CURSO DE BIOLOGIA

RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS

I.

CARBOHIDRATOS

Los carbohidratos son los compuestos orgnicos ms abundantes de la biosfera. La mayora pueden ser representados con la frmula general Cx(H2O)y por lo que son literalmente, hidratos de carbono. Gran parte de sus funciones biolgicas dependen de esta estructura qumica tan particular y verstil. Ellos son componentes fundamentales de muchos alimentos y su degradacin durante el proceso de digestin genera la energa necesaria para las funciones vitales del organismo. Cuando se encuentran combinados con otras biomolculas, dan origen a molculas ms complejas cuyas funciones pueden ser estructurales o de soporte celular y tisular, de comunicacin entre clulas, de reconocimiento o de sealizacin. Qumicamente se definen como polihidroxialdehdos o polihidroxiacetonas cclicas o sustancias que luego de hidrolizarse dan origen a los mismos. Un carbohidrato que no puede ser hidrolizado en uno ms simple es llamado monosacrido. Los monosacridos ms comunes son la glucosa, la fructosa, la galactosa y la manosa. Un carbohidrato que puede ser hidrolizado en dos molculas de monosacridos es llamado disacrido. Los ms importantes son la lactosa (presente en la leche), la sacarosa (presente en el azcar comn) y la maltosa. Por su parte, aquellos carbohidratos que pueden ser hidrolizados en varias molculas de monosacridos son llamados polisacridos. Los ms comunes son el almidn y la celulosa, este ltimo es componente estructural de las plantas. La determinacin de glucosa es de importancia mdica ya que niveles sanguneos alterados pueden ser signo de una enfermedad metablica comn conocida como diabetes mellitus.

a. Prueba de Benedict
Algunos azcares tienen la propiedad de oxidarse en presencia de agentes oxidantes suaves como el ion Fe3+ o Cu2+. Esta caracterstica radica en la presencia de un grupo carbonilo libre, el cual es oxidado y genera un grupo carboxilo. Por lo tanto, aquellos azcares con un grupo carbonilo libre son llamados azcares reductores y aquellos en los que el grupo carbonilo se encuentra combinado en unin glicosdica se conocen como azcares no reductores. Existen varias reacciones qumicas que permiten determinar si se est en presencia de un azcar reductor o no. La prueba de Benedict es una de ellas y se basa precisamente en la reaccin o no de un azcar con el ion Cu2+. El reactivo de Benedict contiene soluciones de carbonato de sodio, sulfato de cobre, y citrato de sodio. El Na2CO3 confiere a la solucin un pH alcalino necesario para que la reaccin pueda llevarse a cabo. El citrato de sodio mantiene al ion Cu2+ en solucin ya que tiene la propiedad de formar complejos coloreados poco ionizados

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con algunos de los metales pesados. Con el cobre produce un complejo de color azul. Si se le agrega al reactivo una solucin de azcar reductor y se calienta hasta llevar la mezcla a ebullicin, el azcar en solucin alcalina a elevadas temperaturas se convertir en D-gluconato y su ene-diol, rompindose luego en dos fragmentos altamente reductores, los cuales con sus electrones expuestos, reaccionarn con el Cu++. Se obtiene entonces un azcar oxidado y dos iones Cu+. Posteriormente el Cu+ producido reacciona con los iones OH- presentes en la solucin para formar el hidrxido de cobre: Cu + + OH 2Cu(OH) Cu(OH) (precipitado amarillo) Cu2O (precipitado rojo ladrillo) + H2O El hidrxido pierde agua La aparicin de un precipitado amarillo, anaranjado, o rojo ladrillo evidencia la presencia de un azcar reductor. Procedimiento. Seleccione la pipeta ms conveniente y deposite 2. ml de reactivo de Benedict en un tubo. Luego, a cada tubo, aada 6 gotas de una y solo una de las siguientes soluciones de carbohidratos: glucosa, galactosa, lactosa, xilosa, fructosa, sacarosa al 0.1M .Despues calentar hasta lograr una ligera ebullicin. Interpretar los resultados

b. Reacciones coloreadas del almidn

Una reaccin caracterstica para reconocer el almidn es la aparicin de una coloracin azul al combinarse con la disolucin de iodo en ioduro potsico. La reaccin de los polisacridos, en particular del almidn, con iodo es un proceso complejo. La coloracin que aparece depende de la estructura de polisacrido. En el curso de la reaccin se forma un complejo del polisacrido con iodo. Este proceso es bien expresado en el caso de la amilosa. En el caso de los polisacridos de cadenas ramificadas, por ejemplo, la amilopectina y el glicgeno, junto con el proceso de formacin del complejo, tiene gran importancia tambin el proceso de adsorcin de iodo sobre la superficie de las molculas ramificadas. Se ha demostrado la relacin entre la longitud de las cadenas laterales y la coloracin resultante de la reaccin con yodo. Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Reactivos. Almidn, disolucin al 1 %. Disolucin de Lugol Procedimientos. En un tubo de ensayo se vierten de 3 a 5 ml de disolucin de almidn y se aaden 3 a 5 gotas de lugol. Ver e interpretar los resultado.

II.

GRASAS

Se denomina lpidos un grupo numeroso de sustancias constituidas como los

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esteres y caracterizadas por su solubilidad en disolventes orgnicos y por su insolubilidad en agua. A ellos pertenecen los glicridos (grasas), las ceras, los esterles (estearinas), fosfolpidos y glicolpidos (cerebrosidos, ganglisidos). Los lpidos desempean un papel muy importante en calidad de componentes estructurales de las membranas celulares, como fuente de energa, disolvente paralas sustancias orgnicas y como precursores de otros componentes de la clula(vitaminas del grupo D, cidos biliares y hormonas de naturaleza de esteroides). En el organismo de los animales casi todos los lpidos se encuentran en complejo con las protenas, los hidratos de carbono y otras sustancias. A los complejos se les atribuye una gran significacin en el cumplimiento de una serie defunciones importantes. As, son ricas en lipoprotenas las mitocondrias, que son elementos estructurales de las clulas, en los cuales se verifican los procesos de oxidacin libre y conjugada con la fosforilacin, como tambin una parte considerablede los procesos de metabolismo intermedio. Las grasas son esteres de un alcohol trivalente (la glicerina y los restos de cidos grasos de cadena larga que tienen la estructura general siguiente:

a. Reaccin de la grasa y el aceite con el Sudn III

Instrumentos. Vidrio de reloj o placas de vidrio. Reactivos. Sudn III, disolucin al 0.2% (preparacin: en 200 mg de Sudn III se aaden 100 ml de alcohol etlico al 70% calentado en un bao mara, se mezcla y se deja en reposo durante 24 h por lo menos). Aceite vegetal. Procedimiento. Sobre el vidrio de reloj se aplica una gota de aceite, se aade una gota de Sudn III y se mezcla. Se observa la aparicin de una coloracin naranja de la mezcla.

b. Prueba de solubilidad de grasas

El trabajo se realiza con el aceite vegetal y diferentes solventes. Instrumentos. Soporte con tubos de ensayo. Reactivos. Aceite de cocina. Agua ,Xilol Procedimiento. En cuatro tubos de ensayo se vierten de 5 a 7 gotas de aceited girasol. En el primer tubo aaden 2 ml de agua, en el segundo 2 ml de Xilol, mezcla en lostubos de ensayo se agita enrgicamente. Reporta los resultados.

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III.

PROTEINAS

OBJETIVO Cuantificacin de las protenas totales y albmina en el suero.

FUNDAMENTO

Proteina: La protena presente en la muestra reacciona con los iones cobre (II) en medio alcalino, originando un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometra. Principio ++ Protena + Cu lcali complejo de color

Albumina: La determinacin colorimetrica de albumina humana en suero se realiza en un medio amortiguado, lo cual permite su union por puentes de hidrogeno a colorantes o indicadores como el verde de bromocresol, tiene la propiedad de enlazarse especficamente con la albmina produciendo un cambio de color de intensidad proporcional a su concentracin.

AcidoSulfosalicilico Determinacin de protenas (proteinuria) con AcidoSulfosalicilico Muestra: 0.5 mL de orina (lo mas fresca posible) Colocar 1mLde cido sulfosalicilico al 3% Agitar suavemente. Incubar a temperatura ambiente durante 10 min Evaluar el grado de turbidez con respecto a una muestra que contenga agua destilada. A mayor turbidez, mayor cantidad de proteinuria. Se puede reportar en +, ++. +++. y ++++ Si el resultado es positivo, repetir el ensayo utilizando procedimientos mas especficos.

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