PESTE PORCINA CLSICA SNCHEZ-VIZCANO, JM MINISTERIO DE CIENCIA Y TECNOLOGA CENTRO DE INVESTIGACIN EN SANIDAD ANIMAL (CISA) 28130 VALDEOLMOS, MADRID

vizcano@inia.es

I. INTRODUCCIN

La Peste porcina clsica (PPC), tambin conocida como Clera Porcino o Fiebre porcina clsica, es una de las principales enfermedades vricas que afecta al ganado porcino, tanto domestico como salvaje, se caracteriza por lesiones de carcter hemorrgico y de curso generalmente fatal en las formas agudas. Fue descrita por vez primera en Ohio (EEUU) a primeros del siglo XIX, apareciendo en Europa en 1862 La PPC est ampliamente distribuida por los diferentes continentes, suponiendo en este momento una importante amenaza al sistema productivo porcino.

II. ETIOLOGA

La PPC est producida por un virus perteneciente al gnero Pestivirus y familia Flaviviridae. (Franki, 1991). La partcula vrica presenta un dimetro de entre 40 a 50 nm con envuelta, la cpside tiene forma icosadrica. Su gnoma viral est formado por una molcula de RNA de banda simple y polaridad positiva que presenta una longitud de 12,284 nucletidos ( 2,2 Kb) con una fase de lectura abierta capaz de codificar 3.989 aminocidos. El genoma viral acta como ARN mensajero y se traduce en una poliprotena que procesada por la accin de proteasas virales, no bien conocidas, y de la clula huesped, para dar lugar a las protenas maduras. El genoma ha sido clonado y secuenciado en su totalidad caracterizandose cuatro protenas estructurales, la protena p14, localizada en la nucleocpsida y tres glicoprotenas : gp 55, tambin denominada (E1), gp 44, tambin conocida como E2 y gp 33. Las gp 55 y 44 estn localizadas en la envuelta. Existe al menos una protena no estructural denominada gp 2. El genoma ha sido clonado y secuenciado en su totalidad conociendose su distribucin y localizacin. Entre los nucleotidos 364 y 1.100 se localizan en primer lugar la gp 44, seguidamente la gp 33y la gp 55. La gp 55 induce anticuerpos neutralizantes y una gran variabilidad en una regin lo que permite diferenciar distintas cepas virales. (Weiland y col. 1992, Ruggli y col. 1996., Van Rijn y col. 1997).

II.1 RELACIONES ANTGENICAS Y GENTICAS

El virus de la PPC (VPPC) se encuentra estrechamente relacionado, tanto antgenica como genticamente con otros dos virus integrantes del mismo gnero pestivirus, el virus de la Diarrea vrica bovina (BVD) y el de la Enfermedad de Border (BD). Estos dos virus son primariamente patgenos para los rumiantes, aunque el VBVD puede tambin infectar el ganado porcino causando en algunas ocasiones infecciones con cuadro clnico y lesiones similares a la PPC. Gracias a la utilizacin de los anticuerpos monoclonales frente a diferentes epitopos de la gp 55 se pueden estudiar las diferencias antigenicas entre los distintos virus. Por otra parte, estudios comparativos de secuencias entre el VPPC y el VBVD han demostrado la presencia de zonas de alta homologa entre ambos virus tanto a nivel de protenas como de nucletidos, donde puede ser del entre 66 al 74 % como de nivel de aminocidos cuyos resultados ronda el 85 %. No obstante, mediante la comparacin de la secuencia de los nucleotidos de las regiones 5- NTR (entre las bases 190 a

339), Felsenstein, 1989 o mediante estudios de la regin de la glicoprotena gp 55 (Lowings, et al. 1996) se han podido clasificar los diferentes virus de la PPC en tres subgrupos.

II.2 PROPIEDADES FISICO QUMICAS

Debido a la presencia de lipoprotenas en su envoltura, el virus se inactiva rpidamente con disolventes orgnicos, como cloroformo y ter, as como detergentes, como Nonidet P-40, desoxicolato y saponina. Tambin es sensible a la accin de radiaciones ultravioleta y a pH entre 3-4 y 11-12. La infectividad se destruye fcilmente sometiendo al virus a temperaturas de 60C durante un mnimo de 10 minutos. Esto mismo se consigue a menos temperatura si se aumenta el tiempo de exposicin. De ah que se observe igual efecto a una temperatura de 56C durante 60 minutos, 50C durante 3 das o 35C durante 15 das. Las enzimas proteolticas, como la tripsina, ejercen una inactivacin moderada. El virus de la PPC es estable en un rango de pH entre 8 y 9, a temperaturas de 20C y 70C, y liofilizado, donde

puede mantenerse durante aos. Asimismo puede durar semanas a temperatura de refrigeracin en recipientes de cristal hermticos, sin una disminucin marcada de la infectividad.los conservantes, como glicerina al 1% o bien fenol al 0,5%, aumentan la efectividad del proceso de conservacin. La destruccin del virus se aconseja en hipoclorito 2%, cresol6%, fenol5%, hidrxido sdico 2% y lechada de cal al 5%.

II.3 RESISTENCIA A CONDICIONES AMBIENTALES.

La supervivencia del virus de la PPC en la naturaleza depende tanto del medio ambiente como del medio en que ste se encuentre protegido ( sangre, saliva, heces ). Aunque se trata de un virus bastante resistente a la desecacin y al medio externo, sobre todo cuando se encuentra en exudados, sangre o cualquier medio proteico, no llega, a alcanzar la resistencia de otros virus porcinos, como por ejemplo el virus de la peste porcina africana.

La putrefaccin lo destruye en 1 a 3 das. Da ah que se inactive fcilmente en estircol

(24- 48 horas ), si no se

encuentra en sangre o exudado nasal. En locales deshabitados suele desaparecer entre 1 a 15 das, tambin puede permanecer durante varios das en heces, orinas y secreciones. En los purines se recomienda mantenerlos durante 45 das para conseguir su inactivacin.

La permanencia del virus en los productos curados del cerdo fue realizado por nosotros (Mebus, y col, 1992). Los animales fueron inoculados con el virus de PPC y en el momento de mxima viremia todos los animales fueron sangrados y sacrificados, se seleccionaron los tejidos a estudiar con los que se realizaran posteriormente los diferentes productos (jamn ibrico y serrano, paletilla ibrica y lomo ibrico). Las muestras fueron tomadas en el momento de sacrificio y a intervalos durante el proceso de curacin, realizndose ensayos para comprobar la supervivencia del virus en muestras de grasa, ganglios, mdula sea y msculo de los tejidos, utilizando tcnicas in vitro y cuando stas resultaron negativas, inoculando las muestras in vivo. Los resultados obtenidos pusieron de manifiesto que el virus se inactivaba antes de terminar el perodo establecido para la curacin comercial de cada producto.

II.4 MULTIPLICACIN Y PROPAGACIN DEL VIRUS

El nico Hospedador natural del virus de la PPC es el cerdo tanto demestico como silvestre, aunque el virus es capaz de replicarse en otras especies animales como rumiantes domsticos, venados y animales de experimentacin, provocando una reaccin febril, prcticamente asintomtico. Entre ellas, el conejo es la ms importante, ya que dieron lugar a la obtencin de las clsicas cepas vacunales atenuadas, utilizadas en Europa en los aos 70 y primeros de los 80 para el control y erradicacin de la enfermedad.

En el cerdo el virus suele entrar principalmente por ingestin seguido de la piel, por semen o por inhalacin, es decir todas las vas son posibles en la infeccin del VPPC. La multiplicacin primaria se lleva a cabo en las clulas endoteliales y fagocticas de amgdalas y ganglios linfticos regionales (segn la puerta de entrada) posteriormente se produce una fase viremia para localizarse finalmente en los rganos diana donde se producir de nuevo replicacin viral. (Mengeling, W, ycol. 1969). La replicacin del virus in vitro en cultivos primarios se produce en clulas de rin porcino, testculos de ratn y cerdo, clulas porcinas embrionarias, cultivos primarios de clulas de rin de cobayo, zorro, conejo y ardilla entre otros.

El virus adems replica en una gran variedad de lneas celulares establecidas de origen porcino, bovino, caprino, primate y cobayo. La de uso ms frecuente en laboratorio es la lnea de rin de cerdo PK-15. Pese a que la replicacin del virus en estos cultivos tiene un mayor grado de reproducibilidad y un comportamiento ms uniforme, la propagacin del virus en ellas solo proporciona moderados o bajos ttulos virales, por lo que los rendimientos en produccin no son muy elevados.

El uso de cultivos primarios trae consigo un elevado riesgo de contaminaciones con otros virus, bacterias y microplasmas procedentes del organismo donante. Este riesgo disminuye en gran medida con el uso de lneas celulares establecidas. En este caso ultimo caso, la contaminacin ms importante es la infeccin del cultivo con el virus de BVD, que puede ir contaminando el suero fetal bovino, utilizado en los cultivos como nutriente. Por tanto es necesario realizar comprobaciones peridicas frente a los distintos agentes contaminantes y principalmente frente a este virus. Las clulas primarias de origen ovino o cultivos permanentes que contengan suero ovino como nutriente presentan el mismo problema de contaminacin con el virus de BD.

La replicacin del virus en las diferentes lneas celulares no produce efecto citoptico en la clula infectada, con la excepcin de muy reducido nmero de cepas citopatopatognicas, por lo que para su deteccin ha de ser monitorizado por distintas tcnicas serolgicas de inmunofluorescencia o inmunoperoxidasa.

III. PATOGENIA Y TRANSMISIN

El VPPC suele penetrar en el organismo por ingestin, inhalacin, piel, o semen. Una vez en el animal , el virus se replica en amgdalas (infeccin oral o nasal) o en los ganglios linfticos regionales (vaginal, piel) . Tras una primera fase de replicacin el virus pasando a sangre produciendo viremia (12 a 20 horas post infeccin hasta varias semanas). Tras esta fase el virus se localiza en los rganos diana (bazo, ganglios, rin, pulmn, mdula sea) donde se producen nuevas replicaciones vricas y las lesiones caractersticas de carcter hemorrgico.

El contacto directo entre animales infectados (en fase aguda portadores) y animales sanos es la forma ms comn de transmisin del VPPC.

La eliminacin del virus en animales infectados puede comenzar a partir del segundo da post infeccin por saliva, secreciones oculares y nasales, aire. Despus de unos das el virus se puede eliminar tambin por orina, heces y semen. Es importante, destacar la transmisin de madres portadoras inaparentes a sus lechones u a otros animales adultos susceptibles.

El VPPC se mantiene infeccioso en la carne porcina cruda por largos periodos de tiempo que van desde los 27 das en el tocino a los 1.500 das en la carne congelada. En los productos curados, el tiempo de inactivacin del VPPC, va de los 250 das para el jamn ibrico a los 140 y 126 para el jamn serrano y el lomo ibrico respectivamente.

Adems del contacto de animales enfermos o portadores con animales sanos o de la ingestin de productos contaminados existen otras importantes vas de contagio de esta enfermedad, entre ellas destacar :

El transporte contaminado

La ropa y calzado

Los prines

Equipo quirurgico y/o de exploraciones mdicas

Insectos y roedores

Los recientes brotes de PPC en Europa han puesto de nuevo de manifiesto que el transporte juega un papel muy importante en la transmisin de la PPC, as se ha podido comprobar que del 25 al 50% de los brotes estaban originados por el transporte contaminado (Snchez-Vizcano, 1999).

IV. CUADRO CLNICO Y ANATOMOPATOLGICO

La PPC puede cursar con una enorme variedad de manifestaciones clnicas y anatomopatolgicas dependiendo de la virulencia de la cepa, del estado inmunitario y edad del animal. Las lesiones caractersticas descritas para esta enfermedad, en general, se presentan solamente con cepas de alta virulencia, en animales no inmunizados y con ms facilidad en lechones que en adultos. Pueden existir animales portadores asintomticos de gran importancia en la eliminacin de virus.

En general se han descrito en cerdos adultos las formas : aguda, subaguda y crnica de la enfermedad. Adems, existe una forma trasplacentaria de la PPC que puede dar lugar a diversas afecciones fetales y neonatales e infecciones persistentes asintomticas.

V. DIAGNSTICO

Dada la gran variedad de sntomas y lesiones con las que puede cursar la PPC as como la gran cantidad de lesiones comunes que puede presentar con otras enfermedades hemorrgicas del cerdo (Peste porcina africana, Pasterelosis aguda, Salmonelosis, Mal rojo, etc) el diagnstico laboratorial es esencial en esta enfermedad.

Como en otras enfermedades infecciosas, el diagnstico laboratorial se puede establecer por la deteccin de:

V.1. VIRUS O ANTGENOS VRALES.

V.2. CIDO NUCLEICO VIRAL.

V.3. ANTICUERPOS ESPECFICOS.

V.1. DETECCIN DE VIRUS O ANTGENOS VRALES

Son varias las tcnicas disponibles para la deteccin de virus o antgenos vrales en la PPC. La eleccin de una u otra se determina segn los siguientes criterios:

Infeccin primaria: Es la primera vez que se sospecha de la enfermedad en un rea determinada.

Rapidez : Necesidad de tener los datos urgentemente.

Nmero de muestras a analizar.

Disponibilidades tcnicas y econmicas.

Segn estos criterios los mtodos ms utilizados sera :

V.1.1. AISLAMIENTO VIRAL

V.1.2. INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA

V.1.3. ELISA DE CAPTURA

V.1.1. AISLAMIENTO VIRAL

El aislamiento del VPPC en cultivos celulares est considerada en la actualidad como la tcnica de referencia obligada en zonas exentas de la enfermedad o como tcnica confirmatoria en caso de dudas. Este mtodo esta basado en la capacidad de multiplicarse el VPPC en la lnea celular de rin de cerdo conocida como lnea PK 15. Sobre esta lnea, se coloca un macerado extrado de los rganos sospechosos. Cada 24 72 horas se realizar una tincin (fluorescencia directa) con un anticuerpo monoclonal (diferencial de pestivirus) para observar la presencia o no del VPPC. En caso negativo se recultivara hasta un mnimo de tres veces. Esta es una tcnica muy sensible (ya que por poco virus que tenga la muestra se multiplicara en la lnea) y muy especifica gracias a los anticuerpos monoclonales. Presenta como nico problema que es muy laboriosa y lenta, pudiendo llevar de entre 3 a 5 das.

V.1.2. INMUNOFLUORECSCENCIA DIRECTA EN TEJIDOS.

Consiste esta tcnica en la puesta en evidencia de antgenos virales en corte histolgico de los rganos sospechosos mediante la tinccin con un conjugado policlonal (contra todas las protenas del virus, no permite la diferenciacin entre los pestivirus) o monoclonal (frente a la protena gp 55, permite la diferenciacin entre los diferentes pestivirus) marcado con fluorescena o peroxidasa.

Las ventajas de esta tcnica es su gran rapidez (dos a tres horas) el inconveniente es que no se pueden realizar un gran nmero de muestras. Su utilizacin esta recomendada para diagnstico rpido en zonas ya infectadas o con altas sospechas de estar infectadas o cuando el nmero de muestras no sea muy elevado.

V.1.3. ELISA DE CAPTURA

Recientemente, se ha utilizado con xito, dado el aceptable nivel de correlacin con el aislamiento viral, sobre todo a partir de los 7 a 10 das post infeccin, la deteccin de un sistema ELISA de captura para la deteccin de los antgenos virales a partir de rganos o de leucocitos sanguneos de animales sospechosos. La tcnica est basada en un sistema ELISA sandwich en el que se utilizan anticuerpos monoclonales (diferenciales de pestivirus) para capturar y revelar la captacin de los antgenos virales. Esta tcnica presenta, frente a la anterior, la capacidad de ser utilizada para gran nmero de muestras, pues las diferentes etapas de la tcnica ELISA, incluyendo la lectura, estn automatizadas. El tiempo total de realizacin de este mtodo es de 36 horas, mucho ms largo que la inmunofluorescencia directa, pero mucho menos que el aislamiento vrico.

Esta tcnica esta recomendada en zonas ya afectadas o con alta probabilidad de ser infectada as como cuando el nmero de muestras sea muy elevado.

V.2. DETECCIN DEL CIDO NUCLEICO VIRAL.

La tcnica PCR para la deteccin de cidos nucleicos virales est resultando tremendamente practica, rpida y eficaz en el diagnstico de gran nmero de enfermedades infecciosas. Consiste esta tcnica en la deteccin de un pequeo fragmento especifico del RNA del VPPC mediante la amplificacin de la reaccin en cadena de la polimerasa. Se ha seleccionado un fragmento de RNA comn a todos los pestivirus y otro fragmento especfico de cada uno de los componentes de este grupo viral, de manera que se puede hacer un diagnstico diferencial de gran sensibilidad y

especificidad. Adems, es una tcnica relativamente rpida y econmica. Sin duda, una tcnica de eleccin para cualquier situacin.

V.3. DETECCIN DE ANTICUERPOS

La deteccin de anticuerpos es de gran utilidad para comprobar la presencia o no de zonas libres y no vacunadas, pero no cuando se sospeche de una infeccin reciente. En ese ltimo caso se debera realizar deteccin de antgeno y/o anticuerpos. Varios mtodos han sido descritos para la deteccin de anticuerpos de PPC, de entre ellos destacaremos los siguientes :

V.3.1. SERONEUTRALIZACIN

V.3.2. ELISA DIFERENCIAL

V.3.1. SERONEUTRALIZACIN

El mtodo de seroneutralizacin (SN) consiste en determinar la capacidad que tiene el suero objeto de estudio de neutralizar el efecto de un virus sobre la lnea celular PK 15. Se utilizan diferentes diluciones del suero problema y se comparan sus resultados frente a un suero control. Dado que el VPPC no produce efecto citoptico, la posible accin del virus sobre la clula, se visualiza mediante fluorescencia directa o inmunoperoxidasa. La SN es una tcnica muy especfica y sensible pero, tiene el inconveniente de su gran laboriosidad, por lo que no esta indicada para un gran nmero de muestras aunque si como tcnica de referencia.

V.3.2. ELISA DIFERENCIAL

Este mtodo esta basado en un ELISA COMPETICIN en el que se utiliza un anticuerpo monoclonal frente a la gp 55 lo que permite adems diferenciar los anticuerpos de PPC de los de BVD. El suero problema se pone en contacto con la gp 55 y tras un periodo de incubacin se pone la mezcla a competir con un monoclonal contra la gp 55. Este mtodo permite la realizacin de un gran nmero de muestras gracias al sistema ELISA(todas las fases se pueden automatizar) en un relativo corto perido de tiempo

El gran incoveniente de los dos mtodos descritos es que no permiten diferenciar los anticuerpos de enfermedad de los anticuerpos vacunales, de las vacunas actualmente comercializadas en la actualidad.

V.4. MUESTRAS A REMITIR AL LABORATORIO

Con el fin de poder realizar un adecuado diagnstico es muy importante que la eleccin de la muestra sea la adecuada as como que llegue en buen estado al laboratorio. NO PUEDE HABER UN BUEN DIAGNSTICO SIN UNA BUENA MUESTRA.

En el caso de la PPC las muestras a enviar seran :

SANGRE CON ANTICOAGULANTE

SANGRE SIN ANTICOAGULANTE

TONSILAS

GANGLIO MESENTRICO

BAZO

LEON DISTAL

RIN

Las muestras deben llegar a su destino de la forma ms rpida y segura posible y en ningn caso deben mantenerse POR LARGO TIEMPO a temperatura ambiente.

Una vez recogidas del animal objeto de estudio, deben ser identificadas de forma inequvoca y estable (etiquetas adhesivas o rotulando los botes) y mantenidas a 4 C. Se debe utilizar un frasco para cada animal y siempre deben quedar cerrados hermticamente.

Si el anlisis laboratorial se va a efectuar en menos de 72 horas no es necesario congelar las muestras y siempre es mejor mantenerlas a 4 C.

Si el anlisis se fuera a realizar despus de las 72 horas, es mejor congelarlas a - 40 C y transportarlas en congelacin.

Material necesario para la recogida de muestras:

Una ficha de historia clnica. Debe colocarse en el exterior de la caja en sobre cerrado. Se deben incluir los siguientes datos:

Nombre y direccin del propietario Enfermedad sospechosa Pruebas solicitadas Especies animales en la explotacin y tiempo que llevan en la misma. Es muy importante sealar si ha habido alguna nueva incorporacin. Fecha de los primeros sntomas Distribucin de la enfermedad por la explotacin

Nmero de bajas y de animales con sintomatologa Tipo de alojamiento y sistema productivo Medicacin y vacunaciones administradas Lista de muestras remitidas

Una nevera de transporte de muestras con abundantes bolsas de refrigerante. Botes de cierre hermtico para la recogida de las muestras de rganos y tubos de vaco para la sangre.

Otro bote, tambin de cierre hermtico, para guardar los botes de las muestras.

Etiquetas y rotulador.

Si no se usaran tubos al vaco, se llevaran jeringas de 20 ml desechables con agujas cerdo.

apropiadas a la edad del

En caso de que el envo no se realice por carretera y tuvieran las muestras que ir como equipaje, se traspasaran de la nevera de transporte a cajas con aislante trmico y refrigeracin suficiente para el tiempo de viaje. La caja ser cerrada hermticamente, se colocar el cartel de Material Biolgico y se aadir la direccin del destinatario y del remitente. Siempre se debe informar de la llegada del material al destinatario con antelacin mediante llamada o fax indicando el medio de envo y la llegada prevista.

VI. INMUNIZACIN FRENTE AL VPPC

Muchos son los mtodos que se han utilizado para inmunizar frente al VPPC desde primeros de siglo, desde la serovacunacin a diferentes tipos de vacunas vivas e inactivadas han sido utilizados para combatir esta enfermedad en varios pases durante las ultimas dcadas, la utilizacin de las vacunas vivas atenuadas permitieron la eliminacin de la enfermedad de los pases de la actual unin europea entre los aos 1970 y 1980.

En la actualidad, las vacunas ms utilizadas en diferentes programas de erradicacin de la enfermedad son las vacunas vivas atenuadas, provenientes de las conocidas como CEPA CHINA y/o CEPA THINVERVAL. CEPA CHINA La conocida como cepa China es una cepa lapinizada denominada tambin como Cepa Suvac, C y K. Su origen es desconocido y segn varios autores podra tener cerca de 480 pases en conejo. La cepa, que se utiliza en la actualidad, no presenta virulencia residual siendo totalmente apatgena incluso en madres gestantes y lechones. Esta cepa fue muy utilizada en la pasada dcada en varios pases europeos con xito. Tiene una actuacin rpida por lo que adems de inducir inmunidad presenta interefencia viral con el virus patgeno. CEPA THIVERVAL Es una cepa de origen francs proveniente de una clonacin viral sobre la lnea celular PK 15. Es decir, esta adaptada y producida en cultivo celular. Se ha probado su inocuidad incluso en animales inmunosuprimidos, no presentando virulencia residual ni reversin a virulencia.

Con ambas cepas se confiere inmunidad contra el VPPC de forma rpida pudiendo los cerdos sobrevivir a una infeccin experimental incluso a los cinco das post inoculacin.

Para conseguir una buena inmunidad es absolutamente esencial inmunizar a los animales de forma adecuada, con las dosis correctas y sin concomitancia de virus patgenos pues, de los contrario, es muy fcil poder inducir animales portadores, sobre todo en hembras gestantes, que pueden trasmitir el virus virulento de forma horizontal y vertical. Se ha demostrado en multitud de ocasiones, que madres gestantes infectadas antes o inmediatamente posterior a la vacunacin, pueden parir camadas infectadas de forma persistente, que puede excretar virus patgeno durante meses sin mostrar signos de la enfermedad. Por ello, cuando se llega a este tipo de situaciones se tiene que mantener los programas de vacunacin por lo menos durante 3 aos. Adems, de este grave problema otro importante inconveniente que estas vacunas presenta, es que los anticuerpos inducidos por ellas no pueden ser diferenciados de los anticuerpos del virus virulento, no pudindose por tanto diferenciar los posibles animales enfermos o portadores de los vacunados sanos.

VACUNA DE SUBUNIDADES

Recientemente, se ha desarrollado una vacuna de subunidades formada exclusivamente por la protena gp 55 que induce inmunidad y proteccin a nivel experimental contra el VPPC. El gen de la gp 55 (E2) ha sido clonada y expresada mediante un sistema de baculovirus. Este sistema es muy eficaz para expresar protenas heterlogas en la lnea celular de insecto. La protena as producida e inoculada en cerdos experimentales ha producido anticuerpos neutralizantes capaces de proteger la infeccin con el virus virulento. Los anticuerpos al ser solamente inducidos por la gp 55 (E2), se pueden diferenciar de la infeccin del virus patgeno, ya que este ultimo, induce anticuerpos no solamente contra la gp 55 sino tambin contra la E- rns. En definitiva, la gp 55 (E2) induce inmunidad y se puede diferenciar de la enfermedad. Se sabe que dicha protena induce la produccin de anticuerpos neutralizantes que desempean un papel fundamental en la proteccin de los cerdos frente a la PPC. En condiciones normales los animales infectados no slo producen anticuerpos frente a la protena E2, sino tambin frente a otras protenas del virus como la E-rns. La presencia de anticuerpos frente a esta protena permitira distinguir a los animales vacunados con la vacuna marcada de aquellos infectados.

La informacin suministrada por las compaas productoras de las vacunas indicaban que estos productos inducan un aceptable nivel de inmunidad (proteccin frente a los signos clnicos de la enfermedad, reduccin de la diseminacin de virus de un animal a otro) despus de 20 das post-vacunacin. Sin embargo, existen dos situaciones de emergencia en las cuales el uso de las vacunas marcadas podra ser discutible:

La introduccin del virus de la PPC en una poblacin poco tiempo despus de haber sido vacunada (cuando la inmunidad podra an no ser completa).

La introduccin del virus de la PPC en una poblacin poco tiempo antes de la vacunacin (cuando los animales se encuentran an durante el periodo de incubacin de la enfermedad).

Ambas situaciones podran originar la persistencia del virus en estas poblaciones mediante formas crnicas o inaparentes de la enfermedad, de difcil deteccin. El riesgo es mayor an cuando se trata de lechones y en cerdas a los 60-80 das de gestacin. Para aclarar estos datos, la Comisin Europea decidi obtener informacin adicional para el potencial uso de las vacunas marcadas antes de conceder la autorizacin comercial para la UE. Para ello, durante el

primer semestre de 1999 se han llevado a cabo diferentes experiencias en los laboratorios nacionales de referencia de PPC de la UE con dos vacunas marcadas de PPC de los Laboratorios BAYER (BAYOVAC-CSF Marker) e INTERVET.

En forma de resumen, el uso de la vacuna marcada en casos de emergencia reducira la transmisin del virus dentro de una granja, y consecuentemente reducira el riesgo de transmisin de la enfermedad a otras granjas, especialmente en reas de alta densidad porcina. Sin embargo, debido a la aparicin de formas subclnicas de la enfermedad, la deteccin de focos secundarios dependera slo de los test discriminatorios. La sensibilidad y especificidad de estas tcnicas por lo tanto es crucial. La transmisin transplacental en condiciones de una vacunacin de emergencia no se pudo evitar en la mayora de las cerdas vacunadas. Debido a la aparicin de lechones positivos al virus de PPC, cada cerda debera ser analizada individualmente mediante los ELISAs discriminatorios despus de la vacunacin de emergencia, por lo que estos tests deberan ser de gran sensibilidad. Sin embargo, los resultados obtenidos con el ELISA no han sido muy sastifactorios con ndices de sensibilidad y especificidad bajos Sensibilidad 73,5% 94,1% Especificidad 91,8% 70,6%

CEDITEST CHEKIT

Estos resultados se resumen en los siguientes comentarios: Ceditest Marker: Si se emplea en una granja, se podra detectar una infeccin de PPC, aunque existe cierto riesgo de no detectar la infeccin en animales individuales. No se detectaran apenas falsos positivos. Chekit Marker: Aquellos animales positivos a BVD/BD resultaran como falsos positivos, siendo considerado por lo tanto como posible foco de PPC al no existir ningn test que permitiera diferenciar entre anticuerpos frente a PPC de aquellos especficos de BVD/BD una vez que los animales han sido vacunados con la vacuna marcada. En la actualidad la deteccin de una infeccin de PPC despus de la vacunacin depende completamente de los ELISAs discriminatorios, pero ambos tests no se pueden emplear para animales individuales, teniendo una sensibilidad y especificidad inferior a los ELISAs convencionales. Es necesaria la ecistencia de un test de confirmacin. Las limitaciones de los test discriminatorios representan la principal limitacin en el empleo de las vacunas marcadas.

Estas vacunas, una vez resuelto la falta de sensibilidad y especificidad de sus mtodos de diagnstico podran ser una importante alternativa en un futuro muy prximo para luchar contra esta enfermedad ya que resuelven el gran problema de poder diferenciar el animal vacunado del enfermo son especificas y seguras.

VII. PREVENCIN, CONTROL Y ERRADICACIN DE LA PPC .

PREVENCIN

Para la prevencin de la PPC debemos de recordar, que como se indicaba en el apartado de patogenia, el VPPC tiene una enorme capacidad de penetracin en los animales susceptibles pudiendo entrar por prcticamente todas las vas posibles. Por ello, la mejor solucin para que un pas este libre de la PPC es evitar la entrada del virus. Los factores a tener en cuenta segn sea un pas o un rea libre seran :

1.- PASES LIBRES DE PPC

Para los pases libres de PPC el control para evitar su penetracin debe estar bsicamente centrado en lo siguiente :

1.- No comprar porcinos vivos, ni carne fresca, ni productos elaborados con carne porcina no tratada, de ningn pas afectado.

2.- No importar de ningn pas afectado semen ni embriones porcinos.

Es importante recordar en este apartado que se considera pas libre de VPPC en aquellos pases o reas en las que no se ha detectado la enfermedad, no hay serologa positiva y no se ha vacunado al menos durante los 12 ltimos meses.

2.- REAS LIBRES DE PPC

Las reas libres de PPC de pases afectados debern aumentar sus medidas de bioseguridad para no ser infectadas, esto implica controlar de forma exhaustiva el movimiento de animales y los medios de transporte utilizados, para evitar que puedan venir de las zonas afectadas, as como informar bien a ganaderos y veterinarios de la zona, para que eviten utilizar los mismos circuitos de proveedores de piensos, tcnicos, etc. y sobre todo que sospechar rpidamente de cualquier animal que no coma para poder descartar que se trate de PPC.

CONTROL Y ERRADICACIN

El control de la enfermedad se puede llevar a cabo de diferentes maneras dependiendo del tamao del rea afectada, densidad porcina, el nivel cultural y social de la zona, las medidas de bioseguridad de la explotaciones, los medios econmicos y humanos disponibles, el mercado exterior del sector, etc, etc. En cualquier caso se lleva la poltica internacional de focalizacin, es decir establecer una zona de proteccin alrededor del foco de 3 Km. de radio, donde se prohibir el movimiento de animales hasta 30 das despus del sacrificio del ultimo foco, y otra zona de vigilancia de 10 Km de radio donde se efectuaran los controles clnicos y serologicos. Estas medidas de control pueden a su vez verse incrementadas con la utilizacin o no de vacunas.

La vacunacin para el control y posterior erradicacin de la enfermedad jugo un importantsimo papel en Europa en la dcada de los 70 y 80, realizndose campaas masivas de vacunacin con las cepas atenuadas, descritas en el apartado de vacuna, con el fin de ir eliminando progresivamente el virus y los animales portadores. En Chile se ha podido erradicar la PPC tambin utilizando un programa de vacunacin sistemtico y eliminacin de portadores.

En la actualidad, los pases que estn utilizando las vacunas disponibles comercialmente, dado que no es posible diferenciar los animales vacunados de los enfermos y/o portadores pierden el estatus de pas libre prohibindose las exportaciones por largos perodos de tiempo.

PUNTOS CRTICOS DE LA ERRADICACIN DE LA PPC CON VACUNACIN.

Los principales puntos crticos en los programas de control y erradicacin de PPC con vacunacin los resumimos a continuacin: Falta de Censo de Explotaciones y animales. Falta de control sanitario de los animales. Utilizacin de vacunas y programas de vacunacin inadecuados. Falta de un buen diagnstico y se detecta malla enfermedad, sobre todo de tipo crnico. Falta de Legislacin y educacin sanitaria. No eliminacin de los animales portadores.

Reposicin con animales mal vacunados. Transporte contaminado. Falta de Bioseguridad.

Cada uno de estos temas sern analizados en profundidad en el desarrollo de la charla en la Expoferia 2000.

BIBLIOGRAFIA Aynaud, J.M., Asso, J. La souche Lapinise dite chinoise du virus de la Peste porcine Classique. Rec. Med. Vet. Cxlvi 2, 119-139 (1970) Ezmanna, P.J. Molecular Biology of the virus. In Classical swine fever and related viral infectious. Martinus Nijhoff publising. Boston 1988. Felsenstein, . Pestivirus clasification. Martinus Nijhoff publising. Boston 1989. Hulst, M., Westra, D., Wenswoort, D., Moormann, R. Glycoprotein of Hog Cholera virus expressed in insect cells protects swine from H.C. J. Of Virol 67 (9) 5435-5442. 1993. Launais, M., Aynaud, J.M., Corthier, G. Hog Cholera virus: Active inmunization of piglets with the Thirverval strain in the presence and absence of calostral passive immunity. Vet. Microbiology. 3. 31-43. 1978. Lowings, P., Ibata, G., Needham, J., Paton D. Classical swine fever virus and evolution. J.Gen. Virology 77, 1311-1321. 1996 Mebus, C.A.; House, C.; Ruiz Gonzalvo, F.; Pineda, J.M.; Tapiador, J.; Pire, J.J.; Bergada, J.; Yedloutschnig, R.J.; Sahu, S.; Becerra, V. and Snchez-Vizcano, J.M.. Survival of foot-and-mouth disease, African swine fever, and hog cholera viruses in Spanish serrano cured hams and Iberian cured hams, shoulders and loins. Food Microbiology 10, 133-143. (1993) Ruggli, N., Tratschin, JD., Mittelholzer,C., Hofman,M. Nucleotide sequence of Classical swine fever virus strain Alford 187 and transcription of infectious RNA from stably cloninged full length cDNA. J. Virol. 70 (6) 3478-3487. 1996. Van Rijn, P., Van Gennip, H., Leendertse, C., Bruschke, C., Paton, D., Moormann, R., Van Oirschot. Subdivision of the Pestivirus Genus Based on Envelope Glycoprotein E2. Virology 237, 337-348. 1997. Weiland , E., Ahl, R., Stark, R., Weisland, F., Thiel, H. A second envelope glicoprotein mediate neutralization pf pestivirus, hog cholera virus. J. Virol. 66. 3677-3682. 1992.