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ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA DE CIENCIAS QUMICAS

BIORREMEDIACIN DE VEGETACIN CONTAMINADA CON PETRLEO POR DERRAMES EN EL CAMPAMENTO GUARUMO PETROPRODUCCIN.

TESIS DE GRADO
PREVIA A LA OBTENCIN DEL TTULO DE:

INGENIERA EN BIOTECNOLOGA AMBIENTAL

AUTOR: VERNICA PAULINA OROSCO VERDEZOTO MERCEDES MARGARITA SORIA GUANO RIOBAMBA-ECUADOR 2008

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AGRADECIMIENTO

Agradezco a DIOS por permitirme la vida para poder cursar mis estudios y la exitosa culminacin de mi carrera.

A mis padres Lida Verdezoto, Javier Orozco por convertirse en el motor que siempre me han impulsado para ser mejor persona.

Al excelente grupo de profesores que formaron parte especial en mi vida, por impartirnos todos sus sabios conocimientos y su gran amistad.

Al Dr.Fausto Yaulema, por su valioso aporte y colaboracin en el desarrollo de la presente tesis. A los seores profesores, miembros del tribunal, Dra. Nancy Veloz, Dr. Roberto Erazo.

Al Ing. Kadir Ron jefe del departamento de Unidad de Proteccin Ambiental (PETROPRODUCCIN), con su ayuda ha sido posible dentro de la empresa llevar a cabo nuestro trabajo

A mis amigas y compaeros que directa o indirectamente han contribuido a la culminacin de este proyecto.

PAULINA

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AGRADECIMIENTO

A Dios por el infinito amor y paciencia que brindo a mi vida para concluir con mis metas fijadas, a mis padres; Jos Soria y Rosa Guano quienes con su apoyo y su valiosa colaboracin han permitido el progreso de esta investigacin y el regalo mas hermoso mi proteccin.

Al personal de las cuadrillas del Departamento de Unidad de Proteccin Ambiental (PETROPRODUCCIN), quienes prestaron su incondicional ayuda en el campo de trabajo, durante toda la fase del desarrollo experimental del presente trabajo.

Al personal del Laboratorio del Departamento de Unidad de Proteccin Ambiental de Lago Agrio (PETROECUADOR), quienes prestaron una incondicional colaboracin en el desarrollo de los anlisis fsicos y qumicos del presente trabajo.

Al Ingeniero Kadir Ron, jefe del Departamento de Unidad de Proteccin Ambiental del Campamento (Guarumo), quien estuvo siempre pendiente del trabajo en desarrollo en el Campamento el Libertador (Guarumo) en dnde se ejecuto el proyecto de investigacin.

MARGARITA

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DEDICATORIA

A DIOS, y a

los seres ms preciados y

queridos de mi vida que me han apoyado de manera incondicional en la culminacin de una de las etapas ms importantes de mi carrera superior como son: mis padres Javier Orozco y Lida Verdezoto, mi hermana Luisa Fernanda Orozco a quienes le debo mi progreso y superacin.

PAULINA

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DEDICATORIA

Dedico este trabajo a mis Padres: Rosa Guano y Jos Soria, quienes con su valiosa compresin, paciencia, colaboracin y cario me han enseado a perseverar hasta logras mis metas y objetivos, en especial a mis hijos por quienes puse un especial esfuerzo para culminar mi carrera. A mis hermanos por brindarme confianza, cario y apoyo.

MARGARITA

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NOMBRE

Dr. Edmundo Calua DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS.

Dr. Robert Cazar DIRECTOR DE LA ESCUELA DE CIENCIAS QUMICAS.

Dr. Fausto Yaulema DIRECTOR DE TESIS

Dra. Nancy Veloz MIEMBRO DEL TRIBUNAL

Dr. Roberto Erazo MIEMBRO DEL TRIBUNAL

Lic. Carlos Rodrguez DIRECTOR DEL CENTRO DE DOCUMENTACIN

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Nosotras, VERNICA PAULINA OROSCO Y MERCEDES MARGARITA SORIA GUANO, somos responsables de las ideas doctrinas y resultados expuestos en esta Tesis de Grado pertenecen a la ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE CHIMBORAZO.

----------------------------------------------------------VERNICA PAULINA OROSCO VERDEZOTO

--------------------------------------------------------MERCEDES MARGARITA SORIA GUANO

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NDICE DE ABREVIATURAS

Cd DINAPA EPA g LABPAM Petroproduccin mg/kg. m.s.n.m mar N TPH Pb ppm RAOHE

Cdmio Direccin Nacional de Proteccin Ambiental Environmental Protection Agency (USA) Gramo Laboratorio de Proteccin Ambiental de Miligramos por Kilogramo Metros sobre el nivel del Nquel Hidrocarburos Totales de Petrleo Plomo Partes por milln Ambiental para las Operaciones Hidrocarburferas en el Ecuador

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NDICE GENERAL INTRODUCCIN CAPTULO I

1. 1.1 1.1.1 1.1.2 1.1.3 1.1.4 1.1.4.1 1.1.4.2 1.1.4.3 1.2 1.2.1 1.2.2 1.2.3 1.2.4 1.3 1.3.1 1.3.2 1.3.3 1.3.4 1.3.5 1.3.5.1 1.3.5.2 1.3.5.3 1.3.5.4 1.3.5.5 1.3.6 1.3.7

MARCO TERICO Petrleo.. 22 Generalidades 22 Origen del Petrleo... 22 Caractersticas Qumicas. 23 Contaminantes.. 25 Hidrocarburos totales de petrleo.. 25 Metales Pesados (Cd, N, Pb). 26 Efectos de los contaminantes en la Salud y el Ambiente... 27 Biorremediacin de vegetacin con hidrocarburos. Vegetacin. Identificacin de la cobertura vegetal Mejoradores y nutrientes. Fertilizantes orgnicos. 28 28 29 30 30

Biorremediacin.. 31 Generalidades 31 Tipos de Biorremediacin Tecnologas de Biorremediacin Fundamento bioqumico de la biodegradacin Composteo. 37 40 41 43

Tcnica de Biorremediacin a aplicarse (Compost) 43 Factores que condicionan el proceso de compostaje. 44 Proceso de compostaje 45 Sistemas de compostaje.. 46 Tipos de Compostaje 48 Biorremediacin por Bioestimulacin. 48 Lmites Permisibles... 50

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1.3.8 1.4 1.4.1 1.4.2

Ventajas y desventajas de la Biorremediacin. 50 Bacterias.................................................................................. Generalidades........................................................................... 52 52

Microorganismos degradadores de petrleo............................. 54

CAPTULO II 2 2.1 2.1.1 2.1.2 2.1.2.1 2.1.2.2 2.1.2.3 2.1.3 2.2 2.2.1 2.2.1.1 2.2.1.2 2.2.1.3 2.2.2 2.2.2.1 2.2.2.2 2.2.2.3 2.2.2.4 2.2.2.5 2.2.2.6 2.2.2.7 2.2.2.8 2.2.3 2.2.3.1 2.3 MATERIALES Y MTODOS.. 56

Materiales... 56 Lugar Experimental... 56 Materiales Experimentales.. 56 Vegetacin Contaminada con Petrleo. 56 Sustratos. 57 Bacterias de la zona Materiales de laboratorio. MTODOS. Recoleccin del material contaminado (Campo) Anlisis de muestra (Laboratorio).. 57 58 60 60 62

Muestreo. 60

Descripcin de la tecnologa a aplicarse... 62 Mtodos Analticos 65 Determinacin de Temperatura. Determinacin de Humedad.. 65 65

Determinacin de (bacterias).. 65 Determinacin de Potencial de Hidrgeno 66 Determinacin de Hidrocarburos Totales.. 66 Determinacin de metales pesados (Cd, Ni, Pb). 66 Determinacin del Nitrgeno global... 67 Determinacin del Fsforo...... Preparacin de la tcnica Aerobios Mesfilos. 68 68 Metodologa Recuento de Aerobio Mesfilos... 68 DISEO EXPERIMENTAL.. 69

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2.3.1 2.3.1.1 2.3.1.2 2.3.1.3 2.3.1.4 2.3.1.5 2.3.1.6 2.3.1.7

Metodologa... Tipo de Diseo.. Modelo Matemtico..

70 70 70

Factores de estudio tratamientos y rplicas. 71 Preparacin de tratamientos... 71 Parmetros de Control. Anlisis de Datos.. 74 77 Parmetros de Medicin. 75

CAPTULO III 3 3.1 3.2 3.2.1 3.2.2 3.3.3 3.3.4 3.3 3.3.1 3.3.2 3.3.3 3.3.4 3.4 3.4.1 3.4.2 3.4.3 3.4.4 RESULTADOS Y DISCUSIN Caracterizacin de vegetacin contaminada por derrames de petrleo... Parmetros de control durante la biorremediacin 79 Potencial de Hidrgeno 80 Humedad.... 81 Microorganismos aerbios mesfilos........ 81 Control de Nutrientes C, N , P...................... 83 Parmetros de medicin durante la biorremediacin 86 Hidrocarburos Totales de Petrleo (TPH). 86 Metales pesados (Cadmio).. 90 Nquel.. Plomo.. Eficiencia de los parmetros de medicin de los tratamientos durante la biorremediacin.. Eficiencia de Hidrocarburos de Petrleo (TPH)... 94 Eficiencia de Metales Pesados (Cd).. 94 Eficiencia de Metales Pesados (N)... 95 Eficiencia de Metales Pesados (Pb).. 96 91 92 93 78 78

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CAPTULO IV 4.1 4.2 Conclusiones. Recomendaciones 97 99

RESUMEN SUMARY BIBLIOGRAFA ANEXOS

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NDICE DE ANEXOS ANEXO 1. ANEXO 2. Diagnstico Ambiental de la Regin. RH-300 derivados ANEXO 3. ANEXO 4. ANEXO 5. ANEXO 6. ANEXO 7. Hoja de seguridad del material: Aerobios Mesfilos). Valores medios de los parmetros de medicin (TPH, Cd, N, Pb). Fotografas (Compost). Fotografas anlisis realizados laboratorio(LABPAM) del Centro de Acopio Biorremediacin RH-300 Valores medios de los parmetros de control (pH, Humedad, Producto Biodegradable para tratamiento de residuos aceitosos, suelos contaminados por hidrocarburos y

NDICE DE TABLAS

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Tabla 1. Tabla 2. Tabla 3. Tabla 4. Tabla 5 Tabla 6. Tabla 7. Tabla 8. Tabla 9. Tabla 10. Tabla 11. Tabla 12. Tabla 13. Tabla 14. Tabla 15. Tabla 16. Tabla 17. Tabla 18. Tabla 19.

Composicin elemental del petrleo Tipos de Hidrocarburos.. Impactos de TPH en la Salud y Ambiente.

23 25 28

Impactos de metales pesados en la Salud y Ambiente. 27 Principales caractersticas de las unidades de vegetacin.. 29 Principales especies 29 Capacidad de biodegradacin... 43 Lmites permisibles para la identificacin y remediacin de suelos contaminados en la Industria Hidrocarburfera.. Grupos de microorganismos segn su Temperatura.... 53 Materiales, Reactivos.. 58 Equipos utilizados 59 Mtodos de anlisis procedimiento laboratorio.. 64
0 Parmetros de Control (pH, T ,%H ,UFC/g)............ 74

51

Parmetros de Medicin (HAP`s, TPH, Cd, N, Pb)................. 75 Represtacin generalizada de las repuestas experimentales 76 en un diseo de bloques Frmulas para ANOVA para un diseo de un factor. 77 Caracterizacin de vegetacin contaminada con Petrleo.. 79 Anlisis tabla de ANOVA TPH..... Prueba de TUKEY para TPH ..... 88 89

NDICE DE FIGURAS

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Figura 1. Figura 2. Figura 3. Figura 4. Figura 5. Figura 6. Figura 7. Figura 8. Figura 9. Figura 10. Figura 11. Figura 12. Figura 13. Figura 14. Figura 15. Figura 16. Figura 17. Figura 18. Figura 19. Figura 20. Figura 21. Figura 22. 98Figura 23.

Parmetros implicados en la Biorremediacin. 32 Diferentes modos de Biorremediacin... 38 Metabolismo Microbiano.. 40 Degradacin aerobio, anaerobia. 42 Representacin esquemtica de biopilas alargadas... 47 Representacin esquemtica de bioplilas estticas 47 Estructura de la clula bacteriana.. 53 Esquema de la gradilla de muestreo............................. Ubicacin de Tratamientos y Rplicas.. Monitoreo del pH durante toda la Biorremediacin Monitoreo de Humedad durante la Biorremediacin.. Monitoreo de Microorganismos de Aerbios Mesfilos durante la Biorremediacin.. Monitoreo de Carbono Orgnico. 84 Monitoreo de Fsforo 85 Monitoreo de Nitrgeno Total.. 86 Monitoreo del TPH durante la Biorremediacin 87 Monitoreo del Cadmio durante la Biorremediacin.. 91 Monitoreo del Nquel durante la Biorremediacin... 92 Monitoreo del Plomo durante la Biorremediacin... 93 Eficiencia del TPH. Eficiencia del Cd Eficiencia del N. Eficiencia del Pb 94 95 95 96 61 73 81 82 83

INTRODUCCIN

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Las actividades petroleras en el Ecuador, han constituido la fuente de financiamiento ms importante del presupuesto del estado. Es innegable su importancia en la economa nacional y en los cambios operados en el desarrollo de las fuerzas productivas, sin embargo, tambin ha generado graves problemas de contaminacin ambiental, prdida irreversible de especies animales y vegetales, deterioro de las fuentes de agua y un agresivo proceso de aculturacin de sus comunidades nativas

La actividad petrolera estatal ha sido la principal fuente de contaminacin por los derrames provocados en el Distrito Amaznico. Un hecho inusual y alarmante es el alto porcentaje de atentados o sabotajes a las lneas de produccin.

Los daos ambientales ocasionados por la industria petrolera estatal, sea cual fuere su origen, son causales de sanciones estipuladas en la Constitucin de la Repblica, la Ley de Gestin Ambiental, el Reglamento Sustitutivo del Reglamento Ambiental para las Operaciones Hidrocarburferas en el Ecuador (D.E.1215), entre otros, que pueden ir desde multas hasta paralizaciones de la actividad e incluso la crcel para algunos funcionarios que por accin u omisin permitieran la alteracin del medio ambiente. (22)

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El campo Guarumo la primera necesidad que se hizo latente, fue la eliminacin de los residuos contaminados con Petrleo que son almacenados en las piscinas de Secoya.

La contaminacin por hidrocarburos es un problema importante en la mayor parte de los pases productores de petrleo, por tal razn tanto la empresa estatal como privada ve la necesidad de realizar trabajos basados en la Legislacin Ambiental que permiten de alguna manera remediar este problema de contaminacin ambiental, a travs de tcnicas de biorremediacin es el uso de los microorganismos vivos para la eliminacin de contaminantes ambientales es una de las tecnologas aplicables a este fin, se caracteriza por ser una tcnica de bajo costo de operacin. La aplicacin de este tipo de tecnologa ha encontrado cierta resistencia de aplicacin por el tiempo que demanda completar un proceso hasta obtener las metas de limpieza deseadas. (15)

Es as que a travs del convenio PETROECUADOR-ESPOCH se da la oportunidad de realizar nuestra investigacin, la cual est enmarcada dentro de la Biotecnologa Ambiental ya que se va a utilizar microorganismos autctonos para el control de la contaminacin. Junto con el personal de Unidad de Proteccin Ambiental, hemos trabajado con los residuos de vegetacin de la estacin Shuara 09 tal caso ocurrido en el mes de Noviembre del 2007 en un derrame en la lnea de transferencia.

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El residuo contaminado fue trasladado desde la estacin hasta el Campamento Guarumo para dar su respectivo tratamiento a los desechos generados por desbroce de vegetacin en los suelos con crudo, se utiliz la tcnica de

Biorremediacin por Compost que es una tcnica innovadora, de bajo costo de operacin.

Estos sistemas de descontaminacin se basan en la digestin de las sustancias orgnicas por los microorganismos, de la cual obtienen la fuente de carbono necesaria para el crecimiento de sus clulas y una fuente de energa para llevar a cabo todas las funciones metablicas que necesitan sus clulas para su crecimiento. Para que estos procesos metablicos se lleven a cabo, y puedan ser utilizados como una tcnica remediativa, ser necesario que existan en el medio unas condiciones fsico-qumicas ptimas. (17)

Cada uno de estos sistemas, bioventing y biopilas, precisarn de unos parmetros de evaluacin adecuados a cada uno, que deben encontrarse dentro de un intervalo ptimo para que la aplicacin de dicha tcnica sea factible y efectiva.

En general, se necesitar la existencia de determinadas poblaciones de microorganismos autctonos de pertenecen utilizar los a la familia como de fuente

Pseudomonaceae capaces

hidrocarburos

nutricional y de energa, as como unas condiciones adecuadas de pH, nutrientes, temperatura, humedad, concentracin de los contaminantes. Dadas las condiciones favorables de la vegetacin no hubo necesidad de inocular microorganismos exgenos, se

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utilizo microorganismos autctonos es considerada como la va ms efectiva para remediar la vegetacin contaminada en contraste a alternativas ms costosas como la incineracin. Adems es una tcnica que puede ser aplicada in situ o ex situ. (16)

En el presente trabajo se plantea los siguientes objetivos:

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OBJETIVOS
GENERAL: Biorremediar los desechos generados por desbroce de vegetacin en los suelos contaminados con crudo en el campamento Guarumo Petroproduccin. ESPECFICOS: Determinar el nmero ms probable de microorganismos presentes en la vegetacin. Estimular los microorganismos nativos apropiados para biodegradar el crudo presente en la vegetacin. Controlar por medio de parmetros fsico qumicos y microbiolgicos la biorremediacin. Evaluar el seguimiento de la biorremediacin de la vegetacin contaminada, aplicando el metodologa de Compostaje Determinar la eficiencia de degradacin. Determinar el tratamiento ms eficiente para degradar los residuos.

- 22 -

CAPTULO I

1 1.1 1.1.1

MARCO TERICO PETROLEO Definicin (generalidades)

Es un lquido oleoso bituminoso de origen natural compuesto por diferentes sustancias orgnicas. Se encuentra en grandes cantidades bajo la superficie terrestre y se emplea como combustible y materia prima para la industria qumica. 1.1.2 Origen del petrleo

Segn la teora ms aceptada, el origen del petrleo y del gas natural es de tipo orgnico y sedimentario. Se form como resultado de un complejo proceso fsico-qumico en el interior de la tierra, que, debido a la presin y las altas temperaturas, se van descomponiendo las materias orgnicas que estaban formadas especialmente por fitoplancton y el zooplancton marinos, as como por materia vegetal y animal, que se fueron depositando en el pasado en lechos de los grandes lagos, mares y ocanos. A esto se unieron rocas y mantos de sedimentos. A travs del tiempo se transform esta sedimentacin en petrleo y gas natural.

- 23 -

La composicin elemental del petrleo normalmente est comprendida dentro de los siguientes intervalos: Tabla 1. Composicin elemental del petrleo Elemento Carbn Hidrgeno Azufre Nitrgeno Peso % 84-87 11-14 0-2 0.2

Fuente: Jos Luis Lascano; quinua, tarwi Universidad Catlica Santa Maria, Arequipa. www.ucsm.edu.pe.

1.1.3

Caractersticas

Todos los tipos de petrleo se componen de hidrocarburos, aunque tambin suelen contener unos pocos compuestos de azufre y de oxgeno. El petrleo contiene elementos gaseosos, lquidos y slidos. La consistencia vara desde un lquido tan poco viscoso como la gasolina hasta un lquido tan espeso que apenas fluye.

Existen categoras de petrleos crudos los de tipo parafnico, los de tipo asfltico y los de base mixta. Dependiendo del nmero de tomos de carbono y de la estructura de los hidrocarburos que integran el petrleo, se tienen diferentes propiedades que los caracterizan y determinan su comportamiento como combustibles, lubricantes, ceras o solventes.

- 24 -

Las cadenas lineales de carbono asociadas a hidrgeno, constituyen las parafinas; cuando las cadenas son ramificadas se tienen las isoparafinas; al presentarse dobles uniones entre los tomos de carbono se forman las olefinas; las molculas en las que se forman ciclos de carbono son los naftenos, y cuando estos ciclos presentan dobles uniones alternas (anillo bencnico) se tiene la familia de los aromticos.

Adems hay hidrocarburos con presencia de azufre, nitrgeno y oxgeno formando familias bien caracterizadas, y un contenido menor de otros elementos. Al aumentar el peso molecular de los hidrocarburos las estructuras se hacen verdaderamente complejas y difciles de identificar qumicamente con precisin. (8)

Cuanto ms ligero es un crudo, mayor es su nmero de API. Los valores del peso especfico relativo en API para los crudos normales oscilan entre 5 a 60

API. En general, los crudos ligeros poseen un peso especfico elevado en API,

pequea viscosidad, escasa tendencia aditiva y alta tendencia a emulsificarse. Lo inverso ocurre para los crudos pesados.

Al agua (en donde se inicia la escala de valores de la densidad expresada en grados API), le pertenece un valor de 10 API. (4)

- 25 -

Los grados API se utilizan asimismo para determinar el precio de un crudo determinado, dado que cuanto mayor sea el valor en API, mayor es la proporcin de crudo utilizable, principalmente en fracciones ligeras (nafta ligera, etc.).

Segn la densidad, los crudos pueden ser clasificados en:

Tabla 2. Tipos de Hidrocarburos Tipo de Hidrocarburo Liviano Medio Pesado Extra Pesado
0

API

>31,1 22,3 31,1 10,0 22,3 <10

Densidad 3 (kg/m ) <970 920 - 870 1000 - 920 > 1000

Fuente: Freeman, Bob A; Microbiologa de Burrows 22a Edicin, Editorial Interamericana, Espaa 1986. Pgs. 57-62.

Para los hidrocarburos, la densidad es funcin del peso molecular. Los crudos parafnicos poseen una densidad menor, los aromticos una mayor densidad, mientras que los fagtnicos poseen densidades intermedias.

1.1.4

Contaminantes

1.1.4.1 Hidrocarburos totales de petrleo Los TPH son una mezcla de productos qumicos compuestos principalmente de hidrgeno y carbono, llamados hidrocarburos. Los cientficos han dividido a los TPH en grupos de hidrocarburos de petrleo que se comportan en forma similar en el suelo o el agua. Estos grupos se llaman fracciones de

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hidrocarburos de petrleo. Cada fraccin contiene muchos productos qumicos individuales.

Algunas sustancias qumicas que pueden encontrarse en los TPH incluyen a hexano, combustibles de aviones de reaccin, aceites minerales, benceno, tolueno, xilenos, naftalina, y fluoreno, como tambin otros productos de petrleo y componentes de gasolina. Sin embargo, es probable que muestras de TPH contengan solamente algunas, o una mezcla de estas sustancias qumicas. (8)

1.1.4.2

Metales Pesados

Los metales pesados son componentes naturales de la corteza de tierra. No pueden ser degradados o ser destruidos. En un grado pequeo se incorporan a nuestros cuerpos va el alimento, el agua potable y el aire.

Los metales pesados son peligrosos porque tienden a bioacumularse. La bioacumulacin significa un aumento en la concentracin de un producto qumico en un organismo biolgico en un cierto plazo, comparada a la concentracin del producto qumico en el ambiente.

- 27 -

a)

El cadmio.

Est

presente como impureza en varios productos,

incluyendo los fertilizantes del fosfato, los detergentes y los productos de petrleo refinados. b) El plomo. En el ambiente se presenta de fuentes naturales y

antropognicas. Es maleable y dctil. (8) c) El nquel. El nquel es un elemento bastante abundante, constituye

cerca de 0.008% de la corteza terrestre. El nquel se presenta en pequeas cantidades en plantas y animales. Est presente en pequeas cantidades en el agua de mar, el petrleo. (23)

1.1.4.4 Efectos de los contaminantes en la Salud Los efectos de contaminantes en la salud de metales pesados (Cd, N, Pb) lo podemos apreciar en la siguiente tabla: Tabla 3.- Impactos de metales pesados en la salud y el ambiente
Metales Pesados Cadmio Efectos sobre Ambiente y Salud.

Daos al sistema inmune. Cuando las concentraciones de Cadmio en el suelo son altas esto puede influir en los procesos del suelo de microorganismos y amenazar a todo el ecosistema del suelo. Nquel Fallos respiratorios. Sabemos que las altas concentraciones de nquel en suelos arenosos puede claramente daar a las plantas. Microorganismos pueden tambin sufrir una disminucin del crecimiento debido a la presencia de nquel, pero ellos usualmente presentan resistencia de nquel. Plomo Perturbaciones en el sistema nervioso Los organismos del suelo tambin sufren envenenamiento por Plomo. Fuente: Agencia para Sustancias Txicas y el Registro de Enfermedades (ATSDR). 1998.

- 28 -

Los efectos de contaminantes de hidrocarburos de petrleo lo podemos apreciar en la siguiente tabla: Tabla 4.- Impactos de Hidrocarburos de Petrleo en la salud y el ambiente
Contaminantes TPH Efectos en la salud Pueden afectar el sistema nervioso central. La ingestin de algunos productos de petrleo produce irritacin de la garganta y el estomago depresin del sistema nervioso, dificultad para respirar y neumona.

Fuente: Resea Toxicolgica de los Hidrocarburos Totales de Petrleo (TPH). Atlanta, GA.

1.2

BIORREMEDIACIN

DE

VEGETACION

CONTAMINADA

CON

HIDROCARBUROS 1.2.1. Vegetacin

Cada unidad de vegetacin se describe en funcin de su composicin florstica, riqueza de especies, estructura y cobertura vegetal. Tabla 5.- Principales caractersticas de las unidades de vegetacin.
Nmero especies 2 0

Tipo de vegetacin Vegetacin de cactceas reas sin vegetacin

Cobertura 20% 0%

Especies dominantes

Cactceus del gnero Cereus No se registran especies Acacia macracantha (Fabaceae) 17 40 - 60% ,Sulix humboldtiana(Salicaceae) Cultivos Fuente: Bioambiental. S.A., Plan de Biorremediacin., 11 de septiembre 2007.

- 29 -

1.2.2

Identificacin de la cobertura vegetal

El uso actual del suelo en el rea de influencia esta representada por bosques secundarios en varios grados de desarrollo se han establecido cultivos permanentes como es el caso del caf, pltano, cacao, guabo, guarumo, entre otros. El Bosque primario es muy escaso y en su totalidad a sido remplazado por pasto. Tabla 6.- Principales especies BOSQUE SECUNDARIO Nombre Cientfico Inga sp. Ficus sp. Apreiba spera Cecropia sp. Nombre Comn Guabo Higueron Peine de Mono Guarumo BOSQUE PRIMARIO Familia Moraceae Nombre Comn Moral Bobo

Melastomataceae Colca Lauraceae Canelo Euphorbiaceae Gurango

Fuente: Corena S.A. Corporacin para los Recursos Naturales., Diciembre del 2007.

1.2.3

Mejoradores y nutrientes que ayudan en el tratamiento de la vegetacin contaminada con hidrocarburos.

1.2.4

Fertilizantes orgnicos.

Existen fertilizantes orgnicos, como el estircol o el compost, e inorgnicos que se utilizan para suministrar al suelo nitrgeno, potasio y calcio en forma de sales. Componentes y utilidad.

- 30 -

Hay muchos tipos de fertilizantes y con diferentes proporciones en sus componentes. Los componentes bsicos de cualquier fertilizante son nitrgeno, fsforo y potasio. La diferencia entre unos y otros est en las proporciones utilizadas de cada uno de estos componentes. Para qu sirven.

Debido a que los contaminantes orgnicos comnmente no se encuentran en concentraciones suficientes para soportar un proceso de composteo, el material contaminado debe mezclarse con sustancias orgnicas slidas biodegradables como aserrn, paja, bagazo, estircol, composta madura y desechos agrcolas. Estos materiales son conocidos como agentes de volumen y se utilizan en el proceso de composteo con tres finalidades bsicas: a) asegurar la generacin del calor necesario para el proceso; b) mejorar el balance y disponibilidad de nutrientes (C/N) para la actividad microbiana y c) aumentar la porosidad de la composta y con esto la aireacin y capacidad de retencin de agua (Alexander 1994, Eweis et al. 1998. Semple et al. 2001). (5) 1.3 1.3.1 BIORREMEDIACION Generalidades

La Biorremediacin es una tecnologa que utiliza el potencial metablico de los microorganismos (fundamentalmente bacterias, pero tambin hongos y levaduras) para transformar contaminantes orgnicos en compuestos ms simples poco o nada contaminantes, con el fin de realizar una mineralizacin

- 31 -

(compuesto blanco CO

+ H 2 O), una transformacin parcial, la humificacin

de los residuos o de agentes contaminantes y una alteracin del estado redox de metales y, por tanto, se puede utilizar para limpiar terrenos o

aguas contaminadas (Glazer y Nikaido, 1995). Su mbito de aplicabilidad es muy amplio, pudiendo considerarse como objeto cada uno estados de la materia (Atlas y Unterman, 1999). (10) Slido: con aplicaciones sobre medios contaminados como suelos o sedimentos, etc. Hidrocarburos de todo tipo (alifticos, aromticos, HAPs,...). Hidrocarburos clorados (PCBs, pesticidas, herbicidas,...). Compuestos nitro aromticos Metales pesados: Estos no se metabolizan por los microorganismos de manera apreciable, pero pueden ser inmovilizados o precipitados. Otros contaminantes: Compuestos organofosforados, cianuros, fenoles, etc. de los

- 32 -

Caractersticas del contaminante

Composicin Toxicidad

Optimizacin Microbiolgica

Nutrientes Humedad Aireacin

Tecnologa aplicada in situ vs. ex situ combinada

Landfarming Compostaje Bioventing

Mtodos Analticos Biorremediacin

Adecuacin

Muestreo

Estadstica Procedimientos

Regulacin Legal

Valores de referencia

Figura 1. Parmetros implicados en la Biorremediacin. Los parmetros crticos a considerar en un tratamiento biolgico son: tipo y concentracin de contaminante, concentracin de microorganismos,

concentracin de nutrientes, aireacin, condiciones macro ambientales.

Tipo y concentracin de contaminante Tipo de hidrocarburos. La biodegradabilidad de un compuesto

orgnico se debe a que es utilizado por los microorganismos como fuente de carbono. No todos los compuestos se degradan con la misma facilidad (Niemi et al, 1987): Los compuestos alifticos de cadena lineal (parafnicos) se degradan

fcilmente, las estructuras ramificadas estricamente inaccesibles para la degradacin. De la misma forma, los compuestos alifticos insaturados se degradan ms lentamente que los saturados. Los compuestos aromticos simples se degradan por diferentes

aperturas del anillo. Los compuestos nitrogenados y azufrados se degradan lentamente

(Niemi et al 1987; Rochkind et al, 1986; Vogel et al, 1987). (17) Concentracin de hidrocarburos. Cuando la concentracin de

contaminante es alta puede ocurrir que se produzca inhibicin del desarrollo microbiano (disminuya su capacidad de metabolizacin) o si es muy alta que intoxique a los microorganismos y estos mueran (La Grega et al, 1996) .(19) Presencia de microorganismos

Los microorganismos pueden degradar hidrocarburos y otras sustancias contaminantes en forma de cultivos puros (especie nica) o cultivos mixtos (varias especies que mantienen una relacin simbitica). Para el caso del tratamiento de suelos contaminados con hidrocarburos se requiere una concentracin mnima de microorganismos degradadores especficos de 10 a 10
4
3

UFC/g

suelo

(UFC:

unidades

formadoras

de

colonias)

de

microorganismos hetertrofos totales de 10 a 10 UFC/g de suelo. En este caso generalmente no se necesita inoculacin. Si esta masa crtica no es suficiente se pueden incorporar microorganismos al suelo mediante inoculacin o a travs el proceso conocido como bioaumentacin. Tambin se puede lograr un incremento importante estimulando la poblacin microbiana existente por incorporacin de nutrientes. (14)

Bioaumentacin. Este proceso implica incrementar drsticamente la masa microbiana del suelo mediante la adicin de microorganismos similares a los presentes en el suelo obtenidos mediante cultivo en reactores biolgicos.

Cometabolismo. Se da en casos de sustratos complejos donde los microorganismos consumen un compuesto y producen enzimas para

transformar otro compuesto, sobre el que no pueden crecer, en uno asimilable por su metabolismo. (18)

Nutrientes

Los nutrientes son substancias qumicas necesarias para el desarrollo de los microorganismos y se pueden dividir en cuatro grupos: fuentes de Carbono, Fsforo, Nitrgeno y oligoelementos o elementos minoritarios (micronutrientes). La fuente de Carbono en nuestro caso es el contaminante, y proporciona el

carbono necesario para producir compuestos celulares, productos metablicos (CO 2 , agua, enzimas) y microorganismos (debido a la reproduccin de los mismos). La dosificacin de Nitrgeno y Fsforo se realiza en funcin de la concentracin de contaminante de acuerdo a una relacin que vincula C: N: P que vara segn los autores entre 100:10:1 la concentracin de hidrocarburo que se toma como referencia y que aporta un 80 % de su masa como carbono al proceso, la velocidad de degradacin esperada y un balance de masa del material en tratamiento y del aporte de cada fertilizante del elemento considerado.

La fuente de Nitrgeno proporciona el elemento necesario para la produccin de aminocidos y enzimas. Dado que la utilizacin de estos compuestos es muy rpida los suelos no alcanzan a cubrir todas las necesidades del proceso y deben ser incorporados bajo la forma de fertilizantes de uso agrcola como urea o sulfato de amonio. Tambin se pueden utilizar fertilizantes de origen orgnico como estircol. (1)

La fuente de Fsforo interviene en la formacin de compuestos energticos dentro de la clula que se utilizan en los procesos de reproduccin y degradacin. Dado que la utilizacin de este compuesto es muy rpida, los suelos no alcanzan a cubrir todas las necesidades del proceso y deben ser incorporados bajo la forma de fertilizantes de uso agrcola como fosfato diamnico o fosfato triclcico. Tambin se pueden utilizar fertilizantes de origen

orgnico como estircol. Este parmetro es de importancia crtica para el buen desarrollo del proceso. (5) Condiciones ambientales. Aireacin

La presencia de oxgeno es importante para la degradacin de hidrocarburos, ya que es un proceso aerbico. PH

El pH del compost es importante para el desarrollo de los microorganismos degradadores, siendo los ms adecuados los comprendidos entre 6 y 8. Cuando el pH excede 8 se debe disminuir el mismo mediante adicin de azufre al suelo. Si es menor de 6 se puede incrementar mediante la incorporacin de carbonato de calcio o hidrxido de calcio al compost. Cuando se encuentran metales pesados en el terreno a muy altas concentraciones se debe trabajar a un pH que mantenga el metal inmovilizado o en forma no soluble (pH alto), para disminuir la toxicidad de los microorganismos. Humedad

El agua es importante para el desarrollo de los microorganismos ya que acta como medio de transporte de nutrientes y oxgeno a la clula. Es conveniente mantener una humedad del orden del 70 % de la capacidad de campo. Un exceso de humedad produce inhibicin del proceso por anaerobiosis. Un dficit impide el desarrollo de los microorganismos.

Temperatura

La temperatura influye en la velocidad de degradacin marcadamente, dependiendo del tipo de microorganismos disponibles. Normalmente las temperaturas ms adecuadas se encuentran entre 20 C y 40 C, (los microorganismos que trabajan a estas temperaturas se denominan mesfilos). La velocidad de degradacin aumenta con la temperatura, por lo que un incremento de la misma es til, en los procesos de compostaje en donde se alcanzan temperaturas de 65 C. (2) Presencia de metales y sales las sales en altas concentraciones intoxican a los

Los metales y

microorganismos. En el caso de los metales se puede aumentar el pH del compost para inmovilizarlos y as disminuir la toxicidad sobre los

microorganismos. Si se tienen suelos muy contaminados con metales o sales se deberan diluir con suelo limpio para poder llevar a cabo el proceso biolgico (17). 1.3.2 Tipos de Biorremediacin

En los procesos de Biorremediacin generalmente se emplean mezclas de ciertos microorganismos o plantas capaces de degradar o acumular sustancias contaminantes tales como metales pesados y compuestos orgnicos derivados de petrleo. Bsicamente, los procesos de Biorremediacin pueden ser de tres tipos:

Degradacin Enzimtica

Biorremediacin

Remediacin Microbiana

Fitorremediacin

Figura 2. Diferentes modos de Biorremediacin 1) Degradacin enzimtica Este tipo de degradacin consiste en el empleo de enzimas en el sitio contaminado con el fin de degradar las sustancias nocivas. Estas enzimas se obtienen en cantidades industriales naturalmente, o por bacterias por bacterias que las producen que son

modificadas

genticamente

comercializadas por las empresas biotecnolgicas se usan enzimas son utilizadas en tratamientos en donde los microorganismos no pueden desarrollarse debido a la alta toxicidad de los contaminantes. 2) Remediacin microbiana En este tipo de remediacin se usan microorganismos directamente en el foco de la contaminacin. Los microorganismos utilizados en Biorremediacin

pueden ser los ya existentes (autctonos) en el sitio contaminado o pueden provenir de otros ecosistemas, en cuyo caso deben ser agregados o inoculados. La descontaminacin se produce debido a la capacidad natural que tienen ciertos organismos de transformar molculas orgnicas en sustancias ms pequeas, que resultan menos txicas.

Existen, por ejemplo, bacterias y hongos que pueden degradar con relativa facilidad petrleo y sus derivados, benceno, tolueno, entre otros. Los metales pesados como uranio, cadmio y mercurio no son biodegradables, pero las bacterias pueden concentrarlos de tal manera de aislarlos para que sean eliminados ms fcilmente. (11)

Las actividades microbianas en el proceso de Biorremediacin se pueden resumir en el siguiente esquema:

- 40 -

Fuente de Carbono: CONTAMINANTE

MINERALIZACIN Contaminante transformado en CO2 y H2O

Microorganismos

NUTRIENTES Nitrgeno Fsforo Otros

TRANSFORMACIN Contaminante modificado

Figura 3 .Metabolismo Microbiano

3) Remediacin con plantas (fitorremediacin). La fitorremediacin es el uso de plantas para limpiar ambientes contaminados. Aunque se encuentra en desarrollo, constituye una estrategia muy interesante, debido a la capacidad que tienen algunas especies vegetales de absorber, acumular y/o tolerar altas concentraciones de contaminantes como metales pesados. 1.3.3 Tecnologas de Biorremediacin.

Existen dos tipos principales de tecnologas de Biorremediacin:

- 41 -

Biorremediacin in-situ:

Las tcnicas in situ buscan estimular y crear un ambiente favorable para el crecimiento microbiano a partir de los contaminantes. Este objetivo

generalmente puede lograrse con el suministro de aire u oxgeno (bioventeo), nutrientes (bioestimulacin), microorganismos (bioaumentacin) y/o humedad, adems del control de temperatura y pH (EPA, 2001). Biorremediacin ex-situ:

Los procesos de Biorremediacin ex situ, incluyen: (i) procesos de biodegradacin en fase de lodos, en donde el suelo se mezcla con agua (para formar un lodo), microorganismos y nutrientes; y (ii) de biodegradacin en fase slida, en donde los suelos colocan en una celda de tratamiento (composteo) o sobre membranas impermeables (biolabranza), en donde se agrega agua y nutrientes (EPA, 2001). (13) 1.3.4 Fundamento bioqumico de la biodegradacin

El fundamento bioqumico de la Biorremediacin se basa en que en la cadena respiratoria, o transportadora de electrones de las clulas, va a producir una serie de reacciones de xido-reduccin cuyo fin es la obtencin de energa.

La cadena la inicia un sustrato orgnico (compuestos hidrocarburados) que es externo a la clula y que acta como dador de electrones, de modo que la

- 42 -

actividad metablica de la clula acaba degradando y consumiendo dicha sustancia.

Los aceptores ms comnmente utilizados por los microorganismos son el oxgeno, los nitratos, los sulfatos y el dixido de carbono. Cuando el oxgeno es utilizado como aceptor de electrones la respiracin microbiana se produce en condiciones aerobias, y los procesos de biodegradacin sern de tipo aerobio; sin embargo, si utiliza los sulfatos o el dixido de carbono se produce en condiciones reductoras o anaerobias, y los procesos de biodegradacin sern de tipo anaerobio. (9)

Degradacin aerobia:

Sustrato O

O2

biomasa + CO 2 + H 2

Degradacin anaerobia:

Sustrato (NO ,SO 4

2+

3-

2-

,Fe ,Mn ,CO 2 )

2+ 2+ 2+

3+

4+

Biomasa+CO (N 2 ,Mn ,S ,Fe ,CH 4 ).

Figura 4. Degradacin aerobia y anaerobia.

- 43 -

Tabla 7. Capacidad de biodegradacin Alta biodegradabilidad Fraccin de los alcanos, incluye alcanos normales, alcanos ramificados. Intermedia biodegradabilidad Compuestos aromticos e hidrocarburos policclicos aromticos. Estos compuestos son los de mayor importancia debido a su toxicidad y tendencia a la bioacumulacin. Baja biodegradabilidad Fraccin polar que son las resinas (piridinas, quinolinas, carbazoles, sulfxidos y amidas) y asfltenos (fenoles, cidos grasos, cetonas, steres y porfirinas)

1.3.5

El composteo como estrategia de Biorremediacin.

1.3.5.1 Composteo. El compostaje o composting es el proceso biolgico aerbico, mediante el cual los microorganismos actan sobre la materia rpidamente biodegradable (restos de cosecha, excrementos de animales y residuos urbanos), permitiendo obtener "compost", abono excelente para la agricultura.

El compost o mantillo es el resultado de un proceso de humificacin de la materia orgnica, bajo condiciones controladas y en ausencia de suelo. El compost es un nutriente para el suelo que mejora la estructura, ayuda a reducir la erosin y ayuda a la absorcin de agua y nutrientes por parte de las plantas.

El composteo es un proceso biolgico controlado, por el cual los contaminantes orgnicos pueden convertirse en subproductos inocuos estables. El material

- 44 -

contaminado se

mezcla en

pilas, con

sustancias orgnicas

slidas

biodegradables, como paja, aserrn, estircol y desechos agrcolas. Se ha usado con xito, para la remediacin de suelos contaminados con clorofenoles, gasolina, TPH`s, HAP`s (Van Deuren y col., 1997; Semple y col., 2001).

1.3.5.2.

Factores que condicionan el proceso de compostaje

El proceso de compostaje se basa en la actividad de microorganismos que viven en el entorno, ya que son los responsables de la descomposicin de la materia orgnica. Para que estos microorganismos puedan vivir y desarrollar la actividad unas descomponedora condiciones se necesitan de

ptimas

temperatura, humedad y oxigenacin. Los factores ms importantes son:

Temperatura. Las pilas de compost son eficientes en rangos de

temperatura entre 30 a 40 C (mesoflicos). Humedad. En el proceso de compostaje es importante que la humedad

alcance unos niveles ptimos del 40-60 %. Si el contenido en humedad es mayor, se producira una putrefaccin de la materia orgnica. Si la humedad es baja se disminuye la actividad de los microorganismos y el proceso es ms lento. pH. Influye en el proceso debido a su accin sobre microorganismos. En

general los hongos toleran un margen de pH entre 5-8, mientras que las bacterias tienen menor capacidad de tolerancia (pH = 6-7,5). Oxgeno. El compostaje es un proceso aerbico, por lo que la presencia

de oxgeno es esencial.

- 45 -

Relacin C/N equilibrada. Estos materiales son adicionados como

agente de volumen, para mejorar el balance de nutrientes (C/N) para la actividad microbiana, y para asegurar la generacin del calor necesario para el proceso. Poblacin microbiana. El compostaje es un proceso aerbico de

descomposicin de la materia orgnica, llevado a cabo por una amplia gama de poblaciones de bacterias, hongos y actinomicetes.

1.3.5.3 El proceso de compostaje. El proceso de composting o compostaje puede dividirse en cuatro perodos, atendiendo a la evolucin de la temperatura:

Mesoltico. La masa vegetal est a temperatura ambiente y los

microorganismos mesfilos se multiplican rpidamente. Como consecuencia de la actividad metablica la temperatura se eleva y se producen cidos orgnicos que hacen bajar el pH.

Termoflico. Cuando se alcanza una temperatura de 40 C, los

microorganismos termfilos actan transformando el nitrgeno en amonaco y el pH del medio se hace alcalino. A los 60 C estos hongos termfilos desaparecen y aparecen las bacterias esporgenas y actinomicetos. Estos microorganismos son los encargados de descomponer las ceras, protenas y hemicelulosa.

- 46 -

De enfriamiento. Cuando la temperatura es menor de 60 C,

reaparecen los hongos termfilos que reinvaden el mantillo y descomponen la celulosa. Al bajar de 40 C los mesfilos tambin reinician su actividad y el pH del medio desciende ligeramente.

De maduracin. Es un periodo que requiere meses a temperatura

ambiente, durante los cuales se producen reacciones secundarias de condensacin y polimerizacin del humus.

1.3.5.4 Tipos de sistemas de compostaje: Hay tres tipos, hileras, pilas estticas y reactores cerrados. La forma de aireacin es lo que diferencia a las pilas estticas de las hileras, las hileras son aireadas por volteo mientras las pilas estticas se introducen aireacin forzada. a) Hileras (biopilas alargadas)

Se apila el material ya mezclado con los agentes esponjantes y los nutrientes si son necesarios, formando hileras, el alto y ancho de las mismas debera ser suficiente para permitir que el calor generado en el proceso metablico sea mayor al disipado. El ancho se sita normalmente entre 3 y 4 m, mientras que la altura puede llegar a 1.2 y 1.5 m.

El mtodo de aireacin depende en cierta medida del tamao de la hilera, la frecuencia del volteo depende de los objetivos a lograr, a veces es una vez al

- 47 -

da, una cada mes o nunca. Como se dijo el volteo ayuda a mantener una temperatura homognea en todo el material que forma la pila.

Figura 5 .Representacin esquemtica de un sistema de biopilas alargadas b) Pilas estticas

El material mezclado se coloca sobre un sistema de tubos perforados conectados a un soplete o bomba de vaco. La aireacin de las pilas puede lograrse mediante aire forzado o por vaci.

En pilas profundas se utilizan redes de tubos a diferentes alturas para la aireacin y para el aporte de humedad y nutrientes. Las pilas pueden ser de 3 hasta 6 metros de altura.

Figura 6. Representacin esquemtica de un sistema aireado de biopilas estticas.

- 48 -

c)

Reactores cerrados.

Tiene altos costos de inversin pero proporcionan el mayor control del proceso. Se equipan con mecanismos combinados para permitir frecuentes o continuas mezclas de los residuos. La mezcla mejora la distribucin de los contaminantes y permite mayor contacto entre los microorganismos, los productos qumicos, incrementando el potencial de la biodegradacin. (21)

1.3.5.5. Tipos de compost. De maleza. El material empleado es vegetacin de sotobosque,

arbustos .Se utiliza como acolchado o mulching. De maleza y broza. Similar al anterior, pero al que se le aade broza

(restos de vegetacin muertos). Es un compost de cobertura. De material vegetal con estircol. Procede de restos de vegetales,

malezas, plantas aromticas y estircol de quidos o de pequeos rumiantes. Este tipo de compost se incorpora al suelo en barbecho.

1.3.6

Biorremediacin por bioestimulacin

Con la bioestimulacin o biorremediacin acelerada lo que se pretende es acelerar el proceso de biodegradacin natural proporcionando nutrientes y/o nuevos microorganismos a una zona contaminada con compuestos orgnicos para proceder a su transformacin en compuestos inofensivos.

- 49 -

Este es el proceso mediante el cual, los microorganismos (bacterias, hongos...) autctonos o contaminantes inoculados orgnicos de una zona, en degradan la misma. (metabolizan) Para que los los

presentes

microorganismos (principalmente las bacterias) puedan eliminar las sustancias qumicas dainas, el compost debe tener la temperatura, los nutrientes y la cantidad de oxgeno apropiados. Esas condiciones permiten que los microorganismos crezcan y se multipliquen, y asimilen ms sustancias qumicas. (18)

Desde un punto de vista metodolgico, que determinan a su vez otras tantas aproximaciones principales a la Biorremediacin son los siguientes:

Atenuacin natural

Se denomina Biorremediacin intrnseca o atenuacin natural, a la que sobre muchos compuestos orgnicos se lleva a cabo por los microorganismos autctonos, principalmente bacterias, del medio afectado (Rosenberg y Ron, 1996):

La capacidad intrnseca de asimilacin de un medio depende, de las habilidades metablicas de los microorganismos nativos, del tipo de contaminante y, lgicamente, de la geoqumica y la hidrogeologa en la zona.

Factores que limitan la atenuacin natural

- 50 -

Hay bastantes factores que pueden limitar o impedir la atenuacin natural en un medio contaminado; algunos de ellos ya los hemos apuntado (King et al., 1997): Carencia de nutrientes esenciales para los microorganismos (por

ejemplo, nitrgeno y/o fsforo). Ausencia de aceptores adecuados de electrones (generalmente

oxgeno). Inexistencia de condiciones medioambientales apropiadas (pH, potencial

redox, humedad, temperatura). Ausencia de poblaciones microbianas con el potencial enzimtico

adecuado necesario para degradar los contaminantes. Presencia de componentes txicos en la mezcla contaminante. (1)

1.3.7

Lmites Permisibles

Los lmites permisibles de los parmetros a analizar en un determinado proyecto dependen del uso posterior a darse al suelo remediado. El monitoreo consistir de una caracterizacin inicial del sitio y/o material a remediarse, un monitoreo de por lo menos un muestreo con los respectivos anlisis cada seis meses, y una caracterizacin final una vez concluidos los trabajos. (6) 1.3.7. Ventajas y desventajas de la Biorremediacin

Ventajas: Generalmente slo origina cambios fsicos menores sobre el medio

- 51 -

Cuando se usa correctamente no produce efectos adversos significativos Puede ser til para retirar algunos de los compuestos txicos del

petrleo Ofrece una solucin ms simple y completa que las tecnologas fsico-

qumicas. Es menos costosa que otras tecnologas

Desventajas Su implementacin es especfica para cada lugar contaminado Su optimizacin requiere informacin sustancial acerca del lugar contaminado y las caractersticas del vertido .(22) Tabla 8: Lmites permisibles para la identificacin y remediacin de suelos contaminados en la industria hidrocarburfera. Parmetro Hidrocarburos totales Cadmio Nquel Plomo Expresado Unidad en TPH Cd Ni Pb
(1)

Uso Ecosistemas Uso (2) Industrial Sensibles agrcola <2500 <2 <50 <100 <4000 <10 <100 <500 <1000 <1 <40 <80

mg/Kg mg/Kg mg/Kg mg/Kg

Fuente: Reglamento Ambiental (RAOHE).D. E.1215.

) Expresado en base de sustancia seca (gravimtrico; 105 C, 24 horas). Valores permisibles enfocados en la proteccin de suelos y cultivos.

2)

- 52 -

1.4 1.4.1

Bacterias Generalidades

Las bacterias son organismos unicelulares que no estn clasificados entre los animales ni entre las plantas, sino que pertenecen al reino Moneras. Es el reino ms primitivo, agrupa a organismos procariotas que carecen de un ncleo rodeado por membranas y de organelas.

Las bacterias vistas al microscopio generalmente aparecen como esferas o como bastones rectos o curvos. La longitud promedio de la clula bacteriana es aproximadamente 5 micras.

Las bacterias pueden clasificarse, atendiendo a su forma, en cocos (esfricas), bacilos (bastones rectos) y espirilos (bastones curvos). Otra forma de clasificar las bacterias es aerobia, las que necesitan aire para vivir, anaerobia, que no pueden vivir en presencia de aire y por ltimo, aquella que indiferentemente pueden vivir con aire o sin ste.

Dependiendo de la fuente de carbono que utilizan, los microorganismos se pueden clasificar en: Auttrofos: si es el CO 2 atmosfrico (microorganismos que

fotosintetizan). Hetertrofos si se utilizan carbono orgnico.

Figura 7. Estructura de la clula bacteriana. A-Pili B-Ribosomas C-Cpsula D-Pared celular E-Flagelo F-Citoplasma G-Vacuola H-Plsmido I-Nucleoide

J-Membrana citoplasmtica.

Hay varios tipos de microorganismos en funcin de sus temperaturas de crecimiento mnima, mxima y ptima Tabla 9.- Grupos de microorganismo segn su temperatura Grupo Psicrfilo Mesfilo Termfilo Temperatura mnima (C) 0-5 5-20 35-45 Temperatura ptima (C) 20-35 30-45 45-70 Temperatura mxima (C) 25-40 40-50 60-80

Fuente: Freeman, Bob A; Microbiologa de Burrows 22a edicin, Editorial Interamericana, Espaa 1986. Pgs. 57-62.

1.4.2

Microorganismos degradadores de petrleo.

Los llamados organismos hidrocarburoclsticos son bacterias y hongos capaces de degradar petrleo fisiolgica y metablicamente. Distinguimos principalmente tres grupos de microorganismos: 1) Bacterias: existen numerosos gneros de bacterias capaces de degradar hidrocarburos, pero de ellos destacamos el gnero Pseudomonas,

Rhodococcus, Acinetobacter o Bacillusentre otros, por poseer los anteriores el mayor nmero de especies con esta capacidad. 2) Hongos: igualmente encontramos varios gneros de hongos capaces de degradar hidrocarburos, destacando en este caso los gneros Aspergillus, Penicillium y Candida (este ltimo dentro de las levaduras). 3) Algas microscpicas: fundamentalmente cianobacterias.

En ecosistemas no contaminados, los microorganismos degradadores de hidrocarburos constituyen menos del 0,1% de la comunidad microbiana; mientras que en ecosistemas contaminados con hidrocarburos pueden constituir el 100% de la comunidad microbiana.

Las poblaciones dominantes en estas comunidades poseen caractersticas nutricionales relacionadas al contaminante y pueden ser tambin resistentes a

muchas formas de estrs ambiental. Cuando la fuente de carbono es un substrato insoluble como un hidrocarburo, los microorganismos facilitan su difusin hacia la clula produciendo substancias como carbohidratos, cidos grasos, enzimas y biosurfactantes. Los microorganismos utilizan estos compuestos a manera de un biofilm alrededor de la molcula del hidrocarburo, para posteriormente ingerirlo o romperlo en compuestos simples de carbono y oxgeno. Estos microorganismos usan la energa liberada para manejar los procesos termodinmicamente componentes celulares. (16) no espontneos como la sntesis de

CAPTULO II

2. 2.1 2.1.1

MATERIALES Y MTODOS MATERIALES Lugar Experimental

El rea de trabajo se encuentra localizada en la parte posterior de la Bodega Central del Campamento Guarumo de Petroproduccin, en donde existe un terreno destinado para este tipo de investigaciones como es Biorremediacin.

El Campamento se halla ubicado a dos kilmetros al este de la poblacin de Pacayacu, Parroquia Pacayacu, Cantn Lago Agrio, Provincia de Sucumbos, se encuentra en las coordenadas 325417 E y 9994338 N; a 265 m.snm.

2.1.2

Materiales Experimentales

2.1.2.1 Vegetacin contaminada con Petrleo La muestra de vegetacin contaminada con petrleo fue tomada en el mes de Noviembre del 2007, en un derrame de crudo por corrosin de la lnea de flujo del pozo Shuara 09, aledao a la entrada estacin Shuara. La vegetacin contaminada proveniente de un rea (aproximadamente 210 m ) fue trasladada al lugar para el cual fue diseado para su posterior tratamiento.
2

2.1.2.2 Sustratos Bagazo de caa. Aserrn Hojas de guaba Estircol 2.1.2.3 Bacterias de la zona Para el presente trabajo los microorganismos no fueron manipulados genticamente, se logr realizar una activacin de los mismos

proporcionndoles (bioestimulacin), los cuales unos meses despus de terminado el tratamiento y habiendo sido metabolizados por los agentes microbianos, volvern a su nivel normal y de esta forma tambin los microorganismos retomarn su nivel de equilibrio poblacional.

Se realiz el monitoreo de microorganismos totales por horas de incubacin sobre agar PCA (Plate Count Agar). 2.1.3 Materiales de laboratorio

conteo luego de 48

Tabla 10. Materiales, Reactivos. MATERIALES REACTIVOS Balones de aforo de 100 ml Acido Brico 2%. Esptula cido Clorhdrico 0.002 N. Filtros whatman sin ceniza whatman sin ceniza 4 Agua destilada Fundas de polietileno Guantes desechables. Mascarilla Molino elctrico Papel filtro Papel aluminio estril Placas para recuento aerobios. Peras Acido Ntrico Concentrado Acido Sulfrico Fren Destilado Hidrxido de sodio al 33%. Selenio Silica Gel de Sodio Bicarbonato 0.5 N. Sulfato de sodio (anhidro). 50ml 1.5 g 9 ml 18 CANTIDAD 25ml

10ml 10 ml 300 ml Pizca 0,6 g

Pipeta volumtrica de 1 ml. Peptona Pipeta graduada de 10 ml Phosver en sachet Pipetas estriles Pinza metlica Probeta de 250 ml Tubos de digestin Tubos de ensayo con tapa rosca Vasos de precipitacin de 50 ml Varilla de agitacin Vidrios reloj

Tabla 11. Equipos Utilizados EQUIPOS Agitador de tubos Agitador calentador magntico Balanza electrnica digital. Bao ultrasonido Cabina de almacenaje para solvente Cmara de flujo laminar Cromatografa de gases Destilador de Kjeldhal Depurador Digestor Estufa pequea Estufa de conveccin mecnica Espectrofotmetro Incubadora Mufla pH metro CDIGO EI/10-02 EI/25 EI/ EI/67 EI/15-01 EI/50-00 EI/20 EI/17 EI/16-00 EI/35 EI/58 EI/24-00 MARCA Brarnstead Thermolyne Cole-Parmer Labconco Shimadzu Gerhardt Gerhardt Gerhardt Cautin Bacostead HACH

EI/59

Orionstar

- 60 -

2.2 2.2.1

MTODOS Muestreo

2.2.1.1 Recoleccin del material contaminado (Campo) El derrame fue localizado en la lnea de flujo del pozo Shuara 09 ocasionada por corrosin interna, el rea de afectacin fue de 210 m . En el muestreo el objetivo es obtener muestras representativas que debern cubrir toda el rea contaminada y son de carcter simple y puntual.
2

Se traz una cuadrcula extendida sobre toda el rea afectada. Las lneas de la cuadricula deben estar distantes una de la otra 3 metros tal como se muestra en el diagrama. En el cual se precedi a realizar un muestreo al azar de vegetacin contaminada con petrleo y se llev todo este material recolectado al centro de acopio para su posterior tratamiento Campamento GuarumoPetroproduccin.

En el centro de tratamiento se realizar un muestreo compuesto del contaminante las mismas sern llevadas a laboratorio en fundas plsticas impermeabilizadas (250g) para el anlisis fsico- qumico. Se escogi este tipo de muestreo porque el rea es irregular.

- 61 -

210 m

Punto de Muestreo Figura 8. Esquema de la grilla de muestreo

La

vegetacin recolectada de cada uno de los puntos de muestreo fue

colocada en una lona para su mezclado y homogenizacin, se proceder hacer el compost. Este se llevar al rea destinada para el tratamiento, localizada en la parte posterior de la Bodega Central del Campamento Guarumo de Petroproduccin.

La muestra especfica de muestreo que se debe emplear en cada caso depende de las condiciones ambientales, caractersticas y estado del

- 62 -

contaminante, sustrato sobre el que se encuentre depositado y factores de origen ambiental que hayan sido incorporados. 2.2.1.2 Anlisis de muestra (Laboratorio) Para realizar los anlisis de laboratorio se procedi a realizar un muestreo compuesto el mismo que consiste en homogenizar la muestra sobre papel aluminio y realizar un cuarteo de la vegetacin contaminada, de las cuales se toma las dos partes diagonales para volver a repetir este mismo procedimiento, hasta obtener una muestra representativa de cada unidad experimental. 2.2.1.3. Descripcin de la tecnologa a aplicarse 2.2.1.3.1 Metodologa El presente trabajo de investigacin, se inicio con la recoleccin del desbroce de vegetacin contaminada con petrleo y se dio por terminado cuando los anlisis de laboratorio (TPH y metales pesados), dieron valores inferiores a los lmites exigidos en el Reglamento Ambiental para las Operaciones la

Hidrocarburferas en el Ecuador, Decreto Ejecutivo 1215, de acuerdo a

Tabla 6: Lmites permisibles para la identificacin y remediacin de suelos contaminados en todas las fases de la industria hidrocarfurfera, incluidas las estaciones de servicios, para suelos de uso agrcola.

1. Toma de muestras compuestas 2. Limpieza de los residuos orgnicos

- 63 -

3. Preparacin del rea de tratamiento 4. Tratamiento de los desechos orgnicos (Compostaje) 5. Tratamiento del material 6. Disposicin en pilas de tratamiento. 7. Oxigenacin y homogenizacin. 8. Monitoreo y control analtico del proceso. 9. Evaluacin del proceso. 10. Disposicin final de desechos.

- 64 -

Tabla 12. Mtodos de anlisis procedimiento laboratorio

TEM 1

ANLISIS Muestreo

UNIDAD

pH

Conductividad elctrica

Us/cm.

Cadmio

mg/kg

Nquel

mg/kg

Plomo

mg/kg

TPH 7 8 9 Nitrgeno Global Fsforo

mg/kg mg/L

mg/L

METODOLOGIA EQUIPO USADO Muestra compuesta y representativa, homogenizacin Extraccin bajo EPA SW-846 condiciones 1311, PEE-AG- estndares, 01 determinacin potenciomtrica Extraccin bajo EPA SW-846 condiciones 1311, PEE-AG- estndares, 02 determinacin conductivimtrica Digestin cida, filtracin y SW-846SW-846determinacin por 3050B/7130Cd 3050B/7130 Cd espectroscopia de absorcin atmica. Digestin cida, filtracin y SW-846determinacin por 3050B/7520 Ni espectroscopa de SW-8463050B/7520 Ni absorcin atmica. Digestin cida, filtracin y SW-846SW-846determinacin por 3050B/7420 Pb 3050B/7420 Pb espectroscopa de absorcin atmica Extraccin con fren EPA 413,1;1664; y determinacin por PEE/LABPAM/SS/0 Publicacin 0 espectotrofotometra 1 ECY 97-602 infrarrojo APHA/AWWA WEF Destilador Kjeldhal y 4500-NH3 titulacin Formacin complejo coloreado y lectura mediante HACH 8048 espectrofotometra UV/VIS PROCEDIMIENTO

MTODO DE REFERENCIA

- 65 -

2.2.2.

Mtodos Analticos

2.2.2.1. Determinacin de Temperatura 1. Principio: 1.1. Normalmente las medidas de Temperatura pueden realizarse con cualquier termmetro Celsius de mercurio, que como mnimo deber tener una escala con marcos cada 0.1 C sobre el tubo capilar y una capacidad mnima que permite equilibrio rpido. 1.1. Alternativa determinacin con sensor de Temperatura. 2. Referencia: 2.1 PHA/AWWA/WEF B2250. Standard Methods N
0 0

2.2.2.2. Determinacin de humedad 1. Principio Se entiende por la cantidad de agua presente en el suelo y se determina por desecamiento en la estufa a 100-105 C hasta obtener un peso constante. 2.2.2.3. Determinacin de Aerobios Mesfilos 1. Mtodo El mtodo se basa en incubar en agar de recuento en placa, a 35C y durante 48 hrs., volmenes medidos de diferentes diluciones de la muestra, y contar el nmero de colonias producidas para determinar el nmero de grmenes viables o unidades formadoras de colonias por gramo de muestra
0

- 66 -

1. Referencia ISO 4833,2003 2.2.2.4 Determinacin de Potencial de Hidrgeno 1. Principio 1.1. Disolucin del suelo contaminado en agua destilado y determinacin mediante un medidor de pH que conste de un potencimetro, un electrodo de vidrio, un electrodo de referencia y un dispositivo para compensar la Temperatura, confiable y reproducible. 2.2.2.5 Determinacin de Hidrocarburos Totales 1. Principio 1.1. Extraccin con fren y determinacin por espectrometra infrarrojo. 2. Referencia: 2.1 EPA 413.1; 1664; Publicacin N ECY 97-602. 2.2.2.6 Determinacin de metales pesados (Cd, Ni, Pb) Cadmio 1. Principio 1.1 Digestin acida, filtracin y determinacin por espectroscopia de absorcin atmica. 2. Referencia:
o

- 67 -

SW-846-3050B/7130 Cd. Nquel 1. Principio 1.1 Digestin acida, filtracin y determinacin por espectroscopia de absorcin atmica. 2. Referencia: 2.1 SW-846-3050 B/7520 Ni. Plomo 1. Principio 1.1 Digestin acida, filtracin y determinacin por espectroscopia de absorcin atmica. 2. Referencia: 2.1 SW-846-3050B/7420 Pb. 2.2.2.7 Determinacin del Nitrgeno global 1. Principio 1.1 Destilador kehndjal y titulacin 2. Referencia: 2.1 APHA/AWWA WEA 4500-NH3.

- 68 -

2.2.2.8 Determinacin del Fsforo 1 Principio 1.1 Formacin del complejo coloreado y lectura mediante espectrofotometra UV/VIS. 2. Referencia: 2.1 APHA, AWWA. Mtodo 4500-P E. 2.2.2 Metodologa del Recuento de Aerbios Mesfilos

2.2.3.1. Preparacin de la Tcnica 10 g de muestra 90 ml de agua peptonada

Agregar 1 ml de la dilucin elegida en Placas Petri

Agregar 20 ml de Agar Plate Count. Mezclar con movimientos rotatorios de izquierda a derecha durante 1 minuto Incubar a 30-35C por 48 hrs. Observar si transcurrido este tiempo se forman colonias de microorganismos.

Informar como: UFC/g= x (prom) (1/inculo) 10

- 69 -

2.3.

Diseo experimental
2

La vegetacin contaminada en el rea de afectacin fue (210 m

) fue

distribuida en partes iguales en cada parcela para recibir el tratamiento correspondiente.

Para el desarrollo de la presente investigacin, se la realiz mediante una tcnica de compost para lo cual surgi la necesidad de construir un cubeto de 18m x 8m delimitada por un muro de tierra de 0.50 m de altura y rodeada por un canal perimetral que dirige las aguas lluvias y probables lixiviados de hidrocarburos a un sumidero impermeabilizado con geomembrana y provisto de un tubo con cuello de ganso, est fue dividida en 18 parcelas, las cuales contienen partes iguales de vegetacin contaminada con hidrocarburos. (Ver fotografa N 1).
o

La investigacin consisti en llevar a cabo una valoracin de una tcnica biolgica para vegetacin contaminada con hidrocarburos, se trabajo con seis tratamientos con tres rplicas de cada uno, lo que da un total de 18 parcelas.

En la Figura N 2

se puede apreciar

la distribucin de las 18 unidades

experimentales, identificadas con sus respectivos cdigos: T 1 T 6 y las rplicas a 1 , a 2 , a 3 ; b 1 , b 2 , b 3 . La ubicacin de las parcelas se las realiz al zar.

- 70 -

Adems se pude apreciar en la figura 9 la distribucin de parcelas, se coloc un blanco (el cual va a permitir comparar al final de la investigacin la eficiencia con cada uno de los tratamientos). 2.3.1 Metodologa

2.3.1.1. Tipo de Diseo En nuestra investigacin se ve la necesidad de trabajar con un diseo

experimental conocido como diseo de doble va, se aplica cuando las unidades experimentales homogneas se agrupan formando grupos

homogneos llamados bloques. Al utilizar este tratamiento adicional se obtiene una informacin complementaria que permite determinar con mucha claridad los resultados y de esa manera llegar a conclusiones ms valederas luego de haber realizado el experimento.

2.3.1.2. Modelo Matemtico Entonces, cada respuesta experimental puede expresarse por el siguiente modelo matemtico:

Y ij = u +B i + T j + E ij
i =1, 2,..., t j =1,2,..., r Donde:

Y ij = observaciones en el i-simo bloque y j- simo tratamiento

- 71 -

u = promedio global para toda todas las observaciones B i = efecto del i-simo bloque T j = efecto del j-simo tratamiento E ij = error aleatorio

2.3.1.3. Factores de estudio tratamientos y rplicas. En nuestro trabajo vamos a tomar 3 muestras por cada tratamiento en total tendremos 18 muestras, debido a que son 6 tratamientos lo que vamos a realizar con 3 rplicas a excepcin del blanco.

Se probarn 6 variantes de tratamiento con 3 repeticiones para evitar errores, por esto es que se dividirn 18 subparcelas y un Blanco o Testigo en total tendramos 19 subparcelas a las mismas que se suministraba agua una vez al da tambin aireando durante toda la fase experimental con el propsito de mantener condiciones aerobias. 2.3.1.4. Preparacin de tratamientos La vegetacin contaminada con petrleo contiene partes iguales 181,81 kg de material contaminado.

- 72 -

La vegetacin contaminada con hidrocarburo de

3272,58 kg (100%), se

combin con nutrientes y los acondicionadores de acuerdo a los tratamientos. Los tratamientos aplicados fueron: T 1 (75% Mo+25% A), T 2 (55% MO+45% A), T 3 (45%MO+55% A), T 4 (25% Mo+75% A), T 5 (35% MO+65% A), T 6 (40% MO + 60% A). Las unidades experimentales (bioceldas) se mantuvieron en temperatura ambiente, por el exceso de lluvias se construye un techo de plstico con base de caa, para ayudar al proceso de biodegradacin se dio aireacin manual 4 veces por semana para lograr la mayor soltura de la vegetacin, a los 30 das de iniciado el proceso de biorremediacin se tritura el material contaminado cada 15 das en adelante durante los 6 meses, se adiciona los porcentajes correspondientes de cada tratamiento, nutrientes(desechos orgnicos

vegetales) y acondicionador(absorbente), con la finalidad de bioestimular la poblacin microbiana.

- 73 -

Figura 9. Ubicacin de tratamientos y repeticiones.

T 1 M1 N1 p1 T 3 M2 N1 p1

T 2 M1 N2 p1 T 6 M3 N2 p1

T4 M1 N2 p3 T1 M1 N1 p3

T5 M3 N1 p2 T2 M1 N2 p2

T4 M2 N2 p1 T4 M2 N2 p2
BLANC O

T 3 M2 N2 p2 T 5 M1 N2 p3

T 6 M3 N2 p2 T 2 M1 N2 p3

T 1 M1 N1 p2 T 3 M1 N2 p3

T = Tratamientos M = Maleza contaminada N = Materia orgnica P = Parcelas

- 74 -

2.3.1.5. Parmetros de Control Es imprescindible tomar en cuenta los parmetros de control durante toda la Biorremediacin (seis meses) a continuacin se detallan en la Tabla 13. Tabla 13. Parmetros de Control Parmetros de control pH Temperatura

Anlisis

Unidad
+ 0

Fsicos

Humedad Aireacin

% ------UFC/g

Microbiolgicos

Aerobios Mesfilos

2.3.1.6. Parmetros de medicin Los parmetros a medir de cada una de las unidades experimentales nos

permiten comparar con los lmites permisibles de RAOHE, de esta manera se determinar si ha disminuido los niveles de contaminacin en la vegetacin impregnada con hidrocarburos. Se detalla a continuacin los diferentes parmetros a medir en la Tabla 14.

- 75 -

Tabla 14. Parmetros de Medicin.

Anlisis

Parmetros de medicin. TPH

Unidad mg/kg. mg/kg mg/kg mg/kg

Qumicos (cada 30 das anlisis)

Nquel Cadmio Plomo

El efecto de 6 tratamientos se determinar mediante una matriz o tabla de doble entrada con las combinaciones de los tratamientos y rplicas 6

tratamientos y 3 rplicas en cada tratamiento. De esta forma el clculo parte determinando la suma de cuadrados total, de los tratamientos, de las replicaciones, y del residuo como si se tratara de un diseo de bloques. Las respuestas experimentales sern consideradas mediante el anlisis de varianza. En la tabla 15 se muestra la matriz de respuestas experimentales. Tabla 15. Represtacin generalizada de las repuestas experimentales en un diseo de bloques.

- 76 -

Bloques Tiempo (Meses) R1 1 R2 R3 2 R1 R2 R3 3 R1 R2 R3 T1 Y 111 Y 112 Y 113 Y 211 Y 212 Y 213 Y 311 Y 312 Y 313 T2 Y 121 Y 122 Y 123 Y 221 Y 222 Y 223 Y 321 Y 321 Y 322 Tratamientos T3 Y 131 Y 132 Y 133 Y 231 Y 232 Y 233 Y 331 Y 332 Y 333 T4 Y 141 Y 142 Y 143 Y 241 Y 242 Y 243 Y 341 Y 342 Y 343 T5 Y 151 Y 152 Y 153 Y 251 Y 252 Y 253 Y 351 Y 352 Y 353 T6 Y 161 Y 162 Y 163 Y 261 Y 262 Y 263 Y 361 Y 362 Y 363

Total de bloques

Medias

Y. 1 Y. 2 Y. 3 Y. 4 Y. 5 Y. 6 Y. 7 Y. 8 Y. 9

Y. 1 Y. 2 Y. 3 Y. 4 Y. 5 Y. 6 Y. 7 Y. 8 Y. 9

R1 R2 R3

Y 411 Y 412 Y 413

Y 421 Y 422 Y 423

Y 431 Y 432 Y 433

Y 441 Y 442 Y 443

Y 451 Y 452 Y 453

Y 461 Y 462 Y 463

Y. 10 Y. 11 Y. 12

Y. 10 Y. 11 Y. 12

R1 R2 R3

Y 511 Y 512 Y 513

Y 521 Y 522 Y 523

Y 531 Y 532 Y 533

Y 541 Y 542 Y 543

Y 551 Y 552 Y 553

Y 561 Y 562 Y 563

Y. 13 Y. 14 Y. 15

Y. 13 Y. 14 Y. 15

R1 R2 R3

Y 611 Y 612 Y 613

Y 621 Y 622 Y 623

Y 631 Y 632 Y 633

Y 641 Y 642 Y 643

Y 651 Y 652 Y 653

Y 661 Y 662 Y 663

Y. 16
Y. 17 Y. 18

Y. 16
Y. 17 Y. 18

Total de tratamientos

Y. 1 Y. 1

Y. 2 Y. 2

Y. 3 Y. 3

Y. 4 Y. 4

Y. 5 Y. 5

Y. 6 Y. 6

Y..

Y.. Y..

Medias

77

2.3.1.7

Anlisis de Datos

Se realizar un anlisis descriptivo, inferencial sobre la poblacin, adems se utilizara una inferencia sobre la poblacin a travs de la prueba de hiptesis basada en pruebas de comparacin mltiple en este caso se utilizar la prueba de Tuckey, el anlisis estadstico se lo realizara utilizando como Software. Las frmulas para el clculo de ANOVA para calcular la variacin entre tratamientos, bloques y error experimental.

La determinacin de anlisis de varianza queda como un D.B.C.A, se desea considerar nicamente los tratamientos, que se detallan en la tabla 16. Tabla 16. ANOVA para un diseo de un factor. Fuente de Variacin Tratamientos Suma de Cuadrados 1/n y. j 2 (y...) / n*k Bloques(Tiempo) 1/k y. i 2 (y...) / n*k Error Total SCT(SCB+SC Tr) k(n-1) kn-1 SCE/(k-1)(n-1)
2 2

Grados de Libertad k-1

Cuadrados Medios SCTr/(k-1)

Razn de Varianza CMTr/CME

n-1

SCB/(n-1)

yij
2

(y...) / n*k

- 78 -

CAPTULO III

3 3.1

RESULTADOS Y DISCUSIN Caracterizacin de vegetacin contaminada por petrleo derrames de

Para los anlisis biolgicos y qumicos de la vegetacin contaminada se tomaron una muestra inicial.

La vegetacin contaminada por derrames de petrleo fue caracterizado por LABPAM en Lago Agrio, acorde a los requerimientos y lmites permisibles para Suelos de Uso agrcola de la Tabla 6 del RAOHE, con lo cual se obtendr resultados sobre TPH y Metales Pesados.

Para lo anlisis biolgicos y qumicos de vegetacin contaminada se tomaran una muestra inicial y luego una muestra por cada unidad experimental, hasta alcanzar los lmites permisibles en el RAOHE.

Tabla 6 del RAOHE, con lo cual se obtendr resultados sobre Hidrocarburos Totales de petrleo (TPH) y metales pesados (Cd, N, Pb).

- 79 -

Tabla 17. Caracterizacin de Vegetacin contaminada con Petrleo Parmetro Hidrocarburos totales Cadmio Nquel Expresado en TPH Cd Ni Unidad mg/Kg mg/Kg mg/Kg Valor 86500 0,8 37,41 Uso agrcola <2500 <2 <50

Plomo

Pb

mg/Kg

20

<100

Potencial Hidrgeno Humedad

de

pH -----

--% UFC/g

5 27,78 5 * 10
6

6-8 -----

Aerobios Mesfilos

De acuerdo con los valores observados en la primera caracterizacin se deduce que el valor de Hidrocarburos Totales (TPH) sobrepasa los lmites permisibles segn el RAOHE para suelos de uso agrcola, podemos ver tambin resultados de metales pesados de acuerdo al reglamento antes mencionado se encuentran vago los lmites permisibles, pero durante todo nuestro trabajo no se descuido en seguir realizando los anlisis de los mismos. 3.2. Parmetros de control durante la biorremediacin

En las tablas 21, 22, 23, 24, 25 y 26 ANEXO (4) se muestran los valores medios de los parmetros de control de cada una de las unidades experimentales. De lo antes mencionado se obtuvieron las siguientes figuras 10,11, 12,13 ,14 y 15.

- 80 -

3.2.1

Potencial de Hidrgeno

En la figura 10, nos da a conocer como ha ido evolucionando el valor de pH al inicio del tratamiento tenamos un valor de 5,00 (caracterizacin inicial) por lo que tenemos un valor de pH cido durante los tres primeros meses(noviembre, diciembre y enero) permanecen en un rango de 5,93-6,00 ligeramente cido con el transcurso de los das podemos apreciar un incremento con respecto al pH que va desde 6,71 a 8,65 a partir del mes de febrero hasta el ltimo mes de experimentacin abril para todos los tratamientos, pero con respecto al testigo se mantuvo en este rango desde el mes de febrero. Cabe destacar que para el aumento de pH hubo la necesidad de incorporar carbonato de calcio (cal).

FIGURA 10. Monitoreo del pH durante la Biorremediacin.

10,00 9,00 8,00 7,00 6,00 5,00 4,00 3,00 2,00 1,00 0,00

NOVIEMBR E DICIEMBR E ENERO FEBRERO MARZO ABRIL

pH

Tratamientos

3.2.2.

Humedad.

En la figura 11, nos da a conocer como ha ido evolucionando el valor de humedad al inicio del tratamiento tenamos 27,78% (caracterizacin inicial) por lo que tenemos un valor de humedad relativamente bajo, con el transcurso de los das obtuvimos un valor de humedad normal gracias a que constantemente aadamos agua durante todo el proceso de biorremediacin para la actividad metablica de los microorganismos de esta manera a partir del mes de diciembre nos mantenemos en un rango de 50 a 70% de humedad para todos los tratamientos, un dficit de humedad impide el desarrollo de los microorganismos.

FIGURA 11. Monitoreo de la Humadad durante la Biorremediacin.

80,00 70,00 60,00 50,00 40,00 30,00 20,00 10,00 0,00 NOVIEMBRE DICIEMBRE ENERO FEBRERO MARZO ABRIL

% humedad

Tratamientos

3.2.3.

Aerobios Mesfilos

En la figura 12, nos da a conocer como ha ido evolucionando el crecimiento bacteriano al inicio del tratamiento tenamos 5,4 *10 (caracterizacin inicial)
6

con el transcurso de los das obtuvimos un valor de 3,3 * 10 gracias a que constantemente aadamos cantidades considerables de nutrientes durante todo el proceso de biorremediacin, es as que los tratamientos T 1 , y T 2 son los que mayor crecimiento microbiano presentan.

3.2.4.

Control de Carbono Orgnico

En la figura 13 puede apreciar que los niveles de concentracin del carbono estn presentes en cantidades altas durante los tres primeros meses, disminuyendo as lentamente a partir del mes de febrero, llegando a obtener resultados medios, mientras que los ltimos meses se observa resultados adecuados con respecto a la cantidad de carbono con respecto al tratamiento (T 1 ).

En la muestra testigo, de igual forma va disminuyendo lentamente los valores de la cantidad de carbono de manera lenta.

Para llegar a los niveles adecuados de concentraciones de carbono se debe controlar la Temperatura, Humedad, pH y finalmente el anlisis qumico

3.2.5

Control de Nutrientes Fsforo cmo va incrementando la cantidad de

En la figura 14 se puede apreciar

fsforo, iniciando con una concentracin baja en los primeros meses (noviembre-diciembre), mientras que en los meses de (enero febrero) presentan una concentracin media, llegando casi a los niveles adecuados en los ltimos meses (marzo- abril).

En la muestra (testigo) lentamente incrementa la concentracin de fsforo durante los seis meses de experimentacin

3.2.6.

Control de Nitrgeno Total

En la figura 15 nos muestra la cantidad de nitrgeno durante los tres primeros meses (noviembre-diciembre) sus rangos presentan niveles de

concentraciones bajos de nitrgeno, mientras que en los meses (febrero-abril) lentamente aumenta su concentraciones llegando a valores medios en los tratamientos (T 1 ,T 2 ) y los tratamientos(T 5 ,T 6 ) adecuados de concentracin con respecto al fsforo. presentan valores casi

0,3 0,2 5 0,2 0,1 5 0,1 0,0 5 0

FIGU RA 1 5. Mo nitoreo del Nitrgeno T otal durante la Biorremedia ci n.

NOVIEMBRE DICIEMB RE ENERO FEBRERO MARZO ABRIL T1 T3 T5 Te stig o

N %

Tratamientos

En la muestra (Testigo), cada anlisis durante los seis meses de experimentacin, nos indica que el aumento de nitrgeno es muy lento. 3.3. Parmetros de medicin durante la biorremediacin

En las tablas 27, 28, 29 y 30 ANEXO (5) se muestran los valores medios de los parmetros de medicin de cada una de las unidades experimentales. De lo antes mencionado se obtuvo las siguientes figuras 16, 17,18 y 19.

3.3.1.

Hidrocarburos Totales de Petrleo (TPH)

En la figura 16, nos da a conocer como ha ido evolucionando los hidrocarburos totales de petrleo (TPH) durante todo el proceso de biorremediacin se

incluye tambin testigo, se puede apreciar que en el tercer mes (enero) surgi una disminucin considerable de TPH debido a la adicin de acondicionadores, caso contrario con testigo su valor permanece constante.

Cabe mencionar que los T 1 y T 2 , son los que han tenido buenos resultados en la disminucin de hidrocarburos totales de petrleo.

FIGURA 16. Monitoreo de los TPH durante la Biorremediacin

NOVIEMBR E DICIEMBRE ENERO FEBRERO MARZO ABRIL

100000

TPH mg/kg

80000 60000 40000 20000 0

T1

T2

T3

T4

T5

T6Testigo

Tratamientos

El tratamiento involucra lavar el material contaminado con agua a alta presin, se ve una disminucin del contaminante (TPH) a partir mes de enero.

Tabla 18. Anlisis tabla de ANOVA con STATGRAPHICS TPH Anlisis de Varianza Fuente Tratamientos Bloques Error Total Suma de cuadrados 2.89517E10 2.33375E7 4.01694E7 2.90152E10 GL 5 5 25 35 Media cuadrtica 5.79035E9 4.6675E6 1.60677E6 F Significacin

3603. 0.0000 71 2.90 0.0335

Si las medias de los tratamientos son diferentes entre s se pueden considerar los tests de comparaciones mltiples y de rangos estudentizados, que se vieron para el modelo unifactorial general. Se ha de reemplazar el nmero de rplicas por nivel del factor (n) por el nmero de bloques (b).

En este estudio de investigacin con la parte relacionada con el anlisis de varianza, siendo esta la forma ms sencilla de su uso.

A travs del factor Fisher de 2.90 el cual al compararlo con los valores preestablecidos en las tablas para una investigacin con 25 GL., nos indica existe diferencia significativa al 5%. Rechazamos nuestra hiptesis nula H 0

Aceptamos nuestra hiptesis alternativa H 1 para lo cual existen pruebas de comparacin mltiple en este caso lo analizaremos mediante la prueba de Tukey. Tabla 19. Prueba de TUKEY para los TPH Method: 95.0 percent Tukey HSD Forml. Count LS Mean Homogeneous Groups -------------------------------------------------------------------------------6 6 2480.33 X 5 6 3401.5 X 4 6 6528.17 X 3 6 12794.2 X 2 6 64268.2 X 1 6 67757.3 X -------------------------------------------------------------------------------Contrast Difference +/- Limits -------------------------------------------------------------------------------1-2 *3489.17 2255.84 1-3 *54963.2 2255.84 1-4 *61229.2 2255.84 1-5 *64355.8 2255.84 1-6 *65277.0 2255.84 2-3 *51474.0 2255.84 2-4 *57740.0 2255.84 2-5 *60866.7 2255.84 2-6 3-4 3-5 3-6 4-5 4-6 5-6 *61787.8 *6266.0 *9392.67 *10313.8 *3126.67 *4047.83 921.167 2255.84 2255.84 2255.84 2255.84 2255.84 2255.84 2255.84

-------------------------------------------------------------------------------* Indica una diferencia estadsticamente significativa.

Esta tabla se aplica un procedimiento de comparacin mltiple lo cual nos da a conocer cual es el mejor tratamiento.

Un

asterisco

se

ha

colocado

junto

14

pares,

lo

que

indica

que

estos pares muestran diferencias estadsticamente significativas en el 95,0% nivel de confianza.

3.3.2.

Metales pesados (Cadmio)

En la figura 17, nos da a conocer como ha ido evolucionando metales pesados en cada uno de los tratamientos en este caso tenemos Cadmio que ha disminuido considerablemente durante todo el proceso de biorremediacin se incluye tambin testigo, se puede apreciar en el mes de enero surgi una

disminucin considerable de cadmio, caso contrario con testigo su valor permanece constante.

Cabe mencionar que los T 1 , y T 2 , son los que han tenido buenos resultados en la disminucin de de este contaminante como es Cadmio.

- 90 -

FIGURA 17. Monitoreo del Cadmio durante la Biorremediacin

0,90 0,80 0,70 0,60 0,50 0,40 0,30 0,20 0,10 0,00

Cd mg/kg

NOVIEMBRE DICIEMBRE ENERO FEBRERO MARZO ABRIL

Tratamientos

3.3.3.

Nquel

En la figura 18, nos da a conocer como ha ido evolucionando metales pesados en cada uno de los tratamientos en este caso tenemos Nquel que ha disminuido considerablemente durante todo el proceso de biorremediacin se incluye tambin testigo, se puede apreciar que en el mes de febrero surgi una disminucin considerable de nquel, caso contrario con testigo su valor permanece constante.

Cabe mencionar que los T 1 , y T 2 , son los que han tenido buenos resultados en la disminucin de de este contaminante como es Nquel.

FIGURA 18. Monitoreo del Nquel durante la Biorremediacin.

40,00 35,00 30,00

NOVIEMBRE DICIEMBRE ENERO FEBRERO MARZO ABRIL

N mg/kg

25,00 20,00 15,00 10,00 5,00 0,00

Tratamientos

3.3.4.

Plomo

En la figura 19, nos da a conocer como ha ido evolucionando metales pesados en cada uno de los tratamientos en este caso tenemos Plomo que ha disminuido considerablemente durante todo el proceso de biorremediacin se incluye tambin testigo, se puede apreciar en el mes de diciembre surgi una disminucin considerable de nquel, caso contrario con testigo su valor permanece constante.

Cabe mencionar que los T 1 y T 2 , son los que han tenido buenos resultados en la disminucin de de este contaminante como es Plomo.

25,00 20,00

FIGURA 19 . Monitoreo del Plomo durante la Biorremediacin

NOVIEMBRE DICIEMBRE ENERO FEBRERO MARZO ABRIL

Pb (mg/kg)

15,00

10,00 5,00 0,00

Tratamientos

3.4.

Eficiencia de los parmetros de medicin de los tratamientos durante la biorremediacin

De acuerdo a todos los datos obtenidos se puede determinar en que porcentaje se ha ido degradando los contaminantes durante los seis meses que se llev a cabo la biorremediacin; Hidrocarburos Totales de Petrleo (TPH), Metales Pesados (Cd, Ni, Pb), se da a conocer en las siguientes figuras 20, 21,22 y 23. 3.4.1. Eficiencia de Hidrocarburos de Petrleo (TPH)

Cabe mencionar que en la figura 20 se puede apreciar que los tratamientos T1 (97,79%) y el T 2 (97,11%), son los que mayor porcentaje de

degradacin tienen en la descomposicin de hidrocarburos Totales de Petrleo (TPH).

3.4.2. Eficiencia de Metales Pesados (Cd) Cabe mencionar que en la figura 21 se puede apreciar que los tratamientos T 1 (63,08%) y T 2 (60,00%), los valores del cadmio siempre estaban bajo la norma segn la RAOHE (< 2 mg/kg) para uso agrcola RAOHE.

3.4.3. Eficiencia de Metales Pesados (Ni) Cabe mencionar que en la figura 22 se puede apreciar que los tratamientos T 1 (94,60%) y T 2 (94,13%) los valores del nquel siempre estaban bajo la norma segn la RAOHE (< 50 mg/kg) para uso agrcola RAOHE.

3.4.4. Eficiencia de Metales Pesados (Pb) Cabe mencionar que en la figura 23 se puede apreciar que los tratamientos T 1 (82,58%), T 2 (82,47%) y T 3 (81,36%) los valores del plomo siempre

estaban bajo la norma segn la RAOHE (< 100 mg/kg) para uso agrcola.

Con el porcentaje de eficiencia de los seis tratamientos en estudio mediante la atenuacin natural, bioestimulacin, se llev a cabo satisfactoriamente el proceso de degradacin de los contaminantes (TPH, Cd, N, Pb) durante la Biorremediacin, obtenindose valores que fluctan (60 -97%). Con todo lo expuesto se acepta la hiptesis planteada.

CAPTULO IV

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

4.1 Conclusiones:

1.

Los microorganismos en el proceso de degradacin de hidrocarburos

desempean un papel importante, al inicio del tratamiento podemos ver un valor de (5,4 X 10 UFC/g) como muestra inicial, con el trascurso del tiempo hubo incremento en la actividad microbiana durante los seis meses de estudio en el tratamiento T 1 obteniendo un valor de (3,3 X 10 UFC/g), por lo tanto mientras mayor cantidad de microorganismos exista la degradacin de los hidrocarburos es mayor.
7 6

2.

Queda demostrado que en la vegetacin contaminada no llega en seis

meses a biorremediarse por la poblacin microbiana natural sin la adicin de nutrientes y acondicionadores existentes, aireacin y humectacin peridica del rea tratada.

3.

Al realizar el anlisis estadstico en el proceso de degradacin de

hidrocarburos totales de petrleo (TPH), metales pesados (Ni, Cd, Pb) y microorganismos se obtuvieron los siguientes valores durante el ltimo mes (Abril) de experimentacin en el tratamiento T 1 : TPH(1465 mg/Kg), metales

Cd (0.24 mg/Kg., Pb (2.00 mg/Kg.), Ni (1.600 mg/Kg.) y Aerobios Mesfilos (3,3 X 10 UFC/g).
7

4.

Se ha demostrado que la tcnica de compostaje es eficiente y

econmico para seguirla aplicando en el proceso de Biorremediacin de vegetacin contaminada con petrleo.

5. por

El tratamiento de Biorremediacin aplicando la tcnica de Compostaje bioestimulacin al rea impactada result efectivo, observndose una

disminucin en la concentracin de hidrocarburos, obteniendo un porcentaje de eficiencia de degradacin en el tratamiento T 1: TPH (97.79%) y el T 2 TPH (97.11%) y en los metales pesados en el T 1 Cd (63,08%) y T 2 (60,00%), T 1 Ni (94,60%), y T 2 (94,13%), T 1 Pb (82,58%),T 2 (82,47%) ,llegando a los lmites permisibles estipulados en el Reglamento Ambiental para las

Operaciones Hidrocarburferas segn la (RAOHE) y seguros que este sea utilizado como abono para las plantas ornamentales

6.

En definitiva el experimento alcanzo sus objetivos a travs del proceso

de compostaje por bioestimulacin y monitoreo de los parmetros de control y medicin, se determin que el T 1 un valor de TPH (1465 es el mejor obteniendo de esa manera

mg/Kg) es el ms idneo para llevar a

cabo la Biorremediacin de la vegetacin contaminada.

4.2. 1.

Recomendaciones El proceso de compostaje en Biorremediacin de vegetacin

contaminada con petrleo es factible por ser una tcnica econmica y da buenos resultados.

2.

Implementacin de equipos en el Laboratorio de Unidad de Proteccin

Ambiental (UPA) de Lago Agrio (PETROECUADOR) de esta manera se facilitara el proceso de investigacin.

3.

Dadas las bondades que presenta este tipo de

tcnica, es

recomendable que la empresa mediante estos tipos de investigacin conozcan los beneficios que involucra la tcnica antes mencionada para la empresa, comunidades y el ambiente que son directamente afectados por las emisiones lquidas de la industria petrolera.

RESUMEN La investigacin tiene por objeto biorremediar vegetacin contaminada con petrleo por derrames en el campamento Guarumo Petroproduccin, con el fin de disminuir la concentracin de hidrocarburos totales de petrleo hasta llegar a lmites permisibles estipulados (RAOHE), se realiz aplicando una tcnica de compost mediante bioestimulacin.

Para alcanzar el objetivo planteado se realiz 6 tratamientos (T 1 T 6 ) con 3 rplicas cada una mas la cantidad de desechos orgnicos vegetales no contaminados el 35% ), para incrementar (75,55,45,25,35 la actividad y microbiana, 65%)y y la vegetacin acondicionadoraserrn (25,45,55,75,65

contaminada fue distribuida en partes iguales (100%) en 6 bioceldas mientras que se utiliza como testigo (T 7 ), controlado por atenuacin natural, siguiendo 2008. un control de los tratamientos mediante anlisis fsicoqumicos y microbiolgicos cada 30 das en el perodo, Noviembre 2007- Abril

Se obtuvo una reduccin de hidrocarburos de petrleo en el T 1 (75% MO, 25% A) obteniendo un porcentaje de eficiencia de TPH en un 97,79%, Cd 63,08%, N 94,60% y Pb 82,58%, en comparacin con el T 7 testigo que obtuvo un porcentaje de TPH 8,00%; se observ presencia de metales pesados de todos los tratamientos, hallndose en niveles inferiores a los lmites permisibles segn la RAOHE. El proceso de Biorremediacin por Compost mediante bioestimulacin inicia con un valor de aerobios mesfilos de 5,4 *10
6

en la vegetacin contaminada; en comparacin con la muestra

7

inicial aument la actividad microbiana llegando a un valor de 3,30 * 10 totales de petrleo TPH, opcin econmica y factible para Biorremediar.

lo

cual demuestra que es un buen mtodo de Biorremediacin de hidrocarburos

SUMARARY

This investigation deals with bio-remedying the vegetation polluted with oil spills in the camp Guarumo-Petroproduccin, to diminish the total oil hydrocarbon concentration up to reaching the permissible limts (RAOHE), it was carried out applying a compost technique through biostimulation.

To attain the proposed objective six treatments (T 1 T 6 ) with 3 replications each were carried out plus the non-polluted organic vegetable waste quantity (75,55,45,25,35 and 65%) and the sawdust conditioner (25,45,55,75,65 and 35 %), were carried out to increase the microbial activity. The polluted vegetation was distributed in equal parts (100%) into six biocells while using the control treatment (T 7 ), controlled bay natural attenuation, following a treatment control trhough the physical and chemical and microbiological analysis each thirty days in the period November 2007-April 2008.

A reduction of the oil hydrocarbons was obtained in the T 1 (75% MO, 25%A) with an efficiency percentage of TPH in a 97,79%,63,08%, Cd94.60% Ni94,60% and Pb 82,58%, as compared to the control (T 7 ) wich obtained a percentage of TPH 8,00%; the presence of heavy metals of all the treatments was observed, being at the levels lower than the permissible ones according to RAOHE. The bio-remedying process bay compost through boistimulation starts with a value of mesophyll aerobes of 5, 4*10 of 3, 30 *10
7 6

in the polluted vegetation; as

compared to the initial sample the microbial activity increased reaching a value witch shows that it is a good bio-remedyng method of total oil hydrocarbons TPH, an economic and feasible option for bio-remedyng.

BIBLIOGRAFA

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10. MAROTO, A.

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ANEXO 1 DIAGNSTICO AMBIENTAL DE LA REGIN.

MES ENERO FEBRERO MARZO ABRIL MAYO JUNIO JULIO AGOSTO SEPTIEMBRE OCTUBRE NOVIEMBRE DICIEMBRE

PRECIPITACIN (mm) 143,2 141,1 178,8 244,5 217,6 238,8 282,8 176,4 191,5 223,7 249,6 104,3

TEMPERATURA
0

HUMEDAD

( C) (%) 28,3 70 27,5 75 27,0 79 26,5 82 26,6 81 25,4 84 24,5 86 25,7 80 26,6 79 27,2 77 26,8 80 28,0 74 Fuente: Anuario Meteorolgico e Hidrolgico.

ANEXO 2 RH-300 PRODUCTO BIODEGRADABLE PARA TRATAMIENTO DE RESIDUOS ACEITOSO, UELO Y LODOS CONTAMINADOS POR HIDROCARBUROS Y DERIVADOS.

El producto RH 300 es una solucin innovadora para los problemas especficos de contaminacin por Hidrocarburos y un elemento importante en los procesos de limpieza industrial, recuperacin de suelos contaminados. Formulado a partir de productos Ctricos Orgnicos no derivados del Petrleo, el RH 300 neutraliza una gran variedad de contaminantes y logra estabilizar (Quelar) metales pesados. Dentro de las ms importantes caractersticas del RH 300 se destaca su no Toxicidad, no es inflamable, no contiene productos separados o destilados del petrleo y es completamente seguro de usar cerca de las Personas, animales, productos alimenticios y plantas. El RH 300 tiene la habilidad de convertir hidrocarburos y otros contaminantes en una solucin acuosa lo suficientemente segura como para ser vertida al sistema de alcantarillado municipal tanto como la regulacin local o municipal lo permita. Esta solucin tambin puede ser digerida por microorganismos presentes en agua y suelo. Principios Qumicos del RH 300.

Origen El Rh 300 es un producto constituido por Solvente Orgnicos derivado de material Ctricos no obtenidos a partir de Derivados del Petrleo. Sus componentes Bsicos son los d- Limonatos y Terpenos obtenidos a partir de fritos ctricos. Caractersticas Fsico- qumicas del Producto. Punto de ebullicin: Temperatura de encendido: Densidad de vapor: Presin de vapor pH: Lmite mnimo de explosin Lmite mximo de explosin Punto de flama: Soluble en agua: Rata de evaporacin: Porcentaje de voltiles: Color y apariencia: 121 C No inflamable Aire = 1 Igual al agua = 1 10 N/A N/A No encender Miscible en todas las proporciones Agua = 1, menor que 1 < 3% Lquido lechoso claro/transparente
0

Mecanismo de Reaccin. Los materiales contaminados con hidrocarburos y derivados de petrleo son convertidos en compuestos no txicos mediante procesos de hidrlisis y saponificacin, adquiriendo la condicin de un sustrato de solucin de agua de aspecto jabonoso. El RH 300 rompe las cadenas de hidrocarburos facilitando su esterificacin. En estas condiciones es fcilmente asimilable y metabolizado por los microorganismos mesfilos presentes en el suelo y agua. Proceso de Quelacin de Metales Pesados.

El RH 300 tiene la especial habilidad o caracterstica de reducir o inactivar los metales pesados y los residuos mediante un proceso recaptura para lograr inactivarlos. Cuando un metal es capturado, los iones son retenidos por cadenas coordinadas y no sern liberados de nuevo durante el proceso.

Algunos de los metales pesados que el RH 300 puede quelar son: Arsnico, Cadmio, Cromo, Bario, Plomo, Zinc, Selenio, Nquel.

ANEXO 3 HOJA DE SEGURIDAD DEL MATERIAL: RH-300 1) IDENTIFICACIN DEL PRODUCTO Nombre del producto: RH 300

2) INGREDIENTES PELIGROSOS Ingredientes peligrosos: Ninguno

3) CARACTERSTICAS FSICAS Y QUMICAS Punto de ebullicin: Temperatura de encendido: Densidad de vapor: Presin de vapor pH: Lmite mnimo de explosin: Lmite mxima de explosin: Punto de flama: Soluble en agua: Rata de evaporacin: Porcentaje de voltiles: Color y apariencia: 121 0C No inflamable Aire = 1 Igual al agua = 1 10 N/D N/D No encender Miscible en todas las proporciones Agua = 1, menor que 1 < 3% Lquido lechoso claro/transparente

4) PELIGROS FSICOS Ninguno

5) PELIGROS PARA LA SALUD Signos y Sntomas: Posible causa de irritacin en la piel y ojos 6) EQUIPO ESPECIAL DE PROTECCIN Guantes de caucho normales, no requiere otros, al menos si la piel es sensible. 7) PRECAUCIONES ESPECIALES Y PROCEDIEMIENTOS

ENDERRAMES O FUGAS Diluir con agua, disponer y acordar con las autoridades locales las regulaciones 8) INFORMACIN ADICIONAL Las propiedades orales y dermatolgicas no se consideran txicas, ni ambientalmente perjudiciales. Los productos no contienen mayores peligros.

ANEXO 4 VALORES MEDIOS DE LOS PARMETROS DE CONTROL TABLA 21. pH

TRATAMIENTOS NOVIEMBRE DICIEMBRE ENERO FEBRERO MARZO T1 T2 T3 T4 T5 T6 Testigo 5,93 5,99 5,92 5,99 5,94 6,00 5,00 6,33 6,00 6,33 6,33 6,33 6,10 5,45 6,33 6,66 6,00 6,33 6,33 6,00 5,65 6,27 7,00 7,82 7,00 6,71 7,97 6,10 7,66 7,21 7,57 6,33 7,39 7,95 6,58

ABRIL 8,11 7,69 8,02 7,86 7,96 8,65 7,12

TABLA 22. HUMEDAD TRATAMIENTOS NOVIEMBRE DICIEMBRE ENERO FEBRERO T1 49,67 55,39 61,81 64,96 T2 48,97 57,32 65,70 63,39 T3 61,28 64,97 68,02 59,54 T4 59,37 60,15 54,52 65,89 T5 53,71 64,29 65,80 63,78 T6 54,34 60,22 57,37 64,74 Testigo 25,78 51,36 55,85 62,65 MARZO 62,55 61,03 71,32 69,04 63,43 70,02 65,89 ABRIL 66,74 61,79 67,43 65,67 61,96 70,64 69,42

TABLA 23. AEROBIOS MESFILOS Anlisis Microbiolgico (UFC/g) TRATAMIENTOS T1 T2 T3 T4 T5 T6 Testigo Fecha 1 8,05E+06 6,44E+06 7,13E+06 6,56E+06 6,66E+06 7,15E+06 5,40E+06 Fecha 2 6,33E+07 6,76E+06 6,45E+07 4,04E+07 6,67E+06 6,08E+07 6,70E+06 Fecha 3 3,30E+07 3,25E+07 3,15E+07 2,22E+07 2,15E+07 2,10E+07 7,85E+06

TABLA 24. Carbono orgnico TRATAMIENTOS NOVIEMBRE DICIEMBRE T1 5,18 4,83 T2 5,23 4,83 T3 4,48 4,26 T4 5,55 3,58 T5 4,47 4,29 T6 4,76 4,43 Testigo 3,50 3,49 ENERO 4,56 4,6 4,10 3,43 4,02 4,19 3,48 FEBRERO 4,05 3,65 3,03 3,01 3,29 3,35 3,47 MARZO 3,17 3,10 2,33 2,65 2,18 2,45 3,46 ABRIL 2,71 2,00 1,43 1,67 1,34 1,52 3,45

TABLA 25. Fsforo TRATAMIENTOS NOVIEMBRE DICIEMBRE T1 4,17 6,58 T2 5,50 6,34 T3 4,03 7,01 T4 4,80 7,10 T5 4,93 6,43 T6 4,27 7,22 Testigo 2,00 2,03 ENERO 7,72 7,79 7,89 7,92 7,95 8,44 2,04 FEBRERO MARZO 10,68 11,35 10,55 10 9,99 12,99 10,09 10,02 10,5 10,6 10,05 12 2,06 2,07 ABRIL 13,98 13,08 14,99 12,72 12,62 13,61 2,09

TABLA 26. Nitrgeno TRATAMIENTOS NOVIEMBRE DICIEMBRE T1 0,08 0,13 T2 0,04 0,07 T3 0,05 0,08 T4 0,07 0,12 T5 0,03 0,07 T6 0,06 0,11 Testigo 0,02 0,021 ENERO 0,14 0,09 0,11 0,13 0,09 0,12 0,022 FEBRERO 0,19 0,17 0,17 0,18 0,15 0,17 0,024 MARZO 0,23 0,16 0,17 0,22 0,20 0,21 0,026 ABRIL 0,24 0,22 0,22 0,23 0,20 0,22 0,027

ANEXO 5 VALORES MEDIOS DE LOS PARMETROS DE MEDICIN TABLA 27. TPH

TRATAMIENTOS NOVIEMBRE DICIEMBRE T1 66206 62112 T2 68686 67960 T3 65624 62386 T4 70018 67265 T5 68462 63193 T6 67548 62693 Testigo 86750 85012 Blanco 235 220

ENERO* 10777 12217 14046 14097 13324 12304 84015 215

FEBRERO 7350 7384 6277 6238 5356 6564 83156 208

MARZO 2657 3272 2659 4441 3501 3879 82154 189

ABRIL 1465 1983 2600 2689 3064 3081 79812 185

*El tratamiento involucra lavar el material contaminado con agua a alta presin, se ve una disminucin del contaminante (TPH) a partir mes de enero.

TABLA 28.CADMIO TRATAMIENTOS NOVIEMBRE DICIEMBRE ENERO FEBRERO T1 0.65 0.46 0.24 0.24 T2 0.60 0.41 0.26 0.24 T3 0.46 0.33 0.29 0.26 T4 0.54 0.38 0.34 0.24 T5 0.42 0.32 0.31 0.24 T6 0.53 0.44 0.35 0.24 Muestra inicial 0.8 0.75 0.66 0.63 Blanco 0.031 0.028 0.026 0.24 MARZO 0.24 0.24 0.24 0.24 0.24 0.24 0.59
0.24

ABRIL 0.24 0.24 0.24 0.24 0.24 0.24 0.58

0.24

TABLA 29. NQUEL

TRATAMIENTOS NOVIEMBRE DICIEMBRE ENERO FEBRERO T1 29.65 18.26 6.50 1.60 T2 27.28 14.32 6.05 1.60 T3 24.29 10.37 5.33 1.60 T4 23.53 15.61 5.66 1.60 T5 24.89 14.68 4.28 1.60 T6 25.66 11.92 4.64 1.60 Muestra inicial 37.41 35.45 30.5 28.31 Blanco 21,00 18,12 16,19 15,11

MARZO 1.60 1.60 1.60 1.60 1.60 1.60 28.2 7,13

ABRIL 1.60 1.60 1.60 1.60 1.60 1.60 26.38 3,75

TABLA 30. PLOMO TRATAMIENTOS NOVIEMBRE DICIEMBRE ENERO T1 11.48 7.89 2.48 T2 11.41 7.02 2.84 T3 10.73 9.23 3.22 T4 8.95 5.55 2.19 T5 9.74 5.22 2.85 T6 8.55 4.46 4.23 Muestra inicial 20 18.32 17.32 Blanco 7,89 7,08 5,78 FEBRERO 2.00 2.00 2.75 2.00 2.00 2.44 16.25 5,67 MARZO 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 16.11 4,73 ABRIL 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 15.25 2,56

ANEXO 6 Fotografa N 1. Instalacin del centro de acopio para Biorremediacin por Compost.
0

Fotografa N 2. Codificacin de Identificacin de los diferentes tratamientos.

Fotografa N 3. Traslado del material contaminado (vegetacin con petrleo).

Fotografa N 4. Distribucin de la vegetacin contaminada con petrleo en cada una de las parcelas.

ANEXO 7 Fotografa N 5. Muestras a analizar laboratorio.

0

Fotografa N 6. Anlisis de Hidrocarburos Totales (TPH).

Fotografa N 7. Anlisis de metales pesados