Universidad Autónoma De Campeche

Facultad De Ciencias Químico Biológicas.

Carrera: Químico Farmacéutico Biólogo.

Asignatura: BIOQUIMICA GENERAL

“Reporte de práctica de laboratorio # 1”

Integrantes:

Flores Martínez María José.

Noh Puga Cinthia Guadalupe.

Oribe Pech Carlos Felipe.

Pat Poot Edward Calletano

Tut Heredia Javier

 REACCIONES DE COLORACIÓN DE LAS PROTEÍNAS

FUNDAMENTACIÓN:

Los carbohidratos se presentan en forma de azúcares, almidones y fibras, y son uno de

los tres principales macronutrientes que aportan energía al cuerpo humano (los otros
son los

lípidos y las proteínas). Actualmente está comprobado que al menos el 55% de las
calorías

diarias que ingerimos deberían provenir de los carbohidratos.

Los carbohidratos o hidratos de carbono ó glúcidos constituyen compuestos químicos

formados principalmente por carbono, hidrógeno y oxígeno, elementos que se conjugan

para

formar diversos tipos, en una proporción generalmente de 1:2:1, respectivamente.

Estas biomoléculas ejercen funciones fundamentales en los seres vivos, como: soporte

(celulosa), reserva de alimento (almidón), reserva energética (glucógeno), energía

inmediata

(glucosa).

Pueden clasificarse atendiendo a varios criterios: de acuerdo al número de monómeros

que constituyen al carbohidrato, al número de carbonos de sus monómeros, según el

grupo

funcional que posee ese monómero.

Los aminoácidos, por su parte, son las unidades elementales constitutivas de las
denominadas proteínas. En ocasiones, la hidrólisis de una proteína da lugar a
estructuras que

químicamente son diferentes de los 20 aminoácidos codificados por el ADN. En este

caso, se

trata por lo general de modificaciones postraduccionales. Además, hay aminoácidos no

proteicos, que teniendo la misma estructura básica de los aminoácidos no forman parte
de las

proteínas.

Son sustancias cristalinas, casi siempre de sabor dulce; tienen tanto actividad ácida
como

propiedad básica y presentan actividad óptica. Químicamente son ácidos carbónicos

con, por lo

menos, un grupo amino por molécula.

En la naturaleza existen unos 20 aminoácidos que pueden ser codificados por el ADN

humano. Cada uno de ellos tiene una estructura química diferente, pero tienen en
común, un

grupo carboxilo y un grupo amino (excepto la prolina que tiene un grupo imino) unidos
al

denominado carbón quiral (excepto la glicina).

La fórmula general para los 20 L- alfa aminoácidos, a pH fisiológico, es la siguiente:

Finalmente, deben mencionarse brevemente las proteínas. El término "proteína"

proviene de la palabra griega proteous, que significa primero. Las proteínas son los
compuestos

bioquímicos más abundantes en los seres vivos. Son verdaderamente especiales por
ser las

sustancias centrales en casi todos los procesos biológicos.

A primera vista podría pensarse en las proteínas como polímeros lineales de

aminoácidos

unidos entre sí por medio de enlaces peptídicos. Sin embargo, la secuencia lineal de
aminoácidos

puede adoptar múltiples conformaciones en el espacio. La estructura primaria viene

determinada por la secuencia de aminoácidos en la cadena proteica, es decir, el

número de

aminoácidos presentes y el orden en que están enlazados. La conformación espacial

de una

proteína se analiza en términos de estructura secundaria y estructura terciaria. La

estructura

secundaria es el plegamiento que la estructura primaria adopta gracias a la formación

de puentes
de hidrógeno entre los átomos que forman el enlace peptídico. La estructura terciaria,
en

cambio, se refiere a la disposición tridimensional de todos los átomos que componen la

proteína.

La asociación de varias cadenas polipeptídicas origina un nivel superior de

organización, la

llamada estructura cuaternaria. Por último, la asociación de proteínas con otros tipos de

biomoléculas para formar asociaciones supramoleculares con carácter permanente da

lugar a la

estructura quinaria.

Presentan numerosas funciones. Por ejemplo, casi todas las enzimas están
compuestas de

estructuras proteicas. Las enzimas son los catalizadores que permiten que ocurran casi
todas las

reacciones químicas en los seres vivos. La vida, como la conocemos no sería posible
sin las

enzimas. Junto con los lípidos, las proteínas son los componentes estructurales de las
membranas

celulares. Las proteínas de las membranas ayudan a transportar sustancias a través de

la doble

capa lipídica y trabajan como sitios receptores de los neurotransmisores y de las

hormonas.

Las proteínas son responsables del soporte estructural y del movimiento del cuerpo

humano. El tejido conectivo está compuesto de fibras proteicas fuertes que ayudan a
unir la piel
y el hueso. Los tejidos musculares están compuestos de proteínas que se contraen; los
huesos se

mueven por músculos que se contraen.

Otras funciones de las proteínas incluyen el transporte y almacenamiento de iones y

moléculas; por ejemplo, transportar el oxígeno de los pulmones a las células

(hemoglobina).

Numerosas hormonas, agentes de comunicación química, son estructuras proteicas.

Una de las

líneas de defensa más importantes contra los agentes infecciosos son las proteínas
denominadas

inmunoglobulinas.

Las proteínas son polímeros de condensación de los aminoácidos, algunas proteínas

contienen cientos de aminoácidos, y en algunos casos miles, en estructuras de

cadenas altamente

organizadas. La polimerización de los aminoácidos se hace con la formación de

enlaces

peptídicos (amida), al unirse el grupo carboxilo del ácido de un aminoácido con el grupo
amino

del siguiente aminoácido y produciendo una molécula de agua. Por eso, la unión de
varios

aminoácidos origina los oligopéptidos y polipéptidos (proteínas de más de 50

aminoácidos).

OBJETIVO:
Poner en práctica una batería de pruebas para la determinación rápida de aminoácidos
presentes en las proteínas.

Conocer y demostrar pruebas que identifiquen proteínas y de acuerdo a los resultados

predecir y comprender su utilidad.

HIPOTESIS:

Se obtendrán las coloraciones respectivas a cada una de las diez pruebas de

laboratorio.

METODOLOGÍA:

a) Reactivos

.reactivo de millón 100 ml

.acido nítrico 15 ml

.amoniaco 100 ml

.NaOH 1 N 100 ml

.reactivo de glioxilico 20 ml

.acido sulfúrico 100 ml

.sol de formol 2º ml

.sol sulfato mercúrico 10 % 100 ml

.sol carbonato de sodio 10% 200 ml

.diazobenzolsulfonico 0.05 g

.acido sulfanilico 2 g

.acido clorhídrico concentrado 2 ml

 .nitrito de potasio 2 g

.hidroxido de sodio 5% y 40% 20 ml

.sol ninhidrina 0.1% 10 ml

.nitrato de plomo 10% 10 ml

.sol alcoholica alfa-naftol al 1% 20 ml

.hipoclorito de sodio o de calcio 10% 10 ml

b) Materiales

.10 tubos de ensayo de 13 x 100 mm

.6 pipetas graduadas de 5 ml

.1 gradilla

.1 baño de agua (pote de peltre de calentamiento)

.pinzas para tubo de ensayo

.indicador de pH

2) técnicas

1. Reaccion de millón:

La reacción del Millón se debe a la presencia del grupo hidroxifenilo en la molécula

proteica. Cualquier compuesto fenólico que no esté sustituido en la posición 3,5 como
la

tirosina, el fenol y el timol producen resultados positivos en esta reacción. De estos

compuestos,
sólo la tirosina está presente en las proteínas, de manera que sólo las proteínas que
tienen este

aminoácido ofrecen resultados positivos.

En esta prueba los compuestos mercúricos en medio fuertemente ácido (ácido nítrico
del

reactivo) se condensan con el grupo fenólico formando un compuesto de color rojo

ladrillo o

rojizo. La prueba no es satisfactoria para soluciones que contienen sales inorgánicas

en gran

cantidad, ya que el mercurio del reactivo del Millón es precipitado y se vuelve negativo,
razón

por la cual este reactivo no se usa para medir albúmina en orina.

Debe tomarse en cuenta que en el caso de que la solución a examinar sea muy
alcalina,

debe ser previamente neutralizada, ya que el álcali precipitaría al ion mercurio en forma
de óxidos

amarillos. Además, proteínas como la ovoalbúmina producen un precipitado blanco que

progresivamente por acción del calor se torna rojo; pero, las peptonas, dan solamente
una

solución de color rojo.

2. Reacción Xantoproteica:

Esta prueba caracteriza a los aminoácidos aromáticos. Esta reacción se debe la

presencia
de un grupo fenilo en la molécula proteica. Los complejos de la molécula proteica que
son de

importancia en esta reacción son la tirosina y el triptófano. La fenilalanina no reacciona

en las

condiciones que se realiza en el laboratorio.

Para esta prueba se produce la nitración del anillo bencénico presente en los
aminoácidos

obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en medio

fuertemente alcalino (formación de ácido picrámico o trinitrofenol). No puede realizarse

esa

reacción para identificar albúmina en orina, por el color anaranjado de la reacción final.

3. Reacción Glioxilica:

El anillo indólico presente en la cadena lateral de los alfa-aminoácidos libres o haciendo

parte de

péptidos y proteínas se puede reconocer mediante reacción con el ácido glioxílico a pH

ácido,

puesto que forma complejos de coloración violeta o amarillo violeta, permitiendo así
identificar al

triptófano.
4. Reacción de Cole:

A 2 ml de las soluciones problemas agregar una gota de solución diluida de formol (2

partes de la solución comercial en 1000 de agua) y una gota de sulfato mercúrico al
10%. Mezclar y agregar algo más de 2 ml de ácido sulfúrico concentrado. Agitar
suavemente: se obtiene una coloración violeta intensa o púrpura. El triptófano es el
aminoácido que produce esta reacción.

5. Reacción de Pauly:

A 3 ml de la solución problema, agregar una solución de carbonato de sodio hasta

reacción débilmente alcalina. Se agregan apoximadamente 0.05 g de diazobenzol
sulfónico disuelto en solución diluida de carbonato de sodio. Se produce de inmediato
una coloración roja de intensidad variable que se debe a la presencia de tiosina o
histidina.

6. Reacción de Ninhidrina:

Tiene como objetivo detectar y cuantificar cantidades de aminoácidos libres. Los

aminoácidos, en general reaccionan con la ninhidrina (hidrato de hicelohidrandeno)

cuando son

calentados con un exceso de la misma. Todos los aminoácidos que poseen un grupo
amino libre

reaccionan y forman dióxido de carbono, amoníaco y un aldehído que contiene un

átomo de

carbono menos que el compuesto original. Esta reacción da lugar a la formación de un

producto

color azul o púrpura (que posteriormente puede ser utilizado para cuantificar el
aminoácido). En

el caso de la prolina, que estructuralmente no posee el grupo amino libre, sino un grupo
imino, la
coloración final es amarilla. El amoníaco, la mayoría de los polipéptidos y las proteínas
pueden

desarrollar coloración en esta reacción, pero a diferencia de los aminoácidos, no liberan

CO2.

Recuerde que la coloración azulada o violeta será proporcional a la concentración del

aminoácido.

La reacción entre una aminoácido y la ninhidrina es la siguiente:

7. Investigación de Tiogrupos:

La presencia de grupos –SH (sulfihidrilo o tiol) en un compuesto orgánico permite que

transcurra una reacción en presencia del acetato del plomo en medio alcalino en lo cual
se tiene:

Entre los tres aminoácidos azufrados que existen: cisteína, cistina y metionina, sólo los
dos primeros darán positiva la reacción de los tiogrupos mientras que la metionina
daría negativo al tener bloqueado su grupo tiol por la presencia del metilo.
8. Reacción de Molisch:

La presencia de carbohidratos en una muestra se pone de manifiesto por la reacción de

Molisch, que a cierto punto es la reacción universal para cualquier carbohidrato.

Se basa en la acción hidrolizante y deshidratante del ácido sulfúrico sobre los hidratos
de

carbono. En dicha reacción el ácido sulfúrico cataliza la hidrólisis de los enlaces

glucosídicos de

la muestra y la deshidratación a furfural (en las pentosas) o hidroximetilfurfural (en las

hexosas).

Estos furfurales se condensan con el alfa naftol del reactivo de Molisch (reacción de
Molisch)

dando un producto coloreado.

9. Reacción del triptófano libre:

El grupo indol del aminoácido triptófano se condensa con el ácido glioxílico del reactivo,
formando compuestos coloreados. El agregado de una pequeña cantidad de ácido
sulfúrico concentrado puro, aumenta la sensibilidad de la reacción. En este caso el
precipitado fue la formación de un anillo color morado en la superficie de separación,
reacción positiva.

10. Reacción de Sakaguchi:

El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la Arginina reacciona con

soluciones de alfanaftol

en presencia de Bromo en medio alcalino formando complejos coloreados rosados o

rojos.

Nota: el desarrollo y la fundamentación de cada prueba están especificados en la

fundamentación del trabajo.

RESULTADOS:

PROCEDIMIENTO DE LA PRÁCTICA:

Cuando entramos al laboratorio como primer paso comenzamos con la limpieza de la

mesa de trabajo y lavamos todo el material a utilizar en la practica y los dejamos
escurrir.

Seguidamente se preparo la muestra a utilizar, rimero se separaron las claras y las

yemas de lo huevos. se disolvieron las claras al 10% en 10 ml de agua.

6 ml ----------60 ml

- 6
 ------------------------

54 ml

6 ml de huevo en 54 ml de agua.

A nuestro equipo nos toco 30 ml de la muestra preparada (huevo).

Las pruebas que realizamos dieron los resultados siguientes:

En la primera prueba que realizamos (reacción de millón): se agregaron 3ml de la

muestra problema en el primer tubo de ensayo y se le agrego la solucion de nihidrina.
unas gotas del reactivo de millon.se formo un precipitado blanco.se calento y la
muestra se coloro a un purpura, se calento mas de 2 minutos.

En la segunda prueba: se agregaron 3ml de la muestra problema en el segundo tubo

de ensayo y se le añadio a la muestra 1 ml de acido nitrico concentrado. la solucion
cambio de color a amarillo y se le formo un anillo en la separacion.

En la tercera prueba: se agregaron 3ml de la muestra problema en el tercer tubo de

ensayo y se la añadio 3ml de glioxilico, 2 ml de acido sulfurico concentrado, la solucion
se sedimento, es decir, se fue hacia el fondo y se formo un anillo violoceo y cambio a
color amarillo.

En la cuarta prueba: a 2 ml de la muestra en el tubo de ensayo se le agrego 1 gota de

solucion diluida de formol y 1 gota de sulfato mercurico al 10%. agragar 2 ml de acido
sulfurico concentrado. se obtuvo una coloracion violeta o purpura intenso.

En la quinta prueba: a 3 ml de la muestra problema en el tubo de ensayo se la agrego

una solucion de carbonato de sodio. se agrego 0.05g de diazobenzol sulfonico.la
prueba no dio positiva.
En la sexta prueba: a 5 ml de la muestra problema en el tubo de ensayo se le añadio
0.5 ml de ninhidrina al 0.1%. se hirvio 2 minutos y se dejo enfriar.coloro rosado.

En la septima prueba: se hirvio 2 minutos 2 ml de clara de huevo no dilulido se la

agrego gotas de hidroxido de sodio al 40%, 2 gotas de sulfuro de plomo. dio resultado
un color negro.

En la octava prueba: a 5 ml de la muestra probema se le añadieron 4 gotas de solucion

alcoholica al 1%. Se formo un anillo, un anillo amarillo de separacion.

En la novena práctica:

se formo un anillo de separacion color violeta.

Imágenes de algunos de los resultados obtenidos en las reacciones con reactivos de

Molisch, Millon y en la reacción Xantoproteica.

Conclusiones:
Las proteínas, debido al gran tamaño de sus moléculas, forman con el agua soluciones
coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formación de coágulos al ser
calentadas a temperaturas superiores a los 700C o al ser tratadas con soluciones
salinas, ácidos, alcohol, etc.

La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su

desnaturalización por los agentes indicados, que al actuar sobre la proteína la
desordenan por la destrucción de su estructura terciaria y cuaternaria

Cuestionario:

1. ¿Qué importancia tiene realizar estas pruebas?

La determinación de aminoácidos en alimentos permite extraer algunas

conclusiones acerca de su composición.

2. Mencione tres aplicaciones de la proteína en la vida diaria

Son las sustancias de la vida, pues constituyen gran parte del cuerpo animal.

Se les encuentra en la célula viva.

Son la materia principal de la piel, músculos, tendones, nervios, sangre,

enzimas, anticuerpos y muchas hormonas.

Dirigen la síntesis de los ácidos nucleicos que son los que controlan la herencia.
3. Escriba dos fundamentos de cualquiera de las pruebas realizadas.

Reacción de Molisch:

Todos los Glúcidos por acción del ácido sulfúrico concentrado se deshidratan
formando compuestos furfúricos (las pentosas dan furfural y las hexosas dan
hidroximetilfurfural). Estos compuestos furfúricos reaccionan positivamente con
el reactivo de Molish (solución alcohólica de alfa-naftol).

Al contacto con la albúmina se obtuvo un precipitado blanco sin juntarse las

sustancias al contacto con el agua caliente empieza a tornarse una coloración
amarillo huevo en forma de una bolita amarilla dejamos en baño Maria hasta
lograr el precipitado rojizo reacción positiva.

Reacción de Millon:

Los compuestos mercúricos en medio fuertemente nítrico (reactivo de Millon) se

condensan con el grupo

fenólico del aminoácido tirosina, formando complejos de color rojizo.

El precipitado se torno blanco lechoso y se separo la parte blanca que dando

bajo del tubo y arriba de el

reactivo de Millon.
BIBLIOGRAFÍA.

- “Identificación de Carbohidratos y Proteinas”, Departamento de ciencias

fisiológicas, Departamento de Medicina. Santiago; República Dominicana.

- “Ensayos para reconocimientos de aminoácidos”; Jorge Tadeo Lozano.

Universidad de Bogotá.

- “Manual de prácticas de bioquímica para instrumentación quirúrgica”, Dr. Miguel

A. Miyares Calás. Fundación universitaria de Boyacá; centro de investigaciones
para el desarrollo, Tunja.

- “Laboratorio de Biología Celular”, autor desconocido.