Introduo

Nesta actividade experimental pretendemos estudar os factores que influenciam a actividade das enzimas, tais como: a temperatura (o efeito ptimo e os extremos) e o pH (o efeito ptimo e os extremos), alm destes existem outros, mas concentrmonos essencialmente nestes dois. As enzimas so catalizadoras que, servem para acelerar a velocidade de uma reaco, sem que consumam as substncias. Estas apresentam uma elevada especificidade para os substratos sobre os quais actuam. A funo destes catalizadores baixar os gastos de energia de activao, permitindo que atinjam mais rapidamente o equilbrio qumico. Os reagentes das reaces que so catalizadas designam se por substratos. Estes ligam-se a uma zona especfica da enzima, que o centro activo. A ligao do substrato com o centro activo da enzima, um processo designado por complexo enzima-substrato. No final deste processo que se forma o produto, a enzima libertada na sua forma original, indicando que no consumida nem alterada. Mas existem factores que podem influenciar a actividade enzimtica, como: - Concentrao da enzima; - Concentrao do substrato; - pH; - Temperatura. Se todos os factores que influenciam a actividade das enzimas forem ptimos, quanto mais enzimas houver disponveis, mais rapidamente ocorrer a reaco. Da mesma forma que na situao anterior, se existir muita concentrao de enzima disponvel e a concentrao de substrato for baixa, a reaco ir ocorrer na mesma, mas com um aumento de velocidade no inicio, devido s aco das enzimas, e se no houver aumento da concentrao do substrato, o rendimento e a velocidade da reaco, sofrer um decrscimo. Cada enzima tem um pH ptimo. Algumas actuam melhor perante um pH mais baixo (cido), outras perante um pH mais alto (bsico). No entanto existem extremos, se a actividade estiver sujeita a um valor fora dos extremos do pH ptimo, a actividade da enzima baixa muito, podendo at ficar inactiva. Quando o pH, e os outros factores so ptimos, a reaco catalizada por uma determinada enzima, aumenta at ao mximo a sua velocidade.

H enzimas que so favorecidas pelo o aumento ou a diminuio da temperatura, mas tal como no pH, existem certos extremos, que quando ultrapassados, podem fazer com que a enzima fique inactiva ou que o seu centro activo fique alterado. Nesta actividade experimental os factores que influenciam a actividade enzimtica nos quais nos vamos concentrar, na temperatura e no pH.

Material
Fgado (fresco, cozido e congelado) Perxido de hidrognio (H2O2) cido clordrico (HCl) Hidrxido de sdio (NaHO) Tubos de ensaio Suporte para tubos Pinas Bisturi Pipetas Almofariz Areia fina Banho-maria (37c)

Procedimento
1. Numeramos os 6 tubos de ensaio. 2. Adicionamos 2cm de H2O2, aos 6 tubos. 3. Ao tubo 2, adicionmos um pouco de fgado fresco (previamente esmagado no almofariz com auxilio da areia). 4. Ao tubo 3, adicionmos um pouco de fgado cozido. 5. Ao tubo 4, adicionmos um pouco de fgado congelado. 6. Nos tubos 1, 2, 3 e 4 introduzimos um fsforo aceso. 7. Colocmos os tubos 3 e 4 em banho-maria a 37C, durante 10 minutos. 8. Introduzimos novamente, nos tubos 3 e 4 um fsforo aceso. 9. Ao tubo 5, adicionmos quatro gotas de HCl e um pouco de fgado fresco.

10. Ao tubo 6, adicionmos quatro gotas de NaHO e um pouco de fgado fresco. 11. Verificmos em qual dos tubos havia maior libertao de oxignio ao
introduzirmos em cada um fsforo aceso.

12. Registmos resultados.

Resultados
Tubo 1 2 Procedimento 2cm de H2O2 Observaes No foram registadas alteraes.

Ocorreu libertao de oxignio, o que 2cm de H2O2 + fgado significa, que temperatura ambiente, fresco a enzima no alterada. Houve libertao de oxignio, mas a reaco foi menos intensa que no tubo 2, o que quer dizer que com 2cm de H2O2 + fgado temperaturas mais elevadas a enzima cozido no cataliza nas melhores condies, podendo levar a uma inibio irreversvel. Aps 10 minutos em A reaco manteve-se baixa. banho-maria a 37C A libertao de oxignio, tal como toda a reaco foi muito mais intensa e 2cm de H2O2 + fgado rpida do que nos outros tubos, alm congelado disso a temperaturas baixas a inibio reversvel. Aps 10 minutos em A reaco baixou, devido ao aumento banho-maria a 37C da temperatura. Verificou-se a degradao do fgado, o 2cm de H2O2 + 4 que podemos concluir que um pH gotas de HCl + fgado muito baixo, no ajuda a aco da fresco enzima e como tal pode provocar uma inibio irreversvel. 2cm de H2O2 + 4 No ocorreu reaco, ou seja, um pH gotas de NaHO + muito elevado tambm no favorece a fgado fresco actividade da enzima.

Discusso
A experincia ocorreu sem problemas ou dificuldades durante todo o procedimento.

No tubo 1, no se registaram resultados por ser o tubo de controlo. Interpretando as diferenas entre os tubos 2, 5 e 6, podemos verificar que, ao colocar um fsforo aceso no interior do tubo 2 ocorreu uma reaco normal com libertao de oxignio, enquanto que no tubo 6, ao se adicionado um meio bsico, no ocorreu reaco alguma devido inibio da enzima por aco do pH. No tubo 5 houve uma degradao rpida do fgado, por aco do pH, pois neste foi adicionado um meio mais cido o, que levou tambm inibio da enzima. Em relao ao tubo 2, tambm nos tubos 3 e 4 foi introduzido um fsforo aceso onde, como era de esperar ocorreu uma reaco, ou seja houve libertao de oxignio. No tubo 3, a reaco ocorrida foi menos intensa que no tubo 2, isto devido temperatura que era mais elevada, pois assim a enzima no catalisa porque fica inibida. No tubo 4, ocorreu uma reaco foi a mais intensa e a mais rpida de entre todos os tubos, apesar da temperatura ser extrema (neste caso era muito baixa) a enzima pode ficar inibida de catalizar, mas nestas condies essa inibio pode ser reversvel.

Concluso
Com esta experincia podemos concluir: a enzima presente no fgado actua melhor a uma temperatura ambiente e em meios em o pH seja ou tenha uma margem neutra. Perante um aumento de temperatura, a energia das molculas tambm vai aumentar, fazendo aumentar o nmero de molculas com energia de activao suficiente para fazer parte das reaces qumicas. No entanto, se o aumento da temperatura foi muito elevado, tambm a energia molecular aumentar, e as ligaes que se estabelecem tendem a quebrar-se, conduzindo a uma desnaturao da enzima provocada por uma inibio irreversvel (e.x.: tubo 3). Numa diminuio da temperatura, a enzimas tambm ficam inibidas de catalizar, no entanto essa inibio reversvel (e.x.: tubo 4). Ou seja, a uma temperatura ambiente, essa inibio no ocorre, podendo a enzima catalizar normalmente. Quando o pH muito baixo (cido), altera a distribuio das cargas elctricas o que vai tornar a enzima inactiva (e.x.: tubo 5). O mesmo acontece quando o pH muito elevado (bsico), pois o meio em que as enzimas esto inseridas, interfere com a conformao do centro activo, levando assim desnaturao da enzima, podendo em ambos os casos tornar-se permanentemente inactivas (e.x.:tubo 6). Sendo assim um pH neutro faz com as enzimas catalizem, sem que fiquem inibidas. E o mesmo acontece para a temperatura. Estes factores alteram-se de enzima para enzima.

Bibliografia
Livros: Amaral, C.; Gonalves, S.(2003). A Vida ao Microscpio Bloco I - Tcnicas Laboratoriais de Biologia. Porto Editora. Porto Matias, O.;Martins, P.(2006). Manual de biologia de 12 ano. Areal Editores.Porto