Clulas natural killer e vigilncia imunolgica

Mariana Jobim I; Luiz F. J. JobimII Mestre, Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS), Porto Alegre, RS. Mdica, Servio de Imunologia, Hospital de Clnicas de Porto Alegre (HCPA), Porto Alegre, RS II Doutor. Professor associado, Faculdade de Medicina, UFRGS, Porto Alegre, RS. Chefe, Servio de Imunologia, HCPA, Porto Alegre, RS Correspondncia
I

RESUMO OBJETIVOS: Analisar a importncia das clulas natural killer, de seus receptores killer immunoglobulinlike receptors e correspondentes genes (KIR) na vigilncia imunolgica do organismo contra agentes infecciosos, transplantes de clulas tronco hematopoiticas, assim como sua participao na auto imunidade. As caractersticas e o polimorfismo dos genes e receptores KIR na populao brasileira sero descritos. FONTES DOS DADOS: Livros, artigos de reviso e artigos cientficos recentes so citados e listados na bibliografia. A experincia pessoal tambm apresentada. SNTESE DOS DADOS: Identificamos o perfil de genes e hapltipos KIR na populao caucaside brasileira, sendo de importncia esse conhecimento para a anlise da relao desse sistema com doenas. Examinamos 116 indivduos doadores voluntrios de medula ssea, identificandose 32 gentipos e a presena de 51 e 49% de hapltipos A e B, respectivamente. Foi realizado estudo comparativo entre os nossos gentipos e os de outras populaes. CONCLUSES: A imunidade inata uma barreira antiinfecciosa de importncia em pediatria. Ela atua de maneira independente da imunidade celular e humoral, sendo mais rpida que as demais fontes de proteo do organismo. Ao mesmo tempo, ela estimula os linfcitos T CD8 a agirem e amplificarem a rede de proteo imunolgica. Entretanto, como na maioria das vezes em que a imunidade atua, ela tambm pode ser prejudicial, agredindo o organismo por mecanismos autoimunes ou mesmo, na sua ausncia, oferecer espao aos agentes infecciosos para agirem de forma impune. Palavraschave: KIR genes, natural killer cells, KIR genotypes in Brazilian caucasoids.

Introduo

O sistema imunolgico uma rede de componentes celulares e humorais com funo de discriminar o "prprio do no prprio", procurando eliminar os agentes infecciosos, as clulas tumorais e as transplantadas. As clulas natural killers (NK) so importantes nessa vigilncia imunolgica. Fazem parte da imunidade inata e correspondem a cerca de 10 a 20% dos linfcitos circulantes. Morfologicamente, so maiores do que os linfcitos T e B, apresentando citoplasma granular e marcadores de superfcie CD16 e CD56. Diferem funcionalmente dos integrantes da imunidade adaptativa por reagirem de maneira rpida, talvez em poucas horas, durante a invaso do organismo por vrus e bactrias. Ao contrrio, os linfcitos T podem levar dias at ini ciarem a resposta imune efetiva, embora apresentem muito em comum com as clulas NK, especialmente pela presena de marcadores de superfcie, funo efetora citotxica por intermdio de secreo de citoquinas, perforinas, granzimas, interferon (INF ) e relao estreita com as clulas dendrticas (CD). As clulas NK apresentam algumas diferenas, como a ausncia do receptor de clula T, molcula central da resposta imunolgica do linfcito T que necessita de experincia tmica para ganhar a circulao e mostrar efetividade na vigilncia do organismo 1. As clulas NK so timoindependentes, e os pacientes com ausncia das NK sofrem de infeces virais persistentes, particularmente de vrus do tipo herpes. Nessa situao, esses agentes s podem ser eliminados com a ao de drogas antivirais, embora apresentem resposta imune adaptativa2. As clulas NK, quando isoladas do sangue, podem destruir alguns tipos de clulasalvo. Esse nvel basal aumenta de 20 a 100 vezes pela exposio ao interferon (INF ), interferon (INF ) e IL12 produzidos por macrfagos em resposta aos agentes virais. Essas linfocinas podem ativar as NK a destrurem os agentes infecciosos imediatamente ou agirem quando os linfcitos T CD8 iniciem sua ao. O INF e o INF favorecem os efeitos citotxicos das NK, enquanto a IL12 estimula a produo de citocinas, entre elas o INF , criando um processo de reativao positiva que ativa ambas as clulas no tecido infectado. Dessa maneira, as clulas NK so preponderantes no incio da infeco no que tange produo de INF , ativando os macrfagos a secretarem linfocinas que iniciam a resposta imune adaptativa com a chegada dos linfcitos T. Quando estes assumem suas funes, as clulas NK podem diminuir a sua funo pela produo de IL10 por parte dos linfcitos T 2. As clulas NK apresentam diversos receptores de superfcie, tambm presentes em alguns linfcitos T e responsveis pela identificao de agentes infecciosos e de clulas transformadas. A participao nesse processo de molculas de classe I do complexo principal de histocompatibilidade, em especial as molculas do sistema HLA (antgeno leucocitrio humano), foi fundamental para o entendimento da funo da clula NK 3. Essas mesmas molculas HLA tambm so de grande importncia no reconhecimento antignico por parte dos linfcitos T, entretanto de maneira diversa do que acontece nas NK. Os linfcitos T reconhecem os peptdeos antignicos que

emergem na superfcie das molculas HLA por intermdio dos receptores das clulas T (TCR), sendo que, a partir desse momento, acontece a ativao linfocitria com produo de linfocinas e sinais estimulatrios para outras clulas do sistema imunolgico. J as clulas NK reconhecem as clulas infectadas, transformadas ou transplantadas pela "ausncia ou presena" das molculas HLA em sua superfcie. Dessa maneira, devemos compreender o sistema HLA como assistente de dois importantes "mestres" na defesa e vigilncia imunolgica: a clula NK da resposta imune inata e o linfcito citoltico T da resposta imune adaptativa. Nesse momento, devemos mencionar a hiptese da "perda de expresso do prprio" (missing self), ou seja, da diminuio da expresso ou mesmo da ausncia de molculas HLA em clulas infectadas, em clulas tumorais ou mesmo em clulas transplantadas com HLA estranho ou diferente, para que as clulas NK sejam ativadas e se tornem agressivas e potencialmente destruidoras4,5. Dessa maneira, a vigilncia imunolgica por parte das clulas NK depende da apropriada e especfica concentrao de molculas HLA na superfcie de outras clulasalvo. Por outro lado, as clulas normais do organismo que apresentam nveis normais de molculas HLA em sua superfcie so reconhecidas pelas NK que geram um sinal inibidor, prevenindo a destruio das mesmas 6. Hoje aceitamos que as clulas NK podem ser ativadas e se tornarem citotxicas tambm pela expresso exagerada de ligantes para receptores de ativao na superfcie da clula alvo5. Dessa maneira, a vigilncia imunolgica pode ser realizada pelas NK, tanto pela expresso diminuda ou ausente de molculas HLA nas clulasalvo quanto por distrbio do equilbrio entre sinais ativadores e inibitrios mediados por receptores existentes nas clulas NK e conhecidos como killer immunoglobulinlike receptors (KIR). Essas molculas proticas de importncia na destruio de clulas anormais so a expresso de um grupo de genes identificados como genes KIR. A imunidade inata e as clulas NK so de grande importncia em pediatria. Muitas doenas infecciosas so combatidas efetivamente enquanto o sistema imune adaptativo ainda no estiver definitivamente desenvolvido. Em certas doenas que se apresentam com regulao anormal da expresso HLA na superfcie celular como infeces virais e tumores a falta de sinal inibidor, alm de prevenir a inibio propriamente dita, permite a ativao das clulas NK7,8. Por outro lado, existem doenas autoimunes que so influenciadas pela ativao e inibio das clulas NK, assim como pacientes podem ser protegidos por esse sistema inato aps um transplante de medula ssea (TMO) para tratamento de leucemia (Figura 1).

Nomenclatura e polimorfismo dos receptores e genes KIR

As clulas NK circulam no sangue em um estado praticamente ativado, preparadas para entrar no tecido infectado quando os macrfagos soarem o alarme. Para manter as NK nesse estado, existe um sistema de receptores que liberam sinais de ativao ou de inibio 8. A nomenclatura dos receptores das clulas NK est baseada na sua estrutura protica extra e intracelular (Figura 2). Essas molculas apresentamse semelhantes s imunoglobulinas com dois ou trs domnios extracelulares (2D e 3D) usados para ligaremse a determinantes polimrficos do sistema HLAA, B e C, uma poro transmembrana (TM) e uma cauda intracitoplasmtica (CIT), que pode ser curta (S ou short) e longa (L ou long). Os nomes usados para os KIR e as seqncias de seus respectivos genes e alelos podem ser acessados no banco de dados KIR (http://www.ebi.ac.uk/ipd/kir)9.

As pores CIT e TM predizem a atividade funcional. As com caudas curtas (S) so ativadoras, e as longas (L) so inibidoras (excetuandose o KIR2DL4). As molculas com cauda longa apresentam um ou dois imunorreceptores com caractersticas inibitrias baseadas em tirosina (ITIM). Em contraste, os receptores de cauda curta (S) no possuem ITIM, mas sim um aminocido positivamente carregado na poro TM, que permite associao com a molcula acessria, DAP12, liberando um sinal ativador por intermdio de imunorreceptores ativadores baseados em tirosina (ITAM). Logo, um receptor como o KIR2DS1 significa ser uma molcula composta de dois domnios extracelulares e uma nica cauda CIT "curta e ativadora". A famlia de genes KIR consiste de quinze genes (KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR2DL4, KIR2DL5A, KIR2DL5B, KIR2DS1, KIR2DS2, KIR2DS3, KIR2DS4, KIR2DS5, KIR3DL1, KIR3DL2, KIR3DL3 e KIR3DS1), assim como dois pseudogenes (KIR2DP1 e KIR3DP1), localizados numa regio cerca de 150 Kb do complexo de receptores leucocitrios (LCR) no cromossomo 19q13.4. Os genes KIR apresentam grande similaridade molecular entre si e so derivados de um gene ancestral por uma srie de duplicaes, recombinaes e mutaes. A estrutura bsica dos genes KIR de uma unidade de nove xons que representa o gene ancestral10. Mais de 100 gentipos diferentes foram encontrados em estudo de colaborao internacional 10. Encontramos 32 gentipos em 116 indivduos caucasides brasileiros, sendo que os dois mais comuns apresentaram a freqncia de 24 e 13,80% (Figura 3).

Esses mesmos gentipos foram tambm os mais prevalentes no estudo colaborativo 11.

Os genes KIR so herdados em bloco ou em hap ltipos, assim como os genes HLA. Embora exista um grande nmero de hapltipos KIR, alguns so mais prevalentes, entre eles os hapltipos A e o B (Figura 4). O hapltipo A apresenta sete locos e tem como caracterstica uma maior expresso de genes ou receptores inibitrios. Ele definese pela presena de KIR2DL1, KIR, KIR, KIR, KIR e KIR. O nico receptor estimulatrio no hapltipo A o KIR2DS4. No hapltipo B, existem inmeras combinaes de KIR, KIR, KIR, KIR, KIR e KIR. O hapltipo B possui mais genes ativadores, sendo definido pela presena do KIR2DL2 e ausncia do KIR3DL1 e KIR2DL3 12,13. Os genes KIR e KIR esto presentes em ambos hapltipos, sendo chamados de genes estruturais ou de "moldura" (framework). Em alguns hapltipos, podemos observar a falta de algum gene "moldura"14.

Estudos sugerem que a reatividade da clula NK contra outras clulas do organismo no acontece em situao normal. Dessa maneira, as clulas NK que no expressam receptores inibitrios que reconheceriam HLA prprios so pouco responsivas e relativamente tolerantes com as clulas autlogas14. A expresso KIR restrita s clulas NK e a algumas clulas T, conhecidas como NKT.

Receptores ligantes das clulas NK

Os ligantes para os receptores KIR so as molculas HLA de classe I (HLAA, B e C). Os receptores KIRD2DL2, KIRD2DL3 e KIRD2DS3 reconhecem algumas das molculas HLAC, identificadas como pertencentes ao grupo 1 (HLA C1). Em contrapartida, os receptores KIR2DL1 e KIR2DS1 reconhecem o grupo 2 (HLAC2). Os grupos 1 e 2 so distinguidos por um dimorfismo na posio 80 na hlice 1 da molcula HLA C15. As duas formas so caracterizadas pela presena de Ser77/Asn80 e Asn77/Lys80, existindo certa hierarquia na interao do KIR com molculas HLAC, sendo a ligao KIR2DL1C2 mais forte do que a KIR2DL3C1 (Tabela 1). Em um TMO, as clulas NK do doador que expressam somente receptores para o grupo C2 podem lisar clulasalvo homozigotas do grupo C1 do paciente. O mesmo pode acontecer caso o doador seja homozigoto para o C2 e o receptor homozigoto para C1. O loco HLAB pode ser dividido em dois grupos: Bw4 e Bw6. O KIR3DL1 interage com molculas HLAB quando sorologicamente forem Bw4, sendo que, se essas apresentarem isoleucina (Ile) na posio 80, acontece a maior inibio de lise mediada pela clula NK. No se conhecem interaes de alta afinidade com molculas Bw616. A molcula KIR2DL4 ligase com HLAG, tipo no clssico de HLA, com pouco polimorfismo e expresso em clulas endoteliais do timo, de trofoblastos fetais e crnea. As clulas NK em repouso podem ser estimuladas a produzir citoquinas e quimiocinas por HLA G solvel. O KIR2DL4 um gene estrutural ou de "moldura" presente em quase todos os indivduos, entretanto no se expressa em cerca de 50% das pessoas, sugerindo que esse gene pode estar sujeito a algum tipo de seleo. Dessa maneira, se assumirmos que a interao KIR2DL4HLAG fisiologicamente relevante, possvel tambm supor que a presena de alelos que no se expressam

seja decorrente de algum tipo de desvantagem em alguma circunstncia.

Identificao laboratorial dos genes KIR

As amostras de sangue para estudo de polimorfismo dos genes KIR em nossa populao foram colhidas e o DNA extrado usando o procedimento de saltingout17. As amostras de DNA foram avaliadas usando o mtodo de reao em cadeia da polimerase com primers especficos (PCRSSP) para 15 genes KIR (Figura 5).

A seqncia dos primers para a PCR foi baseada em publi caes anteriores18. A amplificao do DNA foi realizada no instrumento Gene Amp PCR 9700 (ABI, EUA). Os produtos de amplificao foram visualizados por intermdio de um transiluminador com luz ultravioleta, aps eletroforese em gel de agarose a 1%, contendo brometo de etdio. A tipagem dos genes KIR por oligonucleotdios de sequncia especfica (PCRSSO) foi realizada com os reagentes LabtypeSSO (TeppnelEUA). A genotipagem dos alelos do sistema HLACw foi tambm realizada usando a tcnica de PCRSSP 19. A comparao dos resultados obtidos pelos dois mtodos (PCR SSO e PCRSSP) foi realizada pela anlise de 116 indivduos caucasides, doadores voluntrios de medula ssea (controles). Os resultados foram absolutamente idnticos, no se observando diferenas entre os dois mtodos.

Comparao entre o polimorfismo dos genes KIR em controles caucaside brasileiros com outras populaes
As populaes caucasides brasileira, inglesa e argentina apresentam freqncias semelhantes dos genes KIR2025. Diferenas significativas existem em populaes indgenas da

Argentina e Mxico, quando comparadas com caucasides. Em especial, no gene ativador KIR2DS3, pois ou no apresentam esse alelo, ou o exibem em baixa freqncia, acompanhando algumas populaes orientais (chineses e japoneses). O mesmo KIR2DS3 apresenta freqncia intermediria em populaes caucasides, em contraste com os 81% observados entre aborgenes australianos (Tabela 2). Diferenas existem em relao a outras populaes, demonstrando o polimorfismo gentico existente para esses marcadores e antecipando diferenas de resposta imune inata entre populaes. Os hapltipos A e B esto distribudos com semelhana em caucasides12,13. Examinamos 116 indivduos caucasides brasileiros doadores voluntrios de medula ssea, encontrando se 51 e 49% de hapltipos A e B, respectivamente. Um aspecto de interesse a diferena entre a freqncia de hapltipos entre algumas populaes. Como exemplo, podemos apontar a presena do hapltipo A em cerca de 75% dos japoneses, chineses Han e coreanos e em somente 13% nos aborgines australianos2426.

KIR e doenas
A diversidade de freqncias dos hapltipos KIR e HLA em certas populaes indicanos que alguns indivduos devem apresentar nveis diferentes de proteo contra algumas doenas. A anlise de mRNA e expresso de protenas demonstram que cada clone de clula NK de um indivduo no expressa todo o conjunto de genes KIR identificados em seu genoma, mas uma combinao randmica dos mesmos. Dessa maneira, cada indivduo possui um repertrio de diversas clulas NK com expresso varivel de molculas KIR em sua superfcie27. Alguns autores propem um modelo de classificao das combinaes KIR/HLA em termos de previso de tendncia ativadora e inibidora das clulas NK 28,29. Em um extremo do espectro, esto os hapltipos AA, com a sua tendncia inibidora, enquanto na outra ponta esto os hapltipos BB, com s ua herana de tendncia ativao. Os gentipos com receptores inibitrios e falta de ligantes HLA predizem aumento de ativao, com poucas clulas NK sobre controle de inibio. Esse modelo parece ser vlido para anlise de risco de doena, mas necessitamos de maiores evidncias de sua existncia. Por outro lado, qualquer modelo que se desejar organizar para o entendimento das relaes dos gentipos KIR/HLA deve levar em considerao que alguns indivduos apresentam variantes truncadas de KIR2DS4 e KIR2DL4 no hapltipo A, no expressando molculas KIR ativadoras na superfcie de suas clulas NK. Mesmo assim, aparentemente tm imunidade inata normal. De acordo com esses estudos, a hiptese de que ao menos um receptor estimulatrio deva existir passa a no ser aplicvel para as clulas NK. Alm disso, as NK que no expressam receptores inibidores que reconheam o HLA prprio

(self) aparentemente so pouco responsivas e relativamente tolerantes s clulas autlogas. O mecanismo responsvel por esse efeito no conhecido, entretanto importante assinalar que os receptores inibitrios que reconhecerem o HLA existente em suas clulas podem ter um papel positivo na maturao da clula NK, dando licena para matar30. Em resumo, o balano entre inibio e ativao faz com que a clula NK possa auxiliar o organismo na vigilncia imunolgica natural, mesmo antes da participao da imunidade adquirida. Os agentes infecciosos so eliminados ou parcialmente destrudos pela ao das clulas NK. Alm disso, outras patologias existem onde esse sistema tem igual importncia, como certas doenas autoimunes, tumorais, preclmpsia e abortos espontneos recorrentes. Existem sugestes de que KIR ativadores possam reconhecer molculas HLA de classe I que contenham peptdeos relacionados com algumas patologias ou mesmo outros tipos de ligantes que servem para identificar clulas anormais.

HIV
A imunidade adaptativa e inata tem importncia em diversos estgios da infeco pelo HIV, inclusive em sua progresso. Elas so positivamente importantes na defesa contra a infeco aguda, podendo inclusive limitar a progresso da doena. As clulas NK podem lisar, in vitro, clulasalvo infectadas com HIV, sendo que defeitos na funo das clul as NK levam progresso da doena. conhecido que o HIV diminui a expresso do HLA, e isso faz com que as clulas NK fiquem ativadas para lise das clulasalvo. Entretanto, tambm de conhecimento que o vrus diminui a expresso das molculas HLAA e B, mas pode manter a expresso do HLAC, auxiliando a evaso do reconhecimento pelas NK 31. A anlise dos alelos HLAB em indivduos infectados demonstrou que a presena de homozigose para o HLABw4, ligante do KIR3DL1 e supostamente do KIR3DS1, est associada com um declnio lento da contagem de linfcitos T CD4+, clula que possibilita conhecer a progresso da infeco32. Alm disso, a anlise de mais de 1.000 indivduos infectados com HIV demonstrou que aqueles com o gentipo KIR3DS1 e um subtipo do alelo HLABw4 que apresenta Ile na posio 80 da cadeia pesada (Bw4Ile80) progridem mais lentamente do que aqueles nos quais a combinao KIR/HLA ativadora est ausente. Na realidade, o KIR3DS1 na ausncia do especfico Bw4 no protetor, necessitando o sinergismo entre as duas molculas para a obteno do efeito benfico. De toda maneira, a presena de um programa ativador das NK parece ser benfica em limitar ou atrasar o incio da doena. sugerido que o receptor da clula NK (KIR3DS1) interage com o HLAB Bw4 Ile80 que contm peptdeos do HIV, ativando as clulas NK para a eliminao da clula infectada. Na mesma populao de pacientes infectados, foi observado que a associao

KIR3DS1/Bw4Ile80 apresentava risco retardado de infeces oportunsticas 33. Vrios estudos tentam encontrar os motivos para que algumas profissionais do sexo no se tornem soropositivas. Embora no se tenha resposta adequada, parece claro que a imunogentica, traduzida na habilidade do bloqueio da entrada do HIV e respectiva soroconverso, no deve ser a mesma que realiza o controle da progresso da doena. No estudo realizado em Abidjan, Cote d'Ivoire demonstrou que as profissionais expostas e soronegativas apresentavam freqentemente genes KIR inibidores na ausncia de seus genes HLA cognatos, estimulando a ativao da clula NK com correspondente proteo progresso da doena. As mulheres expostas e soronegativas possuam tambm, com maior freqncia, gentipos KIR com mais receptores ativadores34.

Hepatite C
Os indivduos com vrus da hepatite C (HCV) so 170 milhes e podem ficar curados ou cronicamente infectados. Esses ltimos apresentam anticorpos antiHCV e o prprio RNA do HCV circulantes, podendo desenvolver cirrose e hepatoma. Os pacientes considerados curados so os que deixam de apresentar o genoma viral na circulao por dois anos. Teoricamente, existe a hiptese de que uma resposta da imunidade inata pelas clulas NK possa estimular a maturao das clulas dendrticas. Estas, por sua vez, ativariam a resposta imune adaptativa por parte de linfcitos T com efetivo ataque contra clulas infectadas com HCV. Ficou demonstrado que o grupo que obteve resoluo de seu estado infeccioso tinha alta freqncia de homozigose para o HLAC do grupo 1 e tambm homozigose para o KIR2DL 3. A afinidade de ligao desse alelo pelo HLAC menor do que a do KIR2DL2 ou do KIR2DL1 para seus ligantes. Esses achados implicam um efeito benfico da inibio, permitindo maior possibilidade de estimulao por receptores ativadores. Os pacientes com menor inoculao de vrus so tambm beneficiados com essa combinao de homozigose28. Os resultados acima incentivam o pensamento da existncia de um modelo quantitativo de programao das clulas NK de acordo com diferenas funcionais entre heterozigose e homozigose, tanto para os genes KIR como para os seus ligantes HLA. O aumento da inibio favorece a ativao e pode trazer benefcio ao paciente.

A importncia das clulas NK no transplante de medula ssea

A reatividade imunolgica aps o TMO importante. Para diminuir a possibilidade de rejeio, realizase a mieloablao, ou seja, a destruio da medula ssea do paciente por

quimioterapia. Esse procedimento possibilita a destruio do tecido linfide do paciente, de suas clulas tumorais leucmicas e permite espao para a medula transplantada. A doena enxerto contra hospedeiro (GVHD) esperada em grande parte dos casos, sendo ocasionada pelos linfcitos T CD8 do doador que agridem especialmente o intestino, a pele e o fgado do paciente. Ela acontece aps uma "tempestade" de linfocinas decorrentes da destruio mieloablativa, dependendo tambm da disparidade HLA entre doador e receptor. Dessa maneira, o ideal seria transplantarmos pacientes com medula ssea depletada de linfcitos T, diminuindo o ris co de GVHD e uma discreta incompatibilidade HLA de classe I. Essa pequena disparidade ou aloreatividade serve para estimularmos as clulas NK e linfcitos T CD8 do doador a realizarem uma varredura na medula ssea do paciente, eliminando clulas leucmicas remanescentes (GVL) e tecido medular residual. Entre as vantagens da discreta aloreatividade, citamos a recuperao imunolgica mais rpida, a reduo de recidivas e a diminuio da quimioterapia mieloablativa 35. Nos transplantes sem depleo linfocitria do enxerto, a presena de KIR ativador no doador promove reatividade imunolgica, ao passo que, no receptor, induz tolerncia. Um aumento da GVHD aguda foi identificado com doador KIR2DS3 em transplantes com doador no relacionado, mas HLA idntico e em casos em que o doador tinha mais de quatro KIR ativadores em transplantes haploidnticos. Com intuito de simplificar as anlises de efetividade, autores agruparam os pacientes em hapltipos A e B, sendo que os primeiros tm mais genes KIR inibidores, e os segundos, mais ativadores, assim como para observar se os ligantes HLAC1 e C2 tambm serviriam para avaliar a melhor compatibilidade KIRHLA nos TMO em pacientes com leucemia35. Em relao aos hapltipos A e B, examinaram a relao doadorreceptor, sendo que o grupo homozigoto AA (com maior nmero de genes inibidores) foi considerado quando somente genes do grupo A estavam presentes. Todos os demais indivduos tinham um ou mais genes especficos dos hapltipos B. Esses poderiam ser heterozigotos AB ou ho mozigotos BB, apresentando sempre genes KIR estimuladores. Aproximadamente 28 e 30% dos doadores e receptores, respectivamente, apresentaram o hapltipo AA, sendo que os demais tinham, no mnimo, um hapltipo B. A anlise de sobrevida de 202 pacientes mostrou uma discreta e no significante tendncia a menor sobrevida dos pacientes AA recebendo enxertos BX. Entretanto, em 113 pacientes com leucemia mielide, um efeito benfico foi demonstrado quando pacientes BX recebiam enxertos de doadores AA. Ao contrri o, a sobrevida foi 3,8 vezes pior nos pacientes AA que receberam enxertos de BX (p = 0,046). Sendo assim, hapltipos B (mais genes estimuladores) no doador so prejudiciais nesse tipo de transplante, sendo que sua presena no receptor pode ser benfica. Esses achados foram analisados e demonstraram independncia em relao idade do paciente e ao estgio da doena36.

A combinao de doador BX com receptor AA foi considerada fator de risco para a recidiva da doena (leucemia mielide) e para a GVHD aguda grau IIIV. Em 112 pacientes transplantados, a incidncia de GVHD aguda foi de 46% em receptores AA com doadores BX; 10% para receptores AA com doadores AA; 20% para receptores BX com doadores AA; e 30% para receptores e doadores BX. Os ligantes mais dominantes para os receptores KIR so as molculas de HLAC. A diferena entre os ligantes C1 e C2 que C2 produz uma inibio mais forte do que C1. Dessa maneira, o mesmo estudo dividiu os pacientes transplantados de acordo com os dois grupos nos quais os rec eptores e seus doadores HLA idnticos eram C2; receptores sem alelos pertencentes a C2 foram considerados C1 homozigotos (C1C1); receptores com alelos para C2, incluindo C2 homozigotos, foram denominados C2CX. Surpreendentemente, a combinao de doador BX e receptor AA foi identificada como fator de risco para GVHD aguda somente em transplantes C1C1, e no em C2CX. Quando foi examinada somente a relao do tipo de HLA C, existiu uma leve tendncia de fator de risco para GVHD em casos de C1C1, ao contrrio de C2C2. Em resumo, a melhor sobrevida de transplantados por leucemia mielide est associada com a presena KIR do grupo B no receptor e sua falta no doador. A pior sobrevida acontece quando o doador tem o grupo B, e o receptor no. Essa ltima combinao est tambm associada com aumento de recidiva e de GVHD aguda. Entretanto, esses efeitos deletrios foram vistos somente quando doador e receptor so homozigotos para o ligante KIRC1.

Autoimunidade
Diversos mecanismos tentam explicar a participao das clulas NK na autoimunidade, entre eles, encontramos que os gentipos KIR/HLA que fazem a sintonia em favor da ativao podem ser vantajosos, tanto na eliminao de patgenos como na predisposio autoimunidade. A inapropriada ativao ou a falta de inibio podem ser responsveis pela funo patognica. A esclerose sistmica progressiva uma doena com fibrose tecidual, inflamao e injria vascular, sendo estatisticamente significante a presena do KIR2DS1 e ou KIR2DS2, ativadores da clula NK37, Um interessante exemplo desse efeito tambm encontrado na artrite psoritica, onde o KIR2DS1 e/ou KIR2DS2 tornamse um risco para a doena quando os receptores inibidores KIR2DL1 e KIR2DL2/3 estiverem ausentes. Uma recente proposta sugere um modelo de susceptibilidade para essa doena pela presena de homozigose para ligantes HLAC, minimizando sinais inibidores e conferindo forte ativao 38. Um cenrio semelhante foi identificado para a vasculite reumatide, na qual o risco est associado com a presena do KIR2DS2. De maneira semelhante, a diabetes tipo I est

associada com aumento do KIR2DS2/HLA ligantes na presena de interaes inibitrias. Os autores sugerem um modelo onde a funo KIR seja secundria, promovendo mais ativao de baixa afinidade para os linfcitos T responsveis pela auto imunidade39. A psorase vulgar (PV) uma doena crnica e inflamatria da pele, cuja patognese e influncia gentica permanecem pouco esclarecidas. Estudos sugerem uma associao entre essa patologia com os receptores KIR2DS1 e com o HLAC0602, sendo que os indivduos que apresentam esse ltimo alelo tm 10 vezes mais chances de vir a ter PV. Em relao ao gene ativador KIR2DS1, diversas publicaes identificaram no estatisticamente mais prevalente nos pacientes em comparao com os controles40. Na populao caucaside brasileira analisada recentemente, encontramos o alelo Cw0602 em 26,5% dos pacientes com PV, contra somente 5,4% dos controles (p < 0,001), no entan to o KIR2DS1 no alcanou significncia estatstica. Outros estudos pretendem demonstrar que a PV uma doena na qual esses receptores KIR ativadores esto presentes na ausncia de seus ligantes HLA homlogos. Dessa maneira, a PV decorrente, alm de outros fatores ambientais, de um balano de gentipos ativadores e inibidores, com predominncia dos ativadores37.

Concluses
A inteno desse artigo transmitir conhecimentos atuais sobre a imunidade inata e sua relao com a vigilncia imunolgica dos pacientes. A importncia para a pediatria pode ser antecipada nos pacientes prematuros, recmnascidos e para todos que no tenham desenvolvido uma imunidade adquirida slida. As clulas NK, seus receptores e genes fazem parte da manuteno da sade, especialmente nessa poca da vida, quando a imunidade adquirida ainda no efetiva. Esse conjunto de genes e receptores so parceiros dos pediatras, quando preferem esperar a recuperao, antes de lanar mo de antibiticos precocemente no incio de uma infeco. durante esse perodo de espera da recuperao que os mecanismos inatos participam e, na maioria das vezes, conseguem vencer os agentes infecciosos. No decorrer dessa reviso, podemos encontrar as bases imunogenticas da existncia desse sistema identificado como de importncia na preveno infecciosa, assim como a freqncia de seus genes e hapltipos na populao caucaside brasileira.

Agradecimentos
Aos cientistas e funcionrios do Servio de Imunologia do Hospital de Clnicas de Porto Alegre.

Referncias

1. Parham P. Taking license with natural killer cell maturation and repertoire development. Immunol Rev. 2006;214:155 60. [ Links ] 2. Parham P. The body's defenses against infection. In: Parham P, editors. The imune system. New York: Garland Science; 2005. p. 2526. [ Links ] 3. Vilches C, Parham P. KIR: diverse, rapidly evolving receptors of innate and adaptative immunity. Annu Rev Immunol. 2002;20:21751. [ Links ] 4. Ljunggren HG, Pbo S, Cochet M, Kling G, Kourilsky P, Krre K. Molecular analysis of H2 deficient lymphoma lines. Distinct defects in biosynthesis and association of MHC class I heavy chains and beta 2microglobulin observed in cells with increased sensitivity to NK cell lysis. J Immunol. 1989;142:2911 7. [ Links ] 5. Ljunggren HG, Karre K. In search of the "missing self": MHC molecules and NK cell recognition. Immunol Today. 1990;11:23744. [ Links ] 6. Boyton RJ, Altmann DM. Natural killer cells, killer immunoglobulinlike receptors and human leucocyte antigen class I in disease. Clin Exp Immunol. 2007;149:1 8. [ Links ] 7. DegliEsposti MA, Smyth MJ. Close encounters of different kinds: dendritic cells and NK cells take centre stage. Nat Rev Immunol. 2005;5:11224. [ Links ] 8. O'Connor GM, Hart OM, Gardiner CM. Putting the natural killer cell in its place. Immunology. 2006;117:1 10. [ Links ] 9. The Immuno Polimorphism Database. KIR database. http://www.ebi.ac.uk/ipd/kir [ Links ] 10. Andr P, Biassoni R, Colonna M, Cosman D, Lanier LL, Long EO, et al. New nomenclature for MHC receptors. Nat Immunol. 2001;2:661. [ Links ] 11. Cook MA, Norman PJ, Curran MD, Maxwell LD, Briggs DC, Middleton D, et al. A multilaboratory characterization of the KIR genotypes of 10th International Histocompatibility Workshop cell lines. Hum Immunol. 2003;64:567 71. [ Links ] 12. Hsu KC, Chida S, Geragthty DE, Dupont, B. Killer cell immunoglobulinlike receptor (KIR) genomic region: gene order, haplotypes and allelic polymorphism. Immunol Rev. 2002;190:4052. [ Links ] 13. Hsu KC, Liu XR, Selvakumar A, Mickelson E, O'Reilly RJ, Dupont B. Killer Iglike receptor haplotype analysis by gene content: evidence for genomic diversity with a minimum of six

basic framework haplotypes, each with multiple subsets. J Immunol. 2002;169:5118 29. [ Links ] 14. Shilling HG, Guethlein LA, Cheng NW, Gardiner CM, Rodriguez R, Tyan D, et al. Allelic polymorphism synergizes with variable gene content to individualize human KIR genotype. J Immunol. 2002;168:239 47. [ Links ] 15. Biassoni R, Falco M, Cambiaggi A, Costa P, Verdiani S, Pende D, et al. Amino acid substitutions can influence the natural killer (NK)mediated recognition of HLAC molecules. Role of serine77 and lysine80 in the target cell protection from lysis mediated by "group2" or "group 1"NK clones. J Exp Med. 1995;182:605 9. [ Links ] 16. Cella M, Longo A, Ferrara GB, Strominger JL, Colonna M. NK3specific natural killer cells are selectively inhibited by Bw4 positive HLA alleles with isoleucina 80. J Exp Med. 1994;180:1235 42. [ Links ] 17. Miller SA, Dykes DD, Pol esky HF. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells. Nucleic Acids Res. 1988;16:1215. [ Links ] 18. GomezLozano N, Vilches C. Genotyping of human killercell immunoglobulinlike receptor genes by polymerase chain reaction with sequencespecific primers: an update. Tissue Antigens. 2002:59:184 93. [ Links ] 19. Bunce M, O'Neill CM, Barnardo MC, Krausa P, Browning MJ, Morris PJ, et al. Phototyping: comprehensive DNA typing for HLAA, B, C, DRB1, DRB3, DRB4, DRB5 & DQB1 by PCR with 144 primers mixes utilizing sequencespecific primers (PCR SSP). Tissue Antigens. 1995;46:35567. [ Links ] 20. Contreras G, Alez C, Murgua A, Garcia D, Flores H, Gorodezky C. Distribution of the killer cell immunoglobulin like receptors in Mexican Mestizos. Tissue Antigens. 2007;69 Suppl 1:1259. [ Links ] 21. Flores, AC, Marcos CY, Paladino N, Capucchio M, Theiler G, Arruvito L, et al. KIR genes polymorphism in Argentinean Caucasoid and Amerindian populations. Tissue Antigens. 2007:56876. [ Links ] 22. GutirrezRodrguez ME, SandovalRamrez L, DazFlores M, Marsh SG, ValladaresSalgado A, Madrigal JA, et al. KIR gene in ethnic and mestizo population from Mexico. Hum Immunol. 2006,67:8593 [ Links ] 23. Norman PJ, Stephens HA, Verity DH, Chandanayingyong D, Vaughan RW. Distribution of natural killer cell immunoglobulin like receptor sequences in three ethnics groups. Immunogenetics. 2001;52:195205. [ Links ]

24. Jiang K, Zhu FM, Lv QF, Yan LX. Distribution of killer cell immunoglobulinlike receptor genes in the Chinese Han population. Tissue Antigens. 2005;65:556 63. [ Links ] 25. Yawata M, Yawata N, McQueen KL, Cheng NW, Guethlein LA, Rajalingam R, et al. Predominance of group A KIR haplotypes in Japanese associated with diverse NK cell repertoires of KIR expression. Immunogenetics. 2002;54:543 50. [ Links ] 26. Toneva M, Lepage V, Lafay G, Dulphy N, Busson M, Lester S, et al. Genomic diversity of natural killer cell receptor genes in three populations. Tissue Antigens. 2001;57:358 62. [ Links ] 27. Valiante NM, Uhrberg M, Shilling HG, LienertWeidenbach K, Arnett KL, D'Andrea A, et al. Functionally and structurally distinct NK cell receptor repertoires in the peripheral blood of two human donors. Immunity. 1997;7:739 51. [ Links ] 28. Khakoo SI, Carrington M. KIR and disease: a model system or system of models. Immunol Rev. 2006;214:186 201. [ Links ] 29. Williams AP, Bateman AR, Khakoo, SI. Hanging in the balance: KIR and their role in disease. Mol Interv. 2005;5:226 40. [ Links ] 30. Kim S, PoursineLaurent J, Truscott SM, Lybarger L, Song YJ, Yang L, et al. Licensing of natural killer cells by host major histocompatibility complex class I molecules. Nature. 2005;436:70913. [ Links ] 31. FloresVillanueva PO, Yunis EJ, Delgado JC, Vittinghoff E, Buchbinder S, Leung JY, et al. Control of HIV1 viremia and protection from AIDS are associated with HLABw4 homozygosity. Proc Natl Acad Sci USA. 2001;98:5140 5. [ Links ] 32. Martin MP, Gao X, Lee JH, Nelson GW, Detels R, Goedert JJ, et al. Epistatic interaction between KIR3DS1 and HLA B delays the progression to AIDS. Nat Genet. 2002;31:429 34. [ Links ] 33. Jennes W, Verheyden S, Demanet C, AdjTour C, Vuylsteke B, Nkengasong JN, et al. Cutting edge: resistance to HIV1 infection among African female sex workers is associated with inhibitory KIR in the absence of their HLA ligands. J Immunol. 2006;177:6588 92. [ Links ] 34. Ruggeri L, Capanni M, Urbani E, Perruccio K, Shlomchik WD , Tosti A, et al. Effectiveness of donor natural killer cell alloreactivity in mismatched hematopoietic transplants. Science. 2002;295:2097 100. [ Links ] 35. McQueen KL, Dorighi KM, Guethlein LA, Wong R, Sanjanwala B, Parham P. Donorrecipient combinations of group A and B KIR haplotypes and HLA class I ligand affect the outcome of

HLAmatched, sibling donor hematopoietic cell transplantation. Hum Immunol. 2007;68:309 23. [ Links ] 36. Momot T, Koch S, Hunzelmann N, Krieg T, Ulbricht K, Schmidt RE, et al. Association of killer cell immunoglobulin like receptors with scleroderma. Arthritis Rheum. 2004;50:15615. [ Links ] 37. Pellett F, Siannis F, Vukin I, Urowitz MB, Gladman D. KIRs and autoimmune disease: studies in systemic lupus erythematosus and scleroderma. Tissue Antigens. 2007; 69: 106108. [ Links ] 38. Nelson GW, Martin MP, Gladman D, Wade J, Trowsdale J, Carrington M. Cutting edge: heterozygote advantage in autoimmune disease: hierarchy of protection/susceptibility conferred by HLA and killer Iglike receptor combinations in psoriatic arthritis. J Immunol. 2004;173:4273 6. [ Links ] 39. van der Slik AR, Alizadeh BZ, Koeleman BP, Roep BO, Giphart MJ. Modelling KIRHLA genotype disparities in type I diabetes. Tissue Antigens. 2007;69:101 5. [ Links ] 40. Bashirova AA, Martin MP, McVicar DW, Carrington M. The killer immunoglobulinlike receptor gene cluster: tuning the genome for defense. Annu Rev Genomics Hum Genet. 2006;7:277300. [ Links ]