CROMATOGRAFIA DE EXCLLUSO POR TAMANHO (SEC, GPC) A tcnica de determinao de massa molecular relativa teve grande contribuio a partir

da descoberta de Lord Rayleight quanto a teoria eletromagntica clssica para explicar o fenmeno de espalhamento de luz por molculas de gases. Demonstrou que a fonte de luz incidente dispersa de acordo com o volume do material espalhante. Com o avano da tecnologia a SEC ou em ingls GPC (Gel Permeation Chromatography) tornou-se a tcnica mais utilizada para determinao de peso molecular relativo numrico mdio, molecular ponderal mdio e distribuio do tamanho de partculas. Como nas tcnicas tradicionais de cromatografia h uma fase estacionria, uma fase mvel e um detector, podendo este ser de ndice de refrao ou ultra-violeta. A fase estacionria possui um importante papel da qualidade das anlises realizadas. So compostas principalmente de molculas porosas e, na sua grande maioria, tridimensionais, entre elas se destaca molculas reticuladas de estireno-divinilbenzeno. Em geral so utilizados copolmerors reticulados ou silicatos macroporosos. A porosidade da fase estacionria medida em angstron () no medida pelo seu tamanho de poros nominal e sim pela cadeia estendida no seu limite de excluso. Desta forma uma coluna com 100 ,s conseguir separar, com eficincia, molculas com tamanho menores que 100 . Portanto o limite de excluso ser igual ao tamanho da cadeia estendida. muito importante que a fase estacionria no reaja com o analito, no adsorva a molcula de analito, no inchem na presena do solvente e no sofra alterao com a temperatura ou presso, pois estes fenmenos interferem diretamente no tamanho dos poros da fase estacionria. Para evitar alargamento das curvas necessrio que no ocorra caminhos preferenciais, difuso para zonas estagnadas (difuso tortuosa ou eddy diffusion). Este problema ocorre principalmente devido ao mal empacotamento da coluna. Em alguns casos, quando volume de excluso no permite a separao correta das macromolculas necessrio o uso de mais de uma coluna com tamanho de poros variados. A coluna portanto constituda por partculas contendo diversos tamanhos de poros, onde o volume total da fase mvel na mesma, corresponde ao volume de poros (VP) mais o volume intersticial (volume de fase mvel fluindo entre as partculas (V0)). Desta forma o volume de eluio do analite igual ao volume de poros mais o volume intersticial.

As fases mveis utilizadas precisam no absorver gua com muita facilidade e no provocar inchamento da fase estacionria. Como a determinao da massa molecular mdia medida pelo espalhamento de luz, a fase mvel no deve possuir nenhuma impureza em suspenso e o analito deve estar totalmente dissolvido na mesma. Para polmeros hidrossolveis a gua pode ser utilizada como fase mvel, tendo somente como dificuldade a obteno de uma curva de calibrao ideal. Outra informao muito importante quando ao detector utilizado, a fase mvel do deve absorver no ultra-violeta de este for utilizado. No caso do ndice de refrao no ocorrem restries.