Instituto de Qumica de So Carlos IQSC Universidade de So Paulo

Cadeia de transporte de eltrons e fosforilao oxidativa

Disciplina: Bioqumica Avanada Docente: Profa. Dra. Fernanda Canduri Profa.

Contedo
A Mitocndria Sistema de transporte mitocondrial Transporte de eltrons Termodinmica do transporte de eltrons A sequncia do transporte de eltrons Complexo I (NADH-Coenzima Q oxidorredutase) Complexo II (Succinato-Coenzima Q oxidorredutase) Complexo III (Coenzima Q-Citocromo C oxidorredutase) Compelo IV (Citocromo C oxidase) Fosforilao oxidativa A teoria quimiosmtica ATP sintase Proporo P/O

A mitocndria
A mitocndria o stio do metabolismo oxidativo de eucariotos Contm a piruvato desidrogenase, as enzimas do ciclo do cido ctrico, as enzimas que catalisam a oxidao dos cidos graxos e as enzimas e protenas redox envolvidas no transporte de eltrons e na fosforilao oxidativa Por isso a mitocndria considerada a usina de fora da clula.

Eletromicrografia de uma mitocrndria animal

Sistemas de transporte mitocondrial

Composta pela membrana mitocondrial externa (MME) e membrana mitocondrial interna (MMI), formando um espao intermembrana O espao intermembrana equivalente ao citosol no que se refere s suas concentraes em metablitos e ons A membrana interna composta por cerca de 75% de protenas, mais rica em protenas do que a membrana externa livremente permevel a O2, CO2 e H2O e contm, alm das protenas da cadeia respiratria, vrias protenas de transporte que controlam a passagem de metablitos, como ATP, ADP, o piruvato, o Ca2+ e o fosfato A impermeabilidade controlada da MMI para a maioria dos ons e dos metablitos permite a formao de um gradiente de ons atravs dessa barreira e resulta na compartimentalizao das funes metablicas entre o citosol e a mitocndria

Os equivalentes citoslicos reduzidos so transportados para dentro da mitocndria

O NADH produzido no citosol pela gliclise deve ter acesso cadeia transportadora de eltrons para a oxidao aerbica No h uma protena transportadora de NADH na MMI Somente os eltrons do NADH citoslico so transportados para a mitocndria por um dos vrios sistemas de transporte Circuito do malato-aspartato Circuito do glicerol-fosfato

Circuito do malato-aspartato malato-

Circuito do glicerol-fosfato glicerolA glicerol-3-fosfato desidrogenase catalisa a oxidao do NADH citoslico pela DHAP para produzir NAD+, o qual retorna gliclise Os eltrons do glicerol3-fosfato so transferidos para a flavoprotenadesidrogenase da MMI, formando FADH2, que fornece eltrons diretamente para CTE

O translocador ADP-ATP ADPA maior parte do ATP gerado na matriz mitocondrial pela fosforilao oxidativa utilizado no citosol A MMI contm um translocador de ADP-ATP (ou adeninanucleotdeo translocase) que transporta o ATP para fora da matriz em troca do ADP produzido no citosol pela hidrlise do ADP sistema antiporte

Transporte de eltrons
Os carreadores que transportam os eltrons a partir do NADH e FADH2 at O2 esto associados a membrana mitocondrial interna Alguns desses centros redox so mveis e outros so protenas integrais de membrana A seqncia de carreadores de eltrons reflete seus potenciais de reduo relativos O processo exergnico A oxidao de NADH e FADH2 promovida pela cadeia de transporte de eltrons Os eltrons so carreados do Complexo I e do complexo II para o III pela coenzima Q, e do complexo III para o IV pelo citocromo C

Complexo I (NADH-Coenzima Q oxidorredutase) (NADHO complexo I transfere eltrons a partir do NADH para a CoQ o maior complexo protico na MMI, com 43 polipeptdeos Ele contm uma molcula de flavina mononucleotdeo (FMN) e seis a sete grupos ferro-enxofre que participam no transporte de eltrons Os grupos ferro-enxofre esto presentes como grupos prostticos de protenas ferroenxofre, e podem sofrer oxidao e reduo de um eltron

Transferncia de eltrons no Complexo I

O processo envolve a reduo temporria de cada grupo cuja passagem dos eltrons para o prximo grupo permite a reoxidao do grupo anterior O NADH participa apenas em reaes que envolvem a transferncia de 2 eltrons A FMN e a CoQ podem transferir um ou dois eltrons por vez, proporcionando a formao de um conduto de eltrons entre o doador de dois eltrons, o NADH e os aceptores de um eltron, os citocromos

Translocao de prtons
A medida que os eltrons so transferidos entre os centros redox do Complexo I, quatro prtons so translocados da matriz para o espao intermembrana Bomba de Prtons O mecanismo de bombeamento de prtons deve ser conduzido pelas alteraes conformacionais induzidas pelas alteraes no estado redox da protena

Complexo II (Succinato-Coenzima Q oxidorredutase) (SuccinatoContm a enzima do ciclo do cido ctrico, a succinatodesidrogenase e trs outras pequenas subunidades hidrofbicas que transferem eltrons do succinato CoQ Seus grupos redox incluem o FAD ligado covalentemente succinato-desidrogenase para o qual os eltrons so inicialmente transferidos, um grupo [4Fe-4S], dois grupos [2Fe-2S], e um citocromo b560 O Complexo II permite que eltrons de potencial relativamente alto entrem na cadeia transportadora por uma via independente do Complexo I Os Complexos I e II no operam em srie, mas ambos resultam na transferncia de eltrons para a CoQ a partir de substratos reduzidos NADH e succinato A CoQ serve como um ponto de captao de eltrons

Complexo II (Succinato-Coenzima Q oxidorredutase) (Succinato-

Trs subunidades hidrofbicas

succinatodesidrogenase

Complexo III (Coenzima Q-Citocromo c oxidorredutase) QConhecido tambm como citocromo bc1: possui dois citocromos tipo b e um citocromo c1 Transfere eltrons da CoQ reduzida para o citocromo c1 a partir de um centro [2Fe-2S], e para o citocromo b

Transporte de eltrons no complexo III: o ciclo Q

A funo permitir que uma molcula de CoQH2 reduza duas molculas de citocromo, por meio de uma bifurcao do fluxo de eltrons da CoQH2 para os citocromos c1 e b, permitindo o bombeamento de prtons da matriz para o espao intermembrana A CoQH2 transfere um dos eltrons para a protena Fe-S liberando dois prtons no espao intermembrana e produzindo CoQ-. A protena Fe-S reduz o citocromo c1, enquanto a CoQ- transfere os eltrons restantes para o citocromo b, produzindo uma CoQ oxidada. A CoQ oxidada recebe o eltron novamente do citocromo b, revertendo-se forma CoQCiclo 1

Transporte de eltrons no complexo III: o ciclo Q

No ciclo 2, outra CoQH2 reduzida, provinda do complexo I repete as etapas anteriores: um eltron reduz a protena Fe-S e em seguida o citocromo c1, e outro eltron reduz citocromo b Esse segundo eltron reduz a CoQ- produzido no primeiro ciclo, produzindo CoQH2 Os prtons consumidos originaram-se da matriz mitocondrial Para cada 2 CoQH2 que entram no ciclo Q, uma CoQH2 regenerada

Ciclo 2

Complexo IV (Citocromo c oxidase)

nico transportador de eltrons no qual o ferro heme possui um ligante livre que pode reagir com O2. A citocromo c oxidase catalisa oxidaes de quatro molculas de citocromo c (Cyt c) reduzidas consecutivamente e a concomitante reduo tetraeletrnica de uma molcula de O2 4 cit c(Fe2+) + 4H+ + O2 2 H2O 4 cit c(Fe3+) + A reduo do O2 a 2 H2O ocorre no complexo binuclear citocromo a3-CuB e envolve 4 transferncias de e- consecutivas dos stios do CuA e cit a 2 prtons so translocados

O complexo IV possui 4 centros redox: citocromo a, citocromo a3, um tomo de cobre conhecido como CuB e um par de tomos de cobre conhecido como centro CuA, alm de um Mg2+ e um Zn2+

Fosforilao oxidativa
A sntese endergnica do ATP a partir de ADP e Pi na mitocndria catalisada por uma ATP-sintase (ou complexo V), dirigida pelo processo de transporte de eltrons A energia livre liberada pelo transporte de eltrons atravs dos Complexos I IV deve ser conservada em uma forma que a ATP sintase possa utiliz-la a energia de acoplamento A teoria quimiosmtica:
A energia livre do transporte de eltrons conservada pelo bombeamento de H+ da matriz mitocondrial para o espao intermembrana, criando um gradiente eletroqumico de H+ atravs da MMI. O potencial eletroqumico desse gradiente aproveitado para a sntese de ATP

Processo anlogo ocorre em bactrias, cuja maquinaria transportadora de eltrons est localizada na membrana plasmtica

O transporte de eltrons gera um gradiente de prtons

O transporte de eltrons provoca o transporte de prtons pelos Complexos I, III, e IV atravs da MMI a partir da matriz, uma regio de baixa [H+] para o espao intermembrana, uma regio de alta [H+] Como o pH externo menor que o pH interno, a sada de prtons da matriz, contra o gradiente de prtons, um processo endergnico a energia livre seqestrada pelo gradiente eletroqumico resultante conduz a sntese de ATP A energia livre estimada para a sntese de uma molcula de ATP cerca de +30 a +50 kJ/mol, muito grande para ser conduzida pela passagem de um nico prton de volta matriz A maior parte das determinaes experimentais indica que cerca de 3 prtons so necessrios por ATP sintetizado.

A ATP sintase
Tambm conhecida como ATP sintase bombeadora de prtons ou F1F0ATPase Protena transmembrana de multissubunidades com massa molecular de 450kDa Composta de duas unidades funcionais F0 e F1 F0 um canal de prtons transmembrana F1 composta por vrias subunidades () e dentre elas, a subunidade catalisa a reao de sntese de ATP

A proporo P/O
Relaciona a quantidade de ATP sintetizada quantidade de oxignio reduzido O fluxo de 2 eltrons pelos complexos I, III e IV resulta na translocao de 10 prtons para o espao intermembrana

A proporo P/O
* O fluxo de retorno desses 10 prtons por meio da F1-F0 ATPase suficiente para conduzir a sntese de ~3 ATPs * O NADH do complexo I e o FADH2 no complexo II permitem um movimento transmembrana de oito prtons, suficiente para sintetizar ~2 ATPs * O trnsito de 2 eltrons atravs do Complexo IV contribui com 2 prtons, o suficiente para formar ~1 ATP * Na mitocndria respirando ativamente, a proporo P/O no corresponde a um nmero inteiro * Sendo assim, o nmero de ATPs sintetizados (examinado por Peter Hinkle) por molcula de glicose oxidada ser 2,5 ATP/NADH x 10 NADH/glicose + 1,5 ATP/FADH2 x 2 FADH2/glicose + 2 ATP/glicose a partir do ciclo do cido ctrico + 2 ATP/glicose a partir da gliclise = 32 ATP/glicose, e no 38 ATP/glicose, utilizando a proporo P/O de 3, 2 e 1.

A cadeia transportadora de eltrons e a fosforilao oxidativa

A ATP sintase e os translocadores

A regulao da fosforilao oxidativa

Quando a fosforilao oxidativa mnima, no estado de repouso, o gradiente eletroqumico na MMI acumula-se e impede a continuao do bombeamento de prtons, inibindo o transporte de eltrons, fazendo com que o pH no espao intermembrana diminua Quando a sntese do ATP aumenta, o gradiente eletroqumico dissipado, permitindo o reincio do transporte de eltrons Um agente desacoplador aumenta a permeabilidade dos H+ MMI, e desacopla a fosforilao oxidativa da cadeia de transporte de eltrons, diminuindo a sntese de ATP pela ATP sintase.