Utilidade clnica da Citogentica Molecular Contempornea Resumo O desenvolvimento de microarray baseado em hibridizao genmica comparativa (array CGH) representa

um avano crtico novo em citogentica molecular. Esta nova tecnologia tem impulsionado uma convergncia tcnica entre o diagnstico molecular e citogentica clnica, questionou nossa compreenso ingnua da complexidade do genoma humano, revolucionou a prtica da gentica mdica, desafiou sabedoria convencional relacionada com as bases genticas de condies multifatoriais e espordicos, e est prestes a impactar todas as reas da medicina. O uso de tcnicas de citogentica molecular contempornea em pesquisa e diagnstico resultou na identificao de muitas novas sndromes, expandindo nosso conhecimento sobre o espectro fenotpica de sndromes reconhecveis, elucidado as bases genmicas de bemestabelecida condies clnicas, e refinada a nossa viso sobre mecanismos moleculares de algumas aberraes cromossmicas. Metodologias mais recentes esto sendo desenvolvidos, o que provavelmente levar a uma nova compreenso do genoma e sua relao com a sade e a doena. Introduo Histrico A era moderna da citogentica clnica geralmente pensado para ter comeado em 1956 com a observao Tjio & Levan que clulas humanas normais contm 46 cromossomos. Esta descoberta foi possvel em 1952 por Hsus preparao de pellets nuclear em uma soluo hipotnica que causou os ncleos a inchar, permitindo que os cromossomos a se espalhar. inspirador para pensar o quanto ns progredimos desde o comeos destes modestos, h 50 anos. Dentro de alguns anos desses avanos, descobertas foram feitas rapidamente na identificao de anomalias numricas especficas associadas com fentipos anormais: Em 1959, Lejeune e colegas de trabalho descobriu que a sndrome de Down foi causada pela trissomia do cromossomo 21, e em 1960, Patau, Edwards e colegas reconheceu que o que se tornou sua sndrome homnima so causadas por trissomia 13 e 18, respectivamente. Em 1960, Nowell descreveu um "cromossomo minutos" (o cromossomo Philadelphia) que foi encontrado de forma consistente em "leucemia granuloctica crnica", que Rowley mais tarde mostrou ser causada por uma translocao entre os cromossomos 9 e 22. Em 1970, Caspersson relataram que a Quinacrina mostarda causado cromossomos para exibir faixas claras e escuras ao longo de seu comprimento, assim inaugurando a era dos direitos humanos de bandas cromossmicas e tornando-se possvel determinar pontos de interrupo associados com translocaes e outras anormalidades estruturais na gentica humana. Dentro de alguns anos, Yunis descreveu um mtodo para estudar cromossomos humanos com alta resoluo, permitindo que cada vez mais sutis anormalidades do genoma humano serem descobertas e ligados a fentipos anormais especficos. Desde ento, melhorias progressivas em tcnicas de citogentica e a introduo de mtodos moleculares na forma de hibridizao fluorescente in situ (FISH) e hibridizao genmica comparativa baseada microarray (array CGH) revolucionaram este campo e estendeu suas aplicaes em muitas reas da medicina que no gentica mdica, embora seja aqui que a tecnologia microarray teve seu maior impacto. Em poucos anos, muitas novas sndromes tm sido descobertos, os fentipos dos j existentes foram ampliadas e uma nova apreciao da diversidade do genoma humano est agora a emergir. Citogentica contempornea molecular tambm est transformando outras reas da medicina: recentes aplicaes de alta densidade matrizes levaram identificao de alteraes genticas especficas em espordicos e supostamente condies multifatoriais como cncer, Alzheimer, autismo, e at mesmo doenas infecciosas. A Evoluo da Citogentica Contempornea Molecular Desde a sua criao, citogentica clnica tem sido uma parte integral da investigao de suspeitas de doenas genticas. O tipo de tecido estudado pode variar, dependendo da razo para a investigao, mas os padres caractersticos de bandas indicativas de cromossomos especficos so amplamente consistentes. Embora muitas aberraes so reveladas atravs de estudos de citogentica, anlise citogentica convencional no pode detectar rearranjos de segmentos genmicos menores de 35 milhes de pares de bases. Alm disso, o exame microscpico dos cromossomos no podem revelar a origem cromossmica de pequenos cromossomos marcadores supranumerrios (sSMCs) porque o seu tamanho limitado insuficiente para fornecer um padro caracterstico de bandas reconhecvel, no pode identificar

rearranjos sutis das regies subtelomricos, e no pode elucidar a complexidade de alguns rearranjos, especialmente em tumores slidos e leucemias. A introduo de FISH contornadas algumas das limitaes da citogentica tradicional e se tornou parte integrante de uma avaliao citogentica clnico abrangente. FISH permite a determinao do nmero e localizao de seqncias especficas de DNA, tanto em cromossomos metafsicos e em interfases, simplificando significativamente a preparao e avaliao das amostras. As aplicaes de FISH na prtica clnica incluem triagem de aneuploidias em amostras de pr-natal, em busca de microdelees no gene, avaliando rearranjos das regies subtelomricas em retardo mental inespecfico, e a definio de rearranjos do gene (os genes de fuso) em leucemias e linfomas. Normalmente, esses rearranjos so difceis ou impossveis de visualizar com tcnicas convencionais de faixas, devido ao seu pequeno tamanho ou alteraes indetectvel no bandeamento dentro dos segmentos alterados. A variedade de tipos de sonda pode ser usada em FISH para investigar segmentos especficos do genoma. Por exemplo, as sondas de seqncia nica (sondas single copy) so usados para identificar delees ou duplicaes associadas com sndromes gene contguo ou outras sndromes causadas por microrearranjos de locus nicos, repetitivas sondas de seqncia nica para cada centrmero so usados para identificar o nmero de cpias de cromossomos especficos ou para identificar a origem cromossmica de sSMCs, e sondas pintura toda cromossomo so teis para a caracterizao de translocaes ou outros rearranjos complexos, excluindo inverses. No entanto, o uso eficiente de FISH dita que o paciente ou apresenta caractersticas consistentes com uma sndrome clinicamente reconhecvel com uma etiologia cromossmicas conhecida ou demonstra um cariograma anormal que requer uma melhor caracterizao molecular (por exemplo, o cromossomo marcador). Isto porque as sondas FISH revelam ganhos, perdas, ou rearranjo de apenas os segmentos-alvo e no fornecem informaes sobre o resto do genoma. Assim, as anlises de FISH no detectam anormalidades distintas dos segmentos genmicos para os quais as sondas foram desenhadas e usadas. Alm disso, o laboratrio de citogentica clnica deve confiar pesadamente em direo clnica do mdico avaliar o paciente. Na maioria dos casos, as influncias do julgamento clnico determina a escolhade sondas para o estabelecimento de um diagnstico. Hibridizao genmica comparativa (CGH) representa uma variao da tecnologia FISH com a vantagem clara de revelar desequilbrios em todo o genoma. Em CGH, uma amostra de DNA extrado de um indivduo com caritipo, conhecido geralmente normal (controle) e em comparao com a amostra de DNA obtido a partir de um indivduo com um caritipo desconhecido ou um conhecido caritipo anormal (sujeito). Estas duas amostras de DNA so marcadas com fluorocromos diferencialmente diferentes e permitiu a cohibridizao em cromossomos metafsicos preparados a partir de um indivduo com caritipo normal. Diferenas entre as respectivas intensidades fluorescentes ao longo do comprimento de qualquer cromossomo indicados representam ganhos ou perdas de segmentos de DNA a partir da relao sujeito ao controle. Esta tecnologia tem muitas das mesmas limitaes encontradas em citogentica convencional, pois os substratos para a anlise de cromossomos metafsicos so bem condensado. Assim, a resoluo de CGH limitada ao de cromossomos metafsicos Mb-aproximadamente 5-10 para a maioria das aplicaes clnicas. Para alcanar o exame simultneo de mltiplos locus em uma resoluo maior, a tecnologia CGH foi modificado e aplicado a uma variedade de alvos de DNA fixado a um suporte slido. Matrizes foram construdas com uma variedade de alvos de DNA que variam de oligonucleotdeos (25-80 pb) para bactrias cromossomos artificiais (BACs) (8-20 kb). A principal vantagem de CGH array a capacidade de ao mesmo tempo, detectar aneuploidia, delees, duplicaes ou amplificaes de qualquer lugar representado no array. Em contraste, uma anlise de FISH com sonda em vrios cromossomos metafsicos pode detectar aneuploidia e microdelees, mas sua capacidade para detectar duplicidades limitado. Na verdade, duplicaes que envolvem segmentos menores do que 1,5 Mb pode ser rotineiramente perdidas at mesmo por FISH de ncleos interfsicos. Anlise de microarray pode identificar qualquer desequilbrio segmentar (aneuploidia, a excluso, a duplicao) dos locus representado no microarray, a resoluo limitada apenas pelo tamanho da pastilha utilizada e da distncia entre clones. Alm disso, o polimorfismo de nucleotdeo nico densa (SNP) baseado em arrays de oligonucleotdeos podem identificar mudanas de nucleotdeo nico, alteraes DNA pequena cpia (da ordem de alguns KB), e mudanas no DNA grandes cpia (at o nvel de aneuploidia do cromossomo inteiro); esta tecnologia oferece portanto, em uma nica plataforma, a funcionalidade que foi concedido apenas por seqenciamento (para detectar mudanas de base nica ou poucas centenas de alteraes nucleotdicas), Southern blotting (para detectar mudanas no DNA da ordem de 10-

40 kb), pulso de eletroforese em gel de campo (PFGE) (DNA para detectar mudanas na ordem de algumas centenas de kb para alguns MB), FISH (para detectar DNA alteraes na ordem de 35 kb ou maior), e anlise de cromossomos tradicional bandeamento G (para detectar mudanas no DNA maior que 5 Mb). O impacto da CGH na prtica da gentica mdica foi transformadora. Esta tecnologia j foi usada para expandir os fentipos das condies existentes, identificar os produtos recproca de anomalias conhecidas, determinar as leses genmicas em condies conhecidas, descobrir novas sndromes, apreciar a prevalncia de mosaicismo em indivduos com atraso de desenvolvimento, e determinar a freqncia inesperada e efeito de variantes no nmero de cpias em todo o genoma. Utilidade clnica da Citogentica Molecular Contempornea Gentica Expandindo os fentipos das condies existentes. "Sndromes reconhecveis" so reconhecveis, porque elas apresentam, para o mdico treinado, uma constelao de sinais e sintomas que despertam a suspeita suficiente para fazer o mdico a solicitar um exame que ir confirmar o diagnstico clnico.Este padro milenrio da prtica mdica cria um ciclo que inclui o paciente, o mdico e o laboratrio e, ao faz-lo, refora estas caractersticas reconhecveis, e faz o clnico mais confiante em seu/sua capacidade diagnstica. Essa abordagem de diagnstico, no entanto, ignora que leses moleculares idnticas podem resultar em caractersticas clnicas que so apenas parcialmente presente, ou s vezes completamente ausente, o estreito espectro de caractersticas que tornam reconhecveis a sindrome identificavel. Com a aplicao de CGH array para indivduos com atraso de desenvolvimento inespecfico (DD) e / ou retardo mental (RM), com ou sem dismrficos (DF), agora est claro que muitas microdelees reconhecvel e sndromes microduplicao tm um espectro muito mais amplo de apresentao clnica do que foi previamente apreciado. Essa variao no fentipo dos indivduos com leses idnticas moleculares no locus de interesse h muito tem sido reconhecido em algumas condies, como o DiGeorge/velocardio-facial sndrome (VCFS), mas uma nova apreciao desta variao clnica est emergindo de outros distrbios genmicos. Uma compreenso mais completa do espectro clnico cheio desses distrbios ser alcanado como o uso de CGH array em uma clnica que se torna mais prevalente e como correlaes desses achados clnicos com as leses genmicas so feitas. Recursos existentes, como o website pode facilitar apreciao generalizada de tais variabilidade fenotpica. Identificar os produtos recproca de condies conhecidas. Muitas sndromes de microdeleo reconhecveis so causadas por recombinao homloga nonallelic mediada (NAHR) flanqueando baixa cpia de repetio (LCR) seqncias. Este mecanismo prev que a prevalncia do produto e duplicao recproca na populao deve ser igual freqncia de excluso. No entanto, duplicaes no foram observados at muito recentemente, provavelmente porque, em geral, indivduos com duplicaes tendem a ter um fentipo mais suave do que aqueles com as excluses complementares, e o mais suave fentipo no pode levar a investigao clnica. A caracterizao recente dessas condies a duplicao e o pr-requisito para a investigao FISH de uma suspeita clnica faz a averigao dos indivduos com essas condies menos provvel pelas abordagens tradicionais. A introduo de CGH array em prtica clnica praticamente eliminou todos os entraves tcnicos da citogentica tradicional e FISH e permitiu que a deteco de tais condies com relao, mas no a independncia completado julgamento de diagnstico do mdico. Portanto, recentes opinies de pacientes com determinada disposio CGH mostrou que a freqncia dessas duplicaes muito maior do que at ento apreciadas. Como CGH torna-se o principal mtodo de teste, mesmo indivduos com DD leve / MR, a freqncia de microduplicaes e a sndrome microdeleo locus provavelmente aumentar. Determinar as leses genmicas em condies conhecida. CGH est provando ser um poderoso instrumento para a elucidao da etiologia genmica de condies conhecidas. A descoberta de um gene candidato para a sndrome CHARGE (defeitos cardacos, Atresia das coanas, Retardo do crescimento e/ou desenvolvimento, genitais e/ou alteraes urinrias e anormalidades do ouvido e surdez) fornece uma ilustrao do poder de CGH array para o estudo das doenas genticas que tm resistido a anos de investigao com mtodos tradicionais. Aps vrios relatos em que os investigadores vo digitalizados os genomas de CHARGE indivduos com CGH e anlise de microssatlites, Vissers e colegas hybridizaram linhas celulares a partir de dois indivduos com sndrome de CHARGE em um 1-Mb conjunto do genoma. Aps a confirmao de uma excluso ~ 5 Mb em 8q12 do cromossomo em um sujeito, com uma matriz de resoluo BAC ladrilhos, os autores hibridizaram o DNA de um indivduo com Sndrome de CHARGE e uma translocao aparentemente balanceada. Matriz CGH detectou um rearranjo complexo no ponto de interrupo 8q12, compreendendo duas eliminaes que se

sobrepunham a do sujeito excluso primeiro. Aps a determinao da regio de menor de 2,3 Mb de sobreposio (SRO), os autores selecionaram 17 indivduos com outras CHARGE, nenhum dos quais tinha no nmero de cpias mudanas. Seqenciamento dos nove genes do SRO revelou 10 mutaes em heterozigose no CHD7 nos 17 indivduos sem microdelees, sugerindo que a supresso ou mutao deste gene foi causador de CHARGE. Matriz CGH particularmente til no diagnstico de sndromes raras, porque relatrios isolados no so susceptveis de provocar um padro de malformao que justifiquem a suspeita clnica. Descobrindo novas sndromes. A descoberta de novas sndromes talvez o impacto mais dramtico contemporneo da citogentica molecular na prtica mdica atual. O uso de CGH array tem permitido a descoberta de muitas novas sndromes nos ltimos anos e revitalizou citogentica clnica. Essas sndromes foram identificadas atravs do uso de matrizes que foram construdos com base em caractersticas arquitectnicas especficas do genoma humano, so direcionados para reas especficas do genoma, tais como as regies pericentromrica, tem uma cobertura arbitrria do genoma, ou so direcionados para reas de importncia clnica suspeita. Independentemente de como essas matrizes foram construdas ou utilizadas, muitas novas sndromes ser descoberta como o uso de CGH array na clnica continua. Apreciando a prevalncia de mosaicismo em indivduos com atraso de desenvolvimento. Embora o efeitode mosaicismo no desenvolvimento embrionrio e resultado da gravidez no totalmente clara, os desequilbrios mosaico cromossmicas foram mostrados para afetar o desenvolvimento de embries in vitro pr-implantados. No entanto, a deteco de mosaicismo em apenas 5% de aneuplides abortos espontneos entre 60-20 semanas de gestao e em apenas 1-2% das gestaes viveis selecionados por amostragem de corinica vilosidades (CVS) indica que a incidncia de mosaicismo diminui atravs do primeiro e segundo trimestres da gravidez e ainda mais raro em nascidos vivos. Essa reduo dramtica no mosaicismo desde as fases iniciais do desenvolvimento embrionrio atravs dos estgios finais da gravidez clinicamente estabelecida sugere que existe uma seleo significativa contra mosaicismo. No entanto, a deteco de baixo nvel mosaicismo de anomalias cromossmicas clinicamente significativo permaneceu um desafio para testes de diagnstico citogentico convencional at o advento da CGH array. O primeiro estudo sistemtico de mosaicismo em um mosaicismo grande identificou em apenas 3% das clulas com base em contagens de metfase. Matriz CGH revelou uma prevalncia surpreendente de mosaicismo em populaes no selecionadas de indivduos que so encaminhadas para avaliao devido ao DD, MR, e DF, a freqncia de mosaicismo entre tais indivduos podem ser to elevada quanto 80-10%. Talvez o mais significativo que CGH no requer o estmulo de culturas de clulas por fitohemaglutinina (PHA), como classicamente feito em citogentica clnica, o que pode distorcer a porcentagem de clulas em mosaico e inibir a deteco de algumas anomalias mosaico por anlise cromossmica. Determinar a freqncia de variantes inesperadas nmero de cpias em todo o genoma. O uso de CGH array tem estabelecido que as variaes genmicas nmero cpia (CNV) so muito comuns e envolvem uma proporo surpreendentemente grande do genoma. Embora alguns desses CNVs provavelmente contribuem para a susceptibilidade a doenas comuns, tais como Alzheimer, autismo, cncer e glomerulonefrite, o significado maior parte permanece obscuro. O uso de CGH array em estudos de investigao clnica continuar a caracterizar e catalogar CNVs genmica em indivduos saudveis como uma base para avaliar as suas implicaes para fentipos de doena associada relevantes para as condies genticas e doenas complexas. O CNVs relatada at o momento esto documentadas no TCAG banco de dados (O Centro de Genmica Aplicada), que contm quase 4.000 cpia locus variante. No entanto, informaes sobre CNVs e suas implicaes clnicas permanece incompleta. Isto provavelmente devido a uma srie de fatores. Primeiro, a distribuio de tamanho de CNVs detectado depende da tecnologia utilizada (CNVs incio foram detectados por matrizes BAC e tendem a ser da ordem de aproximadamente 100 kb ou maior). Em segundo lugar, dadas as diferenas na freqncia de provveis CNVs especialmente em diferentes populaes, a variedade de CNVs diferentes observveis num dado estudo pode ser significativamente limitado pelo nmero e origem tnica dos indivduos examinados. Terceiro, a maioria das CNVs podem ser variantes raras, ocorrendo com uma freqncia do alelo menor <5%. Finalmente, o nmero de falsos-positivos e falso-negativos CNVs em diferentes estudos pode ser varivel, dependendo da metodologia, a qualidade da amostra, e na fonte de amostra. Doena Espordica Borrando a linha entre a definio de um teste de "molecular" e um teste "citogentico", citogentica contempornea tem causado a convergncia entre essas duas especialidades e tornou possvel a investigao e diagnstico de condies que foram anteriormente na provncia de um ou outro, mas raramente em ambos. Tem sido conhecido por mais de uma dcada que o que j foi pensado ser

uma condio mendeliana, e, geralmente, aceito que causada por mutaes de ponto ou pequenos rearranjos da ordem de poucos nucleotdeos de um nico gene, podem ser causadas por grandes rearranjos genmicos , s vezes to grande quanto uma megabases, que afetam o nmero de cpias de um ou mais genes contguos, tanto no segmento de DNA afetados e, por vezes, atravs de efeito de posio, em locus muito distante do segmento afetado. Alm disso, o que tradicionalmente considerado como "espordico" pode ser devido a um rearranjo cromossmico. As frequncias de acontecimentos de novo cromossmicos so ordens de magnitude maior do que mutaes pontuais espontnea e provvel que representam a esmagadora maioria das doenas "espordicos" devido a defeitos genticos. Alm disso, os mdicos devem ter essa conscincia da possibilidade de que muitas doenas espordicas podem ser causadas por alteraes cromossmicas e talvez caractersticas multifatoriais e complexas podem ser causadas ou facilitada por novas ou herdadas CNVs que esto agora detectveis com mtodos contemporneos citogentica. A aplicao da anlise de alta resoluo do genoma em pesquisa e laboratrios clnicos descobriu a base genmica de muitas desordens e vai permitir uma melhor correlao dos muitos conhecidos CNVs com fentipos especficos. Embora este promete ser um exerccio muito desafiador, muito trabalho j foi iniciado em cncer, doenas neurolgicas e neuropsicolgicas, as doenas infecciosas, e outros, sugerindo que a utilidade clnica e aplicabilidade de tais investigaes no podem ser muito distante. Cncer Embora mutaes somticas, adquiriu rearranjos cromossmicos de vrios tamanhos, e instabilidade genmica so bem conhecidos para ser associado com oncognese e progresso do tumor, esta reviso aborda anomalias constitucionais que causam ou predispem ao desenvolvimento de neoplasias malignas especficas dos indivduos ou famlias. Em nosso estudo de 8789 indivduos com MR / DD / DF com CGH, foram identificados 12 indivduos com delees constitucionais e quatro indivduos com duplicaes constitucionais especficas em genes supressores de tumor, mas sem sinais exteriores clnicos de cncer. Outras investigaes com a colonoscopia de um indivduo com deleo do locus APC em 5q22.1-5q22.2 milhares de plipos do clon identificado e estabelecido o diagnstico de polipose adenomatosa do clon, consistente com um diagnstico clnico da sndrome de Gardner. Uma busca por tumores revelou carcinoma da tiride. Fez-se colectomia e tireoidectomia e estreita vigilncia, resultando em um resultado favorvel. Outros estudos com CGH array de CNVs constitucional associados a cnceres sindrmicos e no sindrmicos tm sido realizados e levou identificao de locus que causam ou predispem ao surgimento de cnceres ou como isolado anomalias ou como parte de sndromes de cncer reconhecvel. Como CGH array usado mais amplamente, a nossa compreenso do CNVs muito dever evoluir, permitindo uma melhor apreciao do efeito desses CNVs sobre a predisposio para cncer. Este melhor entendimento vai se traduzir em aplicaes clnicas. Condies neurolgicas e neuropsicolgicas Apesar de muitas doenas genmicas terem sido associados com dficits neurolgicos/atrasos no desenvolvimento neurolgico, os pesquisadores tm relatado recentemente CNV relacionados a descobertas em condies no-sindrmica neurodegenerativas. Novas descobertas na doena de Alzheimer, doena de Parkinson (PD) e autismo so particularmente significativos. Rovelet-Lecrux e colegas relataram cinco famlias com herana autossmica dominante na doena de Alzheimer a quem os indivduos afetados tm duplicaes na protena precursora amilide (APP) locus no cromossomo 21 que vo 0,58-6,37 Mb em tamanho e contendo 5-12 genes para a regio centromrica da sndrome de Down. Eles estimaram que mais de 8% de pacientes autossmico dominante de incio precoce doena de Alzheimer (ADEOAD) carregam essa duplicao. A frequncia desta duplicao ADEOAD tanto como metade de mutaes missense em APP. Apesar de um relatrio anterior de trs indivduos franceses com doena de Alzheimer espordica e uma duplicao no locus APP, a freqncia dessa duplicao na doena de Alzheimer espordico ainda desconhecida. O uso de matrizes de alta densidade na investigao de grandes grupos de indivduos com doena de Alzheimer espordico com cobertura densa de locus APP vai ajudar a confirmar essa observao de duas dcadas, estabelecendo a freqncia de tal duplicao nesta condio, e pode identificar CNVs de outro significado clnico para a doena de Alzheimer. PD a segunda condio neurodegenerativa mais comum depois da doena de Alzheimer. A base gentica da maioria dos casos de PD espordica desconhecida, mas algumas famlias com herana autossmica dominante tm mutaes no -sinuclena locus (SNCA) no cromossomo 4q21, enquanto os outros casos so causados por ganhos de cpia do DNA (duplicao e triplicao) no locus SNCA. Famlias com a duplicao de SNCA, em contraste com aqueles com

sintomas triplicao, exposio que se assemelham a doena de Parkinson idioptica, que tem uma idade tardia de incio e progride lentamente e em que nem o declnio cognitivo, nem demncia so proeminentes. Estes resultados mostram que a gravidade do fentipo Parkinson familiar dependente SNCA dosagem do gene, sugerindo que a regulao dos nveis de -sinuclena tem importncia potencial na patognese e tratamento da DP espordica. O uso de tcnicas de citogentica contempornea no caso do PD familiar no s pode estabelecer um diagnstico de uma doena de incio neurodegenerativas, mas tambm permitir prognsticos precisos e aconselhamento. Esforos para mapear genes do autismo por estudos de ligao, os estudos de associao e de anormalidades cromossmicas associadas com o fentipo do espectro do autismo dezenas de lcus identificados que abrangem todos os cromossomos. Apesar deste quadro confuso, alguns locus so mais comumente observado em indivduos com autismo. Regies cromossmicas de interesse (crois), que mereceria uma investigao mais aprofundada no so igualmente distribudos entre o genoma humano, mas tendem a se agrupar em regies especficas. Essas regies incluem banda cromossomo 2 Q37, banda cromossomo 5 p14-p15, vrios locais no brao longo do cromossomo 7, a banda cromossomo 15 q11-q13, banda cromossomo 11 q25, banda cromossomo 16 q22.3, banda cromossomo 17 p11.2 , cromossomo 18 q21.1 bandas q23 e, cromossomo 22 q11.2 bandas e q13.3 e cromossomo X banda p22. Mais recentemente, a primeira anlise de alta resoluo CGH array em famlias com autismo, incluindo 118 famlias com um nico indivduo afetado, de 47 anos com mltiplos indivduos afetados, e 99 famlias de controle afetado, constatou que de novo CNVs foram significativamente associados com o autismo. Tal CNVs foram encontrados em 10% dos indivduos com autismo espordico, em 3% dos pacientes com um parente de primeiro grau afetados, e em 1% dos controles, estabelecendo que as mutaes de novo germinativas so um fator de risco mais significativo para o autismo do que previamente reconhecido. Concluso O desenvolvimento de CGH matriz representa o mais recente avano em citogentica molecular, que revolucionou o campo da citogentica clnica e ampliou o repertrio de condies que podem ser testadas e que eram, at recentemente, a preocupao de outras disciplinas. Alm de algumas doenas malignas e neurolgicas (revisado acima), h uma clara indicao de que alteraes cromossmicas constitucionais que so detectveis por estas tcnicas citogenticas contempornea pode afetar vrios sistemas orgnicos e que podem desempenhar importante CNVs papis em condies multifatoriais. Por exemplo, tem sido conhecido que as duplicaes segmental no genoma humano so enriquecidas para genes envolvidos na imunidade e que as conseqncias fenotpicas poderia resultar desses CNVs. No ltimos anos, tornou-se claro que a predisposio para HIV1/AIDS influenciada por segmentar duplicaes contendo o ligante quimiocina CC 3-como um gene (CCL3L1) em 17q (31). A mais exemplo notvel a constatao de que um CNV envolvendo o FCGR3B humano (Fc fragmento de IgG de baixa afinidade IIIb, receptor), um ortlogo de rat Fcgr3, est associada com glomerulonefrite em lpus eritematoso sistmico e predispe a doena renal mediada imunologicamente em ambas as espcies de mamferos. Este trabalho aponta para a importncia da plasticidade do genoma na evoluo dos fentipos geneticamente complexos, incluindo a susceptibilidade a doenas humanas comuns, e tambm destaca o potencial papel para a citogentica de alta densidade molecular ferramentas do presente e do futuro no diagnstico de tais condies. Com estes novos poderosos instrumentos de diagnstico vem uma grande responsabilidade. Embora a nossa compreenso do CNVs e seus papis na sade e doena est a melhorar, ainda rudimentar. Mesmo com matrizes direcionados para genes de bem-caracterizada a funo, comum identificar alteraes da clnica que causam considerveis dificuldades interpretativas para o laboratrio e criar um dilema aconselhamento significativa para o clnico. Como nossa compreenso do genoma arquitetura melhora, matrizes de diagnstico para a inspeo genoma continuar a exigir a actualizao regular para ficar a par de todas as regies romance estabelecido responsvel pela anormal fentipos humanos. No entanto, os laboratrios de diagnstico devem permanecer, pelo menos, um passo atrs da vanguarda da investigao, porque eles esto preocupados com o bem-estar dos pacientes, e no sujeitos do estudo. Com o ritmo alucinante dessa revoluo, dever do diagnosticador clnica para proteger os pacientes com os erros inevitveis que ocorrem no mundo exploratrio da pesquisa, proporcionando os mais recentes avanos no diagnstico. Alcanar esse delicado equilbrio um desafio.

Citogentica contempornea foi rapidamente integrada as tecnologias nova matriz para uso clnico. Arrays bem projetado para uso clnico permitir a interpretao simples e so susceptveis de fornecer diagnstico sem um nmero substancial de casos no diagnosticados atualmente de doenas genticas humanas e em um futuro prximo, em outras condies multifatoriais. Matriz CGH j transformou a prtica de gentica mdica e citogentica clnica e est prestes a fazer o mesmo para todas as reas da medicina, dando incio nova era da medicina genmica. Novas sndromes cromossmicas foram identificadas, as etiologias conhecidas de sndromes cromossmicas foram descobertos, e fentipos clnicos de desequilbrios cromossomo foram ampliados. O laboratrio e citogentica contempornea j tem microscpios menos de poucos anos atrs, e citogeneticistas esto aprendendo a manipular o DNA genmico, alm de metfase cromossomos. A anlise por banda dos cromossomos metafsicos rapidamente tornando-se obsoleto e est sendo substituda por uma inspeco rpida ao metfase se espalhar para excluir translocaes aparentemente balanceadas ou inverses de grandes segmentos cromossmicos. Todas estas mudanas dramticas exigem a elaborao de programas de melhor formao para preparar os formandos em citogentica para enfrentar os desafios futuros desta disciplina emocionante. Essas mudanas tambm so forando escolas mdicas e programas de residncia para redesenhar seus currculos para incorporaros cursos de gentica e genmica, tornando medicina genmica uma realidade