IDENTIFICACINYCARACTERIZACIONDEColletotrichumspp COMO AGENTECAUSALDELAANTRACNOSISENDioscoreaspp

MARIAJOSEBAQUERO LIBIAMARIAPEREZCASTRO

UNIVERSIDADDESUCRE FACULTADDECIENCIASYEDUCACIN PROGRAMADEBIOLOGA SINCELEJO2002

IDENTIFICACINYCARACTERIZACIONDEColletotrichumspp COMO AGENTECAUSALDELAANTRACNOSISENDioscoreaspp

MARIAJOSEBAQUERO LIBIAMARIAPEREZCASTRO

TrabajodegradopresentadoparaoptareltitulodeBilogoconnfasisen Biotecnologa

Director:

JAVIERDARIOBELTRANPh.D.

UNIVERSIDADDESUCRE FACULTADDECIENCIASYEDUCACIN PROGRAMADEBIOLOGA SINCELEJO2002

AGRADECIMIENTOS

LOSAUTORESEXPRESANSUSAGRADECIMIENTOSA:

ADios,porsuinfinitamisericordia,porserguayporcontribuirconsusabiduraa queestatrabajofueraposible.

AldoctorJAVIERDARIOBELTRNHERRERAPhD.fitopatologa,por ayudarnosaconstruirelcamino,porcontribuiranuestraformacincomo investigadores,porvalorarnuestrasideasporsuapoyoincondicional,porsus orientacionesyporsutiempo.

AARTURODONCELMESTRAporsuinvaluableapoyo.

AloscultivadoresdeamedeldepartamentodeSucreporpermitirnosmuestrear ensuscultivosyporsusenseanzas.

Atodoslosdocentesqueaportaronanuestraformacin,HERNANDOGOMEZ SAULHERNEYSARRI,OCTAVIOSALOMNARZUZA,JAMESCASTAO, ADOLFOCONSUEGRA,CARLOSCABRA,JUANMANUELDIAZ,RINA MARTINEZ,RITAMARQUEZ,CARLOSSUAREZ,ALCIDEZSAMPEDRO, REINALDOTRUJILLO,RUBENPATIOYPEDROJOSEBLANCO.

Anuestrosevaluadores:FERNANDOARANA,MISAELMONTES,ANDRES ALVAREZYALEXANDERPEREZ

Atodosnuestroscompaeritosyamigosporsercmplices.

AlaUNIVERSIDADDESUCREYsutalentohumanoportodoelapoyobrindado.

ALLABORATORIODEMICROBIOLOGAYSANIDADVEGETAL UNIVERSIDADDESucreporsusinstalacionesyequipos.

CORPOICACARMENDEBOLVAR,porfacilitarnossugermoplasma deame

CORPOICATURIPAN,porfacilitarnosequipos. UNIVERSIDADDEVALENCIAESPAA,porfacilitarnossucoleccin decepasde Colletotrichum

UNIVERSIDADDEARKANSASUSA,porenviarnosamablementelas clavestaxonomicasdeColletotrichum

UNIVERSITYILLINOISyINTERNATIONALCENTREOFAGRICULTUREUSA porsuministrarmaterialbibliogrfico.

Yatodasaquellaspersonasquedeunauotraformacontribuyeronparala ejecucindeestetrabajo

DEDICATORIA

Amipadrecelestial,porserunpadredeinmensoamor AmimamiMARIASANDIEGOGARRIDOyamipapiALEJANDRO BAQUERO,porserlascolumnasdeestedificacin. Amisamigosycompaerosdeluchaporserunvaluarte incomparable Amishermanosporestarsiemprepresentes. Amifamiliaresporserunapoyoincondicional AJOSEDAVID,porserluzenmediodemuchos AROBERTOJOSE,porestarenmimenteycoraznsiempre Atodosyatodaslaspersonasqueconsuamoryapoyo permitieronydesearonqueestohoyfueraunarealidad. Finalmentealasgolondrinasporquenuncahandejadode volar.

MariaJose

Amipadrecelestialporllevarmesiempredelamanoyno dejarmesolaunsolosegundo Amimadre,TERESACASTROPEREZporsergua,cmplice, apoyoyamigaporcompartirmissueos,porcontribuira quesehaganrealidad AmipadreANTONIOJOSEPEREZporestarpresenteyporsus abrazos Amishermanitas,MAYO,OMA,OLGUI,YYURYporsuapoyo incondicional,supacienciaporcompartirmisalegras,mis doloresymisangustias.Porestarconmigosiempre. Amisternuritasdesobrinitosysobrinitasporregarlesus sonrisasysusalegrasyporiluminarmivida AlamemoriadeNicoporamarmecomomeamo Amisamigasyamigosporsusbuenosdeseos Yamicielohermosoporexistir

LibiaMaria

Sololosautoressonresponsablesdelasideasexpuestasenelpresente trabajo Articticulo12,ley232000

NOTADEACEPTACIN

______________________________ Pr esidentedeljur ado

______________________________ J ur ado

______________________________ J ur ado Sincelejo,Noviembre6del2002

CONTENIDO

Pag

RESUMEN INTRODUCCIN 1.OBJETIVOS 1.1OBJETIVOGENERAL 1.2OBJETIVOSESPECFICOS 2.JUSTIFICACIN 3.ANTECEDENTES 3.1GENERALIDADESDELAME(Dioscoreaspp) 3.1.1Botnicadelame(Dioscoreaspp) 3.1.2Morfologadelame(Dioscoreaspp) 3.1.3Ubicacintaxonmicadelame 3.1.4Limitantesdelaproduccin 3.2GENERALIDADESDELAANTRACNOSIS 3.2.1SNTOMASDELAANTRACNOSISENAME 3.3ELPATGENODELAANTRACNOSIS 3.3.1UbicacinTaxonmicadelhongo 3.3.2Generalidadesdelpatgeno 3.3.3Epidemiologa

8 10 16 16 16 17 18 18 18 19 19 19 20 21 21 21 21 23

3.3.4Etiologadelhongo 3.4ENFERMEDADESCAUSADASPORDIFERENTESESPECIES DEColletotrichum 3.5METODOSDEMANEJODEANTRACNOSISENAMEENLA COSTACARIBE 3.6CARACTERIZACINMORFOLOGICADELPATGENO 3.7ESTUDIOSDECOMPATIBILIDADSOMTICA: 4.METODOLOGIA 4.1TIPODEESTUDIO 4.2LOCALIZACIN 4.3RECOLECCINYRECEPCINDEMUESTRAS 4.4AISLAMIENTODELPATOGENO 4.5ESTUDIOSMORFOLOGICOSDELHONGO 4.5.1Establecimientodecultivosmonospricos. 4.5.2Mantenimientodelosaislamientos 4.5.3Caracterizacinmorfolgica 4.5.4Curvaytasadecrecimiento 4.6COMPATIBILIDADSOMTICA 4.7PRUEBASDEPATOGENICIDAD 4.8ANLISISESTADSTICO 4.8.1Ratadecrecimientodelascepas 5RESULTADOSYDISCUSIN 5.1DESCRIPCINDELASINTOMATOLOGA 5.2CONSTITUCINDELCEPARIO

21

26

28 29 31 32 32 32 33 33 34 34 35 35 36 36 37 39 39 40 40 42

5.3MORFOLOGA 5.4CARACTERISTICASCULTURALES 5.5CARACTERISTICASDELASCONIDIAS 5.6CURVAYTASADECRECIMIENTO 5.7COMPATIBILIDADSOMATICA 5.8.PRUEBADEPATOGENICIDAD 6.CONCLUSIONES 7.RECOMENDACIONES BIBLIOGRAFIA ANEXO

42 42 45 47 45 51 56 58 59 68

LISTADEFIGURAS

Pg.

Figura1ManchascaractersticasdeantracnosissobreDioscoreaalatacvosito ...................................................................................................................... 41 Figura.2ManchascaractersticasdeantracnosissobreDioscoreaalata cvD22 ........................................................................................................... 37

Figura3.ColordelascoloniasdelosdiferentesaislamientosdeColletotrichum

spp ...................................................................................................................... 39
Figura4Caractersticasdelascoloniasaisladas................................................ 40 Figura5ConidiascaractersticadeColletotrichumgloeosporioides .................. 42 Figura6ConidiascaractersticasdeColletotrichumdematium........................... 42 Figura7Tasadecrecimientocada12hde8aislamientosdeColletotrichumssp eneldptodesucre.............................................................................................. 48 Figura.8Masasalvajeresultadodelaanastomosishifal.................................. 50 Figura9.Anastomosishifalresultadodeelenfrentamientodedoscepas........ 51 Figura.10Respuestadelascepasinoculadassobreloshospederos............... 52 Figura11SeveridaddelaenfermedadenhojadeDiscoreaalatadespusdela inoculacinconColletotrichumgloeosporioides 49

LISTADEANEXOS

Pag.

AnexoA.Cuadrodelascaractersticasaevaluarenlascepasde

Colletotrichumspp.
AnexoB.CuadroderesumendelosaislamientosdeColletotrichumsppysu procedencia.

68

69

AnexoC.Cuadrodelosresultadosgeneralesobtenidosenlascaractersticas morfolgicasdeColletotrichumspp. 71

AnexoD.CuadrodecrecimientoVs.esporulacindelascepasde

Colletotrichumspp.

72

AnexoE.TabladecorrelacindePearson.

73

AnexoF.Tabladedatosestadsticosrelevantesdelapruebadepatogenecidad. 74

INTRODUCCIN

Las enfermedadessonunfactorlimitante y depresivodela produccin y calidad de los cultivos en el mbito mundial destacndose las producidas por hongos, bacterias,virusynematodos,entreotros.Loshongossonunodelosrenglonesde mayor importancia ya que prevalecen en una amplia variedad de formas reproductivas,tantoasexualescomosexuales.Sehandescritoenlaactualidad aproximadamente 8.000 especies de hongos patgenos en plantas y son de particularimportanciaaquellosqueestndirectamenterelacionadosconlacalidad de los cultivos y sus productos, lo cul depende entre otros factores, de la proteccin que tengan estos contra el ataque de dichos patgenos (Herrera y Ulloa, 1990). Es as como el cultivo de ame Dioscorea spp, cultivo de gran importanciasocioeconmicaparalospequeosproductoresdelaCostaAtlntica ha sido afectado por un nmero considerable de estos organismos los cules requierenespecialatencinnosloporlasprdidasocasionadas,sinoporquelos problemas producidos por sus daos se han venido incrementando en forma notoria en reas donde este cultivo tiene importancia econmica (Lpez y Gamero,1998).

Entre los problemas fitosanitarios presentes en el cultivo se destacan las enfermedades producidas por hongos Fusarium oxisporum causante de la marchitezdelaplantayColletotrichumgloeosporioidescausantedelaantracnosis (Osorio y Ramrez, 1989). En la actualidad esta ultima enfermedad es consideradacomolamsgraveydemayordiseminacinenColombiayaqueha causadoprdidasdrsticasafectandolaproduccindelcultivohastamsdel80% delreasembrada(NegreteyRedondo,1997). El hongo que ocasiona la enfermedad conocida como antracnosis en ame,

Colletotrichum es uno de los gneros de hongos patgenos de plantas ms

importantes y de mayor distribucin en el mundo ya que ataca especialmente

cultivosderegionestropicalesysubtropicales.(WallerandBrigde,2000Manners et al., 2000). La sintomatologa se presenta en las hojas, peciolos y tallos. Inicialmente las hojasafectadas presentanpuntos rojizos,las lesionescrecen en formairregularyseunenentresocasionandonecrosistotaldelahoja(Negretey Redondo,1997).

Encuantoalascondicionesquemsfavorecenlaenfermedadestnlosperiodos delluviasintensasyfuertesconaltahumedadrelativa,ocasionandoenmuypoco tiempo brotes epidmicos severos que comprometen casi toda la planta en desarrollo(Melotto etal.,2000). Laseveridad de laantracnosishallevadoalos productores a realizar aplicaciones excesivas de fungicidas, causando contaminacin ambiental, un aumento en los costos deproduccin y en algunos casoselabandonototaldelcultivoanteelfracasodestapractica.

ElagentecausaldelaantracnosiseselColletotrichumgloeosporioideselcualha tomadounagranimportanciaenloscultivoshanivelmundial, yaqueseintentan desarrollar sistemas que simulen los procesos de infeccin y mecanismos de resistenciabioqumicaparatenermayoresconocimientosquesustentenelmanejo delpatgeno(RodrguezyRedman,2000).

1.OBJETIVOS

1.1OBJETIVOGENERAL:

IdentificarycaracterizarColletotrichumsppcomoagentecausaldeantracnosisen

Dioscorea spp mediante tcnicas convencionales a partir de aislamientos

provenientesdelasprincipaleszonasproductoras de ame del departamento de Sucre.

1.2 OBJETIVOSESPECFICOS:

AislarypurificarlascepasdeColletotrichumsppcausantesdeantracnosisen ame en los municipios de Ovejas, Toluviejo, Sampus, Sincelejo, San Juan deBetulia,LospalmitosyCorozal. Caracterizar morfolgicamente las cepas deColletotrichum spp causantes de antracnosisatravsdemicroscopiadirectaenmediodecultivo.

Establecer un cepario a partir de los aislamientos de Colletotrichum spp obtenidosdelcampo.

Caracterizar mediante mtodos de infeccin controlada la variabilidad patognicadeColletotrichumspp apartirdelosaislamientosobtenidossobre clonesdeametolerantesysusceptiblesalpatgeno

2. JUSTIFICACIN

EnColombiaexistedeficienteinformacinacercadelabiologadelColletotrichum

gloeosporioides, su diversidad gentica, patognica y epidemiologa de la

enfermedad lo cual restringe y obstaculiza el conocimiento sobre la estructura poblacional del hongo que se constituye en una herramienta importante para formular estrategias de manejo (Romero, 1999). Las estrategias de manejo se hacen necesarias debido a la alta incidencia de la antracnosis en ame especficamenteenlosdepartamentos de Crdoba, Bolvary Sucre causadapor el hongo Colletotrichum gloeosporioides lo que llev a la reduccin del rea sembrada en un 94%, produciendo la desaparicin de clones comerciales, pero susceptibles a la enfermedad con la consiguiente reduccin de la variabilidad genticaenlapoblacin.Igualmentecauseldeterioroeconmicoysocialdela reginconperdidaspormsde18000millonesdepesosenlosaosde1989y 1990 (Lpez y Gamero, 1998). Por tal razn, los estudios sobre variabilidad morfolgica y gentica, el conocimiento de los procesos de infeccin y su interrelacin con los recursos genticos cultivados son de gran utilidad en procurasdegeneraralternativasdesolucinconlascualessecontribuyaareducir el dao producido por el patgeno y a la vez aumentar la productividad en los cultivos con materiales seleccionados, reducir el uso de agroqumicos, minimizandogastosyevitandoafectarnegativamenteelmedioambiente.

3.ANTECEDENTES

3.1GENERALIDADESDELAMEDioscoreaspp

El ame Dioscorea spp es uno de los tubrculos tropicales ms importante con una produccin anual superior a 25 millones de toneladas (Prez, 1993). Comprende alrededor de 600 especies consideradas de gran importancia econmica entre las que se encuentran D. rotundata, D. cayanensis y D. alata (PereayBuitrago,2000). Dioscoreaalata esunodelosamesdemayortamao yconmayorimportanciaeconmicadetodaslasespeciescultivadas,estaespecie genera una de las ms altas producciones en la regin caribe colombiana, en donde es cultivado principalmente en la zona costera del departamento de Crdoba, la subregin natural de los montes de Mara en los departamentos de Sucre y Bolvar, y algunos municipios del departamento del Cesar y La Guajira. (lvarez, 2000 Guzmn y Fontanilla, 2000), constituyndose en parte indispensabledeladietaalimenticiadelaregincaribe(OsorioyRamrez,1989).

3.1.1BotnicadelameDioscoreaspp

El genero Dioscorea presenta plantas monocotiledoneas anuales la mayora de estasespeciestienenhojassimplesycordadas,soportadasporunpeciololargo. La distribucin de las hojas alrededor del tallo puede ser opuesta o alterna, los tallossongeneralmentebastantedbileseincapacesdesoportarsupropiopeso, porloquerequierenunbuentutorparasucrecimiento(Montaldo,1983). Sonplantasdioicasdeflorespequeas,rosadasocremasconformadecpsulas trilocularessecasytransparentes.Producesemillaspequeasdecoloresclarosy aplanados.Sucosechaproducetubrculoscomestiblesdespusdeochoadiez

mesesyconunperiododedormanciadetresacuatromeses.Esdeanotarque enlaregincaribenosedalapresenciadefrutosysisepresentannosonviables paralareproduccinsexual.

3.1.2 Morfologa del ame: El tubrculo subterrneo del vstago es la parte econmicamente ms importantedela plantayla queseutilizaparala siembra. Estetubrculotieneformaytamaovariabledependiendodelaespecieydelas condiciones ambientales presentndose tres partes: la cabeza, el cuerpo, y la cola, presenta races adventicias y una estructura llamada cormo. En la forma anatmica del tubrculo maduro se aprecianvariascapas: laperidermisformada porlacorteza,yunacapadetejidomeristematicoquepermitelabrotacincentral ytejidosvascularesxilemayfloema(Prez,1990Leverkusen,1998).

3.1.3Ubicacintaxonmicadelame:Segn,IITA(1993).

Reino: Divisin: Clase: Orden: Familia: Genero: Especie:

Vegetal Angiosperma Monocotiledonea Dioscoreales Dioscoreaceae Dioscorea varias

3.1.4Limitantesdelaproduccin:Elcultivodeameesafectadopordiferentes factores depresivos de la produccin, tanto de orden bitico como abitico, destacndoseporsumayorimportancialosfactoresbiolgicos,enlaactualidadla

atencin esta centrada en las enfermedades causadas por virus y hongos, principalmentelaantracnosiscausadaporColletotrichumgloeosporioides,lacual se registra en Colombia en todas las reas productoras con un alto ndice de dao agronmicoeconmico, existiendo datos estadsticos que muestran prdidashastadel100%dependiendodelascondicionesdesusceptibilidaddelos clones, lo cual conlleva a un incremento en los costos de produccin para su control por parte de los productores (Osorio, Ramrez, 1989). Esta enfermedad tambin ha sido encontrada en Nigeria, Islas Salomn, Puerto Rico, EEUU, en IndiayenpasesdefricaOccidentalyOriental(HaddenandBlack,1992).

3.2GENERALIDADESDELAANTRACNOSIS:

Con el termino antracnosis se acostumbra a designar a las enfermedades cuya caracterstica es presentar en los tallos, hojas y frutos de las plantas afectadas, lesiones tpicas necrticas (tejidos muertos), est enfermedad la causan los hongos pertenecientes a los gneros Colletotrichum, Glomerella, Gnomia,

Marzzonia, Mycospharella, Neofabre y Pseudopezzia que afectan numerosos

cultivos(Garca,1988).

3.2.1Sntomasdelaantracnosisename:Losprimerossignosdelainfeccin sonpequeas manchascaf,algunasconbordes amarillentosprincipalmenteen lashojasdelaspartesbajasdelasplantas,crculosconcntricosdecolormarrn clarooscuroyunadecoloracindelashojasenlaregindelasvenaslascuales al madurar conservan su tono plido rojizo en el haz, mientras que por el envs son de color caf muy oscuro y de aspecto brillante. De estas lesiones caractersticas se ha aislado consistentemente el hongo, Colletotrichum

gloeosporioides.Muchasvecessu aparicin se encuentra asociadacon la etapa

detuberizacin,quecoincideconelciclolluviosodeAgostoOctubre.

3.3ELPATGENODELAANTRACNOSIS

3.3.1Ubicacintaxonmicadelhongo(Agrios,1996)

Reino:Fungy DivisinII: Eumicota

Subdivisin4:Deuteromicotina ClaseI:Coelomicetes Orden:Melanconiales Gnero:

Colletotrichum

Especie:Varias

3.3.2 Generalidades del patgeno: El genero Colletotrichum comprende una amplia gama de especies en donde C. gloeosporioides, C. acutatum y C.

orbiculare sonlasmsimportantes(Cannonetal.,2000)stepresentaunmicelio
ramificado,inmerso,septado,quetomacoloracinhialinahastauncastaoplido.

El acrvulo es subcuticular, epidermal, formando tonos hialinos o a veces castaos,conunapareddensaogruesa.

Las setas presentes o ausentes, originalmente irregulares, ms o menos fuertes conunaparedgruesaseptada.Conidiforosseptados,ramificadosenlabasede color castao claro o completamente hialinos, presentan conidias hialinas, aseptadas de forma cilndrica, fusiforme que durante la germinacin se torna de colorcastaoplidoyformaelapresorio(Holliday,1995).

Lapresenciaoausenciadesetas puedediferenciarlosgnerosGloeosporiumde

Colletotrichum, aunque algunos autores mencionan que este criterio se ve

modificado por la formacin de estas estructuras en diferentes condiciones externas.

Las formas de Colletotrichum pueden ser determinadas por un sinmero de patrones naturales, entre los que figuran desde saprfitos hasta parsitos especializados con un amplio rango de hospederos. La conidia se produce en masas mucilaginosas, de color rosado, bastante conspicuas y tpicamente hundidas el patgeno forma lesiones necrticas en tallos, hojas, frutos, siendo denominadaAntracnosissegnJenkis,(1993).

Colletotrichum gloeosporioides ocasionalmente produce sus ascosporas en

periteciossobrefrutosinvernantesycangrosdealgunoshospederos,comoenel tomate de rbol (Romero, 1999) pero casi nunca forman dichas estructuras reproductoras en otros hospederos. Sin embargo, en todos los hospederos el hongose reproduce profusamente y forma masas rosadas deconidias en forma decervulos.

3.3.3 Epidemiologa: La infeccin inicial puede ser causada por esporas y micelio queinfectenlassemillas,las plantasquese desarrollanapartir de estas semillas desarrollan lesiones en el hipcotilo y en el cotiledn, cuando maduran estasplantasproducenunaabundanciadeesporas.Losprimerosestadiospara el desarrollo de la enfermedad son esencialmente los mismos para todas las especiesdeColletotrichum.

Los restosde hojas,tallosyfrutosdentro del dosel constituyen tambin fuentes de inoculo para el comienzo de brotes de enfermedades estacionales, lo cul enfatiza la importancia de las habilidades saprofticas de muchas especies de

Colletotrichum. La existencia de patgenos que hacen parte de la poblacin

microbiana del filoplano o como infecciones latentes de tejidos aparentemente sanos en el hospedero, tambin son fuentes de inoculo desde las cules las enfermedades epidmicas pueden desarrollarse, an cuando las fuentes ms obviasdesobrevivenciasaprofiticasehanremovido.

Cuando el patgeno se encuentra fuera del hospedero, el desarrollo de las enfermedades est restringido por el requerimiento de agua durante todas las fases del ciclode la enfermedad yaque lasesporasdela antracnosisnecesitan una pelcula de humedad en la superficie de la planta para su germinacin y penetracin a la epidermis, una vez desarrollada la lnfecciin las lesiones se amplan y se producen esporas nuevas que son ligadas por una sustancia gelatinosaalalesindetalformaquenopuedeserseparadaporelviento.

Esigualmenteevidentelavariabilidadenlasusceptibilidaddelpatgenoalestrs de humedad ya que en los meses de sequa est condicin afect

significativamente la capacidad infectiva del hongo. Este comportamiento se ha identificadoenotrasinvestigacionescomoindicativodequiescenciaenelhongo, inducida por condiciones desfavorables descritas por Bailey, (1992) y Harvis, (1994)citadoporAranzazuetal.,(1998).

Las condiciones ambientales que favorecen la infeccin involucran un rango de temperatura entre 22C y 32 C y una humedad relativa mayor al 92%. As mismo,laslluviasfrecuentesfacilitanladiseminacindelasconidiasenelcampo. El hongo presenta una alta variabilidad gentica la cual se manifiesta en la existenciademuchasrazasfisiolgicasdelpatgenoquedifierenensugradode patogenIcidad.

Los residuos de cosecha infectados son las fuentes principales de inoculo para causar epidemias, el hongo puede sobrevivir como espora o como micelio en residuos de estas hasta por dos aos. Esta capacidad que tiene Colletotrichum para sobrevivir en estado latente como apresorio en la superficie hospedera, o como infeccin oportunista en los tejidos hospederos cuando las condiciones medioambientalesofisiolgicasdelhospederoimpidensucontinuodesarrollo,es una caracterstica nica que permite que el patgeno rehuya vacos epidemiolgicos que ocurren entre diferentes estados de susceptibilidad del cultivo, permitindole cumplir tambin el papel de oportunista. Una vez

Colletotrichum deja su fase latente e inicia su fase activa en los tejidos jvenes
susceptibles, permite un ciclo epidmico rpido, de tal forma que los niveles de enfermedadcrecenaceleradamentedurantelosbrevesperiodoscuandolasfases susceptiblesdelcultivocoincidenconlascondicionesdehumedad(Pruskyetal., 2000).

La variabilidad de latencia del patgeno representa una adaptacin muy importantealascondicionesdelafisiologadeltejidoyalospatronesclimticos queocurrenduranteelciclodeloscultivosperennes.Asmismo,estavariabilidad se convierte en un gran impedimento para la aplicacin de medidas de control exitosas(Waller,1992).

La antracnosis ha causado perdidas considerables en numerosos cultivos tropicalesdebidoalabajaenlaproduccincomosehaobservadoenloscultivos de mango Mangifera indica en Mjico razn por la cul (Menas et al., 1999) realizaron estudios sobre la epidemiologa y control de la antracnosis durante cuatroaosconsecutivos,encontrndosequelamayorconcentracindeesporas deColletotrichumgloeosporioidescoincideconlamayorhumedadrelativa,porlo culduranteesteestudioelreatotaldelfrutoafectadonosuperoel2%debidoa labajahumedadrelativaquesepresentoduranteeldesarrollodelfruto(menoral 70%)puestoqueparaeldesarrollodelaenfermedadesnecesariaunahumedad relativa mayor al 95%. Estudios epidemiolgicossimilares fueron realizados por SANINET en cultivos de frjol afectados por Colletotrichum lindemuthianum en Mjicoencontrndosequelascondicionesambientalesquefavorecenlainfeccin coincidenconlasreportadasenWaller.,(1992).

3.3.4Etiologadelhongo:Despusdelainfeccininicialqueproduceelhongo mediante la adhesin de sus conidias a los tejidos sanos, el micelio crece intercelularmente durante cierto tiempo antes de que las clulas empiecen a colapsarse y pudrirse. El micelio del hongo produce entonces cervulos, estos constan de un estroma micelial que puede contener pocas o muchas capas de clulas de espesor y se forma inmediatamente por debajo de lacutcula, la cual rompealejercerpresinhaciaelinteriordelamasadeconidioforosyconidiosen proceso dedesarrollo. Losconidios se mantienen unidos en una masaviscosa, firme, y dura cuando el clima es seco, pero en climas clidos hmedos los

conidios son liberados en una masa roscea y pueden ser transportados por la lluvia,elvientoylosinsectos(OConelletal.,2000).

El hongo inverna en tallos, hojas y frutos enfermos de las plantas en forma de miceliooesporascuandoseformanlasascosporasproducenlesionesprimarias en la primavera, el micelio sobreviviente produce conidios los cuales a su vez producenlesionesprimariasysubsecuentementeinfeccionessecundariasdurante toda la estacin de crecimiento en tanto la temperatura y la humedad sean favorables. Los conidios liberados son los encargados de producir nuevas infecciones, requiriendo de temperaturas y humedad favorables para tener una mayoractividad(Wilson,1968Agrios,1996).

3.3 ENFERMEDADES CAUSADAS POR DIFERENTES ESPECIES DE

Colletotrichum:

ElgneroColletotrichumesunodelosmsgrandesentrelosgnerosdehongos patognicoscontienediversasespeciesquecausanenfermedadesenunaamplia gamadeplantascultivablesimportantesdesdeelpuntodevistaeconmicoentre lasqueseencuentran:Mango,tomateyfresa(TimmerandBrown,2000Legard, 2000AdaskavegandFrsters,2000). Colletotrichum poseeunamplio rango de hospederos,seharegistradounagranvariedaddeespeciesdeColletotrichumen cultivos anuales y perennes en todos estos cultivos se denota la presencia del patgeno (Korsten and Jeffries, 2000), adems de los ctricos que son los ms frecuentementeafectados,elhongoatacaplantasornamentalescomoseregistro enunestudiohechoporCabreraylvarezenespeciesdeAglaonemaySingonio de donde fueron aisladas dos especies de Colletotrichum, dematium y

gloeosporioides., El estudio demostr que C. dematium y C. gloeosporioides

producan manchas similares en las plantas ornamentales pero diferan en sus caractersticas morfometricas. Es ascomo C. dematium presenta setas negras numerosas,cirrogrisceo,conidios unicelularesfalcados ofusciformes mientras

que C gloeosporioides presentan setas castaas de nmero variable, cirro color salmnyconidiosrectos. Estudios morfolgicos sobre el genero Colletotrichum muestran que C. acutatum secaracteriza porpresentarcolonias concentro grisy margen colorsalmn con conidiashialinas,unicelulares,rectas,fusiformesconambosextremosterminados en punta y con tamaos de 12 16 mm de largo y 34mm de ancho, el micelio inmerso forma conidioforos uni y bicelulados, el hongo no produce cerdas, ni el estadosexualinvitroeinsitu.(CedeoyCarreo,1996).

Entrelosestudiosrealizadosenelmbitomundialcabedestacareltrabajohecho por Waller, (1992), en donde hace una breve recopilacin de las principales especies de Colletotrichum causantes de enfermedades en los cultivos de regiones tropicales destacndose los de mayor importancia socioeconmica.

Colletotrichumnosloesconocidoporlaproduccindeantracnosissinotambin
pordarorigenapatologasconocidascomomoteados,pudricionesytizones.

En Colombia se han hecho estudios sobre el patgeno y los cultivos afectados comoelrealizadoporBuriticacitadoporRomero,(1999)quienrealizunaamplia y completa recoleccin de las diferentes especies del genero Colletotrichum que han sido reportados en Colombia como agentes causales de enfermedad en un sinnmerodeespeciescultivadasenlasdiferenteszonasagrcolas,observndose de manera general que su incidencia y severidad registran igualmente cambios significativos en los diferentes cultivos afectados sin embargo se puede afirmar quelasprdidascausadasporestasenfermedadesensumayoraocurrencomo unareduccindirectadelacantidadycalidaddelaproduccincosechada.

Romero (1999)realiz un estudio preliminar delpatgeno en tomatederbol en Colombiaevidenciandounaampliavariedadmorfolgica,patognicaymolecular, caractersticasqueporloreducidodesumuestranopudieronseridentificadosy confirmados en su totalidad. Se pudo confirmar que el material comercial del tomatederbolescompletamentesusceptibleatodaslasvariantesdelpatgeno.

3.5 METODOS DE MANEJO DE ANTRACNOSIS EN AME EN LA COSTA CARIBE:

Debidoalasconsiderablesperdidasporlaantracnosisenamesehanrealizado trabajosenbuscadelcontrol de la enfermedad, esascomo en 1983 y1984se hicieron experimentos de laboratorio y de campo con diferentes fungicidas para comparar su eficacia en el control del hongo (Colletotrichum gloeosporioides. penz)agentecausaldelaantracnosisdelame(Dioscoreaspp).Teniendocomo resultado que las aplicaciones cada tres semanas de Benomil corrigen significativamente la enfermedad y permiten obtener un incremento en los rendimientosentreun20yun23%porhectrea(OsorioyRamrez,1989).Ms tardeAcostayCepeda(1994)trabajaronenlafertilizacindelameensuelosde Turipna y Carmen de Bolvar logrando incrementar la produccin hasta en un 67%delossitiosestudiadoshaciendoaplicacionesalsuelode120KgdeNP2O5 porhectrea,60Kg/HadeNP2O5y180Kg/Ha K 2O.

La Corporacincolombiana de InvestigacinAgropecuaria (Corpoica)realiz una investigacin a cerca del comportamiento de clones de ame tolerantes a la antracnosis en tres sistemas cultivo en la regin caribe en donde los clones comerciales 861104 presentaron los mejores rendimientos al igual que otros tubrculos nocomerciales(Lpez y Gamero, 1998). Elclon 861138comparado con los otros clones presenta diferencias en cuanto al ms bajo rendimiento

comercial (6.89Ton/Ha) y un rendimiento total (7.52Ton /Ha) como respuesta al fertilizante.

Debido a la alta susceptibilidad a la antracnosis de las variedades cultivables se presento desaparicin de las siembras lo que conllevo a que se realizara, una coleccin de ames cultivados en los departamentos de Crdoba y Sucre. Durante el segundo semestre de 1994 y el primer semestre de 1995 Los tubrculos colectados fueron codificados y caracterizados morfolgicamente para futuros trabajos de preservacin, caracterizacin y mejoramiento gentico. Es as como Durango et al., (1999) formulan alternativas para mejorar la propagacin masiva del ame (Perea, 1999) y para aumentar la produccin de plantas basados en aplicacin de tcnicas como embriogenesis somtica, produccindesemillasartificialesyproduccindemicrotubrculos.

3.6CARACTERIZACINMORFOLGICADELPATGENO

Los trabajos iniciales con el hongo Colletotrichum gloeosporioides se realizaron buscando la clasificacin del patgeno que conllevara a la caracterizacin morfolgica de acuerdo a las descripciones propuestas por Sacardo citado por Bonde and Man (1991), dentro de las cules se incluyen: forma y tamao de conidias, produccin de esporas, tipo de apresorios, rango de huspedes y patogenicidad de aislados. Estas caractersticas morfolgicas macroscpicas y microscpicaspuedenrevelardiferenciasconsiderablesparaagruparaislamientos provenientes de una misma o de diferentes localidades, los cules podran identificarsey/ocaracterizarsecomopolimorfismos,caractersticaquetipificaraen primer lugar una variabilidad morfolgica que podra ser posteriormente complementadaconlosestudiosdepatogenicidadparadefinirhastadondeexiste unacorrelacindedichavariableconlacapacidadinfectivadelhongo.

Se han adelantado varios estudios de este tipo entre los que se destacan los realizadosporSmithandBlack(1990)quienrealizaunacomparacinmorfolgica, cultural y variacin patognica de especies de Colletotrichum en fresa en el SudestedeEEUU,losculesmuestrandiferenciassignificativastantoenformay tamao de conidias, caractersticas tanto del apresorio, como culturales bajo temperaturasdiferentesyporltimosusceptibilidaddetejidosenplantas.

Estudios morfolgicos sealan a Colletotrichum gloeosporioides como agente causal de antracnosis en ctricos y papaya. Este patgeno tuvo un crecimiento optimo a 30C presentando uncrecimiento mayor a 10mm por da caracterizado por la presencia de conidios y produccin de peritecios, compartiendo estas mismascaractersticasconColletotrichumfragarie.

Latham(1983)realizounestudioculturalypatognicodeGlomerellacingulataen aislamientosdemanzanoenAlabamayresaltolavariacinenlacoloracindela coloniaeneltiempo,asmismosepresentodichavariacinen lasinoculaciones realizadasenfrutos,corroborandodirectamentequeestetipo de estudiosestan solo un acercamiento a confirmaciones preliminares de diferencias entres especiesoaislamientosdelamismaespecie.

ONeil (1996) realiz un estudio de variabilidad patognica de aislamientos de

Colletotrichum trifoli, C. destructivum y C. gloeosporioides evaluando resistencia

en 40 cultivares de alfalfa en Estados Unidos. Una nota concluyente de est investigacin es que la resistencia hacia los aislamientos fue altamente variable los aislamientos fueron clasificados en razas basadas en la expresin de la sintomatologaconrespectoauncultivoestndar.

3.7ESTUDIOSDECOMPATIBILIDADSOMTICA:

La compatibilidad somtica es la expresin fsica del cdigo gentico de los microorganismos y se refiere a la capacidad de los mismos para producir anastomosishifalformandounheterocarionteviable.

Estudiosdecompatibilidadsomticaovegetativahansidorealizadosdebidoala alta variabilidad gentica de las especies de Colletotrichum locul se manifiesta enlamorfologaycolordelaacolonia,formadeconidias,presenciadeapresorio yrangodehospederos.Unodelosestudiosmsinteresantesfueelrealizadopor Katan(2000)quienencontrdiferentesgruposdecompatibilidadvegetativa(VCG) entreaislamientosprovenientes de un mismo hospedero eigualmenteunmismo grupo de compatibilidad vegetativa para aislamientos provenientes de diferente hospederos, lo quecomprueba la alta variabilidad gentica y el amplio rango de hospederos entre las especies de Colletotrichum. Igualmente se han encontrado variaciones entre los diferentes grupos de compatibilidad vegetativa en varios cultivosperoprincipalmenteenfresa(Sweetinghanetal.,1999).

Esta prueba ha sido utilizada para definir en primera instancia la similitud o heterogeneidad notable entrelosdiferentesaislamientos de un mismopatgeno, sintenerquerecurriramtodosmscomplejosdediferenciacin(Romero,1999).

4.METODOLOGIA

4.1TIPODEESTUDIO

Eltipodeestudioquesegeneraconestainvestigacinesdecarcterpreliminar explorativo, descriptivo y evaluativo con el propsito de contribuir a la posterior implementacindetrabajoscomplementariosdecaracterizacinyvirulenciacon dichopatgeno,loqueconllevarageneraralternativasdemanejoycontroldela enfermedad con la seleccin de materiales tolerantes y resistentes a la antracnosis.

4.2LOCALIZACIN

EstainvestigacinsedesarrolloeneldepartamentodeSucreelcualhaceparte delallanuradelcaribesituadaentrelos8 17y10 08delatitudNorteyalos74 32y75 43delongitudOestedelmeridianodeGreenwichlimitaporelNorteyal Oriente con el departamento de Bolvar por el sur con Bolvar, Antioquia y Crdoba,yporelOccidenteconCrdobayelmarCaribe,elestudioserealizen la subregin de los montes de Mara en los municipios de: Sincelejo, Corozal, Ovejas, Los Palmitos, Sampus, Toluviejo, y San Juan de Betulia. (Instituto GeogrficoAgustnCodazzi,1998).

4.3RECOLECCINYRECEPCINDEMUESTRAS

Parael desarrollo inicial deltrabajo en loscultivos,serealiz un recorridoenzig zag (Lpez y Gamero, 1998), donde se colectaron muestras de hojas con sintomatologa tpica de la enfermedad en diferentes grados de infeccin, provenientes de las principales zonas productoras de ame ubicadas en el departamento de Sucre: Sincelejo, Ovejas, Toluviejo, San Juan de Betulia, Sampus,CorozalyLospalmitos(Buitrago,2000).

Las muestras colectadas en cada una de las diferentes regiones fueron empacadas en bolsas plsticas hermticas y transparentes las cuales se etiquetaron con informacin sobre el origen geogrfico y datos agroclimaticos entre los que figuraron: humedad, precipitacin, temperatura y localidad. Las muestrasfuerondesinfectadasylocalizadasencmarashmedaselmismoda desurecoleccin(Romero,1999).

4.4AISLAMIENTODELPATOGENO:

El aislamiento del patgeno se llev a cabo en el laboratorio, a partir de fragmentosdetejidoscortadosdeloslimitesdelaslesionesenlashojasdeame y de hojas completas igualmente infectadas, estas fueron previamente tratados con solucin de hipoclorito de sodio con una concentracin de 0.525% a 5min segn lo propuesto por Agostini et al., (1992) y Cedeo et al., (1994). Proponindoselassiguientesvariacionesas:0.525%a5min,10min,15min1%a 5min y 10min 2% a 5min y 5.25% a 1min luego fueron lavadas tres veces con

aguadestiladaestril,secadasenpapelfiltroestril.Cadaunodelosfragmentos previamente desinfectados fueron llevados a cmaras hmedas e igualmente se realizaron aislamientos cultivados directamente en medio Papa Dextrosa Agar (PDA), incubndose durante varios das a una temperatura de 28 C aproximadamente yuna humedadrelativa del90%aproximadamente. Una vez seevidenciaroncrecimientosmicelialesenlascmarashmedasoenelmediode cultivorespectivo,serealizaronrepiquessucesivoshastalapurificacindelhongo cadaaislamientofuemarcadoenconcordanciaconelorigendelamuestraapartir delacualseobtuvo,loquepermiticonstituiruncepario.

Una vez obtenido el aislamiento cada colonia se mantuvo en PDA hacindose repiquescadavezqueeranecesario.(Sutton,1980Alahakoon,1996Greenetal, 2000Beltrn,2000).

4.5ESTUDIOSMORFOLGICOSDELHONGO:

4.5.1 Establecimiento de cultivos monospricos: Despus de purificado el microorganismo se realizaron montajes y se observaron con microscopio de luz, haciendorecorridosparafamiliarizarseconlamorfologadelasconidiasascomo el micelio y otras estructuras tpicas del hongo, su verificacin se realiz con ayudadelaclaveparahongosimperfectos(Sutton,1980.,Bailey,1992).

Para el establecimiento de cultivos monospricos se realiz inicialmente la purificacindeloshongosaplicandolatcnicadedilucinpropuestaporEchandi, (1971) mediante lacualsedesprenden las esporasdelcultivo conayudadeun asa y un estereoscopio, este inoculo se diluye en agua destilada estril hasta
6 llevarloaunadilucinde1x10 esporasporml,setomaron500mLdeestdilucin

ysesembraronenmedioPDA,seobservolaaparicindelaconidiagerminaday se aisl mediante un corte aproximado de 3mm en cada bloque de PDA y se sembrnuevamenteenPDAconelfindeobtenerunasolaexpresingentica,las colonias fueron incubadas en las condiciones descritas anteriormente. Aproximadamente a los 2 das despus de la siembra se evidenciaron colonias puntuales del hongo, presentndose coloraciones que variaron de salmn, lila a rosadoplido.Acadacultivomonosporicoseleasignunnmeroderegistrode entradaalacoleccin.

4.5.2 Mantenimiento de los aislamientos: Para mantener colonias jvenes se realizaronsubcultivossucesivoscadaochodasaproximadamenteenmedioPDA, inoculandounfragmentodehifadelapartemsjovendelcultivoconayudadeun asaeincubndose bajooscuridada28 Cy90%dehumedadrelativa.

4.5.3 Caracterizacin Morfolgica: El proceso de caracterizacin morfolgica implica una descripcin macro y microscpica del patgeno, que incluye los siguientes factores: color y forma de la colonia crecimiento, aspecto y color del micelio forma,tamao, color,segmentacin, presencia de ncleoyesporulacin delasconidias(Beltrn,2000Sutton,1992)paralocualseutilizunformatocon lascaractersticasanteriormentemencionadas(anexoA)ydetalladasAnexoen elanexoC.

Laforma yeltamaodelasconidiassedeterminutilizandomicroscopiade luz, paralasmedicionesseutilizunmicrmetroadaptadoalocularycalibradoparael objetivo100X.

4.5.4 Curva y tasa de crecimiento: La obtencin de los datos para la curva y tasadecrecimientoserealizaronmediantelamedicindelascoloniasencajasde Petri con medio PDA estas se inocularon con micelio del hongo procedente de cultivos puros de cada uno de los aislamientos con la ayuda de un asa para hongos.Elinculosedepositenelcentrodelmediodecrecimiento.

Los cultivos se incubaron a 28C aproximadamente en oscuridad constante y el dimetro de las colonias se determin cada 12 horas a partir de las 48 horas despus de haber sido inoculado el hongo. En estudios preliminares se pudo observarqueantesdelas48horasybajocondicionesfavorablesdecrecimiento, elhongonomostrunincrementoconsiderable.

4.6COMPATIBILIDADSOMTICA:

Lapruebaseestablecidelasiguientemanera:sesembraron2aislamientosde diferente origen por caja de petri, de manera similar a como se establecen las pruebas de antagonismo. La inoculacin del patgeno estuvo constituida por micelio del hongotomadocon asasparainoculacin apartir delcultivopuro de cada aislamiento, ubicndose de manera equidistante en la caja de Petri, Las cajasdePetriseincubarona28Cyserealizaronlecturasdecompatibilidadalos 2, 4, 6, y 8 das despus de la siembra, siendo la ltima fecha la que permiti establecerdicharelacin.

Con el propsito de observar al microscopio de luz las caractersticas de compatibilidadoincompatibilidadquepodranexistirentrelosaislamientos,enuna delasrepeticionesdelapruebaseincluysuperficialmentedentrodelmediouna laminilla en forma equidistante, la cual una vez fuera invadida por el crecimiento

micelial,seretirdelacajayserealizunmontajeloanteriortuvocomoobjetivo observareidentificaraquellazonadeafinidadmicelialenlaqueelmiceliodelas coloniassecombinaporcompleto,fusinconocidacomoanastomosishifal.

4.7PRUEBASDEPATOGENICIDAD

Una vez realizadas las fases anteriores sobre crecimiento y caracterizacin morfolgica de los aislamientos del patgeno, se procedi a realizar un estudio preliminar de patogenicidad, complemento fundamental para la investigacin, ya que permite establecer el comportamiento de las cepas sobre los hospederos. Comoaspectosimportantesdeestapruebaseconsideraronlossiguientes:

Para la prueba de patogenecidad se realiz una combinacin de experimentos para ocho cepas puras de Colletotrichum aisladas de los diferentes municipios y que presentan caractersticas tpicas de Colletotrichum spp segn la clave de Sutton(1980),bajoundiseocompletamentealazarconarreglofactorialde2x2, con tres repeticiones en condiciones controladas de humedad, temperatura, luminosidad y uniformidad de la cmara, esta estuvo constituida por una bolsa plstica,hermticaytransparentede20x25cmquecontendrunpapelfiltroestril y humedecido con agua destilada estril sobre el cual se colocar la respectiva hojadeameaevaluar,deacuerdoalodescritoporMartnezyZambrano,(1994) ySmithetal.,(1997).

Lapruebaincluyetresvariablesindependientesqueson:

Cepas de Colletotrichum spp aisladas de las diferentes zonas ameras del departamento de sucre utilizadas para la prueba de compatibilidad somtica y

patogenecidad.Lascepasescogidassonlassiguientes:LaCepa9Sincelejo,36 deSampus,113deToluviejo,202deSanJuandeBetulia,306deCorozal,404 deLospalmitos,405deOvejasy138deChocho(Sincelejo).

Plantasdeameaevaluar:seutilizaranplantasdeamedelaespecie Dioscorea

alatapertenecientesalavariedadositoelcualessusceptiblealaantracnosisy Dioscorea rotundata , variedad espino,el cual es tolerante a la antracnosis

(CampoyLuna,1998).

Concentracionesdeconidias:
5 5x10 conidias/ml 6 1x10 conidias/ml

VariablesDependientes: PresenciaoausenciadeManchasnecrticas. Tamaodemanchas: Tiempodeaparicindemanchas: Nmerodemanchasnecrticas:

Para la prueba, la hoja sana se llev al laboratorio donde fue lavada tresveces conhipoclorito5.25%yenjuagadaconaguadestiladaestrilluegosesometia incubacin en cmara hmeda por 5 das ams de90% de humedad relativa y temperaturaambienteconelpropsitodedetectarinfeccioneslatentes.Unavez confirmada su sanidad se realiz la inoculacin colocando en la superficie foliar una gota de inoculo de acuerdo a Alahakoon et al., (1996) las muestras fueron ubicadasdeacuerdoaldiseoestadsticoestablecido.Posteriormentesehicieron observaciones peridicas para detectar el desarrollo de sntomas y signos de la nfeccin.

4.8ANLISISESTADSTICO:

4.8.1. Rata de crecimiento de las cepas: Para el aspecto de crecimiento en funcindeltiemposerealizunanlisisderegresin,dondelavariableenestudio fueelcrecimientoentrminosdetiempo. Crecimiento = f (tiempo). A travs de un modelo de regresin exponencial linearizado.

Para los aspectos de tamao de conidias y tasa de crecimiento se realiz un anlisis descriptivo que incluy grficas, tablas de frecuencia, medidas de tendenciacentralymedidasdevariabilidad.

Paraelprocesamientodelosdatosdelapruebadepatogenicidadlainformacin fuerecolectadaensendoslibrosdecampoytranscritosenunahojadecalculoen elprogramaexcelyelanlisisestadsticoserealizenelprogramaS.A.S.

5RESULTADOSYDISCUSIN

5.1DESCRIPCINDELASINTOMATOLOGA:

Resultados preliminares denotan variabilidad en cuanto a la expresin de los sntomassobrelashojasendependenciaconelhospedero.EnDioscoreaalata variedad osito, los sntomas primarios son puntos rojizos de apariencia hendida, forma irregular, halo amarillento con puntos concntricos de color caf oscuro, estasmanchascrecenpaulatinamentehastaunirseynecrosardandolaapariencia dehundimientoaltejido.Deellasseaislaronconsistentementehongosdelgenero

Colletotrichum esta descripcin est de acuerdo con la que hace Negrete y

Redondo(1997)ylareportadapor(Jacsonetal.,1998Winchetal.,1984Brunt etal.,1989)(figura1).

As mismo se obtuvieron aislamientos a partir de una mancha de aspecto alquitranosoredondadecolorcafoscuroporelhaz,cafclaroporelenvsyde aspecto brillante. Estas manchas se unen necrosando el tejido trayendo como consecuencia la muerte descendente de la planta. De est mancha fueron aisladoshongosdelgeneroColletotrichum ysepresenta principalmentesobre el hospedero Dioscorea alata variedad diamante 22 (figura 2). Las caractersticas morfolgicas de las cepas de Colletotrichum aisladas de las manchas anteriormente descritas corresponden con las caractersticas morfolgicas reportadas para Colletotrichum gloeosporioides segn Sutton (1980) y Bailey (1992).

SobreDioscorearotundatavariedadespinoseaislaroncepasdeColletotrichum que tienen caractersticas morfolgicas propias del genero, pero que no corresponden con las reportadas para Colletotrichum gloeosporioides estas se asocian con las caractersticas descritas para Colletotrichum dematium y cuyas manchastienensemejanzaconlasdescritasparadiamante22convariacionesen laformadelamanchalascualestiendenaserirregularesparaD.rotundata.De igual forma la ocurrencia de conidiomas y acrvulos en la hoja dependen del hospederoobservndosesobreespinoylavariedad861104deD.alata.

Figura1ManchascaractersticasdeantracnosissobreDioscoreaalatacvosito.

Figura2.Manchascaractersticasdeantracnosis Dioscoreaalata.cvD22

5.2CONSTITUCINDELCEPARIO:

A partir del material colectado se obtuvieron 31 aislamientos distribuidos de la siguiente manera: 14 aislamientos de Sincelejo, provenientes de las Palmas, ChochoyCastaedacincoaislamientosdeSampus,provenientesdeSanLuisy Achiote cuatro aislamientos de Toluviejo, provenientes de Nuevo Oriente tres aislamientos de San Juan de Betulia, provenientes de La montaita dos aislamientos de Corozal, proveniente de Don Alonso dos aislamientos de Los palmitos,provenientesdelLaurelyunaislamientodeOvejas.(AnexoB)

5.3MORFOLOGA

Los resultados obtenidos sobre las principales caractersticas morfolgicas del cepariosepresentanenelAnexoC.

5.4CARACTERISTICASCULTURALES

Con los resultados obtenidos se puede establecer que la forma tpica para las coloniasfueradial,conbordesenterosencuantoalcolordelacoloniael61%fue Lila,esdecir19delascolonias,el21%fuecuruba,correspondiendoaseisdelas colonias,el9%fuemoradaesdecirtresdelascolonias,y6%fuecremadosde lascoloniasyun3%fuesalmn.Unacolonia(Figura.3).

El color observado en las colonias es caracterstico del genero Colletotrichum, hubo variacin en las tonalidades de los colores predominantes teniendo como

caractersticaprincipal laatenuacindelcolorhamedidaqueaumentabalaedad delcultivo,estascaractersticasdelavariacinenelcolordelascoloniashansido reportadasporAdaskavegyHartin(1997)quienesindicanquelasvariacionesen lamorfologadelascoloniasestnendependenciadevariacionesenelmedioo sustratoascomotambinvariacionesdelatemperatura.Ennuestroestudiono se tuvieron en cuenta estos parmetros ya que las condiciones de incubacin, temperatura, humedad, y oscuridad constante permanecieron homognea para todos los aislamientos, siendo difcil utilizar estos criterios para agruparlos sin embargo, estas variaciones pueden tener valor como marcadores en estudios posteriores.

Figura.3

Colordelascoloniasdelosdiferentesaislamientosde

Colletotrichumspp

Por otra parte la variabilidad presente en este estudio se puede explicar por las diferentesvariedadesdehospederosdedondefueronaisladasascomotambin por las barreras geogrficas y las variaciones agroclimaticas entre los sitios de aislamiento.

El micelio presente entodos los aislamientos se caracterizo por ser esponjoso y denso,presentndoseunavariacindeblanco93.5%acrema6.5%paralacepa

deColletotrichumgloeosporioides(figura4)yparaC.Dematium micelioconcirro grisceo

Figura4.Caractersticasdelascoloniasaisladas.

La esporulacin de las colonias fue mayor a 58.000conidias / ml para todos los aislamientos, de C. gloeosporioides existiendo una variacin en la esporulacin dadoquehubocepasconesporulacinhastade1.488.000conidia/mlasmismo seobservoquehubounamarcadarelacinentreelcrecimientototalquealcanzo lacoloniaysugradodeesporulacinesascomoel aislado404provenientede LosPalmitostuvouncrecimientode88mmalos8dasylamsaltaesporulacin antesmencionada(AnexoD).

Dentrodelosfactoresqueinducenoporlo menosfavorecenlaesporulacinse encuentran la temperatura, pH, luz, proporcin entre carbono y nitrgeno en el medio(JacsonyBothas1990JacsonySchisler,1992).Asmismocomprobaron queexposicionescortasairradiacinUvestimulanlaproduccinconidial. Timmick citado por Romero (1999) estudiando los sistemas de cultivos ha reportado que los mtodos de inoculacin y la cantidad de medio tienen un profundo efecto sobre la esporulacin. Igualmente, Jacson y Slinger (1993) comprobaron que la composicin de aminocidos presente en el medio influye sobre ella. Vale la pena aclarar que en este estudio se obtuvo una abundante esporulacin bajo condiciones de oscuridad constante y sin inducir ningn factor que laaumentarsobre ningunodelosaislamientos,condicionessimilaresalas reportadasporRomero,(1999)mssinembargoensuestudionoseobtuvieron resultadossignificativos.

5.5CARACTERISTICASDELASCONIDIAS:

Los 31 aislado de Coletotrichum gloeosporioides

se caracterizan por tener

conidiasovoidesendondelamayoradeellaspresentaunextremoredondeadoy otro agudo su citoplasma es uniforme observndose que algunas de ellas presentanvacuolasdegrantamao(figura5).

Lalongituddelasconidiasvariodesde4mma17mm,lamayorlongitudpromediola tuvo el aislamiento 144 proveniente del corregimiento de Choch, municipio de Sincelejo y la menor longitud promedio fue encontrada en el aislamiento 38 provenientedelcorregimientodeSanLuisMunicipiodeSampus.

Para la variable longitud de conidia se encontr un promedio total 8.06 mm y un coeficientedevariacinde11.5%elcualindicalahomogeneidaddelapoblaciny la confiabilidad estadstica de los datos lo anterior est de acuerdo con lo reportadoporMorenoyGallardo(1999).

Elanchodelasconidiasvariodesde1.5mma6mm,elmenorpromediolotuvoel aislamiento 202 proveniente de San Juan de Betulia y el mayor promedio el aislamiento9provenientedelcorregimientodeLasPalmasmunicipiodeSincelejo conunpromediototalde3.06 mmobservndosehomogeneidadenelanchodelas conidiasentretodoslosaislados(AnexoC)locualseconfirmaconelcoeficiente de variacin para est prueba siendo menor al 20.9%, pero no se considera un marcadormorfolgicoparadiferenciarespecies.

Figura5.ConidiascaractersticasdeColletotrichumgloeosporioides.

Figura6.ConidiasysetascaractersticasdeColetotrichumdematium.

Coletotrichumdematiumsecaracterizporpresentarconidiasauxadasconambos
extremosagudosyuntamaoquevarientre16a18 mmdelargoy3mma4mm deancho,presentandoacervulosnaranjassobrelashojasyconidiomasconsetas oscuras y abundantes, estas fueron aisladas del corregimiento de San Rafael municipiodeOvejasyAchiotemunicipiodeSampus(figura6).

Aunque se considera que el tamao de las conidias es una caracterstica que puede variar tanto en condiciones de campo como en condiciones controladas segn los estudios realizados por Adaskaveg y Hartin (1997) en este estudio se encontr poca variabilidad en cuanto al tamao de las conidias con longitudes promedios muy similares entre los aislados estudiadoscaracterstica que podra ser utilizada como base para identificar los aislamientos encuanto el tamao de lasconidiascomolo reportala literatura (Simmons,1965Holliday1995ONeill 1996). Esto estara de acuerdo con el anlisis estadstico de los datos de caracterizacindondesemuestranunaestrecharelacinentrelasvariablesancho ylongituddeconidiaconunrdePearsonde0.51932 (anexoE).

5.6CURVAYTASADECRECIMIENTO:

Con base en los datos de la curva de crecimiento en PDA (figura 7) tomados hastalosochodasdespusdelasiembrasedeterminounavariacindelatasa de crecimiento entre 2.5 y 6.04mm cada 12 horas. La tasa decrecimiento ms

altalapresentelaislamiento404deSanJuandeBetuliacon6.04mmdiarios.El coeficientedevariacinparaestapruebafuede31.8%siendoelcoeficientems alto con respecto a las otras variables analizadas indicando con ello mayor heterogeneidad en el comportamiento de los aislamientos en respuesta a las caractersticasfisiolgicasdecadacepaysuinteraccinconfactoresambientales yelmediodecultivo.LoanteriorconcuerdaconloobservadoporRivero(1986) quien afirma que las condiciones ambientales favorecen o no el desarrollo del organismoysuexpresinfenotpica.

Enla figura7 se presentael crecimientode ocho aislamientos de Colletotrichum seleccionados para las dems pruebas a realizar teniendo en cuenta ciertas caractersticasmorfolgicascomoelcoloryaspectodelmicelioydiferenteorigen geogrfico.

Figura7.

Tasa de crecimiento cada 12h de 8 aislamientos de Colletotrichum

sspeneldepartamentodeSucre

5.7COMPATIBILIDADSOMATICA

Lapruebadecompatibilidadhasidoampliamenteutilizadacomosistemamodelo para evaluar los mecanismos de regulacin de genes, relaciones evolutivas y el origenydesarrollodelasexualidadenhongos(Vaillancourtetal.,2000).Esdecir para establecer la variabilidad gentica existente entre dos aislamientos encontrndosequeaislamientoscompatibles concapacidad de anastosomarsey formarheterocariontesestablescompartenunorigencomnyungrupodegenes, por lo tanto se ubican en un mismo grupo de compatibilidad vegetativa (VCG) (Katan,2000).

Paraesteestudioseestableciquetodoslosaislamientostienenelmismoorigen vegetativoyaquelosenfrentamientosrealizadosmostraronlaformacindeloque sedenominamasasalvajeproductodelaanastomosishifal.(Figura8).

La evaluacin microscpica de la prueba de compatibilidad para los ocho aislamientos seleccionados mostr la formacin de puentes hifales entre los diferentes aislamientos en el 90% de los enfrentamientos realizados. Estas observaciones se hicieron a las 48 horas de su siembra inicial con revisiones peridicas cada ocho horas, locual ayudo a una familiarizacin con lashifas de cadaaislamiento y a evidenciar las unionesintrahifalescuandolos aislamientos fueronenfrentadosconellosmismos(figura9).

Asmismoseobservlaformacindepuentesinterhifalescuandoseenfrentaron aislamientos de diferente origen geogrfico y se hizo el mismo seguimiento microscpico. Apesardequela literaturareportaque es difcildiferenciar entre

anastomosis hifal inter e intra, en este estudio sepudoconfirmar la anastomosis intra ya que los aislamientos se enfrentaron con ellos mismos es decir, por ejemplo aislamiento 9 con 9 y se observ microscpicamente la fusin hifal (Figura.9).

Figura8.Masasalvajeresultadodelaanastomosishifal.

Figura9.Anastomosishifaresultadodeelenfrentamientodedoscepas

De igual forma la anastomosis inter fue observada con el seguimiento microscpicoaunquenoseconfirma lapresencia de un heterocarionte viable ya queparalaconfirmacindeesteesnecesariasegnKatan2000lautilizacinde mutantes y estudios bioqumicos que no eran el objeto de este estudio. Sin embargo la prueba permiti dilucidar relaciones genticas tales como que existe una compatibilidad vegetativacomn dentrodela poblacin est prueba hasido usada en numerosos estudios para establecer la diversidad gentica en las poblacionesdeColletotrichum(Corelletal.,2000).

5.8.PRUEBADEPATOGENICIDAD:

Est prueba logr determinar las respuesta de los hospederos a las cepas de

Colletotrichum aisladas, seis de las ocho cepas seleccionadas desarrollaron

lesiones tpicas de antracnosis similares a las encontradas en el campo (Figura 10) en todos los casos se reaislaron cepas con caractersticas morfolgicas similares a las usadas en la inoculacin de las hojas. Las inoculaciones de las cepas113y202nopresentaronmanchassobreningunodeloshospederospara el caso del hospedero D. rotundata cv. espino ninguna de lascepas desarrollo manchassobreeltejidoaexcepcindelacepa36.

Figura.10Respuestadelascepasinoculadassobreloshospederos. Estemtodofueeficiente en la identificacin de larespuesta del hospedero a la antracnosis y a la virulencia del aislamiento. El anlisis de varianza mostr diferencia altamente significativa entre el tipo de hospedero y la presencia de machas,calculndoseunFde32.11(anexoF),siendolavariedadsusceptible la que present mayor nmero de ellas. Lo anterior sugiriere la existencia de posiblesrazasfisiolgicasdentrodelos aislamientos de C.gloeosporioides. As mismo mediante la prueba estadstica de Duncan se estableci que la
6 concentracin de 1x10 conidias/ml fue la mejor para producir la sintomatologa

tpicadelhongoenlashojasinoculadas.Lapruebafuerealizadaenlashojasyno entallosoentubrculosdebidoaquelasintomatologapresentadaencampofue predominantementeenhojas.

Notodos losaislamientosfueroncapaces de causarmanchasnecrticas.Delas ochocepasevaluadassololasCg404yCg405presentaronelmayornmerode manchas y, la cepa que produjo el tamao de mancha ms grande es la Cg 36 cuando fueron inoculadas en las mismas condiciones. Igualmente el hospedero tolerante D. rotundata no present respuestas significativas a los diferentes aislamientosexceptolaCg36(anexoF).

Con respecto a las diferencias significativas de los aislamientos en la habilidad para causar dao en la hoja, en general, todos ellos son virulentos para la

variedad susceptible excepto las cepas Cg 113 y Cg 202 de la prueba que no fueron capaces de producir sintomatologa en ninguna de las variedades en estudio.

La variacin en la habilidad de las cepas para causar dao y en el grado de agresividaddeldaocausadoenelhospederosusceptiblesedenotaenCg404la cualcausnecrosisenel25%delareatotaldelahoja,encontrasteconlaCg 113yCg202quenofueronvirulentas(Figura.11).

El hecho de que los resultados del estudio muestren diferencias entre las respuestas de los hospederos sugiere la posible existencia de variantes entre estascepas,ascomo la interaccinvariedad/patgeno.SegnJonsthon (2000), noseconoceconclaridadpor quunaespecieatacaaunhusped ynoaotro, frecuentemente ese tipo de patrones se establecen slo cuando todas las relacionesfilogenticashansidoestablecidas

Figura 11. Severidad de la enfermedad en hojas de D. alata despus de la inoculacinconC.Gloeosporioides. Latendenciadelaseveridadquepresentel inoculoutilizadoen laspruebas In

vitro,sepuedeexplicarentrminosdelaconcentracindeesporasprovenientes
deloscultivospurosyaqueestanoessimilaraloquesepresentaenelcampo, ademas sobre las hojas estn asociadas poblaciones variadas de microorganismossaprfitosquepuedeninhibirlagerminacindelhongo.

Esta explicacin esviable, porque algunos autores asocian los altos porcentajes de infeccin utilizando inoculo natural,sin causarheridas, a laexistencia de una asociacinsinergista deotrosorganismoscon Colletotrichum, especialmentecon bacterias del genero Pseudomonas, que luego de aprovechar el hierro existente en la masa de conidias, promueven la germinacin de los mismos e induce la formacindeapresorios.ElapresorioesunaestructurasinlacualColletotrichum es incapaz de causar infeccin (Bailey, 1992 Kubo et al., 2000). Para la formacin de apresorios es necesaria la interaccin planta patgeno y se involucranlaactivacinsecuencialdediferentesgruposdegenesquedefinenla penetracinalhusped(kolattukudyetal.,2000).Estassealessonreconocidas yutilizadasparadefinir lasrelacionesdecompatibilidad e incompatibilidad entre lasespecies(Dickman,2000).

Sobre este aspecto, Mc Cracken y Swinburne (1979) determinaron que agentes quelantes como los siderforos bacterianos procedentes de la cepa de

Pseudomona UV3presentauna altaafinidad porel hierro contenido en lamatriz

conidial de Colletotrichum siendo este metal un factor importante en la estimulacin de la germinacin, por lo tanto, los estudios realizados ayudan a entendercomoencondicionesdecampoexistenmecanismos,microorganismosy condiciones ambientales que facilitan una mayor velocidad de infeccin y

dispersindeestepatgeno,sindescartarni subvalorar los mecanismos propios delhongo.

Thind y Jhooty (1990) encontraron comportamientos semejantes cuando compararonaislamientosdedosespeciesdeColletotrichumalrealizarpruebasde inoculacin en frutos de aj. Los autores hacen referencia a la expresin de la sintomatologa y tasa de infeccin como base de separacin de aislamientos dentro de la especie y entre especies. De sta manera, se podra inferir que la sintomatologaqueseevidencioenlapruebaestpicadelaantracnosis,porende delmismopatgeno,conlaposibilidaddetenerdiferentesespecies. Conociendo que una sola especie de Colletotrichum puede infectar mltiples huspedes yque de igualformaunsolo husped puedeserinfectadoporvarias especies (Freeman, 2000) podemos concluir que las diferencias en los aislamientos patognicos entre dos o ms regiones probablemente refleja las diferencias aescalagenticaenel germoplasmausadoy las practicas agrcolas desarrolladasencadaregin.

6.CONCLUSIONES

Los hongos del genero Colletotrichum estn presentes y son los causantes de antracnosisenloscultivosdeameDioscoreasppdeldepartamentodeSucre.

Se presentan diferentes tipos de manchas de antracnosis dependiendo de las cepas,elhospederoylainteraccinentreellos.

Los aislamientos de Colletotrichum no constituyen grupos morfolgicamente homogneos como lo demuestra la variacin en el color de las colonias de las cepas aisladas lo cual sugiere que los aislamientos que pertenecen a distintas regioneshansufridounprocesodeevolucinconvergentepuestienenunorigen vegetativocomn.

Elporcentajedeesporulacindelascepasestdirectamenterelacionadoconsu velocidad de crecimiento encontrndose que ha mayor velocidad mayor esporulacin.

El hecho de que los resultados de la prueba de patogenicidad muestren diferenciasentrelasrespuestasdeloshospederossugieredemaneracategrica laposibleexistenciadevariantesdelhongo.

Porlas caractersticas morfolgicas de lascepasaisladas nosolo Colletotrichum

gloeosporioides es elcausantedeantracnosisenel departamento deSucresino

quepodranexistirvariantesdeestaespeciey/odiferentesespeciesquecausan la enfermedad como lo demuestra la deteccin de C dematium entre las cepas aisladasdeameespino.

A pesar de la variabilidad morfolgica de las cepas de Colletotrichum

gloeosporioides aisladas existi un 90% de compatibilidad vegetativa entre ellas,

su capacidad de anastomarse podra conllevar a mayor variabilidad gentica en laspoblacionesfuturasyposiblementeamayoragresividad,loquepodrapredecir a futuro continuos problemas con este hongo, justificando as la necesidad de continuarevaluandomaterialestolerantesapatgenos.

La prueba de patogenicidad constituye una herramienta practica, econmica y sencillaparafuturostrabajosdediagnosticodeantracnosisyparaevaluarelgrado de tolerancia del germoplasma las cepas de hongos presentes en el departamento.

7.RECOMENDACIONES

Realizar muestreos jerrquicos y consecutivos del comportamiento del hongo en diferentes aos en los cuales se tenga en cuenta niveles macro y microgeograficos:Municipios,veredas,plantaciones,plantasypartesdelaplanta.

Evaluar mayor nmero de aislamientos de hongos sobre todos los hospederos existentesenlazonaconelfindeestablecerlasrespuestasdecadaunodeellos frentealascepasaisladas.

Realizar estudios complementarios de biologa molecular que corroboren las especies y permitan establecer la variabilidad de los aislamientos con el fin de disear programas de mejoramiento gentico y estrategias de diagnostico y controlmseficientesparaelmanejodelaenfermedad.

Realizarestudiosdetalladosacercadela compatibilidad vegetativaqueincluyan elusodemutantesypruebasbioqumicasparaestablecerlavariabilidadgentica delapoblacinylaviabilidaddelosheterocariontesformados.

8.BIBLIOGRAFIA

ACOSTAC,CEPEDAR.Fertilizacindelame(Dioscoreaalata)Ensuelosde TuripanyCarmendeBolvar.En:revistaICAVol.29N1(EneroMarzo1994), p3941.

ADASKAVEG,JYHARTIN,R.CaracterizationofColletotrichumacutatumisolates causing anthracnose of almond and peach in California. En: Phytophatology: Vol.87:9.1997.p979987.

, and FRSTER , H, Occurrence and Management of AnthracnoseEpidermicsCausedbyColletotrichumSpeciesonTreeFruitCropsin California. En: Colletotrichum Host Specificity Pathology, and HostPathogen Interaction eds. DovPrusky, StanleyFreemanand Martin B. Dickman St. Paul, Minnesota:APSPRESSTheAmericanphytopathologicalSociety.2000.317336p

AGOSTINIJP,TIMMER,B.andMITCHELL,C.Morphological,andpathological characterisisticsonColletotrichumgloeosporioidesfromcitrus.En:Phytopatology. Vol.821992.p13771382.

AGRIOS,G.N.FitopatologaMxico:2ed.Limusa.1996.838p

ALAHAKOON, P. SCRENIVASA, S. BROWN, A. MILLS, P. Selection of genetic variant within Colletotrichum gloeosporioides isolates pathogenic on mango by passagingthoroughwoundentomatofruits.En:physiologicalandMolecularPlant Pathology.Vol:411996.p227240.

ALVAREZ, A. Practicas Agronmicas para el cultivo de ame En: AME: produccindesemillasporbiotecnologa.Bogot:1er.Ed.UNIBIBLOS.Juniodel (2000)p3339.

ARANZAZU, F. ALVAREZ, J. ZULUAGA, L. Manejo integrado de la antracnosis,

Colletotrichum gloesporioides penz. En tomate de rbol, (Solano betacea (cav)

sent) en el municipio de Manizales. En: Seminario de frutales de clima fro moderado.CDTF.p1998.915.

BAYLEY,J.A,OCONELL,R.JPRING,RJandNASH,C.InfectedStrategiesof

Colletotrichum Species. En: Colletotrichum Biology, Phatology and Control.

Bayley.J.AandJeger,MJ.BritishSocietyforPlantPathology.UK.881201992.3 8p.

BELTRAN, J.D. Caracterizacin y diagnstico del genero Colletotrichum spp causantedelaAntraccnosisenameyotroscultivos.En:AME:Produccinde semillasporBiotecnologia.1er.Ed.UNIBIBLOS.(Junio2000).p5465.

BONDE, P. and MAN, S. Isozime comparison for identification of Colletotrichum species.pathogenictostrawberry.En:Phytopatology.Vol81:1991.p15231528.

BRUNT, A. JACSON, G and FRISON ,J .Guidelines for the Safe Movement Of yamgermplasm.InternationalboardforPlantGeneticResources.1989

BUITRAGO,G.BoletnInformativo.ProgramadeBiotecnologiaAgrcola.V12N 2.2000.

CABRERA, M. y ALVAREZ, R. Primera identificacin de Colletotrichum

demathiumsobreaglonemaydeC.gloeosporioidessobresingonioenelnordeste
de Argentina. Argentina: Ctedra de fitopatologa. Departamento de sanidad vegetal.Facultaddecienciasagrarias.Universidadnacionaldelnordeste.1998.

CAMPO Y LUNA. Evaluacin de la Antracnosis en ames Dioscorea alata Diamante 22 en monocultivo e intercalado con la variedad cocha de coco. En: AscolfiInforma.Vol.24(5):1998.p.2627.

CANNON.P, BRIDGE.P.D,CABI BIOSCIENCE,UK AND MONTE.E. Linking the past,presentandfutureofColletotrichumsistematics.UniversidaddeSalamanca,

SpainEn:ColletotrichumHostSpecificityPathology,andHostPathogeneds.Dov Prusky,StanleyFreemanandMartinB.DickmanSt.Paul,Minnesota.Interaction APSPRESSTheAmericanphytopathologicalSociety2000120p

CEDEO,LMOHALI,S.YPALACIOS,E.AntracnosisCausadapordosCepasde

Glomerella cingulata en Frutos de Parchita Venezuela: En: Fitopatologa

VenezolanaVol.6(2)1994p3033.www.redpavfpolarinfo.ve/fitopatology/v062a

_____________. CARREO, O. Primer reporte en Venezuela de Colletotrichum

acutatum causando antracnosis en frutos de fresa. Instituto de investigaciones

agropecuarias. Venezuela Centro de microscopia electrnica. Universidad de los Andes.Mrida.Venezuela.(1996).

CORELL, J. GUERBER, J. WASIWA, L. SHERILL, J and MORELOCK, T. Inter and Intra species variation in Colletotrichum and Mechanisms wich affect population structare En: Colletotrichum host specificity, pathology, and host pathogeninteractioneds.DovPrusky,StanleyFreemanandMartinB.Dickman St paul, Minnesota: ed. APS Press the American phitopathological society 2000.145180p.

DICKMAN, M. Signal exchange during Colletotrichum trifolii. Alfalfa interations. En:Colletotrichumhostspecificity,pathology,andhostpathogeninteractioneds. DovPrusky,StanleyFreemanandMartinB.DickmanStpaul,Minnesotaed.APS PresstheAmericanphitopathologicalsociety2000205231p.

DURANGO R, BALLESTEROS G, PADILLA A, ALVAREZ, A. Creacin de un Banco de Germoplasma de ame. Centro de Biotecnologa. U. Crdoba. En: Boletn informativo del programa de Biotecnologia Agrcola.Proyecto ame, Vol. 1,N3.Febrero.1999.

ECHANDI, E. Obtencin decultivos monosporicos por los mtodos de dilucin y rayado. En: Manual de laboratorio para fitopatologa general. Furrialva. Editorial Hnos.Restrepo.1971p16

FREEMAN,S.Geneticdiversityandhostspecificityof Colletotrichumspecieson various fruits. En : Colletotrichum host specificity, pathology, and hostpathogen interaction eds. Dov Prusky, Stanley Freeman and Martin B. Dickman St paul, Minnesota.:ed.APSPresstheAmericanphitopathologicalsociety2000.131144p

GARCIA, A. Patologa vegetal Practica. Mxico: 2da edicin editorial Limusa.. 1988.2842p

GUZMAN,MyFONTANILLA,M.AlgunosVirusVegetalesydelame.En:AME: Produccin de semillas por Biotecnologa. Bogot: 1er. Ed. UNIBIBLOS. (Junio 2000).p71101

HADDENJandBLACKL..AnthracnoseofpepercausadbyColletotrichumSpp. AgricultureExperimentStation.Vol.88(38)1992.2566p.

HERRERA,TyULLOA,M.ElReinodelosHongosMxico:ISBN.1990.375385p

HOLLYDAY, P. Fungus disesses of trtopical crops. New york.: Dover publication,Inc.1995

IICA,SANINET. www.iicasaninet.net/pub/sanveg/html/frijol/antr.htm

IITA (International Institute of Tropical Agriculture). Yams (Dioscorea spp) Root and Tuber Improvement Program. Archival report (19891993). Ibadan. Nigeria. 1993

JACSON,GuhNEWHOOK,F.J.andWINCH,J.Yamdiebackadvisoryleaflet12 southpacificcommisionnoumea.1998.

JACSON ,M.and BOTHAS T,R.Carbon Concentration and Carbon to Nitrogen Ratio Influence SubmergedCulture Conidiation by the Potential Bioherbicide

Colletotrichum truncantun NRRL 13777.En: Envioronmental Microbiology . vol 58

N7.1990p34353138.

________,____.andSchislerD.TheCompositionand Attributes ofColletotrichum

truncatun Spores areAltered by Nutritional. En:EnvironmentalMicrobiology,Vol

56N11.1992.p260265.

_________,_____andSLINGER,P.SubmergedCultureConidialGerminationand Conidiation Of Bioherbicide Colletotrichum truncantun are Influenced by the

AminoacidCompositionoftheMedium.En:JournalorfIndustrialMicrobiology,Vol 121993.p417422.

JENKIS,A.E.HistoryofTermAnthracnose.En:Phytopathology.Vol:23.1993. p389

JOHSTON,P.R.Theimportanceof philogeny inunderstandinghost relationships within Colletotrichum en: Colletotrichum host specificity, pathology, and host pathogeninteractioneds.DovPrusky,StanleyFreemanandMartinB.Dickman St paul, Minnesota :ed. APS Press the American phitopathological society. 2000.2128p

KATAN,T. Vegetative Compatibility in Colletotrichum. En: Colletotrichum: biology ,pathology andcontrol.Bailey, J.Y Jeger, M. Eds.CABInternational.2000 .337 345p.

KOLATTUKUDY,P.KIKIM,Y.LI,D.MEILIU,Z.AndROGERS,L.Regulationofof melanin biosynthesis genes during appressorium formation by Colletotrichum

lagenarium. En: Colletotrichum host specificity, pathology, and hostpathogen

interaction eds. Dov Prusky, Stanley Freeman and Martin B. Dickman St paul, Minnesota:ed.APSPresstheAmericanphitopathologicalsociety2000.7898p

KORSTEN,L.AndJEFFRIESP.Potentialforbiologicalcontrolofdieseasecaused by Colletotrichum. En: Colletotrichum host specificity, pathology, and host pathogeninteractioneds.DovPrusky,StanleyFreemanandMartinB.Dickman St paul, Minnesota:ed. APS Press the American Phitopathological Society 2000.266291p

KUBO,Y. TAKANO, Y. TSUJI,G.HORINO, O. And FORUSAWA, I. Regulation of melanin Biosynthesis Genes during apressoriuum formation by Colletotrichum

langenarium En: Colletotrichum host specificity, pathology, and hostpathogen

interaction eds. Dov Prusky, Stanley Freeman and Martin B. Dickman St paul, Minnesota:ed.APSPresstheAmericanPhitopathologicalSociety2000.99114p

LATHAM, A. Cultural Characteristics and Pathogenicity of Glomerella cingulata islotesfromApplesinAlabama:En:PlantDisease.Vol.67:10.1983.p10651068.

LEGARD,D.Colletotrichum DiseasesofStrawberry inFlorida.En:Colletotrichum hostspecificity,pathology,andhostpathogeninteractioneds.DovPrusky,Stanley FreemanandMartinB.DickmanStpaul,Minnesota:ed.APSPresstheAmerican phitopathologicalsociety2000.292299p.

LEVERKUSEN,Yam(ame). UnaImportanteplantatildeAfricaOccidental.En CorreoFitosanitarioN21998p810.

LOPEZ, A. GAMERO, G. Comportamiento de Clones de ame tolerantes a Antracnosis (Colletotrichum gloeosporioides) en tres sistemas de cultivo en la ReginCaribe.Corpoica.C.I.Turipan.1998.p18.

MANNERS, S. STEPHENSON, S. CHAOZU, H. MACLEAN.. Gene transfer and expressioninColletotrichumgloeosporioidescausingAnthracnoseonstylosanthes En:Colletotrichumhostspecificity,pathology,andhostpathogeninteractioneds.

DovPrusky,StanleyFreemanandMartinB.DickmanStpaul,Minnesotaed.APS PresstheAmericanPhitopathologicalSociety2000.180194p.

MARTINEZ, M. ZAMBRANO , C. Identificacin y patogenecidad de cepas de

Colletotrichum asociadasalcultivodelcafCoffearabicaenlaregincentraldel
occidentedeVenezuela.En:AgronomaTrop.Vol.44(4).1994.p567577.

Mc CRACKEN, A and SWIMBURNE, T. Siderophores produce by saprophytic bacteria and stimulants of germination of conidial of Colletotrichum musae. PhysiologicalPlantPhatology.Vol.151979.p331340.

MELOTTO,M. BALARDIN, R and KELLY,J. HostPathogen Interaction and Variability of Colletotrichum lindemuthianum. En: Colletotrichum host specificity, pathology, and hostpathogen interaction eds. Dov Prusky, Stanley Freeman and Martin B. Dickman St paul, Minnesota ed. APS Press the American PhitopathologicalSociety.2000.346361p

MENAS, G. NIETO, D. NORIEGA, D. TELIZ, D. MORA, G. CARDENAS, E. Epidemiologaycontroldelaantracnosis(Colletotrichumgloesporioides penz)en mango. Avances en la investigacin. Colegio de postgrados. Instituto de fitosanidad.1999.www.colpos.mx/ifit/entacar/avances/061.htm

MONTALDO,A.Cultivoderacesytubrculostropicales.SanJosdeCostaRica: InstitutoInteramericanodeCooperacinparalaAgricultura.1983.284p.

MORENO, A. GALLARDO, Y. Anlisis de la informacin. Serie a prender investigar.ICFES.V.4:50,1999.104107p.

NEGRETE, J Y REDONDO,A. Evaluacin de la respuesta a la antracnosis,

Colletotrichum gloeosporioides Penz. En: ames promisorios, Dioscorea alata L.

enCrdoba.UniversidaddeCrdoba.Tesisdeingenieroagrnomo1997.61p

OCONNELLR,LUCASJ,LUCASC.MechanismsofInfectinandSpecifity1997. www.lars.acuk/cellbiol/mdpath/colinf.html.

_____________ PERFECT, HUGHES. B, CARZANIGA.R, BAILEY.J.A, AND GREEN.J Dissecting the cell biology of Colletotrichuminfection processes. University of Bristol,UK En:Colletotrichum host specificity, pathology, and host pathogeninteractioneds.Dovprusky,stanleyfreemanandMartinB.DickmanSt paul, Minnesota ed. APS Press the American phitopathological society.2000.57 77p

ONEILL,N.PhatogenicVariabilityandHostResistanceintheColletotrichumtrifolli

/MedicagosativaPhatosystem.En:PlantDisease.Vol.80:4.(1996)p.450457.

OSORIOJyRAMIREZB.PrincipalesEnfermedadesdelameenlareginCaribe colombiana.En:ICAinforma.Colombia.(Eneromarzode1989)vol.XXIII.p13 15.

PEREA,M.TendenciasActualesdelaPropagacinClonal.UniversidadNacional deColombia.BoletninformativodelprogramadeBiotecnologiaAgrcola,Proyecto ame,FebreroV.1,N 3.1999.

_________Buitrago,G.Aplicacindelabiotecnologaagrcolaalcultivodeame. En:AME:Produccindesemillas porBiotecnologa. InstitutodeBiotecnologa. UniversidadNacionaldeColombia.Primeraedicin.(Junio2000).p1729.

PEREZ, P. Determinacin de parmetros para el secado de ame (Dioscorea

alata).Sincelejo.1990.Tesis.UniversidaddeSucre,FacultaddeIngeniera.

PEREZ,L.EnfermedadesdelasPlantas.EditorialLeallon.1993.4651p.

PRUSKY, D. KOBILER, I. ARDI, R. BENO MOALEN,P. YAKOBY,N. KEEN,N. Resitance Mechanism of subtropical fruits to Colletotrichum gloeosporioides. En:Colletotrichum host specificity, pathology, and hostpathogen interaction eds. DovPrusky,StanleyFreemanandMartinB.DickmanStpaul,Minnesotaed.APS PresstheAmericanPhitopathologicalSociety.2000.232244p.

RIVERO,MEvaluacinPreliminardelaresistenciadecincomaterialesdesorgo (Sorghium bicolor) a la antracnosis Colletotrichum graminicola (Ces.) Wilson). TrabajoespecialICAUNC.1986.

RODRIGUEZ, RandREDMAN,R. Colletotrichumasa Model SystemDefining the Genetic Basis of Fungal Symbiotic Lifestyles. En:Colletotrichum host specificity, pathology, and hostpathogen interaction eds. Dov Prusky, Stanley

FreemanandMartinB.DickmanStpaul,Minnesotaed.APSPresstheAmerican PhitopathologicalSociety.2000.114.1p.

ROMERO,S. E.Caracterizacinmorfolgica, molecular yvariabilidadpatogenica delagentecausaldelaantraccnosisColletotrichumgloeosporioidesentomatede rbolenColombia.Bogot1999.,107p.Tesisdemaestria.UniversidadNacional. FacultaddeIngenieraAgrnoma.

SIMMONDS,J.AstudyoftheSpeciesofColletotrichum causingripefruitrotsin Queensland. Queensl. En: Journal of Agriculture and Animal Sciences. Vol. 22. 1965.p437479.

SMITH,B.andBLACK.Morphological,Cultural,andPathogenicVariationAmong

ColletotrichumSpeciesisolatedfromStrawberrry,En:PlantdiseaseVol.74:1990.
p16976.

SMITH,J.AVELLINYA,S.KORSTEN.InfectionofCowpeasStembyCdematium. En:Plantdiseases.Vol81,83.1997.p832.

SUTTON, B. The Coelomycetes Fungi Imperfecti with Pycnidia Acervuli and Stromata.CommmonwealthMycologicalInstitute.Kew,Surrey,England1980.

___________ The genus Glomerella and Pathogenic Variation Among

ColletotrichumSpeciesisolatedfromStrawberry.En:PlantdiseaseVol.74.1992.
p976.

SWEETHINGHAM,M.THOMAS,G.YANG,H.ANDGREGSHCA.,L.Antracnose thepathogene,epidemioligyandthemanagementpachage,.Australia:Agriculture Westen.1999.

THIND. TandJHOOTY,J.S. Studies onVariability in two ColletotrichumSpecies causing Anthracnose and Fruit y Root of Chillies in Punjab Indian En: Phytopathology.Vol.43:1:1990.p5358.

TIMMER, L and BROWN, G. Biology and Control of Anthracnose Diseases of Citrus. En: Colletotrichum host specificity, pathology, and hostpathogen interaction eds. Dov Prusky, Stanley Freeman and Martin B. Dickman St paul, Minnesota ed. APS Press the American Phitopathological Society. 2000. 300 316p.

VAILLANCOURT,LWANG,JandHANAU,R.Iterandintraspeciesvariationin

Colletotrichum and mechanisms wich affect population structure. En: Colletotrichumhostspecificity,pathology,andhostpathogeninteractioneds.Dov

Prusky, Stanley Freeman and Martin B. Dickman. St paul, Minnesota: . APS PresstheAmericanPhitopathologicalSociety.2000.2944p

WALLER,J.M. ColletotrichumDiseasesofPerennialandothercashCropsEn:

Colletotrichum: biology , pathology and control. Bailey, J. Y Jeger, M. Eds. CAB

International.199216770,1769p.

___________. And BRIGDE,P.D. .Recent Advantages in Understanding

Colletotrichum Diseases of Some Tropical Perennial Crops. En Colletotrichum:

biology , pathology and control. Bailey, J. Y Jeger, M. Eds. CAB International. 2000.337345.P

WILSON, E. Control of European Canker of apple by eradicative and protective fungicides.En:PlantDisease1968. WINCH, J. E NEWNOOK, F.J JACSON, GUH. And COLE, J.J. Sudies of

Colletotrichum gloeosporioides of yam, Dioscorea alata. Salomon islands: En:

PlantPathology.1984.p 33:467.