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Uso del aceite de citronela de Java (Cymbopogon winterianus Jowitt) (Panicoidideae) como acaricida frente a la garrapata Boophilus microplus Canestrini (Acari:Ixodidae).
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MARTINS, R.M. ; GONZLEZ, F.H.D. 1 Departamento de Cincias Biomdicas do Centro de Cincias Biolgicas e da Sade da Universidade de Caxias 2 do Sul, R. Francisco Getlio Vargas, 1130, Caxias do Sul/RS, Brasil. CEP: 95070-560 Laboratrio de Anlises Clnicas Veterinrias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Rua Bento Gonalves, 9090, Porto Alegre/ RS, Brasil. e-mail: professormedina@terra.com.br

RESUMEN: En este trabajo son descritos dos experimentos in vivo de una nueva alternativa de control de la garrapata Boophilus microplus Canestrini. Fue utilizado el aceite esencial de la gramnea Cymbopogon winterianus Jowitt (Citronela de Java), aplicado puro en la lnea dorsal del animal (va pour on) o utilizado por va de aspersin del aceite diluido en alcohol en la proporcin de 1/10. Los resultados obtenidos indicaron que las dos alternativas de control fueron eficientes en el control del caro, no fueron txicas para los bovinos y pueden tornarse un tratamiento complementario para el control de cepas de garrapatas resistentes a los productos qumicos. An sin ser objetivo del trabajo, el tratamiento con Citronela de Java indic ser repelente de la Mosca del Cuerno de los bovinos (Haematobia irritans L.). Palabras clave: Aceite de citronela de Java, Cymbopogon winterianus, acaricida, garrapata, Boophilus microplus RESUMO: Uso do leo de citronela de Java ( Cymbopogon winterianus Jowitt ) (Panicoidideae) como acaricida frente ao carrapato (Boophilus microplus Canestrini) (Ixodidae). Neste trabalho so descritos dois experimentos in vivo de uma nova alternativa de controle do carrapato Boophilus microplus Canestrini. Foi utilizado o leo essencial da gramnea Cymbopogon winterianus Jowitt (Citronela de Java), aplicado puro na linha dorsal do animal (via pour on) e por via de asperso do leo diludo em lcool na proporo de 1/10. Os resultados indicaram que estas duas alternativas de controle foram eficientes no controle do caro, no foram txicas para os bovinos e podem se tornar em tratamento complementar para o controle de cepas de carrapatos resistentes a produtos qumicos. Mesmo no sendo objeto do trabalho, o tratamento com citronela de Java indicou ser repelente da Mosca do Chifre dos bovinos (Haematobia irritans L.). Palavras-chave: leo de citronela de Java, Cymbopogon winterianus, acaricida, carrapato, Boophilus microplus

INTRODUCCIN Los acaricidas comerciales empleados para controlar las infestaciones de Boophilus microplus Canestrini (Acari:Ixodidae), adems de no resolver definitivamente el problema, son tambin txicos para los bovinos y para el propio ser humano. Las prdidas pueden ser momentneamente disminuidas por el empleo de estos acaricidas qumicos, pero la resistencia del B. microplus ha sido una constante a lo largo de los aos (Nolan & Schnitzerling, 1986;

Kunz & Kemp, 1994; Benevides et al., 1999; Martins & Furlong, 2001). La resistencia ocurre por que genotipos resistentes son seleccionados por el uso inadecuado de los acaricidas. Estas caractersticas transmitidas a la descendencia, generan cepas resistentes a los acaricidas (Whitten et al., 1982). Por otro lado, Clark & Sanches (1983) relataron la intoxicacin de animales sometidos a consecutivos baos de acaricidas qumicos, que sumados al estrs

Recebido para publicao em 10/01/2006 Aceito para publicao em 03/03/2007

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fsico del tratamiento, predisponen los bovinos a otras enfermedades. Un control alternativo de esta garrapata fue buscada por algunos investigadores que defienden el control biolgico por hongos (Bittencourt et al.,1989) y bacterias (Brum et al., 1991) y tambin la utilizacin de inmunizaciones (Kemp et al., 1986), creacin de razas resistentes de bovinos (Penna, 1990), uso de formas hbridas estriles de garrapatas (Losburn & Knipling, 1982) y cultivo de pastos repelentes a las garrapatas (Sutherst & Wilson, 1986). En la bibliografa existen tambin algunas citaciones sobre el uso de extractos vegetales para control de las garrapatas. Encontramos citaciones sobre este tema, en trabajos de Porter et al. (1995), Johnson et al. (1997), Chungsamarnyart & Jansawan (1996), Williams & Mansingh (1996), Sivaramakrishnan et al. (1996), Vatsya & Singh (1997), y Williams et al. (1997). Los extractos de la gramnea citronela de Java (Cymbopogon winterianus Jowitt) (Andropogoneae: Panicoideae) han sido descritos en la literatura como controladores de hongos (Dikshit & Husain, 1984), nemtodos (Sangwain et al., 1985) e insectos colepteros y lepidpteros (Srivastava et al., 1988; Singh & Chaudhary 1988; Roychoudhury et al., 1989; Marimuthu et al.,1997). Ms recientemente, Alves et al. (2000) cita que la Mosca del Cuerno (Haematobia irritans Linnaeus), fue controlada por el uso de extractos de la Citronela de Java. Sin embargo, no fueron encontradas citas sobre el uso de extractos de esta planta en el control del B. microplus. La Citronela de Java es oriunda de Sri Lanka (antiguo Ceiln) y fue obtenida a partir de la seleccin de una variedad inferior en produccin de aceite, el Cymbopogon nardus Rendle (Virmani et al., 1979). La utilizacin de aceites esenciales para diversos fines teraputicos no es una prctica reciente (Ahmad et al., 1993). Para el tratamiento de parsitos de los animales, Banerjee (1997) presenta varias alternativas del uso de fitoterpicos. Para validar acaricidas qumicos, adems de las pruebas in vitro descritas por Drummond et al. (1973), se utilizan pruebas de establo, segn protocolo originalmente descrito por Roulston et al. (1968). Sin embargo, estos testes son muy caros y necesitan de animales sin previo contacto con la garrapata, lo que es muy raro de encontrar. El objetivo de este trabajo fue probar, bajo condiciones de campo, un producto natural y no contaminante del medio ambiente para controlar la infestacin de la garrapata B. microplus. Fue tambin objetivo del trabajo, saber si este tratamiento sera txico para los bovinos. Finalmente, esta investigacin busc una alternativa de escape para el fenmeno de resistencia de las garrapatas a los productos qumicos convenciona.

MATERIAL Y MTODO Aceite de citronela de Java El aceite de citronela de Java utilizado en los experimentos fue producido en los laboratorios de la Divisin de Aceites Esenciales del Instituto de Biotecnologa de la Universidad de Caxias do Sul, RS, Brasil. Las plantas para la extraccin fueron producidas en una finca del municipio de Santo Antonio da Patrulha/RS, Brasil. El mtodo de extraccin del aceite utilizado fue el de arrastre de vapor de agua con calderas automatizadas que permiten que la presin y la temperatura del vapor que entra en contacto con las hojas, puedan ser bien controladas. El agua utilizada fue previamente tratada evitando, no solamente la corrosin, sino tambin permitiendo que el aceite extrado mantuviera su pureza y caractersticas. Las principales caractersticas del aceite de Citronela de Java utilizado en cuanto a sus compuestos principales fueron: Citronelal (41,15%); Geraniol (17,90%) y Citronelol (17, 28%). La densidad relativa es de 0,881, el ndice de refraccin de 1,470 y el desvo polarimtrico de cero. Garrapatas y larvas de Boophilus microplus (Canestrini) Las larvas y teleoginas de B. microplus utilizados en esta investigacin procedan de bovinos estabulados e infestados con la cepa CPVDF, resistentes a productos organo-fosforados (Centro de Pesquisas Veterinaria Desidrio Finamor FEPAGRO /RS Brasil). Despus de la cosecha diaria por tres das, las teleoginas fueron transportadas al laboratorio y lavadas con una solucin de hipoclorito de sodio al 2,5% para prevenir contaminaciones bacterianas y fngicas, siendo escogidos individuos adultos, aparentemente saludables y del mismo tamao. Las teleoginas fueron encubadas a 27C con 70% de humedad para el desove y eclosin de las larvas, para posterior uso el los Experimentos. Experimentos Fueron utilizadas para los experimentos 60 bovinos hembras de raza mestiza europea, con 3 aos de edad y peso alrededor de 350 kg, con una desviacin estandar de 23 kg, los cuales fueron mantenidos en el campo durante todo los experimentos. Fueron hechos dos experimentos con la finalidad de observar la potencialidad acaricida del aceite estudiado. En el da cero, 60 bovinos fueron infestados con aproximadamente 20.000 larvas de B. microplus en cada animal. Las larvas eran oriundas de huevos previamente incubadas. En el da 20 los animales fueran tratados con Citronela de Java, como

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se describe posteriormente. En los animales se hicieron tomas de sangre en el da 14 y 28 con el objeto de hacer pruebas bioqumicas de funcin metablica. A partir del da 22 de la infestacin y en das alternados, las garrapatas encontradas en el cuerpo de los animales fueron contadas hasta el da 28. Este periodo fue elegido por ser, en el ciclo biolgico, el de ms grande nmero de caros en el animal. El conteo de las garrapatas fue hecho en caros con aproximadamente 0,5 cm o ms de largo en la mitad del cuerpo del animal y despus multiplicado por dos para estimarse el nmero total de parsitos en cada bovino. Los animales fueron marcados, divididos en dos lotes de 30 y sueltos en dos potreros distintos. Durante los experimentos y hasta 30 despus, los animales fueron acompaados para la observacin de alguna alteracin. Experimento I: Aleatoriamente, 15 animales del potrero 1 fueron tratados tpicamente con 40 mL de aceite puro de citronela de Java en la lnea dorsal de los animales (va pour on) en el da 20 despus de la infestacin. Otros 15 animales fueron tratados con el mismo volumen de placebo (aceite de girasol) y quedaron de control. Experimento II: Aleatoriamente, 15 animales del potrero 2 fueron tratados tpicamente con aceite de citronela de Java por va de aspersin en el da 20 despus de la infestacin. El tratamiento fue hecho con 2000 mL por animal (200 mL de citronela de Java y 1800 mL de etanol 95%) de forma que todo el cuerpo del animal fuera mojado. Otros 15 animales quedaron de control y recibieron el mismo volumen de tratamiento con placebo (aceite de girasol diluido en etanol 95% en la proporcin de 1:10). Pruebas Bioqumicas: Con los sueros sanguneos de los animales de los Experimentos I y

II, fueron hechas pruebas bioqumicas para detectar alguna posible alteracin heptica del animal, provocada por el tratamiento con el aceite de Citronela de Java. Fueron hechas pruebas para analizar albmina, aspartato transaminasa (AST), bilirrubina, colesterol, gama glutamil transferasa (GGT), protena total y globulinas. Estos testes detectan intoxicacin heptica del animal por uso de medicamentos (Kaneko et al.,1997. Las pruebas fueron realizadas en espectrofotmetro semiautomtico (Metrolab 1600, Argentina) utilizando tcnicas especficas de kits diagnsticos (Labtest, Brasil). Anlisis Estadstica De los Experimentos: Los datos fueran descritos por promedio y dosis patrn, con un presunto de igualdad en el conteo de las garrapatas (p>0,05). Los grupos de intervencin fueron comparados por anlisis de varianza para un criterio de clasificacin (ANOVA ONE-WAY) con el teste post-hoc de Tukey (Zar, 1996). El nivel de significancia usado fue = 0,05. Los datos fueran procesados con el auxilio del programa SPSS, versin 12.0. De las Pruebas Bioqumicas: Para los clculos estadsticos de las pruebas bioqumicas, fue considerado un grado mnimo de confiabilidad de 95% en el teste T de Student, con relacin a su control. Fueron analizadas muestras de sangre de los 60 animales de los Experimentos I y II. RESULTADO Los resultados de la accin acaricida del aceite de citronela de Java frente a la garrapata B. Microplus, utilizado por va tpica en la lnea dorsal del animal o por va de aspersin diluido en alcohol, se mostraran satisfactorios, cuando comparados a sus respectivos controles (Tabla 1). Todos los resultados fueran de p<0,001, de tal forma que los

TABLA 1. Nmero promedio de garrapatas por animal en los Experimentos I y II y su Desviacin Estndar.

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grupos fueran distintos entre si por el teste de posthoc de Tukey. Se observ que en el da 24 hubo un nmero ms grande de garrapatas en los animales tratados y controles, lo que es normal en el ciclo biolgico del caro, razn porque el conteo individual de las garrapatas fue hecho entre los das 22 y 28 despus de la infestacin. En este periodo, ocurri una diferencia significativa entre el conteo total de las garrapatas en los animales tratados en relacin a sus respectivos controles, indicando que los tratamientos con Citronela de Java, fueron eficientes

para el control de la garrapata B. microplus. Cuanto a las pruebas bioqumicas, los resultados demostraron que los metabolitos de los animales del Experimento I se encuentran dentro de la normalidad segn Kaneko et al. (1997) y que las nicas alteraciones observadas fueron una pequea disminucin en las concentraciones de colesterol (p = 0,049), protena total (p = 0,033) y globulinas (p = 0,041) de los animales tratados en comparacin a sus controles (Tabla 2). Estas alteraciones, sin

TABLA 2. Resultados promedios de metabolitos sricos de 30 bovinos del Experimento I, antes y despus de los tratamientos con citronela de Java (Experimento I).

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embargo, cuando comparadas con valores normales, no caracterizan alteraciones, indicando que el tratamiento tpico en la lnea dorsal no fue hepatotxico para los animales. En las anlisis de las muestras de sangre de los bovinos del Experimento II, los resultados

demostraran que tampoco hubo diferencias estadsticamente significativas entre los niveles de metabolitos de los animales tratados y los animales controles, indicando que el tratamiento tpico por aspersin en las dosis utilizadas, no fue hepatotxico para los bovinos (Tabla 3).

TABLA 3. Resultados promedios de metabolitos sricos de 30 bovinos del Experimento II, antes y despus de los tratamientos con citronela de Java (Experimento II).

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Tambin fue observado que en los animales tratados con el aceite de citronela de Java, no hubo la presencia de la Mosca del Cuerno durante la realizacin de los Experimentos y que por acompaamiento clnico, ningn animal tuvo enfermedad transmitida por las garrapatas hasta 30 das despus del inicio de los tratamientos. DISCUSIN La propuesta de la presente investigacin tuvo dos objetivos. El primero fue investigar la posibilidad del uso del aceite de citronela de Java, como un producto natural para el control del B. Microplus y el segundo fue buscar un tratamiento alternativo no txico para los animales y eficiente para controlar las cepas resistentes de este caro a productos qumicos convencionales. Los resultados demostraran que estos objetivos fueron plenamente alcanzados en las dos formas de tratamiento, o sea, por va pour on del producto puro o por va de aspersin del aceite diluido en alcohol en la proporcin de 1/10. Otra ventaja de este tratamiento alternativo es que permite una infestacin moderada de B. microplus (hasta 20 garrapatas por animal), y que por lo tanto puede conferir al animal una inmunidad natural contra las enfermedades transmitida por esta garrapata. Los animales tratados no enfermaron de Babesiosis o Anaplasmosis despus de los Experimentos. Los principales compuestos del aceite de citronela de Java (Citronelol, Citrinelal y Geraniol) parecen tener una accin sinrgica contra la garrapata, segn experimentos in vitro anteriormente descritos (Martins, 2006). Esta caracterstica no favorece la aparicin de nuevas cepas resistentes por tratarse de un conjunto de substancias con estructuras moleculares muy complejas. Esta caracterstica, segn Whitten et al. (1982), dificulta la seleccin de genotipos resistentes. Otro factor que posiblemente participe de este hecho es que la citronela de Java, por ser voltil y de rpida absorcin, tiene bajo poder residual lo que no es favorable al surgimiento de cepas resistentes ya que, segn Gonzales (2002), los productos con mayor poder residual son favorables a la seleccin natural de los individuos ms fuertes y una situacin de super poblacin de garrapatas, determina la aparicin de cepas resistentes a los acaricidas. El uso tpico del aceite de citronela de Java, tanto en la lnea dorsal del animal (va pour on) como la dilucin en alcohol del producto en la proporcin de 1:10, aplicada en forma de aspersin individual, adems de simples manejo, puede funcionar tambin como repelente de otros insectos como la Mosca del Cuerno, una vez que en nuestros experimentos los animales tratados con Citronela de Java no presentaran esta infestacin durante los experimentos. Alves et al. (2000) anteriormente

tambin describen esta observacin. Este hecho, sin embargo, no fue objetivo inicial de la presente investigacin, tratando-se de una observacin paralela. Los tratamientos con la citronela de Java no presentaran toxicidad para el hgado de los animales. Las pruebas bioqumicas no mostraron disminucin significativa de albmina, colesterol, protena total y globulinas as como tampoco mostraron un aumento significativo de AST, GGT o bilirrubina, indicadores de problemas de intoxicacin o dao heptico (Kaneko et al.,1997). Por otro lado, tratamientos que no erradican las garrapatas tambin son importantes, ya que para otros seres de la naturaleza, la garrapata est presente en su dieta, como es el caso de ratones, sapos, araas, hormigas, insectos y diversas aves silvestres, participando como importante fuente de protena. La erradicacin de las garrapatas por uso indiscriminado de acaricidas qumicos, puede quebrar este equilibrio, segn Gonzales (2002). Para que el aceite de citronela de Java pueda ser utilizado como acaricida en nivel de campo, falta todava un largo camino de investigacin. Deben ser estudiadas otras variables tales como efectos climticos, poder residual, posibles efectos en la gestacin, presencia del producto en la carne y en la leche, adems de ser probado frente a nuevas cepas de garrapatas resistentes a otros productos qumicos. La ventaja es que la citronela de Java, adems de poder tornarse una alternativa complementaria interesante para ser probada, tambin es degradable en la naturaleza y por lo tanto no debe contaminar el medio ambiente (Virmani et al. 1979). La propuesta de esta alternativa no pretende ser la solucin final, pero si un estudio nuevo que puede tornarse una forma til de tratamiento, especialmente en el surgimiento de cepas resistentes de garrapatas a los productos qumicos. Finalmente, el uso de la citronela de Java como fue propuesto en este estudio, es un acaricida con buenas posibilidades para ser usado en pequeas propiedades rurales, principalmente en fincas de ganado lechero con un pequeo nmero de animales y que no disponen de instalaciones especiales para tratamientos de inmersin o aspersin. Esta opinin est basada en el hecho de que los ganaderos de leche en Amrica del Sur, generalmente tienen este perfil (Fonte et al., 1998) y por no tener muchos recursos econmicos, buscan soluciones sencillas para sus problemas de sanidad animal. CONCLUSIONE 1a) El uso del aceite de Citronela de Java empleado en la lnea dorsal del animal (va pou ron) o por va de aspersin, es una alternativa natural, eficiente e indita para ser utilizado en el control del caro B. microplus, principalmente como tratamiento

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complementario frente a cepas resistentes a productos qumicos. 2a) El tratamiento con el aceite de Citronela de Java en las dosis utilizadas no fue hepatotxico para los bovinos. AGRADECIMIENTO Al Dr. Joo Ricardo de Sousa Martins por suministrar las cepas de garrapatas, al Dr. Augusto Cunha por suministrar los animales, al Veterinrio Claudio Chiminazzo y Sr. Juvenal Grigoleti por la ayuda en los trabajos de campo, a la Dra Luciana Serafini por suministrar el aceite de citronela de Java, al Dr. Mario Wagner por la ayuda con los clculos estadsticos y al Dr. Joo Carlos Gonzales por la ayuda con la bibliografa. REFERENCIA BIBLIOGRFICA
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