A BIOLOGIA DOS MACRFAGOS

ANDRESSA COOPE 2011

A Biologia dos Macrfagos

Sistema Imune Inato; Origem e caractersticas dos moncitos/macrfagos; Reconhecimento de microrganismos; Ativao de macrfagos; Diapedese; Fagocitose; Relao com o Sistema Imune Adaptativo; Macrfagos X Doenas Metablicas.

Elie Metchinikoff (1845-1916) - pai da imunologia

Prmio Nobel de Fisiologia e Medicina 1908

A introduo de um micrbio infeccioso seguido pelo acmulo de clulas mveis, os corpsculos brancos do sangue, que absorvem os micrbios e os destroem. Ns iremos dar-lhes o nome de fagcitos (do latim: fago = comer e cito = clula)...

IMUNIDADE INATA
Primeira linha de defesa contra infeces; As clulas do sistema imune inato so codificadas na linhagem germinativa; Reconhece estruturas que so essenciais a sobrevivncia do microrganismo.

Componentes do Sistema Imune Inato

Barreiras fsicas e qumicas (defensinas, criptocidinas e linfcitos intraepiteliais); Clulas fagocitrias (Neutrfilos, Macrfagos e Natural Killers); Protenas do sangue (complemento, protena C reativa, etc); Citocinas (TNF , Interleucinas, quimiocinas, etc)
Mogensen, Clin Microbiol Rev, 2009

Clulas de defesa do organismo

Clulas Mielides

Clulas Pluripotentes

Clulas linfides Timo

Moncito

Granulcito s

Eritrcitos Megacaricito

Macrfagos
Fagocticas

Linfcito B
Plasmcitos Produtora de

Linfcito T
Celular

anticorpos

Moncitos
Possuem um nico ncleo que ocupa cerca de 50% do volume celular (formato arredondado ou em forma de feijo); So produzidos cerca de 1 x 106 clulas por dia; Permanecem no sangue por cerca de 20 horas; Circulam na corrente sangunea para todos os tecidos incluindo rgo linfides mesmo na ausncia de estmulo inflamatrio; Representam 6-10% dos leuccitos.

Neutrfilos

Eosinfilos

Moncitos

Basfilos

O moncito se diferencia em MACRFAGO aps infiltrar no tecido alvo

Medula ssea sangue tecido

Monoblasto

Pr-moncito

Moncito

Macrfago

fagocitos e lisossomo s Presena de receptores

Adaptam-se ao novo ambiente e executam funes especficas de vigilncia, trfica e imunolgica.

Macrfagos
Grandes e irregulares Ncleo arredondado Grande nmero de lisossomos Pseudpodos desenvolvidos Desempenham papel central na imunidade inata e adquirida Tm vida longa e podem sofrer diviso celular no local da inflamao;

Macrfagos
Principais clulas fagocticas de longa vida do organismo; Reconhecem e eliminam patgenos alm de remover clulas senescentes em processo de morte celular; No possuem capacidade de memria. Possuem um repertrio de especificidade limitado. No reagem contra molculas prprias do nosso organismo.

Heterogeneidade dos macrfagos

Macrfagos residentes so encontrados em todos os orgos do corpo, mesmo na ausncia de estmulo inflamatrio. Essa populao de clulas constantemente renovada

Microglia

Macrfago Alveolar

Clula de Kupffer

Osteoclasto

Microglia

Representam 20% do contedo clulas da glia; Ativada por mecanismos que infectam o crebro e proliferam rapidamente; Removem e destroem neurnios danificados ou mortos e agentes infecciosos diminuindo a inflamao antes que danifique o tecido neural.

Clulas de Kupffer
Macrfagos residentes do fgado, apresentam muitos lisossomos e ncleo grande e oval; Fagocitam as partculas estranhas que atingem o fgado pela veia porta; Destruio de hemcias senescentes.

Macrfagos Alveolares
o maior componente celular do pulmo; Defesa contra microrganismos que infectam atravs das vias areas, presentes tanto no tecido intersticial do septo alveolar quanto no lmen do alvolo; Defesa predominante no pulmo em condies associadas com inflamao crnica, como doena pulmonar obstrutiva. Possuem pouca propriedade como APCs e suprimem as respostas proliferativas dos linfcitos T

Osteoclastos

So clulas multinucleadas (330 ncleos por clula); Participam do processo de remodelagem ssea; Osteoporose.

Heterogeneidade dos macrfagos

Nomenclatura Clulas de Langerhans Clulas Tipo A Clulas Mesangiais Macrfagos Esplnicos Macrfagos Linfonodais Macrfagos Pleurais e Peritoneais Pele Articulaes (circundam a cavidade sinovial) Rins (macrfagos intraglomerulares) Bao (circundam os sinusides vasculares) Linfonodos (residentes nos sinusides) Circundam a cavidade pleural e peritoneal Localizao

Como os macrfagos reconhecem os invasores?

Reconhecimento de padres moleculares associados aos microrganismos (PAMPs)

Reconhecem produtos microbianos que so essenciais a sobrevivncia dos microrganismos
Padro molecular do microrganismo Fonte

RNA dupla-hlice Peptdeos N-formilmetionina LPS cidos teicicos

Vrus em replicao Protenas bacterianas Bactrias gram-negativa Bactrias gram-positiva

Mogensen, Clin Microbiol Rev, 2009

Receptores de reconhecimento de padres (PRR)

Microorganismo

Quimiocinas Peptdeos N-formilmetionil Mediadores lipdicos LPS

Receptores transmembrana CD14 de 7 alas

Receptores semelhante ao TOLL

Receptores Scavenger

Receptores de manose

Chen, Nat Rev Immunol, 2010

Receptores scavenger ou depuradores

Atuam na ligao e ingesto de microrganismos; Reconhecem padres de patgenos modificados; Reconhecem e promovem a endocitose de lipoprotenas de baixa densidade (LDL) oxidada ou acetilada.

Receptores de manose

Atuam na ligao e ingesto de microrganismos; O receptor uma lectina que reconhece manose e fucose de glicoprotenas e glicolpideos presentes na parede dos micrbios, principalmente fungos. Estimulam a fagocitose.
Produo de citocinas e intermedirios reativos do oxignio

Fagocitose do microrganismo para dentro do fagossomo

Morte dos microrganismos

Receptores de complemento (C3) e de anticorpo (Fc)

Opsonizao: Revestimento de um microrganismo com molculas (anticorpo, protenas de complemento e lectinas) que favorecem sua destruio pelos fagcitos.

bacter ia Macroph age Complement receptor (CR: CR1, CR3, CR4)

Receptores do tipo TOLL

Membros da superfamlia de receptores de interleucina 1. Foram descritos 13 membros at o momento;
MyD88 TLR2
PM

TLR4

Reconhecem padres moleculares de vrios microrganismos (LPS, peptideoglicanos, flagelina, RNA dupla-hlice), alm de ligantes endgenos (HSP, fibronectina, cido hialurnico, etc..) TLR2 e TLR4 reconhecem o lipopolissacardeo (LPS) presente na parede de bactrias gramnegativas.

IRA K TRA F6 IkBK

NFkB

LPS - lipopolissacardeo

cido lipotecico

cido tecico

LPS
Proteoglicano Espao periplasmtico Membrana plasmtica Fosfolipdeos Proteoglicanos Fosfolipdeos Membrana externa Espao periplasmtico Membrana plasmtica

Gram-positivo

Gram-negativo

Toll-like Receptors (TLR)

LBP LPS

TLR4
MD2
MP

Quatro membros reconhecem componentes lipdicos: TLR1, 2, 4 e 6; O TLR4 uma vez ativado, ativam uma cascata de sinalizao intracelular, induzindo fagocitose, produo de citocinas e quimiocinas e a atividade microbicida.

CD14

MyD88 IRAK TRAF6

IKK

JNK

Park, Nature, 2009 Saitoh, Immunol Rev, 2009 West, Annu Rev Cell Cev Biol, 2006

NFkB

Ap-1

Ativao dos macrfagos

Macrfagos ativados
Aumento da transcrio e traduo de produtos gnicos

Aumento da capacidade fagoctica e microbicida; Promovem secreo de mediadores inflamatrios como: quimiocinas, citocinas, eicosanides, protenas do complemento e enzimas.

Liberao de citocinas e quimiocinas

Macrfago ativados secretam: Citocinas (TNF, INF , Interleucinas) Quimiocinas
Ao Autcrina

1. Promovem a reao inflamatria; 2. Recrutam clulas efetoras para os stios de infeco; 3. Promovem gerao e maturao de novas clulas;

Ao parcrina

Clula Vizinha

Circulao Ao Endcrina Clula Distante

Caractersticas fenotpicas dos macrfagos

LPS INF-

IL-13 IL-4

Ativao clssica (M1) Resposta infeco. Ao anti-microbial Produz citocinas pr-inflamatria (IL-12 e IL-23);

Ativao alternativa (M2) Supresso da inflamao Reparao do tecido

Como os moncitos entram no tecidos atingido?

Recrutamento dos macrfagos no stio de infeco: Diapedese

1- Expresso de citocinas e quimiocinas pelos macrfagos teciduais; 2- Expresso de molculas de adeso; 3 - Rolamento pelo endotlio; 4- Aderncia no endotlio: mediado por receptores presentes nos moncitos bem como em clulas endoteliais; 5 - As quimiocinas tornam a ligao das integrinas de alta afinidade; 6 - Rearranjo do citoesqueleto: Migrao na direo do gradiente de concentrao qumico.

E-selectinas

Integrinas: VCAM e ICAM

Como os macrfagos realizam a fagocitose e matam os patgenos?

Fagocitose de patgenos
pseudpode

macrfago

macrfago

1. Reconhecimento e interao receptor ligante 2. Sinalizao Celular 3. Formao do pseudpode 4. Engolfamento e formao do fagossomo

Fagossomo

Fagocitose de patgenos
1. Fuso do fagossomo com os lisossomos fagolisossomo; 2. Produo de enzimas proteolticas e intermedirios reativos de oxignio e nitrognio nos fagolisossomos; 3. Destruio e degradao do material ingerido; 4. Rompimento da membrana do fagolisossomo; 5. Produo de mediadores que amplificam a resposta inflamatria (citocinas e eicosanides); 6. Os peptdeos gerados a partir de protenas microbianas so apresentados aos linfcitos T atravs de molculas de classe II do MCH, iniciando as respostas imunes adaptativas.

Resumo dos pontos importantes

Os macrfagos se diferenciam a partir dos moncitos do sangue originados da medula ssea; A diferenciao dos macrfagos ocorre nos tecidos; Macrfagos interagem com os patgenos atravs de receptores que reconhecem padres moleculares (Toll, Receptor de Manose, receptores Fc e de C3); Aps a infeco os moncitos adentram o endotlio por um mecanismo chamado diapedese; Quando ativados, os macrfagos apresentam maior atividade fagoctica e microbicida, alm de secretar citocinas e quimiocinas; Existem duas vias de ativao dos macrfagos: clssica (M1) e alternativa (M2); M1 em resposta infecao, tem ao anti-microbial, ativado por LPS e/ou INF- e produz citocinas prinflamatria (IL-12 e IL-23) e ROS; M2 est relacionado com supresso da inflamao e reparao do tecido e ativado por IL-13 e/ou IL-4.

Macrfagos- interface com a imunidade adquirida

Apresentao de Antgeno
Macrfagos so clulas apresentadoras de antgenos (APCs)

Apresentao de Antgeno
Possuem a capacidade de processar antgeno por protelise, convertendo antgenos proticos em peptdeos menores; Expressam protenas do MHC classe I e II; So capazes de associar o peptdeo processado ao MHC; Macrfagos participam da imunidade adaptativa atravs da apresentao de antgeno pelo MHC classe II para os linfcitos T helper.

Sistema Imune Inato X Doenas metablicas

Imunidade inata X Doenas metablicas

A ativao anmala de macrfagos contribui para o desenvolvimento de doenas metablicas

OBESIDADE ATEROSCLEROS E DIABETES TIPO 2

Gregor & Hotamisligil, Annu Rev Immunol 2011 Hotamisligil, Nat Med 2010 Hotamisligil, Cell 2010 Tabas, Circ Res 2010

Aterosclerose
o fator determinante das principais causas de morte entre obesos e diabticos que so: Infarto agudo do miocrdio e AVC; caracterizada pela formao de placas de gordura (ateromas) em artrias de mdio e grande calibre comprometendo o fluxo de sangue atravs dessas artrias. O principal fator que leva a formao dos ateromas o aumento dos nveis de LDL oxidada ou acetilada na camada ntima das artrias.

Aterosclerose
Scavenger Receptors
Reconhecem e promovem a endocitose de lipoprotenas de baixa densidade (LDL) oxidada ou acetilada.

Imunidade Inata X Aterosclerose

A formao do centro necrtico na placa de ateroma causada por apoptose dos macrfagos e por defeitos no clearance fagoctico dos macrfagos em apoptose; TLR4 expresso em macrfagos presentes em placas de ateroma; A sinalizao por meio dos TLR4 ativa NF B induzindo inflamao, formao de foam cells.

Tabas, Circ Res 2010 Hotamisligil, Nat Med 2010

Obesidade
Resistncia insulina Hiperinsulinemia Intolerncia glicose

Doenas cardiovasculares Dislipidemia

Diabetes Tipo 2 Cncer Infertilidade Apnia do sono

Esteatose heptica Hipertenso arterial Osteoartrite

Imunidade Inata X Obesidade

Na obesidade ocorre ativao de um processo inflamatrio subclnico crnico que cursa com infiltrao de macrfagos ativando vias inflamatrias e produo anmala de citocinas.

Inflamao, infiltrao de macrfagos produo de citocinas inflamatrias e comprometimento da funo do adipcito

Wellen & Hotamisligil JCI, 2003 Hotamisligil Science,1993

Toll-like Receptor 4 (TLR4)

TLR4
CD14 MD2
MP

MyD88 IRAK TRAF6

Dieta Hiperlipdica

IKK

JNK

Milanski, J. Neurosci., 2009 Tsukumo, Diabetes, 2007 Shi, J Clin Invest, 2006

NFkB

Ap-1

Obrigada!

andressacoope@gmail.com

Obesidade
Resistncia insulina Hiperinsulinemia Intolerncia glicose Doenas cardiovasculares

Dislipidemia

Diabetes Tipo 2 Cncer Infertilidade Apnia do sono

Esteatose heptica

Hipertenso arterial Osteoartrite

Precursores de adipcitos tm potente capacidade fagoctica; Vrios genes cruciais para o adipcito so essenciais para macrfagos (citocinas, molculas inflamatrias, transpostadores de AG, receptores scavengers).

O tecido adiposo de obesos caracterizado por inflamao crnica e progressiva infiltrao de macrfagos.

Mudanas fsicas alteraes parcrinas - MCP-1 - recrutamento de macrfagos Danos oxidativos por aumento do ambiente lipoltico recrutamento de macrfagos Leptina e adiponectina recrutamento de macrfagos

Recrutamento de macrfagos produo de citocinas inflamatrias e comprometimento da funo do adipcito

Hotamisligil, 2003