UNIVERSIDADE CIDADE DE SO PAULO PR-REITORIA ADJUNTA DE PESQUISA E PS-GRADUAO PROGRAMA INSTITUCIONAL DE BOLSAS DE INICIAO CIENTFICA - PIBIC

TTULO DO PROJETO DE PESQUISA

PROFESSOR ORIENTADOR: Eduardo Achar

ANLISE COMPARATIVA DO TRATAMENTO COM INSULINA TPICA EM DIFERENTES CONCENTRAES SOBRE A CICATRIZAO DE FERIDAS EM RATOS DIABTICOS E NO DIABTICOS E ANALISE DO EFEITO SISTEMICO NA GLICEMIA.

ALUNO: THIAGO COUTO SILVA

CURSO: MEDICINA

So Paulo 2010

TRABALHO DE PESQUISA ANLISE COMPARATIVA DO TRATAMENTO COM INSULINA TPICA EM DIFERENTES CONCENTRAES SOBRE A CICATRIZAO DE FERIDAS EM RATOS DIABTICOS E NO DIABTICOS. __________________________________________________________________ CARACTERIZAO DO PROBLEMA (mximo de duas pginas) __________________________________________________________________ O diabetes melitus um distrbio metablico crnico e complexo caracterizado pelo comprometimento do metabolismo da glicose e de outras substncias produtoras de energia, que levam ao surgimento de hiperglicemia, associada a uma variedade de complicaes em rgos essenciais para manuteno da homeostase.(1) Estima-se que, globalmente, sua prevalncia seja em torno de 120 milhes de indivduos. A anlise atravs de projees estima que, entre 1995 e 2025, o nmero de indivduos diabticos crescer em 42% nos pases industrializados e 170% nos pases em desenvolvimento.(2) No Brasil estima-se que 3% da populao seja portadora de algum tipo de leso crnica, e que cerca 2,7% dos brasileiros apresente ulceras crnicas nos ps e/ou nas pernas, o que representa a segunda causa de afastamento do trabalho no Brasil. Essa porcentagem maior nos diabticos chegando a 10%(3). A etiologia das lceras de p diabtico geralmente possui muitos componentes. Um recente estudo multicntrico atribuiu que, 63% das lceras do p diabtico causada pela trade crtica de neuropatia sensorial perifrica, trauma, deformidade. Outros fatores so: a isquemia, ulcerao, formao de calos e edema. (4) Mais de 100 fatores fisiolgicos conhecidos, contribuem para a deficincia na cicatrizao de feridas em indivduos com diabetes. Estes incluem a diminuio da produo ou dificuldade de produo do fator de crescimento, a resposta angiognica, a funo dos macrfagos, o acmulo de colgeno, funo de barreira da epiderme, a quantidade de tecido de granulao, a quantidade de queratincitos e migrao e proliferao de fibroblastos, nmero de nervos epidrmicos, a cicatrizao ssea e o equilbrio entre o acmulo de componentes

do meio extra celular (MEC) e sua remodelao por metaloproteinases de matriz (MMPs), a cicatrizao ocorre como uma resposta celular leso e envolve a ativao dos queratincitos, fibroblastos, clulas endoteliais, macrfagos e plaquetas. Muitos fatores de crescimento e citocinas liberadas por esses tipos de clulas so necessrios para coordenar e manter a cicatrizao.(5). Estudos evidenciaram que a insulina exerce um papel na cicatrizao de feridas. Uma dose de 20 unidades de insulina U-80, foi utilizada em ensaios clnicos, demonstrando ser uma dose adequada para promover a cicatrizao de ferimentos diversos, tais como lceras de presso e lceras crnicas em coto de amputao, sem hipoglicemia sistmica. (6) Um estudo para determinar a eficcia da insulina tpica na cicatrizao de feridas em 41 ratos diabticos e no diabticos foi realizado. Os resultados mostraram que tratamentos que incluam insulina tpica, obtiveram melhores taxas de cicatrizao. A cicatrizao foi melhor nos dois grupos. (7) Outro estudo realizado em coelhos com injeo local de longa durao da suspenso de insulina-zinco, acelerou a cicatrizao de feridas cutneas sem grandes efeitos colaterais sistmicos, demonstrando a sua utilidade potencial no tratamento de feridas. (8) Em outro experimento, seis voluntrios humanos diabticos e cinco nodiabticos, tiveram dois cortes uniformes criados, um em cada brao. Uma feri da no brao foi tratada com insulina regular tpica e outra com soro fisiolgico quatro vezes por dia at a cura. Os ferimentos tratados com insulina cicatrizaram mais rapidamente do que as feridas tratadas com soluo salina.(9). Outro estudo constatou que aps a perfuso de insulina em feridas, as amostras de sangue que foram obtidas confirmaram que a insulina tem um potente efeito anti-inflamatrio agudo, incluindo uma reduo fator nuclear kappa B (NF-kB), um aumento em Inibidor kappa B (Ikb), e diminuio da formao de Especies de Oxigenio Reativo (EOR), p47phox subunidade, plasma solveis ICAM-1 (sICAM-1), moncitos chemoattractant protein-1 (MCP-1) e inibio do ativador do plasminognio-1 (PAI-1). (10)

__________________________________________________________________ Explanao concisa, na qual so estabelecidas sucintamente a caracterizao do problema, sua pertinncia e relevncia.

OBJETIVOS (uma pgina) __________________________________________________________________ Anlise da glicemia dos ratos com tratamento de cicatrizao com insulina tpica.

__________________________________________________________________ Objetivo tudo aquilo relativo ao projeto, o fim a atingir, o alvo proposto.

PROCEDIMENTO(S) METODOLGICO(S) (uma pgina) __________________________________________________________________ A pesquisa ser desenvolvida nas instalaes da Universidade Cidade de So Paulo UNICID , sendo previamente autorizada pela Comisso de tica na Utilizao de Animais (CEUA) da referida instituio. Para o experimento sero utilizados 36 ratos da linhagem Wistar (Ratus norvegicus albinus), machos, pesando entre 250 e 300g, provenientes do biotrio da UNICID, sendo estes divididos em 6 grupos: Grupo 1: diabtico tratado com insulina creme 20UI/g Grupo 2: diabtico tratado com insulina creme 30UI/g Grupo 3: diabtico sem tratamento Grupo 4 : no diabtico tratado com insulina creme 20UI/g Grupo 5 : no diabtico tratado com insulina creme 30UI/g Grupo 6 : no diabtico sem tratamento Nos grupos 1,2 e 3 ser induzida a diabete por injeo endovenosa de aloxana (5,6 Dioxiuracil monohidrato) diluda em soluo aquosa a 2 %, na dose nica de 42 mg/kg de peso corporal o protocolo. Aps anestesia geral com injeo intraperitoneal de Cloridrato de ketamina (75 mg/kg, Vetbrands, Jacare, Brasil) e Xilazina (10 mg/kg, Vetbrands), a regio dorsal dos animais ser depilada , a seguir, ser realizada a anti-sepsia de toda a rea com digluconato de clorexidina a 2% e, com auxlio de um punch sero removidas duas outra. Os animais dos grupos 1 e 4 tero uma das feridas tratadas com creme de insulina 20UI/g e os animais dos grupos 2 e 5 tero uma das feridas tratadas com creme de insulina 30UI/g, os animais dos grupos 3 e 6 tero suas feridas tratadas com creme base sem insulina. Uma vez por semana ser feita a mensurao da glicemia de jejum e da glicosria de um animal de cada grupo, escolhido aleatoriamente. Os dados resultantes sero tratados estatisticamente por anlise de varincia e pelos testes t e Kruskal-Wallis com grau de significncia de 95%. reas circulares de pele, de aproximadamente 10 mm de dimetro, na regio dorsal do animal, e com cerca de 5 cm de distncia uma da

__________________________________________________________________ Deve ser descrita de forma clara, detalhada e exaustiva, de acordo com o encadeamento lgico das atividades a serem desenvolvidas / deve ficar claro como sero implementadas as diferentes estratgias para atingir os objetivos.

RESULTADOS E IMPACTOS ESPERADOS (uma pgina) __________________________________________________________________ Nosso estudo se prope a relatar com detalhes todos os procedimentos e intervenes realizadas e incluir em sua discusso a anlise das intercorrncias, avaliando a eficcia e a segurana da aplicao de insulina tpica como terapia adjuvante ao tratamento multidisciplinar convencional do p diabtico. Os trabalhos encontrados sobre o uso tpico de insulina no geral so antigos e no h uma descrio detalhada dos aspectos metodolgicos. Optou-se por utilizar ratos neste estudo devido possibilidade de um maior nmero na amostragem por grupo e facilitao da verificao de resultados em curto perodo resultante do metabolismo acelerado destes em comparao a outros animais. Porm, as concluses extradas deste estudo podero ser utilizadas como base em novas pesquisas que visem demonstrar se h benefcio significativo em relao cicatrizao da lcera, reduo do tamanho da ferida ou reduo do risco de amputao menor, e alteraes sistmicas da glicemia. So resultados esperados nos grupos tratados com insulina para a cicatrizao das lceras em ratos diabticos: a) Controlar o risco de infeco. b) Manuteno dos nveis de glicemia c) Manter o estado de sade. d) Evitar amputaes.

__________________________________________________________________ Ao final de um trabalho cientfico espera-se um impacto cientfico e/ou tecnolgico, mas importante no perder de vista o impacto social.

CRONOGRAMA DE EXECUO (uma pgina) __________________________________________________________________ 1) Recepo e alojamento dos animais distribudos em 4 grupos 2) Acomodao e adaptao por 1 semana. 3) Jejum dos animais por 12 horas, com fornecimento normal de gua. 4) Separao dos animais que recebero a induo de diabetes com aloxana. 5) Retorno dos demais animais a dieta alimentar normal. 6) Colocao dos animais que recebero a injeo de aloxana em caixa aquecida com lmpada eltrica, durante um perodo de aproximadamente 10 minutos; Inoculao da droga. 7) Aps 30 minutos os animais so alimentados normalmente. 8) Acompanhamento laboratorial de glicemia e glicosuria (duas avaliaes 7 e 14 dias aps a induo). 9) Separao dos animais considerados diabticos graves representadas por glicemia de jejum acima de 200 mg/dl, glicosria positiva (+++). 10) Tratamento de todos os animais com rao comercial e gua ad libitum por 3 meses com avaliao quinzenal da glicemia. 11) Jejum de 12 horas. 12) Anestesia geral dos animais. 13) Realizao dos procedimentos cirrgicos. 14) Medio diria das reas em processo de cicatrizao. 15)Mensurao semanal de glicemia e glicosuria de um animal por grupo. 16)Tratamento dirio de uma das feridas com creme e a outra com soluo salina, sendo que nos grupos 1, 2, 4 e 5 o creme ter em sua composio a presena de insulina e nos grupos 3 e 6 o creme no apresentar insulina em sua composio. 17) Eutansia de um animal de cada grupo no 4, 7 , 14 e 21 dias aps a leso e retiradas as amostras. 18) Exame histolgico das amostras. 19) Eutansia de todos os animais.

__________________________________________________________________ Deve ser detalhado e coerente com o encadeamento lgico das atividades e guardar estreita relao com o que foi descrito na metodologia / sua durao a mesma da bolsa do aluno 12 meses.

REFERNCIAS (uma pgina) __________________________________________________________________ 1. BENNETT J.C, PLUM F. CECIL Tratado de Medicina Interna. 20ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan; 1997.p.1391-1413. 2. BRASILEIRO, J. L; OLIVEIRA, W. T. P.; MONTEIRO, L. B.; CHEN, J.; PINHO Jr. E. L; MOLKENTHIN, S; SANTOS, M. A. P diabtico: aspectos clnicos / Diabetic foot: clinical aspects. J. vasc. bras; 4(1):11-21, 2005. 3. MANDELBAUM, Samuel Henrique; DI SANTIS, rico Pampado; MANDELBAUM, Maria Helena Sant'Ana. Cicatrizao: conceitos atuais e recursos auxiliares - Parte I. An. Bras. Dermatol., Rio de Janeiro, v. 78, n. 4, Aug. 2003 . 4. FRYKBERG RG. Diabetic foot ulcers: pathogenesis and management. Am. Fam. Physician. 1;66(9):1655-62, 2002. 5. BREM, H; TOMIC-CANIC M; Cellular and molecular basis of wound healing in diabetes. Journal of Clinical Investigations 117:5, 2007. 6. WILSON J. M; BAINES R; BABU ED; KELLEY C.J. A role for topical insulin in the management problematic surgical wounds. Ann. R. Coll. Surg Engl. 90(2):160, 2008. 7. HANAM S.R; SINGLETON C.E; RUDEK W. The effect of topical insulin on infected cutaneous ulcerations in diabetic and nondiabetic mice. J. Foot Surg. 22(4):298-301, 1983. 8. ZHANG X.J; WU X; WOLF S.E; HAWKINS H.K; CHINKES D.L; WOLFE R.R. Local insulin-zinc injection accelerates skin donor site wound healing. J. Surg. Res. ;142(1):90-6, 2007. 9. GREENWAY S.E; FILLER L.E; GREENWAY F.L. Topical insulin in wound healing: a randomised, double-blind, placebo-controlled trial. J. Wound Care. ;8(10):526-8, 1999. 10. DADONA P; ALJADA A; MOHANTY P, GHANIM H; HAMOUDA W; ASSIAN E; AHMAD S. Insulin Inhibits Intranuclear Nuclear Factor B and Stimulates I B in Mononuclear Cells in Obese Subjects: Evidence for an Anti-inflammatory Effect? J. Clin. Endocrinol. Metab. 86: 3257 3265, 2001.

_____________________________ Norma da ABNT mais atual.