BASES DO REPARO DE LESES NO DNA E DOENAS GENTICAS PRODUZIDAS

MECANISMOS DE REPARO DE LESES: A PRESERVAO DA INFORMAAO GENTICA O papel biolgico desempenhado pelas molculas de DNA exige que elas possuam duas propriedades fundamentais: (i) de auto-replicao e (ii) de preservao da informao gentica. Para que o contedo informacional do DNA seja preservado e corretamente transmitido de gerao em gerao, indispensvel que haja fidelidade na replicao semiconservativa e que existam mecanismos de reparo de modificaes estruturais produzidas no material gentico por agentes fsicos, qumicos e biolgicos. Erros na replicao semiconservativa podem ocorrer espontaneamente, mas so bastante raros, dada a existncia de mecanismos capazes de impedi-los ou corrigi-los. Durante a formao das novas cadeias polinucleotdicas, alm das diferenas de afinidades das bases nitrogenadas (formao preferencial de pares entre adenina-timina ou entre citosina-guanina, a atuao seletiva da DNA polimerase evita grande parte dos erros de pareamento devido a sua capacidade exonucleoltica (funo editorial)). Outros mecanismos podem se expressar aps a replicao, por meio de enzimas capazes de remover bases nitrogenadas incorretamente incorporadas cadeia ou de degradar segmentos nos quais tenham erros. Para tal, indispensvel distino entre as hlices neossintetizadas e as pr-existentes, o que depende dos diferentes graus de metilao existentes entre elas. Quando persistem erros de pareamento aps a replicao, algumas enzimas entram em ao. As protenas MutS e MutL reconhecem os erros de pareamento e a protena MutiH corta o DNA nas seqncias 5GATC3 no metiladas (ou novas). Posteriormente a DNA polimerase copia o novo o trecho retirado pelo sistema Mut. A atuao conjugada destes processos faz com que a probabilidade de ocorrncia e/ou persistncia de um erro de pareamento seja bastante reduzida, da ordem de grandeza de 10-10, ou seja. de um nucleotdeo indevidamente inserido para cada 1010 nucleotdeos. Uma base nitrogenada incorporada erroneamente acarreta alterao do contedo informacional transmissvel s geraes subseqentes, constituindo a mutagnese direta. REPARO DE LESES Diversos agentes fsicos ou qumicos do meio ambiente e mesmo componentes biolgicos podem promover modificaes estruturais na molcula de DNA, englobadas sob a designao genrica de leso, cuja persistncia representa um obstculo manuteno dos processos bioqumicos intracelulares regulares. Assim fcil entender a importncia dos mecanismos enzimticos que atuam restaurando a integridade do genoma ou criando vias que permitam clula tolerar as leses, isto , manter suas funes mesmo sem a eliminao dos danos provocados no DNA. A no funcionalidade dos mecanismos de reparao conduz inativao da clula aps o seu tratamento com o agente fsico ou qumico ou, eventualmente, pode ocorrer modificao do patrimnio gentico, isto . podem surgir mutaes. Mas nem sempre os mecanismos de reparo atuam corretamente. Em alguns casos eles podem promover o desaparecimento da leso, com alterao do contedo informacional, o que caracteriza a mutagnese indireta. Os mecanismos de reparao do DNA, em geral, so dependentes dos produtos de diversos genes e se caracterizam por possurem vrias etapas. possibilitando vias alternativas, muitas vezes coexistentes e competitivas. REVERSO DIRETA DAS LESES Alguns tipos de leses podem ser revertidos diretamente mediante a ao de uma nica enzima. que desfaz a leso produzida, restaurando a integridade da molcula de DNA. Como exemplos de mecanismos deste tipo de reparao podem ser citados a fotorreativao e a remoo de grupamentos alquil. FOTORREATIVAAO Entre os fotoprodutos formados pelas radiaes UV germicidas, os dmeros de pirimidinas so os mais freqentes. sendo os responsveis pela inativao celular. A fotorreativao consiste na eliminao de dmeros de pirimidinas mediante exposio das clulas previamente irradiadas com UV germicida a novas irradiaes com UV ou luz visvel. O processo mediado pela enzima de fotorreativao ou fotoliase, que tem a propriedade de combinar-se, mesmo em ausncia de luz, com DNA contendo dmeros de pirimidinas. Quando o complexo enzima-substrato iluminado, ele se dissocia, sendo liberados o DNA reparado e a enzima. esta podendo atuar em outros stios nos quais ainda existam dmeros. A fotoliase age rompendo a ligao ciclobutano entre duas pirimidinas. Os

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comprimentos de onda mais eficientes para promover a fotorreativao situam-se entre 340 e 390 nm. TRANSFERNCIA DE GRUPAMENTOS ALQUIL Quando clulas so tratadas com agentes alquilantes, tais como, nitrosouria ou nitrosoguanidna, o DNA alquilado nas mais diversas posies. Em alguns casos, estas leses podem ser reparadas diretamente pela remoo dos grupamentos alquil. Em E. coli existem duas enzimas que reparam o DNA por transferncia direta do grupamento alquil: as protenas Ada e Ogt (O-6-metilguanina DNA metil transferases) codificadas pelos genes ada e aogt, respectivamente. A remoo dos grupamentos alquil das bases acarreta a inativao destas protenas. REPARAO POR EXCISO O isolamento de mutantes de E. coli B denominados Bs-1 e Bs-2, bastante sensveis s radiaes UV germicidas. levou proposio da existncia de um mecanismo de reparao independente da iluminao que seria deficiente nestes mutantes. Por esta razo, este mecanismo foi inicialmente denominado de reparao no escuro, sendo hoje conhecido como reparao por exciso ou reparao por exciso-ressntese que compreende as seguintes etapas: (i) reconhecimento e inciso: a primeira etapa do mecanismo de exciso de fragmentos da cadeia polinucleotdica, que relativamente inespecfica em relao natureza da leso, pois a enzima por ela responsvel identifica como substrato molculas de DNA que contenham distores produzidas por vrios tipos de leses. Assim, podem ser reconhecidos: dmeros de pirimidinas, produtos de adio de vrios compostos qumicos (tais como a mitomicina C e a psoralena), vrios adutos (inclusive a 6-4 timinacitosina). Em E. coli, a endonuclease responsvel por esta etapa codificada pelos genes uvrA, uvrB e uvrC, s sendo funcional se estes genes encontram-se sob a forma de seus alelos selvagens, e denominada de endonuclease UvrABC. Recentemente, foi mostrado que essa endonuclease capaz de produzir duas roturas na cadeia polinucleotdica, anterior e posteriormente leso. (ii) exciso e polimerizao: etapa seguinte do reparo e envolve a DNA polimerase que preenche as lacunas deixadas e que tambm tem o papel de excisar a leso. (III) ligao: a finalizao do reparo promovida pela polinucleotdeo ligase, que faz a unio do fragmento neossintetizado extremidade livre da cadeia pr-existente. Em clulas de mamferos, a endonuclease parece ser codificada por um nmero ainda maior de genes. Assim, a doena humana xeroderma pigmentoso (XP), que apresenta. entre outras caractersticas, elevada sensibilidade ao UV solar e alta incidncia de cncer de pele, admite oito grupos distintos de complementao. Uma vez que, nesta doena, a deficincia herdada geneticamente da atividade endonucleoltica, parece lgico admitir ser a enzima ativa o produto de, pelo menos, oito genes distintos. REMOO DE BASES NITROGENADAS Bases nitrogenadas lesadas pelo tratamento com um agente fsico ou qumico podem ser removidas pela atuao de N-glicosilases, capazes de romper a ligao entre a base e a desoxirribose gerando stios apurnicos ou apirimdicos (stios AP). REPARAO PS-REPLICATIVA A existncia na clula de dois ou mais exemplares de determinada seqncia informacional pode favorecer a manuteno de sua viabilidade aps tratamentos com agentes fsicos ou qumicos pela recombinao de fragmentos no lesados. O modelo de mecanismo de reparo fundamenta-se nas trocas de material gentico entre as molculas de DNA . Nesta situao, a protena RecA forma longos filamentos que envolvem as hlices do DNA promovendo a troca de fitas entre duas molculas de DNA. Devido a sua complexidade, a reparao recombinacional exige a atuao de varias protenas intracelulares, alm do produto do gene recA. Vias competitivas tambm parecem existir, dependentes de diversos genes. O fechamento das lacunas formadas durante o processo de reparo recombinacional realizado pela DNA polimerase 1. A etapa final do processo promovida, semelhana do que ocorre na reparao por exciso, pela polinucleotdeo ligase. REPARAO INDUTIVA Agentes fsicos ou qumicos podem provocar respostas celulares articuladas, mediadas por determinados sinais, e expressadas fenotipicamente pela desrepresso de um ou mais genes, que so transcritos em RNA mensageiro e traduzidos em protenas. Como exemplos de reparao indutiva tm-se

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as respostas adaptativas e as funes SOS. RESPOSTAS ADAPTATIVAS Quando clulas procariticas ou eucarticas so expostas a concentraes reduzidas (sub-letais) de determinados agentes qumicos, elas podem tomar-se mais resistentes a tratamentos posteriores com concentraes elevadas (letais) do mesmo agente. Este fenmeno, conhecido como reparao adaptativa, explicado pelo acmulo intracelular de uma ou mais enzimas capazes de eliminar leses provocadas no DNA pelo tratamento, reduzindo assim seus efeitos letais ou mutagnicos. Para que ela se expresse indispensvel que a clula possa sintetizar protenas aps o primeiro tratamento indutor. Em E. coli e em algumas outras espcies bacterianas, pelo menos duas enzimas acumulam-se aps o tratamento indutor. Ambas so capazes de promover a eliminao de leses provocadas no DNA por agentes alquilantes e, portanto, de reduzir a inativao celular e a mutagnese produzidas por estes agentes. A protena Ada. remove grupamentos alquil inseridos nas posies 0-6 da guanna, 0-4 da timina e da ligao fosfodister. No caso da remoo do metil da ligao fosfodister, a protena Ada sofre uma mudana conformacional, tomando-se um ativador de seu prprio gene, conduzindo sntese de milhares de molculas de Ada. O excesso de protena Ada conduz a desrepresso de outro gene, o alkA que codifica para a sntese da 3-metil adenina DNA glicosilase II (Tag II) que remove bases metiladas em diferentes posies. A resposta adaptativa tambm tem sido descrita aps tratamento com diversos agentes qumicos, inclusive o perxido de hidrognio, que atuam tendo como intermedirios as ERO. O gene oxyR codifica a protena OxyR, responsvel pelo aumento da resistncia celular ao perxido de hidrognio. 0 produto do gene oxyR um regulador positivo de pelo menos nove genes. A oxidao da protena OxvR o sinal para que haja a ativao da transcrio destes genes. Quatro das protenas OxvR-dependentes j foram identificadas: catalase, superxido dismutase, glutationa redutase e uma alquil hidroperxido redutase. FUNES SOS Em termos de reparo. particular importncia tem sido dada a um conjunto de funes celulares desreprimidas quando surgem leses no DNA, as chamadas funes SOS, cuja expresso dependente da existncia de alelos selvagens de dois genes: recA e lexA. O sistema de controle da expresso das funes SOS relativamente complexo, envolvendo as protenas RecA e lex. O modelo hoje admitido fundamentase nos seguintes princpios, todos j verificados experimentalmente, pelo menos em E. coli: (i) a protena LexA (o produto do gene lexA repressora de diversos genes, entre os quais encontram-se o prprio gene lexA, o gene recA, genes ligados a processos de reparao, genes ligados a outras funes celulares como a filamentao. etc., (ii) a protena RecA uma enzima multifuncional,. desempenhando diversos papis na clula (controle da recombinao gentica e da reparao ps-replicativa, por exemplo). Quando ocorre o sinal indutor (por exemplo, o surgimento de leses no DNA), algumas molculas desta protena passam ao estado co-proteoltico (co-protease RecA). Sua interao com a protena LexA induz a autoclivagem desta. Como consequncia, observa-se o aumento da quantidade intracelular das protenas RecA. LexA e dos produtos dos outros genes que estavam reprimidos por LexA, (iii) aps a eliminao das leses (e conseqentemente do sinal indutor), o nvel de protease RecA se reduz e a protena LexA. neste momento acumulada na clula, volta a reprimir os genes por ela controlados. A existncia em clulas de mamferos de funes anlogas s que acabam de ser descritas em bactrias constitui um dos pontos mais polmicos entre os foto e radiobiologistas. Diversos fenmenos foram observados e interpretados como uma forma de expresso de mecanismos induzidos de reparao do DNA em eucariotos, mas, em muitos casos. outras interpretaes so igualmente possveis. A hiptese da existncia de um mecanismo geral de controle de diversos genes em eucariotos bastante atraente, pois, se verificada experimentalmente, ela poderia justificar inmeros fenmenos da maior relevncia, entre os quais a prpria transformao neoplsica. As espcies reativas de oxignio esto relacionadas ao aparecimento de diversas respostas do sistema biolgico. Como voc se posiciona em relao ao consumo de uma dieta rica em alimentos com substncias oxidantes. Que tipo de dieta voc sugeriria um paciente com alguma doena sugestiva da participao e ERO. Com base no que voc estudou, discuta a importncia dos mecanismos de reparo de leses do DNA

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do ponto de vista dos procedimentos mdicos que empregam agentes qumicos e fsicos, assim como, ao fato dos seres vivos estarem expostos radiao natural. Identifique os principais radio e fotoprodutos formados na molcula de DNA e discuta as consequncias do mesmos.

LEITURA COMPLEMENTAR MECANISMOS DE REPARAAO E ALGUMAS DOENAS Em diversas doenas foi verificada a ocorrncia dr determinadas deficincias nos mecanismos de reparao de leses produzidas no DNA por agentes fsicos ou qumicos, devidas a erros hereditrios na sntese de uma ou mais enzimas. O xeroderma pigmentoso uma doena autossmica recessiva, que se caracteriza por elevada sensibilidade ao sol, hiperpigmentao, queratoses, grande incidncia de alguns tipos de cncer de pele, alm de freqentes alteraes da resposta imune, retardo mental, retardo no crescimento, etc. Clulas XP no reparam fotoleses por serem deficientes na endonuclease. Isso pode ser demostrado. Experimentalmente, adicionando a culturas destas clulas, a enzima codificada pelo gene denV do fago T4, o que toma possvel a evoluo normal do processo de exciso. Em alguns variantes da doena, o reparo por exciso normal, mas parece haver deficincia na reparao ps-replicativa, embora os sintomas clnicos sejam anlogos. A progeria ou sndrome de Hutchinson-Gilford caracteriza-se por envelhecimento bastante precoce, de tal forma que crianas portadoras desta doena aparentam se encontrar cm estado senil, sendo comum o aparecimento, na infncia, de sinais e sintomas devidos insuficincia coronariana. Foi proposto que, nestes pacientes, ocorreria impossibilidade de reparao de leses provocadas pelas radiaes ionizantes, sendo o envelhecimento acelerado pelos efeitos deletrios das radiaes ambientais, principalmente dos raios csmicos. Entretanto, esta hiptese ainda no foi confirmada A ataxia telangiectsica (AT) caracteriza-se por distrbios neurolgicos de origem cerebelar (dificuldades de coordenao motora, tremores, desordens da palavra, etc.), dilatao permanente dos capilares, arterolas e vnulas e deficincias imunolgicas. A incidncia de neoplasias bastante elevada, a morte ocorrendo. Usualmente, antes dos 20 anos de idade. Clulas de pacientes com esta doena so bastante sensveis s radiaes ionizantes e agentes alquilantes, o que tem sido interpretado como devido dificuldade para a reparao das roturas produzidas no DNA. Entretanto, o mecanismo ainda controvertido, pois as cinticas dos reparos por exciso e ps-replicativo parecem normais. A anemia de Fanconi caracteriza-se por severas deficincias na hematopoiese, mal-formaes sseas, retardo no crescimento e no desenvolvimento intelectual e pigmentao marrom da pele. A morte costuma ocorrer na infncia ou na adolescncia, muitas vezes por leucemia. Clulas de pacientes acometidos desta doena, embora aparentemente sejam proficientes em reparao ps-replicativa, so muito sensveis a agentes qumicos que provocam ligaes cruzadas, como por exemplo a mitomicina C. A sndrome de Bloom caracterizada por severos retardos no crescimento, eritema telangiectsico nas zonas expostas ao UV solar e elevada sensibilidade a esta radiao. As deficincias imunitrias e a alta incidncia de leucemias, so, quase sempre, as responsveis pela morte. O defeito no mecanismo de reparao ainda no foi identificado, embora clulas destes pacientes sejam muito sensveis a agentes alquilantes como o etil-metanossulfonato. A sndrome de Cockayne caracteriza-se por um desenvolvimento normal na infncia seguida de uma parada deste desenvolvimento fsico e mental, envelhecimento precoce e sensibilidade ao UV solar, embora no parea haver aumento da incidncia de neoplasias. As clulas destes pacientes so muito sensveis ao UV, embora o defeito nos mecanismos de reparao ainda no tenha sido detectado. interessante ressaltar que a incidncia destas doenas parece correlacionada com determinados grupos populacionais, uma vez que a ataxia telangiectsica freqente em Israel em judeus de origem marroquina, enquanto a sndrome de Bloom ocorre significativamente nos Estados Unidos, entre famlias judias oriundas de uma determinada regio da Ucrnia. Esses fatos favorecem a hiptese de que certos genes recessivos estariam relacionados com a potencialidade do desenvolvimento de uma dessas doenas.