CLNICAS MDICAS DE NORTEAMRICA

SAUNDERS

Med Clin N Am 91 (2007) 937-961

Nanoneurologa y las cuatro P de la regeneracin del sistema nervioso central: preservar, permitir, promover, plasticidad
Rutledge Ellis-Behnke, PhDa,b,*
a

MIT, Brain and Cognitive Sciences, 46-6007, 43 Vassar Street, Cambridge, MA 02139, USA b University of Hong Kong Li Ka Shing Faculty of Medicine, Anatomy, 21 Sassoon Road, Pokfulam, Hong Kong SAR, China

Nanoescala frente a nanotecnologa

La nanoneurologa es una ciencia totalmente nueva; sin embargo, muchos tratamientos neurolgicos existentes son a nanoescala, como frmacos que incluyen cloruro de litio, antidepresivos y anticoagulantes para el ictus. Aunque estos tratamientos tienen el aspecto de la nanotecnologa por el tamao de los materiales, existen ligeras diferencias, aunque fundamentales. Existen tres importantes diferencias: 1. Cuando se ingieren, pequeas molculas y sus metabolitos afectan al cerebro y a sus funciones, como sucede con los antidepresivos. La nanotecnologa libera molculas individuales en dianas especficas sin descomponerse hasta que se consigue el efecto teraputico, y luego el material se descompone y se elimina. Con este tipo de formulacin y construccin, la cantidad liberada puede disminuir de 10 a 50 veces. 2. Muchos productos farmacuticos tienen cargadores que, en algunos casos, facilitan la liberacin y la aplicacin. Se han introducido algunos nuevos productos mdicos que estn nanorrecubiertos con una capa gruesa unimolecular para facilitar la solubilizacin y el transporte. El frmaco slo se libera cuando alcanza la diana correcta. 3. La quimioterapia utiliza campos magnticos para dirigirse a los tumores, por conexin del frmaco con el material magntico. Luego se utiliza el campo magntico para concentrar las partculas a liberar con un estmulo externo y se libera
*Autor para la correspondencia. MIT, Brain and Cognitive Sciences, 46-6007, 43 Vassar Street, Cambridge, MA 02139, USA. Direccin electrnica: rutledg@mit.edu.

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una alta dosis en el rea seleccionada. Mediante nanotecnologa, el tumor podra calentarse con radioondas de alta frecuencia. Slo se calentara el rea con una alta concentracin de nanopartculas, suficiente para destruir las clulas cancerosas, dejando indemne el tejido circundante.

La nanoliberacin de material teraputico en el cerebro requiere un cambio de pensamiento

Los nanomateriales reales se liberan como una estructura especfica, o combinacin de estructuras, diseados para liberar el frmaco intacto, directamente en el lugar, por lo que se requiere una dosis mucho menor. Estos materiales utilizan estructuras moleculares deliberadas y muy especficas que pueden interaccionar con neuronas o estructuras proteicas dentro de las clulas. Normalmente, los nanomateriales se liberan en la clula intacta por endocitosis o pinocitosis, pero en algunos casos, la molcula pasar por la membrana celular y a la clula con muy poca alteracin de la bicapa lipdica. Sin embargo, esta capacidad es un arma de doble filo, porque los materiales que antes se supona que no eran txicos a mayor escala y dosis ms altas, podran tener efectos secundarios perjudiciales y txicos cuando los nanogramos del material se concentran y liberan en clulas especficas.

Nanomaterial frente a nanoactivado

Es importante comprender la diferencia entre nanomaterial y nanoactivado. La definicin tradicional de un nanomaterial es un tamao menor de 100 nm. Sin embargo, algunas protenas, como la tubulina [1], que es mucho mayor de 100 nm, tambin pueden considerarse nanotecnologa. La nanoactivacin es utilizar la nanotecnologa para permitir que un frmaco o material sea utilizado de forma ms eficiente por un sistema, y puede dar una nueva vida a frmacos antiguos por reduccin de los efectos secundarios mediante un direccionamiento eficiente de los materiales y un aumento de la biodisponibilidad. Los nanomateriales estn muy estructurados a escala molecular y pueden recubrirse con una capa de material de tan slo una molcula. El recubrimiento es un ejemplo de nanoactivacin. La tecnologa NanoCrystal de Elan (Elan Corporation, Dubln, Irlanda) es un ejemplo de un frmaco nanoactivado que se utilizar en un ensayo clnico de fase III con una formulacin inyectable de palmitato de paliperidona, un frmaco para la esquizofrenia. Con esta tecnologa se reduce el tamao del frmaco y aumenta la biodisponibilidad. La nanoactivacin puede aplicarse a frmacos antiguos con problemas de solubilidad o disearse en nuevos frmacos como una parte integral del producto.

Sustituir los procedimientos neurolgicos actuales

La nanotecnologa sustituir tambin los procedimientos existentes, con el empleo de un mecanismo de liberacin ms seguro, sin efectos perjudiciales a largo plazo. Actualmente, para llenar los aneurismas cerebrales, se inserta un cable en un catter que provoca la coagulacin de la sangre y la curacin del rea. Se est investigando

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la utilizacin de material molecular autoensamblado que se inyectara en el aneurisma, que se autoensambla a medida que se inyecta (Ellis-Behnke et al, datos inditos, 2005). Permitira la curacin del rea sin necesidad de mantener insertado un cable a largo plazo en el paciente o la posible cizalladura de un cogulo resultante, que podra causar un ictus. Los estimuladores cerebrales profundos, utilizados para tratar la enfermedad de Parkinson, deben ajustarse cada 4 semanas. El nanorrecubrimiento del implante neural con nanoplata dejara el electrodo libre de una reaccin de cuerpo extrao y tambin garantizara que la fuerza y el rea de estimulacin tendran que ajustarse slo una vez al ao [2-4]. Aunque cualquier cambio de dosis, mtodo de liberacin, forma de intervencin, reduccin de efectos secundarios y frecuencia de ajuste seran muy beneficiosos, la nanotecnologa parece ofrecerlos todos simultneamente.

Plan para abordar un traumatismo neural

Hasta hace poco, la recuperacin funcional del sistema nervioso central (SNC) era un objetivo inalcanzable y la nanotecnologa era una ciencia invisible. Igual que en la vida, no existe ninguna panacea, pero un tratamiento bien planificado a lo largo del tiempo producir un retorno funcional en el SNC. Las cuatro P de regeneracin del SNC forman un nuevo plan para tratar la lesin del SNC [5] y las pruebas muestran que la nanotecnologa se utiliza actualmente para la rehabilitacin del ictus y, en varios ensayos clnicos, el tratamiento del bloqueo de la formacin de cicatrices en la mdula espinal. Los cuatro componentes son preservar, permitir, promover y plasticidad.

Las cuatro P de la regeneracin del sistema nervioso central

Antes se pensaba que el factor determinante en la recuperacin funcional era la cantidad de inervacin. Sin embargo, los expertos saben ahora que el nivel de recuperacin viene determinado no slo por el nmero de axones sino tambin por la densidad local de sus conexiones y el trabajo de rehabilitacin realizado para dirigir la reinervacin y el refinamiento con el entrenamiento. Deben estudiarse cuatro temas distintos para que se produzca la regeneracin satisfactoria del SNC: 1. Preservar: cmo pueden mantenerse vivas las neuronas con axones daados durante tiempo suficiente para que vuelvan a crecer y se obtenga una regeneracin funcional? 2. Permitir: cmo puede crearse un entorno permisivo que permita crecer a los axones a travs del foco de lesin? 3. Promover: cmo puede promoverse el crecimiento axonal en la direccin correcta que coincida con el inicio del entorno permisivo? 4. Plasticidad: cmo pueden promoverse los cambios en la morfologa in vivo de forma que las conexiones axonales sean funcionales en la diana, se cartografen correctamente y sean suficientes para dirigir el comportamiento?

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En la figura 1 se muestra la secuencia de cmo debe iniciarse cada una de las cuatro P para producir el retorno mximo de la funcin. La segunda P, promover, tiene un componente en todo el proceso, que es promover el crecimiento o la elongacin axonal. Cuando se reconectan los axones al tejido diana, debe promoverse el crecimiento hacia el tejido circundante, de forma que la estructura se autoconectar para maximizar la entrada de los axones regenerados. Las otras P (preservar, permitir y plasticidad) tienen un componente inicial y un componente tardo.

Tiempo desde la lesin del SNC

Momento y duracin del tratamiento para cada una de las cuatro P

Preservar

P1

Antiapoptosis

Soporte de factores de crecimiento

Permitir Promover

P2 P3

Entorno permisivo de la cicatriz

Tejido diana permisivo

Promover el crecimiento (elongacin)

Plasticidad

P4

Plasticidad poslesin (inmediata)

Promocin de la plasticidad en el tejido diana (arborizacin)

Tiempo A B C D E

Fig. 1. Cada una de las cuatro P de regeneracin se representa con barras horizontales que indican el momento y la duracin en que debe estar activo el tratamiento. P1 es preservar clulas y se divide en dos partes: antiapoptosis y tratamiento antinecrosis y el soporte de factores de crecimiento durante la elongacin. P2 tambin se divide en dos partes: el primer tratamiento es crear un entorno permisivo alrededor del foco de lesin; luego el tejido diana debe ser permisivo para los axones reinervados. P3 es la promocin del crecimiento de los axones en un modo de elongacin. P4, plasticidad, tiene dos partes: la plasticidad poslesin inmediata debe reducirse para que el llenado sea mnimo. Y, mientras los axones se reconectan en el tejido diana, la plasticidad debe hiperregularse. Esta funcin puede conseguirse con factores o entrenamiento. La lnea del tiempo va de izquierda a derecha y empieza en el momento de producirse la lesin. A es el momento de producirse la lesin, B es 24 horas despus de la lesin, C es de 72 a 96 horas despus de la lesin, D es de 2 semanas a 4 meses y puede prolongarse ms, y E son los aos.

Primera P: preservar la clula

Hasta hace poco, el rea de preservacin celular era la ms importante de la regeneracin del SNC, porque sin la clula viva la regeneracin neuronal es imposible. Se dispone de tratamientos, como la hipotermia, que pueden mantener vivo el tejido del SNC o retrasar la apoptosis, pero slo puede utilizarse en el quirfano. La nanotecnologa puede mantener vivas las clulas [6]: 1) permitiendo una mejor liberacin de una molcula pequea, como la metilprednisona [7,8]; 2) transfecciones con un mtodo de liberacin vrica conocida con un nanocomplejo, o 3) la promesa de la tecnologa de interferencia mediada por

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ARN (ARNi) que impactar en el futuro de este campo. Cada tratamiento es nuevo o tiene un mejor control y liberacin, debido a la nanotecnologa. Para comprender mejor qu se entiende por preservar, deben responderse algunas preguntas fundamentales.

Preguntas que deben responderse para determinar la prdida celular

Deben estudiarse seis preguntas para determinar la velocidad y la cantidad de la prdida celular: 1. Cul es la distancia desde el soma hasta el lugar de la lesin? La liberacin del tratamiento puede ser eficaz a travs de distancias relativamente largas por un transporte retrgrado que utiliza el sistema de transporte propio de la clula o la liberacin que estar disponible en el lugar de la lesin. 2. Cul es la gravedad de la lesin? Esta pregunta determinar no slo la dosis y la duracin del tratamiento, sino tambin, y con ayuda de la nanotecnologa, algunos medios nuevos de liberacin al lugar, que reducir la complicacin. 3. Se ha alterado el aporte sanguneo de la poblacin celular? Debido a que puede utilizarse el propio sistema de transporte celular, la alteracin del aporte sanguneo hara que el tratamiento no fuera efectivo, porque la liberacin del mismo requiere un transporte retrgrado activo que requiere energa. Adems, el aporte sanguneo puede alterarse de dos formas: a travs de una hemorragia y por bloqueo de un cogulo que produce un episodio isqumico. La RM funcional ser la primera prueba para determinar el tipo de ictus, de forma que pueda tomarse la accin adecuada. Puede utilizarse factor activador de plasmingeno tisular (TPA) [9-12] para abrir el aporte sanguneo bloqueado, seguido de anticoagulantes para mantener perfundida el rea. La lesin con hemorragia y reperfusin pueden ser muy similares segn la respuesta a la pregunta nmero cuatro. 4. Cunto tiempo estuvo alterado el aporte sanguneo? El tratamiento cambiar segn la duracin. Si el aporte sanguneo ha estado alterado durante un perodo prolongado, entonces se producir una lesin significativa a la reperfusin, causada por el extremo astroctico de la abertura de la barrera hematoenceflica. La nanotecnologa puede minimizar esta lesin por prerrecubrimiento del interior de la arteria con un sellador de fugas molecular o con antioxidantes moleculares que limitan la infiltracin de molculas inflamatorias [13]. 5. Est el soma separado del tejido diana? La localizacin del tratamiento cambiara a un lugar que permitiera el transporte retrgrado de los somas de la poblacin neuronal afectada. Si se utiliz un nanotransportador para una transfeccin con una secuencia diana para la poblacin celular afectada, entonces la inyeccin no tendra que estar en un lugar especfico. Recientemente, se han desarrollado varias tcnicas de transfeccin no vricas que utilizan el autoensamblado molecular para construir el vehculo de liberacin que tiene un sistema de direccionamiento para el tejido neural [5]. La nanotecnologa muestra nuevos tratamientos muy prometedores en el laboratorio, como liberar Bcl-2 al cuerpo celular para mantener vivas las clulas afectadas de forma que vuelvan a crecer. 6. Se ha eliminado o curado la causa de la lesin y est relacionada con un traumatismo o enfermedad? Si la causa de la disrupcin es fsica, debe cambiarse el lugar

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del tratamiento para que se pueda transportar hasta el soma. Sin embargo, si la causa est relacionada con una enfermedad, puede alterarse la localizacin del tratamiento y la capacidad de la neurona de transportar el frmaco. Cada cuestin tiene muchos aspectos diferentes; sin embargo, el principal objetivo es mantener las clulas vivas o preservarlas. Varios mtodos antiguos oscilan entre la hipotermia y los antiinflamatorios. Hasta la reciente introduccin de la nanotecnologa, no era posible transfectar clulas con el ADN necesario para mantenerlas o invertir la cascada de destruccin iniciada por la lesin. La nanotecnologa, junto con la aparicin de la era del ARNi [14], pronto permitir la liberacin exacta de qu debe conectarse y desconectarse para preservar el tejido neural. Pero, igual que en la mayora de lesiones, el tratamiento es algo ms que una panacea. La siguiente P es sobre la creacin de un entorno permisivo.

Segunda P: crear un entorno permisivo

Deben resolverse varios obstculos considerables para conseguir la regeneracin axonal despus de una lesin en el SNC. Estos obstculos son: 1) la formacin de tejido cicatrizal despus de una lesin tisular [15-21]; 2) los vacos en el tejido nervioso originados durante la fagocitosis de clulas muertas despus de la lesin [17,22-28]; 3) los factores que inhiben el crecimiento axonal en el SNC maduro de los mamferos [15,17,22-34], y 4) la imposibilidad de muchas neuronas adultas de iniciar la extensin axonal [17,22-26,29,31,35,36]. La recuperacin de la conducta funcional ser una realidad con la reduccin o resolucin de los dos primeros y quizs del tercero de los obstculos descritos anteriormente, y la creacin de un entorno permisivo para el recrecimiento axonal con nanomaterial biolgico sinttico, con componentes que se descompongan en componentes bsicos beneficiosos y no produzcan efectos adversos en el SNC.

Tres vas para crear un entorno permisivo

Se dispone de tres vas por las que puede crearse un entorno permisivo: 1) bloqueo de la formacin de cicatrices; 2) eliminacin de la cicatriz y seales inhibidoras del crecimiento acompaantes, y 3) el uso de materiales puente como injertos o pptidos artificiales autoensamblados. La inactivacin de seales inhibidoras en la cicatriz crea un entorno permisivo local en el foco de la lesin. Sin embargo, el entorno permisivo no se limita a la cicatriz y al rea que rodea la lesin sino que se extiende hasta los factores inhibidores del tejido diana, como efrinas y receptores Eph, que bloquean o causan el colapso del cono del crecimiento axonal. En el pasado, la regeneracin era la eliminacin de obstculos al crecimiento axonal. Las neuronas que habitualmente pueden crecer, pueden no hacerlo durante una lesin, segn las condiciones del entorno local del foco de lesin. El objetivo es atacar al entorno local de forma que permita que las neuronas crezcan hacia el tejido diana. Si la va no es permisiva, las neuronas dejarn de crecer y producirn bulbos de retraccin y una cavidad.

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Preguntas que deben responderse para crear un entorno permisivo

Deben responderse siete preguntas para crear un entorno permisivo para la regeneracin: 1. Cunto tiempo tiene la lesin? La respuesta determinar si puede bloquearse la formacin de cicatrices o si es necesario eliminar el rea de la cicatriz. El tratamiento con condroitinasa ABC [16] es uno de los xitos ms notables para bloquear la cicatriz, junto con el bloqueo de la formacin de la cicatriz [31]. El tratamiento de Stichel se est utilizando en ensayos clnicos en Europa. Si la lesin es antigua, entonces la cicatriz est totalmente desarrollada y debe eliminarse antes de que pueda iniciarse una regeneracin til. Un experimento que utiliza un nanopptido autoensamblado (SAP) muestra el potencial de la nanotecnologa y cmo estudia el bloqueo de la formacin de la cicatriz junto con la regeneracin resultante [5]. 2. Existe un vaco entre el axn y el tejido diana? La existencia de un vaco en el foco de la lesin seala que la lesin tiene por lo menos 6 meses. Se necesita algn tipo de material puente para permitir la reconexin del tejido. El uso de SAP ha permitido superar este obstculo al recrecimiento, haciendo un gran avance en el campo de la nanotecnologa. Esta cavidad es el mayor obstculo al recrecimiento que existe en el SNC (fig. 2). La figura 2 muestra una lesin en el cerebro y la posterior reconexin del tejido que llev a una retorno de la funcin. Este nanomaterial fluye hacia la cavidad y crea un puente que se descompone, permitiendo que el tejido neural ocupe el lugar y se reconecte con el tejido diana.

Fig. 2. Los cortes parasagitales son de animales sacricados a tiempos de supervivencia de un mes despus de la lesin e inyeccin. Las guras muestran casos de supervivencia de 24 horas de dos animales diferentes tratados con suero salino (izquierda) y saporina sola (derecha). Ntese cmo se ha curado el tejido en el caso tratado. Barras de escala: 100 micrones.

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3. Produce queloides el paciente despus de la lesin? La formacin de queloides sigue siendo un misterio y debe explorarse para determinar si la poblacin que forma queloides tambin puede producir cicatrices ms intensas in vivo. Debido a que la formacin de queloides es, quizs, una variacin molecular en el depsito celular y la formacin de matriz extracelular, la nanotecnologa, con su capacidad para controlar el ensamblaje molecular in vivo, permite mejorar el resultado de los procedimientos neurales realizados en la poblacin que forma queloides. La curacin de la piel y del cerebro es similar, con el aislamiento del interior desde el exterior y con orgenes en el tejido ectodrmico en ambos casos. Cmo se cura la piel de una persona puede ser un gran indicador del resultado de cualquier procedimiento neurolgico en ese paciente [37-41]. 4. Qu edad tienen las neuronas que han de reconectarse? La edad de la poblacin neuronal afectada marca la diferencia. Se ha realizado mucho trabajo en epilpticos que se han sometido a una hemisferectoma parcial o total y una reconexin posterior en el hemisferio opuesto, en nios de hasta 16 aos [42-46]. Incluso despus de un ictus, el cerebro de muchos adultos se reconectar, aunque no de la misma forma que en los pacientes ms jvenes. La edad de los axones y su capacidad de crecer parece basarse en la salud del individuo y no en la edad de la neurona. Sin embargo, el tamao del axn parece importante. Los axones que parecen tener la capacidad de volver a crecer son aquellos que tienen un dimetro ms pequeo cuando se lesionan, igual que un rbol con un tronco de gran dimetro tiene ms opciones de morir que de volver a crecer cuando se corta. 5. Se ha eliminado o curado la causa de la lesin y est relacionada con un traumatismo o una enfermedad? Debe eliminarse cualquier obstculo fsico, o el entorno no podr crearse. 6. A qu distancia deben crecer los axones para reconectarse con el tejido diana? La distancia determinar el tiempo, y la duracin de la lesin debe ser permisiva. Segn la estructura que se est reinervando, puede producirse un recableado plstico de la estructura, que puede aadir hasta 10 aos al reloj de la regeneracin. La opinin previa de que la vctima de un ictus podra tener poca o ninguna recuperacin de la funcin al cabo de un ao es obsoleta. Con rehabilitacin constante, se ha demostrado que la funcin se recupera incluso despus de un perodo de recuperacin de un ao [47]. Slo existe la promesa de que la nanomedicina puede liberar factores de sostenibilidad a largo plazo, como factores de crecimiento, durante la fase de crecimiento y reconexin del viaje de los axones. 7. Encontrarn los axones un gradiente durante la regeneracin? La creacin de un entorno permisivo debe extenderse al tejido diana. Existen ejemplos en algunos tratamientos previos que utilizan factores de crecimiento que son transfectados a las clulas, luego trasplantadas al cerebro de individuos con enfermedad de Parkinson [48-51]. Tambin se est explorando la nanoliberacin de estos factores, no slo de neuronas sino tambin de la gla. Existen molculas inhibidoras, como IN1 en la mdula espinal, que bloquean gran parte del crecimiento axonal. Este estudio utiliza el gradiente especficamente en el sistema visual y se explica en relacin con las efrinas y los receptores Eph.

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Nuevo tratamiento para crear un entorno permisivo y soldar el tejido cerebral

Utilizando el sistema visual del mamfero como modelo, los autores utilizaron un soporte de nanofibras peptdicas autoensambladas para crear un entorno permisivo no slo para regenerar axones en el lugar de una lesin aguda, sino tambin para soldar el tejido cerebral. En experimentos que utilizan una va ptica daada en el hmster, se observ que los axones regenerados se reconectaban con tejidos diana con densidad suficiente para promover el retorno funcional de la visin, como muestra la conducta de orientacin producida visualmente.

Soporte de nanofibras peptdicas autoensambladas

El nuevo tratamiento en este estudio utiliz un pptido de autoensamblado que forma nanofibras espontneamente [52-56], creando una estructura puente tisular tipo soporte que se supuso proporcionaba un marco para la reinervacin parcial de axones con potencial regenerativo en animales tanto jvenes como adultos. Debido a que las fibras nanopeptdicas son a nanoescala, probablemente existe una interaccin directa entre el soporte peptdico, la matriz extracelular y las clulas neurales a ambos lados de la lesin. Estas estructuras crean un soporte de nanofibras que conectan los dos lados de la lesin, facilitando el movimiento de clulas en el soporte. El soporte peptdico crea un entorno permisivo para el crecimiento axonal, al tiempo que frena o previene la formacin normal de una cicatriz en una fase inicial. Este material ofrece un nuevo tratamiento para mejorar o derivar disrupciones tisulares despus de una lesin neuronal. Los soportes de nanofibras peptdicas autoensambladas son materiales biolgicos sintticos formados por ensamblaje de pptidos inicos autocomplementarios [52-59] y se disean con L-aminocidos positivos y negativos alternantes que forman soportes muy hidratados en presencia de sales a concentracin fisiolgica, como suero salino, medio de cultivo tisular, soluciones fisiolgicas o lquidos corporales humanos como lquido cefalorraqudeo [52-54]. El soporte consta de un pptido inico de hoja que contiene residuos cargados un 50% [52-54]. Se han diseado, sintetizado y caracterizado varios pptidos autoensamblados adicionales para la formacin de matriz facilitada por sales [52-54]. El soporte peptdico consta de nanofibras entretejidas; las fibras individuales tienen aproximadamente 10 nm de dimetro. La densidad de nanofibras se relaciona con la concentracin de la solucin peptdica. El soporte de nanofibras peptdico diseado tiene varias ventajas respecto a los biomateriales de polmeros actualmente disponibles: 1. El soporte peptdico forma una red de nanofibras similares en escala a la matriz extracelular natural y, por tanto, ofrece un entorno in vivo para el crecimiento, la migracin y la diferenciacin celular [56]. 2. Puede descomponerse en L-aminocidos naturales y potencialmente puede ser utilizado por el tejido circundante. 3. Es sinttico y libre de los contaminantes qumicos y biolgicos habitualmente presentes en los materiales de soporte derivados de animales. 4. Es biolgicamente inerte, por lo que se evita, por tanto, el problema de una respuesta inmunitaria o rechazo del tejido neural.

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El soporte de nanofibras peptdicas no slo representa una nueva tecnologa nanobiomdica de reparacin y restauracin de tejido sino que tambin ofrece la posibilidad de un tratamiento eficaz de un traumatismo en el SNC o en otro tejido u rgano. La eliminacin del bloqueo del crecimiento axonal no producir regeneracin funcional sola, excepto en animales jvenes. Una vez preservadas las neuronas y que el entorno permita el crecimiento axonal a travs de una cicatriz y en el tejido diana debe promoverse el crecimiento axonal, que es la tercera de las cuatro P.

Tercera P: promover el crecimiento neuronal

Una vez creado el entorno permisivo, la siguiente tarea es restaurar la capacidad de las neuronas del SNC de elongar y promover el crecimiento. Este difcil problema tiene dos componentes que deben estudiarse de forma temporalmente distinta. El reloj tiene que atrasarse en la neurona y restablecer el desarrollo inicial, lo que significa reducir la transmisin y elevar la elongacin, garantizando al mismo tiempo que el entorno a travs del que las neuronas deben crecer es permisivo. Previamente, la regeneracin era simplemente la eliminacin de las seales inhibidoras, pero se demostr que no era adecuado para lograr la recuperacin funcional en el SNC. Al inicio del desarrollo, durante la fase de elongacin del crecimiento, muchas neuronas del SNC pueden crecer a travs de un entorno permisivo, sin ninguna promocin. Sin embargo, parece que esta capacidad se pierde tras el desarrollo inicial. La suposicin es que las neuronas se preservan con xito y que se ha creado un entorno permisivo.

Preguntas que deben considerarse para promover la regeneracin del sistema nervioso central
Para promover con xito la elongacin neuronal y la reinervacin posterior del SNC, deben considerarse las siete preguntas siguientes: 1. Es accesible la poblacin neuronal? Es en esta rea donde la nanotecnologa puede conseguir el mayor impacto. Con algunas de las nuevas tecnologas de direccionamiento y encapsulacin, junto con la ventaja del tamao que permite la alta permeabilidad de la transfeccin celular, las velocidades y las velocidades de liberacin de frmacos pueden aumentar de 10 a 100 veces, sin necesidad de ningn vehculo que cause un dao secundario a la poblacin celular diana. Este tema cambia luego desde si las clulas son o no accesibles hasta cul es la mejor forma para dirigir la liberacin del material a esta clula [5]. Se utiliz una tcnica de transfeccin no vrica que permita administrar el tratamiento en el foco de la lesin y transportarlo retrgradamente a la poblacin neuronal afectada. 2. Durante cunto tiempo tiene que crecer la neurona para alcanzar el tejido diana? El tiempo se determina por la distancia necesaria para la reinervacin. Adems, tambin debe conocerse el recableado necesario para recuperar la funcin, que se estudiar en la cuarta seccin sobre plasticidad. 3. Cul es la distancia desde el soma hasta el cono de crecimiento? Esta informacin es importante porque esta distancia determina la duracin de la promocin

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del crecimiento necesario para reinervar el tejido diana. Tambin debe conocerse el tiempo que tarda la sntesis proteica en suministrar el cono de crecimiento. 4. Debe la neurona tener colaterales o un axn entero? El tema de las colaterales o la necesidad de que vuelva a crecer todo el axn determina la duracin y el tipo de promocin necesarios para lograr la recuperacin funcional. 5. Cundo encontrar el axn un gradiente? Para superar las influencias negativas de un gradiente en el crecimiento axonal, puede ser necesario manipular la tasa metablica para superar el gradiente temporal. La capacidad de la nanotecnologa para estabilizar protenas y liberar materiales a nivel intracelular puede tener un impacto directo para cambiar la produccin celular de otras protenas no relacionadas con el crecimiento y mantener las clulas vivas. Esto es incluso ms adecuado al considerar la aparicin de ARNi, que puede dirigirse a la clula, y su capacidad para detener la produccin de estas protenas [14]. Imaginar que se tiene la secuencia correcta para detener la descomposicin de la protena precursora amiloide (PPA) en el lugar A-. 6. Tendr que regenerarse el tejido de sostn? Se necesita un entorno de sostn que no slo pueda promover el crecimiento sino tambin apoyarlo para que se produzca la reinervacin. Se encuentra un ejemplo en la mdula espinal: si se forma una cavidad, la capacidad de los axones de cruzar este vaco es inexistente. La promocin del crecimiento no se limita a los axones, y tambin se extiende a la promocin de la remielinizacin. Seuelos para el sistema inmunitario, como la inyeccin de acetato de glatirmero para la esclerosis mltiple, pueden facilitar la regeneracin del tejido de sostn [60-62]. 7. Qu tipos de neuronas (p. ej., proyeccin, interneurona, transmisor) deben regenerarse? Es crucial identificar qu poblacin neuronal debe regenerarse. Cada tipo de neurona tiene sus propias propiedades y necesidades para que el crecimiento sea satisfactorio. Estas preguntas ayudan a determinar el abordaje y los mtodos que pueden utilizarse al estudiar el problema de la promocin del crecimiento axonal. Deben estudiarse dos temas distintos al promover el crecimiento axonal: 1) hacer que los axones se elonguen de forma similar a la fase inicial del desarrollo, y 2) hacer que la seal para el crecimiento cambie de elongacin a arborizacin cuando se alcanza el tejido diana. La promocin del crecimiento para la regeneracin es un rea relativamente nueva. Hasta hace poco, el tema dominante en regeneracin era retirar la cicatriz o molculas inhibidoras, que los expertos pensaban que poda causar la regeneracin espontnea. La percepcin errnea de este concepto era debida a la incapacidad de superar el movimiento inhibidor en el lugar de la lesin del SNC y el mtodo del cido acetilsaliclico para la regeneracin: una panacea curar el dficit. Tambin faltaba el conocimiento de que las neuronas no siempre pueden crecer. Con fines aclaradores, crecer o crecimiento se refieren a la capacidad de los axones de elongarse o extender colaterales de varios micrmetros a milmetros. Arborizar, focalizar o recortar hacen referencia a la capacidad de las dendritas de hacer conexiones nuevas, reforzar o eliminar conexiones existentes. Promocin significa la elongacin de axones a distancias largas.

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La promocin del crecimiento axonal en el SNC adulto no tiene ninguna panacea. La cuidadosa seleccin de tratamientos para lograr la promocin del crecimiento axonal en la poblacin de axones lesionados deseado requiere el conocimiento del desarrollo inicial de cada tipo neuronal y el entorno circundante, adems de las distancias que cada axn debe crecer antes de que empiece la arborizacin. El descubrimiento de una tcnica de transfeccin no vrica, junto con la transfeccin satisfactoria de Bcl-2 in vivo a velocidades prometedoras en una poblacin neuronal seleccionada, es el primer paso hacia el direccionamiento satisfactorio de una poblacin neuronal afectada con un gen promotor del crecimiento. Por ltimo, controlar las neuronas a medida que se regeneran en el SNC requiere nuevas formas para separar la contribucin de diferentes aspectos de la promocin del crecimiento. El cuarto y, quizs el aspecto ms importante de la regeneracin y recuperacin de la funcin, es la plasticidad.

Cuarta P: plasticidad
La plasticidad entra en juego dos veces despus de la lesin. Primero, durante el perodo inmediato a la lesin se produce un brote de tejido circundante que ocupa el espacio vacante. Segundo, se produce plasticidad, dirigida por la conducta, despus de la reinervacin. Aunque estos dos eventos plsticos tienen la misma importancia en la regeneracin del SNC, en este artculo slo se estudia la plasticidad despus de la reconexin al tejido diana. Esta seccin se centra en los desencadenantes de plasticidad que llevan a la recuperacin de una funcin perdida y los ejemplos de plasticidad que indican la posibilidad de dirigir y controlar la plasticidad como un medio de recuperacin funcional del SNC. Ms plasticidad significa el crecimiento de ramas terminales o el crecimiento de interneuronas a distancias muy cortas. El cambio ms largo de una neurita o dendrita sera de algunos micrmetros, dato que tambin puede indicar la hiperregulacin de la transmisin en una sinapsis existente; sin embargo, aunque esto se adapta a la definicin de plasticidad, esta medida no fue posible hasta hace un par de aos in vivo.

Preguntas para determinar el rgimen teraputico para la recuperacin funcional

Siete preguntas guan el rgimen teraputico para alcanzar la recuperacin funcional. Aunque muchas preguntas no parecen estar influidas por la nanotecnologa, cada una puede medirse o estar bajo la influencia del estado actual o futuro de la nanotecnologa, desde la medicin de la regeneracin con medios de contraste de RM hasta el desarrollo de msculo plstico nanoestructurado que permitir a los pacientes tener asistencia domiciliaria para su rehabilitacin diaria. 1. Cunta inervacin se necesita para dirigir los sistemas? Antes los expertos crean que una estructura tena que estar completamente reinervada para obtener una recuperacin funcional firme del movimiento. Sin embargo, el grado de inervacin necesario para dirigir el comportamiento puede ser un pequeo parche de la estructura, con una densidad de inervacin local suficiente para dirigir la reorga-

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nizacin local. Segn un trabajo de puente largo y corto de nervio perifrico (NP) que llev a la recuperacin funcional del sistema visual, una densidad de reinervacin local del 42% es suficiente para dirigir el compartimento [63]. 2. Qu factores son los ms eficaces para aumentar la plasticidad por medios qumicos? Muchos factores de crecimiento siguen mostrando su capacidad para dirigir la plasticidad, junto con puntuaciones de factores en aprendizaje y memoria que pueden situar al sistema en un estado ms plstico. Estos factores no se han explorado en el contexto de la rehabilitacin, pero slo es una cuestin de tiempo [64]. La encapsulacin nanoactivada y el direccionamiento permitirn una recableado ms rpido [56,58,59,65-67]. 3. Cunto tiempo tardarn los axones en alcanzar el tejido diana? Con el conocimiento del sistema afectado, la respuesta a esta pregunta sealar cundo empezar la restauracin en el tratamiento de la plasticidad. La rehabilitacin es muy importante al inicio para evitar que los msculos se atrofien, aunque puede no existir inervacin al tejido. Normalmente la rehabilitacin es ms intensa al principio de la lesin, y luego se abandona cuando se pierde la esperanza. Con algunos de los nuevos nanomedios de contraste pueden obtenerse imgenes de neuronas en regeneracin y mantener motivados al paciente y al fisioterapeuta [1,68-71]. 4. Tienen que deprimirse otros sistemas en el tejido diana para que se produzca el retorno de la funcin? Es muy difcil estudiar esta cuestin sin discrepar del tema de la nanotecnologa y la nanomedicina. Un ejemplo en el campo de visin sera tapar un ojo fuerte para animar al ojo dbil a funcionar en tndem con el fuerte, como en el estrabismo. Es decir, deprimir un sistema para que otro sistema sea totalmente funcionante, y luego puede ser necesario restaurar el primero [72,73]. La limitacin de la compensacin durante la rehabilitacin puede ser suficiente para guiar una mejor recuperacin. Ejemplos extremos de esto sera recartrografiar la corteza despus de una hemisferectoma de amputacin de una extremidad [74,75]. 5. Qu tipo de entrenamiento afectar a los sistemas que se han reinervado? La automatizacin de la rehabilitacin junto con los sistemas de retroalimentacin que ahora se estn introduciendo permitirn que muchos ms pacientes accedan al equipo durante un perodo ms largo. Adems, con la aparicin del msculo plstico y otras tecnologas, como el aparato ortopdico articular activo [76], se limitar el movimiento de otros sistemas y har que el paciente rehabilite grupos musculares especficos. El rendimiento mejorar a medida que los pacientes tengan ms acceso a esta nanotecnologa. Con pruebas repetidas, se ha observado un mayor rendimiento de los animales [63,77]. 6. Qu factores se necesitan para inducir la arborizacin de las terminaciones? La ciencia an no ha respondido a esta pregunta. El cambio de elongacin a arborizacin slo se est empezando a elucidar en el desarrollo inicial. Algunos de los factores que causan plasticidad son los que permiten la arborizacin adicional. 7. Terminan los axones en ms de un sistema? Es importante comprender cmo finaliza la poblacin afectada de neuronas al estudiar esta cuestin. Si la plasticidad se dirige en un lugar, debe dirigirse el recartografiado de conexiones en otro. Con algunas de las nuevas tcnicas de nanotrazado, ahora puede responderse a esta pregunta in vivo.

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El plan de las cuatro P define los temas que deben estudiarse antes de que pueda producirse una recuperacin de la funcin de la conducta. Con la aparicin de la nanomedicina, el retorno funcional despus de un traumatismo o ictus parece un objetivo mdico alcanzable y no el problema intratable que era antes. La nanomedicina es un rea en la que el tamao realmente importa. Con frecuencia las personas se sorprenden de que pequeas cosas puedan tener un impacto tan grande, y esto tambin es cierto en nanomedicina. Los expertos siempre crean que para alcanzar dosis teraputicamente relevantes deban comprobarse las concentraciones sricas. Sin embargo, en el reino de la nanomedicina, las nicas medidas relevantes son cmo impactar en la poblacin celular especfica, durante cunto tiempo y cmo medirlo de forma no invasiva.

Procedimientos nanoactivados Encapsulacin

La encapsulacin de un frmaco permite que un frmaco txico, que normalmente activara el sistema inmunitario, se desplace furtivamente por el torrente circulatorio hasta su objetivo. Los nanopolvos de paclitaxel, un frmaco contra el cncer de mama, y la dexametasona, un esteroide utilizado con frecuencia para tratar la inflamacin ocular, se encapsularon en una tcnica de autoensamblaje capa a capa en una nanocubierta de polmero [78]. La nanocpsula se prob en cultivo celular y se observ que mostraba menos fagocitosis (es decir, eliminacin del frmaco) durante 24 horas que el frmaco no encapsulado. Con esta cubierta de polmero de proteccin, estos frmacos pueden circular durante ms tiempo sin eliminarse [66,67,78-82].

Fullerenos esfricos
La C60 es una molcula esfrica de carbono tambin conocida como fullereno o buckyball [83]. Estas molculas hbridas que se autoensamblan espontneamente en bolas huecas tienen alrededor de 400 nm de dimetro. Los bastones de ADN/poliestireno que forman la estructura miden aproximadamente 15 nm de longitud. Aunque an a nanoescala, las esferas de ADN son ms grandes que los fullerenos de carbono, de alrededor de 7 nm de dimetro, normalmente. La geometra de los icosaedros truncados slidos fue descrita por primera vez por Arqumedes en un escrito hace ms de 2.000 aos, y la versin esqueltica, hueca, de los fullerenos ya se observa en las ilustraciones de Leonardo da Vinci en el ao 1494 [83].

Temas de salud y seguridad

La tecnologa avanza para encontrar otras indicaciones a todas las nanopartculas actualmente existentes. Sin embargo, deben considerarse los temas de salud y seguridad. Cuando se utilizan en el SNC, algunos de estos nanomateriales pueden causar agregaciones, como placas, que produciran la muerte del tejido neural.

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Efecto de las nanopartculas inhaladas

Hace 60 aos, los cientficos mostraron en primates que las nanopartculas inhaladas viajaban a lo largo de los nervios de la nariz y se asentaban en el cerebro [84]. Otro estudio muestra que las nanopartculas inhaladas se acumulan en las cavidades nasales, en el pulmn y en el cerebro de ratas, hecho que plantea problemas sobre si esta acumulacin podra causar inflamacin y riesgo de lesin cerebral u otros trastornos del SCN [85].

Efectos de varias nanopartculas de carbono sobre las plaquetas humanas

Los investigadores han examinado el impacto de varias formas de nanopartculas de carbono en un experimento de laboratorio en plaquetas humanas, el principal elemento de coagulacin de la sangre, y en un modelo de trombosis de arteria cartida, o bloqueo, utilizando ratas anestesiadas [86]. Encontraron que algunas nanopartculas de carbono activaban plaquetas humanas y las estimulaban para agregarse o aglutinarse. Tambin demostraron que las mismas nanopartculas estimulaban el bloqueo de la arteria cartida en el modelo de rata. Se estudi el impacto de cinco tipos de nanopartculas y se compararon con la aglutinacin plaquetaria y la trombosis humana en ratas: 1) materia particulada urbana estndar; 2) nanopartculas de carbono mixtas; 3) fullerenos; 4) nanotubos de carbono de una pared, y 5) nanotubos de carbono de pared mltiple. Las nanopartculas de carbono mixtas tuvieron el mayor impacto, provocando el mayor grado de agregacin plaquetaria y la reduccin ms espectacular del flujo sanguneo carotdeo en las ratas. Los nanotubos de carbono de pared nica ocuparon el segundo puesto, los nanotubos de pared mltiple el tercero, y la materia particulada urbana estndar, el cuarto, en ambos experimentos. Estas nanopartculas activaron un receptor en las plaquetas que es fundamental para su agregacin, el receptor integrina de la glucoprotena, que parece ser el mecanismo subyacente de sus efectos, pero cada nanopartcula utiliz una va molecular diferente para activar el receptor. El fullereno fue una excepcin: no mostr ningn efecto en la agregacin plaquetaria humana y tuvo muy poco efecto en la trombosis de rata. Los nanotubos se parecen a los puentes moleculares que intervienen en las interacciones plaquetarias, no as los fullerenos, dando a los fullerenos esfricos, menos adhesivos, una potencial ventaja en el diseo de dispositivos nanofarmacuticos para la liberacin dirigida de frmacos o sistemas de imagen [83].

Efectos txicos de las nanopartculas

El primer estudio de la toxicidad de los fullerenos en clulas humanas individuales muestra que la toxicidad depende claramente de que las molculas se unan a la superficie del fullereno [87]. La toxicidad podra ser deseable en muchos casos, como cuando interesa conseguir partculas que destruyen clulas cancerosas o bacterias perjudiciales. En otros casos, como las aplicaciones que pueden liberar partculas al entorno, la toxicidad es indeseable.

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El estudio analiz el nano-C60, un agregado de molculas C60 a nanoescala que, generalmente, se forma en agua, y molculas de fullerenos derivados con tres grupos qumicos. Los investigadores estudiaron los materiales en dos tipos de clulas humanas: clulas de carcinoma heptico y fibroblastos drmicos. En general, las molculas con un mayor grado de modificacin de la superficie fueron menos txicas, pero la citotoxicidad (es decir, el estudio de efectos txicos en clulas individuales) no debera confundirse con una evaluacin del riesgo toxicolgico hecho y derecho.

La nanotecnologa y el futuro de los dispositivos implantados Nanocables

Los nanocables que se estn creando son bastante ms finos que incluso los capilares ms finos, dato que indica que los nanocables, en principio, podran trasladarse por el sistema circulatorio a cualquier punto del cuerpo, sin bloquear el flujo normal sanguneo ni interferir con el intercambio de gases y nutrientes por las paredes de los vasos sanguneos. En un experimento preliminar, se guiaron nanocables de platino por el sistema vascular de muestras tisulares, y luego se utilizaron con xito para detectar la actividad de neuronas individuales adyacentes a los vasos sanguneos [88]. Los cientficos estn contemplando la primera aplicacin de la nanotecnologa para conocer el cerebro a nivel de interaccin de neurona a neurona, con una nanosonda biodegradable, no intrusiva, biocompatible. Esta tecnologa podra, en ltima instancia, conducir a nuevos tratamientos y formas para tratar enfermedades, e ilustra las nuevas generaciones de dispositivos activos y nanosistemas complejos a nanoescala. La tcnica de los nanocables posiblemente podra localizar el dao de la lesin e ictus, localizar la causa de las convulsiones y detectar la presencia de tumores y otras alteraciones cerebrales. Los nanocables pueden recibir seales elctricas que tambin pueden programarse para enviar seales. Estos nanocables podran liberar impulsos elctricos y recibirlos y, por tanto, la tcnica tiene posibilidades como tratamiento para la enfermedad de Parkinson y similares.

Enfermedades relacionadas con el plegamiento anmalo de las protenas

Las enfermedades por agregacin proteica pueden abordarse por diferentes vas a nanoescala. Primero, la escisin del lugar / puede bloquearse forzando la cascada de escisin a la escisin del lugar . La segunda forma podra ser encapsular la protena, o el amiloide, de forma que no pueda agregarse. Otro abordaje sera modificar la protena, de forma que se identifique como algo ms, permitiendo al sistema inmunitario reconocerlo y atacar a la protena malformada [89-94].

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Desbloquear el rompecabezas de las enfermedades por plegamiento anmalo de las protenas

Siempre se ha considerado que la formacin de placa amiloide era la causa de enfermedades como las de Alzheimer, Parkinson y Huntington, fibrosis qustica, diabetes tipo II, demencia cerebrovascular, artritis, tuberculosis y demencias familiares britnica y danesa. Sin embargo, la placa podra no ser la causa, porque sus fibras son demasiado grandes para afectar directamente a las clulas pequeas. Las respuestas pueden venir de pequeos pegotes de protenas de forma y plegado anmalo que crean agujeros bien definidos en las membranas celulares y alteran su actividad elctrica [95]. Al observar la estructura tridimensional de varias protenas diferentes asociadas con estas enfermedades, los investigadores comprobaron que todas las protenas se plegaban en estructuras parecidas a canales inicos, o poros, en las membranas celulares. Estos poros controlan las propiedades elctricas de la clula al regular el flujo de partculas cargadas (iones) como el calcio. Cuando se incrustan en membranas artificiales, las protenas mal plegadas producen corrientes elctricas similares a canales inicos. Debido a que se sabe que el equilibrio inico anormal altera la funcin celular y causa degeneracin, estos resultados son la prueba de un posible mecanismo por el que la formacin de amiloide puede causar la destruccin celular en estas enfermedades neurodegenerativas. Se utiliz el microscopio de fuerza atmica (AFM) para observar los canales inicos o molculas bio-nano. El AFM permite visualizar estos canales muy pequeos, algo que sera muy difcil, si no imposible, de observar en su entorno natural, tipo celular, con el microscopio electrnico. Los canales inicos podran servir de sistema modelo para disear frmacos preventivos y teraputicos. El control de la actividad y el diseo de frmacos especficos para regular estos canales podran conducir a la prevencin o al tratamiento de varias enfermedades relacionadas con los amiloides.

Nanomquinas que identifican y dirigen

Las nanomquinas identifican y tratan tumores cerebrales malignos con el uso de secuencias selectivas y campos magnticos para la direccin y concentracin de partculas.

Micelas
Las micelas, nanopartculas coloidales autoensambladas, con un ncleo hidrofbico y una cpsula hidroflica, se utilizan actualmente para solubilizar varios productos farmacuticos poco solubles, y tienen propiedades atractivas como transportadores de frmacos [66,79]. Las micelas polimricas miden 21 nm de dimetro de promedio y son muy tiles para trabajar con protenas de difcil manejo. En presencia de fracciones de membrana celulares naturales, las micelas polimricas PreserveX- QML-B de QBI Life Science (QBI Life Sciences, Madison, Wisconsin) se autoensamblan, incrustando piezas de membranas celulares en el complejo y creando partculas mltiples que ofrecen un entorno similar al de la membrana natural.

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Nanotubos
Todos los nanotubos no se crean de igual modo; algunos se descomponen y otros circulan y se incrustan en los rganos del cuerpo. Los nanotubos de carbono pueden tener un efecto positivo y otro efecto negativo, igual que muchos productos qumicos en el organismo. Los nanotubos de carbono ya han conseguido xitos iniciales en la formacin de hueso, dando a la estructura la rigidez necesaria para que los osteoblastos remodelen la estructura global. Sin embargo, segn cmo se funcionalizan o combinan los nanotubos de carbono con otros materiales, podran tener efectos secundarios mdicos que podran no manifestarse por s mismos durante muchos aos. Se ha hecho una comparacin con el asbesto; sin embargo, aunque el tamao de los nanotubos de carbono es similar al del asbesto, tienen propiedades qumicas muy diferentes que permiten que el organismo los descomponga. Debe dedicrseles mucho trabajo, especialmente en la forma inhalada [96], que se ha mencionado previamente en la seccin Salud y seguridad. Sin embargo, los leucocitos tambin incorporan nanotubos de carbono y, por tanto, la historia no est totalmente clara.

Nanobombas
Al estudiar nuevas nanotecnologas para la deteccin y el tratamiento del cncer, existe una nanobomba exclusiva que puede literalmente hacer explotar tumores malignos de mama [97]. Originalmente, los investigadores estudiaron el uso de nanotubos de carbono como vehculos de liberacin de frmacos, porque son ms pequeos que una clula y permiten la inyeccin ms selectiva de frmacos en clulas individuales. Sin embargo, los investigadores descubrieron que cuando los tomos se disponen en diferentes formas, adoptan distintas propiedades a nanoescala y podran provocar explosiones microscpicas de nanotubos en diversas condiciones. Las bombas se crean al liar los nanotubos de carbono. Con un nico nanotubo, el calor generado por la luz es disipado por el aire circundante. En los manojos, el calor no puede disiparse tan rpidamente y el resultado es una explosin a nanoescala [98]. Como agente teraputico para destruir clulas cancerosas, especialmente de cncer de mama, la nanobomba es muy prometedora, porque la onda de choque destruye las clulas cancerosas, las vas biolgicas que llevan instrucciones para generar clulas cancerosas adicionales y las pequeas venas que nutren las clulas enfermas. La nanobomba es muy selectiva, muy localizada y mnimamente invasiva, y causa algo menos que un nanodolor, como un pinchazo. Es potente, selectiva, no invasiva y no txica, y puede incorporar la tecnologa actual, incluida la microciruga [98].

Nanotubos de carbono ingeridos por los leucocitos

Los investigadores han obtenido imgenes de nanotubos de carbono de una pared dentro de leucocitos [99]. Los nanotubos conservaban sus propiedades fluorescentes, de forma que se detectaban con un microscopio de fluorescencia. Con un microscopio de fluores-

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cencia adaptado para obtener imgenes de entre 1.125 y 1.600 nm se observ que las clulas haban incorporado los nanotubos. Los expertos creen que las clulas ingeran activamente los nanotubos porque la velocidad de captacin era ms lenta a temperaturas ms bajas, como podra ocurrir en la fagocitosis, el proceso por el que los leucocitos ingieren partculas como bacterias y virus. El proceso de imagen mostr muchas regiones localizadas de emisin de infrarrojo cercano dentro de la clula, que se supone es debido a los nanotubos contenidos en los fagosomas, las pequeas cmaras en las que se sellan los tubos cuando la clula los ingiere. Adems, los nanotubos conservaban sus propiedades de emisin, a pesar del duro entorno oxidante dentro de la clula. Fueron fotoestables durante por lo menos 100 minutos. La velocidad de ingestin de los nanotubos aument con la concentracin de los mismos. Con la concentracin ms alta de nanotubos (7 g/ml), la velocidad de ingesta media fue de un nanotubo por segundo y clula; las muestras incubadas contenan aproximadamente 70.000 nanotubos por clula.

Tcnicas de imagen con implicaciones para la nanomedicina Diagnstico ms preciso y localizado

La TC y la TC por emisin de fotn nico ya estn utilizando una forma de nanotecnologa con radioistopos marcados. Con la aparicin de la nanotecnologa, existen esperanzas que pueden extenderse a la seleccin de molculas que mejorarn la resolucin y, en combinacin, permitirn a estas mquinas eliminar tumores cancerosos sin ciruga [69]. Esta aplicacin tambin podra significar que algunas de estas nuevas molculas permitirn una medida final de nuevos frmacos que mostrara el resultado en 100 pacientes, en vez de en 1.000, permitiendo comercializar antes estos frmacos. Por otra parte, esto tambin permitir que los frmacos con poco o ningn resultado teraputico se abandonen ms pronto, permitiendo centrar los recursos en el tratamiento ms prometedor.

Tcnica de imagen mdica ultrasensible

Se est desarrollando un nuevo tipo de tcnica de imagen mdica ultrasensible que funciona por iluminacin de un lser a travs de la piel para detectar finos nanobastones de oro inyectados en la circulacin sangunea. Los bastones de oro miden unos 20 nm de ancho y 60 nm de largo o son unas 200 veces ms pequeos que un eritrocito. En pruebas con ratones, los nanotubos produjeron imgenes casi 60 veces ms brillantes que los colorantes fluorescentes convencionales, como la rodamina, utilizados habitualmente por una amplia variedad de tcnicas de imagen biolgicas para estudiar las funciones internas de clulas y molculas [100]. Los nanobastones de oro son una posible forma de superar obstculos en tcnicas de imagen mdica avanzada en desarrollo, que utilizan la luz para analizar vasos sanguneos y tejidos subyacentes, y podran emplearse para desarrollar una tcnica de imagen mdica avanzada para la deteccin precoz del cncer.

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Diferenciar entre ganglios linfticos neoplsicos y no neoplsicos

La Food and Drug Administration de Estados Unidos ha dado la aprobacin inicial para la tecnologa Advanced Magnetics Combidex (Advanced Magnetics, Inc., Cambridge, Massachusetts). El Combidex (ferumoxtrn-10) consta de nanopartculas de xido de hierro que se utilizan en la RM para ayudar a distinguir los ganglios linfticos cancerosos de los no cancerosos. Los estudios clnicos han demostrado que el Combidex se acumula en el tejido ganglionar no canceroso, permitiendo mejorar la seguridad diagnstica para distinguir entre los ganglios linfticos sanos y los alterados.

Utilizacin de nanopartculas para definir tumores y lesiones cerebrales

Algunas de las primeras aplicaciones clnicas en el mundo de las nanopartculas en el cerebro han demostrado que una nanopartcula de xido de hierro tan pequea como un virus puede definir no slo tumores cerebrales por RM, sino tambin otras lesiones cerebrales que, de lo contrario, no se habran detectado [70]. Llamada as por ser una mil millonsima parte de un metro, la nanopartcula de xido de hierro ferumoxtrn-10 puede verse como un medio de contraste en RM durante ms de 24 horas, a veces incluso hasta 5 das. En un estudio paralelo [1], tambin se observ que el ferumoxtrn-10 era un marcador de imagen estable durante la ciruga para extirpar tumores cerebrales, y se mantiene en el cerebro suficiente tiempo para poder realizar la RM postoperatoria, incluso despus de una manipulacin quirrgica. Estos resultados pueden ayudar en la ciruga cerebral guiada por imagen y mejorar el diagnstico de lesiones causadas por esclerosis mltiple, ictus y otros trastornos neurolgicos, adems de tumores residuales. Estos estudios representan la primera vez que este mtodo se ha aplicado para examinar lesiones inflamatorias en el cerebro, no slo tumores.

Microburbujas
Las burbujas ya no son una mala cosa para la circulacin sangunea. Una nueva generacin de medios de contraste ecogrficos, las microburbujas, junto con una nueva tecnologa de secuenciacin de pulsos, permiten a los ecgrafos distinguir mejor que antes entre el tejido sano y los tumores malignos y las metstasis. Son burbujas de gas microscpicamente pequeas que se inyectan en la vena del paciente, desde donde circulan por el cuerpo y empiezan a concentrarse en patrones caractersticos en reas especialmente sospechosas. Las sustancias se mantienen en el flujo sanguneo slo durante unos minutos y se exhalan por los pulmones. Las microburbujas son un claro reflector para la ecografa y tienen alto contraste del tejido corporal, destacando fcilmente reas de inters que no se haban detectado previamente. El doctor Christoph Dietrich, jefe de medicina interna en el hospital Caritas en Bad Mergentheim, Alemania, ha utilizado esta tecnologa en el hgado durante aos [101].

Puntos cunticos
Los puntos cunticos pueden utilizarse como indicadores no invasivos de tumores [102-105]. Aunque estn formados por metales pesados y an no se han colocado en el

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cerebro de humanos, han demostrado su utilidad a corto plazo en muchas enfermedades difciles de detectar por las concentraciones de patgenos. Un ejemplo es la meningitis bacteriana en las fases ms iniciales. Puede obtenerse una muestra de sangre y hacerla reaccionar con una solucin de puntos cunticos con varios eptopos, luego se lavan y se visualizan con un diodo de emisin de luz muy econmico en el campo. Debido a la baja intensidad de la seal, el nmero de molculas alteradas puede ser muy bajo, permitiendo un tratamiento precoz antes de que los propios sntomas se manifiesten aparentemente como un exantema en la espalda.

Nanociruga Nueva ciruga activada por nanotecnologa

Un lser de femtosegundo modificado puede corregir la vista e identificar melanomas malignos. Adems, es una herramienta eficaz para la nanomedicina con lser; por ejemplo, puede utilizarse para practicar nanoagujeros en las membranas celulares y transferir genes a las clulas por medio de la luz. Este lser abre el camino para la entrada en medicina de nanolser, una nueva rama sobre el diagnstico y tratamiento de clulas individuales. Segn la potencia y la ptica del lser utilizados, el sistema puede ser un femtoscopio, que aporta perspectivas en tejido vivo de forma mil veces ms exacta que las mejores TC [106]. Tambin es una herramienta de precisin. Con este sistema, un equipo de investigadores realiz la incisin ms pequea del mundo en tejido vivo, con una anchura de solo 70 nm. Esta tecnologa abre nuevas posibilidades, como la transferencia de genes a travs de la luz, en la que se inserta material gentico extrao en clulas vivas con pulsos de lser ultracortos, sin destruir estas clulas. As podran introducirse frmacos o genes en clulas individuales. Una vez que el proceso obtenga la aprobacin, ya no ser necesario obtener biopsias ni pruebas histolgicas laboriosas.

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