UNIVERSIDAD TCNICA PARTICULAR DE LOJA ESCUELA DE BIOQUMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE TOXICOLOGIA

DRA. BEATRIZ VARGAS

TITULO: DETERMINACION ALCOHOL ETILICO OBJETIVO: Determinar cuantitativamente el nivel de alcohol etlico en sangre y evaluar el estado de la persona bajo el efecto de una determinada cantidad de etanol. 2. FUNDAMENTO: Se fundamenta en la extraccin del alcohol etlico de la muestra de sangre mediante microdifusin para luego ser cuantificado por una reaccin de xido-reduccin con dicromato de potasio, el cual al reducirse el cromo cambia de color, del color amarillo original a verde, la intensidad de color es directamente proporcional a la concentracin de alcohol presente en la muestra y que puede ser cuantificado espectrofotomtricamente frente a estndares de concentracin conocida. La prueba no es especfica para alcohol etlico, por cuanto otras sustancias oxidables pueden producir la reaccin de oxido- reduccin con el dicromato de postasio, sin embargo se puede utilizar considerando el antecedente de ingesta de bebidas alcoholicas o en casos de accidentes de trnsito. No se aplicara para intoxicaciones de tipo industrial. 3. CONTENIDO: Tomar 5,0 ml. muestra de sangre por puncin venosa , limpiando la zona de puncin con agua hervida fra o solucin de cetabln, (NO UTILIZAR ALCOHOL), colocar la muestra extrada en un tubo heparinizado (heparina como anticoagulante). REACTIVOS MATERIALES - Carbonato de potasio 20 % (10 ml) - Tubos de ensayo de 15 ml. - Agua destilada - Cmaras de CONWAY 3x grupo - Estndar de alcohol etlico de 1,0 g/litro (5ml) - Pipetas pasteur 2 por grupo - Dicromato de potasio-cido: - Probeta o tubo graduado de 10 ml. (0,185 g de dicromato de potasio en 7,5 ml - Espectrofotmetro VIS 630 nm de agua dest., aadir lentamente 14 ml - Estufa a 40C de c. Sulfrico q.p.conc., enfriar, diluir a 32,5 ml con agua dest). PROCEDIMIENTO: Extraccin por Microdifusin: Preparar la cmara de CONWAY: colocar 2 cm3 de solucin de dicromato de potasio cido en el compartimiento central. En el compartimiento externo colocar por goteo l cm3 de carbonato de potasio 20 % y 1 cm 3 de muestra (sangre), cerrar la cmara inmediatamente y dejar en reposo por 2 horas a temperatura ambiente o por 20 min. a 40 C luego observar el cambio de color en el compartimiento central. Preparar un estndar de 2.0 g/litro y un blanco de reactivos Cuantificacin : Tomar el contenido del compartimiento central y colocar en una probeta de 10ml. lavar varias veces el compartimiento central con agua destilada y

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colocar todo en la probeta, hasta aforar a 10 ml. Leer la D.O. a 630 nm en un espectrofotmetro, encerando con el blanco de reactivos. 3. Clculos : D.O.(muestra) x Conc.(St.) Conc. M = ---------------------------D.O (St.)

6. REFERENCIAS SUNSHINE, I, Methodology for Analitical Toxicology, Impresin, Vol. I USA, Florida, Editorial CRCPress 1987. 5ta.

VALLEJO, M, Toxicologa Analtica, Universidad Nacional de Bogot