Estrazione del DNA Obiettivo: Estrarre la molecola del DNA da una banana
Cenni teorici L’acido desossiribonucleico o anche chiamato DNA è la macromolecola presente nel nucleo della cellula di ogni individuo avente il compito di contenere le informazioni genetiche e garantire il corretto funzionamento dei processi che avvengono in ogni singolo organismo.
Base azotata
Il DNA è composto da due filamenti avvolti a doppia elica,
questi filamenti detti polinucleotidici poiché formati dai nucleotidi. Un nucleotide è composto da una base azotata Gruppo fosfato (rivolta verso l’interno della doppia elica), un gruppo fosfato (OPO3-)e un desossiribosio (C5H10O4) ovvero uno zucchero pentoso formato da 5 atomi di carbonio, I nucleotidi possono essere di 4 tipi, essi si Desossiribosio distinguono in base al tipo di base azotata di cui sono composti tra adenina e guanina che sono delle
purine, formate da un singolo anello, e timina e citosina che sono delle pirimidine, formate da un doppio anello.
I due filamenti sono tenuti insieme proprio
dalle basi azotate le quali si legano tra loro sempre secondo schemi fissi detti di complementarità: I due filamentil’adenia si lega sono anche sempre ovvero antiparalleli, alla timina uno deimediante due legami due filamenti ad il carbonio 3’ inizia con idrogeno dove mentre la guanina è presente un grupposi lega OH esempre termina con alla citosina mediante tre legami a un carbonio 5’ quindi va in direzione 3’-5’ idrogeno. l’altro invece inizia con un carbonio 5’ e termina con un carbonio 3’ e va in direzione 5’- 3’ Bromelina: è un enzima che si trova all’interno dell’ananas, questo enzima è dotato di attività proteolitica ovvero è capace di degradare i legami della catena proteica rompendo il legame peptidico tra gli amminoacidi mediante una reazione di idrolisi. Utilizziamo la bromelina per questo esperimento in quanto creerà un ambiente acido e sarà in grado di allontanare le proteine in quanto
Materiali e sostanza utilizzate
➣Banana; succo d’ananas, sale da cucina(NaCl), sapone per piatti, acqua, etanolo (CH 3CH2OH). ➣ becher, bagnomaria, provette, bacchetta di vetro, pestello e mortaio, imbuto, carta da filtro, cilindri graduati, contenitore, ghiaccio;
Procedimento 1°fase: Demolizione delle membrane: Per liberare il DNA contenuto nelle cellule di una banana è necessario demolire le membrane cellulare, dato che esse sono composte da fosfolipidi possono essere sciolte utilizzando il detersivo, mentre per facilitare l’eliminazione delle proteine su cui è avvolto il DNA aggiungiamo invece il sale. Diluiamo quindi 3g di sale in 100ml di acqua all’interno di un cilindro graduato e aggiungiamo 10 ml di sapone, agitando con una bacchetta. Nel frattempo, tagliamo una banana a fette e pesiamone circa 100g.
2° fase: Allontanamento delle proteine:
Aggiungiamo poi alla banana schiacciata la soluzione preparata
in precedenza e portiamo a bagnomaria a 60° per 15 minuti questo perché l’alta temperatura servirà per accelerare il processo e per disattivare gli enzimi che potrebbero degradare il DNA e ci impedirebbero di riconoscerlo. Una volta pronta la soluzione, la lasciamo raffreddare in un contenitore contenente del ghiaccio e di tanto in tanto agitiamo con una bacchetta. 3° fase: DNA disidratato
Prepariamo un filtro con un imbuto e carta da filtro su un cilindro
graduato e filtriamo la poltiglia, prendiamo poi 5 ml del filtrato e lo mettiamo in una provetta. A questo punto versiamo l‘etanolo o alcol nella provetta il quale viene utilizzato per rendere visibile il DNA in quanto è insolubile nel alcol.
lasciamo poi riposare per un minuto per consentire al DNA di
raccogliersi
Conclusione: Il DNA essendo insolubile in alcol precipita, formando un ammasso biancastro di filamenti nella parte superiore della provetta
