Universidade Federal de So Joo Del Rei

Relatrio de Anlise Instrumental

Preparo de curvas analticas



Amanda de Abreu Oliveira Ribeiro 094550010
Bruna Almeida Barbosa 094550009
Bryann Clyff Damasceno Mota 094550033
Eduardo Henrique de Azevedo 094550043
Lucas de Melo Vale Vilano 104550064










Ouro Branco - MG
Outubro de 2011
Relatrio apresentado ao curso de
Engenharia Qumica na disciplina de
Anlise Instrumental Experimental,
sob responsabilidade da professora
Ana Maria de Oliveira.
1

Preparo de curvas analticas

RESUMO
A construo de curvas analticas pela relao entre o sinal analtico medido versus a
concentrao do analito, permite a calibrao de equipamentos para mtodos instrumentais.
Os mtodos de padronizao interna, padronizao externa e adio de padro so os mais
utilizados. Tudo que foi desenvolvido nesta prtica, objetivou a construo de curvas
analticas pelos trs mtodos de calibrao citados acima e a comparao entre eles. Foram
preparadas solues estoques de concentraes conhecidas e os procedimentos para a
construo das curvas foram obedecidos. As concentraes obtidas experimentalmente
atravs dos trs mtodos foram: 6,0768 x 10
-4
mol/L, 8,6038 x 10
-4
mol/L, 5,0908 x 10
-4

mol/L, respectivamente. Por meio da regresso linear, o mtodo da padronizao externa se
mostrou mais eficiente para a determinao de KMnO
4 ,
pois o valor obtido foi mais prximo
do que era desejado, tendo como referncia a massa de permanganato utilizada.
1. INTRODUO
A espectrofotometria um dos mtodos analticos mais usados nas determinaes
analticas. aplicada para determinaes de compostos orgnicos e inorgnicos como, por
exemplo, na identificao do princpio ativo de frmacos. Ela avalia a capacidade dos
solutos de absorver luz em comprimentos de onda especficos. A partir disso possvel
determinar a concentrao do soluto em determinada soluo, atravs da medida de
absorbncia das espcies qumicas (VINAD, VINAD, 2005; MASTROENI, GERN,
2008).
Absorbncia a capacidade de absorver energia radiante, ela geralmente expressa
em percentagem (ou por um nmero entre 0 e 1) e os espectrofotmetros so os
instrumentos capazes de registrar os dados de absorbncia de uma soluo (VINAD,
VINAD, 2005; LEAL, 2007).
A concentrao de uma substncia em uma determinada amostra pode ser
determinada atravs da comparao da intensidade da cor, obtida com a intensidade da cor
produzida em solues padro, ou atravs de uma curva de calibrao produzida em um
grfico de concentrao das solues padro versus absorbncia. realizada uma srie de
determinaes com concentraes crescentes da soluo padro, medindo as suas
respectivas absorbncias (SKOOG, et al, 2007 ; BOGO, BASSO, 2009).
Trs mtodos podem ser utilizados para a construo de curvas de calibrao:
2

No mtodo do padro interno, uma quantidade conhecida da espcie que atua como
referncia adicionada a todas as amostras, padres e brancos. Ento o sinal de resposta no
aquele do prprio analito, mas sim da razo entre o sinal do analito e o da espcie de
referncia. preparada, como de maneira usual, uma curva de calibrao na qual o eixo y
a razo entre as respostas e o eixo x, a concentrao do analito nos padres (SKOOG, et al,
2007).
No mtodo do padro externo, um padro externo preparado separadamente da
amostra. Quando os padres externos so usados, considera-se que quando a mesma
concentrao do analito estiver presente na amostra e no padro, a mesma resposta ser
obtida. Assim, a relao funcional da calibrao entre resposta e a concentrao do analito
tambm deve-se aplicar amostra. Normalmente em uma determinao, a resposta original
do instrumento no utilizada. Em vez disso, a resposta analtica corrigida por meio da
medida de um controle (branco). O branco ideal idntico amostra, mas sem o analito
(SKOOG, et al, 2007).
No mtodo das adies de padro, uma quantidade conhecida da soluo padro,
contendo o analito, adicionada a uma poro da amostra. As respostas antes e depois da
adio so medidas e posteriormente usadas para obter a concentrao do analito.
Alternativamente, as mltiplas adies so feitas a diversas pores da amostra. A adio de
padro considera uma resposta linear. Isso deve ser sempre confirmado ou o mtodo das
adies mltiplas deve ser empregado para se verificar a linearidade. Uma forma de anlise
para o quo linear sua curva a utilizao do clculo do coeficiente de correlao (R), seu
valor deve aproximar-se de 1 para que se possa considerar que o resultado obtido seja
aceitvel (SKOOG, et al, 2007).


2. OBJETIVO
Preparao de curvas analticas por mtodos de padronizao distintos e comparao
dos resultados obtidos entre eles.






3

3. MATERIAS E MTODOS

3.1 Materiais e Reagentes
Permanganato de potssio (F. Maia Indstria e Comercio LDTA

) e dicromato de
potssio (Dinmica Qumica Comtempornea

). Bales volumtricos de 100 mL, 250 mL e

1 L, esptula, bquer de 100 mL, basto de vidro, pipetas volumtricas de 1, 2 e 5 mL,
pipeta graduada de 25 mL, pisseta, balana analtica (Shimadzu

AY220), espectrofotmetro
(Biospectro

SP - 220).

3.2 Mtodos
3.2.1 Preparo da Amostra
A balana analtica foi tarada com um bquer de 100 mL, onde foi pesado 0,0947 g
de permanganato de potssio. Com uma pisseta adicionou-se 100 mL de gua destilada ao
bquer e homogeneizou-se a mistura com um basto de vidro. A mistura foi ento
transferida para um balo volumtrico de 1 litro e teve seu volume aferido com gua
destilada. Com uma pipeta graduada de 10 mL, transferiu-se 4 mL desta amostra para um
balo volumtrico de 100 mL, completando seu volume com gua destilada.

3.2.2 Preparo da Soluo Estoque
Padronizao Externa: Tarou-se a balana analtica com um bquer de 100 mL, onde foi
pesado 0,0247 g de KMnO
4
. Com uma pisseta, preenchida com gua destilada, fez-se a
dissoluo do permanganato e a transferncia deste para um balo volumtrico de 250 mL,
que teve seu volume aferido com gua destilada.
Padronizao Interna: do mesmo modo feito anteriormente, pesou-se 0,0148 g de
dicromato de potssio, transferindo-o para o balo volumtrico de 100 mL e aferindo com
gua destilada.

3.2.3 Mtodo de Padronizao Externa
Com auxlio de uma pipeta graduada, foram transferidos 2, 4, 8, 12 e 20 mL da
soluo estoque de permanganato de potssio para um balo volumtrico de 100 mL, que
foram aferidos com gua destilada. Foi feita uma comparao visual entre a amostra
preparada em 3.2.1 e os 5 bales preparados, para estimar a concentrao. Foram feitas as
leituras de absorbncia de cada balo volumtrico no espectrofotmetro e anotou-se os
valores registrados para construo da curva analtica.
4

3.2.4 Mtodo de Padronizao Interna
Assim como feito para a padronizao externa, foram adicionados os mesmos
volumes de permanganato de potssio aos bales volumtricos de 100 mL, s que desta vez
adicionou-se mais 8 mL da soluo estoque de dicromato de potssio a cada um deles. Foi
feita a leitura da absorbncia de cada um dos 5 bales volumtricos preparados. Os dados
foram anotados para posterior construo da curva analtica.

3.2.5 Mtodo de Adio de Padro
Para o mtodo de adio de padro pegou-se 8 mL da amostra diluda, com auxlio
de uma pipeta graduada, transferindo-a para um balo volumtrico de 100 mL, que foi
aferido com gua destilada. Foi ento feita a medida de absorbncia.
Foram preparadas ento mais quatro amostras em balo volumtrico de 100 mL,
sendo que foi adicionado a cada um deles 8 mL da amostra diluda (preparada em 3.2.1) e
acrescentado respectivamente 5, 10, 15 e 20 mL da soluo estoque de permanganato de
potssio. Agitou-se as solues e fez-se as leituras de absorbncia (no comprimento de onda
do permanganato) das amostras de cada um dos bales preparados. Com os dados obtidos
montou-se a curva de adio de padro, e por extrapolao da mesma encontrou-se a
concentrao de permanganato na amostra.

4. RESULTADOS E DISCUSSO

4.1 Padronizao Externa
A soluo de amostra foi preparada utilizando-se uma massa (m) de 0,0947 g de
permanganato de potssio diluda em 100 mL de gua destilada. Aps a diluio, teve seu
volume (V1) completado at 1 L com gua destilada. Logo em seguida, foi feita a diluio de
4,00 mL em um balo volumtrico de 100 mL, completando com gua destilada. Dessa
forma, fez-se o clculo terico da concentrao (C1) de permanganato de potssio na amostra
atravs da equao (1) com a finalidade de, posteriormente, avaliar o erro no resultado do
mtodo analtico.
Considerando a massa molar (M) do permanganato de potssio de 158,03 g/mol, o
nmero de mols do permanganato (n1) ser:

(1)
5

-4

(2)

=
-4
L
-1

Para se calcular a concentrao terica (C2) da amostra, aps a diluio de uma
alquota de 0,004 L (Val
) em um balo volumtrico de 100 mL (V), utilizou-se as frmulas
(2) e (3).

(3)

n2 = 2,3970 x 10
-6
mol

Essa diluio, feita previamente leitura da absorbncia no espectrofotmetro, foi
necessria para que a faixa de concentrao do analito esteja dentro da faixa dinmica linear
do equipamento de medio, que se estende da menor at a maior concentrao em que as
medidas quantitativas devem ser realizadas. Estas concentraes so relativamente baixas
para que, segundo a lei de Beer-Lambert, mostrada na equao (4), a relao entre a
absorbncia da luz no comprimento de onda especificado e a concentrao da substncia na
soluo seja linear (SKOOG, et al, 2007).
A

= c.|._ (4)
Sendo A

a absorbncia a fixo, c a absortividade molar, o caminho tico e a
concentrao da soluo absorvente.
O melhor comprimento de onda para uma determinada soluo aquele no qual h
maior absoro e, portanto, menor transmisso de luz. Portanto, o valor de melhor
comprimento de onda para KMnO
4
encontrado na literatura de = 525 nm, sendo
recomendada a faixa de 490 a 530 nm como aceitvel do ponto de vista de sensibilidade
para medidas espectrofotomtricas (SKOOG, et al, 2009).
A linearidade essencial, j que curvas no lineares requerem um grande nmero de
dados de calibrao e esto mais sujeitas a erros (SKOOG, et al, 2007).
Uma soluo de estoque de permanganato de potssio foi preparada em um volume
(V
e
) de 0,250 L de gua destilada. Dessa forma, calculou-se, o nmero de mols (n
e
) a partir
da equao (2) e a massa (m
e
) de permanganato necessria para obter uma concentrao (C
e
)
de 0,0006 mol/L, conforme a equao (5).
6

0,00015 mol

(5)

0,00015 mol =>

A massa de permanganato realmente pesada foi de 0,0247g. Dessa forma, a
concentrao do estoque (C
e
) passou a ser 6,2520 x 10
-4
mol/L, porm os volumes
necessrios j haviam sido calculados conforme a equao (6). Assim, as concentraes
especificadas (C
p
) foram recalculadas e os resultados listados na Tabela 1.

(6)
Esses volumes foram adicionados aos bales citados anteriormente e a soluo foi
aferida com gua destilada. Realizando uma comparao visual entre amostra e padres,
verificou-se que a tonalidade da amostra estava entre a segunda e a terceira concentrao
padro.
A leitura da absorbncia das solues padro preparadas anteriormente foi feita pela
retirada de uma alquota de cada uma delas, no comprimento de onda de 525nm. Os valores
encontrados no espectrofotmetro esto dispostos na Tabela 1.

Tabela 1 Volumes, de soluo estoque de permanganato, necessrios para preparar solues com as
concentraes desejadas e absorbncia encontrada nas concentraes das solues padro.

Volumes requeridos (L) Concentrao (mol L
-1
) Absorbncia
1 0,002 1,2504 x 10
-5
0,108
2 0,004 2,5001 x 10
-5
0,143
3 0,008 5,0016 x 10
-5
0,206
4 0,012 7,5024 x 10
-5
0,277
5 0,020 1,2504 x 10
-4
0,408

A partir dos dados da tabela foi feito o grfico Absorbncia x Concentrao,
mostrado na Figura 1:

Figura 1 Curva analtica obtida pelo mtodo do padro externo.
y = 0,0267x + 0,0751
R = 0,9998
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0 5 10 15
A
b
s
o
r
b

n
c
i
a

Concentrao de KMnO
4
(10
-5
mol/L)
7

Atravs da equao da reta obtida pela da curva analtica, mostrada na Figura 1, fez-
se o clculo da concentrao de permanganato de potssio na amostra.
(7)
A partir da equao (7) e dos valores de absorbncia medidos no espectrofotmetro
dos grupos 3, 4 e 5, pode-se calcular a concentrao diluda (C
d
) de cada grupo.
Cd3 =

C
d3
= 1,8689 x 10
-5
mol/L
Cd4 =

C
d4
= 2,4307 x 10
-5
mol/L
Cd5 =

C
d5
= 2,3558 x 10
-5
mol/L
Tais concentraes so das amostras diludas, para encontrar as concentraes reais deve-se
utilizar o fator de diluio. Nesse caso, o fator de diluio 25. Sendo calculado pela diviso de 100
mL por 4 mL. Dessa forma, as concentraes reais(C
r
) de cada grupo foram:
C
r3
= (1,8689 x 10
-5
mol/L) x 25 = 4,6723 x 10
-4
mol/L
C
r4
= (2,4307 x 10
-5
mol/L) x 25 = 6,0768 x 10
-4
mol/L
C
r5
= (2,3558 x 10
-5
mol/L) x 25 = 5,8895 x 10
-4
mol/L
A partir da concentrao, encontrou-se as massas (m
c
) de permanganato de potssio
calculado para cada grupo utilizando as equaes (1) e (2) e considerando a massa molar (M) do
permanganato de potssio (KMnO
4
) de 158,03 g/mol.
m
c3
= (4,6723 x 10
-4
mol/L) x (158,03 g/mol) x (1 L) = 0,0738g
m
c4
= (6,0768 x 10
-4
mol/L) x (158,03 g/mol) x (1 L) = 0,0960g
m
c5
= (5,8895 x 10
-4
mol/L) x (158,03 g/mol) x (1 L) = 0,0931g
Com esses valores de massa calculada, pode-se calcular a porcentagem em massa
dividindo a massa calculada sobre a massa medida e multiplicando por 100%.
%m
3
= (0,0738 g / 0,1015 g) x 100% = 72,71%
%m
4
= (0,0960 g / 0,0947 g) x 100% = 101,37%
%m
5
= (0,0931 g / 0,0983 g) x 100% = 94,71%
Mdia da porcentagem das massas 89,60%
O desvio padro para padronizao externa 14,99862.

4.2 Padronizao Interna
A partir da soluo de estoque de permanganato de potssio, adicionou-se 8 mL de
dicromato de potssio em cada balo volumtrico de concentrao listada na Tabela 1.
Realizou-se as leituras da absorbncia de cada soluo estoque no espectrofotmetro em
8

dois comprimentos de onda diferentes, sendo = 375 nm (cromato) e = 525 nm
(permanganato).
O grfico da curva analtica no construdo com o sinal de resposta independente
em funo da concentrao, mas sim da razo entre o sinal do analito e o da espcie de
referncia. preparada, como de maneira usual, uma curva de calibrao na qual o eixo y
a razo entre as respostas e o eixo x, a concentrao do analito nos padres (SKOOG, et al,
2009).
A razo entre o sinal do analito e da espcie de referncia dada pela equao
(MENDES, 2009).
dicromato
to permangana
A
A
(8)
Sendo A
permanganato
a absorbncia obtida pelo permanganato e A
dicromato
a absorbncia
obtida pelo dicromato. Aplicando a relao, obtm-se os resultados descritos na Tabela 2.

Tabela 2 Concentrao da soluo estoque de permanganato de potssio, leituras das absorbncias de
permanganato de potssio e dicromato de potssio, razo entre as absorbncias de permanganato e de
dicromato.

Concentrao (mol L
-1
)
Absorbncia do
permanganato
Absorbncia do
cromato
cromato
to permangana
A
A

1 1,2504 x 10
-5
0,044 0,197 0,223
2 2,5001 x 10
-5
0,075 0,194 0,387
3 5,0016 x 10
-5
0,136 0,195 0,697
4 7,5024 x 10
-5
0,208 0,237 0,878
5 1,2504 x 10
-4
0,334 0,268 1,246

A partir dos dados da tabela foi feito a curva Absorbncia analito / Absorbncia
padro x Concentrao, mostrado na Figura 2:


Figura 2 Curva analtica obtida pelo mtodo de padronizao interna.
y = 0,0889x + 0,1766
R = 0,9816
0
0,5
1
1,5
0 5 10 15
A
a
n
a
l
i
t
o

/

A
p
a
d
r

o

Concentrao de KMnO
4
(10
-5
mol/L)
9

Atravs da equao da reta obtida pela da curva analtica, mostrada na Figura 2, fez-
se o clculo da concentrao de permanganato de potssio na amostra.
A partir da equao (7) e dos valores de absorbncia medidos no espectrofotmetro
dos grupos 3, 4 e 5, pode-se calcular a concentrao diluda (C
d
) de cada grupo.
Cd3 =

C
d3
= 4,2880 x 10
-5
mol/L
Cd4 =

C
d4
= 6,8830 x 10
-5
mol/L
Cd5 =

C
d5
= 7,2295 x 10
-5
mol/L
Tais concentraes so das amostras diludas, para encontrar as concentraes reais deve-se
utilizar o fator de diluio. Nesse caso, o fator de diluio 12,5. Sendo calculado pela diviso de
100 mL por 8 mL. Dessa forma, as concentraes reais(C
r
) de cada grupo foram:
C
r3
= (4,2880 x 10
-5
mol/L) x 12,5 = 5,36 x 10
-4
mol/L
C
r4
= (6,8830 x 10
-5
mol/L) x 12,5 = 8,6038 x 10
-4
mol/L
C
r5
= (7,2295 x 10
-5
mol/L) x 12,5 = 9,0369 x 10
-4
mol/L
A partir da concentrao, pode-se encontrar as massas (m
c
) de permanganato de potssio
calculado para cada grupo utilizando as equaes (1) e (2) e considerando a massa molar (M) do
permanganato de potssio (KMnO
4
) de 158,03 g/mol.
m
c3
= (5,3600 x 10
-4
mol/L) x (158,03 g/mol) x (1 L) = 0,0847g
m
c4
= (8,6038 x 10
-4
mol/L) x (158,03 g/mol) x (1 L) = 0,1360g
m
c5
= (9,0369 x 10
-4
mol/L) x (158,03 g/mol) x (1 L) = 0,1428g
Com esses valores de massa calculada, pode-se calcular a porcentagem em massa
dividindo a massa calculada sobre a massa medida e multiplicando por 100%.
%m
3
= (0,0847 g / 0,1015 g) x 100% = 83,45%
%m
4
= (0,1360 g / 0,0947 g) x 100% = 143,61%
%m
5
= (0,1428 g / 0,0983 g) x 100% = 145,27%
Mdia da porcentagem das massas 124,11%
O desvio padro para padronizao externa 35,2224.

4.3 Mtodo da Adio de Padro

As amostras preparadas no item 3.2.5 foram levadas ao espectrofotmetro, onde
tiveram suas absorbncias lidas e registradas. Os dados podem ser vistos na Tabela 3.








10

Tabela 3 Dados do Mtodo de Adio de Padro

Volume de Soluo
da Amostra diluda
(mL)
Volume de Soluo
Estoque de KMnO
4

adicionada (mL)
Concentrao de
KMnO
4
(mol/L)

Absorbncia
1 8 0
0 0,114
2 8 5 3,126 x 10
-5
0,206
3 8 10 6,252 x 10
-5
0,262
4
5
8
8
15
20
9,378 x 10
-5
12,504 x 10-5
0,378
0,456

A partir dos dados da tabela acima foi feito o grfico Absorbncia x Concentrao,
mostrado na Figura 3:


Figura 3 - Grfico do mtodo de adio de padro (8 mL da soluo estoque diluda de KMnO
4
(de
concentrao desconhecida) adicionada de 0, 5, 10, 15 e 20 mL de KMnO
4
6,2520 x 10
-4
mol/L).

Em todos os grficos pode-se observar que o ajuste de curva foi adequado, visto que
o valor de R
2
se aproxima de 1. Os pequenos erros e desvios na curva podem ser justificados
por interferncia de outras substncias na leitura do espectrofotmetro, ou mesmo pelo
desvio do valor da pesagem de KMnO
4
, na hora de preparar a soluo estoque.
A partir da extrapolao da curva consegue-se encontrar a concentrao da soluo
da amostra diluda, preparada em 3.2.1, que possui um valor de 4,0727x10
-5
mol L
-1
, como
observado no grfico abaixo:

Figura 3 Extrapolao da curva por adio de padro.
y = 0,0275x + 0,1121
R = 0,991
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0 2 4 6 8 10 12 14
A
b
s
o
r
b

n
c
i
a

Concentrao de KMnO
4
(10
-5
mol/L)
y = 0,0275x + 0,112
R = 0,9953
-0,1
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
-5 0 5 10 15
A
b
s
o
r
b

n
c
i
a

Concentrao de KMnO4 (10
-5
mol/L)
11

Tal concentrao referente amostra diluda, para encontrar a concentrao real deve-se
utilizar o fator de diluio. Nesse caso, o fator de diluio 12,5. Sendo calculado pela diviso de
100 mL por 8 mL. Dessa forma, as concentrao real (C
r
) foi de:
C
r
= (4,0727 x 10
-5
mol/L) x 12,5 = 5,0908 x 10
-4
mol/L

5. CONCLUSO
Por meio do preparo das curvas analticas relativas aos mtodos de padronizao
externa, padronizao interna e adio de padro, foi possvel determinar a concentrao de
KMnO
4
nas amostras de permanganato. As concentraes obtidas pelas curvas relativas aos
mtodos citados acima, foram respectivamente: 6,0768 x 10
-4
mol/L, 8,6038 x 10
-4
mol/L,
5,0908 x 10
-4
mol/L. A tcnica mais eficiente foi a de padronizao externa, visto que se
obteve atravs dela a menor diferena com relao ao esperado pela massa de permanganato
que foi utilizada na preparao da amostra. Tal eficincia pode ser corroborada com o fato
do mtodo possuir o melhor ajuste na curva de calibrao, com um coeficiente de correlao
de valor 0,9998, bem prximo de 1.

6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1. VINAD, M. E.; VINAD, E. R., Mtodos espectroscpicos de anlise
quantitativa, 1 edio, Rio Grande do Sul: UFSM, 2005. 272 p.
2. MASTROENI, M.; GERN, R., Bioqumica: Prticas adaptadas. 1 edio, Rio
de Janeiro: Atheneu, 2008. 134 p.
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