NDICE 1.- Introduccin..................................................................................................2 2.- Cromatografa de Gases..............................................................................6 2.1.- Componentes bsicos de un cromatgrafo Gas - Lquido ...............7 2.2.

- Aplicaciones de la Cromatografa de Gases...................................13

1.- INTRODUCCIN: MTODOS CROMATOGRFICOS. Qu es la Cromatografa? La cromatografa es un conjunto de tcnicas que permiten identificar, separar y determinar compuestos qumicos en mezclas complejas. Cabe destacar desde un principio que en todas las tcnicas cromatogrficas hay: Una Fase estacionaria y una Fase mvil. En Cromatografa de gases, la fase mvil es un gas, el cual se hace pasar a travs de una fase estacionaria. En Cromatografa Lquida, la fase mvil es un lquido que se hace pasar a travs de una fase estacionaria. Un Cromatografa de Fluidos Supercrticos la fase mvil es un fluidos supercrtico que tambin pasa a travs de una fase estacionaria. Una de las caractersticas fundamentales en las cromatografas es que los componentes de la mezcla que queremos separar / identificar / cuantificar, se separan cuando sus velocidades de migracin son distintas.

 Desde el siglo pasado las separaciones analticas se llevaban a cabo por mtodos clsicos como son la precipitacin, destilacin y extraccin. Los crecientes esfuerzos por conocer ms sobre la composicin y funcin de las

protenas han obligado a los cientficos a buscar tcnicas, cada vez, ms precisas. Fue el botnico ruso Mikhail Tswett quien invent la cromatografa a principios del siglo XX. Tswett hizo pasar soluciones que contenan pigmentos vegetales, como clorofilas y xantofilas, a travs de columnas de vidrio empacadas con carbonato de calcio finamente dividido. Las especies separadas aparecan como bandas coloridas sobre la columna, lo cual explica el nombre que se escogi para el mtodo, chroma que significa color en griego y graphein que significa describir. Para elegir una tcnica de separacin adems de tener en cuenta los criterios econmicos y de accesibilidad, hay que atender a dos tipos de consideraciones: unas tienen que ver con las propiedades fsicas estructurales de las molculas que se pretende separar, o de las caractersticas de la matriz en que se encuentran; otras se derivan de los objetivos del anlisis (sensibilidad, resolucin1, tiempo de anlisis, necesidad de una deteccin especfica). El mtodo de seleccin incluye los pasos necesarios para la obtencin, preparacin y posible fraccionamiento de la muestra, la aplicacin de la tcnica analtica adecuada y el tratamiento de los datos obtenidos. Las tcnicas analticas ms empleadas en la actualidad pueden englobarse en dos grandes grupos: tcnicas de separacin y tcnicas espectroscpicas. Las tcnicas espectroscpicas proporcionan, para cada compuesto analizado, una informacin compleja, relacionada con sus caractersticas estructurales especficas, por otro lado las tcnicas de separacin se utilizan para resolver los componentes de una mezcla y la seal obtenida puede utilizarse con fines analticos cuantitativos o cualitativos.
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Actualmente las separaciones analticas se realizan fundamentalmente por cromatografa y electroforesis.

La cromatografa comprende un conjunto importante y diverso de mtodos que permite a los cientficos separar componentes estrechamente relacionados en mezclas complejas, lo que en muchas ocasiones resulta imposible por otros medios. Se pueden separar molculas en funcin de sus cargas, tamaos y masas moleculares. Tambin a travs de la polaridad de sus enlaces, sus potenciales redox, etc... La cromatografa no solo permite la separacin de los componentes de una mezcla, sino tambin su identificacin y cuantificacin. El anlisis cualitativo est basado en la medida de parmetros cromatogrficos (tiempos y volmenes de retencin) mientras que el anlisis cuantitativo est basado en la medida de alturas o reas de picos cromatogrficos que se relacionan con la concentracin. La columna cromatogrfica y la forma con la que se disea, constituye el corazn de la separacin. El detector, situado al final de la columna es el que garantiza la respuesta de los componentes que se separan. En todas las separaciones cromatogrficas la muestra se desplaza con una fase mvil, que puede ser un gas, un lquido o un fluido supercrtico. La fase mvil puede pasarse a travs de una fase estacionaria, con la que es inmiscible y que se fija a una columna o a una superficie slida. Las dos fases se eligen de forma, que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos, por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase mvil; por el contrario los componentes que se unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse

cualitativa y/o cuantitativamente. Estos resultados se recogen en forma de grficos llamados cromatogramas .

Los mtodos cromatogrficos se pueden clasificar segn la situacin de la fase estacionaria en: Cromatografa en columna Cromatografa plana.

O bien segn la Fase mvil en: Cromatografa de gases. Cromatografa lquida. Cromatografa de Fluidos Supercrticos.

Relacionando estas dos clasificaciones entre s, slo la cromatografa de lquidos es la que puede llevarse acabo en columna o sobre superficies planas. Por otra parte, tanto la de gas como la de fluidos supercrticos estn restringidas a los procedimientos en columna de tal manera que las paredes de la columna contienen la fase mvil. La tcnica ms usada es la cromatografa lquida de alta resolucin, HPLC por su sensibilidad, fcil adaptacin a las determinaciones cuantitativas exactas, su idoneidad para la separacin de especies no voltiles o termolbiles y su aplicacin a sustancias de primordial inters en la industria, como son los aminocidos, protenas, cidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, entre otros. 2.- CROMATOGRAFA DE GASES.

En esta tcnica cromatogrfica, la muestra se inyecta y volatiliza en la cabeza de una columna cromatogrfica. La elucinse produce por el flujo de una fase mvil de un gas inerte y a diferencia de la mayora de las tcnicas

cromatogrficas la fase mvil no interacciona con las molculas del analito; su nica misin es transportar el analito a travs de la columna.

Existen dos tipos de cromatografa de gases: Cromatografa Gas Slido: La fase estacionaria es un slido de gran rea superficial sobre el que se adsorbe el analito. Actualmente slo se aplica a la separacin de especies de bajo peso molecular (CO 2, O2, N2 e hidrocarburos). Los compuestos ms polares son retenidos en la fase estacionaria de manera semipermanente. Cromatografa Gas Lquido: La fase estacionaria es un lquido no voltil inmovilizado sobre la superficie de un soporte slido inerte. La velocidad de migracin de un analito est determinada por su distribucin entre la fase lquida inmovilizada y la fase gaseosa. La temperatura, la volatilidad del analito (Peb) y su solubilidad en la fase estacionaria son los factores que regulan su retencin. En la cromatografa de gases (que uno de los objetos de estudio en este trabajo: Cromatografa Gas Lquido), se usa como fase estacionaria un compuesto orgnico polimrico de baja volatilidad, estable trmicamente y con adecuadas caractersticas de disolvente. Es preciso sealar que deben usarse fases estacionarias, similares funcionalmente al compuesto a analizar.

Fig 1: Algunos ejemplos de fases estacionarias comunes en cromatografa gas lquido.2

2.1.- Componentes bsicos de un Cromatgrafo Gas Lquido:

Fig 2: Esquema Cromatgrafo de gases.3

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GAS PORTADOR El gas portador debe ser inerte y de alta pureza (He, Ar, N 2, CO2, H2). Su eleccin vendr determinada por el tipo de detector que se use. Este gas estar en la botella de gas portador que son botellas con manureductores para poder controlar el caudal. SISTEMA DE INYECCIN DE MUESTRAS. Las muestras estn formadas por un disolvente, compuestos voltiles (analito) y compuestos no voltiles (suciedad). El mtodo ms comn de inyeccin de muestra implica el uso de una microjeringa que inyecta la muestra lquida o gaseosa a travs de un septum de goma de silicona en una cmara de vaporizacin instantnea situada en la cabeza de la columna. Esta cmara normalmente est a unos 50 C por encima del punto de ebullicin del componente menos voltil de la muestra. Al inyectar con microjeringas el sistema debe asegurar: Que la muestra se vaporice en la cabeza de la columna sin distorsin del gas portador. Que la muestra ocupe la mnima longitud posible de la columna.

Tambin se encuentra el inyector en columnas empaquetadas es una cmara de vidrio o cuarzo denominada glass insert, colocada en un bloque termostatizado a 200 300 C. El gas portador circula a travs del bloque, penetra caliente en el inyector por una parte lateral y arrastra la muestra vaporizada al interior de la columna. Otro tipo de inyector es el usado en columnas capilares donde la muestra vaporizada debe ser mucho ms pequea. Se inyectan volmenes similares a los de las columnas empaquetadas que, o bien dejan pasar slo una pequea fraccin de la muestra inyectada a la cabeza de la columna (inyeccin Split), o 7

bien reconcentra el analito gas en la cabeza de la columna (inyeccin Splitless), o bien vaporizan los analitos una vez que lo ha hecho el disolvente (inyeccin on column).

Fig 3: Inyector en columnas empaquetadas. columnas capilares COLUMNAS

Fig 4: Inyector usado en

Las columnas cromatogrficas varan en longitud desde menos de 2 hasta 60 metros. Se construyen de acero inoxidable, vidrio, slice fundida, o tefln. A fin de poder ser colocadas en el interior del horno termostatizado, normalmente son configuradas como helicoides con dimetros de 10 a 30 cm. La temperatura de trabajo es una variable importante para realizar un trabajo preciso, por ello son introducidas dentro de un horno termostatizado. La temperatura ptima de la columna depende del punto de ebullicin de la muestra y del grado de separacin requerido. Normalmente con una temperatura igual o ligeramente superior al punto de ebullicin promedio de la muestra, se obtienen tiempos de elucin razonables (2 a 30 minutos). En cromatografa de gases se usan dos tipos generales de columnas, las empaquetadas y las capilares. En las columnas empaquetadas la fase estacionaria se impregna en un soporte slido poroso. Este soporte slido debe mantener inmvil la fase lquida

proporcionndole la mxima superficie. Estos soportes slidos suelen ser tierra de Diatomeas que son fuertemente adsortivas.

Las columnas Capilares son de slice fundida con una capa protectora exterior de poliamida. Su longitud varia entre los 10 y 60 metros. Su dimetro interior oscila entre 0,1 - 0,32 mm. Su fase estacionaria recubre las paredes internas de la slice y permiten conseguir mejores eficiencias que las empaquetadas aunque su uso es ms complicado. Este tipo de columna requiere sistemas especiales de inyeccin de muestra y detectores ms sensibles. En ambas columnas, su fase estacionaria est unida qumicamente al soporte slido, lo que las lleva a ser ms estables frente a la temperatura y prdida de fase estacionaria que aquellas en las que la fase estacionaria est inmovilizada por adsorcin fsica. DETECTORES La funcin bsica de un detector es que debe producir respuestas muy rpidas a pequeas concentraciones de soluto. Las caractersticas ideales de un detector en cromatografa de gases son: 1. Adecuada sensibilidad. En general, las sensibilidades de los detectores actuales se encuentran en el intervalo de 10-8 a 10-15 g de analito/s. 2. Una respuesta lineal para los analitos que se extienda a varios rdenes de magnitud. 3. Buena estabilidad y reproducibilidad 4. Un intervalo de temperaturas de trabajo comprendido desde la temperatura ambiente hasta al menos 400 C. 5. Un tiempo de respuesta corto que lo haga independiente del caudal. 6. Alta fiabilidad y fcil manejo. Hasta el punto de estar a prueba de la impericia de operadores inexpertos.

7. Respuesta semejante para todos los analitos, o por el contrario, una respuesta selectiva y altamente predecible para una o ms clases de analitos. 8. No sea destructivo de la muestra.

Actualmente no existe el detector que rena todas esas caractersticas, y tampoco parece probable que pueda llegar a disearse nunca.

Los detectores ms generalizados son: Detector de conductividad trmica (TCD): Es totalmente universal y muy sencillo, aunque no es muy sensible. Se emplea bsicamente en el anlisis de gases. Su baja sensibilidad impide usarlo con columnas capilares. Los gases que salen de la columna entran en un compartimiento en el que se encuentra un filamento caliente, cuya temperatura depende de la capacidad del gas que le rodea en disipar calor, esto es, su conductividad trmica. En el momento en que se eluye de la columna un compuesto con diferente conductividad trmica que el gas portador, la temperatura del filamento vara, y por tanto su resistencia elctrica, lo que es registrado en forma de aumento o disminucin de la corriente. Detector de ionizacin a la llama (FID): Es como detector, el ms usado. Esto se debe porque es prcticamente universal para los compuestos orgnicos, donde es bastante sensible y tiene un comportamiento excelente. Los gases que efluyen de la columna son introducidos en una llama formada por H2 y aire cuya conductividad elctrica est permanentemente registrada. En el momento es que un compuesto de carbono se eluye de la columna, se quema y durante la reaccin de combustin se generan electrones y otras especies cargadas que alteran la conductividad elctrica de la llama. Detector de captura de electrones (ECD): Este detector es selectivo para las molculas que contienen tomos electronegativos, como perxidos o halgenos e insensible a compuestos como aminas, 10

alcoholes, o hidrocarburos. Por lo que se emplea en el anlisis de pesticidas halogenados. Se trata de un detector tremendamente sensible y en algunos casos hasta inestable. El efluyente de la columna se hace circular entre un pequeo ncleo de un metal radiactivo que emite electrones (partculas ), y un electrodo cargado positivamente que los recibe. En el momento en que de la columna eluye una especie de tomos electronegativos, capaces de capturar a dichos electrones, se detecta una disminucin de la corriente del electrodo. Detector Termoinico (TID): Se trata de un detector selectivo de los compuestos orgnicos que contienen fsforo y nitrgeno. En comparacin con un FID, el TID es 500 veces ms selectivo para los compuestos continentes de fsforo y 50 veces ms con los compuestos continentes de nitrgeno. Un detector termoinico tiene una configuracin similar al detector de llama. El efluente de la columna se mezcla con hidrgeno, pasa a travs de la llama y se quema. El gas caliente fluye alrededor de una bola de silicato de rubidio calentada elctricamente, la cual se mantiene a unos 180 con respecto al colector. La bola caliente forma un plasma que alcanza una temperatura de 600 a 800 C. Esto provoca que se produzcan una gran cantidad de iones a partir de las molculas que contienen fsforo o nitrgeno, lo que resulta en una gran corriente de iones, la cual se utiliza para la determinacin de compuestos que contienen esos dos elementos. Detector de Emisin Atmica (AED): Es el detector ms reciente y se encuentra a la venta. En este detector el eluyente4 se introduce en un plasma de helio obtenido por microondas que se acopla a un espectrofotmetro de emisin con series de diodos. El plasma es suficientemente energtico como para atomizar todos los elementos de una muestra, excitarlos, y as obtener los espectros de emisin. Estos espectros son recogidos en un espectrmetro. 2.2.- Aplicaciones de la Cromatografa de Gases. La cromatografa de gases se puede aplicar a gases y cualquier compuesto que pueda ser volatilizado o convertido en un derivado voltil. Con carcter general se puede aplicar en los siguientes casos:
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Para separa muestras analticas complejas. En el anlisis cualitativo: Por ejemplo para determinar el criterio de pureza, la presencia o ausencia de compuestos, el nmero de tomos de carbono en una serie homloga...

En el anlisis cuantitativo: para realizarlo se requiere es uso de patrones o estndares.

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