[Aislamiento y Titulacin de Bacterifagos a partir de Aguas Residuales] 15 de abril de 2011

Aislamiento y Titulacin de Bacterifagos de E. coli a partir de Aguas Residuales

Apunte, K. Ortega, H. Salvador, C. Departamento de Ciencias de la Vida. Carrera de Ingeniera en Biotecnologa. Escuela Superior Politcnica del Ejrcito. Sangolqu. Ecuador.

INTRODUCCIN Generalmente los virus estn asociados con infecciones, enfermedades, pandemias y otros efectos negativos tanto para el ser humano como para el resto de organismos vivos a los que toman como husped. No obstante, sin ellos el planeta podra ser incluso un lugar sin vida [1]. La mayor parte de los virus son bacterifagos y tienen la capacidad de infectar y lisar bacterias. Estos bacterifagos son entes biolgicos importantes ya que estn involucrados en procesos importantes como la homeostasis de las comunidades microbianas as como en el control de las poblaciones bacterianas [2][3]. Un fago es ante todo un parsito bacteriano que puede persistir por s mismo pero es incapaz de desarrollarse y reproducirse fuera de una bacteria. Los genes presentes en los fagos codifican para una diversidad de protenas, sin embargo todos ellos necesitan de la maquinaria de su clula husped como ribosomas, factores para sntesis de protenas y sistemas de produccin de energa para poder replicarse. En otras palabras, un fago slo puede crecer en una bacteria metablicamente activa [4]. Dentro de este grupo se encuentran los colifagos que utilizan E. coli y otras especies emparentadas como hospedadores. Estos colfagos se encuentran presentes en cantidades bajas en las heces humanas y en animales homeotrmicos, pero estn en nmero elevado en aguas residuales, por lo que su presencia se asocia con contaminacin fecal [5][6]. Estudios anteriores dedicados al anlisis de aguas residuales presentan evidencia de que los coliformes fecales y sus relacionados no son buenos indicadores biolgicos de contaminacin fecal en las aguas, no as los colfagos que han sido considerados indicadores eficientes de contaminacin ya que son ms resistentes a mtodos para el procesamiento de agua y las pruebas de identificacin son ms fciles y menos costosas [6]. Uno de los mtodos ms comunes y utilizados para la cuantificacin de bacterifagos es el recuento de Unidades Formadoras de Placa (UFP). Este mtodo se basa en la deteccin macroscpica del ciclo ltico de un fago. Cuando se siembra un nmero suficiente de bacterias sobre la superficie de una caja de agar nutritivo, stos forman una capa uniforme despus de algunas horas de incubacin, pero si estas bacterias se ponen en contacto con fagos, stos pueden desencadenar un ciclo ltico. Cada fago presente en la muestra infecta una bacteria, se multiplica y libera varios centenares de fagos nuevos. Estos virus recin liberados infectan a las bacterias vecinas, de tal manera que despus
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de varios ciclos, todas las bacterias de la zona que rodea al virus original estarn lisadas. Resultado de esto se pueden ver pequeos aclaramientos o placas sobre la superficie de la capa bacteriana, donde cada placa, en teora representa un nico virus de la suspensin inicial. Dado que el nmero de placas es directamente proporcional al nmero de fagos, este mtodo es de utilidad para la deteccin y cuantificacin de fagos en una muestra especfica [4][7]. El presente trabajo tiene como objetivo determinar la presencia de colfagos en una muestra de agua residual adems aislar y cuantificar dichos fagos por el mtodo de formacin de placas. Para esto se utilizar una muestra de agua proveniente de una quebrada ubicada al noroeste de la ciudad de Quito y se analizar la presencia de colfagos en el Laboratorio de Microbiologa de la ESPE. MATERIALES Y MTODOS RESULTADOS Despus de la incubacin por 24h de las muestras a las diluciones 10-2, 10-3 y 10-4 con E. coli se obtuvieron los resultados que se detallan en la Tabla 1.

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