Bacterifagos

Los virus son molculas de DNA o RNA rodeadas por una envoltura proteica que necesitan clulas viables para poder replicarse. Los virus utilizan la maquinaria metablica de las clulas para sintetizar su material gentico y protenas de la envoltura. Existen distintos tipos de virus que pueden infectar clulas procariontes o clulas eucariontes. Los bacterifagos o fagos son virus que se reproducen en clulas procariontes. El genoma de los fagos puede ser RNA simple cadena (MS2, Q), RNA doble cadena (phi 6), DNA simple cadena (phi X174, fd, M13) o DNA doble cadena (T3, T7, lambda , T5, Mu, T2, T4). Estos cidos nucleicos pueden contener bases inusuales que son sintetizadas por protenas del fago. En los T-pares el genoma no contiene citosina sino 5'- hidroximetilcitosina, mientras que en otros tipos de fago alguna de las bases esta parcialmente sustituida. Bacterifago T4

Replicacin del Bacterifago T4

Esquema del Ciclo de Replicacin Bacterifago T4

El ciclo de replicacin de un bacterifago T4 se puede dividir esquemticamente en distintas etapas, las que son comunes a otros virus bacterianos y eucariticos. 1. 2. 3. 4. 5. Adsorcin Inyeccin del material gentico viral Replicacin del material gentico viral Sntesis de las envolturas proteicas Empaquetamiento del DNA dentro de la envoltura proteica y ensamblaje de la envoltura 6. Lisis y liberacin de las partculas viral Adsorcin: El virus se fija o adsorbe a componentes de la superficie celular que actan como receptores especficos. La zona de adsorcin del virus es complementaria al receptor celular, por lo tanto un determinado virus slo puede infectar un nmero limitado de cepas celulares que contengan a un determinado receptor. La naturaleza de la zona de adsorcin vara con el tipo de fago. En el T4 se localiza en el extremo de la cola, en donde se encuentran la placa basal, las espculas y las fibras de la cola.

Esquema de los principales eventos en la adsorcin del bacterifago T4 a la pared celular de la bacteria E. coli.(a) el fago libre muestra las fibras y las espculas de la cola. (b)Adhesin de las fibras de la cola. (c) El fago se acerca a la pared celular y las espculas entran en contacto con la pared celular. Inyeccin del material gentico viral: Despus de la adsorcin, se produce un cambio configuracional en las protenas de la placa basal, alguna de las cuales tienen actividad enzimtica y producen un poro en la membrana citoplasmtica de la clula. La vaina del fago se contrae y el material gentico viral ingresa en la clula, mientras que la envoltura proteica queda en el exterior.

Esquema del mecanismo de penetracin del material gentico del fago T4 o T2 a travs de la pared celular de la bacteria. (a) Las espculas del fago entran en contacto con la pared celular y la vaina se encuentra extendida. (b) La vaina de la cola se contrae y el material gentico del fago penetra la pared celular; la lisozima presente en el fago digiere la porcin de pared celular localizada directamente bajo la partcula viral. Replicacin del material gentico viral: El material gentico viral que ingresa en una clula contiene bases modificadas que evitan la degradacin por nucleasas bacterianas. Esta modificacin consiste en la glicosilacin y/o metilacin de algunas determinadas bases. En el caso del fago T4 se glucosilla la base 5'hidroximetilcitosina. Para lograr una efectiva replicacin del genoma viral se deben sintetizar algunas protenas ni bien el material gentico ingresa en la clula. Estas protenas tempranas reparan el poro de la membrana citoplasmtica por donde ingres el genoma viral, degradan el DNA bacteriano lo que proporciona una fuente de precursores, evita la sntesis de RNA y protenas bacterianas, y proporciona ribosomas para la sntesis de protenas del fago. Adems algunas de estas protenas tempranas participan en la sntesis de las bases inusuales. La forma de replicacin del genoma viral es dependiente del tipo de material gentico (si es RNA o DNA, si es simple o doble cadena). En el caso del fago T4, las molculas replicadas se aparean en los extremos y formando una molcula de DNA ms larga denominada concatmero. Despus una enzima corta esta larga molcula lineal en molculas ms pequeas de igual longitud. Las molculas de DNA del T4 tienen se caracterizan por estar permutadas circularmente (el DNA del T4 es lineal) de esta forma todas las molculas de DNA resultantes contienen genes completos y funcionales. La enzima del T4 que corta al concatmero produce molculas de DNA de tamaos similares pero no reconoce sitios especficos sobre la molcula, en cambio la enzima del T7 reconoce sitios especficos sobre el DNA. Sntesis de las envolturas proteicas: Las protenas de la envoltura (cpside, vaina, fibras, etc.) son protenas tardas que se sintetizan despus de iniciada la replicacin del material gentico. La sntesis de cada componente proteico se realiza separadamente. En el caso del fago T4, el material gentico es encapsulado antes del ensamble del resto de los componentes. Ensamble: Todas las protenas de la envoltura se ensamblan para formar una partcula viral madura capaz de infectar a otra clula cuando sea liberada. Lisis celular y liberacin de las partculas virales: La lisis celular se debe a la sntesis de protenas tardas codificadas en el genoma del fago. En el fago T4, estas protenas son enzimas que lesionan la membrana citoplasmtica y la pared celular. Transduccin La transduccin fue cronolgicamente el ltimo sistema de transferencia gentica bacteriana que se descubri. En 1951 Joshua Lederberg y su colaborador Zinder estaban investigando en Salmonella la posible existencia de un sistema de conjugacin al estilo del que se acababa de descubrir en su pariente Escherichia coli). Mezclaron dos cepas de Salmonella, cada una con un juego distinto de marcadores genticos. (Eureka! Obtuvieron recombinantes. Descartaron que se tratara de transformacin, ya que los resultados eran similares si aadan DNasa al sistema. Entonces, era un fenmeno de conjugacin? Realizaron el experimento del tubo en "U", con una membrana

separando los dos brazos de la U, en cada uno de los cuales se colocaba una de las cepas. La membrana impide el paso de bacterias y los contactos intercelulares directos entre las dos cepas. Pues bien... segua habiendo recombinantes. Esto descartaba, pues, que se tratara de conjugacin. Se postul que deba de existir un "agente filtrable" resistente a las nucleasas, responsable ltimo de la transferencia gentica. La transduccin se puede definir como el proceso de transferencia gentica desde una clula donadora a otra receptora mediatizado por partculas de bacterifagos que contienen ADN genmico de la primera. En la transduccin podemos distinguir dos etapas diferenciadas: 1. Formacin de la partcula fgica transductora: un trozo de material gentico de la clula donadora se introduce en el interior de la cabeza de la cpsida de un fago. Las partculas transductoras son en cierta manera "subproductos" anmalos del ciclo normal del fago. 2. La partcula transductora inyecta de forma habitual el ADN que porta a la clula receptora, donde este ADN puede eventualmente recombinarse y expresar su informacin. La transduccin descubierta por Lederberg y Zinder se llama transduccin generalizada. Mediante ella se puede transferir cualquier marcador del genforo del donador, con aproximadamente la misma frecuencia relativa (de ah el calificativo de generalizada). La transduccin generalizada se produce slo como consecuencia de infecciones lticas. El ADN del genmico de la bacteria donadora que es introducido en la partcula transductora suele ir sin acompaamiento de ADN del propio fago. Por ello, a esta peculiar partcula consistente en cpsida del fago que encierra slo ADN genofrico de la bacteria se la denomina pseudovirin.

Siguiendo con la buena racha de descubrimientos, pocos aos ms tarde (1956), el mismo Lederberg (esta vez junto con su mujer, y con Morse) hallaron un tipo nuevo de transduccin, mientras estaban estudiando el sistema del fago moderado l y su hospedador, E. coli. Este tipo de transduccin recibi el nombre de transduccin especializada, y sus caracteres distintivos son: slo se transfieren marcadores cromosmicos cercanos al sitio de integracin del ADN del fago (profago) en la clula lisognica (p. ej., en el caso de l , los marcadores gal o bio); se produce nicamente como consecuencia de la induccin de la clula lisognica por escisin del profago y consiguiente entrada a fase ltica, productora de nuevas partculas de fago; el ADN genmico de la bacteria transportado por la partcula transductora va unido a ADN del fago; la clula transductante se suele convertir en lisognica para el fago correspondiente.