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Experimento 6. INTRODUO QUMICA DE PRODUTOS NATURAIS

ISOLAMENTO DO EUGENOL A PARTIR DO CRAVO DA NDIA

OBJETIVOS Demonstrar o isolamento de substncias orgnicas de fontes naturais. Demonstrar a extrao de um leo essencial por destilao com arraste a vapor. Demonstrar experimentalmente o uso da extrao contnua (Soxhlet) para isolamento de leos fixos. Anlise cromatogrfica do leo essencial de cravo. LEITURA RECOMENDADA Extrao de produtos naturais; leos essenciais; destilao por arraste a vapor. INTRODUO Desde a pr-histria a humanidade tem demonstrado interesse por substncias orgnicas extradas de fontes naturais. Muitas substncias usadas como medicamentos, pigmentos, venenos e perfumes foram, durante muito tempo, apenas isoladas de plantas ou animais. S com o desenvolvimento da sntese orgnica no final do sculo 19, a humanidade conseguiu libertar-se dessa limitao. Mesmo assim, ainda hoje continua o interesse do qumico orgnico pela descoberta de novas substncias de origem natural (vegetal ou animal), que representem um desafio sntese total ou elucidao molecular, face suas intrincadas arquiteturas. O qumico de produtos naturais atua, de modo geral, em quatro linhas bsicas de pesquisas, s vezes, em duas ou mais concomitantemente: estudo sistemtico da composio qumica de espcies pertencentes a determinadas famlias isolamento de fontes naturais de substncias, com ao farmacologica ou fisiolgica potencial, que possam ajudar no combate a doenas e pragas agrcolas elucidao estrutural de novas molculas, com uso intenso de tcnicas espectromtricas sntese e/ou transformaes qumicas de molculas com ao fisiolgica. O Esquema 1 abaixo, apresenta uma tentativa de definio das atividades desenvolvidas pelos qumicos de produtos naturais e bioqumicos.

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Substncias Orgnicas Naturais - Qumica de Produtos Naturais

Qumicos de Produtos Naturais

Bioqumicos

Processos Metablicos Secundrios

Processos Metablicos Primrios

Metablitos Especializados

Polmeros Naturais

Substncias Orgnicas Micromoleculares

Substncias Orgnicas Macromoleculares: Protenas cidos Nuclicos Polissacardeos Ligninas

(Isolamento e Elucidao Estrutural)

Metabolismo Secundrio (especializado)

Rota-AcetatoMalonato

Rota Chiquimato (Metabolismo de aminocidos aromticos)

Rota Mevalonato (isoprenides)

Policetdeos

Terpenides Alcalides Lignides Neolignides Triterpenides Flavonides Xantanides Esterides Derivados Prenilados

Terpenides Alcalides Flavanides Xantanides Antraquinides Lignides Neolignides Cumarinides Carotenides Policetideos

Glicosdeos e outros derivados naturais

Esquema 1. A qumica de produtos naturais possui uma estreita relao de interdisciplinaridade com outras reas do conhecimento, tais como: botnica, zoologia, biologia molecular, farmacologia, medicina humana e veterinria, entomologia, ecologia, etc. (Esquema 2).

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Substncias Orgnicas Naturais (Micromoleculares)

Sistemtica Qumica

Evoluo Qumica

Ecologia Qumica

Atividade Biolgica

Novos Modelos Insumo para Sntese (matria-prima)

Biotecnologia (Engenharia Gentica)

Farmcologia Medicina Agroqumica

Preparao de Produtos teis

Novas Reaes Novos Reagentes

Sntese Total Sntese Parcial Derivados

Vacinas Produo Animal Anticorpos Energia Fixao Biolgica de Nitrognio Culturas de Clulas e Tecidos de Plantas

Esquema 2. At meados do sculo passado o qumico se valia das reaes clssicas, que exigiam quantidades macias de amostras, para estabelecer as estruturas moleculares, por vezes bastante complexas, de substncias isoladas de fontes naturais. Atualmente, as tcnicas utilizadas na elucidao estrutural dependem, quase que exclusivamente, de mtodos espectromtricos. Tais mtodos, geralmente no destrutivos, requerem amostras muito pequenas, o que, associado s novas metodologias de isolamento e purificao, expandiu em muito a capacidade do qumico em descobrir novas molculas interessantes, que ocorrem em diminutas quantidades nos organismos vivos.

EXTRAO DE LEOS (FIXOS E VOLTEIS) A PARTIR DE MATERIAL BIOLGICO H uma diversidade de metodologias para a extrao de substncias orgnicas a partir de fontes naturais. Dependendo da natureza do material a extrair algumas tcnicas so mais recomendadas que outras. Por exemplo, geralmente usamos a destilao por arraste de vapor d'gua na extrao de essncias ou leos volteis. Para leos (e gorduras) no volteis (leos fixos) a extrao contnua por meio de solvente orgnico em extrator Soxhlet a metodologia mais conveniente. Independente da tcnica a ser usada na extrao, o processo comum para a obteno de produtos naturais a partir de fontes naturais envolve a escolha da fonte (material biolgico, geralmente vegetais), a secagem do material, a triturao, a extrao e a purificao do produto extrado. As essncias ou leos essenciais so substncias odorferas, bastante volteis temperatura ambiente, encontrados em vrias partes das plantas. Os leos essenciais so normalmente encontrados em bolsas secretoras presentes nas partes vitais dos vegetais, tais como flores, folhas, sementes, caule, raiz e frutos. A qualidade do leo essencial varivel de um gnero a outro e/ou de uma espcie a outra, podendo-se encontrar vegetais que possuem essncias quimicamente diferentes em vrias de suas partes. Praticamente todos os leos volteis so constitudos por misturas muito complexas, cuja composio qumica varia muito. Representantes de quase todas as funes orgnicas comuns podem fazer parte de suas composies. Basicamente podemos agrupa-los em duas grandes classes, com base em sua origem biossinttica: a) - derivados dos terpenides, formados via cido mevalnico-acetato; e b) - compostos com anis aromticos, formados via cido chiqumico-fenil propanides. Alguns exemplos de substncias comumente presentes em leos essnciais so mostrados Figura 1.

CHO

O Cnfora (leo de cnfora) O O Safrol (leo de sassafrs) OH

Eucaliptol (leo de eucalipto)

Citral (leo de capim-limo)

-Felandreno (leo de eucalipto) CHO

CH3O Anetol (leo de anis) Cinamaldedo (leo de canela)

OH Linalol (leo de alfazema)

Limoneno (leo de limo)

Carvona (leo de carvona)

Mentol (leo de limo)

Figura 1. Alguns componentes qumicos de leos essenciais conhecidos. Muitas plantas so usadas diretamente com fins medicinais ou aromatizantes. Porm, mais conveniente, para fins de comercializao, isolar a prpria substncia voltil, responsvel pela ao fisiolgica [a vanilina (baunilha) e o leo de cravo so exemplos]. O processo de extrao de uma essncia depende de uma srie de fatores, tais como sua localizao no vegetal, suas propriedades fsico-qumicas e finalidade a qual se destina. Os leos essnciais so facilmente solveis em lcool, clorofrmio, diclorometano, ter e outros solventes orgnicos, mas imiscveis com gua. Assim, possvel extrai-los diretamente com um solvente orgnico de baixo ponto de ebulio (por ex. pentano, e mais recentemente dixido de carbono em estado super-crtico), ou pela tcnica de destilao com arraste de vapor d'gua, processo muito usado na indstria de perfumaria. A extrao com arraste de vapor uma variante da destilao azeotrpica, que permite a separao de componentes volteis imiscveis, sem necessidade de temperaturas elevadas. Quando dois ou mais lquidos imiscveis so aquecidos seus vapores se comportam como gases "ideais" e portanto, obedecem a lei de Raoult (veja Experimento 4). Se um dos lquidos a gua, a destilao se processa a uma temperatura inferior a 100C, por fora da contribuio da presso de vapor do(s) outro(s) lquido(s) (Figura 2, exemplificado com a mistura bromobenzeno-gua).

H2O 760mm azeotropo H2O-bromobenzeno

bromobenzemo

95 100 T

156

Figura 2. Curvas de destilao da mistura bromobenzeno-gua.

A composio do destilado depende do pso molecular dos componentes e de suas respectivas presses de vapor temperatura em que a mistura destila: gA / gB = pA x pmA / pB x pmB No caso da destilao da mistura bromobenzeno(A)-gua(B), que se processa a 95C, temos: pa presso de vapor da gua a 95C 640 mm pb presso de vapor do bromobenzeno a 95C 120 mm m b massa molecular da gua 18 m a massa molecular do bromobezeno 157 g bromobenzeno / g gua = 120 x 157 / 640 x 18 = 1,64 / 1 logo, cada 1grama de gua destilada carrea 1,64 gramas de bromobenzeno. O processo industrialmente muito atrativo devido ao baixo custo e pso molecular da gua. Em escala de laboratrio, a operao facilmente realizada em um sistema para destilao simples, munido de um funil de adio por meio do qual a gua evaporada constantemente reposta (Figura 3).

Figura 3. Aparelhagem para destilao por arraste de vapor.

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Os leos fixos so geralmente constitudos de componentes com alto peso molecular. Enquadram-se, na categoria, os lipdios de baixo ponto de fuso (azeite e outros leos comestveis). Quimicamente so classificados como steres de lcoois e cidos graxos de cadeia longa (triglicerdeos ou triacilgliceris, Figura 4). Gorduras e cras pertencem mesma categoria, mas possuem pontos de fuso mais elevados.
O O R'' O O R''' O O R'

Figura 4. Frmula genrica de um triglicerdeo A extrao de leo fixo (ou gorduras/cras) de fonte natural slida mais convenientemene executada em um extrator Soxhlet (Figura 5). O slido (devidamente modo) colocado em um cartucho poroso na cmara do extrator e o solvente de extrao adicionado ao balo. O solvente vaporizado e condensado na cmara do extrator dissolve o leo (ou gordura) da amostra. Ao atingir o nvel do sifo, a soluo retornar ao balo e o processo repetido um nmero de vezes (extrao contnua).

Figura 5. Extrator Soxhlet. Parte I Extrao de leos Fixos de Materiais Biolgicos Experimento Demonstrativo Objetivo: Demonstrar experimentalmente o funcionamento de um extrator Soxhlet na extrao de um leo fixo de tecidos vegetais (castanha de caju, milho, noz moscada, etc.). Procedimento: (detalhamento a ser apresentado pelo instrutor). Discusso 1. Quais so os dois principais mtodos para extrair grosseiramente um produto natural de materiais biolgicos? 2. Aponte trs analogias entre leo fixo e leo voltil. 3. s vezes um produto natural pode ser isolado macerando a fonte natural em gua e extraindo a soluo aquosa com um solvente diferente. Qual afirmao no uma propriedade necessria de

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um solvente para extrair um produto natural desta soluo aquosa? (a) o solvente no deve reagir quimicamente com os componentes da mistura. (b) o solvente extrator deve ser imiscvel com a soluo original. (c) o coeficiente de distribuio, K, para o produto natural deve ser grande. (d) o solvente extrator deve ter um ponto de ebulio alto. (e) o solvente deve ser prontamente separvel do soluto. 4. (Provo 2001) Lipdios podem ser recuperados de diversos materiais biolgicos atravs da extrao por solvente. Os tipos mais comuns de lipdios so gorduras e leos derivados de cidos carboxlicos de cadeias longas e do glicerol. A figura abaixo mostra um extrator do tipo Soxhlet onde pode ser efetuada a extrao de lipdeos. O solvente a ser usado na extrao, a regio onde deve ser colocado o material biolgico a ser extrado e o local de onde ser recuperado o extrato de lipdios so, respectivamente: Solvente (a) (b) (c) (d) (e) gua gua clorofrmio clorofrmio glicerol Local onde deve ser colocado o material biolgico cartucho poroso balo cartucho poroso balo balo Local onde ser recuperado o extrato de lipdeo balo cartucho poroso balo cartucho poroso cartucho poroso

Parte II. Isolamento do Eugenol a Partir do Cravo da ndia Objetivo: Isolamento de leos essenciais de tecidos vegetais (especiarias) por destilao com arraste de vapor (eugenol). O cravo da ndia contm entre 14% a 20% p/p de leo essencial, cujo principal constituinte o eugenol. Em menores quantidades, esto presentes tambm o acetato de eugenila e o sesquiterpeno cariofileno (Figura 6).

CH3O RO R = H eugenol R = OAc acetato de eugenila cariofileno

Figura 6. Componentes do leo essencial do cravo da ndia. Procedimento Nota: para simplificao o sistema mostrado na Figura 3 foi ligeiramente modificado. Montar um aparato para destilao simples, usando um balo de 250 mL. Colocar 5,0 g de botes de cravo da ndia (preferivelmente pulverizados) no balo de destilao, e adicionar 150 mL de gua. Aquecer suavemente o balo em banho de leo (mantido a cerca de 140C!) sob agitao magntica, at que sejam recolhidos cerca de 100 mL do destilado em um Erlenmeyer de 125 ml.. Transferir o destilado para um funil de separao e extrair com 2 x 10 mL de diclorometano. Desprezar a fase aquosa. Secar o extrato orgnico combinado com sulfato de sdio anidro. Decantar a soluo orgnica para um bquer previamente tarado e evaporar o solvente em banho-maria (capela!). Pesar o leo residual e calcular seu rendimento percentual em relao quantidade original de cravo utilizada. Reservar uma alquota para anlises cromatogrficas.

Discusso 1. Em que categoria geral de produtos naturais se enquadram as essncias? 2. Consulte nos catlogos (Index Merk, Handbooks, etc.) o ponto de ebulio do eugenol. 3. Baseado no peso original de cravo, calcular a porcentagem de recuperao do eugenol, considerando que as impurezas presentes no extrato so insignificantes. 4. Comente sobre a eficincia da montagem alternativa utilizada no processo de extrao do eugenol. 5. Por que a destilao por arraste de vapor preferida destilao simples quando se trata de leos essenciais? 6. Por que um sistema heterogneo, como gua e leo essencial, destila a uma temperatura abaixo de 100oC? 7. Os constituintes de um leo essencial particular podem ser separados por destilao fracionada a presso reduzida, cristalizao ou cromatografia. Supondo que, com leo essencial de cravo, nenhum dos procedimentos acima citados poderia ser adotado para separar os seus componentes (eugenol e acetato de eugenila). Nesse caso, proponha um fluxograma e equaes mostrando como o eugenol pode ser separado (quimicamente!!!) do seu derivado acetilado (ver Figura 6). 8. (Provo 2002) Em um laboratrio efetuou-se a nitrao do fenol, obtendo-se os ismeros o-nitrofenol (A) e p-nitrofenol (B). Os dois ismeros obtidos foram separados utilizando-se aparelhagem mostrada na Figura 3. O mecanismo escolhido para efetuar a separao baseia-se na destilao (a) por arraste a vapor do componente A, pois A mais voltil que B, por apresentar ligao hidrognio intramolecular. (b) por arraste a vapor do componente B, pois B menos solvel que A, por apresentar menor momento de dipolo. (c) fracionada, onde o componente A recolhido puro, pois apresenta menor ponto de ebulio que B. (d) fracionada, onde o componente B recolhido puro, pois apresenta menor solubilidade em gua.

Parte III Anlise Cromatogrfica do leo Essencial de Cravo

Objetivo: Examinar a constituio do leo essencial de cravo por cromatografia em camada delgada. Procedimento 1. Aplica-se em pontos separados, atravs de tubos capilares, uma gotinha das solues de eugenol (padro) e do leo de cravo recm extrado em uma mesma placa de cromatografia, a 1 cm da borda inferior da placa e mantendo-se cerca de 1 cm de distncia entre os pontos de aplicao. 2. Introduz-se a placa na cuba com o solvente de desenvolvimento indicado pelo instrutor. de modo que o nvel do lquido fique abaixo dos pontos de aplicao. Espera-se o desenvolvimento do cromatograma mantendo-se a cuba fechada. 3. Quando frente do solvente ficar a 1 cm (registre essa distncia) da borda superior da placa, retira-se e deixa-se secar totalmente ao ar (10 a 15 minutos). 4. Antes da revelao com iodo, verifica-se o cromatograma na lmpada UV. Marca-se o contorno das manchas das substncias UV-ativas, cuidadosamente, com o auxlio de uma lapiseira. 5. Para revelao definitiva, insere-se a placa em um recipiente cilndrico e seco de tamanho adequado contendo um pouco de iodo slido e coberto com um vidro de relgio. Espera-se o surgimento de manchas na placa. 6. Registrar as distncias percorridas pela frente do solvente e pelos componentes de cada amostra analisada (eugenol e do leo de cravo recm extrado).

Discusso 1. Com base no experimento realizado, apresente um desenho do seu cromatograma (revelado sob luz UV e vapor de iodo). 2. Determinar os Rf de todos os componentes das solues analisadas. 3. Supondo que voc precisa emitir parecer tcnico em relao ao extrato obtido. Voc poderia inferir no seu parecer que inequivocamente o mesmo contm eugenol? Voc pode inferir que seu

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extrato tambm contm acetato de eugenila e cariofileno? Ou nenhum deles? Ou outros constituintes? Explique. 4. Com base nos Rf dos componentes de sua amostra e considerando aspectos estruturais dos constituintes do leo do cravo, voc poderia fazer uma correspondncia entre as manchas observadas e os componentes do leo do cravo? 5. Observe o aspecto da sua cromatoplaca quando revelada sob luz UV e no vapor de iodo. Diga quantos componentes foram detectados em cada caso. Considerando os aspectos estruturais dos constituintes do leo do cravo, voc avalia como coerente os resultados da comparao? Explique.

Disposio dos Resduos e Insumos Seguindo indicao do instrutor, alguns resduos aquosos podero ser descartados na pia com gua corrente. Os demais resduos, lquidos e/ou slidos, devero ser acondicionados em frascos apropriados para posterior tratamento e reutilizao.