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HOSPITAL SAN NICOLAS EMPRESA SOCIAL DEL ESTADO VERSALLES VALLENit 8919010619

MANUAL DE HEMATOLOGIA CLINICA

PAGINA - 1CODIGO: LAB 504 VERSION 1

Objetivo: Brindar una herramienta que permita realizar los procedimientos tcnicos de laboratorio uniformemente, de manera que se eviten desviaciones en su desarrollo y ayuden al medico al diagnostico clnico.

Responsable: bacteriloga y auxiliar de laboratorio HEMOGLOBINA Materiales:

Tubos de ensayo Sangre anticuagulada con EDTA Estndar Reactivo de Drabkin Pipeta automtica

Equipos: BTS 310 Biosystem Cmara de neabawer Microscopio

Procedimiento. 1. Homogenizar bien la muestra mediante agitacin suave. 2. Pipetear 2.5 ml de reactivo de Drabkin a un tubo de ensayo.
Elaborado por: Revisado por: Aprobado por Lorena Rosero Rivera Fecha Fecha Fecha

NOS GUSTA LA GENTE Direccin: Calle. 9 No. 1-22 TELEFONOS: W (2) 2213022 tel. W (2) 2213161 Pag. www.hospitalsannicolas.org E-mail: eseversalles@hotmail.com

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3. Mediante la pipeta aadir 10 ul de sangre homogenizar esta mezcla girando el tubo por inversin y esperar un mnimo de 10 minutos para que se produzca la hemlisis total y se complete la transformacin. 4. Leer la absorbancia de la solucin en el equipo BTS en la localidad (12) a 540 nm 5. Teniendo en cuenta el resultado arrojado en la pantalla del equipo se procede a anotar en la carpeta de hematologa, y despus se pasan al computador. Valores de referencia: Recin nacidos: 16.5-19 g/dl Nios de 1-5 aos: 11.5-13.5 g/dl Mujer en edad frtil: 12-14 g/dl Mujer embarazada: 11.5-13 g/dl Hombre adulto: 14-16 g/dl HEMATOCRITO Procedimiento. 1. Tomar un tubo de microhematocrito y llenar las 2/3 partes de sangre por capilaridad 2. Limpiar el exceso de afuera del microhematocrito y despus sellarlo con plastilina. Siguiendo el nmero de orden de la muestra colocarlo en la microcentrfuga durante 5 minutos. 3. Retirarlo tan pronto la centrifuga pare y proceder a leerlo cuadrando la terminacin sellada en el inicio del paquete globular con el cero de la tabla y el plasma con el 100.

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4. Una vez realizado este procedimiento se lee en la parte superior del paquete de glbulos rojos, sin tener en cuenta la capa de glbulos blancos. Valores de referencia: Recin nacidos: A los 3 meses. Al ao de edad: Entre 3 y 5 aos: De los 5 a los 15 aos: Hombre adulto: Mujer adulta: 44-56 % 32-44 % 36-41 % 36-43 % 37-45% 40-54 % 37-47%

RECUENTOS DE LEUCOCITOS Materiales: Cmara de Newbauer Laminillas Pipeta automtica Puntas amarillas

Equipo: Microscopio

Procedimiento 1. Tomar en un tubo 380 microlitros de reactivo de Turk y 20 Ul de sangre (dilucin 1/20) reposar por lo menos 3 minutos. 2. Descartar la primera gota y montar en la cmara de Neubauber

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3. Contar con el microscopio en el objetivo de 10X en los cuatro cuadrantes de los extremos de la cmara y realizar la siguiente frmula: No de leucocitos/mm3 = n x 20 x 10 = n X 50 4 n: numero de leucocitos contados en los 4 cuadrantes 20: factor de dilucin usada 10 correccin por profundidad de la cmara 4: numero de cuadrantes contados. 4. Teniendo en cuenta el resultado arrojado proceder a diligenciar el formato de hematologa, llenando la casilla Recuento de leucocitos. Valor de referencia: Adultos: Recin Nacidos: Nios: 4.500 a 11.500/ mm3 10.000 a 25.000/mm3 hasta 14.000/mm3

RECUENTO CORREGIDO DE LEUCOCITOS: Los lquidos diluyentes usados para el recuento de leucocitos destruyen o hemolizan los glbulos nucleados. Los normoblastos no son destruidos y al hacer el recuento de leucocitos es imposible diferenciarlos en el recuento en cmara de Newbauer. Cuando el nmero de leucocitos esta aumentado su presencia se pone de manifiesto en el extendido y por lo tanto se procede a corregir el recuento de leucocitos. Si al examinar un extendido sanguneo se encuentran menos de 10% normoblastos, se informa en el reporte del paciente como el nmero de normoblastos contados por cada 100 leucocitos, si el nmero de normoblastos es mayor de 10% del recuento total se realiza la siguiente frmula:
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Rto. Corregido de Leucocitos:

No. de leucocitos contados X 100 100 + No de normoblastos contados

RECUENTO DIFERENCIAL 1. Se realiza un frotis de sangre perifrica de la siguiente manera: 2. Marcar la lmina a utilizar con un marcador registrando el nmero de orden, aplicar una gota de sangre (10 microlitros) en la parte superior de la lmina (2 cm despus del borde). 3. Colocar un portaobjetos sobre otro formando un ngulo de aproximadamente 45 grados y desplazarlo suavemente hacia atrs hasta que alcance la gota de sangre. 4. Esperar a que uniformemente. por capilaridad toda la sangre se distribuya

5. Deslizar suavemente y a velocidad moderada un portaobjetos sobre otro en sentido longitudinal, hasta que la gota de sangre quede bien extendida sobre la superficie del primer portaobjetos 6. Dejar secar durante dos minutos y colorear con el colorante de Wright Coloracin de Wrigth En las gradillas de coloracin colocar los extendidos en plano vertical con la extensin de sangre hacia arriba Aadir a la totalidad de la placa el colorante de Wright previamente filtrado, luego agregar el Buffer. Soplar la placa para diseminar el buffer hasta que se observe una pelcula verde metlico por ltimo dejar esta mezcla por 5 min. Remover el colorante con agua entre 5 y 30 segundos para evitar precipitacin del colorante sobre la superficie del extendido
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Secar y quitar el colorante del dorso de la placa


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7. leer la placa en el microscopio utilizando el objetivo de 100 X con aceite de inmersin, luego clasificar y contar los leucocitos hasta 100 utilizando un contador automtico. 8. Teniendo en cuenta el resultado arrojado proceder a diligenciar el formato de hematologa, llenando en la casilla recuento diferencial los Resultados de linfocitos, neutrofilos, eosinfilos, monocitos y otros. Valores de referencia Neutrofilos: 55 70 % Linfocitos: 30 40% Monocitos: 0-5% Eosinfilos: 0 5 % Basofilos: 0 1% Bandas: 0-3%

RECUENTO DE PLAQUETAS Materiales: Cmara de Neubauer Colorante de Rees ecker Pipeta automtica Cmara hmeda Laminillas Puntas amarillas

Equipo: Microscopio

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Procedimiento: 1. Se toman 990 ul de Rees Ecker y se colocan en un tuvo de vidrio, luego se pipetea 10 landas de sangre anticoagulada con EDTA en le mismo tubo, Se mezcla bien y se deja en reposo aproximadamente durante 5 minutos para permitir la lisis total del resto de las clulas, 2. Se montan en la cmara de Neubauer y se deja en reposo por otros 15 minutos en cmara hmeda para evitar que la muestra ya montada se vaya a secar. 3. Se leen con objetivo de 40 X contando las plaquetas que se encuentran el cuadrante de rojos ubicado en el centro que tienen 25 cuadritos, luego el resultado obtenido se multiplica por 1.000 VALOR DE REFERENCIA: 150.000 - 450.000 / mm3

VELOCIDAD DE SEGMENTACION DE GLOBULOS ROJOS Materiales: Pipeta de Wintrobe Cnula metlica Soporte Cronometro

Procedimiento: 1. Mezclar por inmersin la muestra, tomar una cnula y llenar la pipeta de Wintrobe de sangre hasta la marca de cero (no deben quedar burbujas), colocarla en la gradilla de forma vertical en un soporte, teniendo en cuenta que este recta, despus de esto marcar inmediatamente el cronometro.
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2. Proceder a leerla a la hora, la unidad de medida utilizada es en milmetros/hora de acuerdo a la velocidad con que baje los glbulos rojos. 3. Anotar los resultados obtenido en la carpeta de hematologia en su respetiva casilla. Valores de referencia:
CLASE Nios Mujeres adultas Hombres adultos EDAD 0-15 aos 17-70 aos 17-70 aos VR (mm/hora) 0-15 0-20 0-10

PRUEBAS DE COAGULACION TIEMPO DE SANGRIA Evala el funcionamiento y nmero de plaquetas, as como la contractibilidad capilar. Muestra: Sangre capilar del lbulo de la oreja.

Materiales: Lanceta estril desechable Papel Filtro Torundas de algodn Guantes Cronmetro
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Procedimiento: 1. Explicarle al paciente el procedimiento. 2. Desinfectar la zona a puncionar. 3. Con la lanceta puncionar el lbulo de la oreja. 4. Recoger las gotas de sangre en el papel filtro cada 30 segundos hasta que cese el sangrado. 5. Al recoger las gotas de sangre se debe tener cuidado de no tocar la piel. 6. Registrar el tiempo desde que se punciona hasta que cesa el sangrado. Valores de referencia 1 a 4 minutos.

PT (TIEMPO PROTROMBINA) Evala la va extrnseca de la coagulacin, esta determinacin se aplica en casos como: Estudios de rutina en anlisis prequirrgicos. Detectar alteraciones en uno o ms de los factores involucrados en la va extrnseca. Control de la teraputica con anticoagulantes orales.

Muestra: Plasma obtenido de sangre venosa anticoagulada con citrato de sodio 3.8% Materiales Tubos de ensayo
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Citrato de sodio 3.8% Jeringas desechables Torundas de algodn Soluplastin (tromboplastina clcica) Bao Mara Cronmetro Pipetas

Procedimiento 1. Incubar el plasma a analizar de 2 a 3 minutos. 2. Incubar 200ul del reactivo a 37C durante 1 minuto. 3. Adicionar 100ul de plasma incubado y disparar el cronmetro simultneamente. 4. Mantener el tubo dentro del bao Mara y cerca de una fuente de luz. 5. Previo al tiempo estimado de coagulacin, sacar el tubo del bao, inclinar suavemente una o dos veces por segundo. 6. Parar el cronmetro inmediatamente se evidencie el coagulo. Valores de referencia: 10 - 14 segundos.

PTT (Tiempo de Tromboplastina Parcial Activada) Es una prueba sensible a la deficiencia de factores de la va intrnseca de la coagulacin as como la presencia de inhibidores en el plasma. Esta prueba se utiliza como control en pacientes anticoagulados con heparina. Muestra: Plasma obtenido de sangre venosa anticoagulada con citrato de sodio 3.8%
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Materiales Tubos de ensayo Citrato de sodio 3.8% Jeringas desechables Torundas de algodn Soluplastin (tromboplastina clcica) Bao Mara Cronmetro Pipetas

Procedimiento 1. Incubar el Cloruro de calcio a 37C. 2. En un tubo de ensayo se coloca 100ul de reactivo y 100ul del plasma a analizar, mezclar e incubar 3 minutos a 37C. 3. luego agregar 100uL de Cloruro de Calcio disparando simultneamente el cronmetro. 4. Agitar brevemente para homogenizar, mantener el tubo dentro del bao unos 25 segundos. 5. Sacar el tubo del bao e inclinarlo una vez por segundo y detener el cronmetro en el momento de la formacin del coagulo. 6. Registrar el tiempo de coagulacin. Valores de referencia: 33 a 48 segundos.

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