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A chave para compreender e controlar o crescimento bacterial em Sistemas de gua Potvel Automatizados
Segunda Edio por Paula H. Dreeszen Junho 2003
Definies
Adsoro processo fsico que ocorre quando uma substncia adere superfcie de uma outra. Adsoro um processo fsico que ocorre sem reao qumica. Aerbico requere ar ou oxignio livre para se desenvolver. Anaerbico se desenvolve sem ar ou oxignio livre. AWS Automated Watering System sistema de gua automatizado. Camada limtrofe a zona laminar ou quieta na parede da tubulao onde a velocidade de vazo cai para zero. Carga de superfcie o balano entre os nmeros de cargas positivas e negativas expostas a uma superfcie slida. Chemotaxis movimento de organismos em resposta ao gradiente qumico. Energia livre de superfcie o grau de hidrofobia ou hidrofilia de uma superfcie. Flagella plural de flagellum. Algumas bactrias possuem mais que um flagellum. Flagellum anexo filamentoso longo que impulsiona a bactria; significado literal chicote; veja Figura 3. Glycocalyx substncias polimricas extracelulares (polmeros pegajosos) que a bactria excreta para aderir s superfcies slidas e alojar nutrientes. Hidroflico tem a caracterstica de absorver gua. Hidrofbico tem a caracterstica de repelir a gua (exemplo: Teflon um material hidrofbico.) Motil movimento independente da gua. Oligotrophs bactrias e outros organismos capazes de se desenvolver em ambientes com limitao de nutrientes. Plantnica microrganismos de livre flutuao cujos movimentos so controlados pelo movimento da gua (no agregados s superfcies). RA Roughness Average media de rugosidade ou o desvio da mdia aritmtica da linha de centro de uma superfcie. RDS Room Distribution System sistema de distribuio de sala, parte de um sistema de gua automatizado. RMS Root Mean Square a raz quadrada mdia dos desvios da linha de centro de uma superfcie. Sssil agregada s superfcies slidas (oposto de plantnicas). Vazo laminar movimento de fluido em camadas paralelas suaves, contnuas, no tubulentas que no se misturam entre si.
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Introduo
O que so biofilmes?
Mais propriamente conhecida como biofilme, colnias de lama prosperam em todo lugar que h gua na cozinha, nas lentes de contato, revestimento de tripas animais. Quando a propagao urbana extensiva, biofilmes podem ser vistos a olho nu, cobrindo o interior de tubulaes de gua ou deslizamento oscilante e o verde do chumbo. (Coghlan, 1996). Simplesmente colocado, biofilmes so uma coleo de microorganismos cercados pela lama que secretam, agregados tanto em uma superfcie inerte como viva. Voc j est familiarizado com alguns biofilmes: a placa em seu dente, o lodo escorregadio em pedras de rios, e o filme como gel dentro de vasos de flores que ficaram durante uma semana. O biofilme existe em todo lugar que a superfcie entra em contato com gua. Mais que 99 por cento de toda bactria viva em comunidades de biofilme. Algumas so benficas. Plantas de tratamento de esgoto, por exemplo, confiam no biofilme para remover contaminantes da gua. Mas biofilmes podem tambm causar problemas corroendo tubulaes, obstruindo filtros de gua, causando rejeio de implantes mdicos, e bactrias perigosas que contaminam gua potvel.
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claro, voc deve apenas querer aprender sobre biofilmes para admirar a capacidade da bactria de se adaptar ao seu ambiente e escapar s tentativas de elimina-la.
Condio da superfcie
As primeiras substncias associadas com a superfcie no so bactrias mas traos orgnicos. Quase imediatamente aps a superfcie da tubulao limpa entrar em contato com gua, uma camada orgnica se deposita na interface gua/slido (Mittelman 1985). Estes orgnicos so ditos formarem uma camada de condicionamento que neutraliza excessiva carga de superfcie e energia livre de superfcie que pode prevenir uma clula de bactria de se aproximar o bastante para comear a agregar. Alm disso, as molculas orgnicas adsorvidas sempre servem como uma fonte de nutrientes para bactria.
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traos de nutrientes da gua externa. O glicoclix tambm age como um revestimento protetivo para as clulas agregadas que abranda os efeitos de biocidas e outras substncias txicas.
Fig. 1 Adsoro de molculas orgnicas em uma superfcie limpa forma um filme de condicionamento (Characklis 1990)
TRANSPORTE ADVETIVO
ADSORO REVERSIVEL
DESSORO
ADSORO IRREVERSIVEL
Fig. 2 Transporte de clulas de bactria para a superfcie condicionada, adsoro, dessoro, e adsoro irreversvel (Characklis 1990)
Flagelo
Membrana celular
Fig. 3 Bactrias selvagens so clulas peludas com polmeros extracelulares que aderem superfcies (Mittelman 1985)
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Quando se acumulam os nutrientes, as clulas pioneiras comeam a se reproduzir. As clulas irms produzem ento seu prprio glicoclix, aumentando largamente o volume da superfcie de troca inica. Logo uma prspera colnia de bactrias estabelecida (Mayette 1992). Em um biofilme maduro, a maior parte do volume ocupado pela matriz de glicoclix livremente organizada (75-95%) do que por clulas bacteriais (5-25%) (Geesey 1994). Porque a matriz de glicoclix retm muita gua, uma superfcie coberta por biofilme gelatinosa e escorregadia. O biofilme construdo de micrbios e uma teia de polmeros extracelulares.
Colonizadores Secundrios
Assim como molculas de nutrientes alojadas, a rede de glicoclix tambm armazena outros tipos de clulas microbiais atravs de restrio fsica e interao eletrosttica. Estes colonizadores secundrios metabolizam resduos dos colonizadores primrios bem como produzem seus prprios resduos que outras clulas ento utilizam na verdade. De acordo com Borenstein (1994), estas outras bactrias e fungos se associam superfcie seguindo a colonizao pelas espcies pioneiras por uma questo de dias.
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revestimento orgnico inicial para sees no colonizadas de tubulao no fluxo de baixo como substncias nutrientes para outros tipos de clulas.
Fig. 4 Bactrias e outros microrganismos desenvolvem colnias cooperativas ou consrcio dentro do biofilme. Um biofilme anaerbico pode se desenvolver embaixo da camada aerbica. A espessura do biofilme alcanar um equilbrio quando a gua corrente destacar clulas se estendendo no fluxo turbulento. (Borenstein 1994)
BIOFILME AERBICO
PAREDE DA TUBULAO
Fig. 5 Biofilme periodicamente libera clulas pioneiras
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Alimento
gua potvel, especialmente sistemas de gua de alta pureza, so ambientes limitadores de nutrientes, mas mesmo concentraes muito baixas de nutrientes so suficientes para permitir crescimento microbial e reproduo. Bactrias e outros organismos capazes de se desenvolver em ambientes limitadores de nutrientes so chamados oligotrophs. Bactrias desenvolveram meios de achar e aderir a superfcies para aumentar as chances de encontrar nutrientes. Que vantagens so oferecidas pela adeso s superfcies e desenvolvimento de biofilme? 1. Traos orgnicos se concentraro nas superfcies. 2. Alm disso, polmeros extracelulares concentraro nutrientes do volume de gua. 3. Colonizadores secundrios utilizam os produtos de descarte de seus vizinhos. 4. Juntando seus recursos bioqumicos, vrias espcies de bactrias, cada uma com diferentes enzimas, podem quebrar o suprimento de alimento que nenhuma espcie simples pode digerir sozinha. Que meios as bactrias desenvolveram para encontrar e aderir s superfcies? 1. Motilidade e Chemotaxis Bactrias motis podem nadar ao longo de um gradiente de concentrao qumica em direo a uma maior concentrao de um nutriente. O movimento de organismos em resposta ao gradiente qumico (nutriente) chamado chemotaxis. Pseudomonas aueruginosa uma das bactrias motis que usa um flagellum para se mover em direo a maiores concentraes de nutrientes na aprede da tubulao. No estudo da adeso de Pseudomonas s superfcies de ao inoxidvel (Stanley 1983), pesquisadores colocaram clulas em um misturador para remover a flagella. Eles descobriram que a velocidade de adeso da clula diminuiu ao menos 90% quando as flagellas foram removidas. 2. Parede de clula hidrofbica Muitos organismos ao se depararem com as condies de inanio encontradas em sistemas de gua purificada, respondem alterando sua estrutura de parede celular para aumentar sua afinidade superfcie. Alterando a composio da protena e lipdio da membrana externa, a carga e a hidrofobicidade pode ser mudada. A parede da clula se torna hidrofbica. Tais clulas hidrofbicas querem nada mais que encontrar seu caminho de sada da coluna de gua. Uma vez na camada limtrofe (a zona morta na parede da tubulao onde a velocidade de vazo cai para zero), elas so atradas pela superfcie da tubulao(Mayette 1992).
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3. Produo de polmero extracelular Uma vez ba superfcie, as clulas de bactria se ancoram na superfcie com seus polmeros aderentes. Corte simples (fluxo) no mais adequado para remover estas clulas (Veja seo de velocidade de vazo, pgina 8).
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realmente mais resistentes, apenas esto circundadas com um escudo protetivo. O poder oxidante do desinfetante usado antes dele poder alcanar a clula. 2. Limitaes de difuso Quando clulas so agregadas a uma parede de tubulao, o fornecimento de desinfetante limitado pela proporo de difuso do composto ao longo da camada limtrofe e atravs do filme. Necessita-se uma concentrao maior alm de um perodo de contato mais longo para o desinfetante atingir as clulas de bactrias em um biofilme se comparado aos organismos de livre flutuao.
Novas descobertas
Pesquisa recente do Centro para Engenharia do Biofilme derrubou algumas suposies antigas sobre bactrias e biofilmes.
Centro para Engenharia do Biofilme O Centro para Engenharia do Biofilme foi estabelecida na Universidade do Estado de Montana, Bozeman, MT, em 1990 pelo programa dos Centros de Pesquisa de Engenharia da Fundao de Cincia Nacional (National Science Foundation Engineering Research Centers). Sua misso avanar o conhecimento bsico e educao exigida para compreender, controlar e explorar os processos de biofilme. Visite seu site em: www.erc.montana.edu
Estrutura do biofilme
No passado, microbiologistas assumiram que biofilmes continham grumos desordenados de bactrias localizadas em nenhuma estrutura ou modelo particular. Novas tcnicas para aumentar biofilmes sem destruir a estrutura gelatinosa permitiram aos pesquisadores descobrir a complexa estrutura de biofilmes como se visse uma cidade de um satlite. Esta estrutura descrita no artigo recente Slime City (Cidade de Lodo Coghlan 1996): Na maioria dos casos, a base do biofilme uma camada densa e opaca de lodo de 5 a 10 micrometros (197-394 micropolegadas) de espessura. uma mistura pegajosa de polissacardeos, outras substncias polimricas e gua, todos produzidos pelas bactrias. Subindo muito 100 a 200 micrometros (3940-7840 micropolegadas) esto colnias de bactrias em formato de cogumelos ou cones. Acima nvel de rua torna-se mais lodoso, desta vez de uma consistncia varivel e mais mascarada com gua com uma rede de canais atravs do qual gua, lixo bacterial, nutrientes, enzimas, metablitos, e oxignio viajam.
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Fig. 6 Modelo conceitual da arquitetura de um biofilme de espcie isolada baseado em observaes diretas usando um microscpio confocal. Algumas microcolnias so estruturas cnicas simples, enquanto outras tem o formato de cogumelos. gua corrente (setas) fluem em canais entre as colnias carregando nutrientes e resduo. (Costerton 1995)
NOTA: Em um sistema de gua potvel automatizado que se passa o fluxo regularmente, a espessura do biofilme deve ser menos que 200 microns. Veja seo na espessura do biofilme e velocidade de vazo, pgina 11.
Implicaes para sanitizao Testes de desinfetantes tradicionais foram feitos com culturas de laboratrio de livre flutuao de espcie isolada. A constante CT para um desinfetante o produto da (concentrao) x (tempo) exigido para matar uma bactria particular. Entretanto, valores CT no devem ser extrapolados para bactrias em biofilmes. O que isto significa para sistemas de gua potvel automatizados? Para uma coisa, explica como as contagens de bactrias podem ser medidas mesmo quando a gua contm baixos nveis de cloro. Tpicos nveis de cloro em gua drenada ficam entre 0.5-2.0 ppm. Esta quantidade de cloro demonstrou matar bactrias de livre flutuao, mas pode no ser suficiente para matar bactrias de biofilme. Nacos de biofilme descartados podem conter bactrias viveis que aparecem nas contagens de placa. Este um problema particular com Pseudomonas que um grande produto de lodo, e tambm mais resistente ao cloro. Uma instalao animal determinou atravs de seus prprios testes que eles necessitavam aproximadamente 3 ppm de cloro em gua OR (Osmose Reversa) para alcanar baixas contagens de Pseudomonas.
rea de superfcie
O fator que mais influencia o desenvolvimento do biofilme em sistemas de gua purificada a rea de superfcie. Sistemas de gua industriais, ao contrrio da maioria dos ambientes naturais (lagos e rios), oferecem uma quantidade tremenda de rea de superfcie para agregao. Membranas RO, resinas DI, tanques de estocagem, filtros cartuchos, e sistemas de tubulao todos oferecem superfcies adequadas para agregao e crescimento bacterial (Mittelman 1985).
Nivelamento da superfcie
Embora superfcies mais lisas retardam o surgimento de bactrias agregadas, o nivelamento no afeta significativamente a quantidade total de biofilme que ir se agregar superfcie. De acordo com Meltzer (1993), nunca foi encontrada uma superfcie que seja isenta de bioresduos. A estrutura da superfcie aparece para influenciar a proporo de resduo, mas apenas inicialmente durante as primeiras poucas horas de exposio. Em geral, superfcies lisas se sujam a uma velocidade inicial menor do que superfcies rugosas, mas a formao de biofilme aps um perodo de dias inevitvel. Esta concluso baseada em pesquisa da aderncia da Pseudomonas ao ao inoxidvel (veja o resumo do teste abaixo).
Um estudo da limpeza do ao inoxidvel usado para superfcies de contato com alimentos (Milledge), concluiu que se o acabamento de superfcie tem um efeito sobre o poder de limpeza, provavelmente pequeno em relao a outros fatores durante a limpeza (temperatura, concentrao de detergente, etc.). At agora, nenhuma pesquisa conseguiu comparar a capacidade de sanitizar as superfcies com diferentes acabamentos em sistemas de gua.
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Pode haver algumas vantagens em superfcies lisas. 1. Tubulao lisa deve suportar menos biofilme porque tem menos rea total de superfcie do que tubulao rugosa. Isto foi visto no teste realizado por Pedersen (veja resumo do teste, pagina 10) mas no foi visto no teste realizado por Vanhaecke (veja resumo do teste acima). 2. Superfcies lisas (especialmente eletropolidas) devem ter menos biocorroso. Uma das causas da biocorroso a corrente que passa entre os picos e vales de uma superfcie rugosa.
Velocidade de vazo
Alta vazo de gua pode alterar o crescimento do biofilme mas no prevenir a agregao das bactrias nas superfcies da tubulao. Esta concluso defendida por Mittelman (Parte 1 1985), Patterson (1991) e Meltzer (1994). Alta vazo no previne contra aglomerao de bactrias nem remove biofilmes existentes pelas seguintes razes: 1. Baixa vazo na camada limtrofe Apesar da velocidade de gua, ela flui mais lenta nas camadas adjacentes das superfcies da tubulao. Mesmo quando a vazo de gua no centro da tubulao turbulenta, a velocidade de vazo cai para zero na parede da tubulao. A distncia fora da parede da tubulao no qual a razo de fluxo no turbulenta chamada de camada limtrofe ou subcamada laminar. A espessura da subcamada laminar foi calculada por Pittner (1988) para vrias velocidades de vazo e para 3 tamanhos de tubulao (veja a tabela a seguir) Pittner calculou que as foras de cisalhamento dentro da subcamada laminar so muito menores que aquelas exigidas para deslocar uma clula de bactria. 2. Forte adeso por exopolmeros Nos sistemas de gua com vazo de alta velocidade contnua, a bactria que acumula no biofilme tende a ser de variedade filamentosa (como Pseudomonas) especialmente apropriado para aderncia por filamentos. A bactria se ancora superfcie com seus aderentes exopolmeros.
* O fluxo pode ser ou no turbulento nestas condies Velocidade de vazo E.I. RDS atual aproximadamente 3-4 ps/seg.
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Embora a alta velocidade de vazo no previna a adeso de bactrias s superfcies da tubulao, ela tem os seguintes efeitos na estrutura do biofilme. 1. Biofilme mais denso De acordo com Mittelman (1985) a maiores velocidades de vazo, um biofilme mais denso e mais tenaz formado. Como resultado, estas superfcies sempre aparecem livres de incrustantes, j que no so viscosos ao toque. 2. Espessura de biofilme limitada A espessura mxima do biofilme pode ser considerada a espessura da camada de vazo laminar (veja Tabela 1). Em um sistema de fluxo constante, uma espessura de equilbrio alcanada que depende da velocidade da gua e nutrientes. O crescimento do biofilme alm da camada laminar resultar na liberao de clulas plantonicas pioneiras que, em condies favorveis, estabelecer o biofilme em uma outra seo da tubulao. (Patterson 1991). Em sistemas que possuem fluxo de gua flutuante, tais como sistemas de gua automatizados com fluxo peridico, as bactrias se desprendero durante o fluxo. Isto resulta em chuveiro de partculas aleatrias de bactrias que podem explicar dia a dia flutuaes vistas em resultados de contagem total de bactrias.
Nutrientes limitados
Tabela 2: Nutrientes para crescimento bacterial encontrado em sistemas de gua pura (Mittleman 1985)
Nutriente Carbono Orgnico Origens cidos hmico e fulvico (origem gua) Plastificantes e solventes de tubulao Plsticos reforados de fibra de vidro (FRPs) Lubrificantes de bitola e bomba Subprodutos microbiais Pessoal P do ar cidos hmico e flvico (origem gua) Nitratos e nitritos (origem gua) Subprodutos microbiais P do ar Fosfatos (origem gua) Subprodutos microbiais P do ar Sulfatos (origem gua) cido sulfrico (pr-tratamento de RO) Surfactantes de membrana P do ar Origem gua Tubulao do processo plsticos reforados (FRPs) Componentes de sistema de ao inoxidvel Reagentes do pr-tratamento de RO Pessoal P do ar
Nitrognio
Fsforo Enxofre
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Como outras criaturas vivas, as bactrias necessitam de certos nutrientes para crescerem e se reproduzirem. Limitando estes nutrientes pode se limitar o crescimento da bactria, porm os nveis de nutrientes em sistemas de alta pureza so inequivocamente suficientes para permitir a reproduo e crescimento microbial para uma extenso problemtica (Husted 1994). A Tabela 2 lista algumas fontes de nutrientes em sistemas de gua purificada.
Nutrio do substrato
A bactria pode obter alguns de seus nutrientes da tubulao e juntas em um sistema de gua? Sim, de acordo com Flemming & Geesey (p. 67, 1990). A maioria dos plsticos no so biodegradveis, mas cementadores e plastificantes de tubulao que derivam de resinas epxi, tubulao de PVC e tubulao de poliamida podem ser fontes de carbono orgnico para bactrias. Membranas de RO a base de celulose tambm pode ser uma fonte de nutriente. Esta a razo porque devemos clorar o alimentador de gua de RO. Alm disso, bactrias podem obter nutrientes de traos de metais do ao inoxidvel e outros componentes de metal.
gua purificada
Sob perfeitas condies de crescimento, uma clula bacterial se divide em duas clulas irms a cada 20 minutos (Harfst 1992). Isto significa que uma clula simples e seus descendentes crescero exponencialmente para mais de 2 milhes de clulas em oito horas ou para 4.000.000 de libras de bactrias em 24 horas! claro que esta proporo de crescimento nunca realmente realizada (especialmente em gua potvel limpa) porque so limitadas pelo espao e nutrientes disponveis. As bactrias podem morrer de fome ou ao menos ser inibidas em seu crescimento privando elas de nutrientes orgnicos e oxignio? Infelizmente, mesmo mnimas quantidades de material orgnico sustentam muitas bactrias. Isto explicado no seguinte exemplo por Pittner (1988): Se apenas uma parte por bilho de material orgnico em uma amostra de 1 mililitro de gua for convertida a corpos bacteriais (assumindo que a bactria 20% de material orgnico e a gravidade especfica da bactria sendo a da gua), aproximadamente 9.500 bactrias, a cada 1.0 micron de dimetro, estaria presente em 1 mililitro de amostra. ou 9.500 bactrias/ml em 1 ppb de material orgnico. Tecnologia disponvel atual no pode reduzir os nveis de nutrientes completamente, por isso o controle total de bactrias no alcanvel simplesmente pelo controle de nutrientes. Da mesma forma, quantidades muito pequenas de oxignio sustentaro adequadamente luxuoso crescimento bacterial mesmo que a bactria no se reverta a respirao anaerbica,que a maioria das bactrias so capazes de fazer. Por estas razes, uma farta populao bacterial pode existir mesmo em sistemas de gua de alta pureza.. (Pittner 1988). Ambientes limitadores de nutrientes podem realmente promover o agregamento de bactrias s superfcies porque onde os traos orgnicos se acumulam e polmeros extracelulares no biofilme capturam traos de nutrientes. Embora no podemos matar completamente a bactria de fome, gua de osmose reversa pobre em nutrientes sustenta menos biofilme que suprimentos de gua tamponada regulares.
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Estes valores so os dados mdios de vrios testes. Por causa das muitas variveis que derivam estes dados, desvios de 5% sero considerados dentro dos parmetros de boas medidas. Tirado do Boletim de Finalizadores e Soldas de Materiais por DCI, Inc. (Meltzer 1993)
Altura do perfil
Na maioria das superfcies a altura total do perfil da rugosidade da superfcie, ou altura do picopara-vale ser aproximadamente quatro vezes o valor de RA. Sabendo a rugosidade medida, um perfil aproximado da superfcie pode ser desenhado (veja Figura 7).
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As figuras 8 e 9 mostram fotografias reais de clulas Pseudomonas em uma superfcie em ao inoxidvel grana 180. Os tamanhos relativos de clulas de bactrias e riscos de superfcie mostradas nestas fotos so semelhantes ao perfil grana 180 da Figura 7.
Fig. 8 Micrografia de varredura eletrnica com ampliao de 400x de uma superfcie de ao inoxidvel 316L polida mecanicamente na grana 180 aps incubao de 180 minutos com Pseudomonas aeruginosa. Note que as clulas tendem a congregar marcas longas de polimento. (Gillis 1996).
Fig. 9 Mesma superfcie grana 180 como na Figura 8, mas com ampliao de 500x. Note que os riscos so grandes o suficiente para armazenar bactrias.
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A Tabela 1 (pgina 8) mostra a espessura aproximada da camada laminar em microns para tubulao RDS 1/2" em ao inoxidvel das Indstrias Edstrom para variadas velocidades de vazo. Nos sistemas de gua automatizados atuais, a tubulao RDS tem fluxo de aproximadamente 1.51.75 gpm. Esta uma velocidade mdia de vazo de 3-4 ps/seg. A 3-4 ps/seg., a espessura deve ser limitada a aproximadamente 70-90 microns. A Figura 10 mostra a mxima espessura de biofilme para variadas velocidades de vazo na tubulao RDS em ao inoxidvel das Indstrias Edstrom. Lembre-se que a espessura do biofilme tambm limitada pelos nutrientes disponveis, assim a espessura de equilbrio pode ser menor que aquela limitada apenas pela velocidade de vazo. Compare a espessura do biofilme com uma clula individual de Pseudomonas e note que o biofilme pode ter muitas camadas de bactrias. Tambm, note que irregularidades no acabamento de superfcie so pequenas comparadas a espessura mxima de biofilme possvel. Isto explica o que pesquisadores descobriram (Vanhaecke 1990): o nmero mximo de bactrias aderentes superfcie independente da rugosidade da superfcie.
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Fig. 10
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Uma forma de limitar a atividade da SRB reduzir a concentrao de seus nutrientes essenciais: fsforo, nitrognio, e sulfato. Alm disso, guas purificadas (RO ou DI) teriam menos problemas com SRBs. Tambm, qualquer prtica que minimize a espessura do biofilme (fluxo, sanitizao, eliminao de fendas de extremidade morta) minimizar as reas anaerbicas no biofilme que as SRBs necessitam. (Geesey 1994).
Colnias no uniformes (irregularidades) de biofilme resultam na formao de clulas de aerao onde reas sob colnias que respiram so esgotadas de oxignio relativo a reas no colonizadas circundantes. Tendo diferentes concentraes de oxignio em dois locais em um metal obtm-se uma diferena no potencial eltrico e conseqentemente a corroso ocorre. Sob condies aerbicas, as reas sob colnias que respiram se tornam andicas e as reas circundantes se tornam catdicas. Bactria produtora de cido As bactrias pem produzir metabolismos, tais como cidos orgnicos e inorgnicos. Por exemplo, Thiobacillus thiooxidans produz cido sulfrico e Clostridium aceticum produz cido actico. cidos produzidos por bactrias aceleram a corroso dissolvendo xidos (filme passivo) da superfcie do metal e acelerando a velocidade de reao catdica (Borestein 1994). Bactria produtora de hidrognio Muitos microorganismos produzem gs hidrognio como um produto da fermentao do carboidrato. O gs hidrognio pode se difundir nos metais e causar fragilizao por hidrognio.
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Bactria de Ferro Bactria oxidante de ferro, como Gallionella, Sphaerotilus, Leptothrix, e Crenothrix, so bactrias aerbicas e filamentosas que oxidam o ferro da forma ferrosa solvel (Fe2+) para uma forma frrica insolvel (Fe3+). O ferro ferroso dissolvido pode ser proveniente tanto da alimentao de gua como da superfcie do metal. Este ferro frrico que estas bactrias produzem pode atrair ons cloreto e produzir depsitos de cloreto frrico que pode atacar ao inoxidvel austentico, os depsitos so geralmente marrons ou marrons avermelhados.
Biocidas oxidantes
Mittelman diz que a efetividade dos biocidas oxidantes em sistemas de gua purificada baseada numa dosagem igual a miligramas por litro decresce na seguinte ordem: oznio > dixido de cloro > cloro > iodo > perxido de hidrognio
Cloro De acordo com Mittelman (1986), Cloro provavelmente o mais efetivo e menos caro de todos os biocidas oxidantes e no oxidantes. A atividade do cloro contra biofilmes agregados particularmente alta; no apenas mata bactrias plantnicas e biofilme, mas o cloro tambm reage e destri rede de polissacardeos e suas agregaes superfcie. Destruindo os polmeros extracelulares, o cloro quebra a integridade fsica do biofilme. Characklis (1990) recomenda a melhora de um programa de tratamento com cloro tomando as seguintes medidas:
1. Aumento da Concentrao de Cloro na Interface gua-Biofilme Quando o cloro se difunde no biofilme, ele usado nas reaes com clulas de bactria e materiais extracelulares. baixos nveis de cloro, as bactrias do biofilme podem produzir material extracelular mais rpido que a velocidade do cloro difundir atravs dele assim elas ficam protegidas no lodo. Aumentando a concentrao, o cloro difundir mais profundamente no biofilme. Ao realizar a desinfeco de biofilmes, alta concentrao de cloro com curta durao mais efetiva que baixa concentrao por maiores duraes.
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2. Aumento da Fadiga por Corte de Fluido na Interface gua-Biofilme Simultnea sanitizao por cloro e circulao resulta em uma maior tomada de cloro pelo biofilme e em maior desagregao de biofilme devido a: Maior transferncia de massa de cloro da gua principal para o biofilme. Ruptura do biofilme durante a clorao expe novas superfcies de biofilme ao ataque de cloro. Espessura menor de subcamada viscosa ou laminar.
3. Uso do Controle de pH O alto pH favorece a desagregao de on hipoclorito promovido de biofilmes maduros, e baixo pH melhora a desinfeco por cido hipocloroso de filmes finos. Characklis props um procedimento interessante que seria alterar entre clorao contnua pH 6.5 e clorao de choque pH 8. Ele no indicou que isto tenha sido testado.
Dixido de cloro Dixido de cloro tem atividades biocidas similares quelas do cloro. Por ser instvel, ele deve ser misturado e preparado no local. Como o cloro, o dixido de cloro corrosivo aos metais e deve ser manuseado com cuidado.
Oznio Como um oxidante, oznio aproximadamente duas vezes mais poderoso que o cloro nas mesmas concentraes. Como dixido de cloro, oznio deve ser gerado no local por causa de sua alta reatividade e relativa instabilidade. Os sistemas devem ser projetados com materiais apropriados resistentes ao oznio. Oznio geralmente dosado em uma base contnua a 1-2 mg/l. O sucesso no emprego de dosagens mais altas em uma base descontnua tem sido limitado, possivelmente por causa da limitada solubilidade do oznio em gua purificada, difcil produzir altas concentraes de oznio na soluo. (Mittelman 1986). Embora o cloro no seja to poderoso como oznio quando voc compara 1-2 mg/l de cada, o cloro pode ser usado em concentraes sanitizantes mais altas com igual fora desinfetante.
Perxido de hidrognio Perxido de hidrognio freqentemente usado como um biocida em sistemas de gua purificada com grau microeletrnico porque no produz subprodutos; ele rapidamente se degrada em gua e oxignio. Uma soluo a 10% em volume em gua purificada parece efetiva para matar bactrias plantnicas, mas so necessrios mais estudos na efetividade contra biofilmes agregados. (Mittelman 1986).
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Biocidas no oxidantes
Compostos Quaternrios de Amnio Em adio a sua atividade biocida, quats so surfactantes/detergentes efetivos, que podem ser um fator importante em seu uso para desativao de biofilme remoo das superfcies. A capacidade de enxge pode ser um problema j que a remoo de um sistema de gua purificada sempre exige enxge exaustivo.
Formaldedo Formaldedo tem sido aplicado em sistemas de grau farmacutico. Ele relativamente no corrosivo ao ao inoxidvel. Sua efetividade contra o biofilme questionvel e um carcinognico txico.
Agentes Aninicos e Noninicos de Ativao da Superfcie Estes compostos surfactantes ou detergentes tem atividade biocida limitada contras as bactrias em sistemas de gua purificada. Aplicaes podem ser encontradas para estes detergentes em conjunto com outros biocidas para melhorar a remoo de biofilme e outro particulado.
Tratamentos Fsicos
Aquecimento Sistemas Farmacuticos de gua para Injeo (WFI Water For Injection) usam loops de recirculao de gua quente (maior que 80C) para matar bactrias. De acordo com Mittleman (1986), quando estes sistemas so usados continuamente, bactrias plantnicas so mortas e o desenvolvimento de biofilme reduzido. Biofilmes so ainda encontrados em gua quente (80C). Sanitizao com gua quente peridica pode tambm ser usada para destruir bactrias no biofilme, mas de acordo com Collentro (1995) isto requere uma temperatura de 95C por um perodo em excesso de 100 minutos. Isto no seria prtico em um sistema de gua potvel animal!
Remoo mecnica De Mittelman: Biofilmes pesados no podem ser removidos das paredes do tanque de estocagem pelo uso apenas de reagentes; raspagem ou esfregamento mecnico, spray de alta presso, ou uma combinao tambm exigida. A remoo mecnica do biofilme dos sistemas de distribuio no vivel. Para manuteno de sistemas OR (Osmose Reversa), ns no esfregamos rotineiramente tanques de estocagem, mas geralmente h um baixo nvel de cloro contnuo na gua estocada, assim biofilmes pesados no se desenvolvem.
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Resistncia ao biocida
Diferente dos antibiticos usados para combater bactrias associadas s doenas humana, animal e vegetal, as bactrias no desenvolvem o mesmo tipo de resistncia aos biocidas industriais. A diferena entre antibiticos e biocidas industriais que enquanto um antibitico pode ter um pequeno nmero de locais de alvo provvel ou clula bacterial, todos os biocidas oxidantes tem uma grande quantidade de locais de alvo em potencial. Cloro, por exemplo, capaz de ter mais que uma centena de locais de alvo provvel ou microorganismos. virtualmente impossvel os microorganismos desenvolverem uma resistncia geral a tais compostos (Mittelman 1986). Entretanto, bactrias em um biofilme podem resistir aos biocidas porque so protegidos no lodo.
A figura 13 (Mittelman 1986), mostra um tpico redesenvolvimento aps a sanitizao. Inicialmente, a contagem de bactrias no volume de gua cai para zero aps a sanitizao, mas foi seguida por um aumento gradual em nmeros at nveis ou abaixo dos nveis de prtratamento. Neste exemplo, o redesenvolvimento comeou aps 2 dias e voltou aos nveis de equilbrio aps 20 dias. Este um resultado semelhante aos resultados vistos no teste de sanitizao em laboratrio nas Indstrias Edstrom.
A figura 13 (Mittelman 1986), mostra um tpico redesenvolvimento aps a sanitizao. Inicialmente, a contagem de bactrias no volume de gua cai para zero aps a sanitizao, mas foi seguida por um aumento gradual em nmeros at nveis ou abaixo dos nveis de pr-tratamento. Neste exemplo, o redesenvolvimento comeou aps 2 dias e voltou aos nveis de equilbrio aps 20 dias. Este um resultado semelhante aos resultados vistos no teste de sanitizao em laboratrio nas Indstrias Edstrom.
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De acordo com Characklis (1990), a recuperao de biofilme pode ser devido a um ou a todos os seguintes fatores: 1. O biofilme remanescente contm suficientes organismos viveis que no tem fase de retardamento no redesenvolvimento. Alm disso, a recuperao de biofilme aps clorao por choque mais rpida que o acmulo inicial em uma tubulao limpa. 2. O biofilme residual na superfcie torna-a mais rugosa que a tubulao limpa. A rugosidade do depsito pode oferecer uma superfcie mais aderente a qual adsorve mais clulas microbiais e outros compostos da gua. 3. O cloro preferencialmente remove polmeros extracelulares e no clulas de biofilme, alm disso deixa as clulas de biofilme mais expostas aos nutrientes quando cessa a clorao. 4. Organismos sobreviventes rapidamente criam mais lodo (polmeros extracelulares) como uma resposta protetiva irritao por cloro. 5. H seleo para organismos menos suscetveis aos reagentes de sanitizao. Estes so geralmente os organismos que produzem excessivas quantidades de lodo como Pseudomonas. Estudo de Caso: Seleo de Sanitizao para Pseudomonas Quando vrios ratos em estudos a longo prazo morreram em 1996, esta instalao de laboratrio animal suspeitou que a causa foi Pseudomonas aeruginosa que foi encontrada em tubulaes rack manifold. Eles nunca tinham identificado Pseudomonas at aps eles sanitizarem com cloro seu sistema de recirculao de gua automatizado (AWS) pela primeira vez desde que o sistema foi instalado em 1982. Descrio do Sistema: OR com nenhum pr-tratamento seguido por um filtro de carbono e tanques de deionizao antes de encher 3 tanques de estocagem. Filtros DI e de Carbono mais provavelmente adicionam um monte de bactrias para gua OR. Nenhum cloro permitido na gua potvel animal devido aos estudos nutricionais conduzidos. Um tanque no recirculante e mantm por mais de 2 semanas o suprimento de gua para fluxo rack manifold no clorado. Os outros 2 tanques esto nos loops de recirculao alimentando o AWS. No h fluxo RDS e baixa virada de gua de tanque. Teste de Bactrias: A instalao faz testes regulares de gua potvel para bactrias. Eles regularmente obtm contagens totais de 10.000-50.000 cfu/ml dos tanques de estocagem OR e nunca tiveram qualquer problema de sade animal. Quando as contagens excederam 100.000 cfu/ml, eles decidiram fazer a primeira sanitizao do sistema. Sanitizao: 20 ppm de cloro por 4 horas de imerso com todos os racks animais removidos. As contagens de bactrias foram muito baixas por duas semanas, mas depois aumentaram (tpico redesenvolvimento seguinte a sanitizao). Especulao: A sanitizao por cloro seletivamente promoveu mais organismos resistentes ao cloro como Pseudomonas. Ele provavelmente esteve presente todo o tempo, embutido no biofilme agregado s paredes do tanque e tubulao. Uma sanitizao de uma vez com uma baixa concentrao como 20 ppm no matar 100% de Pseudomonas.
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Contagem de placa no detecta todas as bactrias viveis Contagens de placa so baseadas na capacidade das bactrias em uma amostra de se desenvolverem em um meio nutriente definido. Quando as bactrias crescem em um meio nutriente, elas formam colnias distintas. Teoricamente, uma colnia derivada de uma simples clula de bactria. Alguma subestimao de bactrias causada por grumos de bactrias que forma apenas uma colnia. Uma outra razo das contagens viveis serem muito baixas em gua purificada pobre em nutrientes que as bactrias esto em um estado de inanio e no podem se desenvolver em meio rico em nutriente. Meio rico em laboratrio so txicos para bactrias adaptadas a viver em sistemas de gua de alta pureza. Para conseguir recuperaes bacteriais mais altas de guas purificadas, meio especial (R2A Agar), temperaturas de incubao menores, e tempos de incubao maiores so s vezes utilizados.
Compreendendo mostradores de partculas Algumas vezes os resultados do teste de contagem de placa bacterial parecem muito errados. Amostras tomadas de um ponto no sistema podem variar de menos que 10 cfu/ml para TNTC (toonumerous-to-count muito numerosos para contar). Ou talvez as contagens so geralmente baixas, mas ocasionalmente uma contagem alta aprece. Algumas destas variaes podem ser explicadas compreendendo que biofilmes periodicamente proliferam causando contagens bacteriais altssimas. De acordo com Patterson (1991), Falha repentina da integridade do biofilme em locais especficos resultaro em bactrias e chuveiro de partculas que ocorrem randomicamente de tempos em tempos.
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Concluses
A situao, ento, que nem o nivelamento da superfcie, materiais de construo, nem longos atrasos nas velocidades de vazo evitam a formao de biofilme. (Meltzer 1994) As bactrias constituem uma muito bem sucedida forma de vida. Em sua evoluo, elas desenvolveram estratgias bem sucedidas para sobrevivncia que inclui agregao s superfcies e desenvolvimento de biofilmes protetivos onde elas se comportam muito diferentes das bactrias de livre flutuao. Suas estratgias bem sucedidas torna difcil o controle do desenvolvimento de biofilme em sistemas de gua automatizados.
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Referncias:
Artigo traduzido da literatura Biofilme - The key to understanding and controlling bacterial growth in Automated DrinkingWater Systems, Second Edition, by Paula H.Dreeszen - June 2003, Edstrom Industries, Inc.
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