Tecnolgico de Monterrey Campus Guadalajara

Reportes de Practicas 1 & 2

Julio Alejandro Jaramillo Reyes A00568535 Laboratorio de Microbiologa Profesora: Mayra Mrquez 5 de septiembre del 2011

Resumen:

Estas dos primeras practicas del Laboratorio de Microbiologa sirvieron como introduccin a dicho laboratorio y como mtodo para comenzar a desenvolvernos en un medio necesario no solo para nuestra carrera, si no tambin para nuestra vida profesional despus.

La primera practica o ejercicio fue una introduccin completa al mundo del laboratorio y todas las actividades que se desempean en el. Y como cualquier otro espacio u otra actividad, necesita estar regida por cierto tipo de reglas que permitan la convivencia en el laboratorio y maximicen el xito de las actividades en el.

Despus de una investigacin acerca del reglamento para el laboratorio de microbiologa, debemos pues investigar acerca del medio donde nuestras actividades relacionadas con la microbiologa se llevaran acabo; los medios de cultivo.

Una vez teniendo el conocimiento necesario, hemos de pasar a la parte practica. En el primer laboratorio de microbiolgica generamos diferentes tipos de medio de cultivo que nos ayudaron en la siguiente practica. Una preparacin de medios de cultivo tardada pero al final exitosa; ya que como miembros nuevos de l equipo de laboratorio, nos encontrbamos fuera de nuestra zona de confort, adems los equipos eran nuevos y la tcnica era nula con respecto a estos procedimientos.

Nuestra segunda practica consisti en el uso de los medios de cultivo para generar diferentes cultivos microbiolgicos que despus describimos y en algunos casos hicimos alguna transferencia asptica.

Para esta practica fue necesario investigar desde como nombrar o etiquetar una caja de Petri, pasando por las formas en como los microorganismos crecen en ciertos tipos de medios de cultivo hasta como hacer un conteo adecuado de UFCs y analizar cuales fueron nuestros errores en ambas practicas iniciales.

Introduccin:

1.1 Medios de Cultivo

El objetivo de la practica es Conocer los lineamientos bsicos para el trabajo en el laboratorio de microbiologa adems de conocer los diferentes factores que pueden afectar el desempeo de un medio de cultivo.

Un medio de cultivo es una de las principales herramientas de la biotecnologa, profesionista o estudiante en un laboratorio de microbiologa. Es la base del conocimiento practico que se ira generando a partir de la experimentacin y la observacin.

En palabras menos poticas un medio de cultivo es una solucin con los nutrientes necesarios (mas condiciones favorables de temperatura, ph, humedad etc) para permitir el crecimiento controlado (o semi-controlado) de un organismo pueden ser bacterias, hongos o incluso algn conjunto de eucarionte complejo. como

Los primeros medios de cultivo fueron literalmente gelatinas pero eran muy problemticas con respecto a las temperaturas, mas tarde llegaron las rodajas de papa, un poco mas tarde las mismas rodajas enriquecidas con caldo de carne o sangre. Estos fueron los medios hasta que se descubri el agar, una sustancia extrada de algas rojas que es utilizada hasta nuestros tiempos.

Estos medios de cultivo se diferencian dependiendo de su contenido y estos generan una gran gama de ecosistemas para diferentes tipos de organismos que necesitan de estas composiciones diversas para poder crecer. Primeramente un medio de cultivo puede ser liquido, semi-slido o slido dependiendo de que organismo queremos que crezca en el.

Existen dos tipo de cultivos en general (clasificados por sus componentes) y estos son los definidos y los complejos; entindase por definidos como aquellos donde sabemos que tienen y en que proporciones, los segundos se refiere a aquellos medios que nos es imposible saber su composicin exacta debido a su naturaleza.

Tambin segn su uso, de suelen clasificar: existen agares estndar que dejan crecer a la mayora de los microorganismos, tambin estn los selectivos que evitan el crecimiento de ciertos organismos, los diferenciales, los de transporte, etc

La parte mas importante de un medio podramos decir que es su composicin ya que no importa que sea solido o liquido, la temperatura o la presin si el organismo no tiene lo necesario para habitar en el. Para esto existen ciertos ingredientes que le dan estos nutrientes bsicos:

Necesidad FUENTE DE NITROGENO FUENTE DE ENERGIA SALES Y MINERALES GELIFICANTE FACTORES DE CRECIMIENTO AMORTIGUACION DE PH

Satisfaccin PEPTONAS GLUCOSA-LACTOSA NaCl, sales inorgnicas agregadas Agar-gelatina-silicogel-carragenina SUPLEMENTOS VITAMINICOS FOSFATOS BISODICOS, MONOPOTASICOS

INDICADORES INHIBIDORES

COLORANTES BILIS, ANTIBIOTICOS

(Tabla 1, Necesidades nutrimentales en medios)

Una vez sabiendo la naturaleza de nuestros medios, es posible generarlos en el laboratorio de microbiolgica como se mostrara unas hojas mas tarde.

La mayora de los microorganismos que utilizamos o utilizaremos en nuestra vida estudiantil sern sembrados en medios de cultivo solidos, claro, con diferentes mtodos pero la mayora sobre un agar solidificado.

Ahora, muchos de los medios de cultivo que fueron generados en la segunda sesin no fueron utilizados si no hasta ocasiones posteriores; es por eso que tambin hemos hecho una investigacin de cuanto tiempo pueden durar los medios sin ser utilizados y despus de esterilizarse. Estos medios deben conservarse en una temperatura de entre 2 y 8 centgrados.

Medio de cultivo ACE tubo con tapa rosca ACE Bolsas de Plstico Selladas AST tubo con tapa rosca AST tubo con tapn

Tiempo de conservacin Tres meses Dos semanas Tres meses 7 das aproximadamente

(Tabla 2, Tiempo de conservacin de los medios de cultivo)

Hay diferentes formas de lograr la esterilizacin. Para nuestros medios de cultivo se emplea una esterilizacin fsica, basada en calor y presin a partir de un aparato llamado autoclave que tiene la habilidad de elevar la temperatura y presin de manera hermtica para garantizar la sanidad de nuestros medios de cultivo sin genera mayor problema a este. Dicha esterilizacin se hace por 15 minutos y a una temperatura aproximada de 121 C en seco.

1.2 Reservorio de Microorganismos

Los objetivos de la practica incluye familiarizarnos con las tcnicas microbiolgicas de transferencia asptica de cultivos, conocer y manejar las tcnicas de aislamiento de cultivos en agar solido as como conocer el fundamento para el recuento de microorganismos por la tcnica de siembra por superficie. Familiarizarnos con las formas de crecimiento de colonias bacterianas y fngicas.

Una vez listos los medios de cultivo, habr que utilizarlos para su ultimo objetivo: crecimiento controlado microbiolgico. Una vez inoculado un medio, se genera un crecimiento de organismos con ciertas caractersticas que resultan interesantes y necesarias para su etiquetacin e identificacin.

Caracterstica Forma:

Descripcin Puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide, huso.

Elevacin:

plana, elevada, convexa, acojinada o umbilical.

Margen:

Liso, ondulado, lobular, erosionado, filamentoso, rizado.

(Tabla 3, Caractersticas de colonias microbianas)

Una vez identificadas las caractersticas mas importantes de la colonias crecientes en el medio de cultivo (adems de el color y la consistencia), se debe generar un conteo o rencuentro de dichas cajas.

Las reglas bsicas se mencionan a continuacin:

Las cajas candidatas a contar, deben de tener un total de entre 25 y 300 UFC, todas las cajas que presenten esta caracterstica debern ser contadas, as como sus colonias sin discriminacin por tamao. En las cajas que exista un numero mayor al mximo indicado, se debe de especificar que son demasiado numerosas, si es necesario contarlas, se debe hacer una porcin representativa y el dato anotarse como aproximacin. En cajas menores a 25 se debe reportar el numero asegurndose de marcarlo como menor al numero de diluciones.

Formula: )

Materiales para las Practicas.

Aparatos: Balanza Potencimetro Placa de calentamiento con

Aparatos: Termobao Incinerador Vortex Incubadora Contador de colonias

agitacin magntica Autoclave Termobao

Material de cristalera y otro: Material de cristalera y otro: Matraces erlenmeyer de 500 mL Probetas de 250 y 500 mL Pesamuestras Esptulas Cajas de petri Botellines de vidrio de 250 mL Tubos de ensayo de 18X150 Campana Drham Agitador magntico Reactivos (por cada alumno) 8 tubos con 9 mL de diluyente de peptona 5 cajas de petri con Agar cuenta estndar (ACE): una para estriado en placa y cinco para siembra por Reactivos: Agua destilada superficie. 5 cajas de petri con Agar papa o charolas Pipetas estriles Recipiente para disponer material contaminado Asa de nicromo Recipiente con alcohol

desechables para pesar

 Agar Cuenta Estndar (ACE) Agar Soya Triptocaseina Agar Papa Dextrosa (APD) HCl 0.1N NaOH 0.1N

dextrosa acidificado (APD): una para estriado en placa y cinco para siembra por superficie. 1 tubo de ACE inclinado

(Tabla 4, Materiales, Reactivos y Aparatos)

Procedimientos:

2.1 Preparacin de Medios

Se utilizaran 3 medios de cultivo diferentes adems de 8 tubos de agua peptonada que sern utilizados para diluciones en las siguientes practicas.

Caractersticas del ACE 23.5g/L- Lote: 1055112 ph: 7.0 0.2 Pep. De casena 5.0 gr, Ext de levadura

2.05 gr, Dextrosa 1gr, Agar 15gr. Sobre litro.

(Tabla 5, Caractersticas del Agar Cuenta Estndar)

Dependiendo de el agar ser el procedimiento de preparacin de medio. Para el medio Cuenta Estndar, se usaran 300 ml por persona. Para este se usaran 7.05 gr de agar. Mezclar 2/3 partes de agua en un matraz de un litro, despus los 7.05 gr de agar y verter. Para el AST, se mezclaron 200 ml de agua con 12gr de agar, despus el resto del agua. El APD requiri de la misma cantidad de agua mezclada con 11.7 gr de agar.

(notas: al medir la cantidad de agar; este debe de hacerse en un pesamuestras y utilizando una balanza electrnica. Medir la cantidad de agua con una probeta, el dividir el volumen final es para evitar grumos en la mezcla, la agitacin debe de generarse hasta que no existan fases en la mezcla.)

Una vez disuelto el agar en el agua, se debe de medir el ph para evitar sorpresas al inocular los medios mas tarde. El potencimetro debe de ser calibrado antes. El ph no debe de exceder el ph propuesto por la indicacin de la caja en 0.2 unidades, si esto ocurre entonces debemos de ajustar el ph con una mezcla de acido tartrico al

10%. Los tres agares deben de tener un ph neutro, la lectura del ACE fue de 7.16 (apto para su uso sin necesidad de ajuste)

Calentar el agar en una placa de calentamiento con agitacin hasta que se vea hervor en la muestra, a este punto el agar debe de tener un color vivo, claro y transparentado. (nota: nunca de debe de dejar de vigilar el agar mientras esta en calentamiento). Una vez listo los agares, los ACE, AST y APD deben ser distribuidos en botellas de 1L de capacidad para su esterilizacin.

Teniendo los medios de cultivo en botellas, pasar a su esterilizacin en autoclave a 121c y por 15 minutos.

Los agares debe dejarse enfriar, para despus los ACE Y APD se distribuidos en cajas de Petri; dichas cajas deben de ser llenadas en una zona estril y manejar con cuidado para evitar contaminacin. Despus deben ser almacenadas

preferentemente en bolsas y colocadas en un refrigerador de temperatura de 2 a 8c evitando la congelacin.

El medio con AST debe ser vaciado en tubos con 10ml aproximadamente, dejar inclinados sobre una pipeta para generar la inclinacin del medio en el tubo, una vez solidificado, debe ser conservado en el regrigerador a unos 2 o 8 c sin generar congelacin.

El agua peptona da tiene un procedimiento diferente, ya que ser utilizada para diluciones y no como un agar. Por lo tanto no debe calentarse pero si es necesaria su esterilizacin. En el proceso de deben de verter 400 ml en un matraz con capacidad para 2L, agregar 0.6 gr de peptona previamente pesada y agregar los ltimos 200ml para poder tener la mezcla completa.

Se utiliza una pipeta con capacidad de 10ml para poder verter 9ml en cada tubo ofrecido para hacer las diluciones.

Una vez distribuida en los tubos, el agua peptonada debe ser esterilizada en la autoclave a 121c ypor 15 minutos.

Cabe recordar que tanto las cajas como los tubos deben ser rotulados; el rotulado consiste en poner las iniciales, el medio de cultivo, el tipo de muestra, numero de dilucin y la fecha en que fue echo tanto el medio como la insercin del cultivo.

2.2 Aislamiento de Microorganismos

Se pidi una muestra a cada alumno, estas muestras se pueden definir en tres grupos especficos que sern tratados como similares, estos son lquidos, solidos y muestras de enjuague.

De las dos primeras muestras se tomaran 10gr o 10ml (segn sea el caso) y se aadirn en una bolsa apta para el Stomacher junto con 90 ml de diluyente, se mezclaran a mano vigorosamente y pasaran al menos un minuto por el stomacher para homogeneizar las muestras. Las muestras de enjuague sern insertadas en 100ml de diluyente y debern ser agitadas para generar un enjuague en la superficie de la muestra y as tener nuestras concentraciones 10^0(para enjuague) y 10^-1 (para lquidos y solidos).

Una vez realizado este enjuague se tomara 1ml de muestra diluida y se verter en uno de los 8 tubos de agua peptonada para generar la dilucin 10^-2 y 10^-1 en caso de lquidos, solidos y enjuague. Una vez vertida la muestra se debe agitar en el vortex por 7 segundos (poder ver un vortex dentro del tubo) para asegurarnos de mezclar bien la dilucin.

Estriado en placa.

El estriado en placa es una tcnica de aislamiento de colonias que nos permitir despus hacer una transferencia asptica.

Se debe de tomar una muestra de la dilucin primera que se hizo( 10^0 o 10^-1) con un haza (previamente esterilizada por el incinerador). Generar un estriado pequeo en un borde de la caja de Petri con medio ACE y APD, esterilizar una vez mas el haza, esperar su enfriamiento y generar tres lneas que toquen el primer estriado, estriar de nuevo el rea nueva donde se generan las primeras tres lneas. Por ultimo esterilizar una vez mas el haza y repetir las tres lneas que toquen el segundo

estriado y generar un nuevo estriado a partir de este. Dejar encubar a una temperatura de 35C por aproximadamente 4 das.

Una UFC aislada se considera tal, una vez que no existan otras UFC en un rea el doble que su dimetro.

Con un haza estril, se selecciona una colonia de inters. Se toca la colonia sin necesidad de que en el haza aparezcan residuos, se toma el tubo con AST inclinado, se inserta el haza hasta el fondo de la superficie de la muestra y se genera un estriado en zigzag por toda la superficie. Cerrar el tubo e incubar a 35c.

Siembra por superficie. La siembra de superficie nos permitir generar un conteo de UFCs gracias a las diferentes diluciones que realizamos, generando un estudio microbiolgico necesario para nuestra practica. Como solo contamos con 4 cajas de ACE y APD solo podremos escoger 4 diluciones, para la muestra de la tortillas cremos correcto utilizar las diluciones 10^-3, 10^-4, 10^-5 y 10^6.

Ser necesario rotular todas las cajas, incluyendo en los datos el numero de dilucin y la cantidad a sembrar (en estos casos es de 0.1ml). En una zona estril, se tomaran 0.1 ml de muestra de cada dilucin y sern vaciados en el centro de su respectiva caja de Petri, se tomara el haza estril y se har un estriado dinmico para que la muestra sea dispersada por todo el medio, repetir con todas la diluciones y en ambos medios de cultivo. Una vez inoculadas, se debern encubar las ACE por aproximadamente 4 das y las APD por 5 o 6, esperar resultados.

Despus de estas acciones y dejando incubar los das necesarios, encontraremos en nuestras cajas de Petri una explosin de vida debido a la inoculacin de cajas. Esta es una de las partes mas importantes de la practica: el rencuentro de

microorganismos. Conociendo las reglas y recordndolas, nos pasaremos directo a los resultado en las cajas de ACE y APD de muestras de la tortilla con diluciones de 10^-3, 10^-4, 10^-5 y 10^6.

Para generar el conteo se utilizara un contador de colonias sensible al tacto, una recomendacin que no me pareci totalmente adecuada fue el uso de marcador para evitar contar la misma colonia mas de una vez, recordar las reglas de conteo. Y

ser minucioso con la explicacin y caracterizacin de cada una de las colonias presentes en los cultivos.

ACE 10^-3 0.1ml tortilla 23/ago/2011 NO CONTABLE ( 4832X10^4 UFC/ml)* 1.menores a 1mm blancas solidas, 2.menores a 1mm bien Amarillo solido, con 3.aprox. 1mm relieve blanco margen irregular, capas transparente, borde en

definidas, elevadas con convexo margen entero

definido y entero.
(Tabla 6, Resultados)

ACE 10^-4 0.1ml tortilla 23/ago/2011 NO CONTABLE ( 800X10^5 UFC/ml)* 1.menores a 1mm blancas solidas, bien definidas, 2.menores a 2mm Amarillo convexo solido, con relieve margen

elevadas con margen entero

definido y entero.
(Tabla 7, Resultados)

ACE 10^-5 0.1ML TORTILLA 23/AGO/2011 ERROR DE Dilucin UFC/ml)* No existe crecimiento
(Tabla 8, Resultados)

(1X10^6

ACE

10^-6

0.1ML

TORTILLA

23/AGO/2011

ERROR

DE

Dilucin

(1X10^7UFC/ml)* No existe crecimiento

(Tabla 6, Resultados)

APD 10^-3 0.1ml tortilla 23/ago/2011 (92*10^4 UFC/ml) 2 colonias verde oscuro filamentosas e indefinidas, con mrgenes

filamentosos y elevacin plana. 1 colonia blanca indefinida y filamentosa, con margen filamentoso y elevacin

plana. 8 colonias blanco lechoso, indefinidas y filamentosas con mrgenes deslavados y elevacin convexa 68 colonias amarillas intensas, 0.2 mm formas definida y elevacin convexa 13 colonias blancas cremosas convexas con margen definido.
(Tabla 9, Resultados)

APD 10^-4 0.1ml tortilla 23/ago/2011 Error de Dilucin (1*10^5 UFC/ml)* No concluyente.
(Tabla 10, Resultados)

APD 10^-5 0.1ml tortilla 23/ago/2011 Error de Dilucin (1*10^6 UFC/ml)* No concluyente.
(Tabla 11, Resultados)

APD 10^-6 0.1ml tortilla 23/ago/2011 (1*10^7 UFC/ml)* Colonia amarilla, indefinida y filamentosa que cubre la mayor parte de la caja, acentundose un color naranja en los bordes.
(Tabla 12, Resultados)

Como mejorar las tcnicas aplicadas en esta practica.

Primeramente cabria destacar la necesidad de tener de ante mano la informacin requerida, saber que se va a hacer en la practica y no estar en el momento a las expectativas de la situacin. Tambin recordemos que estas fueron los primeros acercamientos que hemos tenido a un laboratorio, los errores suelen y van a ocurrir, con el tiempo y la experiencia estos se irn reduciendo considerablemente hasta ser casi mnimos.

Para la preparacin de medio seria prudente considerar cuales son los factores que alteran un medio de cultivo segn el error.

Consideremos el uso de agua microbiolgicamente adecuada, sin trazas de metales pesados o sales, as como ausencia de C02. Tambin la limpieza del material es importante; la cristalera debe de ser libre de residuos de detergente (para esto se

enjuaga de 6 a 12 veces y por ultimo un enjuague con agua MA o en su defecto, destilada)

A continuacin se presenta una tabla con los errores mas frecuentes.

Error Peso incorrecto de ingredientes.

Consecuencias Tendr problemas de solidificacin, un ph inadecuado, un color anormal y un dficit en el crecimiento de

microorganismos. Uso de material seco deteriorado. Tendr problemas con el ph, un color anormal y dficit en el crecimiento de microorganismos Medida Incorrecta de Volumen de Agua Tendr problemas de solidificacin, ph inadecuado y dficit en el crecimiento de microorganismos Uso de agua inadecuada Presentara problemas de ph, color

anormal y dficit en el crecimiento de microorganismos Uso de material contaminado con Tendr problemas de ph, un color inadecuado y dficit en el crecimiento de microorganismos Incompleta solubilizaran de ingredientes Tendr problemas de solidificacin, ph inadecuado, color anormal, podr

detergentes

presentar caramelizaran y existir un dficit en el crecimiento de

microorganismos Error al determinar el ph Presentara problemas de solidificacin, color anormal, un ph inadecuado y dficit con respecto al crecimiento microbiano Sobrecalentamiento durante preparacin Habr problemas de solidificacin, ph y esterilizacin inadecuado, color anormal podr

presentar caramelizaran, precipitacin, deshidratacin y obviamente un dficit en el crecimiento microbiano.

Adicin inapropiada de suplementos

No existir solidificacin adems de un dficit en el crecimiento microbiano

(Tabla 13, Errores en preparacin de MC)

Debemos de tener en cuenta todos estos puntos para generar un medio de cultivo viable cuando se requiera.

Con respecto al estriado, una vez mas hay que hablar de experiencia, ya mayora de las personas en el laboratorio no pudo tener mas de un par UFCs aisladas por el estriado previo que se genero. En mi punto de vista personal, fue un error de experiencia debido a que no crea que pudiera haber arrastrado suficientes microorganismos de los primeros estriados, por lo tanto repet la actividad en sentido opuesto en la caja. Despus de no poder encontrar mas que dos UFCs aisladas, es cunado me doy cuenta que mi primer estriado sin modificaciones hubiera quedado perfecto y cabe destacar que la tcnica podra mejorar en mi punto de vista si los dos primeros estriados fueran mas reducidos en rea y el ultimo estriado no estuviera tan denso en la caja de Petri.

Aun no hay resultados en la transferencia asptica, sin embargo creo tener un error debido a que tome demasiada muestra con el haza al momento de inocular el tubo estril. Habr que recordar que aun que no veamos presencia de contaminacin fsica, considerando que trabajamos con microorganismos, debemos de esperar que el mas mnimo contacto entre el haza y la colonia de inters, genera despus un gran numero de colonias en su transferencia asptica sin necesidad de llevarse completamente la colonia o gran perte visible de esta.

Un mayor problema surgi en la etapa de las diluciones. Debido a que en cuatro de un total de mis ocho cajas para inocular se genero un desperfecto. Y es que al estar generando un rencuentro de cada caja de Petri, me di cuenta que en el ACE las cajas con dilucin 10^-5 y10^-6 no presentaban un crecimiento microbiano; cuando tericamente entre cada caja de cultivo se debe de notar un decrecimiento del numero de colonias a la 10^-1. Por otra parte, en el APD se gener el mismo problema pero en las cajas marcadas con las diluciones 10^-4 y 10^-5 que se encontraran en medio de las dos cajas exitosas 10^-3 y 10^-6. Debo concluir entonces que el error no estuvo en la preparacin del agar si no en el proceso de diluciones.

En dicho proceso, un error es hacerlo con ayuda, ya que al tener a dos cabezas trabajando en un mismo lugar, momento y objetivo suele confundir las cosas y generar problemas como el presentado un prrafo atrs. Tambin me hace pensar que se debe de tener una total concentracin en lo que se esta haciendo y para esto tambin es necesario tener un orden con respecto a tu materia y forma de actuar en la practica de laboratorio. Una vez mas estos errores los excusar con el argumento de ser de las primeras practica de laboratorio y la falta de experiencia en el.

Para las diluciones creo que es necesario mejorar el orden de los reactivos y materiales, etiquetar todo de forma adecuada y estar completamente concentrado.

Para las inoculaciones en placas recomendara tener las manos y el material lo mas limpio posible, una cosa que me pareci curiosa es el depositar el agar en las cajas de Petri, se me haba mencionado que se deba de llenar hasta una tercera parte y generar movimiento para generar una pelcula de medio en la caja, en esta practica sin embargo, el vaciado de agar fue hasta que la placa estuviera completamente cubierta. De la primera forma podemos generar un ahorro de agar y una mayor productividad de medios de cultivo para inocular.

Tambin al momento mismo de inocular recomiendo mucho el orden del material, porque tambin en esta etapa pudo haberse cometido el error ya antes mencionado.

Con respecto a fortalezas y debilidades de la practica, mi pensamiento es que no existen debilidades en la practica, solo fortalezas. La fortalezas referente a mezclarnos con el mundo de la microbiologa y el laboratorio, apoyarnos revisando tcnicas biotecnolgicas que nos permitirn desarrollarnos como estudiantes integrales y muy buenos profesionistas.

Las debilidades creo que vinieron mas de nuestra parte y de nuestra inexperiencia con respecto a las reas y tcnicas con las y en las que trabajamos. Poco a poco vamos a ir tomando esta experiencia para convertirla en una ventaja y poderla usar como herramienta en biotecnologa.

Conclusiones.

En las primeras dos practicas con respecto al laboratorio de microbiologa debemos afirmar lo siguiente:

Se conocieron los lineamientos bsicos para el trabajo en el laboratorio de microbiolgica, as como los diferentes factores que pueden afectar el desempeo de un medio de cultivo.

Tambin hubo una familiarizacin con las tcnicas microbiolgicas de transferencia asptica, aislamiento de cultivos. Adems, se conocieron los fundamentos para el rencuentro de microorganismos por la tcnica de siembra de superficie. Una vez afirmando que los objetivos se cumplieron en su totalidad, es menester generar una conclusin mas detallada acerca de las experiencias generadas en el laboratorio de microbiolgica.

El primer punto a tratar puede ser los valores requeridos para poder realizar una practica exitosa; el primero de los valores seria el respeto tanto por la persona misma, como los compaeros, los profesores, las instalaciones y la institucin. Un segundo valor seria la responsabilidad de actuar y el afrontar consecuencias de cualquier tipo.

Tambin es necesario contar con la concentracin, el orden y la madurez para tener nuestra rea de laboratorio adecuada para trabajar con el. Tener un orden en los reactivos, materiales y aparatos para minimizar los errores que su pudieran presentar durante la practica.

El conocimiento tambin es un factor importante durante las actividades en el laboratorio ya que as generamos un plan de accin, generamos mayor asertividad, mayor ahorro de tiempo y nos acercamos a la perfeccin en la practica.

Cabe recordar que muchos de los errores cometidos en esta practica se deben a la falta de experiencia en el laboratorio y con muchos de los instrumentos y materiales dentro de el. Esperamos ir reduciendo estos problemas e ir generando una cultura donde podemos realizar un experimentos sin la necesidad de generar errores significativos en el.

En general fue una practica con un nivel de dificultad bajo-medio que nos gener de sobremanera muchas dudas pero tambin cantidades inmensas de conocimiento que terminaremos aplicando en nuestras ramas de estudio posteriores.

Sabemos que existen diferentes factores que alteran el proceso de realizacin de un medio de cultivo, cosas tan insignificantes como utilizar agua de la llave o no medir el ph, agregar agar de mas o utilizar un volumen mayor de agua pueden generarnos errores que nos constaran horas volver a enmendar. Tener cuidado al vaciar el medio en las cajas, asegurndonos que no haya contaminacin en el proceso. Generar diluciones correctas, analizando cada movimiento y sin tener dudas para no generar problemas innecesarios al momento de hacer una inoculacin en caja de Petri.

Tener cuidado al hacer un estriado en placa, no tomar muestra de mas o subestimar el poder reproductivo de microorganismos en una caja de Petri.

Estos son algunos de los muchos ejemplos de correcciones a tomar en cuenta durante la practica, que poco a poco iremos mejorando hasta convertirlo en una herramienta til para nuestra vida profesional diaria.

Bibliografa:

Pouch Downes F. and Ito K., Ed. 2001. Compendium of methods for the microbiological examination of foods. 4th. Ed. American Public Health Association.

Zymbro M. J. and Power D. A., Ed. 2003. DifcoTM & BBLTM Manual. Manual of microbiological culture media. Becton, Dickinson and Company.

APHA. Standard methods for the examination of water and wastewsater.

Standard methods for the examination of dairy products. 17th Ed. American Public Health Association.

U.S. Food and Drug Administration. Bacteriological Analytical Manual Chapter 3. Aerobic Plate Count. Disponible en:

http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/LaboratoryMethods/Bacteriologica lAnalyticalManualBAM/ucm063346.htm Accesado: 7 agosto 2011.

Zinseer H. Microbiologa. 17 ed. La Habana: Editorial Cientfico-Tcnica, 1983:527.

PANREAC QUIMICA SA. (2003). Manual de Medios de Cultivo. (Ultimed, Ed.) Salamanca.