ANALISIS INSTRUMENTAL ESPECTROSCOPA Estudio de la interaccin entre la radiacin electromagntica (luz) y la materia, con absorcin o emisin de la energa radiante.

Espectroscopa atmica Luz se comporta como onda y partcula. Espectro electromagntico: Distribucin energtica del conjunto de las ondas electromagnticas.
Tcnica Espectroscopa de emisin atmica Espectroscopa de absorcin atmica Excitacin Calor UV-vis Relajacin UV-vis Calor

Referido a un objeto se denomina espectro Espectroscopa de UV-vis UV-vis electromagntico o fluorescencia atmica simplemente espectro a la radiacin Espectroscopa de Rayos X Rayos X rayos X electromagntica que emite (espectro de Espectroscopa molecular emisin) o absorbe (espectro de absorcin) Tcnica Radiacin electromagntica una sustancia. Dicha radiacin sirve para Espectroscopa de identificar la sustancia de manera anloga resonancia magntica Radiofrecuencias a una huella dactilar. Los espectros se nuclear Espectroscopa de microondas Microondas pueden observar Espectroscopa infrarroja Infrarrojo mediante espectroscopios que, adems de Espectroscopa permitir observar el espectro, permiten Ultravioleta-visible ultravioleta-visible realizar medidas sobre ste, como Espectroscopa de la longitud de onda, la frecuencia y la fluorescencia Ultravioleta-visible ultravioleta-visible intensidad de la radiacin. El espectro electromagntico se extiende desde la radiacin de menor longitud de onda, como los rayos gamma y los rayos X, pasando por la luz ultravioleta, la luz visible y los rayos infrarrojos, hasta las ondas electromagnticas de mayor longitud de onda, como son las ondas de radio.

ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION 1. Molecular 2. Atmica El analito absorbe la energa transportada por un fotn pasando a un estado de mayor energa. Intensidad de fotones que pasa a travs de una muestra se atena debido a absorcin, medida = absorbancia. Instrumentacin Fuente de energa de radiacin electromagntica: fuente continua: radiacin dentro de una amplia gama de fuente lineal: emiten radiacin en algunas gamas estrechas de de energa trmica: llamas y plasmas de energa qumica: reacciones exotrmicas

Seleccin de : se intenta seleccionar solo una, para que slo el analito absorba. Filtros de absorcin o interferencia (no permiten seleccin continua de ) Selectores monocromticos: utiliza red de difraccin o prisma que permite la variacin continua de la que se deja pasar

Slit: rendija por la que pasa la luz Slit pequeo: baja sensibilidad y alta resolucin (anlisis cualitativo) Slit grande: alta sensibilidad y baja resolucin (anlisis cuantitativo) Detectores: utilizan un transductor que convierte la seal formada por fotones en seal elctrica fcil de medir. Lo ideal es que la seal del detector sea una funcin lineal de la potencia de la radiacin electromagntica. Detector Fototubo Fotomultiplicador Fotodiodo de Si Fotoconductor Clula fotovoltaica Termopar Termistor Neumtico Piroelctrico Transductores de fotones Rango 200-1000nm 110-1000nm 250-1100nm 750-6000nm 400-5000nm Transductores trmicos 0,8-40 mm 0,8-40 mm 0,8-1000 mm 0,3-1000 mm Seal emitida Corriente Corriente Corriente Cambio de resistencia Corriente o voltaje Voltaje Cambio de resistencia Desplazamiento membrana Corriente

Procesadores de la seal: La seal elctrica generada por el transductor se enva a un procesador que la presenta de forma ms cmoda para el analista. El procesador puede usarse tambin para calibrar la respuesta del detector, amplificar la seal procedente del detector, eliminar ruido mediante filtracin o transformar matemticamente la seal. 1. ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION MOLECULAR UV/VISIBLE

Cuando una molcula o in absorbe radiacin UV o visble sufre un cambio de su configuracin de electrones de valencia. Transiciones en que un electrn pasa de un orbital ocupado a otro no ocupado * n * * n * Los enlaces y grupos funcionales que originan la absorcin de radiacin UV y visible = cromforos. Transmitancia: cuociente entre la luz transmitida y la incidente. T= P/Po x 100 se obtiene transmitancia porcentual 100%T es una sustancia totalmente transparente 0% T una sustancia totalmente opaca Ley de Lambert Beer: relacin lineal entre la absorbancia (o transmitancia) y la concentracin de la muestra. A=bc A = log 1/T coeficiente de extincin molar: probabilidad de que el analito absorba un fotn de una energa determinada, por lo tanto depende de y del disolvente. En muestras con mltiples componentes las absorbancias son aditivas. Limitaciones ley L-B: - fundamentales: vlida solo para concentraciones bajas de analito (concentraciones altas se pierde la independencia de partculas del analito de las dems. Las interacciones pueden cambiar el valor del coeficiente de extincin molar) - qumicas: cuando las especies absorbentes participan en una reaccin de equilibrio - instrumentales: vlida solo para radiacin monocromtica. Radiacin policromtica produce desviacin negativa. Radiacin difusa (alanza detector pero no sigue el camino ptico entre fuente y detector) por

imperfecciones del selector de que permiten que luces extraas se cuelen tambin interfieren. Instrumentacin: Fotmetro de filtro: utiliza un filtro de absorcin o interferencia. Espectrmetro: utiliza un monocromador. Puede ser mono haz o doble haz (con ayuda de un chopper). Doble haz: se puede desdoblar haz a intervalos regulares. La mitad de la luz atraviesa la muestra y la otra un blanco. La absorbancia medida tiene en cuanta la tasa de absorcin muestra/banco y permite corregir desviaciones en el detector y en la fuente de salida. Fuentes: dependiendo de la zona de trabajo. Deben ser uniformes en intensidad - Lmpara H2 y D2: continua 160-380 (UV) - Lmpara tungsteno: continua: 320-2400nm (VIS) Cubetas: vidrio o slice (VIS) cuarzo (UV)

Monocromador: debe tener: rendija de entrada, elemento dispersante (prisma o red de difraccin), espejos que guan los haces, rendija de salida. Slit pequeo: baja sensibilidad, alta resolucin Slit grande: alta sensibilidad y baja resolucin (se puede perder linealidad pq deja entrar luz policromtica) Detectores (de fotones): conversin de radiacin en flujo de electrones y posteriormente en corriente o voltaje en el circuito de lectura: clula fotovoltaica: Consisten en un electrodo (nodo) de un metal (Cu, Fe, Al) en el que se deposita un material semiconductor como selenio y despus se recubre con fina pelcula de Ag o Au. Esto sirve como electrodo colector (Ag). La energa radiante genera una corriente en la interfase entre el semiconductor y el metal. Al incidir radiacin el semiconductor se vuelve conductor, se liberan electrones y huecos +. Electrones pasan a circuito externo para recombinarse con huecos que migran hacia el metal base, se crea una corriente cuya magnitud es proporcional al nmero de fotones que inciden. (es difcil amplificar la seal de salida, manifiestan fatiga) fototubo: fotn incide en ctodo recubierto con una superficie fotoemisora. Se obtiene corriente proporcional a intensidad fotnica. Tubos producen pequeas corrientes oscuras debidas a efectos trmicos Tubo fotomultiplicador: la seal se amplifica mediante el uso de dinodos en serie. Cada dinodo se conecta a una fuente externa de 90V generando en el colector una avalancha de 106-107 electrones por fotn incidente Fotodiodos de silicio: la absorcin de la radiacin electromagntica aumenta la conductividad a travs de una unin pn de polarizacin inversa. Se pueden miniaturizar y utilizar en series lineales de fotodiodos Detector de arreglo de diodos: permite detectar simultneamente la radiacin de varias . Rpida adquisicin de espectros.

Factores que influyen en absorcin: - solventes: pueden absorber luz, interaccionar con analito y disminuir absorcin, interferir con absorcin - pH - ancho slit Aplicaciones espectrometra de absorcin molecular - Titulaciones fotomtricas - Estequiometra de un complejo ML - Determinacin constantes de equilibrio - Determinacin constante de acidez - Determinacin de 2 compuestos que absorben a 2 distintas Evaluacin: - Exactitud: 1-5% errores relativos. Est limitada por la calidad del blanco - Precisin: limitada por errores indeterminados o ruido instrumental - Sensibilidad: equivalente a la pendiente de la curva de calibrado de ley lambert-beer. Mejora cuando se selecciona la en el mx de absorbancia o cuando se aumenta longitud del paso de luz Error fotomtrico: c/c= (0,434 * T ) / TlogT T: caracterstica del instrumento Es conveniente ajusta el intervalo ptimo de transmitancia en que el error de concentracin es mnimo. Es fcilmente demostrable que calibrado que suponga un 2080% de transmitancia, el error es mnimo. ESPECTROSCOPIA VIBRACIONAL IR Regin que se utiliza en espectro infrarrojo: 2500-16000nm. En esta zona se consigue excitar transiciones vibracionales de la molcula: estiramientos y flexiones de los enlaces. Cuando una molcula se irradia con radiacin electromagntica de la zona IR, el enlace de vibracin absorbe energa radiante si la frecuencia de vibracin es igual a la de la radiacin. Cuando una molcula absorbe radiacin IR, la vibraciones molecular con frecuencia igual a la luz aumenta en intensidad, es decir, el enlace que une 2 tomos se estira y comprime un poco ms Cada frecuencia de luz absorbida por la molcula corresponde a la frecuencia de vibracin de un enlace especfico. Cada molcula dar lugar a un IR diferente. As observando su IR podemos saber qu enlaces hay y por lo tanto los grupos funcionales que existen en un compuesto orgnico. La frecuencia exacta de una transicin para un enlace determinado va a depender entre otras cosas de la fuerza de enlace y de la masa de los tomos en los extremos del enlace. Espectro IR: % transmitancia v/s nmero de onda (cm-1). Intensidad se puede expresar como transmitncia o absorbancia.

Instrumentacin Fuentes: - Lmpara tungsteno em IR cercano - Bombilla nerst (oxidos de tierras raras): continua, 04-20mm - Globar nicrom (carburo de silcio): continua, 1-40 mm - Filamento de wolframio - Laser de CO2 Constan de um slido interte que se calienta elctricamente a 1500-2200K y se obtiene una radiacin continua. Detectores: energa de IR no es suficiente para producir una corriente medible cuando se utiliza un detector de fotones. La absorcin de fotones infrarrojos por detectores trmicos aumenta su temperatura cambiando sus propiedades. Detectores trmicos: - termopar: la radiacin incide sobre la unin de 2 metales (ej Bi y Sb) la cual genera una diferencia de potencial que vara en funcin de la temperatura. Detecta variaciones del orden de 10-6K. 600-20.000nm - bolmetro: tipo de termmetro de Pt o Ni en los cuales cambia la resistencia en funcin de un pequeo cambio de temperatura. Si est constituido por Si se llama termistor. 600-20.000nm Detectores piroelctricos: Cambia la polarizacin en funcin de la temperatura generando un potencial elctrico producido por movimiento de cargas + y a los extremos opuestos de la superficie a travs de la migracin. Se usa un material piroelctrico como el sulfato de glicina. En IR se puede acoplar al detector un procesador de Transformada de Fourier (FTIR): se sustituye el monocromador por un interfermetro (hace que todas las lleguen al mismo tiempo al detector) Aplicaciones: til para identificar compuestos orgnicos e inorgnicos puros. Analisis cuantitativo menos til que rango uv-vis. Hay ms desviaciones a ley de beer. Se pueden determinar hidrocarburos totales por enlace C-H. Determinacin de contaminantes en el aire. Espectro: % T v/s n de onda (cm-1)

2. ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN ATMICA Molculas se atomizan hasta tomos o iones elementales en estado gaseoso. As se mide la absorcin UV-VIS, la emisin o la fluorescencia de las especies. Instrumentacin:

Mtodos introduccin de la muestra: sometida a un proceso de preparacin en que pasa a disolucin orgnica o acuosa: - nebulizacin neumtica (disolucin o suspensin) - nebulizacin ultrasnica (disolucin) - vaporizacin electrotrmica (slido, lquido, disolucin) - generacin de hidruros (disolucin de ciertos elementos) - insercin directa (slido, polvo) - ablacin por laser (slido, metal) - ablacin por arco o chispa (slido conductor) - chisporroteo de descarga luminiscente (slido conductor) Atomizacin de llama y electrotrmica requieren muestra lquida o en disolucin. Las muestras slidas deben disolverse en solvente adecuado, si no es solublel deben digerirse usando HNO3, H2SO4, o HClO4. Para concentrar los analitos suele recurrirse a extraccin lquido-lquido. Atomizador: llama, electrotrmico, generador hidruros, vapor en fro (Hg) Fuente: lmpara ctodo hueco Monocromador Detector: fototubos, tubos fotomultiplicadores, etc Sistema de lectura y procesamiento de la seal Absorcin atmica con llama (FAAS): Atomizacin: llama (cmara de aerosol, gases de combustin: combustible y oxidante) Ventajas: mnimas interferencias espectrales, pequea dependencia de la temperatura, buena sensibilidad y exactitud Desventajas: solo metales (otros elementos forman xidos rpidamente), anlisis cuantitativo. Ionizacin: si hay exceso de energa se produce ionizacin adems de atomizacin. Iones interfieren. Agregar otro elemento con potencial de ionizacin mayor. A concentraciones bajas. Autoabsorcin: desviaciones a concentraciones altas. tomos absorben la radiacin de tomos vecinos y no de la fuente de excitacin. Anlisis cuantitativo: A = KbC K: involucra eficiencia de la atomizacin y el paso al estado excitado (sensibilidad) b: paso a travs de la llama C: concentracin de tomos en la llama Se pueden analizar 67 elementos, la muestra debe estar lquida y disponer de al menos 2-4 mL.

 Atomizacin electrotrmica Se utiliza calentamiento por resistencia en lugar de por llama. LD menor. Atomizador tpico: Horno de grafito: por el tubo pasa una corriente elctrica que produce un calentamiento por resistencia. 3 fases: 1. Secado 50-200 C 2. Calcinacin 200-800C 3. Atomizacin 2000-3000C Muestras entre 5-50uL. Seal de salida: abs v/s ug/ml. Se deben utilizar patrones. Atomizacin por generador de hidruros Reaccin qumica que produce un producto voltil. Elementos como As, Se, Sb, Bi, Ge, Sn, Te y Tb forman hidruros voltiles cuando reaccionan con NaBH4 en medio cido. Un gas inerte transporta hidruros voltiles a una llama o tubo de observacin de cuarzo calentado situado en la va ptica. Atomizacin en vapor fro Slo para mercurio. Se trata muestra con cido ntrico y sulfrico (Hg2+) y luego reduccin del mercurio con SnCl2. mercurio elemental conducido a tubote absorcin en camino ptico largo. Eleccin mtodo de atomizacin: depende principalmente de la concentracin de analito. LD menor para atomizacin electrotrmica, gran sensibilidad. Atomizacin con llama mayor precisin, menos interferencias, mayor cantidad de muestra y menos experiencia por lo tanto se elige este cuando la concentracin del analito es mayor al LD, sino se utiliza la atomizacin electrotrmica. Seleccin y amplitud de rendija: lmpara de ctodo hueco proporciona lneas de emisin que corresponden con el espectro de absorcin del analito. La sensibilidad de una lnea de absorcin atmica se describe por su concentracin carcterstica (concentracin del analito que proporciona un 99% de transmitancia) en general se elige la que proporciona mejor sensibilidad (y que absorba solo analito y no interferente) Interferencias de matriz: se produce por el cambio en la viscosidad y densidad de la muestra con respecto a las disoluciones estndares. Hay que igualar propiedades fsicas de patrones y muestras: mtodo de la adicin de estndar. Si la composicin de la matriz es conocida se pueden preparara patrones de matriz idntica. Si el fondo se debe a un componente conocido de la matriz se puede agregar un exceso de l a todas las muestras. Interferencias espectrales: cuando la lnea de absorcin de un analito se superpone con la lnea o banda de absorcin de un interferente. Absorcin y dispersin se corrigen analizando un blanco. Interferencias qumicas: presencia de compuestos que forman productos estables con el analito. Se pueden aadir agentes protectores y liberadores. Ionizacin.

Estandarizacin mtodo: ley de beer tambin se aplica pero en general no hay buena linealidad. Curvas se pueden adaptar usando ecuaciones cuadrticas y cbicas. Lo mejor es hacer anlisis cuantitativo con patrones externos, aunque las interferencias de matriz son frecuentes. A menudo se recurre al mtodo de adicin del patrn aunque tiene la limitacin de que debe haber relacin lineal entre absorbancia y concentracin. Sensibilidad: depende de la composicin de la llama y la posicin. Se puede mejorar aspirando un patrn y ajustando las condiciones de funcionamiento. En atomizacin electrotrmica depende de las fases de secado y formacin de cenizas. Para cada tipo de muestra han de establecerse la temperatura y tiempo utilizados en cada fase. Excelente selectividad. ESPECTROSCOPIA DE EMISIN (molecular) Relajacin: analito pasa de estado de alta energa a baja energa, la liberacin puede ser en forma de calor o radiacin electromagntica. Fluorescencia: emisin de un fotn cuando el analito regresa a un estado de menor energa con el mismo espin que el estado de mayor energa Fosforescencia: emisin de un fotn cuando el analito regresa al estado de baja energa con espin contrario al estado de alta energa. Espectro de excitacin: controlando la emisin en una fija y variando la de excitacin. Permite seleccionar la mejor para anlisis cuantitativos o cualitativos. Una molcula solo tiene 1 espectro de excitacin, pero 2 de emisin (fluorescencia y fosforescencia). Instrumentacin: Para fluorescencia: 2 diseos para medirla 1. Fluormetro: las de excitacin y emisin se seleccionan mediante filtros de absorcin o interferencia. Fuente de excitacin: lmpara de vapor de mercurio de baja presin que proporciona intensas lneas distribuidas por toda la regin UV/VIS. 2. Espectrofluormetros: utilizan selectores monocromticos para de emisin y excitacin. Fuente de excitacin: lmpara de arco de Xe de alta presin con espectro de emisin continuo. Cubetas: similares a absorcin ptica molecular. Ambos tiles para anlisis cuantitativos, para obtener espectro de emisin o excitacin solo puede usarse espectrofluormetro.

Fosforescencia: se debe discriminar entre fosforescencia y fluorescencia. Esta ltima tiene menor tiempo de vida, se logra retrasando la medicin entre la excitacin y la medicin de la emisin de fosforescencia. 2 hlices controlan esto. Aplicaciones cuantitativas de luminiscencia molecular: fluorescencia (en mayor medida que fosforescencia) utilizada para anlisis cuantitativo directo o indirecto. Indirecto cuando analito no fluorescente y se hace reaccionar con reactivo para formar producto con propiedades fluorescentes. Tambin se puede medir la disminucin en la fluorescencia debida al analito. Analitos inorgnicos generalmente no tienen fluorescencia suficiente. Los orgnicos muchas veces contienen anillos aromticos que suelen ser fluorescentes. Alta selectividad. Sensibilidad depende de: rendimiento cuntico, fuente de excitacin, volumen muestra. ESPECTROSCOPA DE EMISIN ATMICA Emisin atmica: cuando un electrn de valencia pasa a un nivel de mayor energa a uno menor. Equipo similar al de absorcin atmica. Atomizacin y excitacin La misma fuente de energa trmica suele servir tambin como fuente de excitacin Por llama o plasma Fuentes de llama: atomizacin y excitacin con el mismo conjunto de nebulizador y cmara de aerosol utilizado en absorcin atmica. Poca utilidad (mejor plasma) salvo para el anlisis de metales alcalinos y ocasionalmente calcio. Estos elementos se excitan a temperaturas relativamente bajas y dan espectros sencillos y exentos de interferencias. Debido a la simplicidad fotmetros de filtros son suficientes para las determinaciones. Dependencia con temperatura de la llama. Fuentes de plasma: plasma: gas caliente y parcialmente ionizado con concentracin abundante de cationes y electrones que lo convierten en conductor. Frecuentemente se emplea plasma de argn. Elevadas temperaturas se alcanzan por el calor de la resistencia desarrollado por el movimiento de electrones y iones de argn. 3 tipos: 1. Plasma de acoplamiento inductivo (ICP) 2. Plasma de corriente continua (DCP) 3. Plasma inducido por microondas (MIP) 1. Plasma de acoplamiento inductivo: antorcha: 3 tubos concntricos de cuarzo a travs de los cuales fluye corriente de argn. Ionizacin de argn se inicia por medio de una chispa proveniente de bobina tesla. Iones resultantes y sus electrones interaccionan con el campo magntico oscilante producido por bobina de induccin. Esto hace que iones y electrones se muevan en trayectorias circulares; calentamiento es consecuencia de la resistencia que presentan iones y electrones a este movimiento. - circular Ar por la antorcha - se aplica radiofrecuencia

- una chispa produce electrones libres en argn - se aceleran electrones en la antorcha causando ms ionizacin - la muestra atraviesa la antorcha Se puede hacer anlisis multielemental: porque todos los analitos se excitan al mismo tiempo. Puede programarse selector monocromtico variable para que se mueva rpidamente entre . O se puede usar un aparato de canales mltiples que permita controla de forma simultnea muchos analitos (red de difraccin con 48-60 rendijas de salida separadas y detectores colocados en disposicin semicircular alrededor de la red de difraccin) Introduccin de la muestra: mediante flujo de argn a travs de tubo central de cuarzo. Se utilizan nebulizadores (con corriente de argn) gotitas se introducen en plasma. Seleccin fuente de atomizacin y excitacin: mejor plasma Seleccin : (harta interferencia por superposicin), forma ms fcil es obtener espectro de emisin de la muestra y despus buscar una lnea de emisin del analito que proporcione seal intensa y que se encuentre separada de las dems lneas de emisin. Interferencias espectrales: ms importantes son una fuente continua de emisin de fondo a partir de llama o plasma, se hace insignificante a altura 10-30 mm por encima del centro, donde se hacen las mediciones. Interferencias qumicas: se disminuyen aadiendo agentes protectores, liberadores y supresores de ionizacin. Estandarizacin mtodo: intensidad de emisin proporcional a la poblacin del estado excitado de la que se origina la lnea de emisin. ESPECTROSCOPIA DE DISPERSIN ESPECTROMETRA DE MASAS ATMICA Muy utilizada para identificar elementos presentes en muestras de materia y determinar sus concentraciones. Ventajas: mejores LD, espectros sencillos nicos y fcilmente interpretables. Puede medir relaciones isotpicas atmicas. Desventajas: caro, deriva del instrumento del 5-10% por hora. Etapas: 1. Atomizacin 2. Conversin de una fraccin significativa de tomos en iones (generalmente +) 3. Separacin de iones segn masa/carga 4. Recuento del nmero de iones de cada tipo o medida de la corriente inica producida cuando iones inciden en detector. 1 y 2 igual que en espectroscopa atmica. 3 y 4 se hacen en espectrmetro de masas.

Distintos tipos de espectrometra de masas: plasma de acoplamiento inductivo (ICPMS); plasma de corriente continua (DCPMS); plasma por induccin de microondas (MIPMS); fuente de chispa (SSMS); ionizacin trmica(TIMS); descarga luminiscente (GDMS); microonda lser (LMMS); in secundario (SIMS). Espectrmetro de masas: separa los inoes que se desplazan rpidamente segn su relacin carga/masa. 3 tipos ms corrientes - cuadrupolar - de tiempo de vuelo - de doble enfoque Componentes de espectrmetro de masas Fuente de iones gaseosos Entrada Analizador de masas Detector iones Procesador

La funcin del analizador de masas es anloga a la de un monocromador. La dispersin se realiza en funcin de la relacin masa/carga de los iones del analito. El detector convierte el haz de iones en una seal elctrica que pueda ser procesada, almacenada y registrada de alguna forma. Componentes requieren bajas presiones (salvo procesador). Detectores: - Canales multiplicadores de electrones: similar a fotomultiplicador. Cada dinodo se mantiene a un potencial ms alto que el anterior. Ctodo y los dinodos tienen superficies de Cu/Be de las que se emiten rfagas de electrones cuando son alcanzados por los iones o electrones de alta energa. Son robustos y fiables, capaces de proporcionar ganancias de corriente elevadas y tiempos de respuesta de nanosegundos. Iones que alcanzan el detector tiene suficiente energa como para expulsar electrones desde la primera zona del dispositivo. - Copa de Faraday. Analizador de masas cuadrupolar: ms comn. Elevada velocidad de barrido. 4 barras paralelas que actan como electrodos. Bandas opuestas se conectan ellctricamente. Se aplican a cada par de barras potenciales variables de corriente alterna de radiofrecuencia, que estn desfasados 180 grados. El que un in choque o no contra la barra depende de la velocidad del movimiento del in a lo largo del eje z-y, su relacin masa/carga y la magnitud de la seal de corriente alterna y continua. Espectrometra de masas con plasma de acoplamiento inductivo (ICPMS) Bajo limite de deteccin, alto grado de selectividad y su razonable buena precisin y exactitud lo han hecho muy importante para el anlisis elemental. Antorcha de ICP sirve como atomizador y ionizador. Se introduce muestra por nebulizador. Iones producidos en la antorcha se introducen a travs de interfase de vaci diferencial unido a un espectrmetro de masas cuadrupolar. Se obtienen espectros

sencillos que se utilizan para determinacin cualitativa y cuantitativa (por curvas de calibrado en que se representa el cuociente entre el recuento de iones para el analito respecto del recuento para un patrn interno en funcin de la concentracin). Anlisis cuantitativos: el ms utilizado emplea un conjunto de patrones de calibracin para preparar curva e calibrado. Un patrn nico en disolucin acuosa adecuado si muestra problema esta lo suficientemente diluida (<2000ug/ml) de slidos disueltos totales. Para concentraciones elevadas de elementos de matriz se intenta igualar los elementos presentes en la matriz de las muestras con los patrones. Patrn interno (elemento ausente de las muestras y que tiene una masa atmica y un potencial de ionizacin prximo al de los analitos) para compensar la deriva del instrumento, las inestabilidades y los efectos de matriz.

CROMATOGRAFA Eficiencia cromatografa:

Resolucin: separacion de 2 picos cromatogrficos

t = tR2 tR1
Factor de capacidad (k) : Medida de la fuerza con que la FE retiene el analito K= tR/tm Factor de selectividad ( ) : Selectividad relativa de la FE para un par de analitos = k1/k2

Al comenzar una separacin cromatogrfica el soluto ocupa una estrecha banda de anchura finita. A medida que el soluto atraviesa la columna la anchura de su banda va

auementando. La eficacia de la columna proporciona una medida cuantitativa de la magnitud del ensanchamiento de banda. Plato terico: medio cuantitativo para evaluar la eficacia de una columna y que consiste en tratar la columna como si estuviera compuesta de pequeas zonas, o platos, en las que tiene lugar el reparto entre las fases mvil y estacionaria. La eficacia de una columna mejora con el aumento del nmero de platos tericos o con la disminucin de la altura del plato. Capacidad del pico: nmero mximo de solutos que pueden separarse en una columna dada. Factores que contribuyen al ensanchamiento de banda: (altura del plato se establece a partir de 4 contribuciones: 1. Difusin longitudinal: una contribucin al ensanchamiento de la banda debida a la difusin del soluto desde las reas de mayor concentracin a las de menor concentracin. 2. Difusin en remolino: molculas en disolucin que atraviesan una columna cromatogrfica siguen remolinos distintos de longitud variada. As molculas inyectadas al mismo tiempo se mueven con tiempos distintos. 3 y 4. Transferencia de masa: una contribucin al ensanchamiento de la banda debida al tiempo necesario para que un soluto se desplace desde las fases mvil o estacionaria a la interfaz entre las dos fases. Ecuacin de Van Deemter: ecuacin que demuestra el efecto de la velocidad de flujo de la fase mvil sobre la altura de un plato terico (cuenta los 4 factores antes mencionados).

CROMATOGRAFIA DE GAS Cromatografa gas-lquido: Fase mvil: gas inerte (He, Ar, N2) Columna: empaquetada o capilar Empaquetada: de vidrio, acero, cobre o aluminio. Se llena co soporte slido en forma de partculas (tierra datomeas) capilar: FSOT: columna cubierta de slice fundida recubierta con polmero protector WCOT: columna abierta de pared recubierta (fina capa de fase estacionaria que reviste pared interna de capilar) SCOT: columna abierta recubierta con soporte (sobre pared interna existe fina capa de sorte slido revestido por fase estacionaria lquida)

Fase estacionaria: depende de lo que se quiera separar, polar apolar. Da selectividad. Debe ser qumicamente inerte, trmicamente estable, baja volatilidad, polaridad adecuada. (ej escualeno no polar, polietilenglicol polar, polidimetil siloxano ligeramente polar, se puede aumentar polaridad cambiando sus grupos metilo) Problema comn a fase estacionaria lquida: sangrado (tendencia de la fase estacionaria a eluir de la columna), lmites de temperatura disminuyen esto Separacin mejor cuanto ms fina es la pelcula de fase estacionaria (para solutos muy voltiles hay que usar pelculas ms gruesas) ELECCIN DE LA COLUMNA: Polaridad: Las fases mviles no polar separan los compuestos basados principalmente en sus temperaturas de ebullicin. Las fases de polaridad intermedia separan los compuestos de acuerdo a la temperatura de ebullicin y a la interaccin de los dipolos inducidos o a los puentes de hidrgeno. Las fases

mviles polares y altamente polares retienen los compuestos polares debido a la interaccin dipolo-dipolo entre los grupos funcionales de la muestra y de la fase estacionaria. Estabilidad trmica de columnas Polares y Apolares. Generalmente, a medida que la polaridad de una columna aumenta, la estabilidad trmica disminuye. Espesor del film. Por regla general debera usarse film delgados para compuestos con temperaturas de ebullicin altas y film mas gruesos para compuestos que eluyen rpidamente. De esta forma, los compuestos se produce interaccin con la fase estacionaria y se retarda la elucin. 3 -5 m: gases, solventes y compuestos de temperatura de ebullicin cercana a la ambiente. 1 - 1.5 m: muestras que eluyen entre 100 a 200 oC. 0.25 - 0.5 m: muestras que eluyen sobre los 300 oC (esteroides, triglicridos, ceras). 0.1 m: son ideales para compuestos de alto peso molecular y que eluyen sobre los 300 oC.

Inyector: Con divisor: solo entra pequea parte de la muestra a la columna capilar (0,1-1%) Sin divisor: permite paso de ms muestra (columna empaquetada) En columna: para muestras termolbiles Control de temperatura: columna se encuentra en horno con termostato. Separacin isotrmica: T constate, ligeramente por debajo del punto de ebullicin ms bajo de los solutos, favoreciendo interaccin de solutos con fase estacionaria (problema, tiempos de retencin muy largos para solutos con mayor punto de ebullicin, se soluciona con hornos de temperatura regulable, a medida que separacin progresa, se aumenta la temperatura). Detectores: Detector Lmite de Rango deteccin g lineal TCD 10-5-10-6 103-104 FID ECD NPD MSD 10-12 10-14 10-8-10-14 10-12 Comentarios Tratamiento analito No destructivo Destructivo No destructivo Destructivo Destructivo

Detector universal 6 7 10 -10 Detector universal 2 3 10 -10 Detector selectivo 5 7 10 -10 Detector Selectivo N,P Segn tipo Detector detector universal

TCD: detector de conductividad trmica (helio como fase mvil). Ventajas: universal (seal para cualquier analito), su respuesta a las concentraciones de soluto es lineal en

un amplio rango, no destructivo. Desventajas: peores LD (imposibilita la utilizacin en columnas capilares debido al pequeo tamao de muestras) FID: detector de ionizacin de llama. Nmero de iones que se produce es relativamente roporcional al nmero de tomos de carbono reducidos en la llama. El detector responde al nmero de tomos de carbono que entra en el detector por unidad de tiempo por ello es ms un detector sensible a la masa, que un sistema sensible a concentracin. No producen seal los grupos carbonilo ni carboxilo (ni alcohol, halgeno y amina). Ventajas: LD, respuesta lineal, detector para muestras ambientales y acuosas, bajo ruido. Desventajas: muestra se destruye. ECD: detector de captura de electrones: fase mvil N2. Selectivo para solutos con grupos halgenos o nitro. Insensible para aminas, alcoholes e hidrocarburos. Importante para deteccin de contaminantes clorados. Excelente LD pero respuesta lineal abarca solo 2 rdenes de magnitud. NPD: ionizacin de llama alcalina: responde a compuestos que contienen nitrgeno o fsforo. MSD: espectro de masas. Solutos Que eluyen pasan directamente a la cmara de ionizacin del espectrmetro de masas. El espectro de masas proporciona informacin cualitativa que permite identificar el analito. Aplicaciones cuantitativas: la altura o rea del pico cromatogrfico permiten determinar su concentracin. Altura fcil de medir pero utilidad limitada por la relacin inversa ente altura y anchura del pico. Una mejor opcin: rea bajo el pico, que es directamente proporcional a la cantidad de analito inyectado. Curvas de calibracin suelen hacerse analizando una serie de patrones externos y representando la seal del detector en funcin de concentraciones conocidas. Mientras volumen inyectado sea igula en patrones y muestras la curva de calibracin proporcionar resultados exactos y precisos. Igual el volumen puede diferir en 5% o ms. Para trabajos en los que se require de gran exactitud y precisin se efectan usando un patrn interno (corrige variaciones entre una inyeccin y otra).

Aplicaciones cualitativas: cuando se usa como detector un IR-TF o un espectrmetro de masas la informacin espectral disponible se emplea para identificar solutos individuales. Con los detectores convencionales no espectroscpicos hay que recurrir a oros mtodos. Por ejemplo hacer una adicin de patrn a la muestra aadiendo una alcuota del presunto analito y buscando un aumento en la altura del pico. Tambin se pueden usar tablas con tiempos de retencin de patrones pero est limitado porque las condiciones nunca son iguales. Solucin: Indice de retencin de Kovat: mtodo para normalizar los tiempos de retencin de un soluto con los de alcanos normales. ndice de retencin de Kovats Es una relacin lineal-logartmica entre el volumen de elucin y el nmero de carbonos. El ndice de retencin para un alcano normal es igual a 100 veces el nmero de tomos de carbono del compuesto independiente del relleno de la columna, la temperatura, flujos. etc. El ndice de retencin para los compuestos que no son alcanos normales vara segn las condiciones cromatogrficas. El ndice de Kovats I definido para todos los n-alcanos en cualquier conjunto de condiciones y para cualquier columna es: I C2H2z+2 = 100 z Los valores del ndice para los alcanos son 100, 200, 300, 400, 500 etc. El ndice de retencin para otros tipos de compuestos se define por la ecuacin: I = 100z + 100 log (tRi/tRz),/log(tRz+1/tRz) zi = tRi/tRz

CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA RESOLUCIN De las tcnicas ms utilizadas (no tiene la limitacin de que las muestras sean trmicamente estables y fciles de volatilizar como en cromatografa de gases). En HPLC: una muestra lquida o una muestra slida disuelta en un disolvente adecuado se hacen pasar por una columna cromatogrfica junto con una fase mvil lquida. La separacin se efecta gracias a las interacciones de las fases soluble y estacionaria, tales como la adsorcin liquido- slido, el reparto liquido-liquido, el intercambio de iones y la exclusin por tamao, y las interacciones entre las fases soluto y mvil. Controlador de gradiente

Bomba
Inyector Fases mviles

Columna
Detector

Con objeto de alcanzar un caudal de eluyente razonable con rellenos de tamao de partcula entre 2 y 10 um se requieren presiones de algunos cientos de kg-fuerza por centmetro cuadrado. Como consecuencia de estas elevadas presiones se requiere un equipo ms sofisticado. Requisitos para un sistema de bombeo: 1. Generaciones de presiones por encima de 6.000 psi 2. Flujo libre de pulsaciones 3. Intervalo de caudales de 0,1 a 10 ml/min 4. Control y reproducibilidad del caudal mejor del 0,5% relativo 5. componentes resistentes a la corrosin (acero inox o tefln). Bombas recprocas: son las que se usan en un 90%. Disolvente es impelido por el movimiento de vaivn de un pistn accionado por un motor de arrastre. Dos vlvulas que se abren y cierran alternativamente, controlan el flujo del disolvente hacia dentro y hacia fuera de un cilindro. El disolvente est en contacto directo con el pistn. Desventaja: producen flujo pulsado que debe amortiguarse. Ventajas: pequeo volumen interno, altas presiones de salida, fcil adaptacin a la elucin con gradiente y sus caudales constantes. Columnas: ms utilizadas de acero inoxidable con diametro interno de 2,1-4,6mm y longitudes entre 30-300mm. Se empaquetan con partculas de slice poroso. 40.00060.000 platos tericos.

Guarda columna: para proteger columna del matrial que la ocluya o solutos que se forman irreversiblemente a la fase estacionaria. Fases estacionarias: (liq-liq) pelcula lquida que reviste material empaquetado. Se une mediante enlaces covalentes a las partculas de slice (reaccin con organoclorosilano, y las que no hayan reaccionado se cubren con Si(CH3)Cl. Propiedades de fase estacionaria depende del grupo alquilo R del organosilano. Si R es polar fase estacionaria ser polar.

Cromatografa de fase normal: fase estacionaria polar y fase mvil no polar Cromatografa de fase inversa: fase estacionaria no polar (C8, C18) fase mvil polar (mas habitual) Sustrato de slice se hidroliza en soluciones bsicas por lo tanto pH de fase mvil debe ser menor a 7,5. Fases mviles: el orden de elucin de solutos depende de la polaridad. - en fase normal: soluto menos polar eluye primero. El uso de una fase mvil menos polar alargar los tiempos de retencin (mejora separacin si una separacin es mala pq los solutos eluyen muy rpido) - fase inversa: soluto ms polar eluye primero. Si se aumenta polaridad de fase mvil se prolonga el tiempo de retencin. Eleccin de la fase mvil: til el ndice de polaridad. Mezclando 2 o varias fases mviles puede obtenerse una polaridad intermedia. Para mejorar la separacin tambin se puede modificar pH, variar uno o ms de los disolventes de la fase mvil tambin (ejemplo agua, metanol, acetonitrilo, THF se usan en disolventes para cambiar tiempo de elucin) Elucin isocrtica: uso de fase mvil cuya composicin permanece constante durante la separacin Elucin en grandiente: cambio de la composicin de la fase mvil a lo largo del tiempo (para esto hay varios depsitos de fase mvil). Hay que desgasificar solventes de fase mvil con bomba de vaco o purga con gas inerte como el He. Partculas capaces de ocluir la columna deben ser filtradas. Disolvente se mueve por las bombas mencionadas antes. Introduccin muestra: imposible inyectar la muestra como en GC por las altas presiones. Se usa un bucle de inyeccin. En posicin de carga el bucle est separado de la fase mvil y abierto a la atmsfera. Se introduce muestra en interior con jeringa (lo que sobra a desage). Una vez cargada se gira el inyector, la fase mvil pasa a travs del bucle y arrastra a la muestra a travs de la columna. Detectores HPLC:

Detector LD Ultravioleta 0.1 - 1 Indice de refraccin 100 - 1000 Electroqumico (amperomtrico) 0.01 - 1 Fluorescencia 0.001 - 0.01 Conductividad 0.5 - 1 Espectrofotometra de masa 0.1 - 1 Infrarrojo de transformada de Fourier 1000

til con gradiente? si no no si no si si

Detector UV/VIS: el ms utilizado porque muchos solutos absorben dicha radiacin. El sistema ms simple emplea emisin a 254 nm de una lmpara de mercurio y deteccin de una sola . Tambin se utiliza lmpara de deuterio y un monocromador para mediciones a variable. Cromatorama: absorbancia en funcin de tiempo de elucin. LD: 100pg-1ng de analito inyectado (mejor fluorescencia) Limitacin: fase mvil no debe absorber a elegida. Detector de arreglo de diodos: registran la totalidad del espectro proporcionando un cromatograma tridimensional que muestra absorbancia en funcin de y tiempo de elucin. Detectores de fluorescencia: semejantes a fluormetros y espectrofluormetros. La fluorescencia se detecta por detector fotoelctrico colocado perpendicular respecto al haz de excitacin. Los detectores ms sencillos utilizan fuente de excitacin de mercurio y 1 o ms filtros para la radiacin emitida. Los ms sofisticados consisten en fuente de radiacin de xenn y emplean monocromador en red para aislar la radiacin fluorescente. Buena sensibilidad porque no todos los compuestos son fluorescentes. Detectores de ndice de refraccin: disolvente en su camino hacia columna pasa a travs de una mitad de la cubeta y el eluyente de la columna pasa por la otra mitad. Los dos compartimientos separados por una placa de vidrio montada en ngulo tal que si las 2 disoluciones difieren en ndice de refraccin se produce una desviacin del haz incidente. El desplazamiento del haz con respecto a superficie fotosensible del detector provoca seal la cual una vez amplificada y registrada proporciona el cromatograma. Responden a casi todos los solutos (universal), son fiables y no dependen del caudal, pero son muy sensibles a cambios de temperatura, no son tan sensibles. Detector por espectrometra de masas: problema: enorme contraste entre los volmenes relativamente grandes de disolvente de cromatografa y los requerimientos de vaco de la espectrometra de masas. Para resolver esto se han desarrollado varias interfases. Proporciona informacin cualitativa, estructural que puede ayudar a identificar el analito. Aplicaciones cuantitativas: clculos, ms fcil que GC ya que inyeccin se hace con bucle de inyeccin de volumen fijo as las variaciones en cantidad de muestra se reducen al mnimo y se pueden utilizar patrones externos y curva de calibracin normal. EVALUACION:

Las diferencias entre cromatografa gaseosa y HPLC son escasas en cuanto a escala de operacin, exactitud, precisin, sensibilidad, selectividad, tiempo y costo. - volmenes de inyeccin suelen ser significativamente mayores en HPLC que en CG dada la mayor capacidad de las columnas de HPLC - la precisin de HPLC es mejor gracias al bucle de inyeccin - HPLC no se limita a analitos voltiles, se pueden analizar ms compuestos que en GC. - Las columnas capilares de GC tienen ms platos tericos lo que proporciona mayor poder de resolucin para matrices complejas. La GC con columnas capilares proporciona rpidas separaciones con una resolucin excelente, pero slo para analitos voltiles o que puedan hacerse voltiles por derivacin adecuada. La cromatografa lquida puede usarse para una gama mayor de compuestos sin embargo los detectores ms utilizados (UV, de fluorescencia y electroqumicos) no son tan universales como los detectores de ionizacin de llama utilizados en GC. Cromatografa de adsorcin lquido-slido: fase estacionaria es un adsorbente slido (empaquetado de columna sirve de fase estacionaria, slice o aluminio, polar). Fase mvil suele ser disolvente no polar o moderadamente polar (hexano, isooctano, cloruro de metileno). Ofrece ventaja (vs cromatografa liq-liq) solo para anlisis de ismeros. CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO IONICO: Fase estacionaria: resina polimerizada mediante enlaces cruzados, habitualmente poliestireno con enlaces cruzados de divinilbenceno unidos covalentemente a grupos funcionales inicos. Los contraiones de estas cargas fijas son mviles y pueden ser reemplazados por iones que compiten por unin. 4 tipos de resinas: - resinas catinicas (c. fuerte): grf c. sulfrico SO3H - resinas catinicas (ac. dbil): grf AC. carboxlico COOH - resinas aninicas (base fuerte): grf sal de amonio cuaternaria R4N+ - resinas aninicas (base dbil): grf -NH2, -NHR, NR2 (1, 2, 3 respectivamente) * resinas quelantes: el gruop funcional es el quelante o complejante. Los tomos ms frecuentes son S, N, O, P, que forman en laces de coordinacin con los metales. Muestran selectividad por iones metlicos. Son caras y reaccionan lentamente. Regeneracin columna: iones unidos a grupos funcionales de fase estacionaria se pueden eluir por compuestos que compitan (c o bases que regeneren el H)l Intercambiadores inicos inorgnicos: - Naturales: aluminosilicatos como zeolitas, arcillas minerales y feldespatos - Sintticos: xidos metales hidratados, sales insolubles de metales polivalentes, sales insolubles de heteropolicidos, sales complejas basadas en hexanofierratos, zeolitas sintticas Intercambiadores inicos orgnicos:

- Naturales: celulosa, quitina, quitosano, dextran, agarosa - Sintticas: matriz polimrica reticulada por la accin de un agente entrecruzante y derivatizada con grupos inorgnicos que actan como grupos funcionales. Son los ms habituales en aplicaciones de intercambio inico en la industrial. La mayora basada en la estructura estierno-divinilbenceno por su buena resistencia qumica, fsica, estabilidad en todo el rango de pH y temperatura. Las resinas de intercambio inico se introducen en columnas de HPLC como perlas de polmero poroso o recubriendo con ellas las partculas de slice porosa. La selectividad depende en cierta medida de si la resina tiene un lugar de intercambio fuerte o dbil y de la magnitud de los enlaces cruzados Fase mvil: suele ser un tampn acuoso cuyo pH y composicin inica determinan el tiempo de retencin del soluto. Es posible realizar elusiones en gradiente en que la fuerza inica o el pH de la fase mvil cambian con el tiempo. En instrumentos de HPLC se puede sustituir columna por una de intercambio inico. El detector ms utilizado mide la conductividad de la fase mvil a medida que eluye de la columna. Sin embargo la elevada concentracin de iones de la fase mvil es un problema porque los iones de esta fase son los dominantes en la conductividad. Para disminuir al mnimo la contribucin de la fase mvil a la conductividad, entre la columna analtica y el detector se coloca una columna supresora de iones que elimina selectivamente los iones electrolitos de la fase mvil sin eliminar los iones del soluto. Por ejemplo si la fase mvil es HCl acuoso la columna supresora tiene resina de intercambio aninico. Si los iones del soluto absorben radiacin UV/VIS podr utilizarse un detector uv-vis. Las que no absorben pueden detectarse indirectamente cuando la fase mvil tiene especies que absorben: se mide la reduccin de la absorbancia cuando el soluto pasa por el detector. Util para anlisis de: protenas, aminocidos, azcares, nucletidos, productos farmacuticos, muestras clnicas, etc. CROMATOGRAFA DE EXCLUSION POR TAMAO Base de la separacin es la capacidad del soluto de penetrar en los poros del empaquetamiento de la columna. Lmite de inclusin: soluto ms pequeo que puede separarse de otros solutos, todos los solutos de menor tamao eluyen juntos. Lmite de exclusin: soluto ms grande que puede separarse de otros solutos, todos los solutos de mayor tamao eluyen juntos Entre el lmite de inclusin y el de exclusin, cada soluto pasa en el espacio poroso en un cierto tiempo, que es proporcional a su tamao. Se exige que la exclusin por tamao sea la nica interaccin entre soluto y fase estacionaria. Para esto se desactivan las partculas de slice y las resinas de polmeros se sintetizan de forma que no posean lugares de intercambio.

Las mezclas que contienen una amplia gama de PM pueden separarse reuniendo varias columnas en serie. Aplicacin en determinacin de PM: las curvas de calibracin (usando protenas de PM conocido) del logPM vs volumen de retencin se establecen entre el lmite de inclusin y el de exclusin. En HPLC se puede sustituir la columna por una de exclusin por tamao. El detector ms utilizado para obtener cromatograma es el de radiacin UV/VIS.

CROMATOGRAFA DE FLUIDOS SUPERCRTICOS til para algunas muestras que no se pueden separar por GC ni HPLC. Fase mvil: es un gas que est a una presin y temperatura que superan su punto crtico. En estas condiciones la fase mvil no es ni gaseosa ni lquida sino que est constituida por un fluido supercrtico de propiedades intermedias entre la de los gases y lquidos. Viscosidad: similar a la de los gases: mejor difusin (se mueven por columnas sin necesidad de aplicar presin como en HPLC) Baja tensin superficial: penetrabilidad Densidad: similar a lquido: buenas propiedades disolventes Alta difusividad: mayor transporte de masa

Por lo tanto fase mvil se comporta ms como fase lquida de HPLC que como la gaseosa de CG. El tiempo de anlisis y la resolucin, aunque no tan buenos como GC, suelen ser mejores que los obtenidos con HPLC convencional. Fase mvil ms utilizada: CO2 por: Tc= 31C Pc= 72,9 atm (1071 psi) Baja toxicidad, baja inflamabilidad, no corrosivo, alta pureza, fcil eliminacin desde solutos, baja reactividad, bajo costo, no contamina, no absorbe UV, no tiene olor. Es un buen disolvente para compuestos orgnicos no polares y menos til para polares. La adicin de un modificador orgnico (ej metanol) mejora la fuerza de elucin de la fase mvil. Instrumentos: similar a HPLC o CG. La nica adicin importante ES um limitador de presin para mantener la presin crtica. Las elusiones en gradiente se logran cambiando la presin a lo largo del tiempo. Presin: tiene un marcado efecto en el factor de capacidad k. este efecto es una consecuencia del aumento de la densidad de la fase mvil

Fase estacionaria: columnas capilares de slice fundida y empacadas. Longitud 10-20m, dimetro interno; 0,05-0,1 mm. Fase mvil: CO2, etano, pentano, dietilter, amonaco, THF, diclorofluorometano y xido nitroso. Detectores: adems de todos los detectores para HPLC se puede usar tambin el FID. Horno termosttico: para controlar con precisin la temperatura de la fase mvil. Restrictor: para poder mantener por una parte la presin en el interior de la columna y por otra parte permitir la bajada de la resin a la salida para que el fludo supercrtico pase al estado gaseoso y pueda ser detectado correctamente el analito. Es un tubo capilar de 2-10 cm de longitud y dametro interno 1/10 del de la columna, donde a la salida el fluido supercrtico se expande y pasa a estado gaseoso y se puede mantener simultneamente la presin al interior de la columna Aumento de la presin aumenta la velocidad de elucin ya que aumenta la densidad del disolvente lo que permite mayor interaccin analito-fase mvil y disminuye los tiempos de elucin. Se puede emplear en las diluciones una primera etapa isobrica para luego aumentar la presin lineal o asintticamente hasta el final de la elucin. Anlisis de polmeros, combustibles fsiles, ceras, frmacos, productos alimenticios. DERIVATIZACIN EN CROMATOGRAFA (GC, HPLC) se convierte el analito en otro compuesto por reacciones con la fase estacionaria, inestabilidad con la temperatura (GC), para que sea ms sensible con un determinado detector. Tcnicas precolumna y post columna. Reacciones para mejorar deteccin (p ej para usar detector de fluorescencia)

Derivatizacin cromatografa de gases

Los compuestos a analizar deben transformarse en otros que tengan un menor punto de ebullicin y puedan transformarse en gases sin someterlos a una temperatura muy alta y causar su descomposicin. La reaccin de derivatizacin tiene como objetivo principal modificar la molcula tratada para evitar la formacin de puentes de hidrgeno, responsables de uniones intermoleculares. Reaccin de alquilacin para formar teres: ROH + Ag2O + MeI DMF> ROMe + 2AgI + H2O Acilacin ROH + (CF3CO)2O Sililacin ROH SiMe3 > piridina > ROCOCF3

ROSiMe3

MTODOS EXTRACCIN Y TRATAMIENTO DE MUESTRAS: Lquido-lquido Soxhlet Extraccin en fase slida Extraccin con fluido supercrtico Extraccin con solvente acelerada Microondas Bao ultrasnico Mezclador

EXTRACCIN LIQ-LIQ

Embudo de decantacin

Se usan 2 solventes inmiscibles para separar un analito desde una fase a otra. La distribucin de un analito entre dos fases es una condicin de equilibrio descrita por la teora de particin. En el solvente acuoso se disuelve solutos polares e ionicos.

SOXHLET

La muestra se coloca envuelta en un papel de filtro y se introduce en la columna de extraccin (2) mientras que el solvente a extraer en el baln 1. Arriba se pone un refrigerante para evitar la evaporacin del solvente (4) Se calienta el baln y el solvente llega a la base del refrigerante el cual lo condensa y cae al reservorio que contiene la muestra (2) El solvente se empieza a acumular en el reservorio para la muestra y luego que llega al nivel superior cae al baln (1) que contiene el solvente. Este proceso se repite en el tiempo que dura la extraccin que normalmente son horas. Es muy adecuado para extraer compuestos orgnicos desde matrices slidas: extraccin de pesticidas en suelo, HPA en sedimentos, etc.

Ventajas: Tcnica muy efectiva, normalmente se logra extracciones con 100 % de eficiencia. Desventajas: Solventes caros y txicos. Gasto de energa.

Extraccin en fase slida (SPE)

Se utilizan jeringas que contienen una fase estacionaria y se hace pasar una fase mvil lquida. Se utilizan para limpiar muestras con matrices complejas (clean up), para concentrar, etc. Se puede fijar el analito en la muestra o fijar las impurezas y eluir el analito. Esto depende de la polaridad del solvente que se utilice para eluir.

El liquido es pasado a travs de una fase slida la cual selectivamente remueve el analito (o la matriz); el analito es eludo con un solvente ms fuerte. El mecanismo es el mismo que para LC / HPLC. Introducida en los 70s, comercializada desde 1978. Para esta tcnica existe, adems de la variante en cartuchos, la opcin de discos, que permite mayores flujos, automatizable y que facilita an ms la extraccin.

EXTRACCIN CON FLUIDO SUPERCRTICO El analito se pone en una celda, la cual se introduce en el horno. El solvente es normalmente CO2 y como este es muy apolar se agrega un co-solvente como por ej. Metanol. Se aplica una presin alta (sobre la presin crtica de la muestra y una temperatura alta (sobre la presin crtica) y este fluido pasa por la muestra disolviendo los analitos de acuerdo a las polaridades. Al salir del horno en el restrictor ocurre la despresurizacin y se recibe en un frasco colector (vaco, con solvente o con bao fro, de acuerdo a la volatitilidad Ventajas: Las extracciones son mas rpidas que con Soxhlet. Adems no se utiliza solventes orgnicos los cuales son de alto costo y toxicidad. Desventajas: Muchas veces las extracciones no son del 100 % Se considera dentro de los mtodos de screening

ANALISIS CON SOLVENTE DE ACELERADA

Se realiza una extracci poniendo en la matriz con un solvente a una temperatura y presi alta. A mayor presi la temperatura de ebullici de los solventes aumenta y con ello la efectividad de la extracci. Ventajas: Rapidez y menor gasto de solventes. (no hay evaporaci de tos) Desventajas: Aveces la efectividad estbajo el 100 %. (modo de screening)

Reacci con microondas

Se usa peque s cantidades de muestra y de solvente. Se aplica la radiaci de microondas y los idos minerales se calientan ridamente disminuyendo el tiempo de reacci. La temperatura no es muy alta por lo que no hay descomposici de muestra ni del ido necesario para el ataque. Ventajas: Ridez y menor cantidad de muestra y de idos para el ataque. Desventajas: Al disminuir la cantidad de muestra disminuye la concentraci del analito y se necesita un modo de cuantificaci m sensible.

BAO ULTRASNICO

Normalmente el ba ultrasico se emplea para extraer analitos desde muestras de suelos, sedimentos, lodos etc. Es mucho m rido que la extracci Soxhlet. Por ej. Algunos pesticidas requieren extracciSoxhlet de 4-18 horas, mientras que el ba ultrasico requiere solo de 8 a 10 minutos. La vibraci a alta intensidad (20 kHz rang) permite la penetraci del solvente en la matriz solubilizando los analitos. El generador ultrasico produce una sel el trica a una frecuencia determinada.

EXTRACCIN CON SOLVENTES: Convencional:

Es un proceso por el cual se transfiere uno o ms solutos de una fase a otra, generalmente entre dos lquidos inmiscibles entre si. Se emplea una fase acuosa y una fase orgnica no miscible. La fase orgnica puede ser ms densa o menos densa que la fase acuosa.

Extractantes: Es un proceso por el cual se transfiere uno o ms solutos de una fase a otra, generalmente entre dos lquidos inmiscibles entre si. Se emplea una fase acuosa y una fase orgnica no miscible.

La fase orgnica puede ser ms densa o menos densa que la fase acuosa.

Sistemas de extraccin. I. Sustancias orgnicas: Se extraen sin mayor transformacin qumica. Ej. Aminas, alcoholes, carbonilos, etc. II. Sustancias inorgnicas: Se debe reemplazar el agua de coordinacin por otro ligante que forme una especie neutra, compatible con el solvente orgnico extractante. Mtodos para formar especies extractables: 1. Coordinacin simple. Por ejemplo GeCl4 2. Heteropolicidos: El in central es un complejo monoatmico. Por ejemplo. H3PO4x12MoO3 3. Quelacin: Ejemplo. Al(Quinolina)3, Cu(DDC)2, Cd(morin)2 4. Formacin de pares inicos. Ejemplo. Cs+ (C6H5)4B-

Relacin de distribucin: A partir de las expresiones de K y KA

K=

[HA] [HA]
2

; KA =

[H +]2 [A-]2 [HA]2

Sustituyendo en la expresin de DC

DC =

[HA]

[HA] 2 + [A-]2 DC =

<[HA] K [HA]
1

1 1

+ KA [HA] K [H +]2

K [H +]2 [H +]2 + KA

demuestra la influencia del pH en el valor de Dc

Procesos frecuentes de la extraccin Liq-Liq

Especie a extraer Compuestos orgnicos poco polares Compuestos orgnicos ionizables Metales (quelatos) Complejos de asociacin inica Fundamento Lo similar disuelve a lo similar Debe de controlarse el pH Se requiere formar complejos neutros, poco solubles en agua. Se requiere formar pares inicos neutros.

Extraccin de quelatos

cupferrn

oxina

Extraccin de pares inicos *Se necesita formar iones muy voluminosos (complejos) a los que se debe de asociar un contra-ion. * El disolvente debe de poseer propiedades fuertemente solvatantes.

Ejemplos: Fe 3+ HCl (6M) Fe Cl4 - (formacin del in)

Especie extrada: HFeCl4 (extraccin en metil-isobutil-cetona o ter dietlico) Determinados tipos de nitratos metlicos, pueden ser extraidos de forma parecida ( U(VI), Bi(III) y Fe(III))

Efecto del pH Sea el cido dbil HA cuyo equilibrio de disociacin es: HA A- + H+ Ka = (H+)(A-) / (HA)

El coeficiente de distribucin D se define: D = (HA) total en fase 2 / (HA) total en fase 1 El coeficiente de reparto para las formas moleculares es: K = (HA)2 / (HA)1 Se supone que la forma inica slo est presente en la fase acuosa y que se reparte la forma molecular. A partir de K: D = (HA)2 / ( (HA)1 + (A-)1 ) K(HA)1 = (HA)2 D = K(HA)1 / ( (HA)1 + (A-)1 ) A partir de Ka: (A-)1 = Ka(HA)1 / (H+) y sustituyendo: D = K(H+) / Ka + (H+) Agentes quelantes: Sea un agente quelante HL que se disocia de acuerdo a: HL H+ + LKa = (H+)(L-) / (HL)

La complejacin viene dada por:

Mn+ + nL-

MLn

= (MLn) / (Mn+)(L-)n

El coeficiente de distribucin: D = (metal total)2 / (metal total)1 = (MLn)2 / (Mn+)1+)1

MTODOS ELECTROQUMICOS DE ANLISIS Electrodo de trabajo o indicador: electrodo cuyo potencial es sensible a la concentracin del analito Contraelectrodo: segundo electrodo que completa el circuito en una clula de dos electrodos

Electrodo de referencia: electrodo cuyo potencial permaece constante y frente al que pueden medirse otros electrodos Electrodo auxiliar: tercer electrodo que completa el circuito en una clula de tres electrodos Ley Ohm: declaracin segn la cual la corriente que pasa a travs de un circuito es directamente proporcional al potencial aplicado e inversamente proporcional a la resistencia de ese circuito (E=IR) Potencimetro: dispositivo para medir el potencial de una clula electroqumica sin producir una corriente ni alterar la composicin de dicha clula Galvanostato: dispositivo que se emplea para controlar la corriente de una clula electroqumica. Potenciostato: dispositivo utilizado para controlar el potencial de una celda electroqumica. 1. Potenciometra: Se mide la diferencia de potencial en funcin de la concentracin del analito (Ec. Nerst) 2. Conductimetra: Se mide la resistencia de la disolucin. 3. Amperometra: Se mide la corriente en funcin de la concentracin (i = KC). 4. Voltamperometra: Se mide la corriente en funcin del potencial aplicado. 5. Coulombimetra: Se mide los coulombs necesarios para electrolizar el analito Q=it=nmF). 6. Electrogravimetra: Se pesa un electrodo sobre el cual se ha depositado electroqumicamente el analito.

POTENCIOMETRA Se mide la diferencia de potencial en funcin de la concentracin del analito. Es una tcnica electroanaltica con la que se puede determinar la concentracin de una especie electroactiva en una disolucin empleando un electrodo de referencia (un electrodo con un potencial constante con el tiempo y conocido) y un electrodo de trabajo (un electrodo sensible a la especie electroactiva). Existen electrodos de trabajo de distinto tipo tiles para distintos cationes o aniones.

Fundamento: Se mide el E que se establece entre dos electrodos (en ausencia de corriente). La respuesta del electrodo indicador es Nerstsiana. Se necesita: a) Un electrodo de Referencia: Potencial conocido y cte Insensible a la composicin de las disoluciones.

b) Un electrodo Indicador: Potencial dependiente de la composicin de analito en la disolucin. Potencial de electrodo 1) Definicin: Potencial de una celda formada por el electrodo de trabajo, actuando como ctodo y un electrodo de hidrgeno (de referencia) que acta como nodo - Potencial normal de electrodo (E0): Potencial de electrodo cuando las actividades de todos sus reactivos y productos son la unidad - Bajo esas condiciones el electrodo de hidrgeno recibe el nombre de electrodo estndar de hidrgeno y se le asigna, por convencin, un valor de potencial de 0.000 V 2) El valor numrico del potencial de electrodo viene definido tericamente por la ecuacin de Nernst. Para la reaccin: Zn2+ + H2 Zn + 2H+
E = E0 0.059 0.059 [H + ]2 log K = E 0 log n 2 [Zn 2+ ] PH 2

Electrodos de referencia: Potencial constante y reproducible Potencial conocido Insensible a la composicin de la solucin Resistente Fcil de usar Ejemplos: Electrodo normal de hidrgeno Electrodo de calomelanos Electrodo de Ag/AgCl

Consiste en un electrodo de Pt sumergido en una disolucin en la que la actividad del in hidrgeno es 1 y en la que se burbujea gas H2 a una presin de 1 atm. Un puente salino convencional conecta el electrodo de hidrgeno con la semicelda indicadora. El potencial estndar para la reaccin es por definicin 0V a todas las temperaturas. Pese a su importancia como electrodo de referencia fundamental con el que se miden y

comparan todos los dems potenciales, apenas se utiliza pues es difcil de preparar e incmodo de manejar. (Se reduce el H+) Calomelanos: Hg2Cl2 (s) + 2 e 2 Hg (l) + 2 Cl-

Par redox formada por Hg2Cl2 y Hg. El potencial de un electrodo de calomelanos depende de la concentracin de Cl-.

Se basa en par redox AgCl y Ag. El potencial tambin depende de la concentracin de Cl- utilizada en su preparacin. Ventaja es que puede usarse a temperaturas ms altas. Por otro lado tiene mayor tendencia a reacciones con disoluciones para formar complejos insolubles de plata que pueden bloquear el puente salino entre el electrodo y la disolucin. Celdas electroqumicas: Se divide en 2 mitades, cada una de ellas con un electrodo sumergido en una disolucin que contiene iones, de cuyas concentraciones depende el potencial del electrodo. Esta separacin es necesaria para evitar que se produzca una reaccin redox espontnea sobre la superficie de uno de los electrodos, evitando el paso de la corriente por la celda e impidiendo la medicin del potencial. Un puente salino que contiene un electrodo inerte (ej KCl) conecta las dos semiceldas. Los extremos del puente salino se fijan con vidrios porosos que permiten el desplazamiento libre de los iones entre las semiceldas y el puente salino, al tiempo que impiden el paso del contenido del puente salino a las semiceldas. Este movimiento de iones en el puente salino es el que completa el circuito elctrico. Punte salino: comunicacin entre 2 disoluciones que permite el movimiento de la corriente en forma de carga inica. nodo: electrodo donde tiene lugar la oxidacin (referencia) Ctodo: electrodo donde tiene lugar la reduccin (indicador) La celda electroqumica potenciomtrica se construye de tal forma que una de las semiceldas proporciona un potencial de referencia conocido y el potencial de la otra semicelda indica la concentracin del analito. Se acepta por conveniencia que el electrodo de referencia es el nodo.

El electrodo de referencia ideal sera el que proporcionara un potencial estable de forma que cualquier cambio de Ecel pudiera atribuirse al electrodo indicador y por tanto a un cambio en la concentracin del analito. Ecuacin de Nernst: El potencial de una celda electroqumica potenciomtrica viene dado por: Ecel= Ecat Ean (E potenciales de reduccin) Estos potenciales dependen de las concentraciones de las especies responsables de los potenciales del electrodo, segn la ecuacin de Nernst n Actividades se pueden reemplazar por concentraciones molares solo en el caso de soluciones diluidas. Ered = E0red 0,0592xLog areducida /aoxidada

Electrodos indicadores: Respuesta rpida y reproducible a los cambios de concentracin de un analito. El potencial del electrodo indicador es proporcional a la concentracin del analito. Electrodos de membrana: -vidrio - membrana lquida - membrana cristalina - gases Electrodos indicadores metlicos: - Metales inertes - Primera especie (electrodos metlicos en los que el metal est en contacto con una disolucin que contiene su in) - Segunda especie electrodo de Ag (indicador de Cl-) (cuando un electrodo responde AL potencial de otro in que est en equilibrio. Electrodo de vidrio Se mide la diferencia de potencial a travs de una membrana de vidrio que separa una disolucin de concentracin desconocida de una disolucin de referencia cuya [H+] es conocida

pH-metro

ESC

electrodo de vidro

alambre de plata HCl O,1 M saturado c/ AgCl agitador magntico

Fina membrana de vidro (responsable dela respuesta del pH)

Electrodos de membrana La generacin de potencial es muy diferente al de los electrodos metlicos: los metlicos transfieren electrones y las membranas iones. El diseo es tambin muy distinto. Se denominan electrodos selectivos de iones (su potencial de membrana es funcin de la concentracin de un in dado en la solucin). Su respuesta se relaciona como funcin px (pH, PCa..etc). Histricamente el electrodo de pH fue el primero. Potencial de membrana: potencial que se desarrolla a travs de una membrana conductora cuyas caras opuestas estn en contacto con disoluciones de composicin diferente. Si existe diferencia entre las concentraciones de analito a ambos lados de la membrana, la interaccin del analito con sta producir un potencial de membrana. Uno de los lados de la membrana est en contacto con una disolucin interna que contiene una concentracin fija del analito, mientras que el otro lado est en contacto con la muestra. La corriente pasa a travs de la membrana gracias al movimiento del analito o de un in que ya se encuentre presente en la matriz de la membrana. El potencial de membrana viene dado por una ecuacin tipo nernst: Emem = Easim RT/zF ln [A]int/[A]mues Z: carga del analito. Emem debe ser 0 cuando la concentracin del analito sea igual en ambos lados de la membrana. El trmino Easim se denomina potencial de asimetra representa el hecho de que el potencial de la membrana no suele ser igual a 0 en estas condiciones (soluciones idnticas a ambos lados y se observa potencial no igual a 0). Los potenciales de membrana se deben a una interaccin qumica entre el analito y los lugares activos de la superficie de la membrana. Por lo que el potencial de membrana ser proporcional a la concentracin de todos los iones existentes en la disolucin de muestra que sean capaces de establecer interacciones con los lugares activos de la membrana.

Clasificacin: Las membranas pueden ser cristalinas y no cristalinas. Las no cristalinas pueden ser de vidrio (electrodo de pH), o lquidas (electrodo de calcio). Electrodo simple de pH. Electrodo combinado de pH.

El electrodo de referencia externo se incorpora dentro del dispositivo. Fundamento: Los iones H3O+ se fijan parcialmente sobre la pared externa e interna de la membrana de SiO2 y la diferencia de concentraciones, genera un potencial elctrico (de membrana EM). La composicin del vidrio fija selectivamente el tipo de in a retener. Tpicamente en el caso del electrodo de pH:22% Na2O, 6% CaO, 72 % SiO2.

Se hidratan aproximadamente los 10nm ms externos de la membrana. La hidratacin da lugar a la formacin de lugares de carga negativa, que forman parte de la estructura de silicio de la membrana de vidrio. Los iones sodio capaces de moverse a travs de la capa hidratada actan como contraiones. Los iones de hidrgeno de la disolucin difunden hacia la membrana y, como se unen con mayor fuerza al vidrio que los iones de Na, desplazan a stos produciendo la selectividad de la membrana para el H+. el transporte de carga a travs de la membrana depende de los iones Na+.el potencial de los electrodos de vidrio tipo corning obedecen a la ecuacin Ecel= K + 0,059 log [H+] a lo largo de una gama de pH que vara desde alrededor de 0,5 a 9. A valores superiores a 9 la membrana responde mejor a otros cationes como Na+ y K+. Sustituyendo el Na2O y CaO por Li2O y Bao se amplan los lmites tiles de pH de los electrodos de membrana de vidrio hasta valores de pH superiores a 12. La mayora de los electrodos de pH de membrana de vidrio suelen presentarse en forma combinada que incluye un electrodo indicador y otro de referencia, lo que simplifica mucho la medida de pH. Los electrodos de vidrio no deben dejarse secar para que no se destruya la capa hidratada de la membrana. Tambin se fabrican electrodos de vidrio para el anlisis de Li, K, Rb, Cs, NH4, Ag y Ti (diferente composicin de la membrana).

Errores en electrodo de vidrio 1) Tampones de calibracin estropeados pH al indicado Recta de calibrado errnea 2) Matriz de tampones de calibracin de la muestra Ej (potencial de unin lquida) Recta de calibrado errnea 3) Error alcalino - Base: El E de la capa hidratada tb se debe a la [Na+]vidrio (en menor medida) no slo a [H+] vidrio - A pH<12 (depende del tipo de vidrio) E(H+)>>E(Na+) pero a pH>12 E(Na+) no es despreciable Eind es > de lo que corresponde a la [H+]vidrio pHmedido< pHreal Errores por defecto 4) Error cido - A pH<1 pHmedido> pHreal Errores por exceso 5) Deshidratacin del electrodo Medidas no reproducibles

Electrodo de membrana lquido: (se incorporan um agente quelante a uma membrana hidrfoba) Ejemplo el de calcio. Consiste en una membrana de plstico poroso saturada con di-(ndecil)-fosfato. La membrana se coloca en el extremo de un tubo cilndrico no conductor y en contacto con dos reservorios. El reservorio externo contiene di-(n-decil)fosfato en forma de di-n-octilfenil-fosfonato, que empapa la membrana porosa. El reservorio interno contiene una disolucin acuosa patrn de Ca2+ y el electrodo de referencia Ag/AgCl.

Electrodo de membrana cristalino: Tienen una membrana formada por Sales inorgnicas policristalinas o de un solo cristal. Los electrodos se fabrican construyendo una fina perla de Ag2S o una mezcla de sta y una segunda sal de plata u otro sulfuro metlico. La perla de 1-2 mm de espesor, se sella en extremo de un cilindro de plstico no conductor, en el que se introduce una disolucin interna que contiene el analito y el electrodo de referencia. Los iones Ag+ transportan la carga a travs de la membrana. El potencial de membrana de la perla de Ag2S se desarrolla a causa de la diferencia de la posicin de equilibrio de la reaccin de solubilidad a ambos lados de la membrana. Electrodo enzimtico: corresponde a la concentracin de un sustrato al que se hace reaccionar con una enzima inmovilizada para producir un in que pueda determinarse con un electrodo selectivo de iones.

Titulacin potenciomtrica Utilizacin de la medida de potencial de un electrodo indicador para determinar el punto de equivalencia de una titulacin. Es un mtodo ms exacto y preciso que la utilizacin de indicadores visuales. Titulaciones potenciomtricas - Definicin: Valoraciones en las que el seguimiento de la reaccin se hace por medidas potenciomtricas. - Medidas de potencial: Tras cada adicin hay que esperar a que se alcance el Eeq - Curva de valoracin Logartmica - Determinacin del PE - Tipos de valoraciones: (a) Precipitacin, (b) cido-base, (c) complejacin, (d) redox

La determinacin potenciomtrica de los puntos de equivalencia es factible en las valoraciones cido base, de complejacin, redox y de precipitacin y en las valoraciones realizadas con disolventes acusoso y no acusoso. Las valoraciones potenciomtrica cido-base, de complejacin y de precipitacin suelen controlarse con electrodos de membrana selectivos para el analito, aunque tambin pueden usarse electrodos selectivos para el agente valorante o para el producto de la reaccin. Para las redox se usan electrodos redox del tipo alambre de pt y un electrodo de referencia. Aplicaciones cuantitativas

La medicin ms habitual quizs sea la medicin de pH de una disolucin. La ecuacin de Nernst relaciona el potencial medido de la celda con la concentracin del analito. Pero en realidad esta ecuacin involucra actividades, no concentraciones. Por lo tanto una manera correcta de escribir la ecuacin es: Ecel= K 0,059/n log 1/[Mn+] M in metlico, K comprende el coeficiente de actividad. Para determinar la concentracin del analito de una muestra es necesario estandarizar el electrodo. Si la respuesta del electrodo sigue la ecuacin de Nernst slo ser necesario determinar la constante K, por lo que podr lograrse la estandarizacin con un solo patrn externo. Como es frecuente observar pequeas desviaciones de la pendiente nernstiana ideal la estandarizacin suele hacerse utilizando 2 o ms patrones externos. En la mayora de los anlisis cuantitativos, lo que interesa es determinar la concentracin del analito, no su actividad. Sin embrago la respuesta del electrodo est en funcin de la actividad. En ausencia de interferentes, la curva de calibracin del potencial en relacin con la actividad es una lnea recta. Sin embrago, la grfica del potencial en relacin con la concentracin puede ser curva para las concentraciones ms altas de analito, debido a los cambios de su coeficiente de actividad. Una curva de calibracin con curvatura permitir determinar la concentracin del analito siempre que la matriz del patrn se similar a la de la muestra. Cuando no se conoce la composicin exacta de la matriz de la muestra como a menudo sucede, resulta imposible acoplarla a la del patrn. Otra posibilidad, no dependiente del conocimiento de la composicin exacta de la matriz de la muestra consiste en aadir una concentracin elevada de un electrolito inerte a todas las muestras y patrones. Si la concentracin de electrolito que se aade es suficiente, las diferencias entre la matriz de la muestra y la de los patrones perder importancia y el coeficiente de actividad permanecer esencialmente constante. La disolucin de un electrolito inerte aadida a la muestra y a los patrones recibe el nombre de tampn de ajuste de fuerza inica total. Analisis cuantitativo usando el mtodo de adicin de patron: debido a la dificultad para mantener una matriz constante en las muestras y patrone, muhos mtodos potenciomtricos cuantitativos recurren a la adicin de patrn. En la celda de la muestra se pone una muestra de volumen Vx y concentracin del analito Cx y se mide el potencial Ecelx. Se hace una adicin de patrn aadiendo un pequeo volumen, Vp, de un patrn que contiene una concentracin conocida de analito Cp, a la muestra y se vuelve a medir el potencial Ecels . Siempre que Vp sea significativamente menor que Vx, podr ignorarse el cambio de la matriz de la muestra y el coeficiente de actividad del analito permanecer constante. Medida del pH: Complicaciones. 1. Significado de pH = -log [H+] Sin embargo el pH de una disolucin se define por la respuesta de un electrodo al in H+ y por tanto es una medida de su actividad: * pH=-log(aH+) Como es lgico la composicin de la matriz influye sobre el pH verdadero de una disolucin. 2. Incertidumbre de la relacin entre potencial y actividad 3. Calibracin: se calibran usando un tampn cuya composicin se elige de forma que el pH establecido se encuentre lo ms cerca posible del obtenido mediante la ecuacin de actividad *. Habitualmente los electrodos de pH se estandarizan usando dos tampones, uno de pH cercano a 7 y otro mucho ms cido o bsico, dependiendo del pH previsto

de la muestra. El electrodo de pH se sumerge en el primer tampn y se ajusta el control de estadarizacin o calibracin hasta que el equipo de medida lee el pH correcto. A continuacin, se introduce el electrodo en el segundo tampn y se ajusta el control pendiente o temperatura al pH del tampn.

COULOMBIMETRA Los mtodos de anlisis columbimtricos se basan en la electrolisis (separacin de los elementos de un compuesto mediante electricidad) exhaustiva del analito. Es un mtodo electroqumico basado en la oxidacin o reduccin cuantitativa de un analito. Se determina la cantidad de analito midiendo la corriente durante el tiempo necesario para que la reaccin se complete. Q = it Ejemplo: Titulacin coulombimtrica de cloruros usando un electrodo de plata Reaccin electroqumica: Ag (s) => Ag+ + eReaccin qumica: Ag+ + Cl- =>AgCl (s) Cmo sabemos cuando la reaccin qumica se ha completado? - Se puede medir la concentracin de Ag+ con un segundo electrodo. -Se puede usar un indicador

Q = It Q = carga requerida (coulombs = amp . sec) I = corriente (amp.) t = tiempo (sec La relacin entre carga y moles est dado por la constante de Faraday Faraday (F) = 96,485 Coulombs (C)/mole eO de otra forma Q = it = nmF n: nmero electrones transferidos por mol de analito M: moles de analito (1:1 Ag+/e-)

Ag (s) => Ag+ + e-

Con lo cual se obtiene el nmero de moles de analito generado, consumido, etc.

Ley de Faraday: corriente o carga que pasa en una reaccin redox es proporcional a los moles de los reactivos y productos de esa reaccin. Ejemplo: Se aplica una corriente constante de 0,8 A para depositar cobre en el ctodo y O 2 en el nodo. Si la reaccin dur 15,2 minutos. Qu cantidad de gramos se forma de cada producto? reacciones: Cu2+ + 2e- => Cu (s) 2H2O =>4e- + O2 + 4H+ Resolucin. Q = i.t Q = (0.800 A)(15.2min) (60 sec/min) Q = 729.6 C (amp.sec) Cantidad de cobre: =(729.6 C)(1 mol e-/96,485 C)(1 mol Cu/2 mol e-)(63.5g Cu/mol Cu) = 0.240 g Cu Cantidad de O2 : =(729.6 C)(1 mol e-/96,485 C)(1 mol O2/4 mol e-)(32.0g O2/mol O2) = 0.0605 g O2

Tipos de mtodos a) Amperosttico (titulacin coulombimtrica) b) Potenciosttica Requisito fundamental 100% de eficiencia en corriente Titulaciones coulombimtricas Se titula el analito aplicando una corriente constante para generar el titulante electroqumicamente.

Comparacin con la volumetra tradicional. Aplicaciones a) Tienen un pto de equivalencia observable a) Titulaciones cido base - Corriente Similitud con el estndar - Titulacin de un cido - Time Similitud con el volumne agregado 2H2O + 2e- =>2OH- + H2 El OH- es el titulante generado electroq. - Se debe conocer estquiometra de la reaccin. Titulacin de una base - La reaccin debe ser rpida, cuantitativa y sin reacciones laterales. H2O => 2H+ + O2 + 2eEl H+ es el titulante generado electroq. b) Ventajas de la coulombimetra b.) Titulaciones de complejacin - Tiempo y corriente son fcil de medir con exactitud. - Se utiliza para titulantes inestables. HgNH3Y2- + NH4+ + 2e- => Hg + 2NH3 + HY3- Fcil de dosificar pequeas cantidades de reactivo y mayor exactitud y precisin, que al medir 3pequeos volmenes. HY => H+ + Y4- utilizacin en reacciones cido-base, precipitacin, redox y complejacn. - se puede automatizar completamente. c.) Titulaciones redox c) Fuentes de error 4+ Ce3+ => Ce + e- variacin de la corriente durante la electrlisis - reacciones4+ secundarias (100 % eficiencia de corriente) Ce + Fe2+ => Ce3+ + Fe3+ - error en la medida de la corriente - error en la medida del tiempo - error de titulacin. (diferencia entre punto de equivalencia y punto final de titulacin

d) Cambio en el potencial durante la medicin. a) En los sistemas de corriente constante, el potencial de la celda cambia cuando el analito es consumido. Cu2+ + 2e- => Cu (s) reaccin inicial Cuando todo el Cu2+ es consumido ocurre otra reaccin electroqumica. Por ejemplo generacin de H2 2H+ + 2e- => H2 (g)

Coulombimtria potenciosttica 1.) Se aplica un potencial constante para convertir por completo el analito en algn producto.

2) Ventajas: - Es ms especfica que la amperosttica (evita reacciones redox que pueden interferir) - Puede ser utilizada para mas de 55 elementos 3) Desventajas - Es mas larga que la amperosttica. La corriente decrece con el tiempo

It = Ioe-kt k = 25.8 DA/V D = Coeficiente de difusin A = Area del electrodo V = volumen = espesor del film de la capa de difusion donde hay un gradiente de difusion

VOLTAMPEROMETRA Y POLAROGRAFA Se aplica un potencial dependiente del tiempo a una celda electroqumica y se mide la corriente que pasa a travs de ella como funcin de dicho potencial. Se aplica una diferencia de potencial entre un electrodo de trabajo y un electrodo de referencia y se mide la corriente que circula. La voltamperometra difiere de otras tcnicas, como la coulombimetra, en que se caracteriza por tener un consumo mnimo del analito mientras que la coulombimetra prcticamente todo el analito pasa a otro estado (el rea de la superficie del electrodo de trabajo es significativamente menor que el de los utilizados en coulombimetra, por lo tanto la cantidad de analito que sufre electrolisis es muy pequea y laconcentracin del analito en el seno de la disolucin prcticamente no se modifica).

Voltamperograma: equivalente del espectro en espectroscopa y proporciona informacin cuantitativa y cualitativa sobre las especies que intervienen en la reaccin de oxidacin o reduccin. La voltamperometra moderna utiliza un potenciostato de 3 electrodos. En el electrodo de trabajo se aplica una seal de excitacin que es un potencial dependiente del tiempo, otencial que cambia en relacin con el potencial fijo aplicado al electrodo de referencia. La corriente medida es la que se establece entre los electrodos de trabajo y auxiliar. Este ltimo suele ser un alambre de platino, mientras que los de referencia habituales son ECS o uno de Ag/AgCl. Electrodos de trabajo Mercurio: Goteante-Colgante-Film. Electrodos slidos: Pt, C vtreo, Au, Rh, Ru, Cu etc. Ventana electroqumica

Tipico polarograma

Cuando un analito se oxida en el electrodo de trabajo, se produce una corriente de electrones que atraviesa el circuito elctrico externo hasta el electrodo auxiliar, donde tiene lugar la reduccin del disolvente o de otros componentes de la matriz de la disolucin. La reduccin de un analito en el electrodo de trabajo requiere una fuente de electrones capaz de generar una corriente que fluya desde el electrodo auxiliar hasta el ctodo. En cualquier caso, las reacciones redox producen una corriente entre los electrodos de trabajo y auxiliar a la que se denomina corriente faradaica. La corriente producida por la reduccin del analito se llama corriente catdia y por convencin se considera positiva. Las corrientes andicas se deben a reacciones de oxidacin y tienen carga negativa. Aunque el flujo de la corriente faradaica depende del potencial aplicado en el electrodo de trabajo, su magnitud depende de la velocidad de la reaccin de oxidacin o reduccin que tiene lugar en la superficie del electrodo. Existen 2 factores que determinan la velocidad de la reaccin electroqumica: la velocidad a la que los reactantes y productos son transportados desde y hasta la superficie del electrodo y la velocidad a la que los electrones se desplazan entre el electrodo y los reactantes y productos existentes en la disolucin. Existen3 mtodos de transporten que influyen en la velocidad con que los reactantes y productos son transportados desde y hacia la superficie del electrodo: difusin, migracin y conveccin Difusin: movimiento de un material como respuesta a un gradiente de concentracin Conveccin: movimiento del material en respuesta a una fuerza mecnica, como la agitacin de una disolucin

Migracin: movimiento de un catin o anin en respuesta al potencial aplicado. La polarografa es una medida voltamperomtrica cuya respuesta est determinada por el transporte combinado de masa difusin/conveccin. La polarografa es un tipo especfico de medida que cae en la categora general de voltamperometra de barrido lineal, donde el potencial de electrodo se encuentra alterado en forma lineal desde el potencial inicial hasta el potencial final. Como mtodo de barrido lineal controlado por el transporte de masa por difusin/conveccin, la respuesta corriente vs. potencial de un experimento polarogrfico tiene la tpica forma sigmoidal. Lo que hace a la polarografa diferente de otras medidas de voltamperometra lineal de barrido es que polarografa hace uso delelectrodo de gota de mercurio (DME). Una grfica de la corriente vs. potencial en un experimento de polarografa muestra las oscilaciones de corriente correspondientes a las gotas de mercurio que caen desde el capilar. Si se conecta el mximo de corriente de cada gota resultara una forma sigmoidea. La corriente limitante (la meseta en el sigmoide), llamada corriente de difusin porque la difusin es la principal contribucin al flujo de material electroactivo en este momento de la vida gota de Hg, se relaciona con la concentracin del analito mediante la ecuacin de Ilkovic: Donde D es el coeficiente de difusin del analito en el medio (cm2/s),Nes el nmero de electrones transferidos por mol de analito,mes el flujo msico de Hg a travs del capilar (mg/s), ytes el tiempo de vida de la gota en segundos, yCes la concentracin del analito en mol/cm3. Ecuacin de Ilkovic. Relacin ente i y C Id(promedio) = 607 n D1/2 m2/3 t1/6 C Id(mxima) = 706 n D1/2 m2/3 t1/6 C t es el tiempo de goteo (segundos), m es la velocidad del flujo de mercurio a travs del capilar (miligramos/segundos), D es el coeficiente de difusin (cm2/s), C es la concentracin del analito (Moles/mL) I es la intensidad en Amperes. Id = K x C El oxgeno interfiere porque es electroactivo Solucin saturada en aire es 4 mM y se obtiene una corriente de difusin de 5 A + O2 + 4 H + 4 e 2 H2O E = +1.23 V Polarografa+ 2 e en2O2 O2 + 2 H+ clsica H electrodo de goteo= +0.70 V E de mercurio: se efecta en una disolucin no agitada, la cada de las gotas de Hg que se mezclan con la disolucin hace que la corriente obtenida sea limitante. Por tanto, cada nueva gota de Hg que cae crece en una Se desgaza con N2 u Ar de alta pureza disolucin composicin es idntica a la de la disolucin total inicial. Las oscilaciones de la corriente se deben al crecimiento de la gota de Hg, que causa un cambio proporcional al tiempo del rea del electrodo de trabajo. Mximos polarogrficos Fenmeno de adsorcin entre el electrodo cargado y el analito

Se elimina agregando un agente surfactante como Tritn X-100

Celda con electrodos

Analisis cuantitativo iD c Curva de calibrado. Adicin de estndar Estndar interno o in piloto. Lmite de deteccin 10-4-10-5 M Precisin 2-5% aprox Especies electroactivas: Iones metlicos de transicin: Cu, Tl, Pb, Cd, Zn, Fe, Ni, etc. Complejos Oxyaniones, e.g. BrO3, IO4, SO32, etc. Molculas inorgnicas e.g. O2, H2O2, SOx, NOx etc. Compuestos orgnicos con grupos nitro-, Carbonilos, C=N, etc. Desventajas polarografa clsica Lmite de deteccin 10-4 a 10-5 M aprox.

Polarografa de Tast

La medicin de la intensidad se realiza durante un perodo cercano al final de la vida de cada gota. Para ello se utiliza un martillo mecnico que despega la gota despus de un intervalo de tiempo. Se mejora sensibilidad y resolucin

Polarografa de pulso Durante un tiempo muy corto se aplica un pulso de potencial durante el ultimo 1/4 de tiempo de vida de la gota. La corriente de carga decae durante los ultimos 20 ms. Corriente de difusin medida durante los ltimos 20 ms. Pulsos sucesivos con incremento de E en funcin del tiempo. Mas sensible que la polarografa convencional DC y la de Tast. Polarografa diferencial de pulso Pulsos de 5-100 mV se superponen con la aplicacin linear de potencial. La corriente se muestrea antes y cerca del final del pulso. Mayor sensibilidad Mayor resolucin Polarografa clsica vs de pulso

De acuerdo al programa de potencial aplicado se ha dado origen a las siguientes tcnicas: Tcnicas de barrido: Polarografa clsica Voltamperometra de barrido lineal (LSV). Voltamperometra cclica (CV). Tcnicas de pulso: Voltamperometra y polarografa de pulso diferencial (DPVDPP). Voltamperometra y polarografa de pulso normal (NPV-NPP). Tcnicas de onda cuadrada: Voltamperometra de onda cuadrada (SWV). Tcnicas de redisolucin: Voltamperometra de redisolucin de pulso diferencial (DPSV).

Voltamperometra de redisolucin de barrido lineal (LSSV). Voltamperometra de onda cuadrada de redisolucin andica (SWASV) y catdica (SWCSV).

Forma de la seal Pulso diferencial La i se muestrea 2 veces. Polarografa o voltamperometra diferencial de pulso. LD aprox. 1x10-7M Onda cuadrada Voltamperometra o Polarografa de onda cuadrada LD aprox. 1x10-8M Onda triangular Voltamperometra cclica
E

Curva i-E

T ie m p o

T ie m p o

Resumen tcnicas polarogrficas

Tcnicas de stripping Tcnicas en 2 etapas: a) acumulacin. Depsito, adsorcin b) barrido. SWSV, SWAdV, PDV, CV, etc. Sensibilidad: bajo ppb

Redisolucin andica

Aplicaciones Metales traza en matrices biolgicas, ambientales y alimentos: Principalmente: Cu, Pb, Cd, Zn, Cr(III) y Cr(VI), Mo(VI), Ni(II), etc. Determinacin de constantes de equilibrio. Capacidad complejante. Voltamperometra cclica

ELECTROFORESIS Tcnica de separacin que se basa en la capacidad de un soluto para desplazarse en un medio conductor por influencia de un campo elctrico. La separacin es posible debido a que iones con diferente relacin q/R migran a diferentes velocidades.

Voltaje aplicado por unidad de longitud del medio de separacin

Medio de separacin

E v
conductor de la corriente elctrica controla la carga elctrica

medio tamponado

En la electroforsis capilar, la muestra se inyecta en una disolucin tamponada retenida en el interior de un tubo capilar. Cuando se aplica un campo elctrico a este tubo, los componentes de la muestra migran debido a 2 tipos de movilidades; Movilidad electrofortica y Movilidad electroosmtica. La movilidad electrofortica es la respuesta del analito al campo elctrico aplicado (cationes al ctodo, aniones al nodo y las neutras permanecen estacionarias). Vef : efdelsoluto x E ef = q/6 r (q es la carga del analito, es la viscosidad del solvente tampn y r es el radio del analito). Flujo electroosmtico se produce cuando la disolucin tampn se mueve por el capilar en respuesta al campo elctrico. En general el tampn se mueve hacia el ctodo arrastrando a los analitos

La electroosmosis se produce porque las paredes del tubo capilar poseen carga elctrica. A pH superior a 2 o 3 los grupos silanol (Si-OH) se ionizan formando silanatos atrayendo a los cationes del tampn en forma mas fuerte y ms dbil, formando una doble capa. Los cationes de la doble capa migran hacia el ctodo y como estn solvatados arrastran disolucin, produciendo flujo electroosmtico.

Al aplicar campo elctrico El resto de las cargas (+) se mueven hacia el polo (-) Se genera un flujo de tampn que arrastra todo lo que hay en el interior del capilar

VENTAJAS
electroforesis capilar electroforesis convencional

MEJOR DISIPACIN DE CALOR ( S /V ) et x in t POTENCIALES DE VARIAS DECENAS DE kV (E) TIEMPOS DE ANLISIS CORTOS DETECCIN EN CONTINUO AUTOMATIZACIN (sencillez, rapidez) Caractersticas electroforesis capilar

RAPIDEZ ALTAS EFICACIAS PEQUEOS VOLMENES DE MUESTRA (nanolitros) AMPLIO RANGO DE APLICACIONES (Modos de EC) AUTOMATIZACIN DETECCIN EN LNEA (on column= en el propio capilar)

DETECCIN EN LNEA (on column)

Monocromador Rendija

Haz de luz UV Fotodiodo

Fuente de luz

Capilar Lente

Absorcin UV-Vis Fluorescencia (no todos los compuestos fluorescen) Amperomtrica (no se disipa la corriente residual) MS (problemas de interfase)

ELECTROFORESIS CAPILAR HPLC

PROPIEDADES ELECTRICAS DEL ANALITO DIFERENTE DISTRIBUCION ENTRE FASES

t Flujo Flujo

Perfil de flujo plano (mayor eficacia) Diferentes mecanismos de separacin Mayor rapidez Menor requerimiento de muestra Peor reproducibilidad en analisis cuantitativo Problemas a escala micropreparativa

Anlisis Farmacutico: Molculas de baja masa molar, compuestos cargados y neutros. Reacciones quirales. Determinacin de pureza, estabilidad, chequeo de productos finales. Biociencia: Pptidos, protenas, DNA, carbohidratos. Alimentos: Cationes y aniones inorgnicos, cidos orgnicos, aminocidos, carbohidratos. Qumica Ambiental: pesticidas, iones inorgnicos, metales de transicin, surfactantes, colorantes, etc. Estudios de especiacin.

BIOSENSORES Instrumentos analticos que transforman procesos biolgicos en seales elctricas u pticas y permiten su cuantificacin Utilizan la especificidad de los procesos biolgicos: - Enzimas x Sustratos - Anticuerpos x Antgenos - Lectinas x Carbohidratos - Complementariedad de cidos nucleicos. Ventajas: - Reutilizacin - Menor manipulacin - Menor tiempo de ensayo - Repetitividad Tipos y usos mas comercializados: 1. Tiras colorimtricas 2. Electroqumicos: - Potenciomtricos: Glucosa, Lactato, Glicerol, Alcohol, Lactosa, Laminocidos, Colesterol - Amperomtricos: Glucosa, Sacarosa, Alcohol 3.pticos: BIAcore: Ag proteicos.

1. Control de metabolitos crticos durante las operaciones quirrgicas. 2. Consultas y Urgencias Hospitalarias: Obvia anlisis caros y lentos en laboratorios centrales Acelera la diagnosis y el comienzo del tratamiento Menor riesgo de deterioro de la muestra 3. Diagnstico Domstico: Ensayos de Embarazos Control de Glucosa en diabticos 4. Aplicaciones in vivo: Pncreas artificial Correccin de niveles de metabolitos Problemas : Miniaturizacin y Biocompatibilidad 5. Aplicaciones Industriales, militares y medio ambientales: Alimentacin Cosmtica Control de Fermentaciones Controles de Calidad Deteccin de Explosivos Deteccin de gases nerviosos y/o toxinas biolgicas Control de polucin.

Tipos de biosensores 1. Biosensores electroqumicos Amperomtricos: Determinan corrientes elctricas asociadas con los electrones involucrados en procesos redox

Potenciomtricos: Usan electrodos selectivos para ciertos iones Conductimtricos: Determinan cambios en la conductancia asociados con cambios en el ambiente inico de las soluciones 2. Biosensores termomtricos 3. Biosensores piezoelctricos 4. Biosensores pticos De onda envanescente Resonancia de plasma superficial 5. Biosensores celulares 6. Inmunosensores Material biolico + Analito Analito Respuesta unido biolica
Respuesta Electr ica
Respuest a electric a (Mima respuesta electrica posible) x (Concentraci del analito) (Constante de semisaturaci) + (Concentraci del analito)