I Jornada Cientfica e VI FIPA do CEFET Bambu

A Cultura de Tecidos na Agricultura

Camilo Alves(1); Josimar Rodrigues Oliveira(1); rika Soares Reis(2)*; Ricardo Monteiro Corra(2); Jonatha Souza(1); Jlio Csar de Oliveira Silva(1); Jlio Csar Ribeiro de Paula(1); Lucas Henrique Fernandes Rodrigues(1); Marco Aurlio de Souza(1); Marcelo Ribeiro de Mendona(1);.
(1) Centro Federal de Educao Tecnolgica de Bambu CEFET-Bambu; (2) Professores Orientadores CEFET-Bambu

RESUMO:
A cultura de tecidos vegetais uma ferramenta com alto potencial de aplicao no melhoramento vegetal. Ela pode ser utilizada desde a multiplicao de material gentico, para a troca e a avaliao de germoplasma, at a produo de mudas livres de vrus. Nessa tcnica pequenos fragmentos de tecido vivo, chamados explantes, so isolados de um organismo vegetal, desinfestados e cultivados assepticamente por perodos indefinidos em um meio de cultura apropriado. O objetivo obter nova planta idntica original, ou seja, realizar uma clonagem vegetal de modo a obter um novo indivduo, mantendo-se o gentipo idntico ao do ancestral comum. Assim o objetivo do presente trabalho ser apresentar comunidade acadmica do CEFET-Bambu a tcnica de cultura de tecidos, desconhecida por vrias pessoas e de grande importncia para a agricultura. Palavras-chave: Cultivo in vitro, clones, biotecnologia, melhoramento gentico. propagao, como por exemplo, algumas espcies nativas do Cerrado. Outro exemplo de grande importncia a limpeza clonal, por meio da qual possvel, em algumas espcies, como abacaxi, morango, citrus, batata e outros, a produo de mudas livres de vrus (FERREIRA et al, 1998). Essa tcnica consiste em cultivar meristemas e induzir a formao de material propagativo geneticamente idnticos aos parentais. Dessa forma o objetivo do presente trabalho apresentar comunidade acadmica do CEFETBambu a tcnica de cultura de tecidos, listando sua importncia e caractersticas prticas aplicveis s cincias agrrias.

1. INTRODUO
O mundo da cincia fascinante e repleto de inovaes e progressos. Nesse aspecto a biotecnologia de plantas tem contribudo de forma relevante para o setor produtivo a partir do impulso, na ltima dcada, s pesquisas para a produo de plantas livres de vrus, para a propagao clonal e o desenvolvimento de gentipos resistentes estresses bitico e abiticos via engenharia gentica (TORRES et al, 1998). A cultura de tecidos uma excelente ferramenta para clonar plantas em escala comercial, alm de colaborar na realizao de estudos de transformao gentica e conservao de espcies vegetais. Permite ainda aperfeioar a interao entre fatores abiticos (nutricionais, luminosos, temperatura etc) e biticos (hormonais e genticos), resultando em plantas sadias, vigorosas e geneticamente superiores, que podem ser multiplicadas massivamente. A tcnica de cultura de tecidos pode ser empregada para a multiplicao de espcies de difcil

2. PRINCPIO TECIDOS

DA

CULTURA

DE

A cultura se baseia na teoria da totipotncia onde os seres vivos tem a capacidade de regenerar organismos inteiros, idnticos matriz doadora, a partir de clulas nicas.

* Endereo para correspondncia: erikareis@cefetbambui.edu.br

I Jornada Cientfica e VI FIPA do CEFET Bambu 3. TCNICAS TECIDOS DE CULTURA DE

- cultura de razes; - conservao in vitro de recursos genticos de plantas; - polinizao e fertilizao in vitro; - cultura de embries; - cultura de ovrios; - protoplasto e - induo de mutaes in vitro.

3.1 Micropropagao
A Micropropagation a propagao fiel de um gentipo selecionado por meio das tcnicas da cultura in vitro.

3.1.1 Fontes de Explantes a) Cultura de meristema

Consiste no estabelecimento do domo meristemtico apical sem os primrdios foliares. A brotao apical tipicamente cresce, originando um nico broto.

4. APLICAES DAS TCNICAS DE CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS PARA O MELHORAMENTO

As principais aplicaes das tcnicas de cultura de tecidos vegetais podem ser sumarizadas nas seguintes:

b) Cultura de pices caulinares

o estabelecimento in vitro a partir de brotaes apicais maiores do que aquelas utilizadas para iniciar a cultura de meristema, tendo alguns primrdios foliares. Essas brotaes apicais podem produzir mltiplas brotaes.

a) Cultura de meristemas
Tcnica mais antiga para a propagao clonal massal e para a obteno de plantas livres de virus, principalmente quando combinada com a tcnica de termoterapia. Esta tcnica relativamente simples e aplicvel a um grande nmero de espcies.

c) Cultura de segmentos nodais

Os segmentos nodais so constitudos de gemas laterais isoladas, segmentos de caule com uma ou mltiplas gemas. Cada gema desenvolve para formar uma nica brotao.

b) Avaliao rpida de suscetibilidade

A cultura de clulas, tecidos e rgos pode ser empregada para a avaliao de suscetibilidade/tolerncia vrias molstias ou estresses abiticos.

d) Cultura de embries
iniciada a partir de embries zigticos extrados de sementes. Os embries germinam originando brotos.

c) Induo de florescimento precoce

Esta tcnica empregada para reduzir o longo perodo de juvenilidade que ocorre principalmente nas plantas perenes, permitindo uma reduo substancial de tempo nos programas de melhoramento gentico.

3.2 Microenxertia
Tcnica que consiste em microenxertar, em condies asspticas, um pice caulinar, retirado de uma planta matriz, sobre um porta enxerto estabelecido in vitro.

d) Variao somaclonal
O ambiente da cultura in vitro pode induzir variabilidade nas culturas este fenmeno foi denominado de variao somaclonal. A variabilidade gerada desta maneira pode ser importante para o melhoramento gentico.

3.3 Outras Tcnicas

Existem vrias outras tcnicas de culturas de tecidos utilizadas na agricultura, so elas:

I Jornada Cientfica e VI FIPA do CEFET Bambu 5. PROBLEMAS NA CULTURA IN VITRO

O cultivo in vitro como qualquer outro processo sensvel a alguns problemas de ordem ambiental ou bioligico que afetam diretamente o desenvolvimento das culturas. Dentre estes problemas pode-se citar a oxidao, o declnio no vigor e a hiperhidricidade. planta, que transferida para um novo ambiente, sendo todo esse processo realizado artificialmente. O termo aclimatao tem um significado similar, mas um processo no qual as plantas ou outros organismos se tomam ajustados a um novo clima ou situao, como resultado de um processo essencialmente natural.

5.1. DECLNIO DE VIGOR

A baixa taxa de desenvolvimento chamada de declnio do vigor e est associado com a produo de substncias fenlicas ou a outros fatores como vitrescncia, habituao ou maturidade dos explante.

7. ENRAIZAMENTO
O enraizamento uma etapa que define o resultado final da microropagao, a etapa onde ocorre a formao de razes adventcias nas partes areas. Pode ser dividido em induo, iniciao e alongamento das razes (TORRES, 1998). Pode ser realizada in vitro como no ambiente externo, porm resultados mais satisfatrios para a maioria das espcies, tem sido obtidos no enraizamento ex vitro.

5.2. NECROSES
Necrose pode ser descrita como sendo a morte de uma parte de um organismo vivo. Isto ocorre com explantes colocados in vitro, podendo ter uma perda parcial ou a de toda a cultura (Santos, et. al., 2001).

8.1 Enraizamento In Vitro

A vantagem deste tipo de enraizamento o melhor controle das condies em que se trabalha e, com isso, a obteno de um alto percentual de enraizamento. Por outro lado, a desvantagem do mtodo que as razes formadas in vitro nem sempre so eficientes na absoro de gua e de nutrientes, no momento da passagem das mudas para o substrato.

5.3. OXIDAO
A oxidao a reao do oxignio com ons metlicos (+) dos outros compostos do meio de cultivo. Os explantes ao serem inoculados no meio de cultura podem liberar exudatos que tornam o meio de cultivo escuro. Este tipo de escurecimento conseqncia da liberao de fenis dos ferimentos ocasionados no processo de extrao dos explantes (SANTOS et al, 2001).

8.2 Enraizamento Ex Vitro

A tcnica de enraizamento ex vitro consiste em destacar brotaes e plant-las no substrato desejado, que pode ser: turfa, areia, vermiculita, perlita, bandejas de espuma fenlica e ou substratos comerciais, ainda solo esterelizado.

5.4. HIPERHIDRICIDADE
A hiperhidricidade definida como o estado fisiolgico que a planta apresenta elevado teor de gua no interior das clulas e tecidos com aspecto translcido.

9. ESPCIES EMPREGADAS

TECNOLOGIAS

6. ACLIMATIZAO DAS PLANTAS

Aclimatizao e aclimatao so termos que apresentam conotaes diferentes. O primeiro trata dos processos para a passagem da planta que est in vitro para o ambiente e definido como a adaptao climtica de um organismo, especialmente uma

A seguir so listados alguns exemplos de espcies vegetais e respectivas tecnologias cujo emprego j corrente: - Dendezeiro: primeiro projeto no qual plntulas originadas a partir de embriognese somtica foram cultivadas a campo, (Unilever, Malasia, 1975). - Coniferas: primeiro projeto no qual tecnologias de poliembriognese somtica desenvolvidas e

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patenteadas pela Universidade da Cailfornia-Davis foram transferidas para empresas de reflorestamento (Weyerhaeuser, Washington, USA), para a clonificao de gentipos superiores resultantes de programas convencionais de melhoramento gentico. - Eucaliptos: organognese, embriognese somtica (USA, Europa). Microestacas (Brasil): aumento de 135% na produtividade de polpa a partir de clones selecionados em comparao a populao base. - Pyrus, Malus, Prunus: Limpeza viral micropropagao (cultura de meristemas e segmentos nodais) para a propagao massal porta-enxertos e para o estabelecimento variedades-copa matrizes sadias. e de de de embriognese somtica e encapsulamento para a obteno de sementes sintticas. Sakata Seed Co., Japo. - Cacau e caf: embriognese somtica para a propagao massal de variedades melhoradas e resistentes a molstias (EUA e Costa Rica).

10. CONCLUSES
A cultura de tecidos uma tcnica de fundamental importncia, tanto no melhoramento gentico de plantas, como na obteno de plantas sadias, sendo de grande interesse na obteno em larga escala de mudas geneticamente idnticas que daro origem plantas com caractersticas superiores, fato este de grande relevncia para a melhoria da produo das culturas.

- Videira: embriognese somtica e organognese para a propagao massal de porta-enxertos e variedades-copa isentas de molstias. - Bananeira: regenerao em larga escala de mudas isentas de pragas molstias como Mal do Panam e Sigatoka-negra. Atualmente a maior parte dos bananais so instalados com mudas micropropagadas produzidas em Biofbricas. - Moranguinho, abacaxizeiro (Figura 1), alho, cebola, batatinha, mandioca: Obteno de plantas matrizes isentas de viroses, pela aplicao da tcnica de cultura de meristemas e subsequente micropropagao massal.

11. REFERNCIAS
CID, L. P. B. A propagao in vitro de plantas. O que isso? Revista Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento. v.2, n. 25, 2000. FERREIRA, M. A.; CALDAS L. S.; PEREIRA E. A. Aplicaes da cultura de tecidos no melhoramento gentico de plantas. In: TORRES, A. C.; CALDAS, L. S.; BUSO J. A. Cultura de tecidos e transformao gentica de plantas. Braslia: Embrapa SPI: Embrapa CNPH. v. 1, p. 2143, 1998. GUERRA M. P.; NODARI R. O. Apostila de Biotecnologia vegetal. Apostila de aula. [http://www.cca.ufsc.br/lfdgv/Apostila.htm]. 2007. SANTOS, R. B.; PAIVA, R.; PAIVA, P. D. O.; SANTANA, J. R. F. Problemas no cultivo in vitro: cultura de tecidos. Paiva e Paiva, UFLA, Lavras, M.G. 9:73-79. 2001. TORRES A. C, CALDAS L. S.; BUZZO J. A. (Eds). Cultura de Tecidos e Transformao Gentica de Plantas. v.1. e 2. Braslia, Embrapa, 864p. 1998.

Figura 1: Cultivo in vitro de abacaxi. Fonte: Cid, 2000.

- Citros, mamoeiro e mangueira: Melhoramento e plantas isentas de molstias. - Brassica sp: resgate de embries resultantes de cruzamentos incompatveis, ativao de