KETOCONAZOLE EN C.

ALBICANS

CESAR BERMUDEZ 11171014 IVAN RINCON 11171061 DREICY RODRIGUEZ 11171058 JENNY COTE 11171058 NATALIA PINILLA 11171005

PRESENTADO A: DOC. INDIRA HERNANDEZ

UNIVERSIDAD DE SANTANDER UDES LABORATORIO DE BIOLOGIA CELULAR BACTERIOLOGIA 17-11-2011

INTRODUCCION conocer mecanismos contra patologias ocasionadas por hongos es de gran importancia para la sociedad, y entender la metodologia para comprobar la efectividad de un farmaco en contra de patogeno nos ayudara ampliar nuestro conocimientos teoricos en la practica. Una levadura muy conocida por su enfermedades que ocasiona es la candida albicans que por su supervivencia en temperatural corporal y humedad , es de facil contagio con el hombre y desequilibar el metabolismo del organismo. Un antimicotico ya conocido es un azol llamado ketoconazole que su mecanismo de accion en el inoculo es afectar la membrana plasmatica para desorganizar la estructura lipidica del microorganismos y terminar con su muerte sin afectar al huesped. Comprobar la efectividad del farmaco se realizara por medio de un metodo de dilucion en caldo para analizar la cantidad minima inhibitoria , con un proceso cualitativo y cuantitativo para un analisis mas esapto de las muestras a estudiar.

OBJETIVO GENERAL: Determinar el efecto del ketoconazole en candida albicans. OBJETIVO ESPECIFICO: Determinar la minima concentracion inhibitoria de ketoconazole. candida albicans tratada con

ESTADO DEL ARTE Candida albicans Agente causal: La candida albicans: es la especie mas importante de levaduras que forma parte de la flora normal de las vias gastrointestinales, la mucosa oral y vaginal asi como tambien de la piel periorificial de individuos sanos [1] .posee caracteristica como crecer en medios simples bacteriologicos ( agar con sangre y sabourand) a 37c y temperatura ambiente,adems, para su supervivencia necesita humedad, as que sus zonas preferidas para habitar son las mucosas, la piel , las uas , etc. Por esta razn, es habitual encontrarla en cepillos dentales, cosmticos, cremas de manos o ropa. se distinguen por sus colonias cremosas, blancusco y brillantes, con una morfologia de una levadura ovalada de 2 a 4 micras con paredes finas y una unica gemacion. Pero sin embargo, en tejidos infectados tambin se han identificado formas filamentosas de longitud variable, con extremos redondos de 3 a 5 micras de dimetro y seudohifas, que son clulas alargadas de levadura que permanecen unidas entre s.

Fig.1(C.albicans)

Tabla No 1 CLASIFICACION CIENTIFICA REINO DIVISION CLASE FAMILIA GENERO ESPECIE Manifestaciones Clnicas con C.albicans: Se ha visto implicada en enfermedades como: El muguet es una patologia que puede ser difusa o limitarse a una sola region de la boca, afectando el velo del paladar, carrillos y encias. Hay enrojecimiento en sitio de infectado, se reconocen placas blanquecinas que dan aspecto de natas de leche.Se acompaan de sensacion de quemadura, sequedad de boca y sabor metalico (afta oral). En la Vaginitis se presenta inflamacion en el organo genital femenio, hay presencia de dolor y dispareunia. El flujo vaginal se torna de color blanquecino, su consistencia es de caracteristica espesa y grumosa, la mucosa vaginal muestra placas blanquecinas o amarrillentas.La Candidosis mucocutanea cronica, se inicia en la lactancia o la niez, las lesiones pueden aparecer en la piel, mucosas y uas. En la boca hay lesiones en forma de placa y en la piel surgen lesiones escamocostrosas sobre todo en cabeza y cara. Las uas de las manos se afectan, igualmente en los pliegues del cuerpo. Puede ser congenita y heredada.[2]. Hongo Deuteromycota Blastomycetes Cryptococcaceae Candida Albicans

Diagnostico: Se realiza a partir de un exudado, esputo, escamas, raspado de uas, o centrifuga de orina, se efectua con hidroxido de potasio, solucion de lugol o fisiologico. Tambien se puede teir con gram, azul de metileno, PAS, giemsa o wright, se observaron abundantes esporas redondeadas u ovales de 2 a 4 micras de diametro, blastosporas y seudohifas o hifas verdaderas.La identificacion de C. albicans es mas trascendental que las otras especies , por ejemplo en piel , uas no se encuentran en formas saprofitica, lo mismo sucede en una muestra de sangre o de orina osbtemido bajo tecnica esteril: en estos casos tiene significado patologico.

Tratamiento: El tratamiento alptico es a base de vulos y cremas que contengan antibiticos fungistticos: responde habitualmente a todos los azoles: Isoconazol, Clotrimazol, Tioconazol, Econazol, Ketoconazol, Itraconazol, Fluconazol, Miconazol, Terconazol, Butoconazol, y tambin a la Nistatina y al Violeta de genciana. Tambin pueden indicarse antimicticos por va oral. Antes de iniciar el tratamiento debe averiguarse sobre enfermedades sistmicas, uso prolongado de antibiticos y otras drogas, otras infecciones, y el uso de duchas vaginales, actualmente proscriptas.Durante el embarazo se aconseja el uso de los azoles en forma tpica local por no menos de 7 das.

KETOCONAZOLE Fing 2. Estructura Qumica

Estructura quimia: Es un frmaco antimictico azlico, de la clase imidazol, en la cual tambin se encuentran: clotrimazol, miconazol, econazol, butoconazol, oxiconazol, sulconazol, bifonazol, tioconazol,

fluconazol e itraconazol como ms importantes. Qumicamente se caracteriza por la presencia del grupo imidazol y de un grupo piperazina, siendo su frmula molecular C26 H28Cl2N4O4 [3]

Mecanismo de accin: El ketoconazole es un antibiotico terapeutico para el manejo de micosis cuando este actua inhibe la biosintesis del ergosterol y de otros esteroles en organismos sensibles lo que provoca el dao en la pared celular y altera su permehabilidad en consecuencia el microorganismo pierde elementos celulares esenciales. Otro efecto sobre los hongos es que inhibe la sintesis de trigliceridos y fosfolipidos en los hongos y la actividad enzimatica oxidativa y perioxidativa originado asi concentraciones toxicas de peroxido de hidrogeno que puede destruir los organelos. En el caso de la candida albicans inhibe la biotranformacion de las plastosforas a la formacion micelial invasiva.

METODOLOGIA 1. Prepara una solucin stock de ketoconazole de 3,6 mg/mL Para tal efecto pesar en una balanza analtica 3,6 mg de ketoconazole y diluir en 1 mL de caldo sabourand. 2. Se ajusta a una concentracion de 1000 L/mL.Evaluar las siguientes concentraciones: 1000 L/mL, 20 L/mL, 4 L/mL, 0.8 L/mL,0.16 L//mL. Para preparar la 1000 L/mL adicionar 138 L de la solucin stock de ketoconazol (3,6 mg/mL) y luego realizar 5 diluciones seriadas 1:5 en caldo sabouraud. 3. Con un asa bacteriolgica tomar una muestra del cultivo de C. albicans y mezclarla en un tubo con 5 mL de caldo sabouraud hasta obtener una turbidez y procedemos a hacer el conteo en la camara de neuvawer y diluir con caldo sabouraud hasta obtener (5000 lev/ml). 4. Adicionar 2.5 mL de la dilucin de cultivo a cada tubo. Mantener un tubo control sin medicamento (Realizar por duplicado). 5. Incubar a 37C durante 24 horas. 6. Tomar con una micropipeta 10 L y distribuirlo homogneamente en un agar(sabouraud) por cada tubo para conteo en placa usando un asa de hockey. 7. Incubar a 37C durante 24 horas. 8. Realizar recuento de colonias utilizando el contador de colonias tipo Quebec. Registrar los resultados y determinar la inhibicin.

RESULTADOS CUALITATIVOS Se obtuvieron en 5 tubos con cultivo (por duplicado) 5 concentraciones diferentes de candida albicans. Las concentraciones fueron determinadas inicialmente segn su turbides. El 90% de los cultivos mostro resistencia al farmaco (ketoconazole) y en un 10% de los cultivos se observo una de inhibicin aparente de candida albicans, es decir no se presento turbidez. NIVELES DE TURBIDEZ Tabla No 2. tipos de niveles de turbidez. Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 Nivel 4 Nivel 5 nula relativa opalescente abundante mxima

Tabla No 3. Inhibicion del crecimiento de candida albicans y CMI de ketoconazole determinado segn su turbides . MUESTRA 1 TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO 5 CUANTITATIVOS Se realizo el reconteo de las colonias por medio del contador de colonias tipo Quebec y se determino que en el 90% de los agares no hubo una inhibicion sobresaliente se determino la presencia de mas de 300 colonias de candida albicans. En un 10% se observo una inhibicion de mas del 95% es decir solo se hizo el reconteo de 35 colonias aproximadamente en el cuadrante. X X X X X NIVEL DE TURBIDEZ 2 3 4 5

Tabla No 4. inhibicion del crecimiento de candida albicans y CMI del ketokotonazole, determinado segn el conteo de colonias. CONCENTRACION DE KETACONAZOLE 1000 L/mL 20 L/mL 4 L/mL 0.8 L/mL 0.16 L//mL 35 Mas de 300 Mas de 300 Mas de 300 Mas de 5000 NUMERO DE COLONIAS

CONCLUSION se determino la cantidad mnima inhibitoria de ketoconazole es de 1000 L/mL.observando que el ketoconozale es un antimicotico efectivo en enfermedades relacionadas con la candida albicans y se detrmino que entre mayor concentracion se maneja de ketoconazole en el inoculo la inhibicion aumentara en el cultivo ya que posee un mecanismo de accion muy efectivo por su relacion con la membrana plasmatica que como sabemos es de gran importancia para la celula. bibliografia 1-Arenas R.micologia medica ilustrada.3 ed.p.218-219. 2- Levinson W.microbiologia e inmunologia medica.p.265-275. 3-Rodriguez R.vademecun academico de medicamentos.4 de.p.459-460