PRCTICAS # 5 CROMATINA X DE MUCOSA BUCAL

OBJETIVO

Observar y diferenciar entre hombres y mujeres la aparicin de corpsculos de BAAR a partir de muestras de mucosa bucal y de esta manera identificar los cromosomas X inactivos en las mujeres. INTRODUCCIN En el ser humano el sexo femenino est dado por el complemento 46 XX y el masculino por el 46 XY. El corpsculo de Barr o cromatina "X" es un cromosoma inactivo que puede verse en algunas clulas en interfase como una masa de heterocromatina adherida a la membrana nuclear. En los leucocitos polimorfonucleares este cromosoma inactivo se observa en forma de "palillo de tambor" que emerge de uno de los lbulos del ncleo. En algunas alteraciones cromosmicas se ve afectado el cuerpo de Barr, como por ejemplo, en el sndrome de Turner (45 X0) se tiene individuos con fenotipo femenino y sin corpsculo de Barr; y en cambio, en el sndrome de Klinefelter (47 XXY) son individuos con fenotipo masculino y con cromatina "X". En la actividad experimental, por medio de un mtodo fcil y rpido se estudia la "cromatina sexual" efectuando un frotis de la mucosa bucal, haciendo un squash de clulas y recurriendo a su tincin con colorantes bsicos. Por otro lado, se obtiene sangre capilar con una lanceta y se realiza un frotis que se tie con colorantes especficos para muestras de sangre, observando despus al microscopio para localizar la cromatina X.1 Cromosomas sexuales En todos los mamferos la hembra es homogamtica y sus cromosomas sexuales (XX) son idnticos y se comportan como homlogos. En cambio, el macho es heterogamtico y sus cromosomas sexuales (XY) son diferentes en tamao, morfologa y contenido gnetico. La evolucin ha influenciado el proceso de diferenciacin cromosmica ya que originalmente ambos cromosomas eran homlogos. El dimorfismo se estableci a expensas de un solo miembro del par que acumul los factores necesarios para el desarrollo del sexo heterogamtico (cromosoma Y en mamferos). En los ltimos aos se han reconocido genes en el cromosoma Y que participan en crecimiento, maduracin sea, desarrollo testicular y espermatognesis. Sin embargo, el hallazgo ms trascendente es la localizacin del gene responsable de la diferenciacin testicular (SRY) en la porcin distal del brazo corto de este cromosoma. Se ha demostrado en humanos que ambos cromosomas comparten una regin homloga en el extremo distal de sus brazos cortos denominada regin pseudoautosmica. En el cromosoma no se han observado cambios filogenticos importantes y se ha preservado en las diferentes especies. Sin embargo, uno de los fenmenos ms importantes en gentica evolutiva es la inactivacin de uno de los cromosomas X en individuos femeninos (XX), proceso que mantiene el equilibrio gnico en ambos sexos al igualar el contenido de ADN cromosmico activo. La inactivacin del cromosoma X resulta en la formacin del corpsculo de Barr o cromatina X que se observa en los ncleos de clulas femeninas en interfase. En 1961, Lyon postul una hiptesis en la que sugiere que tempranamente en la embriognesis uno de los cromosomas X en la mujer se inactiva haciendo que la relacin autosomas-sexocromosomas sea igual que en el hombre. En las clulas somticas, el proceso de inactivacin ocurre al azar y es clonal pudiendo inactivarse el X materno o paterno. No obstante, una vez que se establece este evento, todas las clulas descendientes tendrn el mismo cromosoma X inactivo. Adems del mecanismo de compensacin gnica entre individuos XX y XY, el proceso de inactivacin ocurre sobre los cromosomas X supernumerarios generados por errores mitticos o meiticos. En aos recientes se han reconocido los factores bsicos que determinan la inactivacin del X en el embrin femenino. Inmediatamente despus de la fertilizacin ambos cromosomas X son eucromticos y la primera inactivacin del X, que ocurre en el trofoectodermo, es no al azar y afecta preferentemente al X paterno. Este mecanismo de inactivacin, no al azar, se mantiene hasta el estadio embrionario de blastocisto tardo cuando se inicia la inactivacin al azar. Sin embargo, la inactivacin no es al azar cuando uno de los X es estructuralmente anormal y en estas circunstancias se preserva el X normal activo en la recin nacida. Es importante sealar que durante la meiosis se requiere que ambos cromosomas X estn activos para asegurar la diferenciacin ovrica y la gametognesis, lo que implica la reactivacin del cromosoma X que previamente haba sido inactivado en las clulas germinales. En cambio, la inactivacin del nico X presente en el espermatocito primario es necesaria para la espermatognesis normal ya que la presencia de un cromosoma X activo parecera interferir con la meiosis.2

Corpsculos de Barr Corpsculo de Barr: Masa de cromatina intensamente teida que aparece en la periferia de los ncleos de las clulas somticas femeninas durante la interfase. Representa el cromosoma X inactivado y condensado Y.3 En el ao de 1944 Barr observ un pequeo cuerpo de cromatina en las clulas de gato hembra, este corpsculo no se observaba en las clulas del macho de la misma especie. A partir de este hecho se formul la pregunta del porqu de esta diferencia, extendi su estudio a otro tipo de clulas y de otras especies. En la actualidad se conoce que en la especie humana las clulas de una hembra normal contienen un cuerpo situado junto a la membrana nuclear, que se tie de oscuro, llamado cuerpo de Barr o cromatina sexual, que en este caso representa a uno de los dos cromosomas sexuales X de la mujer. La cromatina del cuerpo de Barr no existe en las clulas de los machos normales, aunque se ha observado que las clulas de individuos con constituciones anormales de cromosomas sexuales. Por ejemplo, un individuo con cromosomas sexuales XXY, presenta un cuerpo de Barr de cromatina sexual, una hembra X0, no tiene ningn cuerpo de Barr, pero una hembra XXX presenta dos cuerpos.4 MATERIAL 6 portaobjetos 6 cubreobjetos Torundas de algodn 12 Hisopos Solucin de aceto-orcena Alcohol al 95% Hipoclorito de sodio al 10% Microscopio

PROCEDIMIENTO 1) Los portaobjetos limpios, colocados en alcohol al 95% se marcan con el cdigo del paciente y se marcan con las letras D o I indicando al lado al que pertenecen. 2) Se enjuaga la boca varias veces con agua 3) Con el hisopo se hace un raspado suave de la mucosa bucal y se desecha este primer material obtenido. 4) Se practica un segundo raspado suave sin lesionar la mucosa y se extiende sobre el portaobjeto procurando que el frotis no quede demasiado delgado. Rpidamente, para evitar que se seque la preparacin, se procede a la fijacin y a la tincin. 5) Sobre el portaobjetos que contiene el frotis de la mucosa bucal se deja caer 1 gota de solucin de aceto-orcena en el centro de la preparacin y se coloca un cubreobjeto. 6) Se coloca un papel filtro y sosteniendo este con la mano izquierda, se hace una ligera presin con el pulgar derecho de un extremo al otro del portaobjeto. Esta maniobra logra el aplastamiento de las clulas y la eliminacin del exceso de colorante. 7) La observacin de la preparacin debe hacerse de inmediato. RESULTADOS En mujeres se observaron claramente los corpsculos de BAAR los cuales son la expresin del cromosoma inactivo X de la mujer (ya que como ya sabemos la mujer tiene 2 cromosomas sexuales XX uno activo y uno inactivo), mientras que en el hombre no se observ ninguno ya que este sujeto no presenta cromosoma X inactivo y por lo tanto solo contiene sus respectivos cromosoma sexuales XY:

DISCUSIN DE RESULTADOS Se observaron tanto en un hombre como en 2 mujeres la presencia o ausencia de los corpsculos de Barr en los cuales en el hombre como normalmente debe ser no se observaron estos corpsculos debido a que no posee el cromosoma x inactivo o en su defecto no posee un cromosoma X adicional por lo que se podra decir que es un sujeto XY normal ya que si poseyera un cromosoma X adicional (si se hubiesen observado en el sujeto corpsculos de barr), presentara el sndrome de Klinefelter (47 XXY) lo cual indica a individuos con fenotipo masculino y con cromatina "X, pero en este caso como ya se mencion no fue as. En las mujeres si se observaron estos corpsculos lo cual expresa la inactivacin de uno de sus cromosomas X ya que la cromatina X o corpsculo de Baar es un cromosoma inactivo que puede verse en algunas clulas en interfase como una masa de heterocromatina adherida a la membrana nuclear y se observa como un pequeo punto adicional. CONCLUSIONES Uno de los fenmenos ms importantes en gentica evolutiva es la inactivacin de uno de los cromosomas X en individuos femeninos (XX), proceso que mantiene el equilibrio gnico en ambos sexos al igualar el contenido de ADN cromosmico activo. La inactivacin del cromosoma X resulta en la formacin del corpsculo de Barr o cromatina X que se observa en los ncleos de clulas femeninas en interfase y este cromosoma X en la mujer se inactiva haciendo que la relacin autosomas-sexocromosomas sea igual que en el hombre. En las clulas somticas, el proceso de inactivacin es clonal. No obstante, una vez que se establece este evento, todas las clulas descendientes tendrn el mismo cromosoma X inactivo. Adems del mecanismo de compensacin gnica entre individuos XX y XY, el proceso de inactivacin ocurre sobre los cromosomas X supernumerarios generados por errores mitticos o meiticos lo cual se reconoce como sndromes cromosmicos sexuales supernumerarios si es que hay cromosomas sexuales adicionales. REFERENCIAS

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http://www.ccs.net.mx/detalle.php?cve=565 http://www.drscope.com/pac/mg/b1/mgb1_p21.htm 3 http://www.sitiosespana.com/diccionarios/genetica/c.htm 4 www.ucol.mx/acerca/coordinaciones/cgd/DGEMS/archivos/mbiologia1.doc