BATTERI - LEZIONE 2/11

I batteri sono dei microrganismi procarioti non sempre nocivi ma che possono svolgere delle funzioni benefiche per il
nostro organismo come, ad esempio, i batteri che popolano la flora intestinale importanti per il corretto
funzionamento del sistema immunitario.
Questi rappresentano una piccola porzione del mondo batterico, ovvero quello che ci aiuta a combattere gli agenti
patogeni più pericolosi, mentre l'altra porzione di questa popolazione riguarda tutti quei microrganismi che sono in
grado di arrecare all' organismo umano dei danni che si traducono con le famose infezioni batteriche.
I batteri sono classificati in base a diverse tipologie di classificazione. Una delle più adottate consiste nel classificare i
batteri in base alla loro forma.
Le principali categorie di batteri sono:
- Cocchi
- Bacilli
- Altri a forma spiralica
I batteri sono caratterizzati anche da tre parametri:
- Infettività: La capacità di un microrganismo di penetrare e replicare in un ospite.
Questo è un momento fondamentale dell’infezione batterica perché se il batterio penetrasse all'interno della
nostra cellula e il suo ciclo vitale si fermasse lì ovviamente non ci sarebbe nessun tipo di problema. Ma il
batterio una volta all'interno dell'organismo è in grado di replicare e quindi di formare tanti cloni e quindi di
espandere la popolazione batterica e di conseguenza i danni associati all’infezione stessa.
- Virulenza: misura del potere patogeno di un agente. Cioè rappresenta quanto danno ci arreca il
microrganismo una volta infettati. Questa è una caratteristica propria di ciascuna specie batterica.
- Stabilità: Esprime il tempo di persistenza dell’infettività di un agente al di fuori dell'ospite.
È un parametro principalmente virale perché il batterio sopravvive spesso e volentieri. Questo perché il virus
per poter duplicare il suo materiale genetico necessità di tutto l'armamentario di duplicazione della cellula
ospite in assenza della quale lui non dispone degli enzimi e degli organuli necessari per poter duplicare il suo
materiale genetico e quindi poi tradurlo in proteine.

Quali sono i principali siti attraverso cui il patogeno può entrare nel nostro organismo e quindi arrecarci danno?

- ingestione: Tutti i cibi contaminati

possono indurre la comparsa di
un’infezione

Come detto prima non tutti i batteri sono pericolosi, molti sono nostri simbionti come, ad esempio, quelli della flora
intestinale altri possono indurre un'infezione che è possibile sconfiggere facilmente, altri ancora hanno un grado di
pericolosità maggiore.
Questi qui descritti vengono egregiamente affrontati grazie a diversi antibiotici che ci permettono di sconfiggere
quasi ogni infezione batterica, ma se pensiamo a 50 anni fa, con queste infezioni batteriche si moriva facilmente.
Se questi batteri pericolosi ad oggi sono contrastabili con l'utilizzo di un farmaco è perché sono passati un centinaio
d'anni dalla scoperta della penicillina, Il primo grande antibiotico che poi è stato commercializzato. Durante questi
100 anni è stato possibile identificare i meccanismi del ciclo cellulare batterico e quindi è stato possibile progettare
delle molecole in grado di attaccare in maniera selettiva questi meccanismi indispensabili per la sopravvivenza della
cellula batterica.

Le infezioni batteriche più comuni si manifestano sotto forma di ascessi, endocarditi, infezioni biliari, nel cavo orale,
osteomieliti e la tubercolosi. Questi sono tra le infezioni più comuni di cui poi parleremo.

CHEMIOTERAPICI
Quali sono le armi a nostra disposizione per poter combattere le infezioni batteriche.
La prima definizione di antibiotico è volta a sostanze di origine naturale prodotte generalmente da microrganismi
come gli stessi batteri, i funghi o gli actinomiceti in grado di reprimere o distruggere la sopravvivenza di altri
microrganismi.
Nonostante questo, rientrano nella classificazione anche le sostanze di origine sintetica.

Chemioterapici sono quindi farmaci che vengono prodotti attraverso una via sintetica in grado di bloccare o ridurre la
crescita di microrganismi batterici.
L'obiettivo della terapia antibatterica è quello di debellare la specie patogena e questo può avvenire in due modi: Un
modo più drastico e uno meno drastico.
Farmaco battericida: è un farmaco in grado di uccidere i microrganismi e quindi va a bloccare uno dei meccanismi
cellulari del batterio fondamentali per la sua sopravvivenza e per la sua crescita
Farmaco batteriostatico: è un farmaco meno drastico rispetto a quello battericida in grado di ridurre la
moltiplicazione della cellula batterica senza uccidere il batterio.
Bloccare la replicazione della cellula batterica è comunque un effetto importante perché ciò andrà a ridurre la
colonia di microrganismi e il sistema immunitario successivamente giocherà poi la sua parte andando ad eliminare la
popolazione batterica. Bloccare quindi la replicazione batterica è un meccanismo meno drastico ma che ci permette
di raggiungere lo stesso obiettivo.

Qual è il principale requisito degli antibiotici?

Il principale requisito è quello di funzionare in maniera selettiva, nei confronti di un target specifico dei batteri,
questo ci dà dei grossi vantaggi rispetto agli effetti collaterali.
Come tutti i farmaci anche gli antibiotici possono causare diversi effetti collaterali come allergie, ipersensibilità,
nausee e vomito, problemi intestinali che possono essere considerati molto limitati se paragonati agli effetti
collaterali di farmaci molto più potenti come quelli antitumorali.
Questi sono diversi perché con la terapia antibiotica si ha il vantaggio di sfruttare un bersaglio selettivo che è
presente unicamente nella cellula batterica e non in quella umana. Questo non è propriamente vero perché sono
presenti molti antibiotici che agiscono su un bersaglio che è comune anche alla cellula eucariotica ma che non
risultano comunque tossici. Questo perché?
La cellula eucariotica e quella procariotica sono molto diverse tra loro e quindi stessi enzimi che svolgono la stessa
funzione sono strutturalmente molto diversi tra le due cellule cioè sono isoforme enzimatiche, enzimi della stessa
specie che svolgono lo stesso ruolo ma che sono strutturalmente diversi.
Quindi i farmaci antibiotici sfruttano questa differenza che sussiste tra bersagli della cellula batterica e lo stesso tipo
di bersaglio della cellula eucariotica.
Un'altra grossa differenza tra batteri e cellule eucariotiche sono le attività metaboliche.
Un esempio nella sintesi dell'acido folico
L'acido folico è utilizzato dalle donne in gravidanza perché è un integratore che consente di aumentare questa
vitamina indispensabile per la sintesi di basi puriniche e pirimidiniche e quindi per la replicazione del DNA Che
chiaramente è molto attiva a livello fetale.
Noi umani lo assumiamo con la dieta o con gli integratori mentre i batteri invece lo sintetizzano.
Questo può essere uno spunto per progettare un farmaco che sia diretto contro gli enzimi del batterio che
sintetizzano l'acido folico perché comunque essi non saranno presenti nell'organismo superiore dal momento che
non è proprio prevista la sintesi di questa vitamina.

Differenze molto importanti, sia in termini strutturali della cellula e delle macromolecole che la compongono sia in
termini di attività metaboliche, ci danno la possibilità di utilizzare delle molecole che funzionino unicamente nel caso
degli enzimi o dei recettori batterici lasciando quindi non affetti gli organismi superiori.

Le classi di antibatterici sono classificate sul meccanismo di base d'azione:

 farmaci che inibiscono la sintesi della parete batterica
La parete cellulare batterica è una struttura tipica del microrganismo assente invece nelle cellule superiori e
quindi può essere un bersaglio molto sfruttato in una terapia antibatterica perché riguarda un bersaglio selettivo.
Questi tipi di farmaci sono tutti betalattamici rientrano in questa classificazione anche gli antifungini perché
anche i funghi sono caratterizzati da una parete cellulare. (comprendono cefalosporine, antifungini azolici,
cicloserina e penicillina)
 farmaci che agiscono direttamente sulla membrana cellulare del microrganismo alterandone la permeabilità e
causando fuoriuscita di composti intracellulari. Anche in questo caso parliamo di antifungini come la
amfotericina B e nistatina
 farmaci che alterano le funzioni della subunità ribosomiale 30S e 50S
Il ribosoma è l’organulo cellulare dove avviene la traduzione del RNA messaggero in proteine. Questi sono
presenti sia nella cellula eucariotica che procariotica, tuttavia sono sensibilmente diversi sia come grandezza che
come funzionalità.
I ribosomi batterici vengono definiti 70S e sono formati da due subunità 30S e 50S mentre il ribosoma eucariotico
è definito 80S.
quindi farmaci in grado di inibire la sintesi proteica attraverso il legame con il ribosoma batterico sono molto
selettivi perché sono in grado di sfruttare queste differenze strutturali tra i diversi ribosomi.
In realtà questo non è vero perché molti dei farmaci che agiscono in questo modo presentano comunque una
tossicità legati al fatto che seppure in piccola parte sono in grado di inibire la sintesi proteica degli eucarioti e
quindi arrecare dei danni (esempio:CAF)
 Farmaci che alterano il metabolismo degli acidi nucleici
 Gli acidi nucleici rappresentano materiale genetico per entrambi i tipi di cellule. questo deve essere duplicato,
trascritto e tradotto. Sfruttando la sostanziale differenza tra le varie isoforme enzimatiche dei batteri e degli
eucarioti noi possiamo bersagliare questi processi, indispensabili per la sopravvivenza della cellula batterica,
utilizzando dei farmaci che siano in grado di bloccare la replicazione del materiale genetico così come la sua
trascrizione. (comprendono le rifamicine)
 farmaci definiti antimetaboliti (sono farmaci molto utilizzati in varie classi di patologie)
Questi sfruttano un meccanismo semplice: sono molecole simili strutturalmente ai substrati endogeni e per
questo motivo sono in grado di ingannare l’enzima andandosi a sostituire al substrato endogeno. Nonostante
siano simili al substrato endogeno non sono uguali per cui la piccola differenza tra i due va a bloccare la via
metabolica nella quale questi metaboliti vanno ad interferire.
 Farmaci antivirali tra cui il covid-19

Nell’immagine sono raffigurate tutte le diverse classi di farmaci che agiscono sui diversi bersagli del batterio.

SULFAMIDICI
Sono dei chemioterapici venuti fuori attraverso una campagna sintetica, non sono molecole di origine naturale.
Sono stati farmaci molto utilizzati intorno agli anni 30 ma che oggi sono di scarso impiego, tranne che per casi
specifici, sia per un certo grado di tossicità sia perchè sono stati superati da farmaci più sicuri, maneggevoli e potenti.
Rappresentano la storia della chemioterapia antibatterica e in alcuni casi ancora oggi vengono utilizzati.

Sono stati scoperti per serendipity, cioè per caso  libro

Il prontosil è un colorante grazie all’estesa coniugazione tra l’anello aromatico, il ponte diazonio, il secondo anello
aromatico e la funzione solfonammidica che estende ulteriormente la coniugazione degli elettroni π in quanto le
strutture molto coniugate assorbono nel visibile.
METABOLISMO DEL PRONTOSIL:

Quando il prontosil veniva dato in vivo e quindi andava in contatto con enzimi presenti a livello epatico, quali le
reduttasi, il doppio legame N=N veniva idrolizzato attraverso una riduzione generando la sulfanilammide e 1,2,4
triamminobenzene.
Il prontosil rosso risultava un antibatterico grazie alla formazione della solfonilamide a seguito dell’idrolisi del doppio
legame N=N e quindi può essere considerato un profarmaco. Quindi il prontosil rosso è una molecola che di per se è
inattiva ma a seguito di un metabolismo cellulare endogeno libera il principio attivo, e nel caso specifico parliamo
della sulfanilammide, mentre la triammino benzene svolge solo un ruolo farmacocinetico ma non ha nessun tipo di
attività biologica.
La sulfanilammide appartiene ad una classe chimica, quella dei sulfamidici.
SO2NH2 è definita funzione sulfonilamidica.

Si cercò di migliorare le prestazioni della sulfanilammide e per far ciò, questo vale per ogni farmaco, è necessario
capire il meccanismo d’azione.

MECCANISMO D’AZIONE
I sulfamidici sono inibitori dell'acido folico, una vitamina necessaria per la crescita della maggior parte degli
organismi viventi e indispensabile per la sintesi delle basi puriniche pirimidiniche di alcuni aminoacidi essenziali come
serine e metionina.

Innanzitutto, cosa fa il THF nella cellula? IL SUO RUOLO

Il tetraidrofolato reagisce con un enzima definito formimino transferasi che è capace di trasferire un’unità
formiminica all’acido folico infatti l’N 5, grazie alla reazione con questo enzima, viene accoppiato con un residuo
formiminico.
Un composto ad un atomo di carbonio è derivato del formile e siccome questo carbonio è unito da un doppio
legame ad una funzione amminica, e quindi è un immina, si chiamerà formimino.
L’N5-Formiminotetraedrifolato, che si è formato, subisce una reazione intramolecolare a causa dell’N che si trova in
catena laterale. Questo azoto è uno dei punti che poi verrà messo in discussione quando prendiamo in
considerazione gli antifolici come il trimetoprim in quanto questa zona è indispensabile per il meccanismo di
attivazione dell’acido folico perché è proprio grazie al doppietto di questo N che viene effettuato un attacco
nucleofilo sul C imminico, in equilibrio con la sua forma aldeidica.
Questa reazione porta alla formazione di un composto intermedio tetraedrico dove si è formato un ciclo
intramolecolare a 5 termini che successivamente subisce un altro processo di trasferimento elettronico, perdita di
acqua e formazione nuovamente di un legame imminico N-C all’interno del ciclo a 5.
Questa forma dell’acido folico, definita N5-N10-metenil-tetraidrofolato, è la forma biologicamente attiva in grado di
trasferire un’unità carboniosa al suo substrato nella biosintesi delle basi puriniche pirimidiniche e di alcuni
amminoacidi.

TRASFERIMENTO UNITA’ CARBONIOSE

Quando subentra un nucleofilo con l’NH2, esso può facilmente attaccare il C imminico poiché esso è molto δ+ e
quindi si passa attraverso un addotto in cui al THF è legata sia l’ammina che il residuo imminico; questo composto
poi evolve andando ad aprirsi rilasciando l’NH fondamentale per l’attivazione. Si forma un intermedio tetraedrico
che riarrangia, quindi si ha un ulteriore movimento elettronico, per formare un doppio legame N-C che facilmente
viene idrolizzato.
In questo modo viene rilasciata l’ammina entrata precedentemente con un’unità carboniosa in più che deriva
dall’acido folico.
Questo è il meccanismo con cui biologicamente all'interno della cellula vengono addizionate unità carboniose
durante la biosintesi di alcuni substrati come le basi azotate che sono indispensabili per la sintesi di DNA.
È grazie al THF, che trasporta queste unità carboniose sotto forma di gruppi formiminici che vengono poi, attraverso
vari meccanismi di riarrangiamento intramolecolare, ceduti a nucleofili che quindi si accrescono di un’unità
carboniosa.
Si capisce in questo modo che il THF è indispensabile all’interno della cellula e che in assenza di questo cofattore
enzimatico non si potrebbero sintetizzare moltissime macromolecole biologiche.
Mentre i batteri sono in grado di sintetizzare l'acido folico all’interno della loro cellula, gli organismi superiori sono
indipendenti dall’alimentazione per l’assunzione dell’acido folico. Esso è contenuto all'interno della carne, della
verdura a foglie verdi, delle cipolle, del latte.

Cosa succede nei batteri? FORMAZIONE ACIDO FOLICO

A partire da 6-idrossi-diidropterina si ha una cascata di reazioni che porta alla sintesi di acido folico.
La prima reazione, catalizzata dall'enzima 6-idrossi metil- diidropterina pirofosfato chinasi, consiste nell’addizione di
due unità fosfato all’OH alcolico primario della pterina con formazione del 6-idrossimetil-diidropterina pirofosfato.
L’addizione di 2 unità fosfato è molto frequente nelle tappe biosintetiche e metaboliche perché l’OH non è un buon
gruppo uscente e quindi per sostituire l’Oh con un altro gruppo è necessario convertirlo in un ottimo gruppo uscente
e si considera quasi sempre il fosfato. Esso oltre ad essere un buon gruppo uscente è molto abbondante nella nostra
cellula.
La reazione successiva consiste nella condensazione con l’acido paraammino benzoico, detto PABA. Esso viene
coniugato al CH2 del pterina con la fuoriuscita del difosfato attraverso una reazione catalizzata dal diidropteroato
sintetasi (DHPS) formando il diidropteroato.
Quest’ultimo, a sua volta, viene accoppiato con un residuo di acido glutammico (questo è un amminoacido naturale
presente anche nei batteri) al carbossile dell’acido paraammino benzoico grazie all’enzima diidrofolato sintetasi
(DHFS).
Ne viene così fuori il diidrofolato, che non rappresenta ancora la forma attiva dell’acido folico.
Il doppio legame (cerchiato sul libro) andrebbe ad ostacolare l’aggiunta di quel residuo formiminico e quindi è
importante ridurre questo doppio legame N-C per formare il tetraidrofolato. Questa reazione di riduzione è
catalizzata dall'enzima definito diidrofolato reduttasi (DHFR); esso esiste sia nei microbi sia negli organismi superiori,
perché quest'ultimi che assumono acido folico dall'esterno necessitano comunque di ridurlo per formare il
tetraidrofolato, nonostante siano due isoforme diverse.
DOVE AGISCONO I SULFAMIDICI?
Agiscono bloccando la tappa biosintetica catalizzata dalla diidropteroato sintetasi che riguarda la coniugazione con il
PABA sul 6-idrossimetil- diidropterina pirofosfato per formare il diidropteroato.
Esistono diversi tipi di inibizione enzimatica: competitiva, che si verifica, da parte di un farmaco, quando vi è una
competizione del farmaco con il substrato endogeno per legare il sito attivo, e allosterica.

Il tipo di inibizione che riguarda i sulfamidici è quella competitiva.

Nell'immagine sono messi a confronto il PABA con le interazioni che forma con l’enzima diidropteroato rispetto alla
sulfanilammide che è il capostipite di questa classe di farmaci che agisce come inibitore competitivo dell'acido
parammino benzoico.
L'enzima diidropteroato sintetasi non è in grado di discriminare tra il PABA, suo substrato endogeno, e la
sulfanilammide, farmaco.

Quindi esso va a legare la sulfanilammide al posto del PABA e il suo sito catalitico rimane impegnato dal farmaco e
non più disponibile per il substrato endogeno. Questo provoca che tutto il meccanismo biosintetico si blocca in
quanto anziché il COO- ci sarà SO2NH2, il gruppo del sulfamidico e l’SO2H2 non può essere accoppiato con l’acido
glutammico, non è una reazione chimicamente accessibile e quindi la biosintesi del tetraidrofolato si blocca a questo
livello.
Come risultato finale non si ha la formazione dell’acido folico, indispensabile per la sintesi delle molecole biologiche.

Quali sono le interazioni chimiche che si verificano tra l’enzima e il substrato e che quindi devono essere mimate dal
farmaco?
Infatti, con l’inibizione competitiva noi dobbiamo stabilire tra il farmaco e l’enzima Le stesse interazioni, se non più
forti, che l’enzima stabilisce con il substrato.
Le interazioni sono l’NH2 del PABA che forma un legame H con il sito attivo e quindi in questa regione dell’enzima ci
deve essere un amminoacido in grado di formare dei legami H con l’NH2.
Per il farmaco, lo stesso NH2 aromatico che forma lo stesso tipo di interazione e quindi non cambia niente per
l’enzima.

L’anello aromatico forma legami di van der waals e più nello specifico legami π, interazioni elettroniche che si
instaurano grazie alla nube di elettroni che circola negli orbitali π.
Avendo due molecole di benzene, molecola planare, gli elettroni π possono interagire con altri sistemi di elettroni π
presenti in altri anelli aromatici e quindi le 2 molecole di benzene si dispongono in modo parallelo tra loro e si ha una
parziale sovrapposizione degli orbitali nella parte apicale e questo genera un legame debole.
Essendo un anello benzenico quindi, sia dell’acido parammino benzoico sia della sulfanilammide, esso formerà
queste interazioni con un amminoacido aromatico.
Anche l’anello arilico non fa differenza

Dov’è che cambia la molecola?

Nella porzione a destra dove il substrato endogeno presenta COO-, carbossile deprotonato a ph fisiologico, che
formerà un legame ionico con una carica positiva.
Nella sulfanilammide avremo SO2NH2 che presenta una carica negativa, che è delocalizzata sulla funzione
solfonammidica (nell’immagine è riportata sull’O ma può essere presente anche sull’N se esso si deprotona
diventando N-), formando il legame ionico con l’opportuno amminoacido mutuando quello che normalmente viene
formato dal carbossilato dell’acido parammino benzoico.
Questa è l’unica differenza tra il substrato endogeno e il farmaco ma di fatto l’enzima non bada a ciò essendo
comunque presente allo stesso modo una carica negativa.
Quello che è importante per l’enzima è l’entità della carica negativa perché essa dipende dal pka del PABA e della
solfonammide e cioè il pka deve essere simile per poter dare la stessa entità di dissociazione.
La sulfonilammide ha un pka molto diverso rispetto a quello del PABA ed è per questo motivo che la sulfonilammide
funzionava per metà, perché la carica negativa sulla funzione solfonammidica della sulfonilammide non era così
spinta come quella del PABA.
La pka dell’acido parammino benzoico è di 4.9 mentre quella della sulfonilammide è di 10.5 e quindi sono 5 ordini di
grandezza diversi e vuol dire che la dissociazione dell’acido parammino benzoico è 100 mila volte maggiore della
dissociazione della sulfonilammide motivo per cui essa non funziona bene.

Capito questo subentra il chimico farmaceutico. Cosa si può fare per migliorare l’attività della sulfanilammide?
Devo rendere il pka di essa quanto più simile al pka del substrato endogeno e per fare questo devo rendere quel H
più acido.
Vicino all’H vado a metterci un sistema coniugato e aromatico che sia in grado di stabilizzare la carica negativa che si
forma su quel N al momento della deprotonazione; l’acidità di quel H è tanto maggiore quanto più stabile sarà la sua
base coniugata.
Affiancandoci quindi un sistema coniugato e aromatico la carica negativa viene delocalizzata e questo succede con
tutti i sulfanilammidici che sono venuti dopo la sulfanilammide.
Tutti i sulfanilammidici presentano legati al N sulfonammidico un eterociclo aromatico in grado di delocalizzare una
carica negativa.
Nel momento in cui questo N si deprotona la carica negativa è stabilizzata per risonanza su tutto l’eterociclo e quindi
l’anione risulta stabile e di conseguenza quel H risulterà più acido perché si può allontanare facilmente generando
una base coniugata stabile.
Non solo io ho reso il pka dei sulfamidici simile a quello del substrato endogeno ma ho aggiunto una porzione
lipolifila che va a formare interazioni aggiuntive, interazioni di van der waals, con il target andando quindi a
potenziare il legame e renderlo più stabile rispetto a quello che formava con il PABA.

RELAZIONI STRUTTURA-ATTIVITÀ
I sulfamidici sono molecole estremamente semplici e possiamo dedurre che andando a variare la funzione
solfonamidica con una funzione carbonilica o ammidica l’attività diminuisce perché l’acidità del H diminuisce e quindi
diminuisce la carica negativa indispensabile per la formazione del legame ionico.
Quando noi parliamo di interazioni vi riferiamo a interazioni deboli ma tra di esse avremo qualche interazione più
forte tra cui la ionica rispetto a quella di van der waals e legame H. Essa è responsabile generalmente dell’affinità,
cioè il primo legame che si forma tra il farmaco e il substrato e l’enzima e poi subentrano le altre interazioni.
Andando a sostituire la funzione solfonammidica con una funzione meno acida non porta bene.

Nell’immagine la funzione solfonammidica è sostituita con un parammino benzen solfone; la molecola che si va a
formare prende il nome di dapsone e mantiene l’attività ed è uno dei farmaci di prima scelta per il trattamento della
lebbra.
L’anello aromatico inoltre non deve essere sostituito nelle posizioni 2,3,5 e 6 ma libero perché nella tasca enzimatica
non c’è spazio. Questo si può dedurre perché l’anello aromatico forma interazioni π-π e sarà tanto più forte quanto
sull’anello aromatico è presente una specie elettron attratore come l’alogeno, ma se non posso metterlo perché
peggiora l’attività vuol dire che non c’è spazio per accogliere l’alogeno.
La funzione anilinica deve essere libera ai fini dell’attività però possiamo preparare dei profarmaci e quindi
migliorare le caratteristiche farmacocinetiche del nostro sulfamidico andando a sostituire uno dei due H dell’ammina
con buoni gruppi uscenti altrimenti deve risultare libero perché l’ammina risulta importante per le interazioni.

LEZIONE 4/11
Quali sono i sulfonilamidici?
Sono farmaci entrati in disuso perché non hanno un’efficacia così alta come i successivi antibiotici che sono entrati
nella terapia antibatterica; nonostante ciò, alcuni di essi sono rimasti capisaldi della terapia antibatterica soprattutto
in associazione ad altri farmaci.

La classificazione dei sulfamidici, che avviene sulla funzione sulfonilamidica, si basa sulla capacità che i gruppi legati
alla solfonilamide hanno di formare legami H. Questo perché questa capacità va ad influenzare la farmacocinetica
della molecola e quindi influenza la durata d’azione, la via di escrezione che a loro volta condizionano dei parametri
importanti relativi al tipo di infezioni per la quale si utilizza il sulfamidico.
La prima classe dei sulfamidici sono quelli che contengono gruppi donatori di H (NH2), questi vengono facilmente
assorbiti.
 La sulfaguanidina è uno dei sulfamidici che presenta dei gruppi guanidicinici in grado di donare legami H;
Questi sulfonilamidici non hanno un buon assorbimento, se vengono somministrati per via orale non
passano nel sangue attraverso l’apparato gastrointestinale ma arrivano direttamente a livello renale dove
vengono escreti.
(è come se somministrassimo il farmaco per via orale ma non arriva a livello sistemico ma viene direttamente
escreto a livello dei reni)
Una buona possibilità è quella di utilizzare i sulfonilamidici per infezioni localizzate nel basso tratto gastrointestinale
perché esso comunque è il tragitto del farmaco all’interno dell’organismo senza che venga assorbito. Ad esempio, la
sulfaguanidina è molto utilizzata come sulfamidico intestinale sfruttando la capacità che il farmaco ha di arrivare
quasi inalterato all’intestino senza subire un granchè di assorbimento sistemico.

 La sulfasalazina è un farmaco impiegato in una particolare malattia infiammatoria, colite ulcerosa e il morbo
di crohn (uno dei pochissimi farmaci utilizzati, essendo queste malattie autoimmuni hanno una terapia
basata su cortisonici).
La sulfasalazina subisce un metabolismo riduttivo in
corrispondenza del legame N-N liberando la sulfapiridina e
l’acido 5-amminosalicilico; la sulfapiridina agisce come
sulfamidico e quindi per eventuali infezioni batteriche mentre
l’acido 5-amminosalicilico è un antinfiammatorio non
steroideo molto utile nel trattamento di patologie a carattere
prettamente infiammatorio.

La seconda classe di sulfamidici sono quelli che contengono gruppi indifferenti nei confronti dei legami H (gruppi
alchilici) e quindi gruppi che non interagiscono con la loro parte eterociclica aggiuntiva e che vengono ben assorbiti
ma rapidamente eliminati. Questi si concentreranno a livello dell’apparato escretorio renale dove è sede di
particolari infezioni batteriche che sono proprio le infezioni alle vie urinarie.
I sulfamidici sono tra i farmaci di elezione utilizzati nel trattamento delle infezioni delle vie urinarie. Sono molti i
batteri che possono causare questo tipo di infezioni e ci sono molti farmaci predisposti per il trattamento di questo
particolare tipo di infezione tra cui i sulfamidici, i chinolonici, la nitrofurantoina.
I farmaci impiegati a questo scopo sono il sulfatiazolo e il sulfafurazolo
(strutture da sapere)

Il terzo gruppo di sulfamidici è caratterizzato da gruppi in grado di accettare i legami H (tipicamente la funzione
metossilica CH3O). Questi sulfamidici vengono facilmente assorbiti ma eliminati lentamente, ottimo per
l’assorbimento sistemico del farmaco.
Includono quelli che vengono impiegati per il trattamento delle infezioni batteriche sistemiche.
Abbiamo la sulfadimetossina e la sulfametossipiridazina.

Tabella con la schematizzazione delle

caratteristiche chimico-fisiche del sulfamidico e
quindi della capacità che ha di formare legami H
rispetto alla sua farmacocinetica e quindi
all’utilizzo clinico che ne è stato effettuato.
Qui sono rappresentati molti dei sulfamidici utilizzati:
 solfonilamide che è la capostipite, molecola derivante dall’idrolisi del prontosil rosso da cui è partita tutta
l’indagine farmaceutica su questa classe di farmaci che ha portato all’individuazione di numerosi antibiotici
impiegati in terapia ma ad oggi caduti per la maggior parte in disuso.
 Solfacetamide presenta al posto del NH2 della solfonamide NHCOCH3. È un sulfamidico urinario, molto solubile
utilizzato per tipi di infezioni localizzate che vengono causate da batteri gram – che si annidano a livello del tratto
urinario.
 Sulfaguanidina, è un sulfamidico che non viene assorbito perché è in grado di formare legami di donazione di H e
trova applicazioni come antisettico intestinale
 Suldadiazina presenta una emivita di 17 ore
 Sulfamerazina
 Sulfaperina
 Sulfadimidina
 Sulfadimetossina
(da sapere i primi 4)

 Sulfametossipiridazina ha una emivita che va dalle 35 alle 40 ore, quindi, è un sulfamidico sistemico grazie alla
presenza di un gruppo in grado di accettare legami H
 Sulfametossipirazina è molto simile alla precedente ed è definito un reggio isomero della sulfametossipiridazina.
(reggio isomeri: molecola con la stessa formula bruta ma varia la disposizione degli atomi o dei gruppi funzionali)
 Solfafurazolo
 Sulfametossazolo (da sapere): è in utilizzo ed è molto importante perché rappresenta la principale associazione
tra farmaci antibiotici che viene impiegata in terapia
 Sulfatiazolo
 Sulfametazolo è molto simile al precedente ma presenza un N in più sull’anello eterociclico e un CH3
(da sapere tutti)
Qui abbiamo la CLASSIFICAZIONE DEI SULFAMIDICI IN BASE ALLA LORO EMIVITA.

Se l’emivita del farmaco è maggiore delle 24 ore lo consideriamo un farmaco ritardo, cioè un farmaco che espleta il
suo effetto farmacologico in un tempo estremamente lungo.
Se invece l’emivita è compresa tra le 10 e le 24 ore si tratta di un sulfamidico semi-ritardo mentre quelli ad
eliminazione rapida parliamo di un’emivita compresa tra le 4 e le 7 ore.

Qui sono rappresentati i più importanti sulfonamidici utilizzati in

clinica
Sulfametossazolo, sulfadiazina, sulfadiazina argentica, sulfisoxazolo,
l’acetil sulfisoxazolo è un profarmaco sul N anilinico e la
sulfacetamide
L’obiettivo nella sintesi di questi farmaci è quello di rendere la dissociazione del gruppo acido, quindi della
solfonamide, quanto più simile possibile a quella del substrato endogeno e quindi bisogna far si che il pka della
funzione solfonamidica deve essere modulato per renderlo il più simile possibile al pka del PABA.
Nella maggior parte dei casi il valore di pka oscilla tra 5.5 e 6.5 per la maggior parte dei sulfamidici.

CARATTERISTICHE GENERALI DEI SULFAMIDICI

La tossicità di questa classe di farmaci è una tossicità selettiva poiché il loro bersaglio è tipicamente batterico e di
conseguenza non ci saranno reazioni collaterali nell’ospite dovute ad un’inibizione aspecifica dello stesso target;
questo rappresenta la sicurezza del farmaco.
Un altro vantaggio dei sulfamidici è la presenza di uno spettro antimicrobico molto ampio e comprende tutte le
specie batteriche che sono sensibili al trattamento con quel farmaco. Nel caso dei sulfamidici, sono attivi sia contro i
gram – che con i gram +.

REAZIONI AVVERSE
Tuttavia, aldilà della questione sulla tossicità selettiva, i sulfamidici possono dare reazioni avverse a carico di
numerosi organi e sistemi come sangue, midollo osseo, pelle, reni, fegato, sistema nervoso ma anche la cristalluria
dovuta alla scarsa solubilità di alcuni esponenti delle urine e quindi la loro tendenza a precipitare e formare cristalli
diurato che causano calcoli. Più frequentemente reazioni di ipersensibilità di pelle e mucose, la più seria tra queste è
la sindrome di steven johnson.

FARMACOCINETICA E RESISTENZA
I sulfamidici hanno una buona farmacocinetica. Molti di questi sono anche caratterizzati da uno spettro molto ampio,
danno pochi effetti collaterali perché non si ha il problema delle tossicità selettiva.
Quindi perché allora sono caduti in disuso?
Per un problema molto importante nell’ambito degli antibiotici. Gli antibiotici sono farmaci che appena immessi nel
mercato hanno rappresentano un importante svolta perché è grazie ad essi che l’aspettativa di vita è salita
vertiginosamente ma è proprio questo che ha determinato il principale problema di questi farmaci cioè la
farmacoresistenza.
I batteri diventano resistenti perché nonostante siano organismi unicellulari sono i primi ad aver popolato il nostro
pianeta e quindi in grado di adattarsi. Così come si sono adattati a tutto il cerchio evolutivo allo stesso modo si
adattano anche al farmaco che minaccia la loro sopravvivenza.
Il batterio nel momento in cui viene a contatto con il farmaco è in grado di generare dei meccanismi di resistenza che
poi si trasmettono da generazione a generazione selezionando quei cloni che sono resistenti e che sono
evolutivamente migliori perché in grado di resistere al farmaco.
I meccanismi di resistenza sono molteplici. Tra i più comuni abbiamo:
- Sviluppo di DHPS con diminuita affinità per i sulfamidici: i l batterio può mutare in corrispondenza del sito
attivo del target. Se il mio farmaco è progettato per riconoscere quella regione di enzima che normalmente è
predisposta per riconoscere il PABA e il batterio muta, anche solo un amminoacido, in quella regione c’è una
buona probabilità che il farmaco non riconosca più quella regione.
- Superproduzione di PABA
Il batterio, laddove si tratta di un’inibizione competitiva, cosa può fare per superare questa competizione?
Produce più substrato.
Nel caso dei sulfamidici, viene superprodotto il PABA fino ad una quantità molte decine di volte superiore
rispetto a quella fisiologica e quindi il sulfamidico è in minoranza; di conseguenza tutta la via metabolica
catalizzata da diidropteroato sintetasi non si ferma.
- Diminuita permeabilità cellulare dei batteri
 Sapendo che i batteri sono protetti da pareti cellulari, ed eventualmente membrane esterne, il cui farmaco
può attraversare attraverso sistemi di trasporto, il batterio può mutare in corrispondenza di questi sistemi di
trasporto e questo significa che se muta questo sistema di trasporto il farmaco può non riconoscerlo più e
quindi rimane fuori
- Accresciuta inattivazione del farmaco (questo riguarda gli antibiotici betalattamici).
Il batterio si può difendere attraverso la produzione di enzimi specifici che vengono diretti unicamente
all’inattivazione del farmaco, cioè questo batterio riproduce solo e unicamente per proteggersi dal farmaco
attraverso una sua inattivazione enzimatica.
Questi meccanismi di resistenza da cosa derivano? Dal fatto che il batterio, a furia di entrare a contatto con
quell’antibiotico, ad un certo punto inizia a mettere in atto questi meccanismi di resistenza.
I batteri non resistenti vengono uccisi dall’antibiotico mentre quelli resistenti sopravvivono, si duplicano e generano
cloni, una nuova popolazione di batteri resistenti a quel tipo di antibiotico. Questo perché le modificazioni genetiche
si trasmettono di generazione in generazione e, considerato che i sulfamidici sono tra i primi farmaci che sono stati
messi sul mercato e quindi sono stati utilizzati su larga scala, è chiaro anche che sono i farmaci per il quale i batteri
hanno sviluppato principalmente resistenza.
Quando vengono utilizzati antibiotici in maniera inappropriata, oltre a sviluppare facilmente ceppi batterici resistenti
si diventa anche più sensibile alle infezioni batteriche perché gli antibiotici non soltanto vanno ad arrestare la
crescita dei batteri patogeni ma agiscono anche sui batteri nostri simbionti che sono fondamentali per lo sviluppo del
sistema immunitario. Quando abusiamo della terapia antibiotica impoveriamo il nostro sistema immunitario perché
andiamo ad attaccare la flora intestinale e quindi quando si utilizza un antibiotico bisognerebbe avere il riguardo di
utilizzare i fermenti lattici in associazione.

METABOLISMO
I sulfamidici vengono metabolizzati attraverso un processo di glucuronazione, metabolismo di fase II. La
glucuronazione avviene sul N primario aromatico, cioè addizione di un gruppo glucuronico e normalmente questi
glucuronati vengono eliminati per via renale.
La velocità con cui viene addizionato il residuo di acido glucuronico determina la durata d’azione del farmaco.

VANTAGGI
Quali sono i vantaggi di questa classe di antibiotici?
- Ampio ventaglio di proprietà farmacologiche, cioè alcuni li usiamo nelle infezioni urinarie, alcuni nelle
infezioni intestinali, quali nel morbo di crohn, altri per le infezioni sistemiche. Questo vuol dire che una
stessa classe di farmaci può essere impiegata per molteplici tipi di infezioni.
- Non interferiscono con i processi biologici dell’ospite. (tossicità selettiva)
- Facilità di somministrazione, principalmente avviene per via orale
- Ampio spettro di attività antimicrobica che comprende i gram + e i gram –
- Rari casi di superinfezioni
- Poco costosi

ASSOCIAZIONE SOLFAMETOSSAZOLO-TRIMETOPRIM IN COTRIMOSSAZOLO

Tra i sulfamidici più importanti in terapia è presente il solfametossazolo. Il motivo per cui questo farmaco è uno dei
pochi rimasti in commercio è dovuto al fatto che viene somministrato in associazione con un altro antibiotico ovvero
il trimetoprim.

Quest’ultimo viene co-somministrato al solfametossazolo in un’associazione il cui nome è cotrimossazolo

(commercialmente è chiamato bactrim) ed è molto impiegato per il trattamento di numerosissime infezioni sia
gastrointestinali, respiratorie, alle vie urinarie.
Perché proprio questa associazione?
L’associazione, come concetto generale, si fa per due motivi:
 - Per potenziare la sua funzione e lo si fa attraverso il sinergismo: facendo la sommatoria dell’effetto dell’uno
e dell’altro singolarmente il sinergismo si verifica quando l’effetto dei due farmaci insieme è maggiore della
sommatoria degli effetti singoli. Ciò vuol dire che di fatto si ha un vantaggio co-somministrando entrambi.
Il sinergismo si ottiene quando andiamo i due farmaci che andiamo ad associare agiscono sulla stessa via
metabolica in due punti diversi.
Considerano la sintesi dell’acido folico in cui subentrano molti enzimi importanti tra cui la diidropteroato
sintetasi, target dei sulfamidici, e la diidrofolato reduttasi che si occupa di ridurre i doppi legami dell’acido
folico.
Utilizzando contemporaneamente due farmaci di cui uno inibisce la diidropteroato sintetasi e l’altro inibisce
la diidrofolato reduttasi, si va a stroncare in maniera definitiva la sintesi di acido folico per il batterio e di
conseguenza la vita del batterio perché esso senza l’acido folico non può sintetizzare il suo materiale
genetico.
- Considerando il problema della resistenza, se un ceppo batterico sviluppa resistenza al sulfamidico e io co-
somministro solfamidico e trimetoprim seppure il target del sulfamidico diventi insensibile al farmaco ho
comunque un paracadute, l’enzima che viene a valle in quanto è improbabile che il ceppo batterico abbia
resistenza a tutte e due gli enzimi

Il solfametossazolo agisce sulla diidropteroato sintetasi mentre il trimetoprim agisce sulla diidrofolato reduttasi
Tra tutti i sulfamidici che sono stati sintetizzati perché proprio il solfametossazolo?
Per motivi farmacocinetici, i due farmaci in qualche modo devono condividere la stessa farmacocinetica.
Si somministrano 400 mg di solfametossazolo e 80 mg di trimetoprim perché quest’ultimo è molto più attivo del
solfamidico.
Per avere un meccanismo di sinergismo perfetto ci deve essere un rapporto 1:20 quindi il sulfamidico è meno
potente rispetto al trimetoprim. Io vado a somministrare 80 mg contro 400 mg, quindi un rapporto 1:5 perché in
vivo, a seguito dell’assorbimento e della distribuzione, il rapporto tra i due farmaci diventa di 1:20 ovvero quello
ottimale per avere il sinergismo.
Inoltre, il sulfametossazolo è stato scelto per motivi farmacocinetici, infatti i due farmaci insieme condividono
l’emivita che è di circa 10-11 ore.

Tappa biosintetica che viene inibita dal trimetoprim

Dopo averlo coniugato con l’acido glutammico per formare il diidrofolato il doppio legame N-C deve sparire perché
quel N è quello su cui viene trasferito il gruppo formiminico, che poi viene processato per essere ceduto alle ammine
biogene nella fase di allungamento della catena.
La diidrofolato reduttasi catalizza proprio questa tappa enzimatica e il trimetoprim è un inibitore di questo enzima.
TRIMETOPRIM
Il trimetoprim è più recente rispetto ai sulfamidici, risale agli anni 60. È un farmaco di sintesi ed è stato ottenuto con
l’obiettivo di creare una tossicità selettiva sfruttando delle differenze strutturali che esistono tra l’isoforma
enzimatica del batterio, diidrofolato reduttasi, e l’isoforma enzimatica dell’uomo.
Mentre il sulfamidico ha un bersaglio tipicamente batterico, la diidropteroato sintetasi, nel caso del trimetoprim, la
diidrofolato reduttasi è un enzima che interviene anche nel nostro organismo per convertire l’acido diidrofolico in
acido tetraidrofolico perché noi dagli alimenti o dagli integratori assumiamo l’acido folico che deve essere ridotto
diidrofolico e tetraidrofolico utilizzando la diidrofolato reduttasi. Quindi questo enzima esiste anche nelle nostre
cellule e quini si deve impedire che il farmaco, insieme all’enzima batterico, vada ad inibire anche l’enzima cellulare.
Questo causerebbe un grosso problema perché l’acido folico è per noi indispensabile.
Le isoforme batterica e cellulare presentano comunque grosse differenze e per il farmaco è possibile sfruttare queste
differenze in modo da avere selettività per una isoforma piuttosto che per un’altra.
Nel caso del trimetoprim si ha una selettività dalle 20000 alle 60000 volte più elevata nei confronti dell’isoforma
batterica, di conseguenza all’organismo superiore non arrecherà molti effetti collaterali perché i suoi processi
metabolici vengono preservati.

Questo tipo di associazione farmaceutica è utilizzato per: bronchiti, polmonite, infezione alle vie urinarie, otiti,
infezioni causate da nocardia e salmonella e come trattamento nella toxoplasmosi.

Il sinergismo consente:
- una riduzione ottimale delle dosi efficaci
- aumento dell’efficacia
- migliore tollerabilità
- ritardiamo la comparsa di resistenza

Gli effetti collaterali dell’associazione sono: nausea, vomito, reazioni dermatologiche (allergie) e leucopenia,
trombocitopenia, depressione e allucinazioni in casi più gravi

Questo tipo di associazione è usata anche in pazienti immunodepressi, malati di AIDS contro pneumocystis carinii, un
protozoo responsabili della polmonite.

Un’associazione basata su antifolico e sulfamidico si usa anche per la malaria ed è definita FANSIDAR. È costituito
dalla pirimetamina, inibitore della diidrofolato reduttasi e la sulfodoxina, sulfamidico inibitore della diidropteroato
sintetasi. Quest’associazione non viene impiegata per le comuni infezioni batteriche ma molto utilizzata per la
malaria in quanto anche il protozoe della malaria è sintetizzatore di acido folico.