Vorlesung: Einfhrung in die Zellbiologie

Genstruktur genetische Information g genetischer Code

Dieter Frst
Universitt Bonn

Dogma der Molekularbiologie

DNA

RNA

Protein P t i

Transkription

Translation

Genstruktur

Definition: Ein Gen ist die vollstndige/ganze Nucleinsuresequenz, die notwendig ist, ein f funktionelles Protein bzw. RNA zu synthetisieren. th ti i
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Bakterielle Genstruktur

Gene von Prokaryoten: Ein Gen ist ein DNA-Stck, das aus zwei funktionell unterschiedlichen B i h f ki ll hi dli h Bereichen besteht: 1. DNA-Abschnitte, die fr ein Genprodukt (meist ein Protein) codieren und codieren, 2. DNA-Abschnitte, die fr die Kontrolle der , Expression eines Genproduktes wichtig sind. sind
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Bakterielle Promotoren Nukleotidsequenzen, die (mit Abweichungen!) in den meisten bakteriellen P i t b kt i ll Promotoren zu fi d sind: t finden i d
35 Region g Pribnow-Box Initiationsstelle . . . T T G A C . . . [15-20 bp] . . . T A T A A T . . . [5-8 bp] . . .[ I. ]
84 79 64 54 45 79 95 44 59 51 96

Hufigkeits-%

Beispiel: Kontrollregion fr die Gene/Enzyme zur Verwertung des Zuckers Lactose

...GCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATT...
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Bakterielle Genstruktur

Transkription: p
Transkription: durch ein Enzym, die RNAPolymerase, katalysiert. Polymerase katalysiert besteht aus mehreren Untereinheiten. Komplex bindet lose an jede beliebige DNASequenz. q Erst zusammen mit dem -Faktor kann das Enzym spezifische Promotor-Regionen erkennen.
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Bakterielle Genstruktur Gruppierung der Gene meist in Operons: Transkription aller Gene, die fr die Enzyme eines Stoffwechselweges codieren als eine codieren, gemeinsame Einheit. Man nennt solche mRNAs polycistronisch. = sehr einfacher und konomischer Kontrollmechanismus! [Die Translation beginnt unabhngig bei jedem einzelnen codierenden Abschnitt!]
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Bakterielle Genstruktur
Die Gene Zucker-metabolisierende Enzyme sind oft in Operons organisiert:

Galactose
Kinase

Lactose
Galactosidase

Arabinose Ribulose
Isomerase Kinase

Galactose-1Galactose 1 Phosphat
Transferase

UDP-Galactose
Epimerase

Galactose + Gl Glucose

Ribulose-5Phosphat Ph h t
Epimerase

UDP-Glucose Glucose

Xylulose-5Phosphat

Pyruvat

Bakterielle Genstruktur

Kontrolle der Initiation: Bakterielle Transkription wird oft durch Nahrungsstoffe induziert oder reprimiert: Induktion: Nhrstoffe vorhanden - Induktion der metabolischen Enzyme ("positive Kontrolle":
z. B. z B Enzyme zur Verwertung bestimmter Zucker) Zucker).

Repression: Nhrstoffe fehlen - Induktion der anabolen Enzyme ("negative Kontrolle": z. B.

Enzyme zur AA-Synthese). AA Synthese).
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Genstruktur bei Eukaryoten Transkription und Translation sind rumlich getrennt! neu synthetisierte RNA der Zellkerne zeigt eine sehr heterogene Lngenverteilung = heterogene nuklere RNA, hnRNA. g , RNAs im Kern und im Cytoplasma sind unterschiedlich RNAs werden als Vorstufen erzeugt! Die meisten eukaryotischen mRNAs sind monocistronisch (codieren fr einzelne Proteine) )
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Genstruktur bei Eukaryoten

Transkription:
Transkription wird bei Eukaryoten durch DREI unterschiedliche RNA P l t hi dli h RNA-Polymerasen k t l i t katalysiert. Die RNA-Polymerasen bestehen aus RNA Polymerasen mehreren Untereinheiten (je 10-15 Proteine). Es gibt eine groe Zahl von Proteinen, die den y RNA-Polymerasen "helfen", die Initiationsstellen zu finden: = Transkriptionsfaktoren
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Genstruktur bei Eukaryoten Ein typisches eukaryotisches Gen: Lysozym aus der Trnenflssigkeit bzw. aus dem Hhnereiwei
das Gen ist wesentlich grer als nur der Proteincodierende Teil der codierende Bereich ist in mehrere Teile gestckelt bei der Transkription wird zunchst ein groes Transkript erzeugt aus diesem groen Transkript werden noch im Kern die Bereiche herausgeschnitten, die nicht Teil der "reifen" RNA i d " if " mRNA sind
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Genstruktur bei Eukaryoten

Das Lysozym-Gen
(Gesamtgre ca. 60 kb)

5'

3'

Scaffold Attachment Region

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Gerstproteine bestimmen die uere Form der Chromosomen

elektronenmikroskopische Aufnahme eines Chromosoms; "Spreitprparat"

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Genstruktur bei Eukaryoten

Das Lysozym-Gen
(Gesamtgre ca. 60 kb)

Promotor (P) Strukturgen 5' Transkriptions-Start (tsp) 3'

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Genstruktur bei Eukaryoten

Das Lysozym-Gen
(Gesamtgre ca. 60 kb)

Strukturgen

5'
tsp

3'

primres Transkript (15 kb) Processierung Splicing = hnRNA

"reifes" Transkript = mRNA

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Genstruktur bei Eukaryoten

Das Lysozym-Gen
(Gesamtgre ca. 60 kb)
4 Exons, dazwischen Introns
P

5'
tsp

3'

Beim Splicing B i S li i werden di d d die den Introns entsprechenden Teile der hnRNA tf t h RNA entfernt.
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Genstruktur bei Eukaryoten

Das Lysozym-Gen
(Gesamtgre ca. 60 kb)
4 Exons, dazwischen Introns
P

5'
tsp

3'
primres Transkript (15 kb)

reife mRNA
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mRNA bei Eukaryoten

mRNA Prozessierung:
hnRNA mRNA 5 5' Cap Bildung: du g
5' 5' 7-Methylguanylat

Modifikation des 3' Endes: 3

Addition eines polyA-Schwanzes von bis zu 250 bp Lnge Allmhliche Verkrzung bei Alterung der mRNA

Splicing: S li i
Herausschneiden nicht-codierender interner DNAAbschnitte (zwischen Codons oder in Codons)
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mRNA bei Eukaryoten

Ergebnis der RNA Prozessierung

poly A Schwanz Stopcodon 3' Protein P t i codierende Region R i

Startcodon 5'

5 5' nicht translatierte Region (UTR)

3 3' nicht translatierte Region (UTR)

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Genstruktur bei Eukaryoten

DNA-Sequenz eines KLEINEN Teils eines eukaryontischen Gens

5 CTTATGGCCAATAAGAAAGCTATACACCTGCGTACCCTTATTAAGATCTGACTCAGGGCC
CAAT-Box E-Box AP-1-Box

TAAGTTCCCTCATTTATTATAAATGATTGCTATTAAAAGACGAAGGAGGTCTTTTAACAA
TATA-Box Promotor

AGGAAGGTGAGGATGGGCATCCCAATCCCATCCATCCTCATCTCTGCATCTGCTGCCCTT
Transkriptions-Start

GCCGCCACC atg gccgacacccagacacagGTAAGTACTCAGTCAGAAAAAAGCAGgt 3

Start-Codon (spterer Translationsstart!) Intron

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Genetischer Code Der genetische Code ist die Grundlage fr die geordnete R li i d t Realisierung d genetischen der ti h Information. In ihm wird geregelt, welche Aminosure b i d T A i bei der Translation f welches l ti fr l h Basentriplett in die entstehende Polypeptidkette eingebaut wird. P l tidk tt i b t id g Es gibt einen "universellen" Code, der allerdings bei manchen Organismen Abweichungen aufweist. g Der richtige, jeweils gltige Leseraster wird durch das Start-Codon festgelegt (erstes ATG Start Codon der mRNA).

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Genetischer Code

genetischer Code genetische Information

Der genetische Code ist die Grundlage zur bersetzung von der "Sprache" der Nucleinsuren in die "Sprache" der Proteine / Sprache Aminosuren !!!
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Genetischer Code

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mRNA / Genetischer Code

Transkriptions-Start = Beginn der mRNA 5- TGGGCATCCCAATCCCATCCATCCTCATCTCTGCATCTGCTGCCCTTGCCGCCACC Start-Codon Stop-Codon

atg gccgacatagagacacaggataa...cttagatat tga ctagac...-3 M W A D I E T Q D N/K..L R Y * P T * R H R I x .. L D I D G R H R D T G * .. * I L T

* R

Mgliche bersetzungen der Nukleinsure-Sequenz in AminosureSequenzen (die Aminosure steht jeweils unter der ersten Base des entsprechenden Tripletts; Ein-Buchstaben-Code; * = Stop-Codon)
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Vorlesung: Einfhrung in die Zellbiologie

Zellzyklus
Dieter Frst
Universitt Bonn
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Zellzyklus

Eine der grundlegenden Eigenschaften lebender Zellen ist ihre Fhigkeit zur Vermehrung. g Jede Tochterzelle erhlt eine identische Kopie des genetischen Materials. Zellwachstum, V d Z ll h t Verdopplung d l des Erbmaterials und dessen Weitergabe g mssen przise aufeinander abgestimmt sein. sein
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Zellzyklus

Bei Einzellern sind diese Vorgnge relativ einfach und unmittelbar eingngig: erwnscht ist Vermehrung so rasch wie mglich dies hngt hauptschlich von der Menge der zur Verfgung stehenden Nahrungsmittel ab
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Wachstum einer Kultur von Einzellern

Zellzahl stationre Phase exponentielle Wachstumsphase

lag-Phase

Zeit Z it
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Zellzyklus

Vermehrung bei Prokaryoten:

E.coli ist am besten untersucht: ein zirkulres DNA Molekl, 4x106 bp, 1,4 mm lang in guten Nhrmedien teilen sich diese Bakterien etwa alle 30 min. diese Zeit wird bentigt um die DNA zu bentigt, verdoppeln!
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Zellzyklus

Vermehrung bei Prokaryoten:

die DNA ist an speziellen Membranstrukturen verankert, beim Wachstum der Zelle werden die verdoppelten DNA-Strnge auseinandergezogen, die Zellen wachsen zu etwa doppelter Gre heran, in der Mitte wird ein Zellwand-Septum gebildet. 2 Tochterzellen

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Zellzyklus

Prokaryoten:
Man kennt einige Gene, die diese Vorgnge g , g g steuern: Am besten charakterisiert sind die Enzyme Enzyme, die die Bildung des Septums regulieren (fts Mutanten = filamentation ts) Weitere Gene sind zwar bekannt, ebenso der Einflu einiger Substanzen aber deren Substanzen, genaue Funktion kennt man nicht.
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Zellzyklus bei Eukaryoten

Vielzellige Organismen:
Bei mehrzelligen Organismen mu das Gleichgewicht der unterschiedlichen Zellarten gewahrt bleiben! Teilungen beschrnken sich daher auf Wachstum, Turnover und Regenerationsvorgnge! Es muss also eine Rckkopplung auf die Vermehrungsrate geben. Eine genaue Kontrolle der Vermehrungsfhigkeit ist essenziell fr die Entwicklung mehrzelliger Organismen!

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Zellzyklus bei Eukaryoten die meisten eukaryotischen Zellen bentigen y g etwa 10 - 20 Stunden fr eine Zellteilung viele Zellen in voll entwickelten Organismen teilen sich nicht (Nervenzellen Muskelzellen) (Nervenzellen, manche Zellen teilen sich nur, wenn dies erforderlich ist (Wundheilung) ungeregeltes, ungehemmtes Wachstum ist bei Mehrzellern tdlich (Krebs)
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Mitose G2-Phase G1-Phase / G1 Ph G0-Phase

Interphase

S-Phase

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Zellzyklus bei Eukaryoten

bei Eukaryoten finden die Verdopplung nur in einem Teil des Zellteilungszeitraums statt = S Phase (DNA S-Phase (DNASynthese-Phase) es gibt also einen Z it ibt l i Zeitraum ( (gap , "L k ") zwischen "Lcke") i h S-Phase und Mitose = G2-Phase gleichfalls gibt es einen Zeitraum zwischen Mitose und S-Phase = G1-Phase G1-, S- und G2-Phase bilden gemeinsame die Interphase differenzierte Zellen sind aus dem Zellteilungsgeschehen ausgetreten; sie befinden sich der der G0-Phase die Lnge der G1-Phase ist am variabelsten
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DNA-Gehalt in den Zellzyklus-Phasen

DNA-Gehalt

4xn

2xn

G1-Phase

S-Phase

G2-Phase Mitose

Zeit

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Zellzyklus bei Eukaryoten

Der am besten untersuchte Organismus ist Hefe ( (Saccharomyces cerevisiae): y ) cdc-Mutanten (cell division cycle)

Es gibt drei wichtige Kontrollpunkte: g g p Restriktionspunkt: G1 S

berprfung, berprfung ob alle Voraussetzungen gegeben sind, die sind Verdopplung der DNA durchzufhren. Regulation durch Wachstumsfaktoren, Zellgre, Nhrstoffe g g

G2-M Transition Point: G2 M

be p u g, berprfung, ob z. B. die DNA verdoppelt wurde de e doppe t u de berprfung der 'Qualitt' der DNA

Metaphase Anaphase Metaphase-Anaphase Transition Point:

Anheftung der Chromosomen an die Mitosespindel
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Zellzyklus bei Eukaryoten

G2-M Mitose G2-Phase G1-Phase / G1 Ph G0-Phase Metaphase-Anaphase Tr.

RestriktionsRestriktions punkt

S-Phase

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Zellzyklus bei Eukaryoten Beispiele f b t ili t Proteine: B i i l fr beteiligte P t i Beim Menschen finden etwa 108 Zellteilungen pro Minuten statt! Sie dienen (auer in der Embryonalentwicklung) berwiegend dem Ersatz kurzlebiger, differenzierter Zellen kurzlebiger Zellen. Die Steuerung erfolgt weitgehend durch Wachstumsfaktoren und Hormone.
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Vorlesung: Einfhrung in die Zellbiologie

Mitose + Meiose =
eigentlich

Schulwissen !!!
Dieter Frst
Universitt Bonn
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Stadien der Mitose

Interphase

Prophase Prometaphase p Metaphase Anaphase Telophase T l h

Mitose

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Mitose Prophase:
Chromatin kondensiert zu Chromosomen (bestehend aus 2 Chromatiden) unmittelbar ausserhalb der Kernhlle beginnt sich im Cytoplasma ein Spindelapparat zu bilden, entweder:
mit Centriolen oder ohne Centriolen
(Polkappen, keine Aster) (Spindelpole mit C. im Zentrum; "Aster" aus Mikrotubuli)
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Mitose Prophase:
die Prophase d di P h dauert i d R in der Regel relativ l l l i lang abruptes Ende durch Zusammenbruch der Kernhlle: Fragmentation innerhalb von Sekunden! es verbleiben Vesikel in den Polregionen

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Prophase

Mitose in einer Endospermzelle von Haemanthus katharinae Kleinig & Sitte, 1986

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Mitose

Prometaphase:
in unregelmigen Bewegungen verlagern sich die Chromosomen zum Zentrum der Spindel = Spindelquator die Chromosomen sind am Centromer verankert die Chromosomenarme hngen seitlich heraus
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Prometaphase

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Mitose Metaphase:
Chromosomen nehmen ihre endgltige Position in der Spindel ein Chromatin ist am strksten kondensiert (bester Zeitpunkt fr lichtmikroskopische y ) Chromosomenanalyse) dieser Zustand kann durch "Spindelgifte" arretiert werden die Teilung der Centromeren wird vorbereitet die Chromatiden verselbstndigen sich
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Metaphase

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Menschlicher Chromosomensatz
( (lichtmikroskopische Darstellung von Metaphase-Chromosomen) p g p )

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Mitose Anaphase:
die Chromatiden haben sich verselbstndigt die Tochterchromatiden werden an ihren Kinetochoren zu den Spindelpolen gezogen die Spindel streckt sich p sobald die Chromatiden maximal voneinander entfernt sind, beginnt sich die Spindel abzubauen
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Anaphase

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spte Anaphase

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Mitose Telophase: Bildung einer neuen Kernhlle durch Fusion von Vesikeln Dekondensation des Chromatins

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Telophase

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Cytokinese

Bei tierischen Zellen werden die Tochterzellen am Ende der Telophase aktiv abgeschnrt: Ring von Aktinfilamenten + Myosin ('kontraktiler Ring ) Ring') Bei Pfl B i Pflanzenzellen ordnen sich Vesikel i d ll d i h V ik l in der quatorialebene an, fusionieren, und es bildet sich di primre Z ll i h die i Zellwand. d

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Mitose tierische Zellen

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Mitose tierische Zellen

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Mitose pflanzliche Zellen

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Mitosespindel

KinetochorMikrotubuli
(+) (+) ( ) (+) (+)

Astral Astral(+) Mikrotubuli

(-) (+)

(-) ( ) (+) (+) (+)

(+)

Centrosom

PolMikrotubuli

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Mitosespindel

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Mitosespindel

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Mitosespindel
Motorproteine in der Mitosespindel: Mikrotubuli Motoren Mikrotubuli-Motoren orientieren die Mitosespindel im Raum Motorproteine in den Kinetochoren ziehen die Chromatiden/Chromosomen zu den Spindelpolen und verkrzen gleichzeitig die Enden der MT Motorproteine in den Spindelpolen verkrzen die MT

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MEIOSE

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Meiose
es geht um die Mglichkeit zwei Mglichkeit, unterschiedliche Genome zu durchmischen Rekombination! R k bi ti ! Grund / Vorteil:
bei einfachen Mitosen entstehen erbgleiche Tochterzellen Mutationen hufen sich an Durchmischung vermindert die "Mutationsbrde"

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Meiose
Spezialform der Mitose bei der Gametenbildung Reduktion vom diploiden auf den haploiden Zustand besteht aus zwei aufeinanderfolgenden "meiotischen" Teilungen ohne DNA-Replikation g p in der dazwischenliegende Interphase! der grte Unterschied liegt in der Prophase der ersten meiotischen T il t i ti h Teilung, di wesentlich die tli h lnger dauert und in der unterschiedliche Morphologien der Chromosomen erkennbar sind
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Meiose
Ablauf in der bersicht: DNA R lik ti Replikation 1. meiotische Teilung 2. meiotische Teilung Prophase 1 Prophase 2 Leptotn Metaphase 2 Zygotn Anaphase 2 Pachytn Interkinese Telophase 2 Diplotn keine Replikation Cytokinese 2 Diakinese Metaphase 1 p Anaphase 1 Telophase 1
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Prophase

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Meiose
LEPTOTN: Chromosomen kondensieren und werden als zarte Strnge sichtbar = Chromonemen in Lngsrichtung treten an den Chromosomen Verdickungen auf = Chromomere stark kondensiertes chromatin alle Chromonemen sind schleifenfrmig zu einem Punkt der inneren Kernhlle hin orientiert "Bukettstadium"
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Leptotn
Chromonemen Chromomere

Kernhlle

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Meiose
ZYGOTN: Paarung der h P d homologen Ch l Chromosomen b ber ihre gesamte Lnge = Synapsis gleichzeitig kondensieren die Chromosomen weiter

Schertha an

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Meiose
PACHYTN: Synapsis der homologen Chromosomen ist vollstndig man erkennt eine haploide Zahl von Chromosomen-Paarungsverbnden, Bivalenten "Vierstrangstadium der Bivalente" die Chromosomen sind ber "synaptonemale Komplexe" fest miteinander verbunden
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Meiose
PACHYTN: whrend des Pachytns kommt es zum Austausch von DNA-Stcken homologer Chromatiden = Rekombination! dies setzt przise DNA-Reparaturmechanismen p p voraus!

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Pachytn

synaptonemale Komplexe
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Meiose
DIPLOTN: die synaptonemalen Komplexe lsen sich wieder auf die Chromatiden weichen auseinander die Chromatiden hngen an einigen Punkten, den Chiasmata zusammen Chiasmata, dort hat Stckaustausch stattgefunden!

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Diplotn
Vierstrangstadium

Chiasmata
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Diplotn
Diplotn

Chromatiden Chiasmata

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Diplotn

DIPLOTN: meist d l i t das lngste St di t Stadium d M i der Meiose te e se e o de sat o der Chromosomen teilweise Dekondensation de C o oso e Transkription kann stattfinden die Oocyten von Amphibien verbleiben oft monatelang in diesem Stadium "Lampenbrstenchromosomen" gewaltige Vermehrung des Cytoplasmas
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Diplotn

kondensiert dekondensiert: Transkription kann stattfinden Lampenbrstenchromosomen

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Meiose
DIAKINESE: Ende der Prophase, bergang zur Metaphase (entspricht also Prometaphase der Mitose) Chiasmata nur noch an den Enden der Chromosomen Kernhlle lst sich auf Spindelapparat bildet sich p pp

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Meiose
Metaphase 1 Anaphase 1: Erst jetzt Auflsung der Chiasmata! Die kompletten Chromosomen werden auseinandergezogen, nicht die Chromatiden! Telophase 1: Abschluss der ersten Teilung

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Meiose
im Anschlu daran findet eine zweite Teilung statt, ohne dass die DNA repliziert wird! diesmal werden wie bei jeder Mitose die werden, Mitose, Chromatiden getrennt Ergebnis: 4 haploide, genetisch nicht identische Zellen!

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Meiose
Meiose

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Meiose
2n 4n 4n 4 4n 2n

MTOC / Zentriolen

n 2n n 2n

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Meiose

Mitose

Interphase

2n 4n

2n 4n

Interphase I h

(Prophase) Metaphase I Ana-/Telophase I A /T l h Interkinese Metaphase II p Anaphase II Cytokinese II (Prometaphase)

2n

Metaphase Anaphase Cytokinese

2n

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