Diafanização de tecidos moles e coloração do tecido ósseo pelo vermelho

de alizarina

Material necessário:

Anestésicos:
* Éter Sulfúrico
* Gelo
* Benzocaína

Fixador:
* Formol a 10%

* Hidróxido de Potássio (KOH)

* Álcool 92%

Corantes:
* Vermelho de Alizarina
* Alizarina P.A.
* Alizarina Red S.(para ossos e cartilagens)

* Glicerina (bem transparente, vidro âmbar (escuro))

* Timol/ Canfora (fungicida
* Luvas Cirúrgicas
* Pinças de ponta fina
* Pinças dente de rato
* Frascos plásticos de tamanhos diversos
* Linha de nylon transparente nº 10
* Laminas cortantes

Procedimento técnico:

1- Morte dos animais:

- Mamíferos, aves, répteis. (éter sulfúrico ou outros)

- Anfíbios. (gelo)
- Peixes. (gelo, benzocaína, MS 222 (anestésico p/ peixes), ou outros)

Obs: ñ danificar a carcaça!!!

2- Fixação:
- Formol a 10%

Mamíferos e outros: 3 dias

Peixes: 1 dia

• Os animais devem permanecer totalmente imersos na solução

fixadora.
• Esta deve ser injetada nos orifícios naturais.
• Colocar os animais em recipientes que não deformam sua posição
natural.

3- Ablação da pele:

• Em embriões e fetos, realizada após passagem dos espécimens pelo

álcool absoluto, feito de maneira cuidadosa, não lesando tecidos
profundos.

Obs: Em regiões de difícil acesso, não efetuar o processo.

4- Evisceração e retirada dos olhos:

• Realizada através de pequena incisão abdominal, retirando-os

fragmentos de todos os órgãos cuidadosamente com uma pinça.
• Animais de boca grande como sapos, rãs e pererecas, retirar os
órgãos pela boca.

5- Retirada de tecido adiposo:

• Feito de maneira cuidadosa, retirando-se tecido adiposo marrom e

branco (amarelo) não lesando tecidos profundos.

6- Desidratação:

- Álcool 95% por 4 dias

- Álcool absoluto por 3 dias

Obs: Se necessário trocar o álcool diariamente. Peça bem desidratada tem

cor bastante pálida.

7- Maceração I:
 • Imersão em solução de KOH a 2% por tempo indeterminado cuja
variação depende da idade e tamanho do espécimen trabalhado.
• Renovar a solução sempre que observado acumulo de resíduos
teciduais.
• Observação constante evitando-se perda do material.
• Maceração suficiente quando observa os ossos através dos tecidos.

Obs: Cada L de água 20g de KOH.

8- Coloração:

• Solução aquosa de vermelho de alizarina a 0,1% em solução de

KOH a 2%.
• Solução corante deve ser utilizada logo após a preparação.
• A cada 15m, verificar se houve coloração suficiente ou não,
retirando-se o espécimen cuidadosamente da solução.
• Tempo de coloração varia com a idade, tamanho e espécie do
animal.
• Após coloração, lavar o espécimen em água destilada.

9- Maceração II:

- Solução de KOH a 2%
- Formaldeído 37% = 1 ml

• Tempo de maceração varia de 1 a 12 horas, ou até que as partes

moles fiquem transparente visualizando-se os ossos corados
• Após maceração II, lavar os espécimens em água destilada.

10- Diafanização:

- Passagem gradual da peça para a glicerina:

• Solução I: Glicerina a 50% em KOH a 2% por 24h..

• Solução II: Glicerina a 80% em KOH a 2% por 24h.
• Solução III: Glicerina pura.

Obs: Solução I deve ser trocada sempre que ficar corada. Acrescentar
cristais de timol na glicerina pura evitando proliferação de fungos e
bactérias.