ESTUDIO ECOMETRICO

ESTUDIO ECOMETRICO DEL AGAR ENDO Autores: Andrs Herrera Resumen Se realizo un estudio, el cual consisti en determinar la selectividad y productividad de un medio de cultivo por un mtodo de evaluacin Luisa Rebollo.2.

semicuantitativa como lo es el anlisis ecometrico. Se evalu el medio Endo para cultivar bacilos gram negativos (Klebsiella pneumoniae) actuando como

microorganismo referente y microorganismo control y cocos gram positivos (Staphylococcus aureus) como microorganismo interferente. Se sembraron veinte lineas con un valor de 0,2 y una con un valor de 1 en una caja SPC (Estndar de conteo en caja, con agar TSA) para evaluar la prueba control, una caja de agar Endo para la prueba de interferencia y una caja de agar Endo para la prueba de referencia con un valor mximo de 5 para determinar los parmetros del ICA y el ICR. Palabras claves: Selectividad. Productividad. Microorganismo referente.

Microorganismo interferente. Prueba control. Introduccin En 1904, Endo describi el desarrollo de un medio de cultivo para diferenciar entre microorganismos fermentantes y no fermentantes de la lactosa (Endo, 1904). La frmula original se ha modificado ampliamente desde su introduccin (Levin, et.al, 1930). _________________________________________________________________ Pontificia Universidad Javeriana, Carrera 7 No. 40-62, Bogot, Colombia.
1

edgar.herrera@javeriana.edu.co

Autor

para

correspondencia.

Pontifcia

Universidad Javeriana, Bogot.

2

l.rebollo@javeriana.edu.co Autor para correspondencia. Pontifcia Universidad

Javeriana, Bogot.

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Durante aos el agar Endo ha sido un importante medio para el examen microbiolgico del agua potable y residual, los productos lcteos y los alimentos; no obstante, el compendio actual de mtodos estndar para analizar estos elementos recomienda las formulaciones de otros medios (Marshall, 1992); (Vanderzan et.al, 1992); (Eaton, et.al, 1995). El medio se utiliza an en microbiologa clnica y en otros sectores para el aislamiento y la diferenciacin de la familia Enterobacteriaceae (Bockemhl, 1992). La selectividad del agar Endo se debe a la combinacin del sulfito de sodio con fucsina bsica, lo cual ocasiona la supresin parcial de los microorganismos gram-positivos. Los coliformes fermentan la lactosa, produciendo colonias color rosa oscuro a rojizo con un brillo metlico verdoso iridiscente y una coloracin similar en el medio. Las colonias de microorganismos que no fermentan la lactosa son incoloras o de color rosa plido en contraste con el fondo rosa claro del medio (Becton, 2009). El anlisis ecometrico establece la eficiencia con la cual un medio de cultivo sirve para recuperar una cepa mediante la comparacin que realiza entre un microorganismo que crece fcilmente en el medio referente y un microorganismo que no crece en el mismo medio interferente. Esta tcnica evala tanto la sensibilidad de los medios a la colonizacin por los microorganismos buscados (productividad) como tambin la resistencia a la colonizacin por las cepas que interfieren (selectividad). Un parmetro til para interpretar los resultados ecomtricos es el ndice de crecimiento absoluto (ICA). ste denota el ltimo sector de la placa en el cual ha habido un crecimiento significativo. Otro parmetro es el ndice de crecimiento relativo (ICR) que relaciona los valores de ICA del medio a evaluar con el ICA del medio control (Villalobos et.al, 2007). El anlisis ecometrico permite establecer qu porcentaje de recuperacin se puede obtener de un microorganismo en un medio de cultivo. Este anlisis permite evaluar la capacidad microbicida/microstatica de desinfectantes, antispticos y

quimioteraputicos (PUJ, 2011).

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Materiales y Mtodos Para realizar este estudio se obtuvieron tres cajas de las cuales una fue destinada como prueba control (caja SPC, con agar TSA) y dos como pruebas de referencia e interferencia (cajas de agar Endo). Previamente a la siembra se le realizaron tinciones a cada una de las muestras para verificar que estas cepas fueran respectivamente bacilos gram negativos y cocos gram positivos, luego se utilizo una cepa del bacilo gram negativo Klebsiella neumoniaee y otra cepa del coco gram positivo Staphylococcus aureus diluidos en una concentracin del factor de Mac Farland, basados en la turbidez producida por el cloruro de bario con el acido sulfhdrico, equivalente 0,5 es decir 1,5x 10l8 ufc /ml como microorganismo control, referente e interferente los cuales fueron sembrados en los agares SPC y Endo. Las cajas de los agares se dividieron en cuatro cuadrantes en donde en cada cuadrante se trazaron 20 lneas de crecimiento con una valoracin de 0,2 y una lnea que se trazo desde el centro de la caja con un valor de 1, para un valor mximo de 5; con estos valores se calcularon los ndices de crecimiento absoluto (ICA) e ndices de crecimiento relativo. Se rotularon las cajas y se mandaron a incubar a 37C por un intervalo de 24 a 48 horas. Al terminar la incubacin se trasladaron al laboratorio y se finalizo el estudio con la lectura e interpretacin de los resultados. Resultados Pruebas microbiolgicas y anlisis ecometrico Se observo crecimiento de K. pneumoniae en el medio de cultivo TSA (prueba control) fue positivo, con un ICA = 5. El crecimiento de K. pneumoniae en el medio de cultivo Endo (prueba referente) fue positivo, con un ICA = 4,4. El crecimiento de S. aureus en el medio de cultivo Endo (prueba interferente) fue negativo, con un ICA = 0. Al relacionar el ICA de la prueba control con el ICA de la prueba referente se obtuvo el valor del ICR para este medio el cual fue igual a 0,88 0,9. Los resultados se analizan bajo los criterios de selectividad, productividad y control e ICR.

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Las colonias de K. pneumonie que crecieron se visualizaron con las siguientes caractersticas: colonias blancas de textura cremosa, superficie lisa brillante de borde liso. Discusin Selectividad La selectividad es la capacidad que tiene el medio para inhibir el crecimiento de una poblacin no deseada y por eso se valora en la caja con medio Endo donde se cultivo el microorganismo interferente (S. aureus). A mayor inhibicin menor debe ser el ICA de la caja. Considerando que los valores del ICA deben seguir los siguientes estndares: ICA = 2 el medio es bajamente selectivo; ICA = 1 1,9 el medio es medianamente selectivo e ICA < 1 el medio es altamente selectivo (PUJ, 2011). Para nuestro estudio el ICA del interferente fue igual a 0, por lo tanto se considera que el agar Endo utilizado es altamente selectivo y est calificado para salir al mercado. Productividad La productividad es la capacidad que tiene un microorganismo de crecer en un medio adecuado para su desarrollo y por eso se valora en la caja con medio Endo donde se cultivo el microorganismo referente (K. pneumoniae). A mayor

crecimiento mayor produccin o recuperacin de microorganismos en el medio. Considerando que los valores del ICA deben seguir los siguientes estndares: ICA = 2,5 el medio es bajamente productivo; ICA = 2,5 - 4 el medio es medianamente productiva e ICA > 4 el medio es altamente productivo (PUJ, 2011). Para nuestro estudio el ICA del referente fue igual a 4,4, por lo tanto se considera que el agar Endo utilizado es altamente productivo y est calificado para salir al mercado. Control de la Prueba e ndice de Crecimiento Relativo (ICR) El control se efecta en la caja con medio TSA; es un medio enriquecido en donde se siembra el microorganismo referente (K. pneumoniae). Su objetivo es determinar que el microorganismo no tiene ningn problema de crecimiento y por

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lo tanto da validez a la prueba. El ICA del referente debe ser parecido al ICA control. El ICR valora la capacidad que tiene el medio selectivo para recuperar la flora en una muestra determinada y su valor debe ser de 0,95 a 1, es decir, la prueba solo tiene validez si existe por lo menos un crecimiento del 95 100% del microorganismo (PUJ, 2011). El resultado del ICR = 0,88 0,9 demuestra que por lo menos hubo un crecimiento del 90% del microorganismo validando la prueba. La buena calidad del lote del medio Endo utilizado, el buen manejo de los medios y de las tcnicas de sembrado permiti tener xito en el anlisis ecometrico del presente estudio. Literatura Citada Becton, Dickinson and Company. 2009. Instrucciones de uso medio en placas listo para su uso. www.bd.com/resource.aspx?IDX=8766., citado el 10 de agosto de 2011. Bockemhl, J. 1992. Enterobacteriaceae. In: Burkhardt, F. (ed.). Mikrobiologische Diagnostik. Thieme Verlag. Stuttgart, New York. Endo, S. 1904. ber ein Verfahren zum Nachweis der Typhusbacillen. Centr. f. Bakt. 35:109-110. Eaton, A.D., L.S. Clesceri, and A.E. Greenberg (ed.). 1995. Standard methods for the examination of water and wastewater, 19th ed. American Public Health Association, Washington, D.C. Levin, M., and H.W. Schoenlein. 1930. A compilation of culture media for the cultivation of microorganisms. The Williams & Wilkins Company, Baltimore. Marshall, R.T. (ed.). 1992. Standard methods for the examination of dairy products, 16th ed. American Public Health Association, Washington, D.C. Pontificia Universidad Javeriana; Facultad de Ciencias; Departamento de Microbiologa; Bacteriologa. 2011. Gua de laboratorio # 1: Estudio ecometrico. Bogot Colombia.

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Vanderzant, C., and D.F. Splittstoesser (ed.). 1992. Compendium of methods for the microbiological examination of foods, 3rd ed. American Public Health Association, Washington, D.C. Villalobos, A; Caldern, L; Figueroa, C; Fierro, J; Otlora, G; lvarez, R; Quevedo Hidalgo, B; Mercado-Reyes, M; Huertas-Valero, M; Trespalacios - Rangel, A. 2007. Evaluacin por mtodo ecomtrico de agar obtenido de algas rojas colombianas. Universitas Scientiarum, Vol. 12, Nm. III, julio-diciembre, pp. 57-65. Pontificia Universidad Javeriana. Bogot Colombia.