Ao del centenario de machu picchu para el mundo UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

INFORME 01 ENTEROBACTERIACEAE

CURSO: MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS.

ALUMNO: TUME FARFAN LUIS FERNANDO.

DOCENTE: Mcblga. . DOROTHY TORRES DE LEN.

SEMESTRE: 2011-II

FECHA: 28 de Septiembre del 2011.

I.-INTRODUCCION:

Las enterobactericeas son una familia de bacterias Gram negativas que contiene ms de 30 gneros y ms de 100 especies que pueden tener morfologa de bacilos o cocos. Los miembros de esta familia forman parte de la microbiota del intestino (coliformes) y de otros rganos del ser humano y de otras especies animales. Algunas especies pueden vivir en tierra, en plantas o en animales acuticos. Sucumben con relativa facilidad a desinfectantes comunes, incluido el cloro. Con frecuencia se encuentran especies de Enterobacteriaceae en la bioindustria: para la fermentacin de quesos y productos lcteos, alcoholes, tratamientos mdicos, produccin de toxinas en el uso de cosmticos, fabricacin de agentes antivirales de la industria farmacutica, etc. (Montiel, 2003). En la definicin clsica de una Enterobacteriaceae se usan siete criterios bsicos, son bacterias Gram negativas, la mayora bacilos, otros cocobacilos y otros pleomrficos, no son exigentes, son de fcil cultivo, son oxidasa negativo (excepto Plesiomonas, que es oxidasa positivo), es decir, carecen de la enzima citocromo oxidasa.1,son capaces de reducir nitrato en nitrito, son anaerbicos facultativos. Son fermentadores de carbohidratos en condiciones anaerbicas con o sin la produccin de gas (en especial glucosa y lactosa), y oxidadores de una amplia gama de substratos en condiciones aerbicas. (Famiglietti, 2005). Muchos gneros tienen un flagelo que sirve para desplazarse, aunque algunos gneros no son mviles. Adicional a ello, las Enterobacteriaceae no forman esporas, algunas producen toxinas y pueden ser encapsuladas y son organismos catalasa positivos. Son quimiohetertrofos, y necesitan para su crecimiento compuestos simples de carbono y nitrgeno, generalmente slo con D-glucosa, aunque algunas requieren aminocidos y vitaminas. La temperatura ptima de crecimiento es de entre 22 C y 37 C. (Jay, 2002). Las diferencias entre los nombres de los diversos gneros provienen de criterios ms precisos, como la fermentacin de los diferentes azcares, la produccin o no de azufre, la presencia de enzimas metablicas (-galactosidasa, desaminasas, descarboxilasas), etc. Los serotipos de importancia mdica y sanitaria pueden distinguirse entre s por la presencia o ausencia de antgenos en su constitucin celular, tales como en el lipopolisacrido (antgeno O), el antgeno flagelar (antgeno H) o el antgeno capsular (antgeno K). (Sways, 2005). Para distinguir los diferentes gneros de los dos grupos principales de enterobacterias se emplean ensayos de diagnostico y medico diferenciales. (Madigan, 2009).

II.MATERIAL Y METODOS: 1.-REACCION DE LA OXIDASA: Klebsiella sp.

Sembrar en agar nutritivo 37C 16-18 horas pero siempre menos de 24h Reactivo: a) Alfa Naftol. b) N.N dimetilparafenildiamidclorhidrato.

2.-AGAR NO3 Reactivo: Reactivo de Gries NO3 35C 24 h Naflilami Ac Sulfamidi Ac tartrico

3.-H2S y ferminilgluco y lactosa.

4. - KCN

35C 24 h

37C

24-48 h

Agar semislido 0.8 -0.7 %

5.-Transformacin de la fenilalanina a c .fenilpiruvico.

35 C- 24h

Sulfato de amonio (NH4)2SO4 Alumbre frrico

Ac Sulfrico H2SO4 6.-Descarboxilacion de la LISINA LIA (lisina hierro agar) 37C 34-48h con lisina Agar Taylor sin lisina

7.-Inhibicin de la B-Galactosidasa. Se hizo una suspensin del cultivo agregando 0.25 SSF Agar nutritivo 1 Gota de tolueno 0.25 ONPG Orto nitro fenil galacto piranosina. Color Amarillo indica prueba 8.-Hidrlisis de la Urea: Se incuba Caldo Urea 37C -24 h (+).

9.- Medio Columna: Movilidad

10.-Agar Arginina: Caldo Arginina Se inocula y se emplea un testigo (sin Arginina).

11.-Ataque a la Salicina. Agar se le coloca Salicina Purpura Bromo Cresol Indicador pH Amarillo (fermentacin) (+).

12.-Asimilacion del malonato:

Caldo Malonato se inocula

37C-24 h

13.-Aglutinacin: Suero polivalente (incluye muchos tipos). Vi= virulencia Cepa patrn Cepa problema

1 gota de solucin salina esterilizada + los inoculos

Tiene que tener aglutinacin:

COLIFORMES:

14.-Prueba Citrato:

Se siembra lnea en la superficie

35C

24-48 h

15.-Indol: Caldo Triptonado se usa reactivo Kovac.

16.-Rojo metilo: indicador de pH.

MRVP se incuba la cepa. 30-35 C 3-5 das.

17.-Voger proskaus. MRVP + KOH + Rojo a rosado

18.-Test Mckenzie Gilbert y Taylor

Caldo Lactosa Blis Verde brillante.

44+- 1 C

Verde amarillo 3-5 das .

19.-Prueba de Eijkman. Triptonado 44+- 1 + Indol Kovac 3-5 das. Verde -- Rojo.

III.- RESULTADOS:

Klebsiella sp. Asimilacin de Citrato.

Se da viraje verde azul marino La prueba es Positiva

Descarboxilacin de la Lisina.

Viraje lila suave- lila oscuro Prueba positiva

Produccin de H2S y fermentacin de la glucosa y lactosa.

Viraje: Rojo/naranja - Rojizo Lactosanegativa.

Viraje: Rojo/naranja - Amarillo Sacarosapositiva.

Viraje: Rojo/naranja - Amarillo Glucosa positiva.

Prueba de la catalasa Positiva, hay produccin de burbujas.

MOTILIDAD.

En el lugar donde se hizo la siembra por puntura, muestra que hay desplazamiento a ambos lados.

Prueba Positiva

PRUEBA INDOL.

No hay formacin de aro rojizo en La zona superior. La prueba es negativa

Hidrlisis de la Urea

Rosado leve - Grosella

Prueba positiva, la bacteria posee la enzima Ureasa.

Reaccin del NO3

Positivo Color Rojo.

Test de Mackenzee Gilburt y Taylor.

Prueba positive hay formacin de gas.

IV.DISCUSION:

La reduccin del nitrato a nitrito o gas nitrgeno por medio de la enzima nitrato reductasa, es un proceso de oxidacin por el cual el nitrato proporciona oxgeno para ser usado como aceptor de electrones. Si se observan burbujas en el medio, stas son de gas nitrgeno, ya que el nitrito intermediario inhibe las decarboxilaciones. Las enterobacterias generalmente son nitratos positivos. La reduccin de nitrato (NO3-) a nitrito (NO2-) y a nitrgeno gaseoso (N2) por lo comn se produce en condiciones de anaerobiosis, en las cuales en un microorganismo produce su oxigeno del nitrato. El oxigeno acta como un aceptor de hidrogeno; es decir, el protn y el aceptor final de electrones. La mayora de las bacterias aerobias son anaerobias facultativas y solo pueden reducir los nitratos en ausencia de oxigeno. El producto formado depende de la especie bacteriana. El producto final ms comn es el nitrgeno molecular (un gas) formado por la va de la reduccin del nitrito. De acuerdo con las condiciones ambientales, estos productos por lo comn no son oxidados con posterioridad ni asimilados en el metabolismo celular, pero son excretados en el medio circundante. La reduccin de nitrato a nitrgeno gaseoso (N2) u oxido nitroso (N20) se denomina desnitrificacion. El nitrato acta como un aceptor de electrones; por cada molcula de nitrato reducido se aceptan cinco electrones. (Sways, 2005).Como se pudo observar en el producto de reaccin de color rojo que indica que se han transformado los nitratos a nitritos.

En agar LIA se determina la capacidad de un microorganismo para atacar el aminocido lisina descarboxilndolo o desaminndolo, la fermentacin de glucosa, la produccin o no de gases (CO2), junto con la produccin o no de cido sulfhdrico (H2S). El indicador del PH del medio es prpura de bromocresol, el cual en acidez vira al color amarillo y en alcalinidad al color prpura. Por contener pequea cantidad de Glucosa (1 g/ L) al ser fermentada al fondo del tubo es amarillo y la superficie alcalina. Muchas bacterias poseen descarboxilasas que atacan el aminocido lisina, con liberacin de aminas de reaccin alcalina y con produccin de CO2. Para que acten las descarboxilasas se requiere PH cido que se obtiene por la fermentacin de la glucosa que tiene el medio. La Desaminacin de la lisina es un proceso oxidativo que se manifiesta por la aparicin de color rojo en el tendido, siendo el fondo del tubo amarillo por fermentacin de la glucosa que posee el medio. Tiene como fuente de azufre el TIOSULFATO DE SODIO, necesario para las bacterias puedan producir H2S y como indicador H2S, CITRATO FERRICO DE AMONIO el cual reacciona con el H2S produciendo un precipitado negro e insoluble de sulfato ferroso. Para que se produzca H2S se requiere de un medio cido por lo que dicha produccin generalmente est limitada al fondo del medio, razn por la cual un fondo negro debe leerse como A (cido), aunque el color amarillo usual est tapado por color negro. (Montiel, 2003). Esta prueba demuestra la presencia de la enzima beta-galactosidasa en algunos microorganismos. Hay bacterias que a pesar de poseer enzimas hidrolizantes de la lactosa (beta-galactosidasas), no pueden actuar sobre ella porque les faltan las enzimas extracelulares apropiadas (permeasas). A estas bacterias se les denomina mutantes crpticos. Para conocer si un microorganismo es productor de beta galactosidasa, basta aadir el compuesto orgnico O-nitrofenil-beta-D-galactopiransido (ONPG) que es incoloro. Si la bacteria posee las enzimas hidrolizantes (beta-galactosidasa), el compuesto se transforma en ortonitrofenol, un derivado cromognico de color amarillo. Todos los grmenes denominados fermentadores lentos de la lactosa son beta-galactosidasa positivos. (Famiglietti, 2005).

Normalmente el metabolismo del citrato comprende una condensacin de acetilo con la coenzima A y oxalacetato para entrar en el ciclo de Krebs. El medio utilizado contiene tambin sales de amonio inorgnicas. Un organismo capaz de utilizar el citrato como nica fuente de cabono tambin es capaz de utilizar las sales de amonio como nica fuente de nitrgeno. Las sales de amonio se desdoblan en amoniaco (NH) con la consiguiente alcalinidad del medio. El indicador de PH es el AZUL DE BROMOTIMOL el cual en presencia de alcalinidad vira al color azul indicando que la prueba es POSITIVA. Cuando no hay cambio de color ni crecimiento se dice que la prueba es NEGATIVA. Si no hay cambio de color, pero s hay crecimiento la prueba es DUDOSA. (Montiel, 2003).

El sustrato urea es una diamina del cido carbnico, denominada carbamida. Todas las amidas (RCO- NH2) son rpidamente hidrolizadas. La hidrlisis de la urea es catalizada por una enzima especfica que es la ureasa es una enzima microbiana importante, relacionada con la descomposicin de los compuestos orgnicos. Las enzimas bacterianas se clasifican en adaptativas o constitutivas. Una enzima adaptativa o inducida es aquella que es producida por una bacteria solamente cuando se encuentra presente su sustrato especfico. La ureasa es una enzima constitutiva ya que la sintetizan ciertas bacterias sin tener en cuenta si hay o no el sustrato urea. El indicador de PH es rojo de fenol, el cual en alcalinidad vira a un color violeta indicando una prueba positiva. si el color es amarillo indica una prueba negativa. (Koneman, 1997)

El indol es uno de los productos del metabolismo del aminocido triptfano. Las bacterias que poseen la enzima triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptfano con produccin de indol, cido pirvico y amoniaco. El indol se puede detectar en un medio adecuado observando el desarrollo de un color rojo despus de agregar el reactivo de Erlich o de Kovacs indicando una prueba POSITIVA, debido a que el indol reacciona con el grupo aldehdo del p- dimetilaminobenzaldehido. Si el color es amarillo indica una prueba negativa. EL SIM es un medio semislido sin hidratos de carbono que inhiban la produccin de H2S y tiene tiosulfato de sodio fuente de azufre y hierro peptonado como indicador de HS, lo que lo hace ms sensible en la deteccin de H2S por produccin de un precipitado negro de sulfuro ferroso. La movilidad bacteriana es otra caracterstica importante en la identificacin final de especie, se realiza en medios semislidos como el SIM, debindose leer antes que la prueba de indol porque al agregar el reactivo de Erlich sta se puede enmascarar. La prueba de motilidad se interpreta realizando un cuidadoso examen macroscpico del medio para observar una zona de desarrollo difuso que parte de la lnea de inoculacin. (Mac Faddin, 1980).

V.-CONCLUSIN: Se pudo observar que las enterobactericeas son Catalasa positivo, ureasa positivo, movilidad positivo, reductoras de nitratos a nitritos, etc.

V.REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Montiel, L; Marynes, K; et al. (2003). Indicadores bacterianos de contaminacin fecal en el agua de la Laguna de Sinamaica.Venezuela.

Famiglietti, A.(2005).Consenso sobre las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en Enterobacteriaceae. Revista Argentina de Microbiologa. Argentina.

Madigan,

Martinko, J, Dunlap, P; Clark (2009).Brock, Biologa de microorganismos.12, Ed.Edit, Pearson Addison Wesley.Espaa

los

James M.Jay. (2002).Microbiologa moderna de los Alimentos.4ta, Ed.Edit, Acribia, S.A.Zaragoza.Espaa. Sways, O. (2005).Microbiologa e inmunologa Diagnosticas.2da, Ed.Edit, World S.A.New York

Koneman Elmer W. Enterobactericeas en Diagnostico Microbiolgico. 5. Edicin, Washington Square: Lippincott Raven Publishers, 1997.

Mac Faddin J. Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia clnica. Panamericana, 1980