Suceptibilidada Antimicrobiana Escherischia coli UNIVERSIDAD DEL ZULIA FACULTADAD EXPERIMENTAL DE CIENCIAS DIVISIN DE ESTUDIOS PARA GRADUADOS MAESTRA

EN MICROBIOLOGA ASIGNATURA BACTERIOLOGIA Segundo Semestre periodo 2010-2011

Susceptibilidad a los Agentes atimicrobianos en infecciones urinarias causada por Escherischia coli Febrero 2011

LIC. MARIALUISA ORELLANES SANCHEZ CI. 16533904 Maracaibo, febrero 2011

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Suceptibilidada Antimicrobiana Escherischia coli INTRODUCCIN La infecciones urinarias representan un impacto en la salud publica ,

constituyendo del 2 al 5% de las consultas de atencin primaria. Escherichia coli es su causa ms comn, aunque su frecuencia concreta vara segn el tipo de pacientes. La resistencia de Escherichia coli a los antibiticos se relaciona con el consumo indiscriminado de los mismos, puesto que la presin selectiva que ejercen, favorece la creacin, adaptacin y diseminacin de mecanismos de resistencia, el aumento de estos es una problemtica que llama la atencin, para orientar racionalmente el tratamiento emprico de la infeccin urinaria en el medio extrahospitalario .(JM sanchez) Un anlisis de las ultimas investigaciones documentan que Escherichia coli sigue siendo el uropatgeno predominantemente aislado, seguido en un orden variable por Proteus mirabilis, Enterococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter cloacae, Streptococcus agalactiae, Staphylococcus saprophyticus, Serratia marcescens y Morganella morganii. (C. Ochoa Sangrador 2005 ) Comnmente los pacientes afectados pueden ser recin nacidos, prematuros, nias de edad prepuberal y mujeres en edad sexual activa, incrementndose con los aos hasta el punto de constituir un problema significativo en la poblacin geritrica. Factores higinicos, nutricionales, metablicos y genticos pueden influir en el tipo y grado de infeccin urinaria y su evolucin. Se ha demostrado que el uso previo de fluoroquinolonas de segunda o tercera generacin se asocia con un aumento de la resistencia de Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa, mostrando resistencia cruzada con todas las modernas fluoroquinolonas adems se ha demostrado que el uso previo de cefalosporinas orales de tercera generacin o parenterales ante infecciones urinarias favorece la aparicin de enterobacterias productoras de betalactamasas de amplio espectro (BLEA), as como de colonizacin o infecciones por Enterococcus faecalis por esto el uso indiscriminado de estos antimicrobianos ha favorecido el desarrollo de nuevos mecanismo de resistencia por parte de las bacteria. (J. Gmez 2005) Facultad de Ciencias Experimental Maestria en Microbilogia 2

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MARCO TEORICO Caracteristicas generales El Manual Bergey establece que el Reino Procariotae est formado por microorganismos caracterizados por carecer de membrana nuclear y por tener ribosomas 70S. A este Reino pertenecen las bacterias. Escherichia coli es un bacilos gram-negativos anaerobios facultativos que pertenece a la familia Enterobacteriaceae no esporulados , fermentan la glucosa con formacin de cido o de cido y gas reducen los nitratos a nitritos y no poseen citocromooxidasa pertenecen al Gnero Escherichia. Especie: E. coli este forma parte de la flora normal humana hasta 109UFC/g en la materia intestinal. Es una bacteria fermetadora de la lactosa, y por esta caracterstica puede ser identificada en medios de cultivo diferenciales como Agar Mac Conkey. factores de virulencia Los factores de virulencia en E. coli causa fimbrias que participan en la adhesin presentan lipopolisacrido (antgeno O), puede producir enterotoxinas que son exotoxinas que afectan al funcionamiento del aparato digestivo, adems puede producir verotoxina que daa las clulas del endotelio e incluso pueden generar otros 1998) Como ya se ha dicho anteriormente E. coli est presente en grandes concentraciones en la microflora intestinal normal de las personas y los animales donde, por lo general, es inocua. Sin embargo, en otras partes del cuerpo E. coli puede causar enfermedades graves, como infecciones de las vas urinarias. Un nmero reducido de cepas enteropatgenas pueden causar diarrea aguda. Se han determinado varios tipos de E. coli enteropatgenas, basndose en diferentes factores de virulencia: E. coli enterohemorrgica (ECEH), E. coli enterotoxgena (ECET), E. coli enteropatgena (ECEP), E. coli enteroinvasiva productos txicos, entre ellos una hemolisina .Todos estos factores de virulencia, se pueden presentarse en unas u otras cepas.(Natara JP

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Suceptibilidada Antimicrobiana Escherischia coli (ECEI), E. coli enteroagregativa (ECEA) y E. coli de adherencia difusa (ECAD). Se cuenta con ms informacin sobre los primeros cuatro tipos mencionados, pero se conocen peor la patogenicidad y la prevalencia de cepas de ECEA y ECAD.(Natara JP 1998) Evolucion genetica
Desde el punto de vista evolutivo hay estudios detallados que sugieren la biologa bsica de E. coli dado que es mucho ms compleja e interesante de lo que los estudios clsicos indicaban. Existe una gran diversidad gentica y ecolgica, as como una alta recombinacin e intercambio gentico. Estos fenmenos permiten generar gran cantidad de genotipos a pesar de no suceder en cada generacin. No slo se mueven genes, sino que recombinan plsmidos y fragmentos de genes. Algunas de estas combinaciones resultan exitosas e invaden nuevos nichos ambientales o nuevos hospederos, y as continuamente estn surgiendo nuevas variantes de E. coli que pueden llegar a ser muy competitivas, como por ejemplo, la patgena O157:H7. Esto genera una estructura poblacional con ecotipos y al mismo tiempo cepas que pueden vivir en gran cantidad de ambientes que antes se crean secundarios o atpicos para la especie.(Souza 2001)

Importancia Clinica la ITU por E.coli constituye un importante problema de salud que afecta a millones de personas cada ao. Es la segunda causa de infeccin ms frecuente en los humanos, seguidas de las infecciones del tracto respiratorio Ms de mitad de todas las mujeres tiene al menos una ITU durante su vida y su presentacin ms comn es durante el embarazo. La proporcin de frecuencia de UTI entre mujeres y hombres jvenes es de 30:1; sin embargo, conforme el hombre envejece, esta proporcin tiende a igualarse. En el adulto mayor, la ITU es la infeccin bacteriana ms comn y el origen ms frecuente de bacteriemia En ms del 95% de los casos, un nico microorganismo es el responsable de la ITU. El agente etiolgico ms frecuente en ambos sexos es la E.coli, responsable del 75% a 80% de casos; Durante el embarazo los agentes causante de ITU son los mismos en frecuencia que los hallados en las mujeres

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Suceptibilidada Antimicrobiana Escherischia coli no embarazadas; sin embargo, es posible detectar en menor medida Enterococcus sp, Gardnerella vaginalis y Ureaplasma urealyticum. Echeverria 2001) Los pacientes sondados suelen presentar este tipo de infeccin pacientes diabticos, inmunosuprimidos o que estn recibiendo antibiticos de amplio espectro. (Juan Echeverria 2001) E. coli causa patologas de las vas urinarias: cistitis y pielonefritis en mujeres jvenes. En algunos casos, esta infeccin puede complicarse con el sndrome urmico-hemoltico es una complicacin grave de ciertas infecciones producidas por E. Coli (O157:H7), Es una enfermedad ms comn en los nios, que era infrecuente; pero cuya incidencia ha ido aumentando. En adultos es rara, aunque se puede presentar en pacientes oncolgicos. La enfermedad se caracteriza por insuficiencia renal, anemia hemoltica y trombocitopenia. La enfermedad es grave y el tratamiento es solo de soporte. En torno al 60% de los afectados tratados se recuperan. No se conocen muchos factores determinantes de esta enfermedad, aunque se ha comprobado una asociacin con el consumo de carne picada contaminada no suficientemente cocinada. .(Natara JP 1998) Criterios de diagnostico Es diagnosticada por cualquiera de los siguientes criterios: fiebre (> 38C), polaquiuria, disuria o dolor suprapbico. Nitratos o leucocito-estearasa positivo. Piuria > 10 leucocitos/mL. Visualizacin de microorganismos en la tincin de Gram. Urocultivo con mas 100.000 UFC/mL de orina. (Juan Echeverria 2001) (Juan

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Suceptibilidada Antimicrobiana Escherischia coli Susceptibilidad antimicrobiana Se han realizado estudios retrospectivo donde se evalan la sensibilidad antimicrobiana de E. coli procedentes de urocultivos , los resultados de estos investigadores demostraron que Las penicilinas fueron los antibiticos menos activos frente a E. coli, seguidos de cotrimoxazol , cido nalidxico y norfloxacino , manteniendo el resto de los antimicrobianos porcentajes de actividad prximos al 95%. Los antimicrobianos con diferencias significativas en la actividad frente a aislados de diferente origen disminuyen progresivamente. Lo que pudieron concluir que Penicilinas, cotrimoxazol y quinolonas no pueden ser consideradas antimicrobianos de eleccin en el tratamiento emprico de la infeccin del tracto urinario por E. coli. Ya que durante el estudio, disminuyeron las diferencias de sensibilidad observadas originalmente entre cepas hospitalarias y extrahospitalarias. (Sonia Junquera 2003) Otros estudios analizaron urocultivos positivos para Escherichia coli

obtenidos de muestras enviadas desde atencin primaria en El Bierzo (Len) durante los aos 2002 y 1998.La sensibilidad in vitro en 2002 y 1998, respectivamente, ha sido la siguiente: los antibiticos que presentaron menor ndices de resistencias fueron la fosfomicina, cefixima y cefuroxima, seguidos por nitrofurantona y amoxicilina-clavulnico. Debe reconsiderarse el uso de ciprofloxacino, norfloxacino, cotrimoxazol y ampicilina en el tratamiento emprico de las infecciones de orina extrahospitalarias.(JM Sanchez 2003)

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Suceptibilidada Antimicrobiana Escherischia coli OBJETIVO El objetivos de este trabajo es poder determinar los patrones de susceptibilidad, para las infecciones urinaria causadas por E. coli extrahospitalario y compararla con los criterios establecidos en CLSI 2010 M100-S20 Vol. 30 N 1. PLANTEAMIENTO Evaluar la sensibilidad a varios antibiticos sobre aislados de Escherichia

coli en muestras de orina de pacientes de atencin primaria que acudieron al laboratorio Lazarca en la ciudad de Maracaibo durante el periodo de Febrero del 2011. MATERIALES Y METODOS. Muestra: orinas de pacientes ambulatorios, que a realizarse urocultivo ante sospecha de infecciones urinarias estos pacientes recibieron orientacin escrita y verbal de cmo realizar una buena toma de muestra , donde se especificaron criterios como: Realizar una asepsia vaginal. Recolectar la primera misin matutina en un recolector de orina esteril, descartar el primer chorro de la misin y recolectar el resto. Rotular la muestra con datos del paciente nombre completo edad, sexo. Tapar bien y sumergirla en un embace limpio con hielo seco a fin de evitar la multiplicacin bacteriana previo al anlisis e identificaron del microorganismo en sospecha. POBLACION La poblacin en estudiada estuvo comprendida por 44 pacientes con edades comprendidas entre 12 y 70 aos de ambos sexos, que acudieron al laboratorio con indicacin mdica.

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Metodo semicuatitativo o de asa calibrada Procedimiento: Se Mezclo la orina completamente. Se Esterilizo el asa calibrada (calibrada para dispensar 0.01ml) y se dejo enfriar. Se Introdujo el asa calibrada en posicin vertical en la orina para asegurar que el volumen deseado se adhiera al asa. Se Coloco el asa cargada con la muestra en la parte superior de la placa para repartir el inoculo en lineas recta a lo largo del dimetro de las placa MC/ SH GC sin flamear se practicaron trazados en todas las placas rayando el trazo central varias veces para obtener colonias aisladas. Muestra (orina)

MC Anaerobiosis 24 h

SH

GC

Microaerofilica 24-48 h Parmetros para la lectura

Nmeros de UFC 1-10 10-100 100-1000 1000 Condiciones de la Prueba

Nuemro UFC/ml 10(1.000=negativo) 10-10 (1.00-10.000) 10 -10 (10.000-100.000) 10 (100.000)

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Suceptibilidada Antimicrobiana Escherischia coli Medios GC(gelosa chocolate) SH (Sangre Humana) Atmsfera Microaerofilica 35 C Microaerofilica 35 C MC ( MacConkey) Aerobiosis 35 C 24-48 horas Tiempo 24-48 horas 24-48 horas Clonias

Colonias grices con un brillo caracteristico no hemoliticas Recuperacin bacilos gram negativos colonias rosadas , chorreadas fermentadoras de la lactosa

Nota antes de descartar las placas se reicuban por 24 horas adicionales colocando Mc a T ambiente y SH /GC microaerofilica a 35 C para detectar creciemeineto en pacientes que han recibido tratamiento o cuando hay factores de inhibicin por temperatura. Identificacin bioqumica +/+ Caracteristicas actividad de la trictofanasa Urea Citrato + actividad de la ureasa uso de citrato como nica fuente de carbono, sales de amonio como nica fuente de carbono.

Pruebas Indol

Motilidad

- Presencia o ausencia de flagelos

Ornitina lisina

+ +

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Antibiograma segn las ultimas recomendaciones CLIS 2010 CONDICIONES DE PRUEBA .-Dilucin en agar: MHA .-Inculo: Crecimiento mtodo o suspensin directa de colonias, lo que equivale a un 0,5 McFarland estndar .-Incubacin: 35 2 C, el aire ambiente, 16 a 20 horas

Antibiticos ensayados: .-De uso frecuente en la prctica clnica: Amikacina , Aztreonam, Carbenicilina, Cefoperazona, Cefalosporina,

Cefuroxime, Cefepime, Imipenem, Meropenem, Cefamandole, Netilmicina, Trimetropim-sulfa, Clidamicina, Ticarcilina, Amoxicilina /Ac , Clavulanico, Cefazolina, Cloranfenicol, Cefoxitina, Cefoperaona/sulb, Ceftibuten

Levofloxacina, Piperancilina, Teraciclina, Ampicilina, Ceftazidime, Cefaclor, Ciprofloxacina, Cefotaxime, Furadantina, Gentamicina, Linezolid, Ac Nalidixico, Ampicilina/sulb, tobramicina.

BIBLIOGRAFIA CITADA

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Suceptibilidada Antimicrobiana Escherischia coli 1.-C. Ochoa Sangrador, J.M. Eiros Bouza , C. Prez Mendez , L. Inglada Galiana. (2005) Etiologa de las infecciones del tracto urinario y sensibilidad de los uropatgenos a los antimicrobianos.Hospital Clnico Universitario, Valladolid, Hospital de Cabuees, Gijn; Valladoli Hospital de Medina del Campo,

2.-J:M. Snchez Merino, C. Guilln Maquieira, C. Fuster foz, F.J Madrid Garca, M. Jimnez Rodrguez, J. Garca Alonso. (2003) Sensibilidad microbiana de Escherichia coli en infecciones urinarias extrahospitalarias . Hospital del Bierzo. 3.-J. Gmez, R. Muoz, V. Baos y G. Gmez .(2005) Tratamiento de las infecciones urinarias adquiridas en la comunidad. Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca. 4.-Juan Echevarra-Zarate, Elsa Sarmiento Aguilar, Fernando Osores-Plenge (2000) Infeccin del Tracto Urinario y manejo Antibitico. 5.-Nataro JP y Kaper JB, (1998) Diarrheagenic Escherichia coli. Clinical Microbiology Reviews, 11:142201 6.-Sonia Junquera a, Elena Loza a, Fernando Baquero (2003) .Evolucin del patrn de sensibilidad de aislados de Escherichia coli en urocultivos procedentes del medio hospitalario y extrahospitalario. Servicio de Microbiologa. Hospital Ramn y Cajal. Madrid. Espaa 7.-Souza, Valeria, Castillo, Amanda, Rocha, Martha . (2001) Ecologa evolutiva de Escherichia coli. , vol.26, no.10, p.513-517.

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