Microbiología

TEMA 1.- INTRODUCCIÓN AL LABORATORIO

1.- FUNCIÓN

La función del laboratorio de análisis clínicos es efectuar

determinaciones analíticas cualitativas y cuantitativas de líquidos
orgánicos como sangre, orina, líquido cefalorraquídeo, etc, así como
heces y otras sustancias.

2.- PELIGROS Y ACCIDENTES EN EL LABORATORIO

a.- Incendio o explosión

Ocurre cuando se utilizan solventes inflamables o sus vapores.

Ej. Alcohol, éter, tolueno, etc. Se deben manipular todos los solventes
inflamables o vapores alejados de llama directa o chispa.

b.- Ácidos y Bases fuertes

- Destruyen rápidamente tejidos produciendo cicatrices.

- Nunca pipetear con la boca.
- Siempre se añadirá el ácido o la base sobre el agua,
lentamente y agitando con frecuencia utilizando vidrios
resistentes. Si se realiza el agua sobre el ácido o la base, se
produce una reacción exotérmica que puede llegar incluso a
explotar.
- Los vapores de amoniaco son irritantes y pueden dañar ojos
y pulmones.

c.- Oxidantes fuertes

Como por ejemplo H2O2, ac. perclórico, ac. crómico, dicromato

potásico, etc.

d.- Compuestos venenosos

Como ac. perclórico, ac.crómico, dicromato potásico, metanol,

cianuro, arsénico, Hg, Pb, I, Ba, Zn, hidrocarburos, derivados del
petróleo, aminas aromáticas,etc.
El I y Hg son compuestos venenosos que en bajas concentraciones no
son perjudiciales para el organismo y pueden ser utilizados como
antiséptico.
Todos los reactivos hay que manejarlos con mucha precaución para
evitar daños en piel y ojos.

e.- Quemaduras y Escaldaduras. Choque eléctrico

Quemadura: daño en los tejidos producido por un sólido.

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 Microbiología

Escaldadura: daño en los tejidos producido por líquidos o

vapores.

Medidas de Seguridad
- Atención (descuido, rapidez)
- Extintor manual
- Contaminación
- Vacunar al personal del laboratorio con gammaglobulinas
- No pipetear con la boca. En caso de pipeteados accidentales
enjuagarse con agua y/o profilácticos.
- Botiquín de urgencias
3.- CAUSAS DE ERROR EN EL LABORATORIO DE ANÁLISIS
CLÍNICOS ( ojo cae en examen)

A.- Debido al paciente

- Error en la identificación
- Error en la petición
- Preparación del paciente
 Variaciones individuales
 Toma de alimentos
 Hora del día al realizar las analíticas
 Posición del cuerpo al realizar las analíticas, ya que puede
haber variaciones de parámetros, como por ejemplo las
proteínas debido a la variación existente entre el líquido intra
y extracelular en distintas proporciones.
 Medicamentos que tomen los pacientes
- Recomendaciones:
 estar sentado
 en ayunas
 mañanas de 7-9 horas

B.- Debido a la muestra

- Extracción de la muestra.
 No deben utilizarse recipientes contaminados
 El paciente debe estar en reposo
 Cuando se vaya a realizar una extracción de sangre el
éstasis no sea muy prolongado
 No hemólisis en la muestra

- Transporte de la muestra. Hay que tener en cuenta:

 Temperatura de la muestra
 Protección frente a la luz
 Tiempo (lo más rápido posible y no pasar más de 2
horas desde la toma de la muestra hasta que llega al
laboratorio)
- Separación de la muestra
- Conservación de la muestra
 Evitar la contaminación

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 Microbiología

 Luz
 Evitar posible evaporación de la muestra
 Evitar pérdida de su estabilidad

C.- Determinación

- Método analítico. Los más adecuados son los que sean más
específicos a la hora de determinar una sustancia,
generalmente son los enzimáticos.
- Errores técnicos
- Medio ambiente

- Error instrumental
 Mal funcionamiento del aparato
 Mal uso del instrumental
 Reactivos
 Pipetas
 Espectrofotómetros
 Tiempo y temperatura

D.- Procesos de Datos

- Tener en cuenta las prediluciones
- Trabajar con unidades concretas

E.- Resultados
- Tener en cuenta las prediluciones (multiplicar por inverso de
dilución)
- Trabajar con unidades concretas
- Errores en la coma

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 Microbiología

TEMA 2.- INTRODUCCIÓN A LA BACTERIOLOGÍA

La microbiología es una disciplina que estudia la biología de los

microorganismos. Los microorganismos son seres vivos cuya
característica común es que para su visualización es necesario utilizar
el microscopio.

Los microorganismos se agrupan en el reino de los protistas, las

creación de este nuevo reino se debe a Haeckel (1866), discípulo de
Darwin que ante la polémica de la época que incluía a unos
microorganismos en el reino animal y otros en el reino vegetal ,
sugirió que había microorganismos que distan mucho de parecerse a
los animales o a los vegetales y eran considerados una cosa u otra
según la corriente del momento, por eso Haeckel sugirió el nuevo
reino para agrupar a los protozoos, bacterias, algas, etc.

El reino de los protistas es muy heterogéneo, son unicelulares y

lo más característico que lo diferencia esencialmente de los animales
y vegetales es que no presenta diferenciación interna, es decir, no
hay diferenciación celular ni mucho menos especialización celular en
tejidos.
Mientras las células microbianas son capaces de crecer y reproducirse
como seres aislados, los animales y vegetales no son capaces de vivir
solos sino en grupo.

En el reino de los protistas se aprecian claramente dos grados

de evolución, cuya diferencia fundamental radica en la estructura
nuclear:

- Procariotas: no tienen estructura nuclear definida. Ej:

bacterias.
- Eucariotas: si tienen estructura nuclear definida. Ej:
hongos, protozoos.

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 Microbiología

Otros autores hablan de un tercer grupo que se denomina Acariota,

en este grupo incluyen los virus.

1.- IMPORTANCIA Y APLICACIONES DE LA MICROBIOLOGÍA

La microbiología la podemos clasificar desde distintos puntos de

vista:

A) Taxonómico

- bacteriología
- viriología
- microbiología
- fitología (algas)

B) Ecológico

- del suelo
- de las aguas
- de la leche
- etc.

C) Aplicado

- Agrícola
- Industrial
- Clínico

2.- BACTERIOLOGÍA CLÍNICA

Estudia las bacterias que pueden causar infecciones en el

hombre.

Las bacterias son microorganismos unicelulares que presentan

una estructura relativamente sencilla y que se incluyen en el reino de
los protistas subgrupo procariota.

CARACTERÍSTICAS DE LAS BACTERIAS.

1.- Tamaño y forma

- Tamaño:

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 Microbiología

Las bacterias miden 0,5 - 1µ m de diámetro y de 2 - 5 µ m de

longitud.
De las más pequeñas esta el micoplasma con 0,125 – 0,250µ m de
diámetro ( no visible al microscopio óptico).
De las más grandes es la Espiroqueta que puede llegar a 500µ m de
longitud, pero con un diámetro de 0,1 – 0,2µ m ( no visible al
microscopio óptico por ser demasiado fina).

- Formas:

Las bacterias pueden ser:

A) Cocos: son esféricos y exponen menos superficie al exterior

distorsionándose menos. Suelen ser más resistentes a la
desecación. La relación superficie/volumen es pequeña.

B) Bacilos: tienen forma cilíndrica rectangular, aparece mayor

superficie al exterior. La relación superficie/volumen es mayor
que la anterior. Tienen un metabolismo muy rápido.

C) Espirales: son adaptaciones al movimiento, avanzando con

mayor facilidad. Tenemos:

- Vibrios: tienen media vuelta de hélice.

- Espirilos: tienen más de una vuelta de hélice y son rígidos.

- Espiroquetas: que se pueden confundir con los espirilos ya

que tienen más de una vuelta de hélice, pero son más
flexibles.

D) Otras formas:

• bacterias estrelladas.
• Bacterias penduladas.
• Bacterias con forma filamentosa.
• Bacterias con forma ramificada.

Cuando se dividen las bacterias pueden quedarse unidas, esto

da lugar a una serie de agrupaciones. Estas dependen de:
- que la bacteria tenga cápsula, ya que va a impedir que se
separe.
- que la bacteria sea móvil o inmóvil. Las bacterias móviles
tienden a separarse y las inmóviles a juntarse.

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 Microbiología

- los planos de división.

Las agrupaciones más frecuentes en cocos son:

a) Diplococos, un único plano de división. Las bacterias

aparecen unidas de dos en dos y su morfología puede
variar.

b) Estreptococos, se dividen en un único plano formando

cadenas.

c) Estafilococos, se dividen según dos planos de división.

Algunas quedan unidas y otras sueltas, dan lugar a
agrupaciones irregulares (racimo de uvas).

d) Lampropedia, se dividen según dos planos y permanecen

unidas siempre, formándose una especie de tableta.

e) Sarcina, se dividen según tres planos de división,

formando una agrupación en forma de cubo.

Las agrupaciones de bacilos más frecuentes son:

a) Estreptobacilos, son bacilos en cadena.

b) Otros casos:

*pendulares

*empalizadas

2.- Estructura

Se comparan células procariotas y eucariotas. Las células

eucariotas tienen núcleos definidos mientras que la procariotas no
tienen núcleo definido.

PROCARIOTA EUCARIOTA
M. Nuclear No Si
Nucléolo No Si
ADN Una molécula no Varios cromosomas

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 Microbiología

asociada a proteínas constituidas por ADN

y proteínas
División No mitosis Si mitosis
Reproducción No meiosis Si meiosis
Sexual
Composición No esteroles Si esteroles
Formaciones Son invaginaciones Tienen retículo
Membranosas de la membrana endoplásmico,
plasmática Ap.Golgi
Ribosomas Son 70 S Son 80 S
Órganos de Están ausentes Están presentes
Membrana Simple vacuolas, lisosomas…
Respiración Lo poseen en parte Son órganos
de la membrana específicos para la
plasmática respiración como las
mitocondrias
Aparato Aparecen vesículas Tienen órganos
Fotosintético en continuidad de la especializados:
membrana cloroplastos
plasmática
Flagelos Simples Complejos formando
subunidades de 9+2
Movimiento no Movimiento Movimiento no
flagelados deslizante deslizante y
ameboide
Microtúbulos Probablemente están Movimientos
ausentes extendidos

ESTRUCTURA BASICA DE FUERA A DENTRO

1.- CAPSULA: puede existir o no.

2.- PARED
3.- MEMBRANA: por debajo de la cual puede existir o no flagelos.
4.- CITOPLASMA: se encuentra hacia el exterior, contiene gran
cantidad de ribosomas. El material nuclear es un filamento formado
por una maneja sin principio ni fin. No hay cromosomas.
5.- ESTRUCTURAS MEMBRANOSAS NO FOTOSINTETICAS: cuerpos
laminares, lisosomas y vacuolas.
6.- ESTRUCTURAS MEMBRANOSAS FOTOSINTETICAS: son equivalentes
a los cloroplastos y se denominan tilacoides, pueden ser laminales,
vesicales y tubulares.
7.- INCLUSIONES CON DISTINTAS SUSTANCIAS:
a) poli-β-hidroxibutilico que son sustancias de reserva
carbonada.
b) glucógeno: reserva de hidratos de carbono.
c) bolutina: reserva de fósforo y cobre.

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 Microbiología

1.- CÁPSULA

Algunas bacterias poseen hacia el exterior una envoltura

constituida por sustancias mucosas ricas en agua denominada
cápsula. La cápsula es cuando esta sustancia tiene un espesor de 0.2
micrómetros y si está en menor cantidad se habla de capa mucosa.

Este material lo sintetiza la propia bacteria y se pone de

manifiesto mediante tinción negativa con Ac específicos ya que la
cápsula tiene poder antigénico.

Si observamos al microscopio óptico (m.o.) las cápsula es

mucho más refringente, lo que se denomina hinchazón de la cápsula
o Reacción de Quellus.

La formación de la cápsula no e característica de especie (sp)

pudiendo existir en cepas. La cápsula no es una estructura básica, es
facultativa, puede o no estar presente, y se puede eliminar por
medios enzimáticos.

Composición química

En general, la cápsula esta compuesta por polisacáridos,

aunque puede haber polipéptidos y complejos polisacárido-proteína.
Ejemplo:
- Estreptococo neumoniae, tiene una naturaleza polisacárida a
base de glucosa y ácido glucurónico formando ácido
celobiurónico.

- Estreptococo pyógenes, tiene en su capsula ac. glucurónico y N-

acetilglucosamina que dan lugar al ac. hialobiurónico.

Funciones

 Bacterias patógenas

- protección frente a fagocitosis

- contribuye a aumentar su virulencia
- si el animal está inmunizado frente a la cápsula, posee Ac.
anticapsulares y la bacteria puede ser fagocitada

 Bacterias no patógenas

- protección de la ingesta de protozoos

- protección frente a la infestación de bacteriofágos

 Otras funciones

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 Microbiología

- protección frente a la desecación

- captación de cationes mediante restos carboxílicos libres
(COO-)
- adherencia al medio formando rosetas

La cápsula está unida a la pared, y esta unión puede ser por medio
de enlaces iónicos, enlaces covalentes, puentes de H y fuerzas de
Vander-Walls.

2.- PARED

Está fuera de la membrana plasmática y aparece n todas las

bacterias a excepción del micoplasma. Su composición química es
original y las bacterias con pared se dividen en dos grupos: gram + y
gram -, denominación que procede de la respuesta frente a la Tinción
de Gram.

Desde el punto de vista de la composición química, las

bacterias gram + retienen el colorante cristal violeta mientras que en
las gram – el colorante es eliminado.
Desde el punto de vista de la estructura física si damos un corte
y observamos al microscopio electrónico:
- las bacterias gram + por fuera de la membrana plasmática
aparece una capa gruesa y compacta de 150 a 800 amstrongs.
- las bacterias gram – fuera de la membrana plasmática aparece
una capa estratificada de 100 amstrongs.

Composición química

Está formada por mureína, glicopéptidos y peptidoglucanos. Es

importante tener en cuenta que la mureína sólo aparece en la pared
bacteriana ( podemos utilizar antibióticos inocuos para el hombre
( las células humanas no tienen pared y por tanto el antibiótico no las
daña)).
Ejemplo: en E.Coli existe en la mureína una serie de cadenas
polisacáridas derivadas de N-acetilglucosamina y N-acetilmuránico.

En la pared también pueden aparecer ac. teicoicos, estos se

encuentran en la pared de las bacterias gram + y no existen en las
gram -. Estos ácidos son polímeros de polialcoholes fosfatos, los más
importantes son:
- glicerol teicoico
- ribitol teicoico

Los OH libres de los ac. teicoicos se sustituyen por distintos radicales

como N-acetilglucosamina, alanina, etc.

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 Microbiología

Para la síntesis de los ac. teicoicos es necesario fósforo en el medio, si

no lo hay estos ácidos son sustituidos por los ácidos teutónicos
formados por: ac. teurónico y N-acetilgalactosamina.
Son compuestos cargados negativamente con carácter ácido que
sirven para captar cationes y proporcionando un ambiente de carga
necesaria para la actividad enzimática. Tienen función en el
crecimiento de la pared, tienen carácter antigénico y son receptores
para fagos (virus)

En la pared también se encuentran lipopolisacáridos que se

encuentran en las bacterias gram -. Son moléculas complicadas desde
el punto de vista químico y presentan una parte lípidica y una
sacárida. Se denominan Ag 0 (somáticos)

Otro componente de la pared son las lipoproteínas

apareciendo solo en las bacterias gram -.

Las proteínas se encuentran en gram + y gram – y tienen una

función degradativa, como ribonucleasas o desoxiribonucleasas,
aunque algunas no son degradativas como las isomerasas.
Las proteínas degradan los compuestos grandes que no pueden
atravesar la membrana. Las bacterias producen las proteínas que
degradan los polímetros en monómeros. No todos los monómeros
pueden ser transportados, actuando las isomerasas las cuales
transforman los monómeros en isómeros.

3.- MEMBRANA

Es un elemento obligado. Está situada debajo de la pared, se

cree que íntimamente adherida a la pared debido a la existencia de
una elevada P osmótica que la empuja hacia la pared.
Presenta lo que se conoce como unidad de membrana, que es la
presencia de dos capas densas envolviendo a una capa clara con un
espesor de 75 amstrongs.

Composición química

Su composición química global es igual a la de la membrana de

las células eucariotas, 40% lípidos y 60% proteínas, aunque existen
diferencias en el detalle del análisis químico, por ejemplo: en la
membrana de las bacterias hay ac. grasos ramificados, existe
ciclopropano y es raro encontrar lecitina.
La función de los lípidos de membrana son:
- estructural
- intervenir en procesos de biosíntesis
La función de las proteínas de membrana son:
- estructural
- tienen enzimas con acción dirigida al citoplasma
- enzimas que participan en la síntesis de la pared

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 Microbiología

- permeasas
- actividad ATPasa

Funciones de la membrana

- Mantenimiento osmótico de la célula que regula el paso de

sustancias de un lado a otro. Este paso de sustancias puede ser
a favor de gradiente o en contra de gradiente requiriendo un
gasto de E.
- Interviene en el metabolismo oxidativo y en la producción de E.
- Participa en la división celular, en la duplicación del material
genético y síntesis de la nueva pared.

4.- ESTRUCTURAS MEMBRANOSAS

Se les denomina tilacoides porque son similares a los

tilacoides de las plantas, y pueden ser tubulares, vesicales y
laminares.
Son invaginaciones de la membrana plasmática igual que le
mesosoma.
Pueden crecer en condiciones de anaerobiosis si las ponemos en
condiciones anaerobias y si se aplica cierta cantidad de luz aparecen
vesículas en la periferia siendo muy numerosas.

5.- CITOPLASMA

No presenta gránulos membranosos independizados. La mayor

parte de sus componentes están en estado soluble. El citoplasma está
lleno de ribosomas (síntesis de proteinas) estando libres y no unidos a
la membrana como en las cels. eucariotas.
Se puede encontrar distintos pigmentos como piocianina (azul),
pioverdina (verde), prodigiosina (rojo) y violacina (violeta).

6.- RIBOSOMAS

No se obtienen ribosomas aislados sino polirribosomas. Para

obtener ribosomas aislados tratamos el polirribosoma con
ribonucleasa y también con actinomicina-D. Si se hace en presencia
de Mg se obtienen las dos subunidades del ribosoma, la 30s y la 50s.
Su composición química es ARN y proteínas.

7.- INCLUSIONES CITOPLASMÁTICAS

Las bacterias pueden presentar en su citoplasma distintas

inclusiones que son generalmente sustancias de reserva y se suelen
formar cuando hay un desequilibrio nutricional en el medio.

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 Microbiología

Las inclusiones son:

a.- Glucógeno: en el medio hay muchos carbonos en forma de

azúcares capaces de dar glucosa, que por medio de la glucogénesis
da glucógeno. Estas inclusiones no tienen morfología diferenciada al
observarlas al microscopio electrónico como ocurre con los animales.
Al microscopio ótico el glucógeno no se ve pero puede ponerse de
manifiesto cuando la bacteria tiene una alta concentración de
glucógeno mediante tinción con lugol ya que se tiñe de color pardo-
rojizo.
b.- Bolutina: su principal constituyente es el fósforo. Desde el
punto de vista químico son fosfatos polimerizados, también pueden
encontrarse otros constituyentes en menores proporciones. Pueden
llegar a constituir el 50% de los fosfatos de reserva en la célula.
c.- Poli-beta-hidroxilbutílico: es una reserva de carbono que se
sintetiza cuando la fuente de carbono es acetato o compuestos que
se degradan en acetato.
d.- Azufre: la acumulan dos tipos de bacterias:
- sulfooxidantes: capaces de oxidar compuestos de azufre para
obtener E.
- fototrofas: emplean compuestos de azufre como dadores y
aceptores de electrones en la fotosíntesis.
e.- Cristales paraesporales: se forman en bacterias esporuladas.
Desde el punto de vista químico son proteínas de estructura
cristalina muy compacta y brillante al microscopio óptico. Su
significado funcional no se conoce y tiene relación con la
esporulación.

8.- MATERIAL NUCLEAR

Se habla de material nuclear y no de núcleo ya que no tiene

envoltura nuclear, por lo que no hay separación entre núcleo y
citoplasma. No se puede ver al microscopio óptico( M/O), para ver el
material nuclear se recurre a técnicas especiales, como la técnica de
Feulgen que consiste en hacer una hidrólisis ácida sobre los ácidos
nucleicos.

La duplicación del cromosoma bacteriano se caracteriza por:

a) ser semiconservativa, el material nuclear esta constituido por

dos cadenas de ADN a partir de la doble hélice. Cuando se
produce la duplicación cada cadena sirve de molde para la
síntesis de su complementaria.

b) sólo tiene un origen de duplicación.

13
 Microbiología

c) Es discontinua, la cadena no se sintetiza continuamente sino en

pequeños fragmentos denominados de Okazoki que
posteriormente son soldados.

d) Es bidireccional, ya que crece en dos direcciones.

En la duplicación cromosómica es necesario la participación de

enzimas, como:

- enzimas desenrollantes, cumplen la función de

desenrollar la doble hélice para que cada cadena sintetice
su complementaria.

- ARN polimerasa, ya que el ADN no se puede biosintetizar

sin obtener un pequeño fragmento de ácido nucleico al
que se añade.

- ADN polimerasa, que se va añadiendo al ARN cebador.

9.- ADN EXTRACROMOSÓMICO

Pequeños fragmentos de ADN pueden estar libres y duplicarse

de forma autónoma , se les denomina plásmidos o bien estos
pequeños fragmentos de ADN que están libres pueden integrarse en
el cromosoma bacteriano y duplicarse al mismo tiempo que el
cromosoma y se les denomina episoma.

Dentro de los plásmidos tenemos distintos ejemplos:

1º- Factor R o RTF (Factores de Transferencia a la Resistencia):

son factores que transfieren resistencia antimicrobiana, son
frecuentes. Ej: bacterias que tengan plasmido penicilasa.

2º- Factor F o factor sexual: codifican para la síntesis de una

estructura de la superficie de la bacteria denominada Pili sexuales,
permite que en unas bacterias se de la conjugación.
A las cepas que presentan el factor F se las denomina F+ o machos,
ya que cede su material genético. Las cepas que carecen del factor F
se las denomina F- o hembras.

10.- ESPORAS

Se tratan de estructuras presentes en algunas bacterias

bacilares que pueden estar en el interior de la bacteria (endoespora)
o permanecer libre. Son formas de resistencia y son capaces de
soportar durante tiempos elevados temperaturas de 60- 80 ºC, esta

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 Microbiología

temperatura no la soporta una bacteria normal. Las más resistentes

pueden resistir 120ºC durante 10 minutos.

Son visibles al M/O, la forma y posición de la espora en el

interior de la bacteria es característica taxonómica a la hora de
clasificar las bacterias esporuladas.

El tamaño es importante y se pueden clasificar en :

a) esporas no deformantes, son aquellas que su diámetro es

inferior a la célula vegetativa. En función de la posición en que
se encuentra la espora tenemos:

- Espora en posición central.

- Espora en posición subterminal.
- Espora en posición terminal.

b) esporas deformantes, son aquellas en las que su diámetro es

mayor que la célula vegetativa.

Las bacterias esporuladas son un pequeño grupo de géneros, los

más importantes son :

• Bacillus, son aerobios.

• Clostridium, son anaerobios.

Estructura de las esporas

De dentro hacia fuera encontramos:

1. Citoplasma con material nuclear.

2. Membrana plasmática.

3. Pared.

4. Por fuera aparece una capa gruesa propia de la espora llamada

Cortex (corteza) que da resistencia.

5. Aparecen dos túnicas ( intima y exina) o más que son más

resistentes a los agentes físicos y químicos.

6. Puede haber una última capa de contorno irregular llamada

exosporio (sólo en algunas especies).

A la bacteria que produce la espora se la denomina célula vegetativa

o esporangio.

15
 Microbiología

Se denomina esporulación al fenómeno por el cual una

bacteria vegetativa produce una espora al ser las condiciones del
medio adversas.

Se denomina gemación al proceso por el cual de una espora

surge una bacteria al volver a ser favorables las condiciones para el
germen.

11.- FLAGELOS

La mayoría de las bacterias móviles deben ésta a apéndices

filamentosos denominados flagelos, cuya longitud es igual a 10 -
20µ m y su diámetro a 10 – 20nm.
No son visibles al M/O por su pequeño diámetro .

Según el número y posición de los flagelos en la bacteria se

clasifican en :

a) Monotriticas, un flagelo en el polo.

b) Politriticas o L ofotriticas, varios flagelos en el polo.

c) Anfitrícas, varios flagelos en ambos polos.

d) Peritricas, varios flagelos alrededor de la bacteria.

Los flagelos tienen naturaleza proteica. Al observarlos al M/E se

distinguen tres partes:

1. Filamentos, constituidos por una cadena proteica

denominada flagelina (diferente en cada especie). Tiene
carácter antigénico y se denomina Ag h o Ag flagelar.

2. Gancho, es un engrosamiento constituido por proteínas

globulares.

3. Cuello o cuerpo basal, con dos parejas de cilindros y

proteínas diferentes.

12.- FIMBRIAS, PILIS O PELOS

Son apéndices filamentosos similares a flagelos, aparecen en la

superficie de algunas bacterias , son móviles e inmóviles y no tienen
nada que ver con el movimiento y son más finos que los flagelos,
longitud 0,5 - 2µ m y diámetro 7 – 8nm. No son visibles al M/O.

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 Microbiología

Puede haber distintos tipos de pilis según el grosor: pili I, pili II,
pili III, pili IV, pili V. Una bacteria puede tener varios tipos dentro de
una misma especie.

Los pelos mejor conocidos son los de E. Coli, tipo I, en los que se
ha aislado una proteína denominada pilina que son proteínas
globulares con ordenación helicoidal o lineal. A las especies cuyas
cepas no tienen pelos se las denomina calvas.

Función de los pelos

1º.- Adherirse al medio donde vive, en superficies inertes o células de

animales.

2º.- Las cepas con pelos poseen una actividad respiratoria mayor que
las cepas sin pelos.

Existen unos pelos especiales (pilis sexuales) que determinan

presencia de material genético extracromosómico (Factor F) su
función es actuar como conducto de material genético de una
bacteria F+ a una F- . La proteína es distinta de los pelos normales y
se denomina pilina F.

13.- GLICOCÁLIX

Es una masa de fibras constituida por polisacáridos que rodean

a una o varias bacterias (posición extracelular). Gracias a él las
bacterias pueden unirse a distintas superficies, como piezas
dentarias, etc.
Sus funciones son :

- De adherencia.
- Concentra enzimas líticos.
- Almacena y canaliza alimentos.
- Protege a la bacteria de los fagocitos.
- Interfiere en la respuesta inmune.

3.- Tipo de reproducción bacteriana

La principal forma de reproducción bacteriana es binaria o

asexual, esta división requiere la duplicación de todos los
constituyentes necesarios y el reparto de todos en las células hijas.

17
 Microbiología

La 1ª etapa es la separación de las cadenas de ADN y

replicación de cada una para dar dos cromosomas más que se
repartirán entre las dos células hijas, luego se forma un tabique
transversal asociado al mesosoma que separa las dos células que se
origina. Los dos cromosomas hijos emigran a uno de los polos así
como los orgánulos más importantes. También puede haber una
reproducción bacteriana pero menos importante a partir de la
gemación (más típica en hongos)

● Mecanismo de intercambio genético:

Tiene lugar principalmente por división binaria. Tiene como

principal inconveniente la falta de material genético, por ello la única
posibilidad de que la bacteria evolucione:

a) Variación en el fenotipo: relacionado con las condiciones del

medio ambiente. El genotipo no se altera, es reversible y no
hereditario.
b) Mutación: se altera el genotipo, son irreversibles y
hereditarias.
c) Transferencia: se produce cuando un fragmento de ADN
(plásmido) procedente de una bacteria pasa a otra.

Existen tres tipos de trasferencias:

a) transformación: la bacteria receptora capta ADN que se

encuentra presente en el ADN después de haber sido
liberado por la bacteria donante.
b) congujacion: se transfiere el plasmido por medio de un
contacto físico entre dos bacterias a través de pilis sexuales.
c) Traducción: transferencia de ADN por medio de
bacteriófagos (virus).

● Crecimiento bacteriano:

La principal función de cualquier bacteria es el crecimiento

considerando este un aumento de número o masa de todos los
componentes celulares.
La medición del crecimiento se realiza inoculando un medio
líquido con la bacteria y estudiando la concentración celular en cada
momento. De esta forma comparando el número de células vivas/ml a
lo largo del tiempo se obtiene la curva de crecimiento, en la que se
distinguen las siguientes fases:

1ª) fase de latencia: las bacterias inoculadas se adaptan al

nuevo medio, no se observa crecimiento.
2ª) fase exponencial: la masa bacteriana aumenta como
consecuencia de la multiplicación bacteriana.

18
 Microbiología

3ª) fase estacionaria: a medida que se agotan los nutrientes y

aparecen productos tóxicos de materia celular, el crecimiento se
endentece pero existe un equilibrio que mantiene constante el
número de células.
4ª) fase de declive: la tasa de mortalidad aumenta y el
crecimiento se endentece por disminuir nutrientes el número de
bacterias viables disminuye hasta casi cero.

El tiempo que un cultivo bacteriano necesita para completar

este ciclo depende del tiempo de generación de cada especie (tiempo
para que cada célula de lugar a dos células hijas). Este tiempo de
generación es de 20-30 minutos encontradas con frecuencia en
patología humana por lo que la curva se completaría en 18-24h.

El crecimiento bacteriano también se puede simular en

aparatos del laboratorio denominados quimiostatos y túrbidostatos,
ambos aparatos se basan en añadir medio fresco en un cultivo a
medida que eliminamos igual volumen que el cultivo viejo.

4.- Nutrición Bacteriana

Para que una bacteria se desarrolle adecuadamente es

necesario que el medio disponga de:
▬ De una fuente carbonada a partir de glúcidos, lípidos y
cetoacidos.
▬ Una fuente de nitrógeno que se consigue a partir de
proteínas, péptido y aminoácidos.
▬ Fuente de fósforo a partir de fosfatos inorgánicos.
▬ Metabolitos esenciales obtenidos de la degracion de
alimentos y formados en el interior de las bacterias gracias a
reacciones metabólicas que dan lugar a g-6-p.
▬ Factores de crecimiento que las bacterias no pueden producir
F.V y F.X.
▬ Factores estimulantes que no son imprescindibles pero
aligeran el procedimiento.

Las bacterias pueden obtener la energía de dos formas:

a) Energía radiaciones solares (fototrofas)

b) Reacciones químicas (quimiotrofas).

En cuanto al poder sintetizante de cada bacteria, tiene una

distinta capacidad para sintetizar glucidos, lípidos y proteínas a partir
de elementos sencillos como agua, CO2… dependiendo de esta
capacidad podemos distinguir:

a) Bacterias autótrofas: gran poder de síntesis (glucidos, lípidos

y proteínas) obtienen energía a partir de materia inorgánica.
Dentro de estas las podemos clasificar en:

19
 Microbiología

▬ Estrictas: no pueden utilizar la materia orgánica.

▬ Facultativas: si pueden utilizar la materia orgánica.

b) Bacterias heterótrofas: poder de síntesis menor. Necesita

obtener sus propios nutrientes (glucidos, lípidos, proteínas) a
partir de materia orgánica.

5.- Metabolismo bacteriano

Cuando los nutrientes has entrado en la bacteria sufren

transformaciones químicas que dan lugar a la síntesis de materia
bacteriana. A estas reacciones se les denomina metabolismo, el cual
se divide en tres etapas:

a) Catabolismo: conjunto de transformaciones que sufre la

materia asimilada por las bacterias hasta llegar a degradarse
en componentes más sencillos y producir energía necesaria
para que la bacteria pueda sintetizar sus propios nutrientes.
La energía se almacena en forma de ATP.

b) Anfibolismo: los metabolitos intermedios se transforman

enzimaticamente en componentes básico como aminoácidos,
bases nitrogenadas. También se puede obtener energía y
almacenar en forma de ATP.

c) Anabolismo: síntesis de macromoléculas de las bacterias.

Aprovechando la energía obtenida en las fases anteriores.
Las bacterias tienen un anabolismo sintetizado, hidratos,
lípidos, proteínas, ADN, ARN, y 20 aminoácidos necesarios.
(las células eucariotas no sintetizan los 20 aminoácidos).

Principales vías catabólicas: se pueden clasificar en función

de las oxidaciones biológicas teniendo en cuenta la naturaleza del
aceptor final del hidrogeno:

1º) Respiración aerobia: el aceptor final es el oxigeno.

2º) Respiración anaerobia: el aceptor final es un componente

inorgánico distinto del oxigeno, Ej.: sulfato y nitrato…

3º) Fermentación: el aceptor final es un componente

orgánico.Existen distintos tipos de fermentación:
a) Alcohólica: producto final es el CH3-CH2-OH y CO2.
b) Láctica: producto final es el acido láctico y el CO2 por
contaminación de bacterias acéticas que pueden dar
lugar a acido acético.
c) Propionica: CH3-CH2-COOH, CO2 y acido acético.

20
 Microbiología

La fuente de obtención y utilización del oxigeno en los distintos

microorganismo permite clasificarlos en los siguientes grupos:

a) Aerobios estrictos u obligados: deben utilizar el

oxigeno como ultimo aceptor de electrón. Utiliza la
respiración aerobia en su metabolismo.

b) Anaerobios estrictos u obligados: mueren o se inhiben

ante la presencia utilizando la fermentación en su
matebolismo.

c) Facultativas: pueden utilizar el oxigeno como aceptor

final de electrones o alternativamente sales como son,
NO3, carbonatos. Utiliza la respiración anaerobia.

d) Microaeroficos: son inhibidos por una partícula de

oxigeno que es igual que atmosférica, crecen o lo
hacen mejor con una concentración baja de oxigeno.

e) Anaerobios aerotolerantes: no requieren oxigeno ni son

inhibidos o destruidos por el, utilizan matebolismo
fermentativo.

21
 Microbiología

TEMA 3.- CLASIFICACIÓN, TAXONOMÍA Y NOMENCLATURA

BACTERIANA. BACTERIAS MÁS COMUNES, BACTERIAS DE
LENTO CRECIMIENTO Y BACTERIAS ESPECIALES

1.- CLASIFICACIÓN, TAXONOMÍA Y NOMENCLATURA

Para clasificar las bacterias se hace colocándolas en distintos

según sus características. Una bacteria pertenece a:

a.- Cepa. En ellas se encuentran organismos dentro de la misma

especie con una cualidad determinada. Son organismos con la
mayoría de sus características iguales.
b.- Serotipo o Serogrupo: Son organismos que difieren por la posesión
de los mismos Ag siendo todos de la misma especie.
c.- Especie: Son organismos que tienen características biológicas
iguales para todos.
d.- Género: Son un grupo de especies estrechamente relacionadas.
e.- Familia: Grupos de géneros estrechamente relacionados.

En la clasificación podemos distinguir:

- Reino
- Filo
- Orden
- Clase
- Familia
- Tribu
- Género
- Especie
- Cepa
- Serotipo

Ejemplo: Neisseria gonorreae IV

• Reino: Procariotas
• Filo: Bacteria
• Orden: Eubacteria
• Clase: Escotobacteria
• Familia: Neisseriaceae
• Género: Neisseria
• Especie: Gonorreae
• Cepa: IV

2.- BACTERIAS MÁS COMUNES

Cuadro de las fotocopias

22
 Microbiología

3.- BACTERIAS DE LENTO CRECIMIENTO

Como vimos en la curva de crecimiento bacteriano, la mayoría

de las bacterias crecen entre 18-24 horas, aunque hay algunas
bacterias que su periodo de crecimiento es superior. (> 7 días).
Ejemplo: Brucella y Micoplasma.
4.- BACTERIAS ESPECIALES

a.- Rickettsias

Son parásitos. Son cocobacilos pleomórficos, gram + que se

presentan en cadenas o parejas y poseen pared celular rígidas. Son
parásitos intracelulares. La infección es transmitida por vectores.
Generalmente el parásito vive en las células intestinales y la
saliva de donde se trasmiten al hombre por picadura o agresiones en
la piel.

b.- Clamidias

Son cocobacilos gram – con pared celular que se caracterizan

por ser parásitos intracelulares. Es uno de los microorganismos
patógenos de mayor difusión dentro del reino animal, ya que utiliza
como huésped desde el hombre hasta artrópodos pasando por todos
los animales peridomésticos.
En el género Clamidia hay muchas especies entre las que se
destacan:
- Clamidia trachomatis (ETS)
- Clamidia neumoniae ( relacionado con enfermedades
respiratorias)
- Clamidia psittachi (relacionada con enfermedades
respiratorias)

c.- Micoplasma

Organismos procariotas gram – que carecen de pared celular,

por lo que son muy pleimóficos y varían desde coco a filamentoso.
Su hábitat es muy amplio y puede multiplicarse en plantas,
insectos o mamíferos. Entre los aislados en el hombre y productores
de patología:
- Micoplasma neumoniae (infecciones respiratorias)
- Micoplasma hominis (ETS)
- Ureaplasma (ETS)

23
 Microbiología

TEMA 4.- RELACIÓN HUÉSPED-PARÁSITO

• Parásito: Organismo que vive en otro organismo llamado

huésped y le causa un daño
• Infección: La infección es la situación en la cual un
microorganismo se introduce en el huésped y se desarrolla
perjudicándolo o no. No es sinónimo de enfermedad puesto que
una infección no siempre se traduce en daño para el huésped,
incluso si el patógeno es potencialmente virulento.
• Enfermedad: Resultado de la interacción entre agente
patógeno y huésped causando como consecuencia un daño en
el huésped (modificación en el metabolismo celular, malestar,
lesiones, etc. Las enfermedades infecciosas se clasifican según
la facilidad de transmisión de un individuo a otro en:
a.- Enfermedades infecciosas contagiosas o transmisibles: se
transmiten fácilmente por contacto directo o indirecto (besos,
tos, toallas, cepillos de dientes). Ej. SIDA, gonorrea, sarampión,
lepra, etc.
b.- Enfermedades infecciosas no contagiosas: No se transmiten
fácilmente por contacto sino por inoculación directa. Ej.
Tétanos.
• Virulencia: Capacidad de una cepa para producir enfermedad.
• Patogenicidad: Capacidad de un grupo de organismos para
producir enfermedades; pueden existir especies patógenas que
tengan cepas virulentas.

La Epidemiología se encarga de estudiar las enfermedades

infecciosas y los factores que determinan su frecuencia y distribución
en una población dada.
Desde el punto de vista etimológico:
- “epi” significa por encima o sobre
- “demos” significa pueblo

24
 Microbiología

- “logía” significa tratado o ciencia.

En la Epidemiología es importante:
1º. Identificar el agente causal.
2º. Descubrir la fuente de infección.
3º. Buscar el mecanismo de infección.
4º. Buscar las características del huésped.
5º. Investigar la influencia del medio ambiente.

Para que se produzca las enfermedad infecciosa es

indispensable que se cierre la cadena epidemiológica, la cual está
constituida por tres eslabones:
a. Fuente de Infección: Pueden ser:
- Personas: pueden ser:
 Persona enferma, es aquella que elimina los gérmenes
durante un periodo característico de la enfermedad.
 Persona portadora, es aquella que transmite la enfermedad
pero no la padece. La persona está infectada pero no presenta
manifestaciones clínicas. Hay dos tipos de portadores:
temporales (1-2 meses) y crónicos (toda la vida).
A veces lo gérmenes no se eliminan se quedan en sangre o
tejidos del enfermo portador, serán, por tanto, reservorios
siempre que haya un vector que transmita el microorganismo
(artrópodos picadores como plasmodium, tripanosoma,
leismonia,etc).
Cuando la fuente de infección es el hombre hablamos de
infección homóloga, si es un animal infección heteróloga.
- Animal: Tiene un doble papel ya que el animal puede actuar
como fuente de infección y como vector.
b. Mecanismo de Transmisión
Son los procedimientos que los agentes patógenos utilizan para su
transmisión desde la fuente de infección hasta la persona susceptible.
Pueden ser:
- Directos:
 Por contacto físico o estrecha relación entre la persona
sana y la fuente. Ej. contacto sexual, piel.
 Por gotitas salivares: gotículas de Wells y de Pfluge. La
diferencia entre unas y otras es el tamaño. Ambas están
en la boca u se transmiten por besos, estornudos, tos, el
habla, etc.
 Manos sucias.
 Objetos recientemente contaminados, principalmente por
contaminación salivar u orofaríngea. (fomites)*
 Inoculación directa por transfusiones sanguíneas u
jeringuillas (SIDA, hepatitis).
- Indirectos:
 Aire
 Agua contaminada
 Artrópodos (vectores)

25
 Microbiología

 Fomites (objeto contaminado capaz de transmitir

enfermedad como toallas, ropa, bolígrafos, etc.)

c. Persona sana o susceptible de padecer enfermedad

La principal a destacar son las vías de entrad y de salida de los
microorganismos como son:
 Aerea
 Digestiva
 Parenteral
 Cutánea
 Ocular
 Ótica
 Urogenital
 Anal
 Placentaria

2.- CLASIFICACIÓN DE LAS ENFERMAEDADES TRANSMISIBLES

DIGESTIVAS: El contagio se denomina DAME (dedos, alimentos,

moscas y excretas)
RESPIRATORIAS: Su via de transmisión más frecuente son las
gotículas de Wells y las de Pluge (ej. Paperas, sarampión, gripe)
ETS (sífilis)
ANIMALES (zoonosis) ej. Brucelosis, triquinosis.

3.- MEDICINA PREVENTIVA

La prevención se realiza a tres niveles:

1. Fuente de infección.
- En el hombre, realizar un diagnostico precoz, tratamiento y
aislamiento.
- En el portador, realizar control y aislamiento.
- En animales, realizar un diagnóstico, tratamiento y sacrificio.

2. Mecanismo de Transmisión.
- Saneamiento ambiental.
- Desinfección.
- Lucha contra el vector.

3. Persona sana.
- Vacunación.
- Prevención con quimoprofilaxis.

4.- EPIDEMIOGÉNESIS

Es el estudio de las epidemias y su desarrollo. Hay que saber:

26
 Microbiología

 Endemia: Presencia habitual de una enfermedad en un área

geográfica. El reservorio es generalmente humano y el número
de casos que casos que aparecen es aproximado al número
teórico.
 Epidemia: Se produce cuando en un país o comunidad el
número de casos de una enfermedad es el esperado.
 Pandemia: Se produce cuando la epidemia afecta a varios
países o continentes.

Comienzo y Desarrollo de la Epidemiología

La epidemiología se inicia al romperse el equilibrio entre el huésped

y el germen debido a:
- Falta o disminución de inmunidad o resistencia de un grupo de
población con respecto al germen.
- La llegada de un nuevo germen. (ej. Gérmenes que llevaron los
conquistadores a América)
- Mutación del agente infeccioso; ocurre con frecuencia en virus
de la gripe.
El desarrollo depende de:
- Número de población susceptible
- Conservación y virulencia del germen
- Factores sociales, ambientales y económicos
- Factores de agregación (colegios, internados)
- Factores de dispersión (turismo, inmigración)
- Factores de saneamiento ambiental y hábitos higiénicos.
- Clima y meteorología que influyen en la supervivencia del
germen.

Hay distintos tipos de epidemia:

Brote Holomiántico: Se produce a través de una fuente común
transmitiendo la infección a un número de personas en poco
tiempo. Suele transmitirse por vía digestiva a través de agua y/o
alimentos contaminados. Se caracteriza por una fuerte subida y un
descenso brusco afectando a mucha población. La epidemia se
extingue al suprimir la fuente de infección. Ej. Salmonelosis.

Brote Prosodémico: La propagaciópn es de persona a persona

estableciéndose una cadena de casos que aumenta gradualmente
hasta alcanzar un máximo que perdura en el tiempo y luego
empieza a declinar. Ej. Gripe.

27
 Microbiología

Brote Mixto: Se caracteriza porque presenta un comienzo

holomiántico y continuación prosodémica o viceversa.

5.- PODER PATÓGENO DE LOS MICROORGANISMOS

En la relación huésped- microorganismo existen diversos grados:

1º) Colonización: llegada, establecimiento y multiplicación del

microorganismo sin que haya respuesta inmune por parte del
huésped.
2º) Infección inaparente: los microorganismos que han
colonizado origina una respuesta en el organismo inmunitario.
3º) Enfermedades infecciosas: cuando el microorganismo
provoca daños en el huésped, la enfermedad depende del nº de
microorganismo, virulencia y resistencia que oponga el huésped.
E= N x V / R

Para saber la virulencia de un germen se recurre a:

1º) dosis mínima letal (DmL) que es la menor cantidad de
microorganismo capaz de producir la muerte en la dosis mínima letal,
debemos señalar:
● El animal de experimentación.
● Vía entrada.
● proporción respecto al animal.
Ej.: conejo, por vía parenteral con 50 mg/Kg. de conejo.

2º) dosis letal 50 ( Dl 50): dosis mínima letal que mata el 50%
de los animales de experimentación.

3º) dosis infectiva 50 (Di50) provoca la infección del 50% de los

animales.

6.- FACTORES QUE DETERMINAN LA VIRULENCIA

1º) Colonización
2º) Penetración
3º) Multiplicación
4º) Invasión por continuidad a través de vía linfática, nerviosa o
sanguínea. Cuando el germen invade la vía sanguínea hay que
definir:
a) bacteremia: paso ocasional de bacterias o virus de la sangre.
b) septicemia: paso constante y masivo de la bacteria a la
sangre.
c) viremia: paso ocasional de virus a sangre.
5º) Toxinas: sustancia que proceden de las bacterias y causan
lesión en el huésped.

28
 Microbiología

Se denomina toxigenicidad: a la capacidad de producir

enfermedad por la liberación de toxinas.
Las toxinas se clasifican:

A) Exotoxinas: toxinas liberadas extracelularmente por las

bacterias a medida que van creciendo. Las toxinas se
trasladan por el cuerpo y causan daños en regiones retiradas
del lugar donde están creciendo las bacterias que las
produce.
Cada toxina tiene un tejido u órgano específico donde actúa
o causa daño denominado tejido u órgano diana. Se dirá que
la toxina tiene tropismo (tendencia) Ej.: toxina del botulismo
es neurotropa.
Son de naturaleza proteica, la producen las bacterias gram
positivas y negativas. Son sensibles al calor y a los rayos UV.
Se deterioran a Tª ambiente y pierden su capacidad toxica a
mas de 60º. Tiene un gran poder toxico (el veneno biológico
mas potente es la toxina de botulismo). Ej.: 1mg de la toxina
mata 100 toneladas de materia viva.
Las exotoxinas tienen un gran poder antigenico por lo que
estimulan la formación de Ac.
Si se le aplica formol se convierten en Anatosoides: pierden
su capacidad toxica pero no la antigénica, esto es a base de
las vacunas hechas a partir de exotosinas. Son altamente
específicas frente a su actuación de su órgano diana.
B) Endotoxinas: de naturaleza liposacárida y provienen de la
pared bacteriana gram negativa. Se liberan con la lisis de la
bacteria. la bacteria tiene poder toxico bajo, no forman
anatoxoides por lo que no sirven para vacunas. Provocan
leucopenia, hipertermia, hipotensión, plaquetopenia, etc.

EXOTOXINAS ENDOTOXINAS
Origen Bacterias positivas y Bacterias negativas.
algunas negativas. Se Salen de la bacteria
recogen del cuando se destruye
sobrenadante del
cultivo.
Composición Proteica Liposacáridos
Toxicidad Elevada Baja
Acción Especifica sobre Inespecífica
tejidos diana
Labilidad Termolábil es Termoestables
Poder antigénico Son muy antigénicos Pocos antigénicos no
estimulando inducen la formación
formación de Ac de Ac
Acción del formol Se transforman en No se transforman en
toxoides por lo que toxoides
sirven como vacunas
Acción de los Son efectivos No son efectivos

29
 Microbiología

sueros

Estudio de las exotoxinas más importantes

- Toxina Diftérica: producida por Corinebacterium difteriae. Es

pantotropa (tendencia por todo el organismo). Se unen a las
células del huésped y a las pocas horas pierde su capacidad de
síntesis proteica y mueren.

- Toxina tetánica: producida por Clostridium tetanus. Es

cardiotoxica y hemolítica. Lo más importante es su acción
espasmolizante al ser neurotropa y fijarse de forma irreversible
a la sinapsis (conexiones entre neuronas) neuronal.

- Toxina botulínica: producida por Clostridium botulium. Es

neurotropa y provoca una parálisis dando lugar a la muerte por
asfixia debida a parada cardio respiratoria.

- Toxina de Clostridium perfinges: provoca gangrena

gaseosa.

- Toxina del Estreptococos pyogenes: lo más importante es

la estreptolisina que provoca hemólisis y la toxina eritrogénica
que es la responsable del eritema de la escarlatina.

- Toxina del Estafilococos aureus: actúa como enterotoxina.

- Toxina del Vibrio cholerae: produce el cólera.

- Toxinas enterotóxicas: toxinas de E.coli y Salmonella,

producen deshidratación que puede llegar a la muerte.

7.- TIPOS DE MICROORGANISMOS

1.- Patógenos: son exógenos al huésped colonizan, infectan y

producen enfermedad. Su acción patogénica es debida al número y
virulencia.

2.- Oportunistas: suelen ser endógenos al huésped formando parte

de la flora microbiana normal, colonizando y en determinadas
circunstancias provocando enfermedad, la cual es provocada por la
disminución de las defensas del huésped.

3.- Flora habitual (saprofita): Son microorganismos que colonizan

al huésped y le producen incluso beneficio comportándose como
simbiótico y preservando la salud del huésped al :

30
 Microbiología

• facilitar la absorción de vitaminas.

• Degradación de ácidos biliares.
• Realizar la interferencia microbiana que consiste en evitar la
infección de verdaderos patógenos por medio de bactericidas,
alterar el pH o competir por el espacio con los verdaderos
patógenos. Por tanto ante un tratamiento antibiótico se debe
elegir el que menos daña la flora habitual.

Flora normal, oportunista y patógena en el hombre

Las áreas del cuerpo se subdividen en dos categorías generales:

a) Las que poseen normalmente microorganismos.

b) Las que normalmente son estériles o que ocasionalmente
albergan algunos microorganismos pero que pueden ser
altamente colonizados en caso de enfermedad.

La flora según aparatos es:

1º- Aparato Respiratorio

a) áreas que normalmente albergan microorganismos:

- boca
- nariz
- garganta
- región nasofaríngea
- amígdalas
- senos paranasales

La localización del organismo es muy importante para saber si es

patógeno o no. Pueden aparecer en algunas personas sin ser
patógenos.

b) áreas normalmente estériles:

- bronquios
- bronquíolos
- alvéolos
- laringe
- traquea

Es posible su contaminación por distintos microorganismos

ocasionales. Los distintos mecanismos de defensa tenderán a
eliminarlos rápidamente.
Tanto el exputo como algunos aspirados pueden estar contaminados
por la flora de garganta, nariz y boca.

2º- Tracto gastrointestinal

31
 Microbiología

a) áreas que normalmente albergan microorganismos:

- intestino grueso
- ileon inferior

b) áreas normalmente estériles aunque ocasionalmente pueden

presentar microorganismos:
- esófago
- estómago

Aunque hay que tener en cuenta que debida al paso de alimentos

pueden estar contaminados por bacterias pero no sobreviven por los
jugos del estómago.
El hígado y la vesícula biliar están normalmente exentas de
contaminación microbiana. En estas zonas los microorganismos son
síntomas de enfermedades.

3º- Tracto genitourinario

a) áreas que normalmente albergan microorganismos:

- genitales externos
- uretra
- vagina

La microflora normal de la vagina dura hasta la menopausia siendo

frecuente la presencia de bacilos de Doderlein o más correctamente
Lactobacilus acidofilus. En ocasiones las complicaciones de los
abortos prolongados pueden ser ocasionados por la microflora
vaginal, de modo similar los recién nacidos pueden tener
enfermedades por la flora vaginal.

b) áreas normalmente estériles:

- el riñón

4º- Tracto de la piel, oído y ojo

L a superficie externa del cuerpo esta poblada constantemente por

microorganismos que reflejan las costumbres del individuo, su dieta,
clima, trabajo, etc.

5º- Sangre y LCR (líquido cefalorraquídeo)

Son generalmente estériles pero en muchas enfermedades

infecciosas y durante las complicaciones infecciosa de las
enfermedades es frecuente encontrar microorganismos en sangre.

8.- CLASIFICACIÓN DE LOS AGENTES PRODUCTORES DE

INFECCIÓN

32
 Microbiología

De acuerdo con la clasificación etiológica se dividen en agentes

productores de infección en:

1.- enfermedades por hongos.

2.- enfermedades por bacterias.
3.- enfermedades por virus.
4.- enfermedades por protozoos.
5.- enfermedades por helmintos.
6.- enfermedades por artrópodos.
7.- enfermedades por algas.
8.- enfermedades por priones.

Priones: son partículas infecciosas de pequeño tamaño y naturaleza

no bien conocida. Se presentan como partículas de naturaleza
proteica en las que no se ha determinado ni ADN ni ARN aunque no
se excluye que tenga alguno. Se les considera los agentes
productores de la enfermedad de Crentzfeld - Jacobs (C-J).

TEMA 5.- OBSERVACIÓN DE LOS GÉRMENES VIVOS: MOVILIDAD

DE LOS ORGANISMOS. TINCIONES

1.- OBSERVACIÓN DE LOS GERMENES VIVOS

Para la investigación de algunas características biológicas de los

microorganismos como son su morfología y movilidad es necesario
observar los gérmenes in vivo.
Para ello se debe partir de cultivos jóvenes ya que los
microorganismos de los cultivos viejos pierden su movilidad y gran
parte de ellos están en regresión.
Estas técnicas son las siguientes:

a.- EXAMEN EN FRESCO

33
 Microbiología

 Fundamento: Suspendiendo el microorganismo en un medio

líquido transparente es posible observar al M/O sus
características morfológicas y su movilidad. Se utiliza para
clasificar a los organismos en los procesos de identificación en :
- móviles o inmóviles
- observación de estructuras espiriladas
- fase de reproducción

 Material: m.o., cubreobjetos, portaobjetos excavado, mechero,

asa de siembra.
 Reactivos: vaselina sólida y microorganismos (Proteus vulgaris).

 Técnica: Para el examen en fresco existen dos métodos, son los

siguientes:
1º- Método de la gota pendiente
 Técnica:
1º En el centro de un cubre limpio y desengrasado se coloca
una gota de la suspensión de microorganismos con un asa
esterilizada.
2º Invertir sobre el cubre el porta excavado untando con
vaselina alrededor del pocillo, colocándolo de forma que la gota
quede centrada en la depresión, la vaselina adhiere el cubre al
porta de modo que se forma una cámara que evita la
evaporación de la gota.
3º Después dar rápidamente la vuelta a la preparación.
4º Observar al M/O con el objetivo de 40x.
2º- Método de la cámara húmeda
 Técnica:
1º Depositar en el centro de un porta limpio y desengrasado
una gota de agua estéril.
2º Tomar con el asa una muestra del microorganismo y realizar
una suspensión con la gota de agua.
3º Colocar sobre la suspensión un cubre evitando que queden
burbujas de aire.
4º Observar al M/O con el objetivo de 40x.

 Resultados e interpretación: La movilidad se manifiesta en un

desplazamiento del microorganismo en todas las direcciones
del campo del M/O a diferencia del movimiento browniano de
los gérmenes presentes en la suspensión que no presentan
movilidad, los cuales se desplazan en la misma dirección. Este
extremo se puede comprobar añadiendo un antiséptico a la
preparación en caso de tratarse de organismos móviles
desaparecerá el movimiento observado.

 Observaciones al método: Es importante que el tamaño de la

gota sea adecuado. Si es muy grande provocaría en ambas
técnicas el desplazamiento del cubre impidiendo la visión

34
 Microbiología

correcta de la preparación, si es muy pequeña puede

evaporarse en el interior de la cámara. En el método de la gota
pendiente si no se dispone de vaselina se puede humedecer los
bordes de la excavación con solución salina estéril o agua
destilada.

b.- COLORACIÓN VITAL

 Fundamento: Es un proceso intermedio entre el examen en

fresco y las técnicas de coloración después de fijación.
Tiene por objeto poner de relieve detalles estructurales de los
microorganismos que no es posible observar en fresco sin
causar modificaciones físicas o químicas incompatibles con el
elemento examinado.
En general no se tiñen sino que se acumulan en ciertas partes
del microorganismo. Se deben emplear colorantes atóxicos a
diluciones muy altas.

 Material: Portaobjetos, cubreobjetos, asa de siembra, mechero,

papel de filtro y aceite de inmersión.

 Reactivos: Se emplean colorantes en disoluciones: 1/1000,

1/5000, 1/10000. Son: nigrosina, azul de metileno, verde janus,
verde malaquita.

 Técnica:
1º Colocar en el centro del porta una gota de la suspensión del
microorganismo y otra del colorante.
2º Mezclar con el asa de siembra y colocar el cubreobjetos
sobre la gota resultante (sin burbujas).
3º Observar al M/O con el objetivo de inmersión (100x).

2.- TIPOS DE COLORANTES

Los colorantes son sustancias capaces de dar color a otros

cuerpos, pero para que sean efectivos deben tener predilección por
determinados organismos, es decir, deben ser selectivos.
Los colorantes se pueden dividir en:
a.- En función de su naturaleza estructural, pueden ser:
- Naturales (carmín y hematoxilina).
- Artificiales (anilinas), que proceden de la destilación de la hulla.

b.- Desde el punto de vista químico, pueden ser:

- Ácidos (citoplasma)
- Básicos (núcleo)
- Neutros (cuando se asocian el colorante ácido y el básico. Los
más conocidos son los eosicionatos de tiacina que suelen
designarse con el nombre del autor que inventa la mezcla)

35
 Microbiología

- Indiferentes (son insolubles en agua y solubles en alcohol. Ej.

Sudán III)

En bacteriología, se usan principalmente los colorantes artificiales

básicos. Algunos colorantes se depositan sobre determinadas
estructuras cuando han sido sometidas a la acción de un mordiente
(fijador) que puede actuar en solitario o junto con el colorante
formando lo que se denomina como “laca”
(LACA=FIJADOR+COLORANTE).

3.- TÉCNICAS DE TINCIÓN

En la mayoría de las ocasiones para la observación de los

microorganismos, éstos son teñidos ya que de esta forma son más
fáciles de visualizar y se pueden poner de manifiesto características
diferenciales. Las tinciones se pueden clasificar es función de 2
características:

a.- Procedimiento de coloración: Se pueden dar:

• Técnicas de Inmersión: Permite teñir varias preparaciones a
la vez. Se realizan introduciendo la extensión en el/los
recipientes que contienen colorante.
• Técnicas de Vertido: Son las más usadas. Se efectúan por
decantación libre de colorantes y reactivos distinguiéndose 2
tipos:
- Técnica en condiciones normales.
- Técnica en condiciones drásticas. Llamada Tinción de Emisión
de Vapores. Se suele emplear para los BAAR (Bacilos ácido
alcohol resistentes).
 Materiales: El mismo utilizado en condiciones normales.
 Técnica: La extensión debe quedar cubierta por un trozo
de papel de filtro del mismo tamaño que el porta que se
irá impregnando de forma intermitente con el colorante
usado en la tinción. La emisión de vapores se consigue
calentando la parte inferior del porta con algodón
impregnado en alcohol etílico sostenido del extremo de
una varilla de vidrio. No se debe mantener la llama fija,
pues se puede romper el porta. La extensión se somete a
calentamiento hasta que se emitan vapores. En ese
momento se retira la llama hasta que deje de emitirlos y
se repite nuevamente el ciclo, así sucesivamente durante
todo el tiempo que dure al titulación (práctica).
 Observaciones: No se debe dejar secar el papel de filtro
ya que si no se deterioraría la extensión. Hay que ir
añadiendo periódicamente el colorante. Algunos autores
no usan papel de filtro realizando la técnica por contacto
directo del colorante sobre la extensión y posterior
calentamiento hasta la emisión de vapores. Se debe tener
la precaución de añadir el colorante repetidamente. Estas

36
 Microbiología

tinciones requieren calentamiento para que el colorante

atraviese la pared bacteriana como en las micobacterias.

b.- Según su aplicación

Técnica General de Tinción

1º.- Extensión.
Para obtener una película lo más homogénea posible de muestra.
Si la muestra el líquida, depositar una pequeña cantidad en el
extremo del porta, extenderlo con el asa de siembra hasta conseguir
una capa fina y homogénea.
Si la muestra es sólida, depositar una gota de suero fisiológico o agua
destilada y suspender en ella una pequeña cantidad de cultivo, hasta
obtener una capa fina y homogénea.

2º.- Desecación.
Tiene como objeto eliminar el agua de la extensión para fijarla. Se
deja secar a Tª ambiente o calentando ligeramente alrededor de la
llama, jamás directamente sobre ella.

3º.- Fijación.
Se consigue la muerte de los microorganismos por coagulación de las
proteínas quedando la extensión adherida al porta, para que resista
las operaciones siguientes. Tiene por objeto mantener la composición
fco-qca. del microorganismos de forma que conserve definitivamente
una estructura lo más parecida posible a la inicial.
La fijación puede realizarse por:
- Solución fijadora (etanol, metanol), que se deja actuar durante
varios minutos; se escurre y se deja secar.
- Calor, poniendo la parte inferior del porta contra la llama del
mechero repitiendo la operación.

4º.- Tinción.
Mediante la cual el microorganismo capta el colorante.

5º.- Lavado.
Mediante el cual eliminamos el exceso de colorante.

6º.- Secado.
Se mejora la visualización del microorganismo.

Hay distintos tipos:

• Tinción Simple
Son aquellas que solo utilizan un colorante y tienen como objetivo
permitir la observación de la morfología bacteriana. La tinción
resultante puede ser uniforme o presentar algunos gránulos en su
interior, lo que significa una mayor afinidad de determinados

37
 Microbiología

componentes de la célula por el colorante. Los mas usados son: verde

malaquita, violeta de genciana…

• Tinción diferencial o compuesta

Requieren más de un colorante y sirven para poner de manifiesto
algún carácter propio de microorganismos. Las principales tinciones
son: tinción de Gram y tinción Ziehl-Nielsen.

TINCION DE GRAM

 Fundamento: divide a los microorganismos en gram positivas y

gram negativas. Las gram positivas son aquellas que resisten la
acción de colorante del disolvente alcohol-acetona, tras el
tratamiento con un colorante básico y lugol, mientras que las
gram negativas son decoloradas siendo posteriormente teñidas
con un colorante de contraste como puede ser la fusina diluida
o safranina, este hecho se debe a la diferente composición de la
pared celular. Es conveniente realizar la tinción de gram sobre
células de cultivos jóvenes ya que algunos microorganismos son
gram positivos solo en la fase de crecimiento.
 Material: portaobjetos, mechero, asa de platino, pipeta, pinzas
de madera, M.O. y equipos de tinción (cristalizador, barras
paralelas y frascos lavaderos).
 Reactivos: lugol, violeta de genciana, fusina diluida o safranina,
alcohol-acetona, aceite de inmersión.

 Técnica (ver fotocopia)

PASOS METODOS RESULTADOS

Positivos
Negativos
Colorante básico Violeta genciana Violeta
Violeta
Mordiente Lugol Violeta
Violeta
Decolorante Alcohol / acetona Violeta Se
decolora
Colorante Suframina o fusina Violeta
contraste Rosa

 Resultados e Interpretación: Las bacterias gram positivas son

de color violeta y las gram negativas de coloración rosa.

TINCION DE ZIEHL-NIELSEN

38
 Microbiología

 Fundamento: se utiliza para diferenciar BAAR es decir, aquellos

microorganismos que resisten la decoloración con una mezcla
de ácido y alcohol.
Algunas bacterias poseen en su pared celular ciertos lípidos que
le confieren la propiedad de resistir la decoloración con ácido –
alcohol.
Esta tinción requiere un calentamiento para que el colorante
atraviese la pared bacteriana. Los microorganismos que
resisten la coloración son: micobacterias, actinomicetos y
nocardia.
 Material: portaobjetos, asa de siembra, pipetas, pinzas de
madera, mechero, M.O. y equipo de tinción.
 Reactivos: fusina, alcohol clorhídrico (97:3), azul de metileno,
microorganismo uno BAAR y uno no BAAR y aceite de
inmersión.
 Técnica: (ver fotocopia).
 Resultados e interpretación: Los microorganismos BAAR
adquieren color rojo y los no BAAR azul.

TINCIÓN AURAMINA-RODAMINA

 Fundamento: Tanto la Auramina como la Rodamina son dos

fluorocromos que tiñen microorganismos. En las micobacterias
se fijan sobre los ácidos micolicos de la pared diferenciándolas,
por lo que en la investigación de estas bacterias es una técnica
principal. Además se aplica un colorante de contraste no
fluorescente con el fin de ejercer un papel de campo oscuro.
 Materiales: portaobjetos, mechero, equipo de tinción, m/f.
 Reactivos: Auramina-rodamina.
 Técnica:
1º Extender, secar y fijar.
2º Teñir con Auramina-Rodamina a temperatura ambiente
(37ºC) durante 15 minutos.
3º Lavar con agua destilada.
4º Decolorar con alcohol clorhídrico durante 2-3 minutos y
después lavar con agua destilada.
5º Contrastar durante 2-4 minutos con colorante de contraste,
ya que tiempos mayores originan perdidas de brillo. El contraste
reduce la posibilidad de artefactos.
6º Lavar, secar y observar al m/f con objetivo de 40x.

 Resultado e interpretación: En los microorganismos se verán

puntos amarillos-verdosos brillantes.

 Observaciones al método: Es una tinción equivalente a la de los

B.A.A.R.

39
 Microbiología

No obstante debe utilizarse una tinción B.A.A.R de Ziehl-Nielsen

para confirmar su prueba.
Este método tiene la ventaja sobre el anterior de que no es
necesario el calentamiento de la preparación.

TINCIÓN ÁCIDO RESISTENTE DE KINYOUN

 Fundamento: la observación de presencia o ausencia de

B.A.A.R.

 Técnica:
1º Extensión.
2º Fijación en llama(preferiblemente).
3º Cubrir la muestra con solución de Kinyoun durante 3
minutos.
4º Lavar con aguas corriente durante 30 segundos.
5º Cubrir con solución de Gabett durante 1 minuto.
6º Lavar con agua corriente y secar.
7º Observar al m/o con objetivo de inmersión.

Tinciones estructurales

Nos permiten ver distintas estructuras: flagelos, esporas, cápsula,

corpúsculos metacromáticos, etc.

 Flagelos:

- Método de Rodees.
- Método de Triboadeau.
- Método de Leifson.

 Esporas:

- Método de Moeller.
- Método de Wirlz-Conklin.

 Cápsula:

- Método de Hiss.
- Método de la tinta china.

 Corpúsculos metacromáticos:

- Método de Albert.
- Método de Loeffer.

TINCIÓN DE WIRLZ-CONKLIN

40
 Microbiología

 Técnica:
1º Extensión.
2º Desecación.
3º Fijación.
4º Teñir con verde malaquita a emisión de vapores durante 10
minutos.
5º Lavar con agua destilada arrastrando el papel de filtro
(opcional).
6º Teñir con fusina diluida durante 3 minutos.
7º Lavar, secar y observar al m/o con el objetivo de inmersión.

 Resultados e interpretación: las esporas se observan de color

verde, mientras que la forma vegetativa se observa de color
rojo.

41
 Microbiología

TEMA 6.- MEDIOS DE CULTIVO I

1.- INTRODUCCIÓN

Para estudiar las reacciones metabólicas y fisiológicas de las

bacterias es necesario cultivarlas en un medio de cultivo que es una
mezcla de sustancias que proporcionan en forma asimilable todos los
elementos necesarios para su crecimiento y multiplicación.
El desarrollo de las bacterias en un medio de cultivo depende de una
serie de factores:

1º.- Composición: los medios de cultivo deben incluir los elementos

imprescindibles para la vida bacteriana:

• Fuente de N y C.
• Elementos minerales como: S, P, Mg, Ca, Fe, etc.
• Factores de crecimiento que por si solas no son capaces de
sintetizar(aa, vitaminas, etc.).
• Factores estimulantes o de arranque. Ej: sangre.

2º.- pH: suele estar alrededor de la neutralidad, aunque hay algunos

microorganismos que tienen un pH específico diferente. Ej: bacterias
acidofilas.

3º.- Presión osmótica: los medios se preparan en condiciones de

isotonia.

4º.- Potencial Redox: esta en relación con el tipo respiratorio de

cada bacteria, que puede ser:

 aerobios estrictos u obligados.

 anaerobios estrictos u obligados.
 facultativos.
 microaerófilos.
 anaerobios aerotolerantes.

5º.- Hidratación: el agua es imprescindible para el crecimiento

bacteriano por lo que estará en cantidad suficiente en los medios de
cultivo.

6º.- Temperatura: se incuba a la temperatura de interés médico

(35-37ºC).

7º.- Atmósfera: algunas bacterias, especialmente algunas aerobias

y facultativas necesitan la presencia de ciertos ambientes gaseosos.
El más usado es el CO2 en proporciones entre 3-10%.

42
 Microbiología

2.- CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo se pueden clasificar:

1.- Según el fin al que están destinados:

 Medios generales: en los cuales se desarrollan una amplia

variedad de microorganismos sin condiciones nutritivas
especiales. Ej: agar nutritivo o caldo nutritivo.

 Medios selectivos o inhibidores: inhiben por completo el

crecimiento de bacterias distintas de las que se quieren aislar y
que existen en la muestra. La selectividad del medio se
consigue con la adicción de sustancias como sales
biliares( inhiben las formas cocaceas gram +) o la ázida
sódica( sólo permite el crecimiento de las gram+). Los
antibióticos son otras sustancias que transforman los medios de
cultivo en selectivos.

 Medios de enriquecimiento: favorecen el crecimiento de algún

tipo de bacteria que se encuentra minoritariamente en una
mezcla de varias bacterias. Ej: caldo de selenito y tetrationato
que se usan para en aumento de Salmonellas que existen en el
contenido intestinal.

 Medios de diferenciación: se usan para poner de manifiesto a

las bacterias que dan positiva alguna prueba bioquímica y que
están presentes en la mezcla. Ej: bacterias glucosa + o glucosa-

 Medios de identificación: son aquellos que se utilizan para

estudiar la acción de un solo tipo de bacterias frente a un
determinado sustrato. Se diferencian del anterior en que se
siembran con bacterias pertenecientes a un sólo clon. Se utiliza
para la identificación de bacterias.

 Medios de multiplicación: son aquellos que poseen una

composición determinada y óptima que permiten el máximo
aumento celular bacteriano en el mínimo tiempo. Son muy
usados en la preparación de vacunas y Acs.

 Medios de conservación: son aquellos cuya composición

favorece el mantenimiento de los microorganismos que en él se
siembran y que posteriormente se incuban entre 2-4 ºC.
Algunos medios de conservación incluyen glicerol y se guardan
en el congelador(-20ºC), estos medios han sido desplazados por
la liofilización.
Existe una variación de los medios de conservación que son los
medios de transporte cuya finalidad es mantener el estado

43
 Microbiología

viable aunque sin reproducción(mínimamente) de los

microorganismos presentes en la muestra, permitiendo con
posterioridad recuperar incluso a los que están
minoritariamente presentes. Los más utilizados son: de Stuart,
Amies, Cary-Blair.

2.- Según su consistencia.

 Medios Líquidos: También llamados caldos. No llevan ninguna

sustancia gelificante, se usa principalmente para
enriquecimiento o identificación. Su recipiente puede ser un
frasco, una botella o un tubo.

 Medios semisólidos: Contienen una proporción menor del 5% de

agente gelificante.

 Medios sólidos: Se denominan agares. Contienen agentes

gelificantes en proporciones considerables. Los medios sólidos
se pueden dividir en:
o Inicialmente líquidos: según su reversibilidad de estado hay 2
tipos:
 Reversibles: después de solidificar pueden volver a licuar.
Tienen fácil conservación. Los agentes gelificantes
incorporados son agar, suero, etc.
 Irreversibles: no se pueden volver a licuar. Como
sustancias solidificantes contienen huevo, suero, etc.
o Inicialmente sólidos: en función de la naturaleza química del
agente solidificante se distinguen 2 tipos:
 Orgánicos: como tubérculos.
 Inorgánicos: como silicatos.

Los medios sólidos pueden estar contenidos en frascos, botellas o

tubos, pudiendo aparecer éstos:
- en horizontal: usado en siembra de picadura
- inclinado: se emplean en identificación, obtención de masa de
microorganismos y almacenamiento (colonias). Una variante es
el pico de flauta.
También los medios sólidos suelen estar contenidos en placas, siendo
las más utilizadas las placas de Petri.

3.- Según su consistencia.

 Medios naturales o empíricos: Están constituidos por

componentes de origen animal o vegetal como huevos, leche,
patatas, etc. Actualmente está en desuso.

 Medios sintéticos: Son una solución de medios puros

químicamente disueltos en agua destilada. Poseen composición

44
 Microbiología

constante. Se utilizan para el crecimiento y metabolismo

bacteriano.

 Medios semisintéticos: Contienen sustancias químicas de

naturaleza y proporciones conocidas junto a productos de
origen natural. Son los medios más utilizados actualmente.

3.- PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO

 FUNDAMENTO: La manipulación adecuada de determinados

agentes nutritivos permite obtener una fuente de alimentación
y ambiente adecuado para que puedan crecer y desarrollarse
los microorganismos en las condiciones idóneas.

 REACTIVOS: Ingredientes del medio de cultivo, NaOH (1%) y

HCl (1%).

 MATERIALES: Vaso de precipitados de 250/500 cc., erlenmeyer

de 250/500 cc., placa petri, pipetas de 10 y 25 ml, papel
indicador de pH, tubos de cultivo, autoclave, algodón graso,
papel de aluminio y balanza.

 TÉCNICA:
1. Elección de los ingredientes: Sólo cuando se elabora un
medio de cultivo a partir de los elementos que los
componen. Este paso es poco frecuente debido a la
comercialización de los medios.
2. Pesada de cada uno de los ingredientes.
3. Hidratación: El agua usada en la reconstitución debe ser
destilada o desionizada y calentada a 50-60ºC. Se coloca en
un vaso de precipitado la mitad del agua a la que se le
añaden los ingredientes o el medio de cultivo
homogenizando con una varilla agitadora y manteniendo la
exposición al calor. Los medios líquidos no necesitan llevar a
ebullición en su preparación, mientras que los medios sólidos
deben llevarse a ebullición pues necesitan una Tª de 98-
100ºC para disolverse. En la preparación del medio sólido se
recomienda que antes de iniciar el calentamiento se deje
reposar el agua precalentada durante 5-10 minutos para
provocar un esponjamiento del agente gelificante que
facilitará la disolución.
4. Ajuste de pH: Se hace imprescindible cuando se parte de
ingredientes por separado. Se mide el pH y si este no es el
adecuado se ajusta con las disoluciones de NaOH y HCl.
5. Distribución: Para la esterilización se distribuirá el medio de
cultivo en recipientes que permitan un buen proceso de
esterilización y procurar que los recipientes sean los

45
 Microbiología

definitivos para llevar a cabo el cultivo. Se plantean dos

posibilidades:
o Medios en tubo: con una pipeta de boca ancha o un
dosificador se depositan en cada tubo la cantidad de
medio de cultivo correspondiente a 10-20 cc., según la
capacidad del tubo. Se tapa con una torunda de
algodón graso que se cubre a su vez con papel de
aluminio y se lleva a esterilizar. También se puede
utilizar tubos con tapón de rosca. Con ello se consigue
esterilizar recipiente y medio de cultivo por lo que éste
estará dispuesto para ser sembrado y almacenado
hasta su uso, ya que los tubos constituyen el
recipiente definitivo.
o Medios en placa: Se vierte el medio en un erlenmeyer
no debe ocupar más de 2/3 de la capacidad total pues
la ebullición en el autoclave haría que el medio
rebasase. Antes de esterilizar se tapa con algodón
graso y aluminio.

6. Esterilización: Se realiza a 121ºC durante 15 minutos. Para

volúmenes mayores de 250cc. se aumenta el tiempo.
7. Vertido en placa: Tras la esterilización se homogeniza
moviendo en sentido rotatorio. El vertido en placa se debe
realizar cuando la Tª sea próxima a la gelificación 45-55ºC
(puede mantener la mano sobre el recipiente).Con ello se
evita la excesiva formación de agua de condensación en la
tapa de las placas. Para el llenado se usan pipetas estériles
de boca ancha o un dosificador estéril, siendo este más
adecuado para evitar la obstrucción del agar. Las placas
estériles por lo que la técnica de vertido debe realizarse en
condiciones de esterilidad. El volumen de muestra que debe
depositarse en la placa será según el espesor de la capa
deseada y las dimensiones de la misma ( de 2.5-3 mm, un
poco más de la mitad de la placa).
8. Enfriamiento:
o Medios líquidos: Tal como se extraen del autoclave se
dejan enfriar.
o Medios sólidos: Dependerá de donde se encuentre el
medio, así
-Tubos: enfriar a Tª ambiente en posición vertical (para
conseguir agar horizontal) u oblicuo (para conseguir agar
inclinado).
- Placas: tras el vertido debe asegurarse que no existen
burbujas ejerciendo movimientos rotatorios (las burbujas
se quitan con el asa esterilizada).

 OBSERVACIONES AL MÉTODO: Si no se dispone de autoclave

se pueden esterilizar los medios en baño maría hirviente o en

46
 Microbiología

olla a presión durante 30 min. repitiendo la operación durante 3

días consecutivos.
Los ingredientes o medios deshidratados se protegerán de la
humedad, la luz y el calor. Los recipientes deben ser de plástico
o vidrio opaco y cierre hermético. No deben abrirse en
ambientes húmedos y deben desecharse cuando se apelmacen.
Se controlará periódicamente su fecha de caducidad. Los
medios hidratados y esterilizados tienen un tiempo limitado de
conservación, en general pueden conservarse 4-6 semanas en
condiciones adecuadas. El problema más frecuente es la
deshidratación, se tendrá en cuenta las siguientes
recomendaciones:
- almacenar en nevera a 4ºC, también a Tamb. aunque su
duración es más limitada.
- no deben guardarse a T menor de 0ºC (T de congelación) pues
altera la estructura del gel.
- protegerlos de la luz, para ello envolver el recipiente en papel
de aluminio
- los tubos con cierre hermético son más recomendables que las
torundas de algodón
- los medios para verter en placa se conservan mejor en el frasco
original aunque pueden quedarse en ellos teniendo en cuenta:
se deben refrigerar inmediatamente después de su
solidificación
se protegerán frente a desecación precintando con cinta
adhesiva su borde lateral o envolviendo varias en bolsa de
plástico
se recomienda mantener en posición invertida para evitar
que se caiga sobre el medio el agua de condensación
Los medios conservados en refrigerador deben ser atemperados
antes de su empleo con estufas de cultivo o a T ambiente. No utilizar
nunca medios con excesiva deshidratación, la cual se manifiesta:
- en medios líquidos, por aumento de concentración o
disminución de volumen
- en medios sólidos, por disminución de espesor, agrietamiento,
retracción, cambio de color, etc.
Algunos medios son conservados en estado sólido en el recipiente
original y luego son refundidos para su distribución.
Las precauciones a tener en cuenta son:
- no deben realizarse con medios ácidos, ya que se alteran sus
características (el agar se hidroliza al calentarse en medios
ácidos)
- si se mantienen fundidos periodos de tiempo mayores de 60
minutos, la calidad del medio disminuye considerablemente
- es aconsejable refundir al baño maría o autoclave durante 30
minutos, nunca aplicar calor directamente

4.- ELIMINACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

47
 Microbiología

Cualquier medio de cultivo sobre todo si ha sido sembrado, es un

posible foco de contaminación debiendo eliminarlo tras su utilización.
Los medios de cultivo se pueden descontaminar:

1.- Inundación en solución desinfectante: Se cubre la superficie con

esta solución y se deja unas 12 horas. Se utiliza cuando no hay
autoclave.

2.- Esterilización en autoclave

3.- Incineración: se utiliza para microorganismos muy patógenos.

Solo después de la descontaminación del medio de cultivo se

procederá a la limpieza de sus recipientes (cuando éstos son
recuperables).

5.- CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

El 4% de los medios de cultivo de los lotes se controlan en estufas

durante 5-7 días a una temperatura de 37ºC, durante este tiempo
debe verificarse el color del medio preparado así como la gelificación,
los precipitados atípicos, etc. en el caso de advertir variaciones
atípicas se desechan los lotes.
Con los medios de cultivo se deben establecer tres tipos de controles
antes de considerarlos aptos:
1º.- Control de esterilidad (explicado anteriormente).
2º.- Control de calidad, se realiza para comprobar que el medio
contiene aquellos componentes que le caracterizan. Para su
comprobación se utilizan por lo menos dos gérmenes distintos:

- uno que crece en ese medio o da + una determinada prueba.

- Otro que no crece en ese medio o da – la prueba.

3º.- Control de caducidad, para ponerlo en práctica es necesario

que en el momento de emplaque se rotule en un lugar de la placa
además del medio, la fecha de preparación.

48
 Microbiología

TEMA 7.- CULTIVO DE BACTERIAS II (SIEMBRA)

1.- INTRODUCCIÓN

Dado que la manipulación de muestras en microbiología entraña

riesgos, recordamos las siguientes instrucciones:

- Todo material debe ser estéril.

- La manipulación en radio de 10-15 cm. (zona aséptica)
alrededor de campana o zona de flujo.
- Se procurará disponer de todo el material al alcance de la mano
para evitar desplazamientos.
- Es necesario adquirir rapidez y automatismo indispensable para
una buena ejecución de las técnicas.

2.- MANIPULACIÓN DEL MATERIAL

 Asa de hilo, platino o micro:

1º Esterilizar antes y después de su uso, para lo cual se coloca
perpendicular a la llama hasta que alcance el rojo vivo en toda su
longitud. Para evitar salpicaduras el instrumento se introduce
gradualmente en la llama.

49
 Microbiología

2º Cuando se quiere meter en recipiente de boca estrecha se

debe flamear la parte del mango que quede dentro del recipiente
durante su manipulación.
3º Tras la esterilización se enfriará unos segundos en la fuente
aséptica, pues si contacta con la zona del microorganismo
(colonia, medio líquido, etc.)esterilizaremos la muestra recogida.

 Pipetas: Con pipetas de seguridad (tienen filtro de algodón en

su boquilla) o con prepipetas se flameará previamente la punta
y en toda su longitud que contacte con el recipiente de la
muestra. La pipeta se manejara con la punta dirigida hacia
abajo, manteniéndola vertical u oblicua pero nunca horizontal.

 Recipientes de vidrio: Siempre que contenga algún producto en

su interior (m.c.) deben estar tapados con torundas de algodón
así:

 No se abrirán en posición vertical.

 Su apertura se realizara oblicuamente dirigiendo su apertura
sobre la llama.
 El algodón se coge con el dedo meñique de la mano opuesta,
evitando el contacto mientras se manipula el contenido del
medio.
 La boca se flameara al abrir y al cerrar, la cual se expone en
la llama unos segundos con movimientos rotativos.

 Placas de Petri: Se manipularan semiabiertas con la abertura

orientada a la llama del mechero.

3.- MANUPILACION DE MUESTRAS

1º) Medio líquido:

- Con asa de platino o Nicron:

 destapar el tubo
 flamear la boca del tubo
 introducir el asa estéril y sumerguirlo
 extraer el asa
La muestra queda formando una película circular en la luz del
asa, solo se puede conocer el volumen de la muestra utilizando asas
calibradas.

- Con pipeta estéril: se debe tener la precaución de mantener

limpia la parte exterior de la pipeta por lo que se dejara
gotear él liquido adherido a las paredes sobre el recipiente
antes de taparlo.

50
 Microbiología

2º) Medios sólidos:

 destapar el tubo o flamear el tubo

 contactar suavemente el asa o el hilo estéril con alguna
colonia visible
 flamear la boca del tubo o cerrar la placa

4.- PREPARACION DEL INOCULO ESTANDARIZADO (práctica)

Cuando las muestras son muy viscosas o concentradas y para

técnicas en las que se pretende el aislamiento del germen o la
realización de un análisis cuantitativo, es necesario preparar él
inoculo de siembra para obtener resultados fiables.

• Técnica general de preparación de inoculos:

Se obtiene a partir de un cultivo joven (fase exponencial de

crecimiento) y puro o de un producto patológico.
Se toma con un asa estéril colonias de un cultivo o una porción de
una muestra biológica y se diluye en 5 cm cúbicos de una solución
diluyente, la cual se homogeneiza. Como diluyente podemos utilizar
caldo nutritivo, solución salina o agua destilada estéril.

• Técnica de KYRBY – BAUER:

Utiliza escalas con gradiente de turbidez, cada tubo de la escala va

numerada y sirve de referencia según el nº de microorganismos que
se quieran. Él inoculo se puede ajustar al patrón de referencia
mediante:
- comparación visual aproximada (turbidez)
- espectrofotometría
Una escala universalmente aceptada es la escala de Mc FARLAN,
constituida por una serie de tubos en los que se origina un
precipitado blanco de BaSO4 por acción de H2SO4 con BaCl2.

Tubo 0,5 1 2 3 4 5 6 1 7 8 9
0
Cl2Ba 2H2O al 0,0 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 1
1,175 % (P/V) 5 1 2 3 4 5 6 7 8 9
H2SO4 1% (V/V) 9,9 9, 9, 9, 9, 9, 9, 9, 9, 9, 9
5 9 8 7 6 5 4 3 2 1
Densidad de cels. 1,5 3 6 9 1 1 1 2 2 2 3
aprox 2 5 8 1 4 7 0
x10 cel/cc
6

51
 Microbiología

Cada tubo se lee en el espectrofotómetro y se obtiene una

absorbancia de cada uno. Se representa Absorbancia frente a
concentración y se obtiene una recta en la que se interpolan las
absorbancias de las muestras problema pudiendo conocer la
concentración de éstas, así se estandariza la muestra problema.

5.- SIEMBRAS

Existen diferentes técnicas y éstas se clasifican según el modo

de efectuarse:

1.- Por inoculación.

Se puede llevar a cabo en medio liquido o medio sólido.

a) Medio liquido:
- Con asa: sumergir el asa cargada y agitar.
- Con pipeta: verter el contenido de la pipeta sobre el m.c. y
se homogeneiza.
- Con escobillon: se realiza de igual modo que con el asa de
siembra.

b) Medio sólido:

- En placa : Hay dos técnicas: técnica de Barry y la técnica de

Kirby Bauer.

• Técnica de Barry: Es una inoculación previa al vertido en placa, se

siguen los siguientes pasos:
1º) se toma 0,1 cm cubico de inoculo y se añaden a 25 cm cúbicos de
m.c. fundido (40-50º).
2º) homogeneizar.
3º) verter en la placa de petri.
Una modificación de esta técnica consiste en verter él inoculo
directamente en la placa y seguidamente se agrega en m.c. y dando
movimientos de rotación para así mezclar. Esta técnica se utiliza para
el recuento de viables y antibiogramas.

• Técnica de Kyrby Bauer: Es la inoculación sobre la superficie del

medio solidificado, se siguen los siguientes pasos:
1º) preparado él inoculo en tubo estéril se introduce un escobillon
también estéril hasta quedar impregnado.
2º) se elimina el exceso de inoculo presionando el escobillon con
movimientos de rotación contra las paredes del tubo.
3º) se siembra la placa empleando la técnica de los tres giros,
pasando el escobillon por toda la placa 2 o 3 veces antes de efectuar
cada giro, para distribuir uniformemente él inoculo.

52
 Microbiología

4º) se deja secar la placa 3-4 min. En posición semi abierta e

invertida quedando lista para utilizar.
Esta técnica se emplea para el estudio de sensibilidad o
inoculación directa de productos patológicos.

- En tubo: Existen dos técnicas: siembra en estrías y siembra

en picadura.

• Siembra en estrías: En superficie inclinada, se siguen los

siguientes pasos:
1º) se toma la muestra con el asa.
2º) se introduce en el tubo que contiene el medio.
3º) desde el fondo de la superficie y en progresión ascendente,
deslizar el asa con movimientos de zig-zag.
Esta técnica se utiliza para obtener colonias, renovar cepas
(resembrar) y pruebas biológicas.

• Siembra en picadura: Se siguen los siguientes pasos:

1º) se toma la muestra con la punta del hilo.
2º) se punciona en el centro del m.c. introduciendo la punta del hilo
hasta 2-3 mm del fondo del tubo.
3º) se extrae el hilo por la misma línea que se introdujo.
4º) si se trata del medio inclinado (pico de flauta) se puede realizar
una siembra en estrías con el mismo hilo por la superficie del medio.
Esta técnica se emplea para pruebas de identificación,
movilidad, pruebas bioquímicas, hidrólisis de principios inmediatos
etc.

2.- Por aislamiento

Se realizan en placa y hay dos tipos:

- Por dilución:
1º Disponer de tres tubos fundidos a 30-50 ºC previamente marcados
con los números 1, 2 y 3.
2º Tomar con el asa estéril la muestra y sembrar en el tubo 1.
3º Homogeneizar el tubo 1 por dilación (entre las palmas de las
manos) y tomar un asa del mismo tubo, resembrando al tubo 2
dejando el tubo 1 al baño maría a 45ºC.
4º Homogeneizar el tubo 2, tomar una muestra y pasarla el número 3
dejando el tubo 2 en el baño maría a 45ºC.
5º verter el contenido de cada uno de los tubos homogeneizados de
nuevo en tres placas marcadas con los números 1, 2 y 3, esperar que
solidifique el medio.
6º En la placa número 3 se obtendrán colonias aisladas.

- Por agotamiento: Hay cuatro modos:

53
 Microbiología

• Siembra en estrías o zig-zag

1º Se deposita el inoculo en el extremo superior de la polaca.
2º Se siembra con el asa a partir del inoculo con un movimiento de
zig-zag cada vez más amplio (en la línea media de la placa alcanza su
máxima amplitud), para ello el asa debe contactar suavemente con la
superficie del medio (no se debe presionar demasiado pues se
agrietaría).
3º La siembra se efectuará hasta la zona distal del comienzo, donde
se obtendrán colonias aisladas.

• Siembra en estrías múltiples

1º Se deposita el inoculo en el extremo de la placa.
2º Con el asa se reparten en varios tramos siguiendo el borde de la
placa. Entre cada tramo se debe flamear el asa.
3º Los segmentos seguidos definen un poliedro regular. El último
tramo se efectuará hacia el interior, donde se obtendrán las colonias
aisladas.

• Siembra en los cuatro cuadrantes

1º Se divide la placa en cuatro cuadrantes (se puede rotular con
rotulador de vidrio en la parte superior).
2º Se deposita el inoculo en la parte superior de uno de los
cuadrantes y se siembra por estrías.
3º Sin flamear el asa se repite la operación en los tres cuadrantes, en
cada uno de ellos se siembra el inoculo adherido al cuadrante
anterior. Tenemos colonias aisladas en el cuarto cuadrante.

• Siembra en tres giros

1º Se siembra en estría la mitad de la placa.
2º Flamear el asa.
3º Se gira la placa 90º, sembrando en estría la mitad superior de la
misma.
4º Se repiten los pasos 2º y 3º.
5º Las colonias aisladas aparecen en la zona sembrada en último
lugar.

6.- ESTUDIO MORFOLÓGICO DE LAS COLONIAS

El estudio morfológico se hace tanto macro como

microscópicamente.

1.- Estudio macroscópico

Cuando una bacteria se cultiva en medio sólido se desarrolla

una colonia. La morfología de dicha colonia y su entorno en relación
con el medio donde se desarrolla es un dato orientativo y puede
servir para identificar al microorganismo.

54
 Microbiología

El aspecto de la colonia puede recordar algún objeto denominándose

de la misma forma.
Hay que tener en cuenta que una bacteria puede dar colonias
distintas en función del medio (ejemplo: salmonella en agar makonki
da colonias distintas que en agar SS). El estudio de la morfología de
colonias es solo orientativo, puesto que en determinados medios
especies distintas pueden dar colonias similares.

Las colonias aisladas en placa se pueden clasificar atendiendo a:

 Forma: puntiforme, circular, filamentosa, ameboide, rizoide y
fusiforme.
 Elevación: plana, convexa y umbonada.
 Borde: entero, ondulado, lobulado, crenado, filamentoso y
enrollado.
 Superficie: lisa, rugosa, brillante y mete.
 Color: relacionado con el medio de cultivo y el metabolismo del
microorganismo.
 Consistencia: para determinarla es necesario tocar la colonia
con el asa (mantecosa, grumosa)
Las colonias aisladas en agar inclinado pueden ser: filiformes,
equinuladas, perladas, difusas, arborescentes y rizoides.

 Entorno colonial: Las modificaciones del entorno colonial más

significativas son las hemólisis producidas en agar sangre
(presencia de una zona de eritrocitos lisados alrededor de una
colonia). Es un dato que resulta útil en la identificación inicial de
ciertas bacterias, sobre todo Estreptococos. Pueden existir tres
tipos de hemólisis:
 Hemólisis α : La colonia está rodeada de una zona de
eritrocitos parcialmente lisados frecuentemente
acompañada de color marrón-verdoso o pardusco.
 Hemólisis β : Las colonias están rodeadas de una zona
clara del color del medio base lo que indica lisis completa
de eritrocitos.
 Hemólisis γ : no se observa hemólisis aparente.

 Olor: Es otra característica que facilita la identificación del

entorno colonial (aunque son muy subjetivos)

BACTERIAS MEDIOS DE OLOR

CULTIVO
Pseudomonas MK Jabón
E.Coli MK Levadura de cerveza
o pan
Proteus MK Fétido
Salmonella Agar SS Semen

2.- Estudio Microscópico

55
 Microbiología

Está relacionado con el tamaño, forma y agrupación de las

bacterias (visto en tema 2)

TEMA 8.- RECUENTO DE MICROORGANISMOS

1.- INTRODUCCIÓN

El recuento de microorganismos es la determinación del número

de microorganismos presentes en una muestra. Frecuentemente es
conveniente su determinación pero además de la dificultad que
presentan los resultados no permiten excesiva fiabilidad.

2.- CLASIFICACIÓN DE LAS TÉCNICAS

1.- METODOS INDIRECTOS: Son aquellos en los que no se

encuentran el número de microorganismo sino que se calcula a partir
de otros parámetros. Los dividiremos en 3 grupos:

56
 Microbiología

a.- Determinación analítica de moléculas: pertenecientes al

microorganismo. Por ejemplo: proteínas, ADN…
b.- Métodos Gravimétricos: basados en la determinación del peso
seco.
c.- Métodos Turbidimétricos: son los más utilizados.

2.- METODOS DIRECTOS: En ellos a cada uno se considera una

unidad. Hay 3 tipos:

a.- Métodos directos totales: determinación del número de

microorganismos vivos y muertos. Son métodos microscópicos y
entre ellos destacamos:
- método de Breed o recuento de extensiones teñidas,
- método de Wright
- método de recuento en cámara.

b.- Directos culturales: contabilizan únicamente los

microorganismos vivos, el mas utilizado: recuento de viables en
placa.

c.- Semidirectos totales: por medio de contadores electrónicos de

partículas.

Los más rápidos son los turbidimétricos y semidirectos. Su

inconveniente es que requiere un aparataje sofisticado y no distingue
entre microorganismos vivos y muertos.

3.- RECUENTO EN CAMARA

(apuntes Isabel López, 1º lab.)

4.- MÉTODO DE EXTENSIONES TEÑIDAS

 Fundamento: Se basa en contar los microorganismos de un

volumen determinado de suspensión de los mismos tras la
extensión y tinción de ésta. El método a desarrollar es el de
Breed.
 Material: Portas, mechero, pipeta de 10 µ l, equipo de tinción,
estufa y microscopio.
 Reactivos: Azul de metileno y suspensión de microorganismos.
 Técnica:
1. Marcar un porta un cuadrado de 1cm de lado con ayuda
de papel milimetrado.
2. Invertir el porta y depositar en el cuadrado 10 µ l de la
suspensión.
3. Dejar secar al aire o en estufa.
4. Fijar a la llama.
5. Teñir con azul de metileno 3 minutos.

57
 Microbiología

6. Lavar, secar y observar con objetivo de inmersión.

7. Contar los microorganismos existentes en 25 campos
distintos situados en la diagonal.

 Resultados e Interpretación: Para el cálculo del microorganismo

se tiene en cuenta:

A= Área del cuadrado marcado (100mm2)

C= Volumen de suspensión utilizada (10 µ l)
R= Radio del campo del microscopio (mm)
S= Superficie del campo del microscopio (π r2)
V= Volumen de suspensión del microorganismo contada en 25
campos (µ l)
N= Número total de microorganismos contados en 25 campos

A __________ C
S.25 ________ V → V = CS25/A = 10 π r2 25 / 100 = 2.5 π r2

V ___________ N
S.25 ________ X → X= N / V = nº microorganismos / µ l

 Observaciones al método: La suspensión de microorganismos

debe ser homogénea por todo el cuadrado, si no se desecha la
preparación. En lugar de azul de metileno se puede utilizar
cualquier colorante de la tinción simple (nigrosina, sudan IV,
etc.)

5.- RECUENTO DE VIABLES EN PLACA

 Fundamento: basado en que un microorganismo da lugar en un

medio de cultivo a una colonia visible, por tanto el número de
colonias contadas será igual al número de microorganismos
existentes inicialmente.
 Material: pipeta de 1 ml, tubo de ensayo y placa de petri.
 Reactivos: solución salina estéril, medio de cultivo para el
microorganismo y suspensión del microorganismo.
 Técnica:
1.- Tomar 1ml de la solución problema, homogeneizarla y
añadirlo a 9 ml de solución salina estéril (suspensión 1/10).
2.- Homogeneizar.
3.-Tomar 1ml y pasarlo a otro tubo con 9ml de solución salina
estéril (suspensión 1/100).
4.- Repetir la operación.
5.- De cada dilución se siembran un mínimo de tres placas
estériles. Depositar en cada una 1ml del inóculo

58
 Microbiología

correspondiente y agregar 10ml de medio de cultivo,

imprimiendo un movimiento de rotación con el fin de
homogeneizar la muestra.
6.- Dejar solidificar e incubar a una temperatura adecuada
según el tipo de microorganismo.
7.- Contar las placas cuyo número de colonias este entre 30-
300.
 Resultado e interpretación: En primer lugar se calcula la media
aritmética de las colonias contadas en las placas seleccionadas,
esta se multiplica por la inversa de la dilución a la que se ha
efectuado el recuento, con lo que se obtendrá el número de
microorganismos viables por ml de muestra.
 Observaciones al método: El error más habitual radica en que
una colonia se forma a partir de más de un microorganismo. No
obstante tiene ventajas frente a los anteriores, no cuentan los
microorganismos muertos o partículas contaminantes
indistinguibles de los microorganismos en los recuentos
microscópicos.
Si se dispone de material suficiente se preparan 10 placas, de
este modo los resultados estadísticos son más representativos.
Hay que homogeneizar la muestra perfectamente.
El medio y las condiciones de cultivo deben ser las idóneas para
el microorganismo estudiado.
Una alternativa empleada para el recuento de viables consiste
en utilizar un asa calibrada con la que se siembra en placa.

59
 Microbiología

TEMA 9.- DESINFECCIÓN Y ESTERILIZACIÓN

1.- CONCEPTOS BÁSICOS

 Asepsia: ausencia de microorganismos conseguida por

métodos físicos.
 Antisepsia: ausencia de microorganismos conseguida por
métodos químicos.
 Desinfección: técnica de saneamiento encaminada a eliminar
elementos patógenos.
 Esterilización: técnica de saneamiento encaminada a eliminar
cualquier forma de vida patógena, no patógena o formas de
resistencia como esporas.
 Desinfectante: sustancia antimicrobiana que no puede
aplicarse sobre superficies vivas.
 Bactericida: sustancia que destruye a las bacterias.
 Bacteriostático: sustancia que impide el crecimiento y
multiplicación de las bacterias.

Desinfectante
Se utiliza para destruir las formas de vida patógenas, el ideal es el
que más se aproxime al concepto de esterilización, pero están muy
lejos de conseguirlo. Según el microorganismo sobre el que actúe se
denomina:

- Bactericida, si destruye bacterias.

- Viricida, si destruye virus.
- Funguicida, si destruye hongos.

Normalmente los desinfectantes son bactericidas y los antisépticos

son bacteriostáticos.
Hay que tener en cuenta que muchos desinfectantes cuando se
utilizan de forma errónea pueden estimular el desarrollo de los
organismos al seleccionarse las cepas más resistentes que son las
más virulentas.

60
 Microbiología

Esterilización
Un objeto puede estar desinfectado pero no esterilizado,
mientras que el objeto esterilizado esta desinfectado también.
Experimentalmente se comprueba que la esterilización no destruye el
100% de los microorganismos. Sólo se conseguirá la asepsia con
temperaturas y tiempos muy elevados (que son inoperantes).
Para que el método de esterilización sea útil debe destruir el 99,99%
de los microorganismos.
Antes de desinfectar o esterilizar hay que limpiar bien el material de
restos de materia orgánica ya que estos dificultan dicho proceso.
Vamos a aclarar dos conceptos:
a) Material estéril: Es aquel objeto que tras ser esterilizado sigue
manteniendo esta propiedad en el tiempo a la hora de ser
utilizado, pues se le han aplicado medidas para ser estéril.
b) Material esterilizado: Ha sido esterilizado y en el momento de
usarlo ya no se conserva la esterilidad, ya que no se le han
aplicado las medidas para conservarlo.

2.- MÉTODOS DE DESINFECCIÓN Y ESTERILIZACIÓN

1.- MÉTODOS FÍSICOS

a.- Métodos Térmicos

Factores que influyen en la muerte de microorganismos por calor

1.- Número de microorganismos: Al aumentar en número de

microorganismos aumentará la intensidad del tratamiento
aumentando la temperatura o el tiempo.
2.- Naturaleza del microorganismo: Las formas vegetativas son más
sensibles que las esporas.
3.- Temperatura: Al aumentar la temperatura hasta cierto límite
aumenta la efectividad y rapidez.
4.- Tiempo de actuación: Generalmente el tiempo de actuación se
relaciona con la temperatura, jugando con ambos. Si se aumenta la
temperatura disminuye el tiempo y si disminuye el tiempo se
aumenta la temperatura, es decir, con frecuencia estas dos variables
se comportan de forma inversa.
5.- Tiempo de duración: Hay que tener en cuenta la suma de:
- Tiempo de penetración: Tiempo necesario para que el material
adquiera la temperatura de esterilización.
- Tiempo de calefacción: Tiempo requerido para que dicha
temperatura destruya la población microbiana.
- Tiempo de seguridad: Se asigna de forma arbritaria.

61
 Microbiología

Los sistemas enzimáticos de las bacterias tienen una temperatura

óptima para actuar, pero por encima y por debajo de dicha
temperatura también siguen viviendo, son las temperaturas máximas
y mínimas. Por ejemplo en E.Coli el intervalo de temperatura oscila
entre 8º-47ºC y en N.Gonorreae 30º-40ºC. Según esto, los intervalos
de temperatura pueden ser grandes o pequeños en función de los
microorganismos.
Se pueden distinguir:
- Bacterias psicrófilas: Intervalo de temperatura oscila entre 0º-
30ºC. Ejemplo: Pseudomonas.
- Bacterias mesófilas: Intervalo de temperatura oscila entre 20º-
45ºC. Son las más numerosas y patógenas. Incluyen:
 20º-24ºC: gérmenes saprofitos y parásitos de
plantas superiores.
 35º-45ºC: gérmenes saprofitos y parásitos del
hombre y animales superiores.
- Bacterias termófilas: Temperatura óptima está por encima de
los 45ºC. Habitan en suelo y aguas termales.
El frío no mata a los microorganismos sino q impide su reproducción.

Se dan 2 tipos de métodos térmicos:

 CALOR HUMEDO: Puede ser a través de H20 o vapor.

• H2O

 Ebullición: en el lab. Se utiliza poco no es muy fiable en el

sentido estricto, no es un método de esterilidad ya que no
destruye a las esporas. Consiste en introducir el material en
H2O húmeda durante unos 10 minutos.

 Pasteurización: no mata las formas de resistencia, es muy útil

en tecnología de alimentos. Ej: leche. Podemos distinguir 2 tipos
de pasteurización:

 pasteurización alta: se consigue con Tª de 72-75 º

durante 15 minutos.
 Pasteurización baja: se consigue con Tª de 63º durante
30 minutos.

 Tindalizacion: es un método de esterilizaciones sucesivas, se

utiliza en microbiología cuando existen problemas de
contaminación en el autoclave. Consiste en esterilizaciones
repetidas a lo largo de 3 o 4 días. Teóricamente no se deben
alcanzar Tª superiores a 100º y durante este intervalo no se
debe abrir el aparato que se somete a la tindalizacion. El
objetivo es destruir esporas cuando germinan, así como evitar
contaminación con microorganismos resistentes. La

62
 Microbiología

tindalizacion se lleva a cabo a 65º durante 30 minutos cada día,

durante 4 días. El resto del tiempo se mantiene a 30-35º.

 Uperizacion: es muy útil en industrias alimentarias, se realiza a

una Tº aproximada de 150º durante 1-5 segundos. No se
alteran las propiedades organolecticas (son atributos, aquellas
que podemos apreciar a través de los sentidos, ej: color, olor,
sabor) y se produce esterilización.

• VAPOR

 A chorro: se alcanzan Tª de hasta 100º, es un método poco

utilizado en microbiologia.

 Autoclave: es un recipiente cilíndrico que se cierra

herméticamente. Externamente lleva un manómetro, un reloj
de Tª y otro para el tiempo. En el interior tiene un cestillo donde
se introduce el material a esterilizar. La esterilización se puede
conseguir a 1 atm. 20 minutos a 120 º. No abrir hasta que la
presión no este en cero.

 CALOR SECO:

• Flameado: poner algo a la llama.

• Incinerado: se lleva a cabo en crematorios.

• Horno pasteur o poupinel: la esterilización se consigue a 180º 2

h. o 160º en 3h y media.
La esterilización se lleva a cabo: se preparan los instrumentos a
esterilizar que deberán estar debidamente protegido. Se
introduce en la estufa, se conecta y se selecciona la Tª en el
termostato y el tiempo en el reloj (si lo hubiera). Comenzara a
contabilizar cuando alcance la Tª deseada, transcurrido el
tiempo se desconecta el interruptor y dejamos que baje la Tª,
los materiales que se pueden esterilizar por este método son:
porcelana, vidrios y no para m.c. , plástico.

b.- Radiaciones

 Ionizantes: son fundamentalmente R. alfa y R. gamma.

Destruyen las bacterias al actuar los ac. Nucleicos y enzimas.
Presentan un poder de penetración alto.

 No ionizantes: son R. UV no son muy útiles porque son poco

penetrantes, solo aseptizan la superficie.

63
 Microbiología

2.- METODOS MECANICOS

 Filtros: con poro de menor tamaño que las bacterias por lo que
las retienen, se hacen con barro y otras sustancias,
generalmente los virus pueden atravesarlos.

 Ultrasonido: consiste en introducir en tanques de distintos

tamaños que contienen líquido desinfectante. Una vez puesto
en marcha el dispositivo comienza a vibrar a gran velocidad
ocasionando pequeñas burbujas que entran en todos los
recodos consiguiendo eliminar todos los microorganismos. Es
un método poco utilizado ya que es aro y poco practico.

 Agitación: se lleva a cabo por perlas de vidrios.

3.- SALES MINERALES

 Medios hipotónicos: colocar una bacteria en este medio

tiende a coger H2O hasta estallar. Esto es solo teoría ya que en
la práctica la pared bacteriana la protege.

 Medios hipertónicos: colocar una bacteria en este medio

pierde H2O hasta deshidratarse, con lo que se frena la
multiplicaron pero no se destruye.

4.- COMPUESTOS QUIMICOS: van a producir la destrucción de

todos los microorganismos patógenos.
Todo buen material de desinfección debe cumplir:
1º) matar al mayor nº de gérmenes o al menos a todos los
patógenos.
2º) ser económico y de fácil adquisición.
3º) no ser corrosivo (material), toxico (para personas, animales o
plantas) ni irritantes para los tejidos.
4º) que posea un alto poder de penetración.
5º) olor agradable.
6º) estabilidad y homogeneidad de composición y difusión.

Las técnicas mas empleadas para su uso son:

 inmersión
 loción
 nebulizacion
 pulverización

64
 Microbiología

Los desinfectantes y antisépticos más utilizados son:

 Compuestos inorgánicos

• Detergentes catiónicos: se utilizan derivados del R-NH4 , los más

empleados son:
- Cloruro de Benzalconio
- Cetrimida
Se suelen emplear para la limpieza y desinfección de paredes,
ropa, etc.

• Detergentes aniónicos: como por ejemplo el uridilsulfato sódico.

• Metales pesados: son derivados del mercurio, la más conocida

es la mercromina que generalmente se emplea como
antiséptico.

• Halógenos: existen dos tipos:

- Derivados del cloro: se utilizan en forma de gases o hipoclorito
(lejía). Se utilizan principalmente para el saneamiento de aguas.
- Derivados del yodo: se utilizan en solución alcohólica como la
tintura de yodo (Betadine).

• Agentes oxidantes: como el agua oxigenada.

 Compuestos orgánicos

• Alcoholes: se utilizan como antiséptico y desinfectante sobre el

filo de algunas superficies. Se emplea el etanol o alcohol etílico
para tejidos y metanol para superficies que no vayan a estar en
contacto con la piel.

• Fenoles: se utilizan para la desnaturalización de proteínas. Los

más utilizados son el resorfinol, hexaclorofeno, zotal, etc. muy
utilizada es la clorohexidina que se puede considerar lo más
parecido a un antiséptico ideal, junto con el Betadine, ya que
actúa sobre gram + y -, hongos, virus, etc.

• Aldehídos: se utilizan principalmente vapores de formol y

glutaraldehído.

• Oxido de etileno: es un gas tóxico que con el aire forma una

molécula explosiva, por lo que se utiliza en cámaras de oxido
de etileno a 4-6 atm. y mezclado con un gas inerte como

65
 Microbiología

dióxido de carbono queda adsorbido en el material por lo que

una vez estabilizado hay que airear dicho material.
Presenta un gran poder de penetración y se aplica a cualquier
material resistente al calor y que no puede desinfectarse por
otros métodos. Ej: instrumentos para endoscopia, plásticos
termolábiles, cauchos, etc.
El material esta disponible para ser utilizado a las 48 horas
después de su esterilización y deberá conservarse estéril en
bolsas cerradas por procedimientos termoeléctricos. La
duración de la esterilización es de aproximadamente 6
semanas.

• β -propiolactona: es un líquido muy tóxico que se utiliza para

esterilizar material sensible al calor.

Podemos generalizar y decir:

a) que para esterilizar se utiliza:

- Calor.
- Radiaciones.
- Formol
- Glutaraldehído.
- Oxido de etileno.
- β .propiolactona.

b) que para desinfectar se utilizan:

- ácidos y álcalis.
- Algunos halógenos.
- Glutaraldehído.

c) que como antisépticos se utilizan:

- Detergentes.
- Metales pesados.
- Derivados halogenados.
- Agentes oxidantes.
- Alcoholes.
- Fenoles.

Actualmente son ampliamente empleadas mezclas de desinfectantes

para aumentar la potencia o espectro de acción. Las asociaciones
más utilizadas son:
- Clorhexidina con cetrimida
- Mercuriales orgánicos con detergentes aniónicos y fenoles.

3.- CONTROLES DE ESTERILIDAD

66
 Microbiología

Sirven para comprobar la eficacia del proceso de esterilización.

Podemos distinguir:

a.- De tipo Físico: Son sistemas de control incluidos en sistemas de

esterilización. Ejemplo: manómetros, termómetros, vacuómetros
(miden el vacío) y registros gráficos de distintos parámetros.

b.- De tipo Químico: Son cintas adhesivas en las que se produce un

cambio de color si se ha estilizado bien.

c.- De tipo Biológico: Sistemas comerciales en forma de cápsula

cerrada en cuyo interior hay esporas. Dichas cápsulas tras haber sido
sometidas a esterilización se incuban a 40º-45ºC durante 48-64 horas
y se procede a la lectura donde la germinación y cambio de color
indicará en cada caso que no se ha producido condiciones de
esterilización.

4.- EVALUACIÓN DE ACTIVIDAD DE UN DESINFECTANTE.

DETERMINACIÓN DEL COEFICIENTE FENOL (práctica)

 Fundamento: Se puede determinar la potencia de un

desinfectante problema utilizando como patrón el fenol. Para
ello se compara el poder germicida a distintas concentraciones.
 Material: Tubos de ensayo, pipetas de 2 y 5 ml, gradilla, asa de
siembra, estufa de cultivo, cronómetros o relojes.
 Reactivos: Fenol, desinfectante problema, caldo nutritivo y
microorganismo problema.
 Técnica:
1. Se preparan 4 tubos con 5 ml de cada una de las
diluciones crecientes del desinfectante a titular. Las
diluciones son: 1/100, 1/200, 1/400 y 1/800.
2. De la misma forma se preparan 4 tubos con 5ml de cada
una de las diluciones crecientes de fenol (patrón) cuya
concentración es el doble del antiséptico problema. Las
diluciones son: 1/50, 1/100, 1/200 y 1/400.
3. Se llevan los todos los tubos al baño maría a 37ºC durante
5 minutos.
4. Se añade a cada tubo 1.5ml de la suspensión de
microorganismos problema.
5. Pasados 5 minutos se toman de cada tubo un asa y se
siembra en caldo nutritivo. Se efectúa la misma operación
a los 10 y 15 minutos.
6. Se incuba durante 48 horas a 37ºC en estufa. El
crecimiento puede verse por turbidez, cambio de color,
precipitado blanco lechoso, etc.
 Resultados e Interpretación: El coeficiente final es la relación
existente entre el inverso de la mayor dilución del desinfectante
problema que no inhibe los microorganismos en 5 minutos de

67
 Microbiología

contacto pero sí en 10 minutos y la mayor dilución del fenol que

se comporta igualmente.

TEMA 10.- TIPACIÓN BIOQUÍMICA

1.- Introducción.
2.- Clasificación.
3.- Requerimientos nutritivos. Factores V y X.
4.- Pruebas del metabolismo hidrocarbonado (oxidativo y
fermentativo).
- O-F de Hung y Lesión.
- Producción de ácido- gas.
- β -D-Galactosidasa.

1.- INTRODUCCIÓN

Los microorganismos como seres vivo tienen su propio

metabolismo:

a) Anabolismo: relacionado con síntesis para lo que se requiere

energía.

68
 Microbiología

b) Catabolismo: relacionado con degradación con ganancia de

energía.

Estas reacciones vienen regidas por unos biocatalizadores de

naturaleza proteica denominados enzimas, los cuales son
característicos para cada germen, por lo que la detección “in vitro”
del conjunto de estos enzimas es de gran utilidad en el proceso de
identificación microbiológica.

La presencia de enzimas se investiga de dos formas:

a) Sembrando el microorganismo en un medio que contenga el
sustrato a investigar con posterior incubación en condiciones
adecuadas. Ej: prueba de Hung y Leifson o la reducción de
nitratos.
b) Cultivando previamente en un medio que o contenga el sustrato
y posteriormente se pone en contacto con él. Ej: prueba de la
oxidasa, de la catalasa.

La tipación bioquímica puede realizarse sobre un cultivo puro. El

número y tipo de pruebas bioquímicas a realizar sobre el germen
depende de los primeros datos del examen microbiológico:
- morfología del germen y sus colonias.
- características tintoriales.
- medios donde crecen, etc.

2.- CLASIFICACIÓN
(fotocopias)

3.- REQUERIMIENTOS NUTRITIVOS. FACTORES V y X.

Algunos microorganismos son muy exigentes nutricionalmente

y requieren para su desarrollo la presencia de sustancias específicas
llamadas factores de crecimiento, vitaminas, aminoácidos, factores
de la coagulación, etc. El ejemplo más conocido en bacteriología es el
de Haemophylus que precisa del factor X, V o ambos para
desarrollarse de forma óptima.

Las bacterias Haemophylas crecen bien en sangre entera, la

cual aporta ambos principios:
- Factor X o hemina: es una sustancia termoestable derivada de
la Hb.
- Factor V o coenzima I (NAD): es una sustancia termolábil.

 Fundamento: FV y FX por ser hidrosolubles difunden

rápidamente en medio sólidos como el agar, si se depositan
tiras de papel de filtro impregnadas en estos factores en un
medio dificultorio de los mismos se puede conocer la necesidad

69
 Microbiología

de F V y X del microorganismo estudiado, observando el

desarrollo de las colonias alrededor de las tiras.
 Material: placa de petri, asa, pipeta Pastear, pipeta calibrada y
tubos estériles.
 Reactivos: medio deficiente de F V y X, como agar Mueller-
Hilton, caldo infusión de cerebro corazón, tiras de papel de filtro
impregnadas en F V y X respectivamente y microorganismos.
 Técnica:
1.- A partir de un cultivo puro del microorganismo problema
preparar una suspensión de 2-3 ml de caldo infusión cerebro
corazón (BHI).
2.- Realizar con esta suspensión una siembra de inoculación en
una placa con agar Mueller-Hilton, preferiblemente por la
técnica de Kirby Bauer.
3.- Colocar una tira con el FV y otra con el FX en la superficie
del agar presionando suavemente, deben estar separadas por 1
cm.
4.- Incubar a 37ºC 18-24 horas.

 Resultados e interpretación

Se observa si existe crecimiento alrededor de las tiras:

• 1º Caso: microorganismo requiere FX.
• 2º Caso: microorganismo requiere FX.
• 3º Caso: microorganismo requiere ambos factores.

Si el microorganismo estudiado es Haemophylus se cultivará en una

atmósfera del 5-10% de CO2.

4.- PRUEBAS DEL METABOLISMO HIDROCARBONADO

La utilización por un microorganismo de los hidratos de carbono

tiene lugar por alguno de estos procesos:
a) metabolismo oxidativo
b) metabolismo fermentativo

La oxidación de hidratos de carbono es un proceso aeróbico y lo

realizan los microorganismos aerobios obligados o estrictos.
La fermentación es un proceso anaeróbico efectuado por
microorganismos aeróbicos y anaeróbicos facultativos.
Las diferencias entre el metabolismo oxidativo y fermentativo están
presentes en el esquema siguiente:

Metabolismo Metabolismo
fermentativ oxidativo
o

70
 Microbiología

Producción de ácido Aeróbica y Aeróbicamente

anaeróbicamente
Producción de gas Pueden producirlo No
Grado de acidez Alto Bajo
Fosforilación de Sí No
glucosa
Último aceptor de e- Sustrato orgánico Oxígeno
en la cadena
respiratoria

Las pruebas del metabolismo hidrocarbonato son:

1.- PRUEBA O.F. DE HUNG Y LEYSON

 Fundamento: Se basa en que el metabolismo oxidativo sólo

produce ácido en la superficie del medio mientras que en el
fermentativo el ácido es producido en todo el medio, incluso en
las zonas de anaerobiosis; además en caso de aparición de gas
éste sólo se forma en el metabolismo fermentativo.
La formación de ácido se detecta por el viraje de un indicador
de pH mientras que la de gas por la aparición de burbujas
dispersas, grietas o porque el medio se despega del fondo.
La prueba se puede realizar sobre distintos HC, los más
utilizados son glucosa, lactosa, sacarosa y maltosa.
Entre las principales aplicaciones de esta prueba están:
a. Diferenciar géneros intestinales:
• Enterobacterias: fermentan la glucosa
• Pseudomonas: oxidan la glucosa
• Moxarella, Alcalígenas, Acinetobacter: ni fermentan
ni oxidan la glucosa
b. Diferenciar géneros de la familia Micrococaceae:
• Staphylococo: fermentan la glucosa
• Micrococus y Planococus: oxidan la glucosa
 Material: Tubos de cultivo, hilo de siembra, pipeta de 10 ml,
algodón, mechero y estufa de cultivo.
 Reactivos: Medio básico de Hung y Leyson, parafina o vaselina
estéril, solución de HC al 10% y microorganismo.
 Técnica:
1.- Agregar al medio básico de Hung y Leyson un 10% de la
solución de HC con lo que se obtiene una dilución final del 1%.
2.- A partir de un cultivo puro y joven de microorganismo
problema se toma una muestra con el hilo. Se siembra en
picadura 2 tubos con el medio H-L. Un tercer tubo no inoculado
actuará como control negativo.
3.- Calentar uno de los dos tubos cultivados para que el CO2 del
medio se desprenda y se sella con 1-2 ml de vaselina o parafina
fundida para mantener la anaerobiosis.

71
 Microbiología

4.- Se incuba a 37ºC durante 48-72 horas y en algunas

ocasiones se requieren hasta 14 días de incubación.
 Resultados e Interpretación: Si se forma ácido el medio virará
de verde a amarillo. La producción de gas se verá en burbujas,
grietas, elevación del medio, etc.

La interpretación de resultados posibles se detalla en el siguiente

esquema:

Tubo abieto Tubo cerrado

Fermentación Amarillo Amarillo
anaerogénica
Oxidación Amarillo Verde
No oxidación ni Verde Verde
fermentación
Oxidación y Amarillo Amarillo
fermentación

El tubo de control siempre será de color verde quede cerrado o

abierto.

 Observaciones al método: Para microorganismos con

requerimientos nutritivos se agrega al medio básico de H-L un
2% de suero o 0.1% de extracto de levadura. En esta prueba se
puede observar la movilidad del microorganismo ya que hará
un zig-zag en el medio.

2.- PRODUCCIÓN ÁCIDO-GAS

 Fundamento: Se basa en el viraje del indicador de pH al

producirse ácido. La producción de gas se detecta por la
retención de éste en una campana de Durham. Al igual que en
la prueba O.F. se puede realizar sobre distintos HC. Su
aplicación fundamental es la investigación de la capacidad
degradativa de un HC por el microorganismo.
 Material: Tubo de cultivo, asa de siembra, campana de Durham,
pipeta de 10 ml, algodón, mechero y estufa de cultivo.
 Reactivo: Agua de peptona, solución al 10% de HC, solución al
1% de rojo fenol y microorganismo.
 Técnica:
1.- Mezclar 900 ml de agua de petona, 100 ml de solución de
HC al 10% y 1ml de la solución de rojo de fenol al 1%.
2.- Llenar 2 tubos de ensayo con la campana de Durham con
5ml del medio preparado.
3.- Esterilizar en autoclave.

72
 Microbiología

4.- A partir de un cultivo joven y puro de un microorganismo

tomar una muestra con el asa. Se inocula en uno de los tubo
mientras que el otro actúa de control negativo.
5.- Incubar a 37ºC durante 24-48 horas.
 Resultados e Interpretación: Si se produce ácido el medio virará
de color rojo a color amarillo. La producción de gas se detecta
en la acumulación de éste en la campana de Durham.
 Observaciones al método: La campana de Durham de estar
llena de caldo nutritivo en el momento de incubar ya que la
sola presencia de un burbuja de gas indica la formación del
mismo si queremos ver la presencia de ácido y gas a partir de
lactosa por medio de Enterobacterias. El medio descrito se
sustituye por el caldo McKonkey que lleva lactosa. En la
preparación del medio de cultivo se puede sustituir el rojo de
fenol por otros indicadores a la misma concentración, como:
azul de bromotimol o púrpura de bromocresol.

3.- PRUEBA DE LA β -D-GALACTOSIDASA

Determina la capacidad de fermentar la lactosa. Los

microorganismos que fermentan la lactosa de forma activa poseen
dos enzimas:
- Lactosa permeasa: localizada en la membrana celular y
relacionada con el transporte de la lactosa.
- β -D-galactosidasa: enzima intracelular capaz de desdoblar la
lactosa en glucosa y galactosa.

Según actúen sobre la lactosa los microorganismos se clasifican

en:

a) Fermentadores activos de lactosa: poseen ambos enzimas y la

catabolizan rápidamente (antes de 24 horas)
b) No fermentadores de lactosa: carecen de ambos enzimas y no
penetran en la célula ni es degradada la lactosa.
c) Fermentadores tardíos de lactosa: carecen de lactosa permeasa
pero pueden fermentar la lactosa porque tienen β -D-
galactosidasa. Estos microorganismos en presencia de altas
concentraciones de lactosa son capaces de permeabilizarse
ligeramente a la lactosa y fermentarla entre 2-15 días.

La principal aplicación de esta prueba es la diferenciación de

Enterobacterias: da positiva esta prueba E.coli, Yersinia, Klebsiella y
Shigella y la da negativa Salmonella y Proteus.

 Funadamento: Se puede detectar el enzima β -D-galactosidasa

empleando ortonitrofenil-β -D-galactopiranósido (ONPG),
compuesto de estructra similar a la lactosa en el que la glucosa
ha sido sustituida por el ortonitrofenol, el cual liberado en

73
 Microbiología

medio alcalino, por acción de la β -D-galactosidasa, produce un

color amarillo. Esta reacción se produce en un intervalo máximo
de 24 horas.
( La lactosa se pone en contacto con el microorganismo; si el
microorganismo posee la β -D-galactosidasa desdoblará la
lactosa, si no la posee no la desdoblará).

 Material: Tubo de ensayo, asa de siembra y baño o estufa a

37ºC.

 Reactivos: Solución tamponada a pH 7 de ONPG y

microorganismo.

 Técnica:
1.- A partir de un cultivo puro preparar una suspensión densa de
microorganismo en 0,5ml de suero fisiológico estéril.
2.- Añadir una gota de tolueno a la suspensión y mezclar. (Así
se consigue la liberación de la β -D-galactosidasa de la
bacteria).
3.- Agregar 0,5ml de solución tamponada de ONPG.
4.- Incubar a 37ºC y leer antes de 24 horas.
 Resultados e Interpretación:
- ONPG positivo: color amarillo. Algunos microorganismos
lo producen en 5-10 minutos, la mayoría antes de 1 hora.
- ONPG negativo: incoloro. No se debe interpretar como
negativo antes de 24 horas de incubación.
 Observaciones al método: La solución de ONPG se puede
sustituir por tabletas o discos comerciales.
Los microorganismos ensayados en esta prueba deben provenir
de un medio con lactosa (ej: kliger).
La solución de ONPG recién preparada debe ser incolora y se
puede emplear un control positivo (E.coli) y otro negativo
(Proteus).
La solución debe conservarse en frascos de olor topacio a 4ºC y
antes de emplearse se debe atemperar a 37ºC para redisolver
el fosfato que cristaliza durante la conservación.
Es importante utilizar un inóculo concentrado para obtener una
elevada concentración de enzima y así acelerar la velocidad de
reacción.

74
 Microbiología

TEMA 11.- TIPACIÓN BIOQUÍMICA II

1.- Metabolismo proteico

- Hidrólisis de la gelatina.
- Producción de sulfhídrico.
- Prueba de las descarboxilasas.

2.- Pruebas enzimáticas.

- Prueba de la oxidasa.
- Prueba de la catalasa.
- Prueba de la coagulasa.
- Pruebas de la ureasa.

75
 Microbiología

- Prueba de reducción de nitratos.

1.- METABOLISMO PROTEICO

1.- HIDRÓLISIS DE LA GELATINA

Las proteínas exógenas son muy grandes para entrar en la

célula bacteriana por tanto para poder ser utilizadas deben
hidrolizarse con enzimas extracelulares de tipo proteolítico.
Estas enzimas son secretadas por ciertas bacterias y esta capacidad
es utilizada para su tipación.
El catabolismo de las proteínas por enzimas proteolíticas es un
proceso en dos etapas:

1º proteínas + H2O proteinasa polipéptidos.

2º polipéptidos H2O + proteinasa aminoácidos.

Con esta técnica se permite diferenciar distintas especies, como

por ejemplo Psudemonas aurogenosa(da +), Serratia (da +) y Listeria
monocitogenes (da -).
Debemos tener en cuenta que la gelatina entre 20-25ºC es sólida y a
temperaturas superiores a 28ºC se licua.

 Fundamento: Se siembra en picadura un tubo con gelatina

nutritiva, observándose la licuefacción por la acción de las
gelatinas.
 Material: Hilo, tubos, algodón, mechero, pipeta 10ml, estufa de
cultivo.
 Reactivos: Medio gelatina nutritivo y microorganismo.
 Técnica:
1.- Se preparan dos tubos con gelatina nutritiva estéril. Para su
llenado se licua el medio tras lo cual se solidifica con inmersión
en hielo.
2.- A partir de un cultivo joven y puro de microorganismo
problema se toma una muestra con el hilo.
3.- Se siembra en picadura 1 tubo, el otro se punciona con el
hilo estéril (actuará como control -).
4.- Incubar a 22-25ºC de 1-14 días.

 Resultados e interpretación:
- Hidrólisis de gelatina +: se produce una zona de
licuefacción con ensanchamiento en la línea de punción.
- Hidrólisis de gelatina - : no se produce
ensanchamiento en la línea de punción.

76
 Microbiología

2.- PRODUCCIÓN DE SULFHÍDRICO (H2S)

 Fundamento: Algunos microorganismos son capaces de liberar

azufre en forma de H2S (gas) como producto final de la acción
metabólica sobre proteínas con aminoácidos azufrados.
Dan reacción + : Proteus vulgaris y Proteus mirabilis.
Dan reacción –: Proteus morganii y Proteus rettegeri (permite
distinguir distintos especies de Proteus)
También permite distinguir distintas Pseudomonas.
 Técnica:
1.- A partir de un cultivo joven y puro del microorganismo
problema se toma una muestra con el hilo.
2.- Se siembra en el medio AHP (Agar con Hierro y Peptona).
3.- Incubar a 37ºC durante 18-24 horas.
 Resultados e interpretación:
- Sulfhídrico + : ennegrecimiento del medio.
- Sulfhídrico - : no ennegrecimiento del medio.

3.-PRUEBAS DE LAS DESCARBOXIDASAS

Son un grupo de enzimas capaces de atacar el grupo carboxilo

de los aminoácidos para formar aminas con desprendimiento de CO2.
Este proceso se realiza en anaerobiosis.
Cada descarboxilacion es específica de un aminoácido: lisina, arginina
y ornitina son los 3 aminoácidos más utilizados en la tipacion
bioquímica:

LISINA --------------------- CADAVERINA + CO2

(LDC= Lisina descarboxidasa)

ORNITINA ----------------- PUTRESCINA + CO2

(ODC= Ornitina descarboxidasa)

ARGININA -------------- CITRULINA + NH3 --------- PUTRESCINA

+ CO2
(ADC= Arginina descarboxidasa)

Son pruebas importantes para el estudio de las Enterobacterias. En

los 3 procesos se produce una alcalinización del medio con
desprendimiento de CO2.

 Fundamento: Si a un medio base (medio general) con un

indicador de pH se le añade los aminoácidos correspondientes
al enzima estudiado y posteriormente se le añade el
microorganismo, el viraje del indicador del pH indicará la

77
 Microbiología

alcalinización del medio y por tanto la presencia del enzima

estudiado

DC
R – CH – COOH →→→→→ R – CH2 –NH2
│ CO2 básico
(ANAEROBIOSIS)
NH2

Amarillo Rojo púrpura

 Material: Tubo de ensayo y asa.

 Reactivos: Caldo de Moeller para descarboxilasa, aminoácidos
ensayados, parafina o vaselina estéril y microorganismo.
 Técnica:
1.- Se preparan 4 tubos:
- T1 (C) 5 ml Caldo Moeller → Control
- T2 (L) 5 ml Caldo Moeller + L. Lisina (1% con respecto al
caldo)
- T3 (O) 5 ml Caldo Moeller + L. Ornitina (1% con respecto
al caldo)
- T4 (A) 5 ml Caldo Moeller + L. Arginina (1% con respecto
al caldo)
2.- A partir de 1 cultivo joven y puro del microorganismo
problema se inoculan los 4 tubos.
3.- Sellarlos con 2-3 ml de parafina estéril (aprox. 1 cm de
altura).
4.- Incubar 35º C 18-24 horas.
 Resultados e interpretación: Si el aminoácido es descarboxilado
se forman aminas que alcalinizan el medio dando un color rojo
púrpura (la prueba es +). Si la prueba es – el primer tubo es
de color amarillo.
NOTA: el pH del caldo de Moeller es igual a 6.

2 .- PRUEBAS ENZIMATICAS

1.- PRUEBA DE LA OXIDASA

La oxidasa es el enzima que cataliza la transferencia de

electrones del sustrato al oxigeno, en general se detecta en los
microorganismo aerobios o anaerobios facultativos. Los anaerobios
estrictos carecen de ella.
Se denomina también citocromo oxidasa y sirve para diferenciar
Pseudomonaceae de los miembros oxidasa negativa de
Enterobacteriaceae.
Ayuda a diferenciar entre los géneros Moraxella + y Neiseria + de
Acinetobacter -.

78
 Microbiología

 Fundamento: consiste en la utilización de indicadores

susceptibles de ser oxidados en presencia de oxidasa.
Estos tienen la propiedad de ser incoloros en estado reducido y
colorearse al ser oxidados (cesión de electrones a la oxidasa).
Entre los indicadores más utilizados se encuentran los
derivados de la parafenilendiamina que por acción de la oxidasa
dan indofenol.

 Material: Placa de petri, mechero, estufa de cultivo, papel, placa

de cultivo, asa, pipeta de 10 ml y pipeta Pasteur.
 Reactivos: Agar sangre, microorganismo y reactivo oxidasa de
Kovacs.
 Técnica:
1.- Cultivar el microorganismo problema en una placa de petri
con agar sangre.
2.- Colocar un papel de filtro de 6 cm2 en la placa de petri vacía
y estéril.
3.- Depositar 2-3 gotas del reactivo oxidasa de Kovacs en el
centro del papel.
4.- Recoger con el asa una colonia de la placa con agar sangre y
extenderla en el papel.
5.- Leer el resultado a los 5-10 sg.

 Resultados e interpretación:
- Oxidasa + : aparición de color negro púrpura (violeta).
- Oxidasa - : no se produce color.

2.- PRUEBA DE LA CATALASA

La catalasa es una enzima que actúa sobre el peroxido de

hidrogeno (H2O2) según la reacción:

catalasa
2 H2O2 -------------------------------- 2H2O2 + O2 (gas)

BURBUJAS

El H2O2 se forma como producto terminal oxidativo de la

degradación aeróbica de los hidratos de carbono. Si se acumula es
toxica para los microorganismos y produce la muerte por lo que la
catalasa es imprescindible para su desarrollo.
Entre sus aplicaciones se encuentra la diferenciación de:
- Staphylococo, Bacillus, Listeria monocitogenes → positivo
- Estreptococo, Micrococo, Clostridium → negativo

79
 Microbiología

 Fundamento: Se basa en poner en contacto el microorganismo

posible productor de catalasa con un sustrato natural (H2O2) y
observar la presencia del enzima por la aparición de gas.
 Material: Porta, pipeta pasteur, asa y mechero.
 Reactivos: Agua oxigenada al 30% y microorganismo.
 Técnica:
1.- Recoger con un asa una colonia de 18-24 horas.
2.- Colocar en un porta.
3.- Agregar sobre el microorganismo una gota de agua
oxigenada al 30%.
 Resultados e interpretación:
- Catalasa + → formación inmediata de burbujas de O2.
- Catalasa - → no aparecen burbujas.
 Observaciones al método: No utilizar m.c. que tengan hematíes.
Ej.: agar sangre, agar chocolate, puesto que estos contienen
catalasa por lo que podrían producir falsos negativos.
El agua oxigenada es inestable y se descompone con la luz, por
ello hay que mantenerlo en refrigerador y en frascos opacos.

3.- PRUEBA DE LA COAGULASA

Enzima producida por ciertos microorganismos que es capaz de

coagular en plasma. Se utilizan para diferenciar Staphyloocos Aereus
de otras especies.

 Fundamento: Consiste en poner en contacto el microorganismo

problema con el plasma para observar la coagulación de este
por la acción de la coagulasa.
 Material: Tubo de hemólisis, pipeta de 0,5 ml., asa, mechero,
baño, estufa de cultivo.
 Reactivos: Plasma humano o plasma de conejo y
microorganismo.
 Técnica:
1.- Colocar en un tubo de hemólisis estéril 0,5 ml. de plasma
2.- Agregar 0,5 ml de un cultivo de 18-24 h en medio liquido del
microorganismo problema. En caso de partir de un medio
sólido, tomar con el asa 2 o 3 colonias y emulsionarlas en el
plasma.
3.-Homogeneizar con rotación suave en los tubos.
4.- Incubar al baño Mª a 37º. Observar cada 30 min. si hay
coagulación, durante 4 h. Si a las 4 h no hay coagulo visible se
deja en estufa de cultivo a 37º durante 24 h.
 Resultados e interpretación:
- Coagulasa + → formación de coagulo.
- Coagulasa - → no formación de coagulo.

80
 Microbiología

 Observación al método: la prueba se puede realizar mezclando

una gota de plasma más una gota de microorganismo en un
porta. Si la reacción es + se detecta un precipitado en forma de
aglutinado blanco.

4.- PRUEBA DE LA UREASA

La hidrólisis de la urea es catalizada por una enzima específica

denominada ureasa dando carbonato amonico como producto final
con la consiguiente alcalinización del medio:

ureasa
NH2–CO–NH2 + H2O ----------------- CO2 +2NH3 → CO3 (NH4)2
ROJO

 Fundamento: Se basa en el viraje del indicador de ph debido a la

alcalinización del medio por el carbonato amonico producido por la
acción de la ureasa sobre la urea del cultivo.
 Material: Tubos de cultivo, asa, pipeta de 10 ml, estufa de cultivo,
mechero, algodón.
 Reactivos: Microorganismo agar uera de Christensen.
 Técnica:
1.- A partir de un cultivo puro y joven se toma una muestra con el
asa.
2.- Inocular en la superficie del tubo con agar urea de Christensen.
3.- Incubar a 37º hasta detectarse el viraje del indicador. Si no se
produce el viraje en 6 días la prueba será negativa.
 Resultados e interpretación:
- Urea + → color rojo rosado.
- Urea - → no se produce viraje del indicador.

5.- PRUEBA DE REDUCCIÓN DE NITRATOS

Algunos microorganismos anaerobios o anaerobios facultativos

utilizan nitrato como último aceptor de electrones en su metabolismo.
Este proceso de reducción de nitratos es producido por una enzima,
nitratasa o nitrato reductasa, pudiendo originar diversos productos
finales: nitritos, nitrogeno molecular, oxido nítrico, oxido nitroso,
amoniaco,etc. La formación de uno u otro depende de la especie
bacteriana, lo más común son nitritos y nitrogeno molecular.
La reducción de nitratos consiste en la detección de los productos de
reducción al ser excretados al medio por el microorganismo.
Se utilizan para la identificación de especies de Haemophylus y
Neisserias.

81
 Microbiología

 Fundamento: Puesto que los productos finales de la reducción

más común son los nitratos y nitrógeno molecular, la prueba
constará de dos fases:
• Detección de nitritos por una reactivo colorimétrico.
• La no aparición de color en la primera fase puede
significar:
a. No se ha reducido el nitrato, se comprueba
añadiendo un agente reductor, con lo que se
desarrolla la reacción colorímetrica de la primera
fase.
b. El nitrito se ha reducido a nitrógeno molecular, el
cual se detecta por la campana de Durham (si el
medio es líquido) o por la formación de grietas (si el
medio es sólido).
c. El nitrito se ha reducido a otros productos
nitrogenados. Ej: oxido nitrico.
 Materiales: Tubo, asa, pipeta 10ml., campana de Durham,
algodón, mechero, estufa de cultivo.
 Reactivos: Caldo con nitrato, reactivo A (alfanaftilamina al
0.5%), reactivo B (ácido sulfanilico al 0.8%), Zn en polvo y
microorganismo.
 Técnica:
1.- A partir de un cultivo joven y puro se toma un amuestra con
el asa.
2.- Inocular un tubo con caldo con nitrato, otro sin sembrar
actuará como control - , en ambos se pone campana de
Durham.
3.- Incubar a 37ºC durante 12-24 horas.
4.- Agregar 1ml. de reactivo A y 1 ml. De reactivo B. Si se
desarrollará color antes de 30 segundos se da por finalizada la
prueba, en caso contrario añadir al tubo un pellizco de polvo de
Zn.
Resultados e interpretación:
Si la prueba es positiva:
a. Reducción a nitritos, aparición de color rojo o rosado al
añadir el reactivo A y B.
b. Reducción a nitrógeno molecular, acumulación de gas en
la campana de Durham.
c. Reducción a otros productos nitrogenados, si al añadir el
polvo de Zn no se desarrolla color.

82
 Microbiología

TEMA 12.- TIPACIÓN BIOQUÍMICA III

El IMVIC son 4 pruebas de identificación bioquímica que hacen

referencia a:
 I → Indol: Se utiliza en el metabolismo proteico.
 M → Rojo de Metilo: Se utiliza en el metabolismo
hidrocarbonado.
 V → Voges-Proskauer: Se utiliza en el metabolismo
hidrocarbonado.
 C → Citrato: Se utiliza en el metabolismo hidrocarbonado.
Estas pruebas son muy útiles en el estudio de Enterobacterias (
E.Coli, Salmonella, Shigella, Proteus, Yersinia).

1.- PRUEBA DEL INDOL

 Fundamento: Estudia la utilización de prótidos por parte de un

microorganismo, en concreto determina la capacidad de
desdoblar indol de la molécula de triptófano. El triptófano es un
aminoácido que puede ser degradado por ciertas bacterias para
originar distintos metabolitos indólicos . El triptófano por acción
de una enzima, la triptofanasa, da lugar a determinados
metabolitos indólicos como: indol, escatol o indol acético).
El indol es detectado por un reactivo que produce coloración al
reaccionar con él.
Las diversas enzimas intracelulares que intervienen en el
proceso reciben el nombre de triptofanasa.

 Material: Tubo de cultivo, asa de siembra, pipeta de 10ml,

algodón, mechero y estufa de cultivo.
 Reactivos: Agua de peptona, ractivo indol de Kovacs o reactivo
indol de Ehrlich, éter etílico (dietiléter) y microorganismo.
 Técnica:
a.- Método de Kovacs
1.- Sembrar el microorganismo en un tubo con agua de
peptona.
2.- Incubar a 37ºC 24-48 horas.
3.- Agregar 5 gotas del reactivo indol de Kovacs.
4.- Agitar muy suavemente y dejar reposar unos minutos.

b.- Método de Ehrlich

1.- Sembrar el microorganismo en un tubo con agua de
peptona.
2.- Incubar a 37ºC 24-48 horas.
3.- Añadir 1ml del éter etílico y esperar a que éste suba a la
superficie.

83
 Microbiología

4.- Añadir 5 gotas del reactivo de Ehrlich resbalando por la

pared del tubo.
 Resultados e Interpretación:
o Indol +: Anillo rojo en superficie.
o Indol -: Color amarillento.
 Observaciones al método: El reactivo indol de Kovacs debe ser
fresco (refrigerar a 4ºC varios días), si se deja a T ambiente
variará el color de amarillo a castaño siendo menos sensible.

2.- PRUEBA DEL ROJO DE METILO

 Fundamento: Investiga la capacidad de un microorganismo de

producir ácidos como metabolitos finales del proceso de
fermentación de azúcares. Emplea como indicador el rojo de
metilo.
Los microorganismo rojo de metilo positivo producen ácidos
estables con elevada concentración de H+ cesando toda la
actividad metabólica.
Los microorganismos rojo de metilo negativo también producen
ácidos pero en menor concentración porque existe una recesión
hacia la neutralidad debido a la degradación de ácidos
orgánicos y posible formación de compuestos de NH4.
 Material: Tubo de cultivo, asa de siembra, pipeta de 10ml,
algodón, mechero y estufa de cultivo.
 Reactivos: Medio de Clark y Lubs, solución de rojo de metilo y
microorganismo.
 Técnica:
1.- Sembrar el microorganismo problema en un tubo con medio
de Clark y Lubs.
2.- Incubar a 37ºC 48-72 horas.
3.- Añadir 5 gotas de rojo de metilo.
4.- La lectura se efectúa inmediatamente después de añadir el
indicador.
 Resultados e Interpretación:
o Rojo de metilo +: Color rojo intenso en superficie.
o Rojo de metilo -: Color amarillo en superficie.
 Observaciones al método: No interpretar nunca una prueba si
el medio no se ha incubado como mínimo 48 horas. Si la lectura
se efectúa antes los resultados serán falsos positivos, dado que
los rojo de metilo – no habrán tenido tiempo suficiente para
metabolizar los productos ácidos iniciales acumulados por la
fermentación de la glucosa.
El viraje de rojo de metilo a pH 4.5 da color rojo y a pH 6.3 da
color amarillo.
Si no hay rojo de metilo empleamos:

84
 Microbiología

- Rojo Fenol, a pH 6.8 da color amarillo y a pH 8.4 da color

rojo.
- Azul de Bromotimol, a pH 6 da color amarillo y a pH 7.6
da color azul.
- Púrpura de Bromocresol, a pH 5.2 da color amarillo y a pH
6.8 da color púrpura.

3.- PRUEBA DE VOGES PROSKAUER

 Fundamento: Consiste en determinar la capacidad de un

microorganismo de producir un metabolito neutro llamado
acetil metil carbinol o acetoína como producto intermediario
derivado del metabolismo de la glucosa. En presencia de
oxígeno atmosférico y álcalis, la acetoína es oxidada a
diacetilo que es un sustrato que genera un compuesto
coloreado al añadirle los reactivos adecuados.
 Material: Tubo de cultivo, asa de siembra, pipeta de 10ml,
algodón, mechero y estufa de cultivo.
 Reactivos: Medio de Clark y Lubs, solución α naftol, solución
KOH al 40% y microorganismo.
 Técnica:
1.- Sembrar el microorganismo problema en un tubo con medio
de Clark y Lubs.
2.- Incubar a 37ºC 48-72 horas.
3.- Agregar al cultivo en orden: 0.5 ml de α naftol y 0.5 ml de
KOH.
4.- Agitar el tubo suavemente y mantenerlo inclinado casi
horizontal con el fin de favorecer la oxidación de la acetoína por
el oxígeno atmosférico.
5.- Dejar reposar el tubo 10-15 minutos antes de interpretar la
prueba.
 Resultados e Interpretación:
o Voges Proskauer +: color rojo-rosado en la superficie
antes de 1hora.
o Voges Proskauer -: color amarillo, a veces aparece color
cobrizo al mezclar los reactivos.

4.- PRUEBA DEL CITRATO

 Fundamento: Determina si un microorganismo es capaz de

utilizar citrato como única fuente de carbono. El medio contiene
citrato (como fuente de carbono) y sales de amonio inorgánico
(como fuente de nitrógeno).
Los microorganismos citrato + crecen en este medio
alcalinizándolo debido a:
- formación de amoniaco por desdoblamiento de las sales
de amonio

85
 Microbiología

- producción de carbonatos y bicarbonatos por degradación

de citrato
 Material: Tubo de cultivo, asa de siembra, pipeta de 10ml,
algodón, mechero y estufa de cultivo.
 Reactivos: Medio de Kosser (medio líquido en tubo), medio
citrato de Simons (agar inclinado), medio citrato de Christensen
(agar inclinado) y microorganismo.
 Técnica:
1.- Se preparan 2 tubos con el medio elegido. Se inocula uno de
ellos, mientras que el otro servirá de control -.
2.- Incubar 48-72 horas a 37ºC. Los tubos estarán destapados
para que el CO2 se evapore libremente. Leer después de 48
horas de incubación.
 Resultados e Interpretación:
• Medio Kosser:
 Positivo: turbidez en el tubo
 Negativo: no turbidez en el tubo
• Medio Citrato de Simons
 Positivo: color azul intenso en superficie
 Negativo: no hay cambio de color
• Medio Citrato Christensen
 Positivo: color rojo o rosa con crecimiento de
microorg en superficie
 Negativo: no cambio de color ni crecimiento de
microorganismo.

TEMA 13.- COCOS POSITIVOS. ESTAFILOCOCOS Y

ESTREPTOCOCOS.

STAPHYLOCOCO

1.- Introducción (Morfología y características).

86
 Microbiología

2.- Aislamiento
3.- Pruebas de Identificación
a. Esquema.
b. Prueba de la catalasa.
c. Prueba de la coagulasa.
d. Prueba de hemólisis.
e. Prueba de sensibilidad a la Novobiocina.
f. O-F de Hung y Lesión.
g. Prueba de la ureasa.
h. Actividad de la fosfatasa.
i. Prueba de la desoxirribonucleasa.
j. Prueba de la pirrolidonilamidasa.
k. Sistemas comerciales (API).
4.- Estructura antigénica
- Péptidoglucanos.
- Ácidos teicoicos.
- Proteína A.
- Factor de aglutinación.
- Polisacáridos.
5.- Enzimas y Toxinas:
- Toxinas
 Hemolisinas.
 Leucocinas o leucotoxinas.
 Enterotoxinas.
 Toxina exfoliativa.
 Toxina responsable del shock toxico.
- Enzimas:
 Coagulasa.
 Fibrinolisina.
 Hialurodinasa.
 β -lactamasa o penincilasa.
 Lipasas, esterasas, proteinazas, catalasas y nucleasas.
6.- PATOLOGÍA:
- Infecciones superficiales.
- Infecciones intestinales (enterotoxina).
- Infecciones hematológicas.
- Infecciones respiratorias.
- Localizaciones varias.
7.- Infecciones Hospitalarias (Nosocomiales).
8.- Diagnóstico
- Directo.
- Indirecto.
9.- Sensibilidad antibiótica

1.- INTRODUCCIÓN

Son cocos gram + que se pueden encontrar aislados, en

parejas, tetradas, cadenas cortas y racimos de uva.

87
 Microbiología

La mayor parte de las especies son aerobias o anaerobias

facultativas. Son inmóviles, no esporuladas y no capsulados.
Desde el punto de vista bioquímico son catalasa + , oxidasa – y
fermentadores de azucares.
Crecen bien en los medios habituales, Ej: agar sangre o chocolate
(para ver hemólisis) o en caldo de trioglicolato o infusión cerebro-
corazón.
Son bastante resistentes a la acción del calor (50ºC 30 min.) y a la
acción de las sales biliares y NaCl, sin embargo se lisan por la acción
de ciertos antibióticos y se inhiben con productos químicos como
hexaclorofeno.
Se engloban junto con los géneros no patógenos: Micrococus,
Planococus, Estomacocus dentro de la familia Micrococaceae.
El género Estafilococo se compone actualmente de 27 especies. El
hábitat normal de éstas es variado, principalmente a nivel de piel y
mucosas, Ej: Estafilococos capitis, E. Hominis, E. Haemoliticus (se
encuentra en axilas y pubis) E. Auricularis.
Las especies que se asocian a infecciones humanas o animales son
Estafilococos aureus, epidermis y saprofiticus.

2.- AISLAMIENTO.

Los medios utilizados son:

- Champman.
- Agar Cham-Manitol.
- Baid-parker.
Éstos son muy selectivos por tener altas concentraciones de NaCl.

También se puede realizar su aislamiento en medios con sangre para

el estudio de su hemólisis. En el agar sangre aparecen colonias lisas
de color amarillento o blanco.
El material de estudio puede ser pus, sangre, esputo y LCR.

3.- PRUEBAS DE IDENTIFICACION

1.- ESQUEMA ( fotocopias )

2.- PRUEBA DE LA CATALASA (ya explicada)

Nos permite diferenciar:
- Streptocoo (–)
- Staphylococo (+).

3.- PRUEBA DE LA COAGULASA (ya explicada)

Permite diferenciar:
- Staphylococo Aureus (+)
- Staphylococo Saprofitico y Staphylococo Epidermis (-).

4.- PRUEBA DE HEMÓLISIS (ya explicada)

Distingue:

88
 Microbiología

- Staphylococo Aureus (+)

- Staphylococo Saprofitico y Staphylococo Epidermis, no
producen hemólisis.

5.- SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA

Sirve para diferenciar
- Staphylococo Epidermis (sensibilidad +, resistencia - = si
muere)
- Staphylococo Saprofitico (sensibilidad -, resistencia +, = no
muere).

 Medio de cultivo utilizado es Mueller – Hinton.

 Reactivos: discos de Novobiocina.
 Método:
1.- Inocular superficialmente un microorganismo en una placa
de cultivo
2.- Dejar reposar 15 min. A Tª ambiente
3.- Depositar en el centro de la placa un disco de Novobiocina.
4.- Incubar 24 h 35º.
 Lectura: aquellos Staphylococos que son inhibidos por discos de
Novobiocina son de la especie de Staphylococo Epidermis, los
no inhibidos son Staphylococos Saprofitico.

6.- PRUEBA O – F (ya explicada)

Staphylococo Aureus son fermentadores de azucares.

7.- PRUEBA UREASA ( fotocopias )

- Staphylococo aureus → Variable: en función de la cepa puede
dar (+) o (-) a la ureasa.
- Staphylococo epidermis → (+)
- Staphylococo saprofitico → (+)

8.- PRUEBA DESOXIRRIBONUCLEASA.

- Staphylococo aureus → (+)
- Staphylococo epidermis y Staphylococo saprofitico → (-)

9.- PRUEBA DE LA ACTIVIDAD FOSFATASA.

10.- PRUEBA DE LA PIRROLIDONILAMIDASA.

11.- SISTEMAS COMERCIALES (API)

Son sistemas múltiples de pruebas de identificación basadas en
pruebas bioquímicas, enzimáticos y de sensibilidad (pruebas de
antibiogramas).
Consisten en tiras con microcúpulas que contienen los sustratos
deshidratados.
Se inocula la suspensión del microorganismo en cada una de ellas y
tras la incubación se leen los resultados directamente o por revelado
con reactivos.

89
 Microbiología

Las reacciones + se traducen en un perfil numérico con el que se

acude a un manual que identifica la especie.

4.- ESTRUCTURA ANTIGENICA

Los Staphylococos presentan en su estructura un importante

contenido antigénico que está implicado en el mecanismo de
patogeneicidad de estos microorganismos. Las principales estructuras
antigénicas están en la pared y las más importantes son:
 Peptidoglucanos: Es un polímero polisacárido formado por un
compuesto N – acetilmuranico y N–acetilglucosamida que
desempeña un papel importante en la patología de la infección
ya que:
- Induce la producción de IL (interleucinas).
- Induce la producción de Ac opsonizantes por los monolitos
humanos.
- Atrae leucocitos.
- Activa el C’.
- Posee actividad endotoxica.
 Ac. Teicoicos: (visto en pared bacteriana).
 Proteína A: Es una proteína de 42.000 Dalton que aparece en
muchos Staphylococos aureus. Se encuentra unida de forma
covalente al peptidoglucano. Estas proteínas son capaces de
anclarse en la región FC de las Ig G humanas y de activar el C’.
 Factor de aglutinación: También conocido como coagulasa. Se
encuentra pegado a la superficie externa de Staphylococo
aureus y fija fibrinógeno mediante una reacción no enzimática.
 Polisacáridos: Algunos Staphylococos aureus poseen una
cápsula polisacárido situada en la parte externa de la pared
celular capaz de inhibir la fagocitosis por los leucocitos
polimorfonucleares.

5.- ENZIMAS Y TOXINAS

El efecto más o menos patogénico e Staphylococo aureus para

hombre dependerá de:
- Ag presentes principalmente en la pared.
- Toxinas.
- Enzimas.

A.- TOXINAS

 Hemolisina: de composición proteica y en general lisa con

facilidad los eritrocitos, además de tener efectos tóxicos sobre
células como macrófagos y GB. Debido a esta propiedad estas
exotoxinas son conocidas como citotóxicas. Son en general muy
sensibles al calor y se conocen un total de cuatro que son:

90
 Microbiología

• Alfa- hemolisina o alfa-toxina: ataca los hematíes

produciendo una hemólisis total alrededor de las colonias
en medio agar sangre o agar chocolate. Por vía
subcutánea es dermonecrótica, con ella se pueden hacer
vacunas.
• ß-toxina o ß-hemolisina: responsable de la hemólisis
parcial de hematíes.
• Gamma hemolisina: interviene en lesiones y heridas pero
tienen poca importancia patógena, no producen
hemólisis.
• Delta toxina: tiene una acción detergente sobre
membranas biológicas y se le ha asociado un papel en la
diarrea aguda en algunas infecciones staphylocócicas.

 Leucotoxinas o Leucocidinas: son responsables de matar

leucocitos polimorfo nucleares y macrófagos proporcionando
una gran resistencia a las bacterias.

 Enterotoxina: son responsables de intoxicaciones alimentarías

de las que se conocen 6 serotipos distintos (A → F). Se trata de
toxinas termoestables y resistentes a la acción de jugo gástrico,
uniéndose posteriormente a los receptores nerviosos del tubo
digestivo y actuando sobre el centro del vomito, lo que origina
numerosos vómitos, nauseas y diarreas. La intoxicación
alimentaría no cursa con fiebre.

 Exfoliativa: engloba 2 toxinas responsables de los daños

dermatológicos que tienen lugar en el síndrome de la piel
escaldada provocando una lesión caracterizada por una
aparición de ampollas.

 Toxina responsable del Shock Tóxico: se ha observado que es

más común en mujeres que utilizan tampones.

B.- ENZIMAS

 Coagulasa: coagula en el plasma sanguíneo al activar el

fibrinógeno, así pues la coagulasa interviene en la formación del
coagulo.

 Fibrinolisinas o Staphyloquinasas: destruyen los coágulos

sanguíneos formando microémbolos que facilita la diseminación
del trombo, es decir, ejercen un efecto opuesto a la coagulasa.

 Hialurodinasa: disocia la sustancia fundamental del tejido

conjuntivo facilitando la penetración del Staphylococo.

91
 Microbiología

 ß-Lactomasa o penicilasa: rompe el anillo ß-lactamico de las

penicilinas apareciendo resistencia a las penicilinas.

 Lipasas, esterasas y proteinasas: que hidrolizan lípidos, esteres

y proteínas.

 Catalasa y Nucleasa: la nucleasa produce la ruptura de ácidos

nucleicos. Catalasa (ya explicada).

6.- PATOLOGIA

Estudio de las enfermedades producidas por Staphylococos.

a.- Infecciones superficiales: Principalmente producen:

- forúnculos
- Ántrax.
- problemas en la piel que producen muerte del tejido.
- heridas
- quemaduras.
- infección en el acné.

b.- Infecciones intestinales: relacionadas con:

- vómitos
- nauseas
- diarrea
- mal esta
- a veces fiebre
La producen las enterotoxinas.

c.- Infecciones hematológicas: dando lugar a:

- bacteriemia
- se le ha atribuido a Staphylococo aureus el Síndrome de Shock
Tóxico caracterizado por fiebre, erupción descamativa,
hipotensión y afectación multisistémica (daños en distintos
órganos).

d.- Infecciones respiratorias:

- sinusitis
- laryngitis
- faringitis
- bronquitis
- neumonía.

e.- Localizaciones varias: Puede dar:

- artritis
- endocarditis
- pericarditis
- meningitis

92
 Microbiología

- neumonía
- osteomielitis

7.- INFECCIONES HOSPITALARIAS O NOSOCOMIALES

Staphylococo aureus constituye el principal patógeno dentro de

Staphylococos. Se le denomina el microorganismo “dorado” ya que
produce un pigmento de color amarillo. Aproximadamente entre un 2
– 40 % de adultos son portadores nasales y un 10 % de las mujeres lo
llevan en la vagina.
Hay un grupo de población que son más propensos a ser
colonizados por Staphylococo aureus: personal sanitario, adictos por
intravenosa, diabéticos y pacientes tratados por hemodiálisis.
Es importante señalar el Staphylococo epidermis que es
causante de bacteriemia y endocarditis infecciosa, peritonitis,
osteomielitis, infección del tracto urinario.
El Staphylococo saprofitico es un agente ideológico de
infecciones importantes del tracto urinario en mujeres jóvenes
sexualmente activas.

8.- DIAGNOSTICO

 Directo: vamos a hacer dos subgrupos:

o Infecciones no intestinales: se recoge la muestra en
condiciones de asepsia de pus, exudados superficiales,
LCR, sangre.
Se realiza un Gram, se cultiva en agar sangre y se
realizan pruebas bioquímicas como catalasa y coagulasa.
o Infecciones intestinales: la toma de muestra se hace de
los alimentos sospechosos y no de heces (ya que en
condiciones normales puede aparecer Staphylococo
aureus en heces (flora habitual)).
Se busca la enterotoxina y no se cultivan gérmenes ya
que no es el productor de la enfermedad. También se
investigan los portadores.

 Indirectos: no se suele hacer, si se quisiera buscar Ac frente a

antihemolisinas, antileucocinas o anticoagulantes (lo que se
busca son Ac frente Ag específicos)

9.- SENSIBILIDAD ANTIBIOTICA

La sensibilidad de Staphylococo aureus a los antibióticos ha

disminuido de forma importante en los últimos años. Poco después de
la introducción de la penicilina G apareciendo cepas de Staphylococos
que destruyeron el antibiótico por las penicilasas.

93
 Microbiología

En pacientes con cepas de Staphylococo productoras de penicilasa la

penicilina no es eficaz.
La introducción de las tetraciclinas y eritomicinas que se
mostraron efectivas en el tratamiento poco después de ser
comercializadas se aislaron numerosas cepas hospitalarias,
resistentes a estos antibióticos.
La introducción de las penicilinas semisinteticas no ha resuelto
el problema. Así la resistencia a ampicilina es del orden del 85% igual
que la amoxicilina.
El desarrollo de las penicilinas semisintéticas resistentes a la
penicilasa como la meticilina, oxacilina, doxacilina han resuelto en
parte el problema.
Hoy en día los antibióticos mas utilizados son Vancomicina,
Rifampicina y Ciprofloxacina siendo muy útil las Cefalosporinas y
Aminoglucósidos.

STREPTOCOCO

1.- Introducción (Morfología y Características)

2.- Aislamiento
3.- Pruebas de Identificación
- Prueba S.F. o glucosa azida
- Prueba de la Bacitracina
- Prueba de sensibilidad a Optoquicina
- Solubilidad en bilis
- Prueba Voges Proskauer
- APIs
- Otras pruebas:
Catalasa
Oxidasa
Fermentación de HC, etc.
4.- Estructura Antigénica
- Ag de pared específico de grupo (LANCEFIED)
- Proteína M
- Otros Ag
5.- Clasificación
- β hemolíticos
- Grupo D:
Enterococos
No Enterococos
- α hemolíticos:
Streptococo viridans
Streptococo pneumoniae
6.- Enzimas y Toxinas
- Enzimas:
Fibrinolisina o streptoquinasa
Hialuridinasa
Desoxirribonucleasa

94
 Microbiología

Proteinazas
- Toxinas:
Toxina eritrógenica
Hemolisina : O y F
7.- Patología
- Streptococo pyogenes:
o Tejidos (eripsipela)
o Infecciones locales
o Enfermedades poststreptocócicas no supurativas
- Streptococo agalactiae
- Streptococo grupo C
- Streptococo viridans
- Streptococo pneumoniae
- Streptococo grupo D
8.- Diagnóstico
9.- Sensibilidad a los antibióticos

1.- INTRODUCCIÓN

Son cocos gram + agrupados en cadenas o parejas, inmóviles,

no pigmentados, no esporulados, con o sin cápsula.
Pueden ser saprofitos o patógenos en función de su ubicación.
En los cultivos viejos la bacteria puede perder su carácter gram + y
aparecer como gram -.
Bioquímicamente son : catalasa –, oxidadsa -, fermentan lo HC, no
producen gas, indol ni SH2.

2.- AISLAMIENTO

Son aerobios y anaerobios facultativos pero crecen mejor en

medios que presenten un 10% de CO2. Su temperatura es de 15-45ºC
siendo la óptima 37ºC.
Los medios de cultivo son:
a. M. Generales: agar sangre y agar chocolate.
b. M. Enriquecimiento: caldo tripticasa de soja e infusión cerebro
corazón.
c. M. Selectivos: contienen antibióticos (Ab) que inhiben el
desarrollo de la flora acompañante. Ej: agar columbia-colistina-
nalidixílico.
d. M. Selectivos de enriquecimiento: favorecen el desarrollo de
Streptococos inhibiendo el desarrollo del resto de
microorganismos. Ej: glucosa azida (inhibe bacilos gram -) y
violeta de cristal (inhibe Staphylococos).
En agar sangre se comprueba la hemólisis (ver hemólisis).

3.- PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN

95
 Microbiología

1.- PRUEBA DE S.F. O DE LA GLUCOSA AZIDA

 Fundamento: Consiste en comprobar el crecimiento de

microorganismo en presencia de azida sódica y en su caso la
capacidad de fermentar la glucosa.
 Reactivos: El medio de cultivo (m.c.) es el caldo S.F. el cual es
selectivo para Streptococo fecalis y Enterococo.
 Técnica:
1.- Se inocula el microorganismo cogiendo con un asa una colonia
de 24horas y se pone en el caldo S.F.
2.- Se incuba a 38ºC y se realiza la lectura a las 24 horas.
 Resultados: Si hay turbidez en el medio la prueba el positiva
con crecimiento bacteriano. La modificación del color indica
fermentación de la glucosa.

2.- PRUEBA DE LA BACITRACINA

 Fundamento: Los Streptococos β hemolíticos del grupo A se

distinguen de los demás porque son sensibles a la bacitracina.
 Reactivos: Se utiliza como m.c. agar sangra al 5% y como
reactivos discos de bacitracina.
 Técnica:
1.- Inocular por diseminación de superficie un placa de agar sangre
con la suspensión de microorganismo problema.
2.- Dejar reposar a temperatura ambiente durante 15 minutos.
3.- Colocar con unas pinzas estériles un disco de bacitracina.
Incubar a 37ºC 24 horas.
 Resultados: Los Streptococos β hemolíticos del grupo A inhiben
el crecimiento alrededor del disco con un diámetro de 10-18
mm. Los demás Streptococos no inhiben si crecimiento.

3.- PRUEBA DE LA SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA

 Fundamento: El crecimiento de Streptococos pneumoniae se

inhibe por la optoquina, mientras que no afecta a otros
Streptococos.
 Reactivos: El m.c. utilizado es agar sangre de cordero o humano
y discos de optoquina.
 Técnica:
1.- Empapar un hisopo con una suspensión de Streptococo,
inocular la palca y dejar reposar a temperatura ambiente.
2.- Depositar presionando un disco de optoquina para favorecer el
contacto con el medio (algunos autores consideran importante añadir
al disco una gota de agua destilada para favorecer el crecimiento del
halo de inhibición).
3.- Incubar a 35ºC durante 18-24 horas.

96
 Microbiología

 Resultados: El crecimiento de Streptococo pneumoniae queda

inhibido con más de 15 mm de halo de inhibición alrededor del
disco.
NOTA: Si la zona de inhición es menor de 15mm es indispensable
confirmar que es un neumococo con una prueba de solubilidad en
bilis.

4.- PRUEBA DE SOLUBILIDAD EN BILIS

 Fundamento: Se basa en la capacidad de determinadas

especies (spp) bacterianas de lisarse en medios con sales
biliares. Los más utilizados son desoxicolato sódico y
taurocolato sódico al 2%. Ambos provocan un descenso en la
tensión superficial que unido a la acción de enzimas autolíticas
destruyen las células. El efecto de esta enzima autolítica se
pone de manifiesto sobre colonias viejas de Streptococo
pneumoniae crecidas en medio sólido.
 Técnica:
1.- A 5ml de un cultivo de 24 horas se añade 0.5ml de solución de
sales biliares al 10%.
2.- Agitar la mezcla con cuidado e incubar a 35ºC.
 Resultados: Si antes de 3 horas de incubación se produce
aclaramiento del contenido del tubo se interpreta como soluble
en bilis, tendremos Streptococo pneumoniae. Si permanece
turbia se interpreta como insoluble en bilis por lo que
tendremos otros Streptococos.
NOTA: Es esencial el control del pH, ya que si las condiciones son
ácidas se puede producir un precipitado del desoxicolato.

5.- PRUEBA DEL VOGES PROSKAUER

6.- OTRAS PRUEBAS

7.- APIs

4.- ESTRUCTURA ANTIGÉNICA

1.- ANTÍGENO DE PARED ESPECÍFICA DE GRUPO

Se trata de un carbohidrato localizado en la pared de muchos

Streptococos que ha permitido una clasificación serológica en los
llamados grupos de LANCEFIED. Esta especificidad serológica de HC
específico de grupo viene determinada por un amino-azúcar, así los
Streptococos del:
- Grupo A: tienen como amino-azúcar la ramosa N-
acetilglucosamina
- Grupo B: tienen como amino-azúcar la ramosa glucosamina

97
 Microbiología

- Grupo C: tienen como amino-azúcar la ramosa N-

acetilgalactosamina
- Grupo D: tienen como amino-azúcar la ramosa ácido
glicerolteicoico
- Grupo F: tienen como amino-azúcar el glucopiranosil-
Nacetilgalactosamina

2.- PROTEÍNA M

Se trata de un antígeno proteico que pertenece a la pared

celular y constituye el principal factor de virulencia de Streptococo
pyogenes.
Aparece como proyecciones similares a pelos que emergen de la
pared y su presencia io ausencia condiciona la virulencia de las
cepas.
En el caso de que no exista en el huésped Ac contra esta proteína,
las cepas de Streptococo pyogenes con proeteína M son capaces de
resistir la acción de los fagocitos polimorfonucleares.
Esta proteína también está implicada en la adherencia a células
epiteliales.
Existen más de 80 tipos distintos de estos Ag, por lo que una
persona se puede infectar repetidamente con cepas de Streptococo
pyogenes con distintas proteína M en su pared.

3.- OTROS ANTÍGENOS

Son las sustancias T y R localizadas en la pared celular y

nucleoproteínas. En el Streptococo pneumoniae su presencia en la
cápsula polisacárida impide que sean ingeridos por fagocitos. Además
es antigénica de modo que los Ac frente a la cápsula del pneumococo
confieren inmunidad.
Existen más de 80 tipos distintos de Ag capsulares.

5.- CLASIFICACIÓN DE LOS STREPTOCOCOS

(Ver fotocopias tabla 6.3)

En general, los Streptococos se pueden clasificar en función de:

- Comportamiento antigénico frente a distintas pruebas
biológicas
- Por el tipo de hemólisis
- Por pruebas bioquímicas.

El resultado es la clasificación en tres grupos importantes:

 β hemolíticos: corresponden a distintos grupos denominados
con letras del alfabeto griego
 Grupo D: pueden ser Enterococos y no Enterococos

98
 Microbiología

 α Hemolíticos: Se encuentran el Streptococo viridans y

Streptococo pneumoniae.

6.- ENZIMAS Y TOXINAS

A.- Toxinas: tienen capacidad antigénica:

 T. Eritrogénica: provoca el exantema de la escarlatina y

erisipela. Es antigénica y da lugar a la formación de una
antitoxina específica.
 Hemolisinas o estreptolisina: destruyen los hamatíes y podemos
distinguir dos tipos:
• Estreptolisina O: proteína que se inactiva en presencia de
oxigeno. Los anticuerpos dirigidos contra ella se
denominan ASO, ASLO o AEO (serian antiestreptolisina
o ). Cuando un individuo tiene un titulo superior a 250u,
sugiere una infección reciente por Estreptococos.
• Estreptolisina S: resistente a la acción del oxigeno. No
tiene acción antigénica.

B.- Enzimas:

 Fibrinolisina o estreptoquinasa: transforma el plasminógeno en

plasmina (sustancia responsable de la lisis de lisina) ha sido
utilizada por vía intravenosa para el tratamiento de embolias y
trombosis.
 Hialudinasa: desdobla el ácido hialurónico del tejido conjuntivo,
favoreciendo la diseminación del coco. También induce
anticuerpos específicos. Se ha facilitado para la absorción de
medicamentos.

7.- PATOLOGÍA

1.- STREPTOCOCOS PYOGENES : del grupo A, produce enfermedad

por:

 Invasión de tejidos: es el agente etiológico de la erisipela

(inflamación aguda de la piel con afectación de vasos linfáticos
cutáneos, cursa con fiebre elevada y escalofríos), el área
afectada suele ser la cara y en ocasiones tronco y
extremidades.
También puede producir sepsis; la infección puede afectar al
recién nacido. También puede ocasionar celulitis, linfagitis y miositis
(mio-músculo).
 Infecciones locales: la fundamental es faringitis, es más benigna
en niños que en adultos. La toxina puede provocar inflamación
de tejidos que bloquean el paso de aire y producir asfixia.

99
 Microbiología

También puede dar lugar a pioderma y procesos de

endocarditis, otitis, meningitis y neumonía.
 Enfermedades postestreptococicas no supurativas: fiebres
reumáticas y glomerulonefritis. Se trata de procesos
autoinmunes por reacciones cruzadas por Acs. dirigidos contra
Streptococos que se unen a las células del riñón y en ocasiones
a las del miocardio formando inmunocomplejos en estos
órganos. Estos complejos atraen las células defensivas del
huésped que son las que originan daño. Se conocen como no
supurativas porque en los órganos afectados no se encuentran
presentes los microorganismos ni existen reacciones
inflamatorias.

2.- STREPTOCOCOS AGALACTIAE:

Pertenecen al grupo B de Lancefied. Produce β - hemólisis y

forma parte de la flora normal del tracto genitourinario,
encontrándose en la vagina de las mujeres sanas, desde donde pasa
al recién nacido en el momento del parto. Es el agente etiológico más
frecuente de sepsis y meningitis neonatal.
También se ha visto implicado en osteomielitis, infección del
tracto urinario, heridas, endocarditis y neumonías. Se asocia a
infecciones oportunistas.

3.- STREPTOCOCOS DEL GRUPO C:

Aparecen como saprofitos en la rinofaringe, tracto

gastrointestinal y vagina. En raras ocasiones puede actuar como
patógeno dando lugar a faringitis, endocarditis, glomerulonefritis,
bacteriemia, etc. Pueden provocar sepsis en el parto.

4.- STREPTOCOCOS VIRIDANS

Son saprofitos del tracto respiratorio y gastrointestinal (placa

dental, orofaringe, etc.), sin embargo se les ha considerado
como patógenos oportunistas, siendo la principal causa de
endocarditis bacteriana aguda.
Las especies implicadas con mayor frecuencia son:
- S.mutans (principal agente etiológico de la caries dental)
- S.sanguis I, II.
Las especies del grupo viridans también pueden producir abscesos,
neumonía y otras infecciones supurativas.

5.- STREPTOCOCOS NEUMONIAE

Se agrupan en parejas (diplococos) rodeadas de una cápsula,

siendo por tanto inmóviles, capsulada y no esporuladas. Para
evidenciar la virulencia del neumococo se buscan las cápsulas con
tinta china o con Acs-anticapsulares específicos, provocando un

100
 Microbiología

precipitado de la cápsula que se denomina hinchazón de la cápsula o

reacción de Quelluns.
Es el agente productor de neumonía neumococica, proceso en
el que hay una reacción de tipo inflamatorio en las áreas pulmonares
donde se desarrolla el germen lo que conlleva una vasodilatación de
los capilares de la zona con salida del plasma, hematíes y leucocitos,
lo que supone una solidificación por coagulación. Clínicamente se
presenta con diseña, fiebre, dolor pleural, tos productiva, edemas y
mal estar general.
Su poder patogénico se debe a la capacidad que tiene para
multiplicarse en los tejidos e inducir la reacción produciendo fibrosis,
siendo ésta una reacción de tipo cocatricial producida por el tejido
conjuntivo en la zona afectada en respuesta a un agresión.
También produce sinusitis, otitis, meningitis, etc.
La principal fuente de infección son las gotículas.

6.- STREPTOCOCOS DEL GRUPO D

Pueden ser α , β o γ hemolíticos, resisten bien los agentes externos,

incluso los antibióticos. Se dividen en :
a) Enterococos, corresponden a S.fecalis y S.faecium entre otros.
Son saprofitos del intestino del hombre (apareen normalmente
en heces, vagina y cavidad oral). Son agentes etiológicos de
endocarditis, bacteriemia, infección del tracto urinario, SNC,
heridas, abscesos intrabdominales. En ocasiones el origen de
infecciones nosocomiales.
b) No enterococos, corresponden a S.bovilis, S.equinus que
afectan a vacas y caballos.

7.- DIAGNÓSTICO

- Directo: se emplea agar sangre para ver las hemólisis y

posteriormente se hacen las pruebas bioquímicas.
- Indirecto: a través de estudios serológicos buscando el ASLO
(antiestreptolisina O).

8.- SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA

 Streptococo pyogenes: sensible a penicilina y eritromicina.

 Streptococo agalactiae : sensible a penicilina, ampicilina,
cefalosporina y vancomicina. Los aminoglucoxidos se usan
combinados con la penicilina para el tratamiento de la
endocarditis ya que actúan de forma sinérgica.
 Enterococos: son los Estreptococos más resistentes, presentan
resistencia a cefalosporinas y penicilina, la mayor parte son
también resistentes a las tetraciclinas, aminoglucoxidos,
clidamicina, cloranfenicol y sulfamidas.
Son sensibles a : imipenem, ciprofloxacina y vancomicina.

101
 Microbiología

 Neumococos: el fármaco de elección es la penicilina, aunque

existen cepas resistentes a este antibiótico.

La mayor parte de Streptococos son sensibles a la cefotaxima.

9.- OTROS COCOS GRAM +

• Pediococos y leuconstoc, son catalasa - . Su principal

característica es la resistencia a la vancomicina.
• Lactococus, se usa en la industria lactea y es una especie no
patógena.
• Gemella, produce procesos de endocarditis.

TEMA 14.- COCOS GRAM NEGATIVOS. NEISSERIA Y

BRAHNAMELLA (MORAXELLA).

NEISSERIA

1.- INTRODUCCIÓN.
2.- CULTIVOS.
3.- CLASIFICACIÓN DE LAS NEISSERIAS
• Neisseria meningitidis.
• Neisseria gonorreae.
• Otras

4.- NEISSERIA MENINGITIDIS

 Poder antigénico.
 Patología.
 Epidemiología.
 Toma de muestras.
 Pruebas químicas y serológicas.
 Vacunas y tratamiento.

5.- NEISSERIA GONORREAE:

• Poder antigénico.
• Patología.
• Epidemiología.
• Toma de muestras.
• Pruebas químicas y serológicas.
• Vacunas y tratamiento.

6.- MORAXELLA CATARRHALIS

102
 Microbiología

1.- INTRODUCCIÓN.

Son anaerobios estrictos, se presentan en parejas (diplococos),

dentro de los leucocitos polimorfonucleares con aspecto de riñón o
grano de café.
Son inmóviles y pueden presentar cápsula (+ virulentos).
Algunos pueden producir pigmentos de naturaleza carotenoide y color
amarillo.
Bioquímicamente son catalas (+), oxidasa (+) y fermentadores de
hidratos de carbono con producción de ácido sin gas.
Muy importante a tener en cuenta son los métodos serológicos
(inmunofluorescencia, aglutinación, fijación del complemento,
precipitación, ELISA, etc.).

2.- CULTIVOS.

Son aerobios y crecen a temperaturas aproximadas de 37ºC,

cesando el crecimiento por debajo de 30ºC. La adicción al medio de
un 5-10% de CO2 favorece el crecimiento.
Es importante tener en cuenta que se inhibe con la presencia de
ácidos grasos y sales presentes en el agar.
Son microorganismos sensibles que no resisten a la desecación ni a la
exposición prolongada a la luz, en estas condiciones elaboran
enzimas autolíticos que conducen a su destrucción.
Existen distintos medios:
 Medios normales de aislamiento: agar sangre y chocolate.
 Medios selectivos: Thayer-Martin, que llevan antibióticos (para
destruir otras bacterias gram + y - ) y antifúngicos (para

103
 Microbiología

destruir hongos). También es selectivo el medio New York City

(NYC).
Los antibióticos que pueden llevar son: colistina (inhibe bacilos
gram -), vancomicina (inhibe los bacilos gram +), etc.
Hay una modificación de Thayer-Martin que lleva trimetroprim
que inhibe Proteus.

Estas bacterias se localizan en las mucosas de los tractos

respiratorio, digestivo y genitourinario del hombre y los animales.
Únicamente las especies de Neisseria meningitidis y Neisseria
gonorreae se consideran patógenos para el hombre.

3.- CLASIFICACIÓN DE NEISSERIAS

Se pueden distinguir tres grupos:

Neisseria meningitidis: Producen meningitis y son muy difíciles
de cultivar siendo necesario un medio específico y una
temperatura de 35-37ºC. Se denomina meningococo.
Neisseria gonorreae: Se le denomina gonococo. Son muy
exigentes, requieren cultivos muy específicos y una temperatura
de 35-37ºC. En muchos casos su crecimiento se ve favorecido por
un aporte de CO2 del 5-10%.
Neisserias saprofitas: Se encuentran en el aparato genital y en
la rinofaringe. Son microorganismos poco exigentes. Crecen a
temperatura de 22-35ºC. Resisten bien a los agentes externos.
Crecen en medios generales. (Ej: N. subflava, N. lacatamica y
N.sicca).

4.- NEISSERIA MENINGITIDIS

A.- PODER ANTIGÉNICO.

El polisacárido capsular producido por N.meningitidis ha

conducido a la clasificación de este microorganismo en 13
serogrupos.
El diagnóstico de N.meningitidis puede realizarse por la detección de
los Ag capsulares en muestras orgánicas (LCR, suero, etc)mediante
técnicas de aglutinación e inmunofluorescencia que transmiten un
diagnostico precoz.
El meningococo posee además otros determinantes antigénicos como
las proteínas de membrana, los pilis y liposacáridos (responsables de
la mayor parte del proceso de infección meningocócica).

B.- PATOLOGÍA

104
 Microbiología

El hombre es el único huésped natural para el meningococo.Se

encuentra frecuentemente en la nasofaringe de individuos sanos
portadores, los microorganismos se adhieren a las células faringeas
con los pilis.
El cuadro clínico comienza con rinofaringitis leve que afecta
sobre todo a los niños, ya que en adultos aparece Ac protectores
frente al meningococo. De esta faringitis leve se evoluciona a una
forma más severa pudiendo complicarse a bronquitis. Si el
meningococo pasa a sangre puede dar lugar a una sepsis
meningococica que va acompañada de petequias, cefaleas, fiebres
altas y fracaso suprarrenal dando lugar a un síndrome denominado
Waterhose–Friederichen.
Puede pasar a LCR alcanzando las meninges y provocando meningitis
con un cuadro caracterizado por la rigidez de nuca, cefaleas y
vómitos en escopetazo, fiebre, etc.
El microorganismo meningococo puede producir artritis y con menor
frecuencia neumonía, faringitis y uretritis.

C.- EPIDEMIOLOGÍA

La meningitis por Neisseria meningitidis suele ocurrir en brotes

epidémicos. Los niños entre 6 – 12 meses y adolescentes son los que
se afectan con mayor frecuencia.
Un individuo puede tener colonizada su nasofaringe por el
meningococo y no desarrollar síntomas ni infecciones (portador).
En periodos interepidemicos de 5 a 30 % de la población puede ser
portadora.
En épocas de epidemia los portadores aumentan hasta un 70 – 80 %.
El contagio será por vía aérea, siendo muy importante los factores de
agregación.

D.- TOMA DE MUESTRA

Podemos hacer:
 Hemocultivo se existe sepsis.
 Frotis faringeo para buscar portadores.
 LCR mediante punción lumbar: Se toman 2 tubos y se
transportan inmediatamente al laboratorio. Se centrifugan los
tubos:
a) Con el sedimento se realiza un gram o azul de
metileno, puede haber cocos que si son gram (-) será
meningitis meningococica y si son gram (+) habrá que
cultivar y hacer la prueba de la catalasa que si es (+)
será Staphylococo y si es (–) meningitis pneumococica
(producida por Estreptococo pneumoniae).
Si aparecen bacilos en el gram, si son BAAR indica
meningitis tuberculosis (producida por Micobacterium
tuberculosis).

105
 Microbiología

b) Con el sobrenadante se estudiara albúminas, Ig así

como polisacáridos capsulares o reacciones
inmunológicas. También se pueden observar
polimorfonucleares, glucosa disminuida y cloruros
normales o disminuidos.
En personas afectadas por Neisserias meningitis el LCR es
turbio, purulento y con abundantes meningococos.

E.- PRUEBAS BIOQUÍMICAS Y SEROLÓGICAS

 Bioquímicas → catalasa (+), oxidasa (+) y fermentación de

hidratos de carbono.
 Serologicas → inmunofluorescenia directa y ELISA.

F.- VACUNAS Y TRATAMIENTOS

Existen vacunas en caso de epidemias produciendo una

inmunidad de grupo. Las hay frente a los serogrupos A y C pero no
contra B que es la que con más frecuencia origina epidemias.
El antibiótico de elección es la penicilina, en individuos alérgicos a
estos se administra cefalosporina.
El estado de portador no se puede erradicar con penicilina porque ha
creado resistencia, es necesario administrar rifanticina.
Un nuevo antibiótico βlactamico distinto de la penicilina y
cefalosporina es el moxalactan, ha dado buenos resultados y se
difunde rápidamente por el LCR.

5.- NEISERIA GONORREAE

A.- PODER ANTIGÉNICO

Es una bacteria con una composición antigénica compleja y

capaz de modificar para eludir la R.I. del huésped.
Entre los componentes antigénicos se encuentran los pilis que
permiten adherirse a las células epiteliales del huésped y evitar la
fagocitosis. Posee también varias proteínas con carácter antigenico:
• Proteína I o POR: forman parte de la superficie dando lugar a la
formación de poros a través de los cuales entra en la célula
ciertos nutrientes.
• Proteína II u OPA: mantiene la adherencia y la ayuda a anclarse
en las células del huésped.
• Proteína III o PMR: se asocian a las proteínas POR para formar
los poros de la superficie celular. Posee liposacáridos con
carácter antigénico y endotóxico.

B.- PATOLOGÍA

106
 Microbiología

Neisseria gonorreae tiene apetencia por las mucosas principalmente

por las urogenitales.
Los cuadros clínicos son:
 Gonorrea o Blenorragia Típica: es una E.T.S. que afecta a la
mucosa urogenital produciendo sudoración purulenta, disuria
(dolor en la micción), puede conllevar a esterilización o
estrechecimiento en vías urinarias. Es un microorganismo muy
infectivo (con un solo contacto es posible padecer la
enfermedad).
En el varón es mas frecuente la uretritis gonocócica con la
denominada dota matinal o militar.
El periodo de incubación es de 2 – 15 días, la infección puede
ascender y dar cistitis, prostatitis y orquitis, en la mujer puede
cursar sintomáticamente, puede producir uretritis, cistitis,
cervititis, endometritis u osferitis, peritonitis, salpintigitis. Puede
llegar a producir esterilidad.
 Enfermedad Gonocócica Atípica: localizada en faringe y región
anorectal.
 Septicemias: mas frecuentes en mujeres sintomáticas
caracterizada por lesión en la piel, Ej.: papulas, pústulas y en
extremidades (artritis, principalmente en tobillos y muñecas).
 Oftalmia neonatal: Puede aparecer en raras. Es una conjuntivitis
purulenta del recién nacido que al pasar por el conducto del
parto se infecta, puede producir ceguera. La prevención hasta
hace unos años era con nitrato de plata, hoy se utilizan colirios
de penicilina.

C.- EPIDEMIOLOGÍA

Es una enfermedad de distribución mundial transmitida casi

exclusivamente por transmisión sexual y principalmente por mujeres
portadoras crónicas asintomáticas.

D.- TOMA DE MUESTRA

En el hombre la muestra será tomada del pus de la gota

matinal. En la mujer de la mucosa vaginal y del cérvix y en los
homosexuales en el recto y uretra.
En septicemias la toma de muestra puede ser sangre y muestra
faríngea.

E.- PRUEBAS BIOQUÍMICAS Y SEROLÓGICAS

Se realizan las mismas pruebas que Neisseria meningitidis.

 Bioquímicas → catalasa (+), oxidasa (+) y fermentación de
hidratos de carbono.

107
 Microbiología

 Serologicas → inmunofluorescenia directa y ELISA.

F.- VACUNAS Y TRATAMIENTOS

Con penicilina o ampilicilina se crea resistencia, se suele

sustituir por cefalosporinas. Es conveniente administrar
simultáneamente cefalosporinas con tetraciclina o eritomicina,
debido a la concomitancia de infecciones (varias infecciones a la vez
por parte de más de un microorganismo) por Clamidias.
En el neonato la gonococia ocular se trata con nitrato de plata con
instilación en el saco conjuntival. También se puede tratar con
antibióticos.

6.- MORAXELLA CATARRHALIS.

Se habla de Moraxella o Brahnamella. Es catalasa y oxidasa (+),

no fermentan ningún azúcar, dan positiva la DNAasa, reduce nitratos,
lo que la diferencia de las Neisserias.
Produce la enzima butiratoesterasa y β -lactamasa.
Crecen bien en medios habituales como agar sangre y chocolate.
Su temperatura óptima es de 35ºC y la incubación puede hacerse en
una atmósfera con CO2.
Las colonias son blanco grisáceas en agar sangre o chocolate.
Estas bacterias pueden formar parte de la flora normal del
tracto respiratorio superior de individuos sanos. No obstante se ha
aislado como patógeno en ciertas infecciones, como: septicemia,
meningitis, endocarditis,y en infecciones otorrinolaringologicas.
Brahnamella catharralis es responsable del 10-15% de los casos de
otitis media y es un agente etiológico importante de sinusitis. Los
individuos más susceptibles a padecer esta infección son los ancianos
y los niños.
Las cepas productoras de β -lactamasa se consideran
resistentes clínicamente a la penicilina, ampicilina y amoxicilina
(los antibióticos que tienen un anillo β -lactamico esta enzima lo
rompe y se hacen resistentes).
Son sensibles a amoxicilina-clavulanico y ampicilina-sulfbactem.

108
 Microbiología

TEMA 15.- COCOBACILOS GRAM NEGATIVO.

HAEMOPHYLUS

1.- INTRODUCCIÓN.

2.- CLASIFICACIÓN E IDENTIFICACIÓN.

- Dependencia del factor X y V.
- Pruebas bioquímicas.
- Pruebas serológicas.

3.- HAEMOPHYLUS INFLUENZAE.

- Patología
- Tratamiento.

4.- HAEMOPHYLUS DUCREY.

- Patología
- Tratamiento.

5.- AISLAMIENTO Y DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO.

- Toma de muestras.
- Tinciones.
- Medios de cultivo.
- Pruebas bioquímicas y serológicas.

109
 Microbiología

1.- INTRODUCCIÓN.

El género Haemophylus está formado por bacterias gram (-),

aerobios y anaerobios facultativos, inmóviles y no esporulados.
Algunas especies poseen cápsula. Son parásitos obligados del tracto
respiratorio superior del hombre y animales, llegando a constituir
hasta un 10% de la flora acompañante de la orofaringe en los
individuos sanos.
Las especies del género Haemophylus fermentan los hidratos de
carbono con producción de ácido, producen nitratos y la mayor parte
son catalasa y oxidasa (+) .
El crecimiento viene condicionado por la presencia en el medio de
factor V y X. El factor V a diferencia del X no se encuentra libre en
sangre, para liberarlo deben romperse las células sanguíneas por
calentamiento.
Los medios de cultivo son agar sangre y chocolate que deben
incubarse a 35-37ºC y en atmósfera de un 5-10% de CO2. También se
puede emplear como medio específico Levinthlal.

2.- CLASIFICACIÓN E IDENTIFICACIÓN.

Existen distintas especies del género Haemophylus, las

principales desde el punto de vista patógeno para el hombre son H.
influenzae y H. ducrey.
Para la identificación de las especies nos basamos en:
- Dependencia del factor V y/o X.
- Pruebas bioquímicas. (ver cuadro).
- Pruebas serologicas, aglutinación el látex y prueba de
hinchamiento capsular.

3.- HAEMOPHYLUS INFLUENZAE

a.- Patología

Es una bacteria que parasita exclusivamente al hombre

localizándose en el tracto respiratorio superior. Accede a dicho tracto
por inhalación colonizando las mucosas. Hasta un 80% de personas
pueden ser portadoras sin que desarrollen síntomas clínicos.
Es capsulado (virulento) y se ha observado que la cápsula está
formada por polisacáridos distintos que según sus características se
diferencian en 6 serogrupos (a→f). En España es más frecuente la de
tipo b.
Este microorganismo es junto al neumococo (Streptococo
neumoniae) uno de los agentes etiológicos más frecuentes de otitis
media bacteriana y sinusitis aguda.

110
 Microbiología

Puede invadir el torrente circulatorio y alcanzar las meninges

(produciendo meningitis) o localizarse en articulaciones (produciendo
artritis). Es la causa más frecuente de meningitis en niños menores
de 5 años. En recién nacidos es muy rara la infección ya que poseen
Ac maternos frente a este microorganismo.
También afecta a ancianos y adultos debilitados por procesos
gripales. Ocasionalmente puede producir epiglotitis con obstrucción
respiratoria aguda y un desenlace fatal si no se recurre a
traqueotomía.
Este microorganismo está implicado como agente etiológico de
neumonía principalmente en niños y adultos con infección pulmonar o
historia de alcoholismo.

b.- Tratamiento

En ausencia de tratamiento puede ser mortal en el caso de

meningitis y epiglotitis.
El tratamiento de elección son ampicilina y cloranfenicol, aunque
últimamente existen cepas resistentes y se recomiendan las
cefalosporinas.
A partir de los 18 meses de vida los niños se pueden vacunar frente a
Haemophylus b.

4.- HAEMOPHYLUS DUCREY

a.- Patología

Es el agente etiológico del chancro blando o chancroide (ETS),

caracterizado por la presencia de úlceras en los genitales y zona
perianal.
El periodo de incubación es de 7 días, siendo una enfermedad muy
similar a la sífilis.

b.- Tratamiento

A base de eritromicina.

5.- AISLAMIENTO Y DIÁGNOSTICO BACTERIANO

a.- Toma de muestras

Se realiza en condiciones totalmente asépticas a través de

exudados faríngeos esputo o líquido purulento en caso de infección
de las vías respiratorias.
En caso de meningitis se saca LCR por punción lumbar.

111
 Microbiología

b.- Tinciones

Generalmente tinción de gram o tinción negativa para el estudio de la

cápsula.

c.- Medios de Cultivo

Principalmente agar sangre o agar chocolate a los que

añadimos discos con FV y FX y algún Ab para hacer más selectivo el
medio.

d.- Pruebas bioquímicas y serológicas

- Pruebas bioquímicas: (ver cuadro)

- Pruebas serológicas: principalmente pruebas de precipitación y
aglutinación.

BRUCELLA

1.- INTRODUCCIÓN.
2.- AISLAMIENTO Y DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO.
- Estudio microbiológico:
• Toma de muestras.
• Pruebas bioquímicas.
- Estudio serológico:
• Test de seroaglutinación o de Wright.
• Test de Coombs antibrucella.
• Test de rosa de bengala.
• Prueba de la introdermorreacción con la melitina.
• Otras.
- Medios de cultivo.
- Técnicas de cultivo:
• Técnica de castañeda.
• Técnica de isolator.
3.- EPIDEMIOLOGÍA.
4.- PATOLOGÍA.
5.- TRATAMIENTO.

1.- INTRODUCCIÓN Y CLASIFICACIÓN

Son cocobacilos gram negativos, inmóviles, no esporulados y

aerobios estrictos. Algunos pueden presentar cápsula.
Se observan agrupados en parejas o en cadenas cortas.
Su temeperatura óptima de crecimiento es 37ºC y algunas especies
necesitan presencia de CO2.

112
 Microbiología

Son catalasa +, la mayoría dan la prueba de la oxidasa +, reducen

NO3- y fermentan escasos HC.
Las especies del género Brucella son parásitos obligados de
animales y algunos producen infección en el hombre.
Son bacterias de largo crecimiento y se destruyen con facilidad son
temperaturas de pasteurización (aprox. 70ºC).

2.- AISLAMIENTO Y DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO

No es fácil evidenciar la clínica de la brucelosis, debido a que en

muchas ocasiones y sobre todo al principio de la enfermedad, ésta es
difusa (no hay síntomas claros de brucelosis) siendo necesario los
estudios microbiológicos y serológicos.

a.- Estudio microbiológico

• Toma de muestra: La recogida de muestra de los productos en
los que se sospecha presencia de Brucella son principalmente
sangre y en ocasiones líquidos orgánicos como pus y LCR.
De la muestra de sangre se realiza hemocultivo, de vital
importancia ya que la brucelemia (paso de Brucella a sangre) está
presente en las primeras fases de la brucelosis, sobre todo en
manifestaciones febriles, teniendo en cuenta que un resultado
negativo de hemocultivo no excluye en principio la enfermedad.
• Pruebas bioquímicas: Se realizará al menos la prueba de la
catalasa y oxidasa (+), así como la prueba del indol, gelatina,
voges proskauer y rojo de metilo (-). También se realizan otras
pruebas ( ver cuadro 12.3)

b.- Estudio serológico

Las pruebas más importantes son:
• Test de seroaglutinación o test de Wright: Consiste en
diluciones sucesivas del suero problema en el medio que
contiene antígeno purificado específico (el Ag de la Brucella),
por lo que los títulos positivos (aglutinación) indicarán un
contacto previo con la Brucella si este es superior a 1/80. Los
títulos de brucelosis en fase aguda están alrededor de 1/320.
En casos de cronicidad los títulos suelen ser muy bajos e incluso
negativos, ya que en este tipo de pacientes aparecen muchos
anticuerpos no aglutinantes (incompletos) que deberán ser
detectados por otras pruebas (test de Coombs).

• Test de Coombs antibrucella: Sirve para detectar anticuerpos

incompletos. Es una técnica muy específica y útil en Brucellas
crónicas. Su negatividad no excluye brucelosis.

• Test de rosa de Bengala: Es una prueba muy rápida de

aglutinación y su negatividad no excluye brucelosis.

113
 Microbiología

• Prueba de la introdermorreacción con la metilina: Consiste en

una inyección intradérmica en el brazo o antebrazo de un
filtrado autolisado con bacterias muertas, pero con efecto
antigénico y otra inyección de carácter intradérmico (testigo
calentado a 100ºC) en el otro brazo, que actúa de control (-).
Transcurridas 8 horas se efectuará la lectura, si la reacción es
(+) aparecerá una zona roja y edematosa de 3 o más cm. de
diámetro en el lugar donde se aplicó el autolisado.

• Otras: fijación del complemento, radioinmunoanálisis, etc.

c.- Medios de cultivo

La Brucella es un microorganismo intracelular, por lo que necesitan
compuestos nutricionales. Existen muchos medios para el aislamiento
de Brucella:
Medios líquidos: como el caldo tripticasa, el caldo de hígado,
caldo de brucella, etc.
Medios sólidos: como el agar tripticasa, agar de brucella, etc.
Medios selectivos: que contienen antibióticos, como el medio de
Kurdas y Mose, Forwel o Jones-Morgan.

Las colonias de Brucella son pequeñas y transparentes y son de

dos tipos morfológicos:
♦ Colonias lisas o S: son transparentes y corresponden a cepas
virulentas cuya virulencia corresponde a dos factores
virulentos: factor A y M, que son de naturaleza polisacárida.
♦ Colonias rugosas o R: no son patógenas.

En la tinción de gram para Brucella se recomienda prolongar el

tiempo de contacto con la safranina y resuspender las colonias
sospechosas con una gota de solución salina fenicada al 1%,
depositándolo en el portaobjetos con el fin de evitar el peligro de
contaminación para el personal del laboratorio.

d.- Técnicas de cultivo

Las muestras de sangre se cultivan siguiendo dos técnicas:
 Técnica de Castañeda: Utiliza un medio bifásico (medios que
tienen una fase líquida y otra sólida en un mismo frasco). El
medio líquido permite el enriquecimiento previo de la Brucella y
el medio sólido sirve para la siembra. Esta técnica tiene las
siguientes ventajas:
- manipilación sencilla.
- frascos de cierre hermético que dificultan la
contaminación.
- los frascos pueden llevar CO2.
- conservación indefinida y transporte cómodo.

114
 Microbiología

El volumen de sangre que se siembra no debe superar el 20%

del volumen del medio. El frasco se incuba a 35-37ºC en
posición vertical y a las 48 horas se inclina para que la fase
líquida impregne la fase sólida y se incuba nuevamente en
posición vertical.
El hemocultivo se observa cada 2-3 días hasta un total de 30
días.

 Técnica de Isolator: En un sistema de lisis-centrifugación

realizado en el mismo tubo. La sangre inoculada se lisa por la
acción de detergentes y se somete a concentración por
centrifugación. El sedimento se siembra en medio sólido. Esta
técnica tiene como ventajas:
- lisa las células sanguíneas, por lo que permite una
mayor recuperación de patógenos intracelulares.
- se acorta el tiempo de aislamiento.
- mayor número de resultados positivos.
Inconvenientes: la tasa de contaminación es mayor al no
tratarse de incubación en recipientes cerrados, sino en placas
de agar.

3.- EPIDEMIOLOGÍA.

La brucelosis es una típica zoonosis en la que el hombre es un

huésped accidental. Las posibles fuentes de contaminación son:
- Contagio directo por:
contacto con animales infectados
inhalación de aerosoles
inoculación
contacto con mucosas principalmente en personas que
trabajen con animales
- Contagio indirecto por ingestión de leche y derivados no
pasteurizados.

Es importante destacar el peligro que corre el personal del

laboratorio que se puede infectar por:
- contacto con piel y mucosas.
- inhalación de aerosoles.
- inoculación accidental con agujas contaminadas.
Por ello siempre que se sospeche Brucella hay que extremar las
condiciones de trabajo.
Recomendaciones:
 Trabajar en campana de seguridad.
 Usar ropa protectora.
 No oler ninguna placa de cultivo.
 Tirar directamente las jeringas del hemocultivo al contenedor.

115
 Microbiología

4.- PATOLOGÍA

El periodo de incubación de la Brucella es de 1-6 semanas; en

este tiempo la Brucella se multiplica en el interior de las células en el
retículo endoplásmico y de aquí pasa a sangre y tejidos donde se
producen granulomas y abcesos. Es característico el polimorfismo de
la enfermedad y la recaída en los primeros meses.
Es frecuente que la infección se localice en distintos órganos ( hígado,
músculo, huesos, etc).
La Brucella melitensis causa un acusado neurotropismo (tendencia
por SNC).
En humanos las complicaciones más frecuentes es la osteomielitis.
La Brucella es el agente productor de brucelosis, fiebre de
malta o fiebres ondulantes. Comienza con fiebre, debilidad, dolores
óseos y sudoración. La fiebre aumenta por la tarde y disminuye por la
noche apareciendo una sudoración con olor a paja mojada..
La enfermedad se disemina por vía linfática alcanzando los ganglios
linfáticos, bazo, hígado y vértebras donde se forman nódulos
granulomatosos.

5.- TRATAMIENTO

Dado que se trata de un microorganismo intracelular y las

reacidas son frecuentes, los tratamientos han de ser prolongados
principalmente por tetraciclinas-estreptomicinas. También es útil la
rifancitina y la doxiciclina. En ninos menores de 14 años se usa
trimetroprimsulfametoxazol.

BORDETELLA.

1.- INTRODUCCIÓN.
2.- CLASIFICACIÓN Y ESPECIES MÁS IMPORTANTES.
3.- AISLAMIENTO Y DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO.
- Toma de muestras.
- Medios de cultivo.
- Tinciones.
- Pruebas bioquímicas y serológicas.
4.- EPIDEMIOLOGÍA.
5.- PATOLOGÍA.
6.- TRATAMIENTO Y PROFILAXIS.

1.- INTRODUCCIÓN

116
 Microbiología

Es un bacilo gram -, capsulado, móvil o inmóvil, no formador de

esporas y se considera parásito estricto.
Crece en células epiteliales ciliadas del tracto respiratorio.
Son muy sensibles al calor y desecación y sobrevive muy poco fuera
del hombre.

2.- CLASIFICACIÓN Y ESPECIES MÁS IMPORTANTES

La especie más importante es Bordetella pertusis. (ver cuadro 12.4)

3.- AISLAMIENTO Y DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO

a.- Toma de muestras

Se toma en condiciones asépticas con una torunda impregnada

en alginato cálcico a través de esputos o incluso con un escobillón de
la zona nasofaríngea. También se puede tomar la muestra por
expectoración en placa en un medio específico para Bordetella
pertusis denominado Bordet-gengou.
Las placas se incuban a 35ºC en atmósfera húmeda y CO2 opcional.
Las colonias a los 5-7 días de incubación son pequeñas y de color
blanco perlado (similar a gotas de Hg)

b.- Tinciones

Se realiza tinción de gram, de esporas y de cápsula.

c.- Pruebas bioquímicas y serológicas

- Pruebas bioquímicas: (ver cuadro 12.4)

- Pruebas serológicas: Consiste en la búsqueda de Ac de
Bordetella aglutinante mediante reacciones de precipitado del
suero del paciente con suero específico. Suelen emplear
técnicas de ELISA, fijación de C e inmunofluorescencia. Son muy
útiles en la fase terminal de la fase catarla y paroxística cuando
el microorganismo disminuye su número (en fase precoz es más
útil el cultivo).

4.- EPIDEMIOLOGÍA

La enfermedad que produce se denomina tos ferina. El periodo

de incubación es de 7-10 días. La fuente de infección es el enfermo,
generalmente niños menores de 5 años.
Se transmite por vía respiratoria al toser, estornudar, hablar, etc.

5.- PATOLOGÍA

Bordetella pertusi posee una enterotoxina dermonecrótica y

estimulante de la tos. Produce la tos ferina y la enfermedad comienza

117
 Microbiología

con un periodo catarral que dura 1-2 semanas. Es un catarro débil

con fiebre y tos muy contagiosa.
Se continúa con periodo paroxístico o espasmódico en el cual tras una
inspiración profunda se producen de 10-12 golpes de tos breves pero
periódicos. Bruscamente se produce una inspiración profunda de
carácter sibilante (silbido) que se asemeja al canto de un gallo (se
denomina tos coqueluchoide).
El tórax queda fijo en inspiración y el niño aparece cianótico volviendo
a producir otra serie de golpes de tos.
El mecanismo de la tos es mixto:
- Central: por acción de la enterotoxina en el centro de la tos
- Periférico: por el esputo viscoso y filante y la compresión de los
bronquios.
Se observa un aumento de linfocitos y también puede estar
acompañada de vómitos.
Puede haber fiebre por asfixia.
En lactantes es frecuetne la apnea (ausencia de respiración), cianosis
y estertor (inspiración forzada).
Los niños mayores o adultos inmunizados presentan solamente
síntomas catarrales o ligera bronquitis.

6.- TRATAMIENTO Y PROFILAXIS

 Tratamiento: a base de eritromicina. La administración de

antibiótico en la fase previa catarral erradica los
microorganismos. Cuando la enfermedad ha entrado en su fase
paroxística la administración de antibiótico no bloquea el
progreso de la misma. Se recomienda entonces la
oxigenoterapia para evitar lesiones cerebrales.
 Profilaxis: durante el primer año de vida se debe vacunar a los
niños frente a Bordetella Pertussi, se administra la vacuna DTT
(Difteria, Tétanos y Tos ferina).

FRANCISELLA TULARENSIS.

1.- INTRODUCCIÓN.

118
 Microbiología

2.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS.

- Toma de muestras.
- Estudios microbiológicos y serológicos.
3.- PATOLOGÍA.
4.- TRATAMIENTO.

1.- INTRODUCCIÓN

Es un cocobacilo gram – aerobio y anaerobio facultativo y no

esporulado, responsable de una enfermedad zoonótica llamada
Tularemia. Forma parte de la flora orofaringea normal de un gran
número de animales salvajes, desde donde pasa al hombre por varias
vías:
• Contacto con cadáveres de animales infectados.
• Inhalación de aerosoles.
• Ingestión de carne contaminada.
• Picaduras de moscas, mosquitos y garrapatas que actúan de
vectores de las bacterias.

2.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

 Toma de muestras → la toma de sangre se realiza de las

heridas, esputo y sangre.
 Estudios serologicos y microbiológicos → en cuanto a los
estudios microbiológicos: tinción de gram y tinción de
fluorescencia.
 Medio de cultivo → Thaller – Martin y agar sangre enriquecidos
con glucosa y cisteína a 37º.
 Pruebas bioquímicas: catalasa – y producción de sulfhídrico.
 Pruebas serologicas: pruebas de aglutinación y test de
introdermoreacción en la piel.

3.- PATOLOGÍA

Tiene un periodo de incubación de 3-4 días. El paciente tiene

fiebre, escalofríos, dolor de cabeza y linfoadenopatias. La forma
mas común de la enfermedad es la Tularemia ulceroglandular, en
la que se observa una lesión localizada en la puerta de entrada de
las bacterias menos habituales, son las Tularemias Oculo-
Glandular y Orofaríngea asociado a infecciones en ojos y faringe.
Si la infección se produce por inhalación de aerosoles se verán
afectados los pulmones dando lugar a Tularemia Pulmonar.
La ingestión de carne contaminada dará lugar a Tularemia Tifoidal
(infección sistémica con alta tasa de mortalidad).

4.- TRATAMIENTO

Principalmente estreptomicina.

119
 Microbiología

PASTEURELLA.

1.- INTRODUCCIÓN.
2.- ESPECIES MÁS IMPORTANTES.
3.- PATOLOGÍA.
4.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS.

1.- INTRODUCCIÓN
Son cocobacilos gram – no esporulados, anaerobios facultativos
capsulados y patógenos para algunos hombres y algunos animales.

2.- ESPECIES MAS IMPORTANTES

Existen seis especies siendo la más importante Pasteurella

Multocida.

3.- PATOLOGÍA

Tiene una estructura capsular de acción enterotoxica dando un

efecto virulento principalmente en infecciones locales afectando a
la piel.
El foco de infección es a través de las heridas, de aquí pasa s
sangre ocasionando bacteriemia, a veces en enfermedades
crónicas de origen pulmonar se han observado sobre infecciones
originando cuadros de neumonía.
También se ha visto implicada en Meningitis.

4.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

 Toma de muestra: de heridas

 Tinciones: gram principalmente
 Medio de cultivo: agar sangre dando colonias pequeñas y
traslucidos que desprenden olor a champiñón.
 Pruebas bioquímicas: oxidasa, catalasa, Indol, nitratos +. Las
colonias pueden ser rugosas, lisas o mucosas.
 Pruebas serologicas: aglutinación.
 Tratamiento: penicilina.

120
 Microbiología

KINGELLA

Cocobacilo gram – forma parte de la flora normal de la orofaringe

del hombre y rara vez produce daño en este.
Se ha aislado en bacteriemia y en lesiones de piel y huesos.
El tratamiento: penicilina, gentamicina y cloranfenicol.

ACTINOBACILLUS

Son cocobacilos gram – inmóviles y oxidasa +, forman parte de la

flora oral habitual de un gran numero de animales domésticos.
El hombre se infecta por inoculación de esta bacteria generalmente
por mordeduras.
Una de las especies más importantes es Actinobacillus
Actinomycetemcomitans, se le ha asociado a peridontitis destructiva
de los adolescentes. Se considera patógeno oportunista y es sensible
a la penicilina.

121
 Microbiología

TEMA 16.- BACILOS Y COCOBACILOS GRAM POSITIVOS

1.- BACILLUS

a. Introducción
b. Especies más importantes
 Bacillus anthracis
 Epidemiología
 Patología
- Carbunco cutáneo
- Carbunco pulmonar
- Carbunco intestinal
 Aislamiento y características bioquímicas
- Toma de muestra
- Tinción
- Medios de Cultivo
- Pruebas biquímicas
- Pruebas serológicas
 Tratamiento
 Bacillus cereus (intoxicación alimentaria)

2.- LISTERIA

a. Listeria monocitogenes
 Introducción
 Patología
 Aislamiento y características bioquímicas
- Toma de muestra
- Tinciones
- Medios de cultivo
- Pruebas bioquímicas
- Pruebas serológicas
 Tratamiento

3.- CORYNEBACTERIUM

 Introducción

122
 Microbiología

 Especies más importantes → Corynebacterium difteriae

 Patología y profilaxis
 Aislamiento y características bioquímicas
 Tratamiento

4.- OTROS

 Erysipelothrix rhusiopathiae
 Kurthia
 Lactobacillus

1.- BACILLUS

A.- INTRODUCCIÓN

La familia Bacillaceae comprende los géneros Bacillus y

Clostridium que son bacilos gram (+) formadores de esporas
(Clostridium lo estudiaremos en un capítulo aparte de anaerobios).
El género Bacillus comprende numerosas especies ampliamente
distribuidas en la naturaleza pero sólo unas pocas tienen importancia
patológica, entre ellas destaca B.cereus y B. Anthracis.
Se caracteriza por crecer la mayor parte a 37ºC en medios generales.
Son aerobios y facultativos (pueden crecer en condiciones
anaerobias) y esporulados.

B.- ESPECIES MÁS IMPORTANTES

Bacillus anthracis

♦ Epidemiología: Es una zoonosis principalmente siendo una

enfermedad profesional de pastores, veterinarios, mataderos,
etc. El germen entra a través de rasguños, heridas,
inhalaciones, etc.

♦ Patología: Es el microorganismo causante del Carbunco o

Ántrax; hoy en día no se suele dar en países industrializados
pero sí en subdesarrollados.
En un bacilo gram (+) que se agrupa en parejas o cadenas, con
bordes cortantes, con aspecto de tiza o caña de bambú, capsulado,
esporulado e inmóvil.
Se puede transmitir por inhalación por lo que se deberá realizar
un aislamiento.
Forma una exotoxina de carácter proteico con una acción muy
tóxica y junto a presencia de cápsula proporciona a estas
bacterias propiedades antifagocitarias.

123
 Microbiología

El carbunco humano tiene lugar tras el primer contacto con

animales infectados que tras un periodo de incubación de 2-3
días da lugar a:
Carbunco cutáneo o Pústula maligna: El poder patógeno
se debe a la exotoxina que da lugar a una pápula que se
transforma en vesícula luego en pústula y posteriormente en
úlcera necrótica cubierta por una costra negra; a partir de
ésta se propaga por vía linfática provocando linfagitis y
septicemia. Los más habitual son formas benignas que se
curan con facilidad tras un tratamiento adecuado.
Carbunco pulmonar: Cursa con edema pulmonar u
pulmonía debido a la inhalación de polvo contaminado con
esporas. También se le denomina como la enfermedad de
los cardadores de lana.
Carbunco intestinal: Conlleva dolor abdominal, vómitos,
diarreas, etc debido a la ingestión de alimentos
contaminados. Es la más rara y grave.

♦ Aislamiento y características bioquímicas:

- Toma de muestra: se coge a partir de la pústula o
también del esputo. Se realizara un hemocultivo
(septicemia).
- Tinciones: gram, esporas y cápsula.
- Medio de cultivo: medios generales como sangre, dando
lugar a colonias grandes en forma de melenas de león o
cabezas de medusas.
- Pruebas bioquímicas: (esquema, fotocopias: tabla 10.1 y
10.2)
- Pruebas serologicas: inmunofluorescencia
- Prueba de la Antracina: Es una prueba de
introdermoreaacion, la cual será positiva si da una
reacción eritomatosa de al menos 8 ml de diámetro a las
24 h.
♦ Tratamiento: Penicilina y alternativamente tetraciclina,
cefalosporina, cloranfenicol y aminoglucosidos.

BACILLUS CEREUS

Agente capaz de producir toxiinfecciones mediante el

aislamiento en alimentos y heces del paciente.
Es resistente a los beta-lactamicos, y sensibles a los
aminoglucosidos, vancomicina y clindamicina.

2.- LISTERIA

Existen 8 especies siendo la más importante Listeria

monocitogenes.

124
 Microbiología

A.- PATOLOGÍA

Se han descrito una gran variedad de manifestaciones clínicas,

entre ellas, las importantes son: sepsis o meningitis neonatal, sepsis o
meningitis en pacientes inmunodeprimidos (particularmente en
transplantados de riñón) y sepsis puerperal (después del parto) o
enfermedad gripal en la gestación.
Se ha observado que se desarrolla en personas que tienen bajas las
defensas pudiendo producir la muerte.
Listeria monocitogenes es capaz de crecer en el interior de las
células del sistema retículo endotelial lo que le permite vivir en
macrófagos confiriéndole una extraordinaria resistencia frente a
agentes antibacterianos(Ab). Además este mecanismo le va a facilitar
su diseminación.
Posee una estructura antigénica específica correspondiente a Ag
flagelares (Ag H) y Ag somáticos (Ag O).

B.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

 Toma de muestra: Sangre, LCR, esputo, etc.

 Tinción: Gram
 Medios de Cultivo: Medios enriquecidos con ambiente
microaerófilo (10% de CO2) a 37-42ºC. Se puede sembrar en
agar sangre para conocer su grado de hemólisis. Listeria
nopresenta ni cápsula ni esporas, pero sí flagelos en disposición
peritrítica. Su distribución es ubicua (en todas las partes, agua,
tierra, ser humano, aire, etc) y se ha aislado asociado a
numerosas enfermedades de peces, mamíferos, plantas, etc.
 Pruebas bioquímicas: Catalasa, ONPG, esculina (+); oxidasa,
coagulasa, decarboxilasa, ureasa (-); movilidad (+) a 22ºC. (ver
cuadro 10.2)
 Pruebas serológicas: Principalmente pruebas de aglutinación en
el que se evaluará el título de las aglutininas H de las muestras
del suero del paciente. También se realizan técnicas de fijación
de C’ cuyo título se da como positivo a partir de 1/10. También
técnicas de inmunoprecipitación, inmunofluorescencia, test de
alergia por introdermoreacción, etc.

C.- TRATAMIENTO

Principalmente ampicilina y eritromicina.

3.- CORYNEBACTERIUM

A.- INTRODUCCIÓN Y ESPECIES MÁS IMPORTANTES

Comprende un grupo de cocobacilos gram positivos, no

esporulados, generalmente inmóviles y pueden contener gránulos
metacromáticos que se tiñen irregularmente. Son pleomórficos y lo
más característico es que adoptan una posición en empalizada o
letras chinas.

125
 Microbiología

Están muy distribuidos en la naturaleza y forman parte de la

flora normal del hombre; algunos autores los denominan
difteromorfos.
Son erobios facultativos o microarófilos. La especie más
represantiva es Corynebacterium difteriae que junto con
Corynebacterium ulcerans y Corynebacterium pseudotuberculosis son
los únicos que pueden producir toxinas o ser patógenos. Las demás
especies son patógenos oportunistas.

B.- PATOLOGÍA Y PROFILAXIS

El Corynebacterium difteriae produce la difteria que es una

enfermedad infecciosa aguda causada por cepas que producen
toxinas.
La vía de entrada es la mucosa respiratoria donde se multiplica
y produce la exotoxina que causa necrosis en los tejidos vecinos
provocando una respuesta inflamatoria con formación de la
pseudomembrana diftérica.
La toxina puede afectar al corazón y nervios periféricos. El
periodo de incubación es de 3-5 días y teniendo en cuenta el punto de
entrada se produce faringitis o amigdalitis con fiebre y/o diseña
(dificultad respiratoria). Esto se debe a la pseudomembrana que
provoca una obstrucción de las vías aéreas produciéndose un edema
(hinchazón por retención de líquidos) localizado en el cuello,
denominado “cuello de toro”, provocando un taponamiento de las
vías respiratorias que puede llevar a la asfixia lo que se denomina
“crup diftético”.
Si hay una difusión de la toxina se pueden producir alteraciones
hepáticas, renales,etc.
Su efecto patógeno se encuentra directamente relacionado con
dos tipos de Ag:
 Ag O: es un polisacárido termoresistente y responsable de
reacciones cruzadas con micobacterias.
 Ag K: es un Ag proteico sensible a la Tª y responsable de da la
reacción de hipersensibilidad.
Otros factores de patogenocidad:
 Hialurodinasa: causa la infección sobre las células.
 Exotoxina
 Glicoliticos: muy toxico y causa muerte celular.
En cuanto a la profilaxis: la vacuna DTT.

C.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

o Toma de muestra: vías respiratorias.

o Tincones: gram, corpúsculos metacromáicos.
o Medio de cultivo: Loeffler que da colonias grisáceas pequeñas
con bordes irregulares.
o Pruebas bioquímicas: (ver tabla 10.3)
o Prueba de la Toxigenicidad: Puede realizarse in vivo o in vitro.

126
 Microbiología

 In vivo → se inyecta introperitonalmente una suspensión

con el corinebacterium difteriae a un animal de
experimentación (cobaya) y a un control al que se le
inyecta además antitoxina difterica, al cabo de 2 días si la
cepa de la suspensión fuese toxígena se producirá una
infección.
 In vitro → se lleva a abo por medio de un test de
inmunodifusion radial en placa, la prueba será positiva si
aparece el precipitado en el pocillo.

D.- TRATAMIENTO

Penicilina y eritromicina.

4.- OTROS

ERYSIPELOTHRIX RHUSIOPATHIAE

Solo tiene una especie, es muy frecuente como patógeno en los

cerdos y otros animales. Produce la Erisipela Porcina. En el hombre
puede producir una lesión inflamatoria en la piel que generalmente
afecta a manos y a dedos que se denomina Erysipeloide.
Las lesiones presentan un borde eritomatoso elevado y puede
complicarse con septicemia y endocarditis. La adquisición en el
hombre esta vinculado con contactos de tejidos animales: matarife,
carniceros, pescadores, pescaderos, etc. aunque también puede estar
presente en suelos contaminados.

Diagnostico: muestra de biopsias de las lesiones de la piel y

hemocultivos. Crece bien en los medios habituales (agar sangre,
chocolate). La característica mas llamativa es la producción de
sulfhídrico en el medio TSI (triple sugar iron) hay que relacionarlo con
el Kligler.

Características bioquímicas: catalasa negativa, oxidasa negativa,

movilidad negativa, sulfhídrico positiva, nitratos negativa, glucosa
positiva, lactosa positiva, xilosa negativa, manitol negativa, sacarosa
negativa.

KURTHIA

LACTOBACILLUS

Son bacilos gram positivos, pleomórficos, normalmente

inmóviles, microaerófilos y catalasa negativos. Reciben este nombre
porque el producto principal de su metabolismo es el ácido láctico.

127
 Microbiología

Destacan algunas especies como el bacilo de Doderleim presente

en la flora vaginal.
Otras especies forman parte de la flora intestinal como el
Lactobacillus acidofilus. Especialmente se ha aislado en casos de
neumonía, sepsis o infección del tracto urinario. Son sensibles a
muchos betalactámicos.

TEMA.- 17 MICOBACTERIUM Y ACTINOMICETOS

1.- INTRODUCCIÓN.

2.- MICOBACTERIUM

2.1 Introducción.
2.2 Procesamiento de las muestras para el estudio de
micobacterias.
2.3 Aislamiento y características bioquímicas.
2.4 Realización de baciloscopias.
2.5 Patogenicidad.
2.6 Especies más importantes: M.tuberculosis y M. Leprae.

3.- MICOBACTERIM TUBERCULOSIS

3.1 Patología.
3.2 Epidemiología.
3.3 Prueba de la tuberculina.
3.4 Tratamiento.

4.- MICOBACTERIUM LEPRAE

4.1 Patología: lepra tuberculoide y lepra lepromatosa.

4.2 Epidemiologia.
4.3 Prueba de la lepromina o mitsuda.
4.4 Toma de muestras.
4.5 Tratamiento.

5.- ACTINOMICETOS

5.1 Introducción.
5.2 Especies más importantes.

128
 Microbiología

5.3 Aislamiento y características bioquímicas.

5.4 Patología.
5.5 Tratamiento.

1.- INTRODUCCIÓN

De acuerdo con la última edición del manual de Bergey`s

Micobacterium se encuentra en la sección 17 dentro de los
Actinomicetes, el orden actinomiceto presenta ocho familias de las
que dos resultan importantes para el ser humano por su interés
clínico:

- Micobacteriaceae.
- Nocardiaceae.

2.- MICOBACTERIUM

2.1.- INTRODUCCIÓN

Los Micobacterium son bacilos rectos o ligeramente curvados

de 0.2- 0.6 µ m, son aerobios, inmóviles y no esporulados. Siendo
típico de estos microorganismos la pared, ya que se encuentra
altamente enriquecida por ácidos micólicos y en general
componentes céreos, de tal forma que para su coloración se
necesitan colorantes de alta capacidad tintorial así como calor para
facilitar su penetración ya que este tipo de microorganismos se tiñen
muy difícilmente. Una vez teñidos son altamente resistentes a la
decoloración ácida, por todo ello son llamados BAAR, que es la
principal diferencia con los demás microorganismos.
La presencia de estos componentes en la pared ofrecen a las
micobacterias resistencia a la desecación y acción de decolorante,
desinfectante y de agentes antibacterianos.
Así el colorante verde malaquita y el antibiótico penicilina se emplean
en medios habituales de aislamiento de Micobacterium.

129
 Microbiología

Son gérmenes muy distribuidos en la naturaleza, pueden ser

saprófitos del agua, suelo, etc. , incluso afectar al hombre causando
infecciones graves y en ocasiones crónicas como la lepra.
De las 57 especies que se conocen al menos 25 se han aislado en
infecciones del hombre.
Se tiñen difícilmente con gram pero cuando lo hacen responden a
gram + , aunque su principal característica es su capacidad BAAR.
Las micobacterias se pueden clasificar :
- Atendiendo a su velocidad de crecimiento.
- Morfología colonial.
- Y a la propiedad de desarrollar pigmentos de naturaleza
carotenoide en determinadas condiciones.

Según estos puntos Runyon dio los siguientes grupos:

♦ Micobacterium fotocromógenos: desarrollan color cuando se
exponen a la luz (pigmento amarillo-anaranjado)
♦ Micobacterium escotocromógenos: desarrollan color en la
oscuridad.
♦ Micobacterium no cromógenos: de crecimiento lento ( más de 1
semana).
♦ Micobacterium crecedores rápidos: (menos de 7 días)

Posteriormente se vio que esta clasificación no era perfecta puesto

que existen micobacterias que pueden clasificarse en más de un
grupo.

Otros autores realizan otra clasificación dividiendo a las micobacterias

en dos grupos importantes:
♦ Bacilos de Micobacterium cultivables en medios artificiales, con
crecimiento más bien lento y que en función de su cuadro
clínico que producen en el hombre se dividen en:
a) Especies que producen tuberculosis en el hombre y
animales (Micobacterium tubercolisis y Micobacterium
bovis)
b) Especies de micobacterias atípicas de crecimiento muy
lento y que pueden presentar un poder patógeno en el
hombre distinto de tuberculosis y lepra.
♦ Bacilos de Micobacterium no cultivables en medios artificiales y
patógenos para el hombre (Micobacterium leprae)

2.2.- PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS PARA EL ESTUDIO

DE MICOBACTERIAS

La mayor parte de las muestras que se procesan para

micobacterias proceden del tracto respiratorio (esputos, líquido
pleural, broncoaspirado), orina, LCR, biopsias, etc.

130
 Microbiología

El procesamiento de muestras requiere un paso inicial que es una

concentración por medio de centrifugación (muestras más
peligrosas). La mayor parte de las muestras contaminadas por flora
acompañante que crece más rápido que las micobacterias puede
inhibir el desarrollo de éstas, por ello las muestras deben ser
sometidas a un proceso de homogenización-descontaminación previo
a las siembra.
La homogenización de esputo es necesario para fluidificar la
muestra, normalmente muy mucosa, para ello se utilizan mucolíticos
como N-acetilcisteína o el detergente lauril-sulfatosódico.
La descontaminación se lleva a cabo con ácido o álcalis, a pesar de
que las micobacterias son muy resistentes a estos agentes
únicamente sobreviven de un 10-20% de la población inicial. El
tiempo de contacto de NaOH no debe ser mayor a 15 minutos.
Los líquidos estériles cono el LCR no necesitan del proceso de
homogenización ni descontaminación y pueden sembrarse
directamente.
El proceso de descontaminación se lleva a cabo en cabinas de
seguridad.

2.3.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

• Toma de Muestras: esputo, LCR, broncoaspirado, etc.

• Tinciones: principalmente Ziehl-Nielsen y Auramina-Rodamina.
• Medios de Cultivo: Lowenstein-Jensen que contiene huevo y
verde malaquita y antibióticos, como penicilina, para inhibir el
crecimiento de otros microorganismos.
Miedlebrook
Hoy se utilizan medios de cultivo radiométricos siendo el más
utilizado Bactec-TB. Este sistema contiene un medio liquido de
soporte de crecimiento de micobacterias suplementado con Ab
y que contiene un sustrato marcado con C14. Las micobacterias
al crecer metabolizan el sustrato y liberan CO2 marcado
radiactivamente que puede ser detectado. La principal ventaja
de este método es el acortamiento del tiempo de crecimiento
de micobacterias.
Cuando se emplean medios de cultivo convencionales deben
cultivarse a 35ºC en oscuridad y en atmósfera húmeda con 5-
10% de CO2 durante 1 semana, y después se pone a atmósfera
normal.
• Pruebas bioquímicas: Test de la niacina, reducción de nitratos,
catalasa, hidrólisis de Tween 80, test de la arilsulfatasa,
reducción de telurito e inhibición del crecimiento por la
hidracida del ácido tiofeno2-carboxílico. Hoy en día se han
desarrollado nuevas técnicas que permiten la determinación de
especies en pocas horas. Las más empleadas son: técnicas de
sondas genéticas de ADN y análisis cromatográfico de lípidos de
la pared celular.

131
 Microbiología

• Pruebas serológicas: principalmente precipitación, aglutinación,

fijación de complemento.

2.4.- REALIZACIÓN DE BACILOSCOPIAS

Una vez recogida la muestra debe hacerse un proceso de

concentración-descontaminación y una tinción BAAR.
El hallazgo de BAAR en un frotis no es diagnóstico definitivo de
infección bacteriana pero permite:
a) Un diagnóstico de presunción de tuberculosis.
b) Seguimiento del paciente que está siendo tratado con
antituberculosos, pudiéndose saber cuando la baciloscopia de
vuelve negativa.
Para la realización de la extensión se recoge una mínima parte de
esputo y cubrirá las 2/3 partes de la superficie, no deben ser gruesas
pues dificultarían la visión.
Cuando se observa una tinción de Ziehl-Nielsen se recomienda hacer
una valoración cuantitativa de los bacilos presentes en la muestra. El
objetivo se debe colocar en un extremo de la preparación y se recorre
toda una línea. Si se observan aproximadamente 100 campos se
cuentan los BAAR encontrados. Si se han visto 50 BAAR no es
necesario continuar y se informa como 50/1L (50 bacilos en una línea
del porta). Si el número está entre 10 y 50 se informa con X/1L,
siendo X el número de bacilos contados. Si el número de bacilos es
menor de 10, habrá que observar 2 líneas más, un total de 300
campos, expresándose el número de BAAR como X/3L. Otra de
comunicar la información es por semicuantificación (sistema de
cruces).
El examen microscópico es subjetivo y el microscopista que
carece de experiencia puede cometer errores, por lo que es necesario
conocer las causas más frecuentes de los falsos positivos y negativos:
 Falsos positivos:
- Restos de comida en esputo
- Fibras de algodón
- Ralladura del porta
- Precipitados de colorante
 Falsos negativos:
- Mala realización del frotis ( grueso, no haber cogido la
zona más purulenta, mala fijación, mala decoloración)
- Fallo del microscopista

2.5.- PATOGENICIDAD

Los bacilos tuberculosos virulentos contienen una serie de

componentes celulares que dañan los tejidos del huésped. Son ceras,
fosfolípidos, proteínas, polisacáridos y ácidos glucólicos.
También producen factores tóxicos como cera-D y factor cord
(denominado factor cuerda o cuerda serpentina, ya que al

132
 Microbiología

microscopio tiene disposición de largas cuerdas) cuya presencia está

relacionado con la virulencia.

3.- MICOBACTERIUM TUBERCULOSIS

3.1.- PATOLOGÍA

Es un bacilo denominado Bacilo de Koch. Es capaz de crecer en

el interior de las células retículo-endoteliales sin ser destruidas.
Llega al organismo por inhalación aunque excepcionalmente por
ingestión de alimentos contaminados o heridas en la piel. Tras una
única exposición es menor el riesgo de desarrollar la infección (3-5%),
siendo necesarias exposiciones repetidas para que aumente esta
probabilidad junto con una inmunidad deteriorada por parte del
huésped.
Cuando el M.tuberculosis llega al huésped por inhalación produce una
infección primaria o primoinfección tuberculosa que actúa sobre el
pulmón y más concretamente a nivel de los alvéolos provocando una
intensa reacción inflamatoria que produce exudación. Estos bacilos
pueden llegar a los vasos linfáticos, ganglios y retornar a la
circulación venosa originando focos metatásicos en distintos órganos.
Si no hay tratamiento a tiempo el tubérculo que se origina en el
pulmón se va desarrollando evolucionando a necrosis caseosa (masa
amorfa y homogénea generalmente debida a proteínas coaguladas
formada por estructura de tejidos en descomposición; es similar a un
queso en su aspecto). El tubérculo que se forma está constituido en
su parte central por células gigantes en cuyo interior se encuentran
los bacilos, una parte intermedia de carácter epitelial y con apenas
bacilos y una parte periférica que contiene abundantes linfocitos,
monocitos y bacilos tuberculosos. Esto va acompañado de fiebre,
sudoración nocturna, adelgazamiento, tos con esputos purulentos y
en fases avanzadas hemoptisis (expulsión de sangre por la boca
procedente de las vías respiratorias bajas).
Además de la lesión primaria también podemos hablar de
tuberculosis post-primaria o reacción secundaria que ocurre tras una
reactivación de la lesión primaria.
Histológicamente hablamos de que micobacterium puede producir
dos tipos de lesiones:
♦ Exudativas: son propias de la etapa inicial apareciendo lesión
inflamatoria aguda con edema y acumulación de
polimorfonucleares alrededor del bacilo tuberculoso. El cuadro
se asemeja a la neumonía. Puede curar espontáneamente,
producir necrosis tisular p evolucionar hacia una lesión
productiva.

133
 Microbiología

♦ Lesión productiva granulomatosa: consiste en un granuloma

crónico formado en la zona central por células gigantes y
bacilos, una zona intermedia de carácter epitelial y zona
periférica con linfocitos y macrófagos.

3.2.- EPIDEMIOLOGÍA

Se difunde por las gotículas y esputos de individuos y animales,

también por contaminación de alimentos (tuberculosis intestinal) y
por heridas.
Los bacilos pueden sobrevivir hasta 6 semanas en esputos y se
destruyen a la luz solar en poco tiempo.
Su mayor incidencia está en grupos sociales de bajo nivel,
malnutridos y sin condiciones higiénicas.
La tuberculosis es una enfermedad importante a nivel en países
subdesarrollados y en grupos marginados de países industrializados.
El M.tuberculosis produce cada año de 5-8 millones de nuevos casos,
siendo el responsable de 2-3 millones de muertes en el mundo.
En el M.tuberculosis la fuente de infección es el hombre a nivel del
tracto respiratorio; en el caso de M. Bovis la vía de entrada es
respiratoria por la tos de la vaca o por ingestión de la leche no
pasteurizada o de la carne procedente de una vaca tuberculosa.
La tuberculosis afecta principalmente a las personas
inmunideprimidas: alcoholicos, ancianos, drogadictos, pacientes con
SIDA.

3.3.- PRUEBA DE LA TUBERCULINA

Permite diferenciar entre individuos infectados y no infectados.

 Prueba positiva: indica que el individuo ha estado en contacto
con M.tuberculosis y es portador de micobacterium en los
tejidos. No implica que exista infección activa en ese momento
pero existe el riesgo de adquirir la enfermedad por reactivación
de dicho foco primario.
 Prueba negativa: no se corre el riesgo de reactividad.
A la prueba de la tuberculina también se le llama prueba de
Mantoux, que consiste en una inyección intradérmica de DPP
(derivado proteico purificado); a las 48-72 horas se mide el grado de
induración de la zona. Tradicionalmente se consideraba positivo
cuando el diámetro es mayor o igual a 10 mm. Actualmente se siguen
las siguientes pautas para considerara positivo el test:

 Diámetro ≥ 10 mm en pacientes menores de 35 años.

 Diámetro ≥ 15 mm en pacientes de 35 años o más.
 Diámetro ≥ 5 mm en individuos en contacto con pacientes
tuberculosos e infectados con VIH.

134
 Microbiología

3.4.- TRATAMIENTO

Los fármacos antituberculosos que se usan normalmente son

isoniazida, etanbutol, rifampicina y estreptomicina. Para evitar
la aparición de resistencia se lleva a cabo la politerapia.
Los tratamientos son largos, de 6-12 meses, ya que las bacterias son
muy resistentes a agentes terapéuticos; no se debe olvidar que son
microorganismos intracelulares y que el acceso del antibiótico se
dificulta la propia composición caseosa de las lesiones tuberculosas.
Las micobacterias que producen lesiones cutáneas se tratan con
cirugía. Las infecciones por otras micobacterias distintas de
tuberculosis se denominan micobacteriosis.

4.- MICOBACTERIUM LEPRAE

4.1.- PATOLOGÍA

Agente etiológico de la lepra. Se trata de una especie que no se

puede cultivar en el laboratorio por lo que se conoce muy poco sus
características microbiológicas. Se ha observado que el único
reservorio es el hombre con auténtica predilección por las
terminaciones nerviosas.
Son BAR aislados en parejas o masas, se pueden inocular en animales
siendo el armadillo la especie más receptora. Sí existen pruebas
serológicas para la lepra.
Es un bacilo inmóvil, rectilíneo, que se encuentra en la mucosa nasal,
dermis y biopsias de lesiones de individuos con lepra.
Son bacilos no esporulados, no flagelados ni capsulados. En el
hombre da lugar a la lepra que es una enfermedad caracterizada por
lesiones granulomatosas crónicas. Es de lenta evolución que ocasiona
lesiones desfigurantes y mutilantes en las zonas más frías del cuerpo
ya que el bacilo posee gran afinidad por el tejido cutáneo y nervioso.
Aparecen maculas pálidas y nódulos grandes llamados lepromas
acompañados de anestesia local. La afección de la cara da lugar a la
caída de la cola de la ceja y a la destrucción del tabique nasal, es lo
que se denomina “facies leonina” o “cara de león”. La lepra se puede
manifestar de dos formas:

 Lepra tuberuloide: de evolución benigna y con tendencia a

quedar latente con maculas cutáneas, grave afectación
nerviosa y prueba de la lepromina positiva.
 Lepra lepromatosa: de curso maligno con aparición de nódulos
cutáneos, amputación y prueba de la lepromina negativa.

4.2.- EPIDEMIOLOGÍA

135
 Microbiología

Generalmente se necesitan más de un contacto con enfermos

de lepra activa. El material mas infeccioso son las secreciones nasales
y el periodo de incubación es de 2-6 años. Es una enfermedad
difícilmente de determinar por su elevado periodo de incubación. Su
periodo de invasión es poco específico y con síntomas raros no
asociables a la lepra. A veces se presenta picor, hormigueo, perdida
de la sensibilidad en manos y pies y a partir de aquí de forma lenta y
progresiva lesiones cutáneas. Suele durar toda la vida y su evolución
más o menos grave dependerá del grado de inmunidad del huésped.

4.3.- PRUEBA DE LA LEPROMINA O MITSUDA

Existe una prueba que indica el estado inmune del individuo

frente a la enfermedad que se denomina Mitsuda. Se toma un
extracto de la lesión leprosa y se pasa por el autoclave,
posteriormente se inyecta en el antebrazo. Puede ocurrir después de
25 días:
♦ Aparece una induración de más de 25 mm de diámetro : Esto
indica que estamos frente a un organismo inmunizado frente a
micobacterium.
♦ Induración de menos de 3 mm: individuos sensibles por no
haber tenido contacto o por tener una lepra lepromatosa.
♦ Induración entre 3-5 mm: son de resultado dudoso (nos
fijaremos en la sintomatología).

4.4.- TOMA DE MUESTRA

Se realiza un raspado de la mucosa del tabique nasal o se hace

una biopsia de un leproma en la oreja, ganglio nervioso o trozo de
nervio afectado.

4.5.- TRATAMIENTO

Se utilizan sulfanos y rifampicinas.

5.- ACTINOMICETOS

5.1.- INTRODUCCIÓN

Son bacilos gram positivos aunque se tiñen con dificultad

siendo mas característico porque algunas especies son baar positivo
debido a la composición de la pared celular (ácidos micólicos y
componentes céreos), dan positiva la prueba de la catalasa y el
microorganismo se ve de forma variable dependiendo de los géneros,
pudiendo ser: cocobacilos, filamentosos…

136
 Microbiología

La morfología filamentosa se asemeja a la de los hongos, de ahí

el nombre de actinomiceto. Estos microorganismos se encuentran en
el suelo, plantas y vegetales generalmente, aunque también pueden
aislarse en piel, orofaringe y tracto gastrointestinal del hombre y
animales.
El hombre puede infectarse por inhalación o contacto de una
herida, son inmóviles no esporulados y no capsulados.

5.2.- ESPECIES MÁS IMPORTANTES

(ver fotocopias tabla 11.2)

5.3.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

• Toma de muestras: esputo, secreciones virulentas, LCR, liquido

pleural.
• Tinciones: gram positivas (se ven con dificultad) principalmente
BAAR, Niehl- Ziensen y Rodamina-Auramina positivas.
• Medios de cultivo: agar infusión cerebro corazón, Mueller Milton
y medio de Lovestein – Jensein. La Tª de cultivo 20-27 º que
impide que se desarrollen otras bacterias.
• Pruebas bioquímicas: (tabla 11.2)
• Pruebas serologicas: fijación del complemento, Elisa,
aglutinación, precipitación.

5.4.- PATOLOGÍA

Cualquier infección pulmonar causada por estos

microorganismos se considera nocardiosis. Gran parte de los estudios
de nocardiosis parecen apuntar a infecciones de carácter
oportunistas, es decir que se requiere de una enfermedad subyacente
previa o que el paciente esté inmunológicamente debilitado.
El género Nocardia no producen toxinas pero tiene en su pared
bacteriana una alta proporción de lípidos muy relacionados con su
virulencia ya que le van a conferir a las bacterias alta resistencia
frente a los sistemas de defensa del huésped. Tiene la capacidad de
crecer y multiplicarse en el interior de los tejidos y macrófagos de
aquí que se hayan considerado parásitos intracelulares.
Las manifestaciones clínicas mas frecuentes son:
o Nocardiosis pulmonar: causada por Nocardia, asteroides que
producen lesiones pulmonares con abscesos, inflamación
diseminada semejante a la tuberculosis, pudiendo dar áreas de
necrosis y a partir de aquí la diseminación general por sangre a
otros órganos. También pueden diseminarse por el sistema
linfático, rara vez puede afectar al hígado, bazo y miocardio,
pero cuando afecta puede ser grave o mortal, se le denomina

137
 Microbiología

pulmón del granjero como consecuencia de hipersensibilidad a

Ag de los actinomicetos.
o Nocardiosis cutáneo: generalmente se debe a la manipulación
de tierra y plantas contaminadas con actinomicetos
apareciendo celulitis pustular.
o Micetomas: infección crónica supurativa cutánea y subcutánea
que afecta a tendones, huesos y músculos. La localización más
frecuente son las extremidades. El origen puede ser la
inoculación de las bacterias procedentes del suelo o vegetación.
Es una enfermedad típica en climas tropicales principalmente la
especie Brasiliensis.
5.5.- TRATAMIENTO

Trimetropin- Sulfametosazol combinado con Rifampicina y

aminoglucosidos.
En el caso de micetoma y otras formas graves de Nocardiosis cutánea
es necesario recurrir a la intervención quirúrgica además de la
administración de antígenos.

138
 Microbiología

TEMA 18.- MICROORGANISMOS ANAEROBIOS

1.- INTRODUCCIÓN

2.- SIGNOS CLÍNICOS DE INFECCIÓN POR ANAEROBIOS

3.- CLASIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS ANAEROBIAS

4.- BACTERIAS ANAEROBIAS ESPORULADAS. GÉNERO

CLOSTRIDIUM

4.1.-Introducción
4.2.-Clasificación
 Acción neurotoxica.
 Acción histológica.
 Acción sobre el aparato digestivo.
 Responsables de cuadros purulentos.

5.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

6.- TOMA DE MUESTRAS, TRANSPORTE, ETC.

139
 Microbiología

1.- INTRODUCCIÓN.

Todas aquellas bacterias incapaces de crecer y/o mantenerse en

contacto con el oxigeno a la presión atmosférica se consideran
anaerobias o anaerobias estrictas.
A estos microorganismos se les considera que tienen un metabolismo
anoxibiotico, es decir incapaz de utilizar el oxigeno como aceptor final
de electrones, utilizando como aceptor sustratos orgánicos.
Se sabe que estas bacterias no tienen cierto enzimas llamados
metaloporfirinicos que en los mecanismos aerobios transportan
oxigeno.
Nos encontramos bacterias anaerobias para los que la presencia de
oxigeno es altamente toxica o bactericida, mientras que para otras
bacterias es bacteriostático de tal forma que cuando se establezcan
de nuevo las condiciones de anaerobiosis las bacterias crecen.
Las bacterias anaerobias forman parte de la flora normal (tabla 16.1)
y dan lugar a patologías.

2.- SIGNOS CLÍNICOS DE INFECCIÓN POR ANAEROBIOSIS

(Ver tabla 16.2)

3.- CLASIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS ANAEROBIAS

(Ver tabla 16.1)

4.- BACTERIAS ANAEROBIAS ESPORULADAS. GÉNERO

CLOSTRIDIUM

4.1.- INTRODUCCIÓN

Dicho género tiene más de 30 especies y muchas son peligrosas

para el ser humano. Este género se caracteriza por la formación de
toxinas que responden a sustancias proteicas solubles.

140
 Microbiología

4.2.- CLASIFICACIÓN

Se clasifican en los siguientes grupos:

 De acción neurotoxica, en este grupo se encuentra Clostridium

tetanis (produce tétanos) y Clostridium botulium (produce
botulismo).

 De acción histotóxica, en este grupo se encuentra Clostridium

perfringes (produce gangrena gaseosa) y otros Clostridium.

 De acción sobre el aparato digestivo, destacaremos el

Clostridium perfringes, Clostridium dificille y Aclostridium.

 Responsables de cuadros purulentos, destacaremos a

Clostridium pyogenes, Aclostridium, Clostridium perfinges y
Clostridium ramosum.

CLOSTRIDIUM TETANIS

Es un bacilo gram +, pequeño, con capacidad de formar

esporas terminales dando a las bacterias un aspecto de cerillas o
palillo de tambor. Su hábitat se encuentra fundamentalmente en la
tierra y en intestinos de hombres y animales.
Posee 3 toxinas de acción neurotoxica y son transportados por
vía sanguínea hasta el SNC bloqueando la liberación de
neurotransmisores, esto origina convulsiones y parálisis apareciendo
a nivel periférico en exceso de liberación de acetilcolina en el
músculo esquelético que constituye el cuadro clínico característico de
parálisis, así mismo se ve alterado el sistema contracción relajación
muscular, de forma que este entra en una fase de contracción y no se
recupera (rigidez tetánica).
Para que se produzca el tétano es necesario que el
microorganismo se encuentre en condiciones de anaerobiosis. Tras
una herida mas o menos profunda ya sea cortante, punzante,
mordedura, arañazo, quemaduras, úlceras por decúbito e incluso
heridas superficiales como rozaduras que se pudieran infectar y
formar costra facilitan la infección anaerobia.
Si las condiciones son favorables el periodo de incubación es de
5 – 7 días y se origina la reacción patógena. Podemos hablar de 2
formas clínicas:
• Local
• Tetánica, que es la más grave.

141
 Microbiología

El tétanos afecta principalmente a países subdesarrollados, es

importante el diagnostico precoz y las medidas profiláctica (vacunas
DTT). De no ser así el índice de mortalidad es muy elevado.

CLOSTRIDIUM BOTULIUM

Son bacilos gram +, anaerobios estrictos, grandes, no

capsulados, móviles, debido a su flagelación peritrica. Presentan
esporas de carácter subterminal y en general es capaz de formar
toxinas, las toxinas que se denominan con letras (A → G). Las más
peligrosas y potentes para el hombre son las neurotoxinas A, B. y E.
Clostridium Botulium presenta una estructura antigénica típica
debida a los Ag flagelares y a los Ag de esporas.
Se encuentra ampliamente distribuido en muchos ambientes
como aire, suelo, alimentos. Si las condiciones son las adecuadas las
esporas germinan facilitando la proliferación de Clostridium Botulium.
Es importante destacar su presencia en las conservas y pescados.
El efecto patógeno es debido a dichas neurotoxinas y son
venenos biológicos que se conocen muy bien, una pequeña
cantidad del microorganismo es suficiente para causar la
muerte. Las condiciones para que germine la espora será de
anaerobiosis, Tª aproximada 30º C y un pH neutro o
ligeramente ácido.
Estas toxinas son de carácter proteico y termolabiles, de tal forma
que se destruyen con facilidad a Tª altas (100ºC 15 min., 70º C 30 –
60 min.)
La toxina puede llegar al hombre a través de alimentos
contaminantes, en el tubo digestivo producirá in situ una toxiinfección
alimentaria.
A partir de aquí a través de vía sanguínea y linfática llega al
sistema nervioso periférico donde actúa sobre terminaciones
nerviosas bloqueando la liberación de acetilcolina y originando como
consecuencia parálisis del músculo esquelético, así como otras
manifestaciones neurológicas como: visión borrosa, fotofobia,
disfagia, sequedad en boca y faringe y debilidad en los músculos
incluyendo los respiratorios que pueden llegar a paralizarse y en
muchas ocasiones es frecuente la muerte por fallos respiratorios y
arritmias cardiacas.
Su periodo de incubación está en torno a las 16-36 horas después de
la ingestión de alimentos contaminados. Los cuadros más graves se
originan a las 24-48 horas.
Algunos autores hablan del Botulismo del lactante que se
produce por la elaboración de toxinas en el colon tras la ingestión de
esporas. El cuadro clínico puede ser desde leve a grave y se
manifiesta por dificultad muscular, en la alimentación, estreñimiento,
disminución del reflejo de succión e insuficiencia respiratoria.

142
 Microbiología

El diagnóstico del botulismo es fundamentalmente clínico ya

que el microbiológico puede retrasarse. Se puede mostrar presencia
de toxinas en sangre por pruebas serológicas.
El tratamiento consiste en combatir los síntomas, limpieza a
fondo de heridas, administración de antitoxina botulínica y Ab.
También fármacos relacionados con el funcionamiento de al
acetilcolina.

CLOSTRIDIUM QUE AFECTA A LOS TEJIDOS. CLOSTRIDIUM

PERFRINGES

Es un bacilo gram positivo y anaerobio estricto. Se caracteriza

porque está ampliamente distribuido por la naturaleza, especialmente
en el suelo cuya concentración habitualmente sobrepasa las 50 mil
bacterias /gramos de tierra, especialmente en tierras húmedas y
abonadas con estiércol.De aquí a través de heridas puede pasar al
hombre produciendo gangrena gaseosa. Es poco frecuente pero muy
grave.
La gangrena gaseosa consiste en necrosis tisular (muscular)y
signos de toxicidad sistémica debido a la producción de toxinas
histológicas. Se caracteriza por un intenso dolor en la herida seguido
de aparición de lesiones cutáneas como edemas, ampollas, etc, que
se extienden rápidamente y evolucionan a necrosis y destrucción
celular.
El diagnóstico se realiza por cuadro clínico y presencia en
tinción de gram realizada principalmente en pus o tejidos afectados.
El tratamiento es quirúrgico y altas dosis de penicilina.
Existe una toxina α , que es la principal responsable de este
daño, y otras toxinas β y H que son responsables pero en menor
medida.

CLOSTRIDIUM QUE AFECTA A TRACTO DIGESTIVO.

CLOSTRIDIUM PERFRINGES

Además de provocar gangrena gaseosa puede dar lugar a

infección toxialimentaria producida por ingestión de carne
contaminada. En el intestino delgado germinan las esporas dando un
cuadro característico con diarreas, vómitos, dolor abdominal, etc,
pudiendo llegar a estados de shock.
El cuadro es generalmente benigno y el diagnóstico se realiza
mediante detección del microorganismo en el alimento o heces del
paciente.

CLOSTRIDIUM RESPONSABLE DE CUADROS PURULENTOS.

CLOSTRIDIUM PYOGENES

Suele ir acompañado de otras bacterias anaerobias. Las toxinas

no actúan ejerciendo efectos patógenos salvo cuando hay
complicaciones.

143
 Microbiología

5.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

 Toma de muestras: Se ha de realizar en condiciones de asepsia.

 Tinciones: Tinción gram y de esporas (Clostridium tetani)
 Medios de cultivo: Medios específicos como agar TSM a base de
carne, sangre, huevos, tripticasa trisulfato y neomicina.
 Pruebas bioquímicas: Se utilizan muchas siendo las más
importantes: hidrólisis de gelatina, producción de indol y
pruebas de fermientación de HC.
 Otras pruebas de identificación:
a) Para Clostridium tetani: pruebas de inoculación en
animales, cromatografía de gases, HPLC, etc.
b) Para Clostridium perfringes y Clostridium botulium: las
mismas que para Clostridium tetani además de RIA e
inmunofluorescencia.

6.- TOMA DE MUESTRAS, TRANSPORTE, ETC.

La incubación se lleva a cabo con un sistema de campana, la

atmosfera anaerobia se consigue mediante la introducción en la
misma de un sobre generador de gas (CO2) y un catalizador.
Se incluirá siempre un medidor de anaerobiosis, que cambia de color
en ausencia de aire, para comprobar que el sistema ha funcionado.
El sobre generador de gas se activa introduciendo en él 10 ml de
agua del grifo, lo que da lugar a la liberación de H2 y CO2. El oxígeno
del interior de la campana se une al hidrogeno y forma agua que se
deposita en forma de gotas en las paredes del recipiente. El CO 2
generado procuce el crecimiento de algunos anaerobios.
Los sobres e indicadores de anaerobiosis son de un solo uso.
(Ir a la pregunta 6 de las fotocopias)

144
 Microbiología

TEMA 19.- RICKETTSIA, CLAMIDIAS Y MICOPLASMA.

1.- FAMILIA RICKETTSIACEAE

1.1 Introducción.
1.2 Géneros y especies más importantes:
• Rickettsias: R. Prowazekii, R. conorii y R. rickettsi.
• Coxiella burnetii.
• Ehrlichia.
1.3 Aislamiento y características bioquímicas

2.- CLAMYDIAS

2.1 Introducción.
2.2 Especies más importantes: C. tracomatis, C. psitacci y C.
pneumoniae.
2.3 Tratamiento.
2.4 Aislamiento y características bioquímicas.

3.- MICOPLASMA.

3.1 Introducción.
3.2 Micoplasma neumoniae.
3.3 Micoplasma genitalis: Ureaplasma urealiticum y M. Hominis.
3.4 Acholeplasma.
3.5 Aislamiento y características bioquímicas.

4.- FORMAS L

145
 Microbiología

1.- FAMILIA RICKETTSIACEAE

1.1.- INTRODUCCIÓN.

Son microorganismos procariotas que precisan de células vivas

para poder desarrollarse, es decir son microorganismos intracelulares
que se encuentran adaptados a un parasitismo celular.
Morfológicamente son cocos o cocobacilos gram – que presentan una
dotación enzimática muy escasa de ahí que necesiten
microorganismos o células a las que parasitar.
Producen en el hombre enfermedades epidémicas o endémicas
transmitidas por vectores (piojos, pulgas, ácaros, etc.).
Esta familia comprende 4 géneros importantes:
• Rickettsias.
• Coxiella
• Ehrlichia.
• Rochalimaea.

1.2.- GÉNEROS Y ESPECIES MÁS IMPORTANTES

RICKETTSIAS.

Son cocobacilos gram – y cuyo diámetro es igual a 0,3-0,5µ m y

0,8-2µ m de longitud. Dentro de estas tenemos:
 Rickettsias prowazekii: produce el tifus epidémico, lo
transmite el piojo, la vía de entrada en el hombre a través de la
picadura que tras el rascado produce la penetración. El periodo
de incubación es de 1-3 semanas, los síntomas que produce
son: escalofríos, fiebres muy altas, dolores generalizados e
inflamaciones que afectan sobretodo a capilares, arteriolas y
vénulas, así como a piel y músculo. Pueden crear estados
obstructivos que dificulten la corriente sanguínea debido a la
formación de nódulos y en casos graves pueden provocar
gangrena en extremidades. Lo más probable es que en la piel
aparezcan manchas rosadas que luego se vuelven papulosas y

146
 Microbiología

petequiales. Esta enfermedad es transmitida de persona a

persona produciendo gran epidemias en guerras. Puede ser
grave (incluso muerte) en condiciones adversas.
Tratamiento: tetraciclinas y cloranfenicol, siendo muy
importante y decisivo la lucha contra el piojo (vector) con
insecticidas.
Puede presentarse recaídas al cabo de muchos años
llamándose entonces enfermedad de Brill-Zinsser.
 Rickettsias conorii: produce la fiebre botonosa, se transmite a
través de la garrapata. Es una enfermedad endémica en la
cuenca mediterránea, en general es de curso benigno y da
lugar a manchas negras en el lugar donde muerde la garrapata.
Sus síntomas en primer lugar es macular y posteriormente
papular y botonosa. La enfermedad se mantiene durante 8-20
días.
Tratamiento: tetraciclinas.
 Rickettsia Rickettsi: Produce la llamada fiebre de las
montañas rocosas, transmitida por garrapatas, periodo de
incubación 3- 6 días aparecen fiebres muy altas que presentan
mialgias y manchas negras en la zona de picadura.

COXIELLA BURNETTI

Produce la llamada enfermedad de la fiebre Q. La vía de

entrada principalmente por inhalación aunque puede haber otros.
Es un microorganismo bacilar de pequeño tamaño de 0,3
micrómetros de diámetro y o, 4-1 micrómetros de longitud. Afecta al
ganado, presentando un tropismo especial por las placentas siendo
excretado en el parto.
Las manifestaciones clínicas son síntomas generales del estado
febril, mialgias y afectación pulmonar en la mitad de los casos, por lo
que se considera agente de neumonía atípica, puede dar también
afectación hepática.
El tratamiento es cloranfenicol y tetraciclinas.

1.3.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

En estados de fiebre las Rickettsias se mantienen abundantemente

en sangre, así pues será la muestra de elección.
A partir de sangre heparinizada y centrifugada se usará el sedimento
para obtener una muestra mas concentrada. Posteriormente
realizaremos:
- Tincion directa: Ej.; Giemsa, apareciendo la Rickettsias de
color púrpura. Tincion de Jiménez: que se ven de color rojo
sobre fondo verde. Si hacemos un gram se verán negativo.
También podemos realizar técnicas de inmunofluorescencia.

147
 Microbiología

- Medio de Cultivo: se pueden inocular en cultivos celulares o

embriones de pollo.
- Pruebas serológicas: principalmente reacciones Ag – Ac, las
pruebas mas usadas son las seroaglutinación,
inmunofluorescencia indirecta y la técnica de Weil – Félix que
consiste en que a partir de diluciones de suero problema con
esta bacteria ponerlas en contacto con una cantidad fija de
Ag de Rickettsia.

2.- CLAMYDIAS

2.1.- INTRODUCCIÓN

Son microorganismos procariotas que hasta hace poco se

consideraban más bien virus que bacterias. Son procariotas
intracelulares estrictos ya que no pueden sintetizar ATP.
Morfológicamente son cocos gram -, inmóviles y tienen 2 tipos de
ácidos nucleicos: ADN y ARN, se multiplican por división binaria, dato
que aleja a las Clamydias de los virus.

2.2.- ESPECIES MÁS IMPORTANTES

(ver tabla 12.2)

Clamydia Tracomatis

Puede producir distintas enfermedades:

- Tracoma: que es una queratoconjuntivitis, causa más
importante de ceguera en el mundo, principalmente en
países subdesarrollados.
- Linfogranuloma venéreo: que es una E.T.S. para su detección
se realiza inmunofluorescencia.

Clamydia Psitacci

Puede producir neumonía atípica, la transmisión suele esta mediada

por contacto con aves, el diagnostico principalmente es por fijación
del complemento.

Clamydia Pneumoniae

Es un patógeno de reciente descubrimiento que produce neumonía.

2.3.- TRATAMIENTO

Sulfamidas.

2.4.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

148
 Microbiología

 Toma de muestra: secreciones oculares o genitales según el

caso.
 Tinciones: Giensa, Jiménez, Gram.
 Técnicas citológicas: para observar células del epitelio
conjuntivas y genital con el fin de verificar los gránulos ricos en
glucogeno.
 Cultivos: embriones de pollo aunque ésta técnica no es muy
frecuente por el riesgo de infección en el laboratorio.
 Pruebas serológicas: principalmente radioinmunoensayos y
fijación del C´.

3.- MICOPLASMA

3.1.- INTRODUCCIÓN

Da los microorganismos más pequeños y se caracteriza porque

carece de pared celular. Presenta división binaria.
El carecer de pared celular le confiere una serie de propiedades tales
como:
- sensibilidad a la presión osmótica del medio en que se
encuentra que puede facilitar su lisis
- pleomorfismo
- resistencia a antibióticos como cefalosporinas y penicilina
- no se tiñen con gram
Están ampliamente distribuidos en la naturaleza y pueden afectar al
hombre, principalmente Micoplasma neumoniae.
Requiere medios enriquecidos y apartir de medios líquidos
pueden visualizarse en microscopio óptico de campo oscuro o
contraste de fase.
Las colonias son típicas por su forma de huevo frito.
Los principales géneros son:
- Micoplasma
- Ureplasma
- Acholeplasma

3.2.- MICOPLASMA NEUMONIAE

Principal agente causal de neumonías atípicas, con un periodo

de incubación de aproximadamente 3 semana considerando que es
un microorganismo de lento crecimiento.
Los síntomas son fiebres, mialgias, cefaleas y tos no productiva
afectando principalmente a los escolares. En muchas ocasiones la
infección es subclínica (no tiene síntomas claros) o de neumonía

149
 Microbiología

suave, pero este micoplasma puede permanecer varios meses en el

tracto respiratorio tras la infección.
Existen otros micoplasmas que son flora normal como
Micoplasma salivarium, Micoplasma orale y Micoplasma buccale.
La infección por Micoplasma neumoniae no presenta
distribución estacionaria (no depende de las estaciones del año). La
enfermedad requiere un contacto estrecho. Puede tener pronóstico
benigno y aparecer manifestaciones extrapulmonares como por
ejemplo erupciones cutáneas.

3.3.- MICOPLASMA GENITAL

Comprenden este grupo Ureplasma urealyticum y Micoplasma

hominis. Forman parte de la flora normal de las mujeres el 60% de
Ureaplasma y el 20% de Micoplasma hominis. Se consideran
patógenos oportunistas produciendo enfermedades uretrales y
vaginales como vaginitis, prostatitis, etc. Pueden producir fiebre en el
postparto.

3.4.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

 Toma de muestras: mucosa faringea, secreción uretral,

exudados, esputo, sangre, etc, según la patología.
 Tinción: de Giemsa principalmente, también tinción en campo
oscuro con nigrosina. No se hace gram porque carece de pared
celular.
 Medio de cultivo: medios específicos a 37ºC y ambientes
aerobios.
 Pruebas serológicas: inmunofluorescencia, RIA, fijación de
complemento.

4.- FORMAS L

No hay que confundirlas con micoplasma aunque tienen en

común carecer de pared celular. Son variantes de bacterias en los
que ha ocurrido pérdida de pared celular, que se puede inducir
mediante sustancias que inhiben la síntesis de la pared.

150
 Microbiología

TEMA 20.- VIBRIOS, CAMPYLOBACTER Y GÉNEROS

RELACIONADOS

1.- VIBRIOS

1.1.- Introducción
1.2.- Especies más importantes
1.3.- Poder patógeno
1.4.- Patología
1.5.- Tratamiento
1.6.- Aislamiento y características bioquímicas

2.- CAMPYLOBACTER

2.1- Introducción
2.2- Especies más importantes
2.3.- Aislamiento y características bioquímicas
2.4.- Patología
2.5.- Tratamiento

3.- HELICOBACTER PILORI

3.1.- Introducción
3.2.- Métodos de detección
• Directos
• Indirectos
- Prueba de la urea rápida
- Prueba de la urea respiratoria
- Pruebas serológicas
3.3.- Poder patógeno
3.4.- Patología y Tratamiento

4.- AEROMONAS

4.1.- Introducción
4.2.- Patología
4.3.- Tratamiento
4.4.- Aislamiento y características bioquímicas

5.- PLESIOMONAS

151
 Microbiología

1.- VIBRIOS

1.1.- INTRODUCCIÓN

Son bacilos gram negativos, anaerobios facultativos, de

morfología curva, no esporulados y móviles gracias a su flagelación
lofótrica.
Crece bien en medios generales y son oxidasa positivo, prueba que
nos va a permitir diferenciarlos de las Enterobacterias.
Aguantan bien elevadas concentraciones de NaCl, por lo que se le
denominan bacterias halofíticas y su crecimiento se facilita en medio
alcalino.
Reducen nitratos a nitiritos.
Se hallan muy distribuidos en la naturaleza. Son bacterias acuáticas
que habitan en ríos, lagos, etc.
De las 34 especies conocidas sólo 11 se han aislado en el hombre.

1.2.- ESPECIES MÁS IMPORTANTES (ver tabla 14.2)

 Vibrio parahaemolyticus: Vive en ambientes marinos y se

transmite al hombre a través de alimentos como el pescado y el
marisco. En el hombre produce cuadros gastrointestinales
graves.
 Vibrio fluvialis: Produce cuadros gastrointestinales a través de
alimentos como el pescado y el marisco.
 Vibrio alginolyticus: Se asocia a conjuntivitis y otitis.
 Vibrio vulnificus: Agente causal de infección de heridas
traumáticas causadas en ambientes marinos.
 Vibrio cholerae: Es el más patógeno para el hombre. Es el
agente etiológico del cólera. Provoca diarreas graves hasta
llegar a la deshidratación, shock hipovolémico y si no hay
tratamiento la muerte.

1.3.- PODER PATÓGENO (Vibrio cholerae)

Presenta 3 componentes antigénicos responsables de su

virulencia:
♦ Ag somático O: Termoestable y de naturaleza polisacárida.
♦ Ag flagelar H: Termolábil.
♦ Exotoxinas: Son enterotoxinas de naturaleza proteica y sobre la
que se desencadena el principal efecto patógeno del cólera.
Las cepas epidémicas de Vibrio cholerae, de las que existen más de
100, se pueden separar en función de sus serotipos siendo los más
importantes el 01.

1.4.- PATOLOGÍA (Vibrio cholerae)

152
 Microbiología

El Vibrio cholerae penetra en el organismo por vía oral a tavés

de agua y alimentos contaminados, principalmente productos
marinos crudos.
Debe se capaz de eludir el medio ácido del estómago, hecho que
sucede cuando se ingiere más de 100 millones de gérmenes,
circunstancia que se facilita en epidemias sobre todo si se tiene en
cuenta que pueden encontrarse 106 gérmenes/ml de agua
contaminada.
Además de estas condiciones, Vibrio cholerae deberá traspasar la
barrera del estómago para producir diarrea que da lugar a una
pérdida de agua y electrolitos que provoca una deshidratación que sin
tratamiento puede causar shock hipovolémico y la muerte.
El mecanismo por el que produce la deshidratación es
provocado por la enterotoxina que se encuentra en las
microvellosidades intestinales. Dicha enterotoxina se divide en dos
fracciones: la fracción a y la fracción b. La fracción b es la encargada
de seleccionar los receptores específicos a los que se une, y una vez
unida la enterotoxina, la fracción a actuará activando una enzima, la
adenilciclasa, lo que supone que el ATP de las células que infecta se
transforma en AMP. Como consecuencia de las elevadas
concentraciones de AMP se producirá una inhibición de la absorción
de Na por parte de las células intestinales y una liberación de agua,
cloruros, bicarbonatos, K y que en los casos más graves puede
perderse de 10-15 litros al día.
El periodo de incubación es de 1-4 días y los síntomas clínicos
nauseas, vómitos, dolor abdominal, diarrea, etc. Las heces contienen
moco, células y gran cantidad de Vibrio. La muerte sobreviene en
pocas horas si no se restablece l equilibrio electrolítico.

1.5.- TRATAMIENTO

El tratamiento es sintomático y encaminado a la reposición de

líquidos. Vibrio cholerae es sensible a tetraciclinas y
trimetroprimsulfametoxazol.
El uso de antibióticos ha dado lugar a la aparición de cepas
resistentes.
Se trabaja en la elaboración de vacunas.

1.6.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

Las muestras de heces que no se procesan inmediatamente se

transportan en medio de Cary-Blair donde los Vibrios se mantienen
viables hasta 4 semanas. Se debe evitar la exposición al aire ya que
son muy sensibles a la desecación.
El vibrio se desarrolla bien en agar sangre y Mckonkey, pero el
más selectivo es el medio TCBS (triptona, citrato, bilis y sacarosa)
donde Vibrio cholerae crece dando colonias amarillas. También se
puede utilizar como caldo de enriquecimiento a partir de heces agua

153
 Microbiología

peptonada al 1% de NaCl. El tiempo de incubación es de 16-22 horas

a 35-37ºC.

2.- CAMPYLOBACTER

2.1.- INTRODUCCIÓN

Son bacilos gram negativos, cortos, con forma espiral, alas de

gaviota o coma. Son microaerófilos, móviles, con un flagelo polar, no
esporulados, no fermentan HC y dan posita la oxidasa y catalasa.
Habitan en el tracto gastrointestinal de un gran número de animales.
En el hombre se asocia a infecciones gastrointestinales y cada vez
más a infecciones extraintestinales como meningitis, endocarditis,
artritis, etc, especialmente en pacientes con SIDA.

2.2.- ESPECIES MÁS IMPORTANTES ( ver tabla 14.1)

Las especies más importantes de Campylobacter son:

- Campylobacter jejuni
- Campylobacter coli
- Campylobacter hyointestinalis

2.3.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

Hay dos tipos de muestras:

 Muestra de heces
Emplea medios selectivos que poseen antibióticos para reducir la
flora acompañante (medio Skirrow, Campy o Buzler).
Uso de atmosfera reducida en oxígeno (ambiente de CO2) y
temperatura de 42ºC.
Un medio alternativo para el aislamiento de Campylobacter en
heces es filtrar las heces para eliminar los coliformes y otra flora
acompañante. Los filtros son de acetato de celulosa y se colocan
sobre una superficie de agar, se pone una gota de heces, se
incuba toda la noche, se retira el filtro y se vuelve a incubar la
placa.
 Muestra de sangre
En sangre se han aislado como agente etiológico se sepsis en
pacientes inmunodeprimidos y con SIDA.

2.4.- PATOLOGÍA

Campylobacter jejuni se ha asociado a infecciones en el hombre

asociadas con gastroenteritis con eliminación de sangre por las
heces.
El microorganismo se adquiere por vía oral, por la ingestión de
comidas o bebidas contaminadas, o por el contacto con aves.

154
 Microbiología

Es sensible al pH gástrico por lo que se debe ingerir un inóculo muy

elevado de microorganismo. Se multiplica en el intestino delgado e
invade el epitelio, produce inflamaciones, en ocasiones pasa a sangre
y origina fiebre. La diarrea que produce se acompaña de dolor
intestinal, dolor de cabeza, fiebre, nauseas, etc.

2.5.- TRATAMIENTO

La infección es autolimitada resolviéndose en una semana sin

necesidad de administrar antibiótico. Los casos más graves se tratan
con eritromicina.
Existe una especie la Campylobacter hyointestinalis que causa
infección intestinal y es común en individuos homosexuales.

3.- HELICOBACTER PILORI

3.1.- INTRODUCCIÓN

En 1982, se aislaron por primera vez en pacientes con lesiones

gástricas y úlceras peptídicas unos bacilos gram negativos con forma
de espiral y gran actividad ureasa.

3.2.- MÉTODOS DE DETECCIÓN

a.- Métodos directos

Helicobacter pilori se encuentra en los pliegues de la mucosa

gástrica. Si el estudio no se va a hacer de inmediato es útil como
medio de transporte solución glucosada al 20% o solución salina,
manteniéndose viable en estos medios durante 5 horas a 4ºC.
Las muestras recibidas pueden usarse para realizar un gram. Las
biopsias se cortan en trozos o se machacan en un mortero estéril con
solución glucosada al 20% y se siembra en los siguientes medios:
- agar BHI (infusión cerebro corazón)
- agar Müeller-Hinton
- agar Brucella al 1% de almidón soluble,
- agar sangre o chocolate
Para el aislamiento de Helicobacter pilori es importante incluir medios
selectivos con antibióticos.
La incubación es de carácter microaerófilo que se puede conseguir
con las jarras de CO2 y la temperatura óptima es de 37ºC, no
desarrollándose a 25,30 y 42 ºC.
La identificación de Helicobacter pilori se realiza por la tinción de
gram y pruebas bioquímicas como catalasa, oxidasa y ureasas
positivas, teniendo en cuenta que la temperatura de crecimiento es
muy selectiva.

b.- Métodos indirectos

155
 Microbiología

 Prueba de la urea rápida: Un trozo de biopsia se inocula en un

medio con altas concentración de urea y un indicador de pH.
Un viraje del indicador a un medio alcalino por hidrólisis de la
urea es significativo de Helicobacter pilori.
 Prueba de la urea respiratoria: El paciente ingiere urea
marcada y tras un periodo de tiempo se mide el nivel de CO2
espirado. Se emplea urea marcada con C13 o C14 que se detecta
en un espectrofotómetro de masas.
 Pruebas serológicas: principalmente ELISA para detectar
presencia de IgG e IgA en individuos con Helicobacter pilori.

3.3.- PODER PATÓGENO

Se señala al producción de ureasa capaz de crear un entorno

alcalino que protege a los microorganismos de la acidez gástrica
hasta que se localiza en las capas de la mucosa gástrica. También las
proteasas modifican el pH gástrico de la mucosa y disminuyen la
capacidad del ácido de difundir al mucus.

3.4.- PATOLOGÍA Y TRATAMIENTO

Helicobacter pilori es el agente etiológico de gastritis aguda y

crónica. En relación a ulceras peptídicas se aísla en el 100% de los
casos y el ulcera duodenal en el 77% . Parece ser que la presencia del
microorganismo no es suficiente para desarrollar la ulcera aunque se
cree que colabora.
Es importante tener en cuenta que hasta el 50% de la población
adulta es portadora desconociéndose el mecanismo de transmisión.
Tratamiento: Es sensible a succionato de bismuto y
sucsalicato de bismuto y muy resistente a antibióticos. El
tratamiento es difícil y nunca se emplea monoterapia. Suelen
administrarse varios fármacos juntos y aún no se erradica el
microorganismo habiendo recaídas.

4.- AEROMONAS

4.1.- INTRODUCCIÓN

Son bacilos gram – , anaerobios facultativos, oxidasa + y fermentan la

glucosa con o sin producción de gas, la mayor parte son móviles y
crecen a temperaturas de 4-40ºC. habitan en aguas dulces y saladas
donde infectan a los animales, generalmente peces y anfibios.

156
 Microbiología

En el hombre se asocian a infecciones intestinales en heridas e

infecciones sistémicas.

4.2.- PATOLOGÍA

♦ Produce una diarrea aguda (diarrea del viajero) que suele ser
autolimitada.
♦ Puede dar lugar a celulitis o infecciones de heridas por contacto
de mucosas, por la tierra o aguas contaminadas.
♦ Septicemias en pacientes inmunodeprimidos.
♦ Otras (endocarditis, peritonitis, meningitis,etc.).

4.3.- TRATAMIENTO

Tetraciclinas, aminoglucosidos y cefalosporinas.

4.4.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

 Toma de muestras: líquidos orgánicos (sangre o exudados).

 Medios de cultivo: agar sangre y agar Mc konkey y más
selectivos: agar tripiticasa de soja al 5% y agar sangre con
ampicilina.

5.- PLESIOMONAS

Comprenden una sola especie que es la sigeloide. Es un bacilos

gram -, anaerobio facultativo, móvil o inmóvil, catalasa y oxidasa +
que fermenta glucosa sin producir gas y reduce nitratos a nitritos.
La temperatura óptima es de 37ºC aunque crece bien entre 8-44ºC.
se aisla bien en el intestino de peces de agua dulce y no sobrevive en
agua del mar.
En el hombre se asocia a diarrea en zonas tropicales y subtropicales.
Crece bien en agar sangre y agar SS.

TEMA 21.- ESPIROQUETAS: TREPONEMAS, BORRELIAS Y

LEPTOSPIRA

157
 Microbiología

1.- INTRODUCCIÓN A LAS ESPIROQUETAS

2.- TREPONEMAS

2.1.- Introducción
2.2.- Especies más importantes: Treponema pallidum
 Patología
 Epidemiología
 Aislamiento y características bioquímicas
 Tratamiento

3.- BORRELIAS

3.1.- Introducción
3.2.- Especies más importantes
3.3.- Patología
 Fiebre recurrente
 Enfermedad de Lyme
3.4.- Tratamiento
3.5.- Aislamiento y características bioquímicas

4.- LEPTOSPIRA

4.1.- Introducción
4.2.- Especies más importantes
4.3.- Patología
4.4.- Tratamiento
4.5.- Aislamiento y características bioquímicas

158
 Microbiología

1.- INTRODUCCIÓN A LAS ESPIROQUETAS

Existe una serie de bacterias con morfología espiral y flexible

denominadas espiroquetas. Presentan una movilidad característica
no asociada a flagelos, sino a un filamento axial que se extiende
longitudinalmente por debajo de la envoltura externa.
Presenta una pared muy fina y flexible de naturaleza liposacárida y
lipoproteica donde se vana a encontrar la mayor parte de los Ag
específicos.
Son gram negativas, pero presentan muchas dificultades para
teñirse. Se tiñen con impregnación argéntica, tinción de Giemsa o
microscopía de fases. Presentan metabolismo fermentativo u
oxidativo siendo aerobios o aerobios facultativos.
Se encuentran muy difundidos en la naturaleza, en el agua, suelo y
mucosas del hombre y animales.
Dentro de la familia Espiroquetaceae existen 5 géneros:
- Treponema
- Borrelia
- Leptospira
- Espiroqueta
- Cristipira

2.- TREPONEMA

2.1.- INTRODUCCIÓN

Comprende especies patógenas que afectan al hombre y otras

que forman flora normal del tracto intestinal, boca y tracto genital.
Son espiroquetas muy helicoidales, finas, pequeñas y móviles. Son
anaerobias facultativas y presentan un metabolismo fermentativo.
Se tiñen difícilmente con gram utilizándose giemsa e impregnación
argéntica.
No crece en cultivos “in vitro” y requiren un medio “in vivo”.

2.2.- ESPECIES MÁS IMPORTANTES

La especie más importante es Treponema pallidum, que

produce la sífilis. Afecta principalmente a adultos. Es de distribución
mundial. Es una ETS, siendo una infección congénita. Produce
lesiones destructivas e infecta a todos los tejidos.

 PATOLOGÍA

Es el agente causante de la sífilis. Es un microorganismo que no es

capaz de resistir fuera del organismo humano.
La sífilis comienza con un primer contacto (sexual, ETS), con
lesiones primarias ricas en treponemas presentes en la mucosa.
Después de un periodo de incubación de 10-90 días, con termino

159
 Microbiología

medio de 20 días, aparece en la zona genital un chancro primario, es

lo que se denomina Periodo primario de Sífilis, con abundantes
treponemas que poco después se diseminan por vía sanguínea y
linfática a otras localizaciones convirtiéndose en una enfermedad
sistémica.
Es frecuente su multiplicación en los ganglios linfáticos próximos a
la zona genital originando pequeños tumores. Transcurrido un tiempo
corto (2-6 semanas) estos signos desaparecen espontáneamente y
entran en fase de latencia. Transcurrido un tiempo (2 meses-2 años)
surge la Sífilis secundaria o florida. De forma súbita hay una
espiroquetemia en genral muy abundante y que da lugar a manchas
en la piel y mucosas muy ricas en treponemas y altamente
infecciosas. También se pueden producir lesiones en otros órganos,
fiebre, y en ocasiones pústulas o pápulas ricas en treponemas. Si esto
se produjese nos encontraríamos con una forma eruptiva, pero la
mayor parte de los casos no aparece debido a la fuerte respuesta
inmunitaria.
Este cuadro clínico de carácter sistémico remite a las pocas
semanas (2-6 semanas) volviendo a entrar en fase de latencia.
Transcurrida la fase de latencia (3-30 años), surge la Sífilis terciaria,
forma muy grave y mal pronóstico si los pacientes no han sido
tratados. El número de treponemas en sangre es muy escaso y
abundante en ganglios, hueso, bazo, sistema cardiovascular, SNC,
etc. Cuando afecta al SNC se denomina Neurosífilis, formándose
también unas lesiones granulomatosas denominadas grummas.
Recientemente de distingue entre:
a. Sífilis precoz: menos de 1 año de evolución
b. Sífilis tardía: mas de 1 año de evolución

 EPIDEMIOLOGÍA

La transmisión más frecuente es la sexual, pudiendo aparecer

lesiones en labios, boca, tronco, etc.
Otra modalidad de transmisión es la transplacentaria, llamada
Sífilis congénita, que para evitarla se hace un estudio serológico
durante la gestación. También se realiza este estudio a donantes de
sangre para evitar contagio por vía transfusional.
En la actualidad han disminuido los contagios por una buena
metodología del diagnostico y tratamiento eficaz aunque se está lejos
de la erradicaión.
También se le denomina Lues venerium.

 AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

♣ Toma de muestras: Se realiza exprimiendo el chancro primario

o condiloma (mancha que aparece en la piel en la sífilis
secundaria)

160
 Microbiología

♣ Medios de cultivo: No crece en medios “in vitro”, solo en medios

“in vivo” como testículos de conejo.
♣ Tinciones: de Giemsa e Impregnación argéntica.
♣ Diagnóstico: Puede ser directo o indirecto:
a. Directo: Buscamos microorganismos en tinciones.
b. Indirecto: Pruebas serológicas donde se busca en el suero
del paciente Ac frente Treponema pallidum por medio de
distintas pruebas:
 Pruebas reagínicas o no treponémicas: Son baratas,
rápidas y ofrecen buena indicación de la actividad
de la enfermedad, pero son inespecíficas, ya que
dan falsos positivos. También se denominan
pruebas cardiolipínicas, ya que el Ag utilizado no el
es Ag de treponema sino la cardiolipina, que es un
lípido extraído de tejidos de mamíferos
(generalmente corazón de buey). Esta prueba es
positiva entre las 2-3 semanas de infección no
tratada. Existen 2 pruebas:
- Prueba de la floculación o VRDL o RPR: La
cardiolipina que actúa de Ag se combina con
la reagina (Ac tipo Ig E) que el huésped
produce para dar aglutinación visible.
- Prueba de Wassermann o Fijación de
complemento: Las reaginas del suero fijan el
complemento en presencia de cardiolipinas .
Estas pruebas no treponémicas tienen gran
sensibilidad.
 Pruebas treponémicas: Se utilizan para confirmar.
Los Ag utilizados son treponémicos y se utilizan:
test de fluorescencia, denominada prueba FTA, y de
aglutinación (TPHA), que tiene la ventaja de que es
sencilla y no necesita microscopio de fluorescencia.
También se utiliza ELISA.

 TRATAMIENTO

Penicilina, siendo alternativas eritromicina, cefalosporinas y

tetraciclinas.

3.- BORRELIA

3.1 INTRODUCCIÓN

Es una espiroqueta de mayor tamaño, con espirales más amplias e

irregulares, son móviles y existen especies patógenas para el hombre
y animales, originándose fiebres recurrentes y endémicas. Es
anaerobio con metabolismo fermentativo y se tiñen con facilidad, son
gram - , se cultivan in vitro con medios complejos y enriquecidos.

161
 Microbiología

3.2 ESPECIES MÁS IMPORTANTES

Todas las bacterias son transmitidas por artrópodos:

 Piojo: dando lugar a Borrellia recurrentis, que provoca fiebres

recurrentes a nivel mundial.
 Garrapata: produciendo Borrellia hispanica que produce fiebres
recurrentes endémicas en España. También por garrapatas se
transmite la Borrellia turicatae y Borrellia hermsii que producen
fiebres recurrentes en Estados Unidos. Borrellia burgoloferi
produce la enfermedad de Lyme, etc.

3.3 PATOLOGÍA

1.- Fiebres recurrentes:

Se manifiesta como una enfermedad septicémica febril con periodo

de incubación de 3-15 días, la fiebre persiste y continua con periodos
afebriles de varios días o semanas pudiéndose repetir las recidivas
hasta 10 veces en pacientes no tratados. Esto ocurre por las
variaciones antigénicas que se van produciendo en el
microorganismo.
A causado grandes epidemias en la 2ª guerra mundial con un millón
de casos declarados, calculándose en más de 9 millones las
infecciones reales. Actualmente es anormal en nuestro país.

2.- Enfermedad de Lyme.

Es una enfermedad cuyo agente etiológico se conoce desde 1981,

que produce una reacción inflamatoria que en su inicio aparece como
un eritema crónico migratorio (ECM), acompañado de mialgias, fiebre
y adenopatías semanas o meses más tarde produce complicaciones
como meningoencefalitis, artritis, miocarditis, etc.
Se da en España, pero las dificultades de su diagnóstico hace que se
detecten menos casos de los que se podrían esperar.

3.4 TRATAMIENTO

Penicilinas y tetraciclinas.

3.5 AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

Se toma la muestra de sangre en estados febriles y se realiza

tinción de gram y giemsa, también se realiza inoculación en animales
de experimentación por ejemplo ratas y en ocasiones también se
realizan técnicas serológicas.

162
 Microbiología

4. LEPTOSPIRA

4.1. INTRODUCCIÓN

Formada por espiroquetas finas con espiras regulares muy

numerosas y apretadas con sus extremos ligeramente
incursados. Son móviles. Se tiñen débilmente con gram siendo
gram – también con Giensa e impregnación argéntica.
Se pueden cultivar in vitro en medios ricos en albúmina y con
ácidos grasos. Su metabolismo es oxidativo y necesitan condiciones
aerobias.
Existen en la naturaleza Leptospiras saprófitas y parásitas. En el
hombre pueden originar lectosporiasis que originan cuadros febriles.
El reservorio son animales y de hecho las lectosporiasis se consideran
zoonosis.

4.2. ESPECIES MÁS IMPORTANTES

a. Lectospira biflexia: no es patógena para el hombre y es

abundante en agua.
b. Lestospira interrogans: que da lugar a cepas parasitarias.

4.3. PATOLOGÍA

Presentan cuadros clínicos variados de leves a muy graves y en

ocasiones mortales. Tras incubación de 5 días a 3 semanas surge una
1ª fase febril, donde la Leptospira se disemina por el aparato
circulatorio originando leptospiremia. Le sigue una 2ª fase de
lectospiuria y en algunos casos también aparece en heces. Cuando la
gravedad es extrema aparece ictericia, hapetomegalia, hematuria,
nefritis, es decir principal afectación renal y hepática.

4.4. TRATAMIENTO

Tetraciclinas, penicilinas
4.5. AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

Toma de muestra sanguínea en periodos febriles. Si la toma es

de orina se realizara a los 10 – 15 días de la enfermedad y recién
cogida se intentara visualizar la Leptospira por examen directo así
como aislarla en medios específicos como Jonhson – Harrys. Esto se
realiza inmediatamente ya que la Leptospira se destruye con
facilidad. Si la muestra es suero se recurre a muestras inmunológicas
para demostrar la presencia de Acs frente a Leptospira como pruebas
de fijación de complemento, ELISA, ect.

163
 Microbiología

TEMA 22.- BACILOS GRAM NEGATIVOS NO FERMENTADORES

DE GLUCOSA. PSEUDOMONAS.

1.- INTRODUCCIÓN

2.- PSEUDOMONAS

2.1 Características

164
 Microbiología

2.2 Clasificación
• Primer grupo (pigmentos fluorescentes) : P. Aeruginosa, P.
Putria y P. Fluorescens.
• Segundo grupo (producen el muermo) : P. Mallei y P.
Pseudomallei.
• Tercer grupo (excepcionalmente patógenas) : P. Cepacea, P.
Diminuta, P. Maltopila y P. Acidovorans.
2.3 Poder patógeno.
• Antigenos: Ag. somático O, Ag. flagelñar H y Ag. mucoide M.
• Toxinas: enterotoxina y eritrodermica.
• Piocianina.
2.4 Patología.

1º A nivel respiratorio:
- sinusitis, neumonía, faringitis, etc.

2º A nivel del aparato circulatorio:

- endocarditis en drogadictos y personas con SIDA.

3º A nivel del aparato digestivo:

- enterocolitis, principalmente pacientes con SIDA.

4º A nivel del sistema nervioso:

- meningitis en neonatos e inmunodeprimidos.

5º A nivel del aparato urinario:

- pielonefritis.

6º A nivel de la piel:
- infecciones graves por quemaduras.

7º A nivel del sistema osteoarticular:

- artritis.

8º A nivel de ojos y oídos:

- ceguera y sordera.

En casos graves bacteriemia y muerte.

2.5 Aislamiento y características bioquímicas.

3.- OTROS MICROORGANISMOS NO FERMENTADORES DE

GLUCOSA.

1.- INTRODUCCIÓN

165
 Microbiología

Son microorganismos que aparecen como saprofitos o como

comensales de hombres y animales. En ocasiones se asocian a
infecciones afectando sobretodo a inmunodeprimidos. Todos son
incapaces de fermentar la glucosa. El principal patógeno es
Pseudomona aeruginosa, considerado como el segundo agente
patógeno nosocomial después de E.coli.

2.- PSEUDOMONAS

2.1 CARACTERÍSTICAS

Son bacilos gram -, aerobios estrictos, oxidasa + y móviles, con

flagelación polar a excepción de P. Mallei que es inmóvil. No
fermentan los hidratos de carbono, pero pueden usar los azúcares
oxidándolos. Es catalasa + y salvo alguna excepción no forman
cápsula, no son esporulados.
De 27 especies sólo 8 tienen importancia clínica por el posible efecto
patógeno que podrían desencadenar.

2.2 CLASIFICACIÓN

• Primer grupo: se caracteriza por dar pigmentos fluorescentes.

Se pueden encontrar de forma saprofita en piel y tubo
digestivo, aunque puede crecer en órganos debilitados
(quemados, graves infecciones) provocando cuadros graves y
mortales (septicemias).
• Segundo grupo: generalmente se asocian a zoonosis, aunque
se podrían aislar en el hombre. P. Mallei es el agente causal del
muermo (zoonosis transmitida generalmente por equinos que
produce alteraciones cutáneas, cuyo agente causal es P.
mallei).

2.3 PODER PATÓGENO (Pseudomonas aeruginosa).

Presentan 3 antígenos:
- Antígeno somático O.
- Antígeno flagelar H.
- Antígeno mucoide M.

Presenta también toxinas:

- Enterotoxina, que provoca nauseas, vómitos, dolor abdominal,
etc.
- Eritrodermica.
- Y en ocasiones también toxinas con mecanismo de acción
parecido a la toxina diftérica que disminuye el consumo de
oxigeno.

166
 Microbiología

También es capaz de formar ciertas sustancias, como la piocianina

que es un pigmento azulado de acción bactericida o la fluoresceína de
color verde amarillo o incluso pigmentos melénicos de color marrón.

2.4 PATOLOGÍA

Dependerá de que los cuadros sean graves o muy graves, del

carácter oportunista, es decir, de las características del huésped.

1.- A nivel respiratorio:

- sinusitis
- neumonía
- faringitis, etc.

2.- A nivel del aparato circulatorio:

- endocarditis en drogadictos y personas con SIDA.

3.- A nivel del aparato digestivo:

- enterocolitis, principalmente pacientes con SIDA.

4.- A nivel del sistema nervioso:

- meningitis en neonatos e inmunodeprimidos.

5.- A nivel del aparato urinario:

- pielonefritis.

6.- A nivel de la piel:

- infecciones graves por quemaduras.

7.- A nivel del sistema osteoarticular:

- artritis.

8.- A nivel de ojos y oídos:

- ceguera y sordera.

En casos graves bacteriemia y muerte.

2.5 AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

Se realizará un frotis y tinción de gram (si la pus es azulada se

sospechará de la existencia de P. aeruginosa). También tinción de
flagelos o tinción con anticuerpos fluorescentes para poder visualizar
piocianina o pioverdina. Se cultiva a 37ºC.
Es importante el estudio de los pigmentos pudiendo distinguir 4:

167
 Microbiología

• Piocianina: color azulado que puede adquirir el medio y es

característico de P. Aeruginosa es el único que la posee).
• Pioverdina: color verde.
• Eritorgeno: color rojo.
• Melenico: color marrón.

Se pueden presentar distintas colonias:

♦ R: rugosas.
♦ S: lisas.
♦ M: mucoide.
 Medio de cultivo: Agar cetrimida. En otros medios como
Mckonkey, agar sangre, podemos ver β hemólisis con olor
característico a fruta, debido a la producción de
aminoacetofenona, lo que ayuda a su identificación.
 Toma de muestras: generalmente se realiza de cualquier
producto patológico de carácter purulento.

CARACTERÍSTICAS QUE AYUDAN A LA IDENTIFICACIÓN DE

PSEUDOMONAS AERUGINOSA

1º En agar sangre aparición de colonias azuladas y olor afrutado.

2º Catalasa, oxidasa y reducción de nitratos + .
3º Crecimiento a 42ºC.
4º Oxidación de glucosa y hidrólisis de arginina.
5º Tolerancia a la cetrimida.

TRATAMIENTO
Es resistente a la mayor parte de los antibióticos, excepto
aminoglucosidos, carbencilinas y colistina.

3.- OTROS BACILOS GRAM – NO FERMENTADORES DE

GLUCOSA.

(Ver pregunta 5 de fotocopia)

168
 Microbiología

TEMA 23.- ENTEROBACTERIAS I

1. INTRODUCCIÓN.

2. CARACTERÍSTICAS MÁS IMPORTANTES.

3. ESTRUCTURA ANTIGÉNICA.

3.1 Antígenos: O, H y K (capsular).

3.2 Toxinas: exotoxinas, endotoxinas, hemolisinas y colimicinas.

4. GÉNEROS.

4.1 Fermentadores rápidos de lactosa.

4.2 Fermentadores lentos de lactosa.
4.3 No fermentadores de lactosa

5. PRUEBAS BIOQUÍMICAS.

6. AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS.

6.1 Medios de cultivo:

• Diferenciales poco selectivos: McKonkey y EMB.
• Diferenciales selectivos: SS, XLD y Hektoen.
• Complejos diferenciales: KIA y TSI.

6.2 Caldos de enriquecimiento:

• Selenito.
• Tetrationato.

6.3 Prueba de la DNAasa.

169
 Microbiología

1.INTRODUCCIÓN.

Son bacilos gram -, aerobios y/o anaerobios facultativos,

móviles (con flagelación) o inmóviles que en la última edición del
manual de Bergey’s se clasifican en la familia Vibrionaceae.
Se caracterizan por ser fermentadores de glucosa, suelen ser
huéspedes habituales del tracto gastrointestinal de hombres y
animales, produciéndose en muchas ocasiones efectos patógenos, en
otros casos puede actuar como saprofito de la flora intestinal.
Se pueden encontrar en agua y suelo y se pueden comportar como
oportunistas.

2. CARACTERÍSTICAS MÁS IMPORTANTES.

• Son cocobacilos gram -.

• Aerobios y/o anaerobios facultativos.
• Móviles o inmóviles.
• Oxidasa -.
• Catalasa +.
• Fermentadores de glucosa.
• Reducen nitratos a nitritos.
• Son muy importantes las pruebas del INVIC, KIA y TSI.
• Pueden producir gran cantidad de fermentos como gelatinazas,
descarboxilasas, ureasas y galactosidasas.
• Algunos pueden producir sulfhídrico.
• Presentan gran similitud biológica con los vibrios, por eso se
estudian conjuntamente aunque los vibrios son oxidasa +.

3.- ESTRUCTURA ANTIGÉNICA

3.1.- ANTÍGENOS

170
 Microbiología

 Antígeno somático O: Termosestable, ligado a la pared

bacteriana siendo una endotoxina que presenta una parte
proteica responsable del poder antigénico, y una parte lipídica
responsable, en parte de la toxicidad.
 Antígeno capsulado K: De naturaleza polisacárida con
propiedades antiparasitarias.
 Antígeno flagelar H: De carácter proteico y responsable de la
acción patógena de las bacterias.

3.2.- TOXINAS

♣ Exotoxina: son enterotoxinas.

♣ Endotoxinas: responsables del shock tóxico.
♣ Hemolisinas: las producen algunas cepas.
♣ Colimicinas: susutancias son efecto antibiótico (son tóxicas para
las cepas de la misma o distinta especie de las cepas que las
producen).

4.- GÉNEROS DE ENTEROBACTERIAS

Las enterobacterias siempre han sido clasificadas en función de

su capacidad de fermentar la lactosa. Hay tres grupos:

1. Fermentadores rápidos de lactosa: en él se encuentran

Escherichia coli, Klebsiella y Enterobacter.
2. Fermentadores lentos de lactosa: se encuentran
Citrobacter,Serratia, Yersinia y Shigella sonnei. Estos dos
grupos de les denomina coliformes por su capacidad de
fermentar la lactosa.
3. No fermentadores de lactosa: son no coliformes, se
encuentran Salmonella, Shigella y Proteus.

5.- PRUEBAS BIOQUÍMICAS

(Ver tabla 13.2)

6.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

6.1.- MEDIOS DE CULTIVO

Los medios más utilizados son:

1.- Medios diferenciales poco selectivos: Permiten ver las diferencias

entre fermentadores y no fermentadores de lactosa. Se utilizan:

171
 Microbiología

- Mackonkey (MK): donde los fermentadores aparecen

formando colonias rosas y los no fermentadores colonias
incoloras
- EMB (Medio eosina azul de metileno o Levine)

2.- Medios diferenciales más selectivos: Son:

- Agar SS
- Medio XLD
- Medios Ektoen

3.- Complejos diferenciales: Son:

- KIA (agar triple Fe): contiene lactosa y glucosa
- TSI (triple azucar Fe): contiene lactosa, glucosa y
sacarosa
Tanto TSI como KIA son medios sólidos en tubo que constan de
2 partes:
a.- Parte superior acabada en pico de flauta que permite ver el
crecimiento aerobio
b.- Parte inferior que permite ver el crecimiento anaerobio.
La siembra se hace a partir de una colonia bien aislada, tanto
en la inclinación como en el fondo.
Las reacciones que pueden tener lugar y sus interpretaciones
son:

Parte Fondo
aeróbica
Alcalino Ácido Inclinación roja y fondo amarillo, solo hay
fermentación de la glucosa.
Parte Fondo
aeróbica
Ácido Ácido Amarillo / Amarillo, fermentación de glucosa y
lactosa.
Alcalino Alcalin Rojo / Rojo, no hay fermentación.
o
Alcalino Sin Indica inclinación roja / fondo naranja, no hay
cambi fermentación de azucares, únicamente
o utiliza las peptonas.

Los medios KIA y TSI permiten observar si hay producción de

gas en cuyo caso aparecerá burbujas de aire o elevación del medio y
en ocasiones desquebrajamiento del medio.
A las bacterias productoras de gas se les denomina aerogénicas y
las no productoras anaerogénicas.
La producción de sulfhídrico se pone de manifiesto con la
aparición de coloración negra, debido a las sales ferrosas como
consecuencia de la reacción del sulfhídrico con Fe 3+.
Por tanto KIA y TSI ponen de manifiesto tres características:

172
 Microbiología

- Capacidad para fermentar la lactosa (KIA) o lactosa y

sacarosa (TSI).
- Producción de gas por fermentación de azucares.
- Producción de sulfhídrico.

6.2.- CALDOS DE ENRIQUECIMIENTO

Para que las bacterias se multipliquen y crezcan podemos

utilizar caldos de enriquecimiento, ej.:
- caldo selenito → Salmonella
- caldo tetrationato → Salmonella y Shigella.
Estos caldos son muy utilizados en las pruebas de heces, se
toma con una torunda la muestra y se disuelve en dicho caldo
24 – 48 h.

6.3.- PRUEBA DE LA ADNasa

Se realiza sobre un agar que contiene verde de metilo como

indicador y ADN como sustrato. Los organismos que producen
ADNasa se identifican por la producción de una zona clara alrededor
de la colonia.

TEMA 24.- ENTEROBACTERIAS II

1.- SALMONELLA

1.1.- Introducción
1.2.- Epidemiología
1.3.- Acción patógena e interés clínico
- Fiebres tifoideas
- Fiebres paratifoideas
- Infección gastrointestinal
1.4.- Tratamiento

173
 Microbiología

1.5.- Aislamiento y Características bioquímicas

2.- SHIGELLA

2.1.- Introducción
2.2.- Acción patogénica e interés clínico
- Ag O y K
- Exotoxinas (neurotoxina, citotoxina y enteroinvasiva)
2.3.- Tratamiento

3.- ESCHERICHIA COLI

3.1.- Introducción
3.2.- Clasificación según cuadro clínico
a. Enteropatógenas
b. Enterotoxígena
c. Enterohemorrágica
d. Enteroinvasiva
3.3.- Profilaxis y tratamiento
3.4.- Aislamiento y Características bioquímicas

4.- YERSINIA

4.1.- Introducción
4.2.- Especies más importantes
a. Yersinai pestis (bubónica, pulmonar y septicémica)
b. Yersinia pseudotuberculosis
c. Yersinia enterocolítica
4.3.- Aislamiento y Características bioquímicas

5.- OTRAS ENTEROBACTERIAS (OPORTUNISTAS)

1.- SALMONELLA

1.1.- INTRODUCCIÓN

El género Salmonella es el responsable de un gran número de

gastroenteritis por los alimentos.
Es móvil, con flagelación perítrica, no coliforme, no esporulado y casi
nunca capsulado. Tiene un carácter más o menos patógeno según las
especies.

1.2.- EPIDEMIOLOGÍA

174
 Microbiología

Las fuentes más frecuentes de infección son las aves (pollos,

patos, etc.) y sus productos (huevos).
Los brotes suelen aparecer por ingestión de alimentos que
contienen huevos crudos o carnes poco hechas, dado que la
Salmonella es sensible al ácido gástrico se tienen que ingerir un gran
número de microorganismos (106-109 µ o/ml. o gr.) para que
aparezcan los síntomas, multiplicándose en el intestino delgado.

1.3.- ACCIÓN PATOGÉNICA E INTERÉS CLÍNICO

Su acción patogénica va a ser dependiente de los antígenos

estructurales y toxinas. Poseen 3 antígenos:
• Antígeno somático O.
• Antígeno flagelar H.
• Antígeno capsular K.
También posee una endotoxina y una enterotoxina responsable del
efecto irritante y en ocasiones citotóxico sobre el tracto intestinal.
Las especies del género Salmonella pueden actuar sobre el
hombre y animales, los más importantes son: S. typhi, S. paratyphi,
S. choleraesuis y S. enteritidis.
Los principales cuadros clínicos son:
a.- Fiebres tifoideas(S. Typhy) y Fiebres paratifoideas(S.
paratyphi)
La Salmonella tras ser ingerida llega al intestino delgado y
penetra por endocitosis destruyendo parte de la mucosa intestinal.
Una vez dentro la Salmonella son fagocitadas por macrófagos
originando una primera bacteriemia que tiene una duración de 8-
15 días, a partir de aquí hay un comienzo brusco de signos y síntomas
de la enfermedad.
La Salmonella en sangre es de nuevo captada por los mononucleares
y de aquí pasa al bazo, hígado, etc. produciendo la multiplicación de
nuevas Salmonellas, volviendo de nuevo al intestino donde provocan
unas placas ulceradas con necrosación denominadas placas de
peyer y en casos más graves pueden originar perforación y
hemorragias.
Las fiebres pueden alcanzar 40ºC y durar varias semanas. Van
acompañadas de dolores de cabeza, anorexia, debilidad, dolor
muscular, etc.
El germen se elimina a través de las heces (Salmonella en heces es
patógeno)

b.- Infecciones gastrointestinales

Es la infección más frecuente en caso de Salmonella. El periodo
de incubación es de 8-48 horas de haber ingerido el alimento
contaminado. Aparecen nauseas, vómitos, etc.
El síndrome requiere tratamiento de aproximadamente 6 días. Puede
ser que no existan bacterias en sangre , sin embargo sí aparecen en
heces.

175
 Microbiología

Las personas más propensas a padecer la infección son niños,

ancianos e inmunodeprimidos.
Tras una infección de fiebres tifoideas un 1-3% se vuelven portadores
crónicos eliminándolo en las heces durante largos periodos de
tiempo.
Desde el punto de vista epidemiológico tiene gran importancia dado
que de este modo se contribuye a la diseminación del patógeno.
En las salmonelosis no tifoideas menos del 1% de los pacientes van a
seguir excretando el bacilo por heces.

1.4.- TRATAMIENTO

Ampicilina, cloranfenicol, trimetropim, sulfametoxazol y

cefalosporinas.

1.5.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

Toma de muestras

Se realiza en alimentos contaminados, sangre y heces.

En caso de enfermedades gastrointestinales son importantes los
coprocultivos y alimentos sospechosos.
En casos de fiebres tifoideas y paratifoideas las muestras se obtienen
de sangre, orina y heces.

176
 Microbiología

2.- SHIGELLA

2.1.- INTRODUCCIÓN

Bacilo gram -, no esporulado, no flagelado, no produce desaminasas,

ni gas, ni H2S.

2.2.- ACCIÓN PATOGÉNICA

Se debe a los factores antigénicos 0 y K y a la producción de

toxinas, principalmente exotoxinas que presentan propiedades
citotóxicas, neurotoxicas y enteroinvasivas.
La toxina esta compuesta por 2 subunidades:
- subunidad b, que actúa adheriendose a las células del
epitelio gastrointestinal (efecto enteroinvasivo).
- subunidad a, cuyo mecanismo consiste en el bloqueo de la
síntesis proteica (efecto citotóxico que origina un estado de
necrosis celular con la consiguiente formación de ulceras,
hemorragias y perforaciones, siendo un cuadro clínico muy
grave.
Cualquier especie de Shigella al llegar al intestino comienza a
ejercer la acción toxica para pasar después al colón complicando el
proceso, lo que origina neurosis y en general los signos y síntomas
anteriormente descritos.
Los cuadros diarreicos van acompañados de dolor cólico,
nauseas, vómitos, fiebre y deposiciones cada vez más sanguinolentas
(disentería bacilar), con moco y pus, los más afectados son los niños.

2.3.- TRATAMIENTO

El mismo que para Salmonellas y también fluoroquinolonas.

3.- ESCHERICHIA COLI

3.1.- INTRODUCCIÓN Y CLASIFICACIÓN SEGÚN EL CUADRO

CLÍNICO

Bacilo gram negativo, no esporulado, móvil con flagelos

períticos, raramente capsulado y su capacidad antigénica se debe a
los Ag O y K confiriéndole propiedades antifagocitarias y de
resistencia frente a sustancias bactericidas, proporcionándole con ello
alto poder invasivo.

177
 Microbiología

También presenta distintos tipos de toxinas, así los cuadros

clínicos de las cepas patogénicas para el hombre son más o menos
variables según el tipo de toxina que la origina:

1. Escherichia coli enteropatógena: forma una enterotoxina

citotóxica con cuadros diarreicos en brotes epidémicos que
afecta principalmente a niños y lactantes.
2. Escherichia coli enterotoxígena: forma una enterotoxina
semejante a la del Vibrio cholerae, provocando procesos
diarreicos que afecta a niños y adultos. Produce la diarrea del
viajero.
3. Escherichia coli enterohemorrágica: es similar a Shigella
disenteriae que produce procesos diarreicos graves de tipo
hemorrágico (sangre).
4. Escherichia coli enteroinvasiva: se presenta principalmente en
niños y adultos produciendo cuadros diarreicos graves con
fiebre, dolor abdominal, diarreas con gran contenido de moco
junto con leucocitos y PMN.

En Escherichia coli no se recomienda dar profilaxis antibiótica para

diarrea del viajero con el fin de evitar cepas resistentes, sí es
conveniente tomar precauciones como tomar agua embotellada, no
consumir hortalizas crudas, etc. En caso de padecer esta infección se
procederá a la restauración del equilibrio electrolítico.

3.2.- TRATAMIENTO

El tratamiento en lactantes es neomicina y en adultos

fluorquinolonas.

3.3.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

Escherichia coli es saprofito del tubo digestivo y en general su

presencia en agua y alimento es indicativo de contaminación fecal
reciente.
A parte de trastornos gastrointestinales puede originar otras lesiones
urinarias, biliares, infección de heridas y lesión en meninges
principalmente en neonatos.
Es uno de los principales microorganismos productores de infecciones
nosocomiales.
En cuanto a las pruebas bioquímicas, destacar:
- las de la tabla 13.2
- las pruebas del IMVIC
- Kliger

4.- YERSINIA

4.1.- INTRODUCCIÓN

178
 Microbiología

Bacilo o cocobacilo gram negativo con flagelación peritrica,

moviles a 25 ºC e inmoviles a 37ºC. No fermentan la lactosa, no
forman esporas y excepcionalmente pueden presentar capsula.
4.2.- ESPECIES MÁS IMPORTANTES

Son: Yersinia pestis

Yersinia pseudotuberculosis
Yersinia enterocolitica

1.- YERSINIA ENTEROCOLITICA

Afecta principalmente a animales aunque también al hombre y

principalmente a niños.
Es un patógenos capaz de crecer a temperaturas de refrigeración
(4ºC), por lo que es un microorganismo a tener en cuenta en industria
alimentaria.
Se requiere un inóculo de 109 µ o /gr para adquirir la infección. Tras
un periodo de incubación de 4-7 días aparecen síntomas clínicos
como: dolor abdominal, fiebre y en ocasiones diarrea. En los casos en
los que no hay diarrea se confunde la yersioniosis con apendicitis
aguda.
Afecta a niños de 5-15 años y principalmente en Europa.
Es sensible a aminoglucosidos, cloranfenicol y trimetroprim-
sulfametoxazol. No se recomienda la utilización de Ab en caso de
que los síntomas solo sean gastrointestinales, ya que la infección
suele ser autolimitada.

2.- YERSINIA PESTIS

Es el agente causal de la peste en el hombre. Se origina de

forma epidémica, da lugar a cuadros agudos y febriles con alta
inflamación de ganglios linfáticos, hemorragias internas, petequias y
cuadros septicémicos y de neumonía.
Es grave y muy contagiosa aunque para ello es necesario la presencia
de ratas y roedores, encargados de su diseminación. Se origina en
lugares de salubridad baja.
Los factores de virulencia que determinan la gravedad de Yersinia
pestis son:
 Toxina murina: de carácter proteico; bloquea la utilización de
oxígeno por parte de ciertas células y en general sólo se liberan
al medio cuando muere la bacteria.
 Endotoxinas: liberadas por la bacteria en el transcurso de la
enfermedad; están relacionadas con el proceso febril.
 Antígeno V: le confiere propiedades antofagocitarias.
 Coagulasas y fibrinolisinas.

179
 Microbiología

A Yersinia pestis también se le denomina Yersinia bubónica;

Llega al hombre a través de pulgas infectadas por ratas con peste.
Tras la picadura de la pulga atraviesa los vasos linfáticos y de aquí a
los ganglios donde se multiplica formando bubones (inflamación de
los ganglios). De aquí pasa a sangre y posteriormente se disemina
por bazo, hígado, pulmones, piel y mucosas donde aparecen lesiones
con carácter piógeno, hemorrágico, necrótico y edematoso.
En casos graves puede aparecer coagulación intravascular por acción
de las coagulasas y hemorragias por acción de las fibrinolisinas,
colapso circulatorio, toxemia generalizada y muerte.
Existen varias formas clínicas dependiendo de su localización.
Las más importantes son:
a. Peste bubónica: Es la más frecuente y tras un periodo de
incubación de 3-7 días aparecen los primeros síntomas con
escalofríos, vómitos, bubones en ingles, axilas y zona
submaxilar. Si no hay tratamiento se produce la muerte.
b. Peste pulmonar: Es una complicación de la peste bubónica,
produciéndose una afectación pulmonar grave con insuficiencia
respiratoria, siendo altamente mortal.
c. Peste septicémica: Corresponde a los últimos estadíos de la
peste en cualquiera de sus formas, pulmonar o bubónica. Es
generalmente mortal.

4.3.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

La toma de muestra es a través de exudados purulentos,

bubón, sangre, LCR, tejido pulmonar, esputo, etc.

5.- OTRAS ENTEROBACTERIAS OPORTUNISTAS

 Klebsiella, Enterobacter y Serratia producen enfermedades

nosocomiales.
 Klebsiella neumoniae es el agente etiológico del 3% de las
neumonías de origen bacteriano. Afecta principalmente a
individuos con diabetes mellitus y alcohólicos con infección
pulmonar crónica.
 Enterobacter se asocia a infecciones de heridas, quemaduras, e
infecciones del tracto urinario y respiratorio.
 Serratia coloniza el tracto respiratorio y urinario de pacientes
hospitalizados.
 Citrobacter se asocia a infecciones respiratorias y urinarias y,
en ocasiones, en neonatos se ha aislado en meningitis.
 Proteus, Morganella y Providencia se han relacionado con
enfermedades del tracto urinario; tienen la capacidad de
hidrolizar urea con liberación de amoniaco produciendo la
alcalinización de la orina que induce a la formación de cálculos
renales. La movilidad de Proteus favorece la invasividad del
tracto urinario. El género Providencia se ha asociado a
bacteriemias en pacientes con catéteres venosos.

180
Microbiología

181
 Microbiología

TEMA 25.- LEGIONELLA, GARDNERELLA,SPIRILIUM

HIMUS,STREPTOBACILLUS MOVILIFORMES Y
CALYNMATOBACTERIUM GRANULOMATIS

1.- LEGIONELLA NEOMOFILA

1.1.- Introducción
1.2.- Hábitat natural y patogenia de la infección
1.3.- Interés clínico
1.4.- Aislamiento y Características bioquímicas
1.5.- Tratamiento

2.- GARDNERELLA VAGINALIS

2.1.- Introducción
2.2.- Hábitat natural e interés clínico
2.3.- Aislamiento y Características bioquímicas
2.4.- Tratamiento

3.- STREPTOBACILLUS MOVILIFORME (produce la Fiebre

Norverhill)

4.- SPIRILIUM HIMUS (produce la Fiebre de Sodoku)

5.- CALYNMATOBACTERIUM GRANULOMATIS (produce

Granuloma inguinal o Donovalosis)

182
 Microbiología

1.- LEGIONELLA NEOMOFILA

1.1.- INTRODUCCIÓN

Presenta 29 especies, tres subespecies y distintos subgrupos. De

ella Legionella neomofila es el patógeno mas frecuente. Se aisló por
1ª vez en 1976 a partir del tejido pulmonar en un brote de pulmonía
ocurrida en un grupo de legionarios de Philadelfia por lo que se
conoce como la enfermedad de los legionarios.
Es un bacilo gram -, aerobio, de 0,5 – 2 micras que produce potentes
citotóxicas que pueden ser responsables de la lesión tisular del
pulmón. La mayor parte de las especies posee flagelos.
Todas las especies son catalasa y gelatina +, en general, no
fermentan ni oxida HC y es nitrato – y urea -. Los aminoácidos son su
mayor fuente de energía y todas las especies necesitan N – cisteína
para su crecimiento.

1.2.- HÁBITAT NATURAL Y PATOGENIA DE LA INFECCIÓN

El hábitat es el agua y a partir del agua se pueden contaminar

residencias, cuarteles, hospitales…
Este microorganismo resiste Tª de hasta 60º C y se a aislado en
agua fría y caliente, sistemas de aire acondicionado con desagües.
Los aerosoles que se generan en estos ambientes son la principal
fuente de infección. Los pacientes de alto riesgo que pueden adquirir
en enfermedades a través de esta fuente en los hospitales.
Legionella es un parásito intracelular facultativo, se desarrolla en el
interior del citoplasma de células respiratorias, en ella se libera
enzimas como lipasa, nucleasas, fosfatasas y potentes enzimas
proteolíticos que dan lugar a la destrucción celular. En el organismo
humano se replica preferentemente en los macrófagos alveolares.

1.3.- INTERÉS CLÍNICO

La enfermedad de los legionarios es una neumonía aguda

con manifestaciones multisistémicas que pueden presentarse como
brotes epidémicas e infecciones nosocomiales. Tiene principal
influencia en los meses de verano siendo mas frecuente en el hombre
que en la mujer.
El periodo de incubación es de una semana. La enfermedad
comienza con fiebre aguda, mialgia, debilidad y tos no productiva.
Posteriormente comienza los síntomas respiratorios con esputo
sanguinolento o purulento, disnea, dolor pleural, bradicardia, anorexia
y en general un cuadro típico de neumonía atípica. También va
acompañado de síntomas extrapulmonares como confusión,
desorientación, vómitos, nauseas, diarrea…

183
 Microbiología

La radiografía del tórax muestra un filtrado pulmonar y a

menudo derrame pleural. Otras alteraciones analíticas es un aumento
de creatinina, hipolatremia, hipofosforemia y aumento de
transaminasas sin ictericia, aumento de VSG e insuficiencia renal.
Los factores que favorecen la infección son la inmunosupresión,
cirugía reciente, edad elevada y tabaquismo.
Además produce un cuadro semejante a la gripe que se denomina
fiebre de Pontiac, caracterizado por fiebre, tos, mialgia, dolor
torácico, diarrea…

1.4.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

Toma de muestras: Generalmente son respiratorias aunque

también existen muestras extrarespiratorias como liquido peritoneal,
pericardico, exudados de heridas y en ocasiones hemocultivo.
El esputo es una muestra valida para el cultivo de Legionella ya que
no forma parte de la flora normal. Si el paciente no expectora, se
tomara una muestra por broncoscopia.
En el transporte se debe evitar el uso con solución salina porque el
Na inhibe el crecimiento de Legionella.
En cuanto al diagnostico microbiológico destacaremos:
a) Examen directo: se pueden hacer tinciones de gram, giensa,
Jiménez aunque son muy útiles las técnicas de
inmunofluorescencia directa. El hecho la inmunofluorescencia
sea negativa no excluye la enfermedad y es necesario realizar
un cultivo.
b) Pruebas serológicas: principalmente RIA y ELISA el
inconveniente es que no están comercializadas.
c) Técnicas de hibridación de ADN con PCR.

En cuanto a los medios de cultivo el más utilizado es: BCYE – α .

Las placas se incuban a 35º C en atm. De CO2 con humedad, un
mínimo de 7 días algunos laboratorios incuban 2 semanas antes de
desecharlas como -, la identificación de las colonias se hacen
comparándola con una cepa control a las que se dan pases.

1.5.- TRATAMIENTO

Principalmente eritromicina y en ocasiones rifampicina.

2.- GARDNERELLA VAGINALIS

2.1.- INTRODUCCIÓN

184
 Microbiología

Se suelen agrupar en bacilos gram – pero se caracterizan por tener

una pared laminar no típica de gram + y gram –, por tanto, es un
bacilo gram variable, es anaerobio facultativo y oxidasa y catalasa -.

2.2.- HÁBITAT NATURAL E INTERÉS CLÍNICO

Se encuentra en flora vaginal de mujeres sanas de un 20 – 70 %

este microorganismo desempeña un papel importante en el síndrome
de vaginosis bacteriana caracterizado por:
- Exudado vaginal maloliente
- Ph vaginal mayor 4, 5
- Flujo vaginal abundante
- Pruebas de las aminas +. Esta prueba consiste en mezclar una
gota de KOH al 90% con una gota de exudado vaginal y si es +
se aprecia un fuerte olor a pescado podrido.
- Presencia de células CLUE, que son células epiteliales
recubiertas de bacterias.
En vaginosis bacteriana el síndrome se caracteriza por la presencia
de al menos 3 de los síntomas expuestos, también se ha descrito
bacteriemia debido a Gardnerella vaginalis sobre todo en la fiebre
post parto o post aborto. También esta asociado a meningitis
neonatal, peritonitis, abscesos hepáticos e infecciones urinarias.

2.3.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

La toma de muestra se realizara de exudado vaginal y es

preferible la toma de 2 muestras:
- para examen directo
- para cultivo que se realiza entre 48 – 72 h con medios
semiselectivos con agar sangre humana con colistina y ácido
nalidísico.
Para su determinación se utilizan pruebas bioquímicas,
enzimáticos y cromatografiítas acompañados de APIs.

2.4.- TRATAMIENTO

Metromidazol, clindamicina y gentamicina.

3.- STREPTOBACILLUS MOVILIFORMES

Son bacilos gram – pleomórficos y anaerobios facultativos. Se

encuentra en nasofaringe de ratas. El hombre adquiere la infección
por mordedura, arañazos de ratas u otros roedores.
Produce la fiebre de Norverhill que se adquiere tras ingerir leche,
agua u otra comida contaminada.
La fiebre por mordedura de rata consiste en aparición rápida de
fiebre, cefaleas, nauseas y en un 75 % aparecen eritema primero
macular papilar en la palma de la mano y planta del pie.

185
 Microbiología

También puede haber diarreas y en la mitad de los pacientes

poliartritis migratoria.
En ocasiones existen complicaciones graves como neumonías,
meningitis, endocarditis.
Se aísla en hemocultivos y líquido sinovial y crecen en medio
con agar sangre y chocolate a 35º
El tratamiento: penicilina, estreptomicina y tetraciclina.

4.- SPIRILiUM HIMUS

Produce la fiebre de Sodoku, se produce por mordedura de rata y la

sintomatología va a ser igual que el del Streptobacillus moviliformes.

5 CALYNMATOBACTERIUM

Son bacilos gram -, pleomorficos, no móviles y capsulados.

Produce la donovalosis o granuloma inguinal. La enfermedad
se adquiere por vía sexual y se caracteriza por aparición de lesiones
ulcerosas en el área ano genital y algunas veces también en el área
extragenital. La mejor muestra es una biopsia donde se realiza tinción
de giemsa. La donovalosis se caracteriza por la presencia de cuerpos
de Donovan que consiste en reacciones donde el microorganismo
aparecerá como racimos teñidos de azul oscuro o negro en el
citoplasma de células mononucleares.
No existen medios de cultivo eficaces.
Tratamiento es penicilina, tetraciclina y gentamicina.

TEMA 26.-IDENTIFICACIÓN BACTERIANA

1.- PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN

1.1 Epidemiología.(1ª evaluación)

1.2 Morfología.(1ª evaluación)
1.3 Tinciones.(1ª evaluación)
1.4 Pruebas de susceptibilidad.(tema de antibióticos)

2.- SISTEMAS COMERCIALES Y SISTEMAS AUTOMÁTICOS

2.1 Sistemas multipruebas:

• Macrotécnicas: KIA y TSI.
• Microtécnicas: API, Tubos, otros.
• Sistemas rápidos: tiras reactivas, métodos automáticos.

2.2 APIS.
• Introducción.

186
 Microbiología

• Fundamento.
• Material.
• Reactivos.
• Técnica:
1º Preparación de la galería.
2º Preparación del inóculo.
3º Realización de la inoculación.
4º Periodo de incubación.
5º Resultados e interpretación.

API

Es un sistema de 10-20 microtubos que contienen los medios

deshidratados. Se cultivan con una suspensión bacteriana que los
rehidrata. Durante la incubación el metabolismo del microorganismo
origina cambios en el color del medio o bien se produce al añadir
reactivos.
La interpretación de estos cambios se produce mediante tablas de
lectura u otros sistemas automáticos.
Si la practica la realizamos manualmente obtendremos un perfil
numérico que nos servirá para la identificación de microorganismos.
(Ver figura 17.15 y libros de Staphylococos y Enterobacterias)

TEMA 27.- ANTIMICROBIANOS Y PRUEBA DE SENSIBILIDAD A

LOS ANTIMICROBIANOS

1.- CLASIFICACIÓN

2.- CONSIDERACIONES PRÁCTICAS

2.1.- Elección de antibiótocos

2.2.- Controles durante la antibioterapia
2.3.- Fallo en la respuesta
2.4.- Asociación de antibiótocos

3.- ANTIBIÓTICOS EN SITUACIONES ESPECIALES

187
 Microbiología

3.1.- Embarazo
3.2.- Lactancia
3.3.- Antibióticos en insuficiencia renal

4.- DEFINICIONES

4.1.- Antibiótico sensible

4.2.- CMI
4.3.- CMB
4.4.- Coeficiente terapéutico
4.5.- Resistencia

5.- MÉTODOS DE ANTIBIÓTICOS

5.1.- Dilución
- Sólido
- Líquido
5.2.- Difusión. Fuentes de error son debidas a:
- Medio
- Antibióticos
- Microorganismo
- Observador
5.3.- Elucción de discos

6.- RESISITENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS

6.1.- Alteración de permeabilidad

6.2.- Alteración de blanco o diana
6.3.- Inactivación enzimática
6.4.- Reflujo
6.5.- Bloqueo

1.- CLASIFICACIÓN

1.1.- β -LACTÁMICOS

En su estructura química presentan un anillo β -lactámico.

Su mecanismo de acción se basa en la inhibición de la

formación de peptidoglucano componente esencial de la pared
celular. Para ello se fijan a las PDP/PFD (proteínas fijadoras de
penicilina). Su acción suele ser bactericida y los grupos principales
son:
1. Penicilinas
2. Cefalosporinas

188
 Microbiología

3. Carbapenemas
4. Monobactamas
5. INBIL (inhibidores de β -lactamasa)

1.- PENICILINAS

La base se estos compuestos es el 6-amino penicilánico (6-APA).

Dentro de las penicilinas hay varios grupos:

a. Penicilina G y V: Se suelen administrar oralmente. Son útiles
para gram positivos como neumococo, streptococo, strptococo
pyogenes, anaerobios, espiroquetas y enterococo. No es activa
frente a enterobacterias. Presenta baja toxicidad y se asocian a
procaína y benzatina para prolongar la semivida plasmática
(concepto de tiempo de activación de los Ab en el organismo),
también se puede unir al probenecid que bloquea su excreción
por los túbulos renales.
b. Aminopenicilinas: Se destacan la ampicilina y amoxicilina.
Son de amplio espectro (pueden actuar sobre gram positivos y
gram negativos). Actúan bien sobre enterobacterias aparece
resistencia en cepas de Escherichia coli.
c. Isoosazolil: Son penicilinas resistentes a penicilasas y son muy
útiles como tratamiento de elección para Staphylococos aureus.
Las principales son: oxacilina, cloxacilina y meticilina.
d. Carboxipenicilinas: Se recomiendan para gram negativos,
principalmente para Enterobacterias y Psudomonas. La principal
es la carbenicilina.
e. Ureidopenicilinas: Muy utilizado frente a enterococos y
streptococos, destacando la piperacilina.

2.- CEFALOSPORINAS

El núcleo es el 7-aminocefalosporamico (7-ACA)

Proceden de productos de fermentación de hongos del genero

Cefalosporium cuyo anillo básico es el anterior.
Se clasifican por generaciones estando en desarrollo la 4ª generación;
a. 1º generación: actúan sobre gram + y tiene una acción
moderada sobre gram -. Destacan: cefalotina y cefactor.
b. 2º generación: útiles sobre gram – y algunos anaerobios.
Destacan cefoxitina y cefamandol.
c. 3º generación: aunque disminuye su actividad sobre gram +
aumenta sobre gram -. Destaca Cefotaxima. Hoy existen
preparados activos sobre vía oral como cefixima.

3.- CARBAPENEMAS

El principal es IMIPENEM. Tiene la siguiente estructura:

189
 Microbiología

Es inestable y destruido por dihidropeptidasas renales por lo

que se une a lafilaxtatina para evitarlo. Tiene un gran espectro de
acción generalmente todos los cocos gram + y gram -, bacilos gram
+, anaerobios y la mayor parte de enterobacterias y algunas
pseudomonas son sensibles a él.
Es resistente a Staphilococo Aureus y no se absorbe por vía oral.

4.- MONOBACTAMAS:

Son derivados monociclicos cuyo principal representante es

aztreonam cuya formula es:

Se caracteriza por tener un espectro más reducido siendo activo solo

gram – especialmente pseudomonas y enterobacterias

5.- INBIL

Inhibidor de β -lactamasa. Su actividad antimicrobiana es reducida

pero su unión irreversible sobre algunos β -lactamasa impiden que
estos destruyan los Ab β -lactámicos por lo tanto estos inhibidores
suicidas deben ir asociados a otros Ab β -lactámicos proporcionando
un aumento de su espectro. Destaca el Ácido clavulanico, cuya
estructura es:

1.2.- INHIBIDORES DE LA SÍNTESIS PROTEICA

Antibióticos que actúan sobre la subunidad 30s de los ribosomas

• Aminoglucósidos: Son antibióticos naturales y semisintéticos.

Son potentes bactericidas y pueden derivar de Streptomyces o
Micromonospora (son hongos). Los principales aminoglucosidos
son: Streptomicina, Gentamicina, Trobamicina,
Neomicina, Amikacina.
El mecanismo de acción se centra en el ribosoma en la
subunidad 30s, produciéndose una inhibición de la síntesis
proteica o proteínas defectuosas por error en la lectura del
ARNm. Son muy activos sobre gram – entre ellos Psudomonas,
Acinetobacter y sobre gram + como Staphylococo aureus.
Pueden presentar sinergismo con β -lactámicos, con los que
frecuentemente se asocian.
Las reacciones adversas más importantes son toxicidad renal y
auditiva.

• Tretraciclinas: Son antibióticos de amplio espectro

bacteriostático que se unen a la subunidad 30S del ribosoma
inhibiendo la síntesis proteica.

190
 Microbiología

La más utilizada es la Doxiciclina que presenta un amplio

espectro sobre gram – y + (Ej: Brucella, Vibrio, Micoplasma,
Micobacterium, Clamidia, etc.).
En la actualidad el nivel de resistencia de Neumococos y
Enterobacterias es elevado.
No se utilizan en niños menores de 8 años ya que pueden afectar a
la dentición y huesos. Pueden provocar trastornos gastrointestinales y
hepáticos.

5 6 7
Tetraciclina CH2OH
Clortetracicli CH2OH Cl
na
Doxicilina OH CH3

Antibióticos que actúan sobre la subunidad 50s de los ribosomas:

• Cloranfenicol: Su acción se sitúa en la subunidad 50s del

ribosoma, impidiendo la transpeptidación. Su espectro abarca
gram – y + (Ej: anaerobios, espiroquetas, micoplasmas, etc.),
aunque se suelen reservar para infecciones graves ya que
produce toxiinfección medular.

Si: R es NO2 --------- > Cloranfenicol.

R es CH2-SO2----> Tranfenicol

• Macrólidos: Dentro de este grupo tenemos dos

principalmente:

- Eritromicina, que procede de Streptomyces. Es un

antibiótico de medio espectro que actúa a nivel de la
subunidad 50s impidiendo la transpeptidación y
translocación, inhibiendo la elongación de la cadena
proteica. Su espectro abarca gram + , Micoplasma,
Trachomatis, Legionella, siendo resistentes las
Enterobacterias.
- Clindamicina, es un antibiótico frente a anaerobios y su
espectro, mecanismo de acción y farmacología es
parecida a los macrólidos. Se considera por esto
compuesto similar a los macrólidos.

1.3.- QUINOLONAS Y FLOXACINAS

Son quimioterápicos que se obtienen por síntesis química; su

mecanismo de acción se basa en la inhibición de la ADN-girasa,
enzima necesaria para la duplicación del ADN.

191
 Microbiología

Son bactericidas.
El primero que se introdujo fue el ácido nalidíxico como antiséptico
de vías urinarias.
La norfloxacina supuso una ampliación de espectro sobre gram
positivos y pseudomonas.
La Ciprofloxacina se puede utilizar en infecciones distintas de las
vías urinarias debido a la buena concentración que alcanza en los
tejidos. Presenta buena actividad sobre parasitos intracelulares y
amplio espectro. Puede actuar sobre Rickettsias, micobacterias,
parásitos intestinales y genitales. Se puede utilizar por vía oral. El uso
desmedido de las quinolonas llevan a un aumento de la resistencia.

R1 R2 R3
Ac. Nalidíxico -CH2-CH3 H CH3
Norfloxacina -CH2-CH3 F
Ciprofloxacinol F

1.4.- GLUCOPÉPTIDOS

Destacan la vancomicina y teicoplamina. Tienen actividad

sobre los gram positivos. Presentan toxicidad renal y ótica y no se
absorben por oral. Están reservados para infecciones por gram
positivos resistentes. Su mecanismo de acción se dirige contra la
formación de la pared celular inhibiendo la síntesis de
peptidoglucanos.

1.5.- SULFAMIDAS Y TRIMETROPRIM

Ambos inhiben a distintos niveles la síntesis de ácido fólico. Se

utiliza el trimetroprim-sulfametoxazol
Las sulfamidas derivan del paraaminobencenosulfamida cuya
estructura es:

Suele administrarse por vía oral. No se utiliza en neonatos

porque compite con la bilirrubina. Presenta un amplio espectro que
comprende gram positivos, gram negativos, actinomicetales,
clamidias y algunos parásitos como toxoplasma, plasmodium, etc.

1.6.- NITROIMIDAZOLES

Destaca el metroimidazol que es bactericida. Actúa sobre el

ADN y es útil sobre anaerobios y algunos parásitos como triquina,
tricomonas y entamoeba.

1.7.- OTROS ANTIBIÓTICOS

 Nitrofurantoína: es un antiséptico de vías urinarias y

actúa sobre gram positivos y gram negativos.

192
 Microbiología

 Ácido fusídico: actúa sobre Staphylococos aureus

 Rifampicina: esun antituberculoso; también actúa contra
el meningococo, gonococo, clamydias y haemophylus.
 Fosfomicina: de origen español, de amplio espectro que
actúa a nivel de la pared celular.

2.- CONSIDERACIONES PRÁCTICAS

2.1.- ELECCIÓN DEL ANTIBIOTICO

Para elegir un fármaco hay que tener en cuenta:

- microorganismo
- condiciones de la infección
- condiciones del paciente

Siempre que sea posible, el tratamiento debe ser elegido o iniciado

sólo después de que se haya determinado el agente etiologico; esto
nos obliga a un conocimiento de los principales gérmenes implicados
en infecciones específicas así como el Ab más específico para cada
gérmen.
Un punto importante a tener en cuenta son las condiciones del
paciente. Tenemos que considerar la posible historia de
hipersensibilidad, estado inmunitario, función hepática y función
renal. Una vez determinadas dichas condiciones debemos elegir el Ab
que debe cumplir los siguientes requisitos:
- ser el más activo y específico, a ser posible bactericida
- menos tóxico
- más barato

2.2.- CONTROL DURANTE LA ANTIBIOTERAPIA

Son necesarios debido a la aparición de efectos secundarios.

Estas medidas son más necesarias en aquellas condiciones en las que
se prevea un mayor riesgo por edad, alteración hepática, renal, etc.
Estas medidas incluyen controles químicos, hematológicos,
bioquímicos, bacteriológicos, etc.

2.3.- FALLOS DE RESPUESTA

Ante este problema se debe plantear de nuevo toda la

sistemática relacionada con la elección del Ab. Si las causas son:
a. Debidas al germen:
- Que no sea el agente etiológico
- Que presente resistencia
- Que haya sobreinfección (haya más de un
microorganismo implicado en la infección)
b. Debidas al antibiótico:
- Que no sea el Ab adecuado para el germen
- Que no sea la vía de administración adecuada

193
 Microbiología

- Que no sea la dosis adecuada

c. Debidas a características del paciente o de su infección:
- Presencia de cuerpos extraños
- Acceso insuficientemente drenado (la sangre no llega al
lugar de infección)
- El paciente no cumple el tratamiento

2.4.- ASOCIACIÓN DE ANTIBIOTICOS

Los objetivos que se persiguen con la asociación de Ab son:

 Aumento del espectro bacteriano
 Evitar la aparición de resistencias
 Conseguir efectos selectivos
Es importante escoger antibióticos con distintos mecanismos de
acción, cuya acción tenga un efecto sinérgico a ser posible
bactericida. Se deberán administrar por separado y cada uno en su
dosis terapéutica.

3.- ANTIBIÓTICOS EN SITUACIONES ESPECIALES

3.1.- EMBARAZO

Las reglas generales para el uso de Ab en gestación es el siguiente:

a) Contraindicación absoluta de drogas antivirales.
b) Evitar medicamentos nuevos.
c) Evitar fármacos en el 1º trimestre.
d) Emplear el menor nº de fármacos en los meses siguientes.

Se considera siempre contraindicado:

- antiviricos
- medicamentos nuevos
- tetraciclinas

Se suele utilizar ampicilina, eritromicina y miconazol.

3.2.- LACTANCIA

En la leche materna se alcanzaran niveles similares a los

sanguíneos con el uso de cloranfenicol, eritromicina, sulfamida y
tetraciclinas.

3.3.- ANTIBIÓTICOS EN INSUFICIENCIA RENAL

En pacientes con insuficiencia renal se debe evitar los Ab mas

tóxicos y los de eliminación exclusivamente renal.

4.- CONCEPTOS

194
 Microbiología

4.1.- ANTIBIÓTICO SENSIBLE

Cuando un determinado Ab alcanza niveles plasmáticos iguales a la

CMI en el lugar de la infección.

4.2.- CMI

La mínima cantidad de antibacteriano que inhibe el crecimiento.

- C= concentración
- M= mínima
- I= inhibitoria

4.3.- CMB

Es la concentración mínima bactericida (mata al microorganismo)

4.4.- COEFICIENTE TERAPÉUTICO

Es la relación entre la concentración en el lugar de la infección y CMI

4.5.- RESISTENCIA

Es cuando no inhibe el crecimiento.

5.- MÉTODOS DE ANTIBIOGRAMAS

5.1.- DILUCIÓN

 MEDIO LIQUIDO

 Material: tubos estériles, tubos estériles de 13 cm. de

largo, 1 cm. de diámetro con tapón de rosca, pipetas y
estufa de cultivo.
 Reactivos: solución madre de antimicrobiano, caldo
Müeller-Hinton, indicador de pH, suspensión del
microorganismo que va a ser un inoculo estándar por la
técnica de Kyrby Bauer a 0,5 por la escala de Mc Farlan.
 Técnica:
1.- Preparar diluciones de antimicrobiano a partir de la
solución madre por el caldo de Müeller-Hinton.
2.- Se coloca en una serie de tubos de rosca 1 ml de cada
solución de antimicrobiano e inoculamos con 1 ml de
suspensión de microorganismo.
3.- Incubamos 37 º C 18 – 24 h.
 Resultados e Interpretación: Tras la incubación se debe
observar la proliferación bacteriana en cada tubo de la
serie. Esta se puede detectar mediante:

195
 Microbiología

a) Turbidez en el medio
b) Viraje de color en el medio si hemos añadido un
indicador de pH.
 Observaciones al método: Las principales desventajas de
este método son las diluciones y no se detectan posibles
contaminaciones.
 MEDIO SÓLIDO

 Material: tubos estériles, tubos estériles de 13 cm. de

largo, 1 cm. de diámetro con tapón de rosca, pipetas,
estufa de cultivo y placas de petri.
 Reactivos: solución madre de antimicrobiano, caldo
Müeller-Hinton, indicador de pH, suspensión del
microorganismo que va a ser un inoculo estándar por la
técnica de Kyrby Bauer a 0,5 por la escala de Mc Farlan.
 Técnica:
1.- Preparar en tubos de ensayo distintas diluciones a
partir de la madre.
2.- A partir de estas se coloca en otra serie de tubos una
parte de solución antimicrobiana por cada 9 de medio de
cultivo.
3.- Si se utiliza la técnica de Barry de inoculación se
coloca 1 ml de la suspensión de microorganismo, se vierte
el contenido de cada tubo sobre una placa de petri y se
deja solidificar. Si no se utiliza la técnica de Barry se
inocula por cualquiera de las otras técnicas.
4.- Incubar a 37 º C 18 – 24 h
 Resultados e interpretación: Tras la incubación se vera el
crecimiento en cada placa y la menor concentración de
antimicrobiano capaz de inhibir el crecimiento
corresponde a CMI.
 Observaciones al método: Las desventajas son las
mismas que en el caso anterior. Para gérmenes exigentes
debemos sustituir el agar Mueller Milton por medios
enriquecidos, por ejemplo agar sangre y chocolate.

5.2.- DIFUSIÓN CON DISCOS

 Fundamento: Se realiza introduciendo discos de

antimicrobianos sobre cultivos en placas, la difusión del mismo
a través del medio produce un halo de inhibición de crecimiento
cuyo diámetro será proporcional a la potencia del
antimicrobiano.
 Material: placa de petri estériles de 9 o 15 cm de diámetro,
pipetas estériles de 10-20 ml o dosificadores, pinzas o
dispensador y regla de precisión.
 Reactivos: agar Müeller-Hinton, discos antimicrobianos y
suspensión del microorganismo.
 Técnica:

196
 Microbiología

1.- El medio para el antibiograma es Mueller-Hinton, se hace la

preparación y estandarización del inóculo por la escala de Mc
Farlan.
2.- Se hace el vertido en placa.
3.- Se siembra el microorganismo (no aislamiento)
4.- Elección del antibiótico. Debe seleccionarse un
representante de cada grupo, debemos tener en cuenta para
elegirlos:
- Lugar de la infección.
- Bacteria a investigar.
- Características tintoriales del germen.
5.- Implantación de discos que puede ser normal o automático
por el sistema multidisco.
Método manual
Se extrae cada disco con unas pinzas estériles y se sitúa en el
medio, teniendo en cuenta:
- la distancia mínima entre discos debe ser de 24 mm. para
evitar superposiciones de halos.
- se situarán a un mínimo de 15 mm. de los bordes.
Con estas dos premisas en cada placa de 9cm. de diámetro se
colocan como máximo 6 discos y en las de 15cm. de diámetro
12 discos.
Una vez depositado cada disco se debe presionar ligeramente
con las pinzas para que el disco se fije al agar.
6.- Incubar 18-24 horas a 35-37ºC
7.- Interpretamos los resultados según el halo de inhibición de
cada disco.
 Resultados e Interpretación: Cuando el crecimiento de la placa
es débil nos podemos ayudar con la reflexión de los rayos de la
luz. Si se trata de Proteus la aparición de una ligera niebla sobre
los halos no se tiene en cuenta. En ocasiones en los halos de
sulfamidas se produce un falso crecimiento que no se
considera, se debe a elementos antagonistas.
Debemos tener en cuenta el tipo de medio (pH y composición) y
las dimensiones y concentración de los discos antimicrobianos.
Una vez puesto el disco no se puede mover.
Fuentes de error.
Pueden ser debidas:
1.- Al medio:
• Al mal estado del medio.
• A que no haya un ajuste de pH del medio.
• Volumen inadecuado de la placa.
2.- Al antibiótico:
• Mala conservación del antibiótico.
• Error en el tiempo de demora de la inoculación.

3.- Al microorganismo:
• Exceso de inóculo.
• Utilización de cultivos viejos.

197
 Microbiología

• Inoculación de más de un microorganismo.

• Excesiva demora en la siembra.
• Condiciones de inoculación inadecuadas.

4.- Al observador:
• En la lectura (en la medida).
• Interpretación.
• Demora de lectura.

5.3 ELUCIÓN DE DISCOS

Se realiza introduciendo discos con antimicrobiano en caldo,

éste eluye el disco y alcanza una concentración conocida. Se inocula
seguidamente y conociendo la metodología anterior se obtiene la
CMI.
Es un método poco útil por lo que se suele utilizar la técnica de
difusión.

6.- RESISTENCIA DE LOS ANTIMICROBIANOS

6.1.- ALTERACIÓN DE LA PERMEABILIDAD

Impide que el agente penetre en la bacteria. Es el mecanismo más

frecuente.

6.2.- ALTERACIÓN DEL BLANCO DIANA

Lugar donde debe actuar el antibiótico.

6.3.- INACTIVACIÓN ENZIMÁTICA

6.4.- REFLUJO

Aunque penetra el antibiótico es excretado de nuevo al exterior.

6.5.- BLOQUEO

Impide el paso del antimicrobiano.

198
 Microbiología

TEMA 28.- MICOLOGÍA I

1.- INTRODUCCIÓN

2.- CLASIFICACIÓN

2.1.- Zigomicetos
2.2.- Ascomicetos
2.3.- Basidiomicetos
2.4.- Deuteromicetos

3.- MECANISMOS DE PATOGENICIDAD

3.1.- Hongos patógenos verdaderos

3.2.- Hongos oportunistas

4.- AISLAMIENTO Y MEDIOS DE CULTIVO (Saboraud)

5.- TÉCNICAS DE CULTIVO

6.- IDENTIFICACIÓN MORFOLÓGICA

6.1.- Análisis microscópico

6.2.- Análisis macroscópico

7.- IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA

7.1.- Auxonograma
7.2.- Zimograma

8.- ANTIFÚNGICOS

199
 Microbiología

1.- INTRODUCCIÓN

Los hongos son microorganismos eucariotas, heterótrofos y de

vida saprófita o parasitaria. Pueden crecer como células aisladas
(levaduras ) o como filamentos multinucleares (hongos filamentosos
con estructura miceliar)
Algunos hongos patógenos para el hombre son dimórficos,
pueden crecer como levaduras o como hongos filamentosos
(generalmente las levaduras son parásitos).
Los hongos no presentan diferenciación entre raíces y tallos, se
denominan talófitos, y dado su carácter eucariota las células fúngicas
se asemejan a las células animales y vegetales.
Poseen varios cromosomas rodeados de membrana nuclear.
La pared celular de los hongos está formada por:
- polisacáridos cristalinos (quitina) que le da rigidez y que son
responsables de su forma.
- polisacáridos amorfos (mananos y glucanos) que actúan como
sustancias de sostén.
Algunos hongos poseen cápsula con propiedades antifagocitarias e
inmunológicas.
Las levaduras son hongos unicelulares que salvo raras
excepciones se reproducen por gemación. Poseen morfología esférica
y elíptica y miden de 3-10 µ m de longitud.
La unidad estructural de los hongos filamentosos son las hifas
que poseen un diámetro de 3-12 µ m y pueden tener varios
centímetros de longitud. Un conjunto de hifas entrelazadas
constituyen el micelio que se hace macroscópicamente visible como
una colonia fúngica.
En el medio se distinguen dos partes:
- una parte que pentra en el medio de cultivo y se extiende por la
superficie siendo la responsable de la nutrición (micelio
vegetativo).
- otra parte que se proyecta siempre en la superficie y contiene
esporas (micelio aereo o reproductor).

200
 Microbiología

2.- CLASIFICACIÓN

Clase Reproducci Ejemplo Reprodució Morfología

ón sexual n asexual microscopi
ca
Zigomicetos zigosporas Rhizopus Esporangios Micelio sin
poras dentro tabiques o
de septos
esporangios
Acomicetos Ascosporas Estado Esporas Micelios con
en el teleomorfo externas o tabiques o
interior de de la gran conidias son
ascas mayoría de levaduras
hongos Ej:
Aspergillus
Basidiomice Basidiospor Estado Esporas Micelio con
tos as en la teleomorfo externas o tabiques o
extremidad de C. conidias son
de basidios neoformas levaduras
Deuteromic Desconocid Hongos Esporas Micelio con
etos a imperfectos externas o tabiques o
verdaderos conidias son
y estado levaduras
anamorfo
de todos los
hongos

Los hongos se reproducen por esporas, de forma que el tamaño

de las mismas y la forma de esporulación permite clasificar e
identificar los hongos.
Las esporas pueden reproducirse de forma sexual o asexual. Los
hongos que poseen reproducción sexual se denominan hongos
perfectos y el estado de reproducción sexual teleomorfo. Los hongos
que no poseen reproducción sexual que se desconoce son hongos
imperfectos y al estado de reproducción se le denomina estado
amorfo.

3.- MECANISMOS DE PATOGENICIDAD

Las dos principales barreras fisiologicas para el crecimiento de

los hongos en los tejidos humanos son la temperatura y el potencial
redox.
La mayor parte de los hongos crecen de forma óptima a temperaturas
más bajas que el organismo.
Es importante distinguir entre:
a. Hongos patógenos verdaderos, causantes de micosis sistémicas
en las cuales la capacidad de adaptación es bastante elevada y

201
 Microbiología

se manifiesta por dimorfismo, ejemplo, Histoplasma y

Blastomyces.
b. Hongos oportunistas, causantes de micosis sistémicas menos
virulentas.

La actividad patógena de los hongos depende de la capacidad para

adaptarse a los tejidos y resistir a las defensas celulares. En el
transcurso de una infección fúngica, la inmunidad celular es la que
lucha contra el invasor, mientras que la inmunidad humoral tiene
menos importancia.

4.- AISLAMIENTO Y TÉCNICAS DE CULTIVO

En general un medio de cultivo para hongos debe llevar una

fuente de carbono y nitrógeno , un soporte sólido (agar) y un
indicador de pH.
Los principales medios son:
a. Como medios general, agar Saboreaud.
b. Como medio de aislamiento, agar Saboreau-cloranfenicol y
agar Nickeson (para aislamiento de Candida albicans)
c. Medios con fines específicos, enriquecidos con sangre y
vitaminas para identificación bioquímica (auxonograma).
La siembra se realiza igual que la de las bacterias y las condiciones
de cultivo suelen ser de:
- 20-25ºC para micosis superficiales
- 37ºC para micosis profundas.
El tiempo de incubación es variable:
- Levaduras crecen de 2-3 días
- Hongos oprtunistas como Aspergillus y Penicilium crecen en 2-4
días
- Mayoría de hongos patógenos de 6-15 días

5.- TÉCNICAS DE CULTIVO

Además de las técnicas de cultivo ya conocidas tenemos:

Microcultivos sobre portaobjetos

 Fundamento: En ocasiones es necesario el estudio

microscópico de los hongos en su estado natural para su
identificación.
 Material: Pipetas estériles, portas, cubres y asas de
siembra.

202
 Microbiología

 Reactivos: Agar Saboraud, agua y azul de lactofenol.

 Técnica: Se denomina técnica del portaobjetos modificada
por Simón y Collado.
1.- Con una pinza sumergir un porta limpio en alcohol y
pasar por la llama.
2.- Dejar enfriar asépticamente en una placa de petri
estéril
3.- Depositar en los bordes de la placa de petri unas gotas
de agua para mantener la humedad adecuada.
4.- Con una pipeta estéril se deposita de 0.5-1 ml de agar
Saboreaud sobre la superficie del porta a 45ºC.
5.- Extenderlo por el método de la cuña y dejar solidificar.
6.- Se siembra tocando el asa cargada en el centro del
porta.
7.- Incubar
8.- Una vez desarrollado el hongo se añaden 1-2 gotas de
azul de lactofenol. Se coloca un cubre y se observa al
microscopio.

6.- IDENTIFICACIÓN MORFOLÓGICA

6.1.- ANÁLISIS MACROSCÓPICO

En primer lugar se valora la ubicación de la lesión.

Posteriormente se observa el aspecto típico del cultivo para su
identificación.
 Los hongos unicelulares crecen formando una capa algodonosa
o aterciopelada en la que se estudia la morfología y
pigmentación.
 Las levaduras presentan aspecto cremoso similar al de las
bacterias.
 Los hongos dimórficos pueden desarrollar ambos tipos de
colonias, en general presentan forma miceliar cuando se
incuban a 25-30ºC y forma levaduriforme cuando se incuban a
37ºC.

6.2.- ANÁLISIS MICROSCÓPICO

 Material: pipeta, cubre, asa y m/o.

 Reactivos: solución aclaradora (KOH) al 10-30%, lo que facilita
la disolución de otras células y fibras para conseguir el producto
patológico en buenas condiciones, azul de lactofenol.
 Técnica:
1.- Examen directo en fresco sin aclaramiento: Se utiliza
para productos patológicos fluidos.

203
 Microbiología

2.- Examen para productos patológicos tras

aclaramiento: Se utiliza para productos patológicos sólidos (Ej:
pelos, escaras, etc.).
1º Colocar una muestra sobre un porta limpio.
2º Añadir una gota de solución aclaradora
3º Tapar con un cubre y secar suavemente a la llama de un
mechero 2-3 minutos. La queratina de la muestra se disolverá.
4º Posteriormente observaremos al m/o.
3.- Examen directo tras coloración:
1º Colocar una gota de azul de lactofenol sobre un porta.
2º Emulsionar la muestra sobre la gota del colorante. Si se
realiza un cultivo se toca con el asa humedecida en agua
estéril, la colonia se arrastra.
3ºColocar un cubre y observar al m/o.

7.- IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA

Son pruebas complementarias al estudio morfológico, se utilizan

para el estudio de levaduras patógenas y las principales son:
- Auxonograma
- Zimograma

7.1 AUXANOGRAMA

 Fundamento: Son pruebas en las que se estudia la identificación

de sustratos carbonados o nitrogenados. El crecimiento de las
levaduras en presencia de estos sustratos indicará la
asimilación delos mismos. De los dos tipos de auxonogramas el
más utilizado es el de hidratos de carbono.
 Material: tubos de ensayo, placa de petri, discos, dosificador,
estufa de cultivo.
 Reactivos: agar base levadura, solución de azúcar al 20% en
agua destilada (se recomienda 12 azucares), suspensión de
levadura en solución salina ajustada al patrón nº 1 de la escala
de McFarlan.
 Técnica: (Utiliza los hidratos de carbono por vía oxidativa).
1.- Inocular el medio de cultivo por la técnica de Barry.
2.- Se impregna cada disco con 2 gotas de solución de azúcar
correspondiente y se desecan en estufa.
3.- Se colocan los discos en la placa.
4.- Se incuba a 37ºC 24-48 horas.
 Resultados: Alrededor de los discos se formará una zona de
crecimiento.

7.1 ZIMOGRAMA

204
 Microbiología

 Fundamento: Es una prueba de fermentación de azucares, la

cual se detecta por producción de gas, es complementaria al
auxonograma.
 Material: tubo de ensayo, pipeta 10 ml., algodón graso,
campana de Durham, pipeta pasteur, asa y estufa de cultivo.
 Reactivos: caldo de fermentación para levaduras, solución de
distintos azucares al 20%, suspensión de levaduras en solución
salina ajustada al patrón nº 1 de la escala de McFrlan.
 Técnica:
1.- Preparar una batería de 6 tubos con 9 ml. de caldo.
2.- Añadir 0.5 ml. de solución salina y colocar una campana de
Durham.
3.- Esterilizar e inocular añadiendo a cada tubo una gota de
suspensión de levadura y homogeneizar.
4.- Incubar a 30-37ºC durante 24-48 horas.
 Resultados: La presencia de burbujas en la campana de Durham
será indicativo de fermentación.

8.- ANTIFÚNGICOS

Para el tratamiento de las micosis se dispone de un número

reducido de fármacos:
♣ Anfotericina B: muy utilizado en micosis sistémicas. Los
fármacos se unen a la membrana celular del hongo
aumentando su permeabilidad. Inconveniente: efectos tóxicos
que pueden ser muy graves.
♣ 5-Fluorcitoxina: es un antifúngico sintético. Se absorbe por vía
oral y es una pirimidina fluorada. Es eficaz en el tratamiento de
pocas micosis, actúa inhibiendo al síntesis de ácidos nucleicos.
♣ Derivados azólicos: Miconazol, Clotimazol, Ketoconazol,
Fluconazol, Itraconazol. Su acción se debe a la inhibición de
a síntesis de esteroles en las membranas celulares. En la
actualidad se utilizan casi exclusivamente para Cándida o
Cryptococus.

En algunos casos han aparecido resistencias para el tratamiento

único de 5-fluorcitoxina.

205
 Microbiología

TEMA 29.- MICOSIS II

Existen más de 50.000 especies de hongos diseminados por el

suelo, aire y agua, de los cuales sólo 175 están relacionados con
infecciones en seres humanos.
Las micosis humanas las podemos clasificar en :
♣ Micosis oportunistas.
♣ Micosis sistémicas.
♣ Micosis subcutáneas.
♣ Micosis cutáneas o superficiales.

1.- MICOSIS OPORTUNISTAS

Actúan principalmente sobre individuos inmunodeprimidos. Los

hongos oportunistas más importantes son:

1.1.- CÁNDIDA ALBICANS

La forman hongos levaduriformes y se multiplican por

gemación. Está dentro del género Candida aunque existen otras
especies (ver cuadro 30.1 de fotocopias)
Puede encontrarse como flora comensal de distintas partes del
cuerpo como piel, vagina, tubo digestivo, etc.
Candida albicans causa infecciones en individuos
inmunodeprimidos como neonatos y diabéticos.
En mujeres es frecuente la vaginitis, produciendo
enrojecimiento y secreción vaginal. Suele suceder en mujeres
sometidas a tratamientos prolongados con antibióticos, diabéticas,

206
 Microbiología

por embarazo y uso de anticonceptivos orales. También se denomina

candidiasis vulvovaginal.
En neonatos es frecuente la candidiasis mucocutánea que
puede dar lugar a unas placas en la mucosa bucal, dando la lengua
un aspecto lechoso y blanquecino, son las que se denominan placas
de Muguet, pueden ser frecuentes en niños mal nutridos.
También aparecen las denominadas aftas que son parecidas a
las placas de Muguet y que se han asociado a personas sometidas a
tratamientos de quimioterapia o antibióticos durante largo periodo de
tiempo, también se ha asociado a avitaminosis, sobretodo de la
rivoflamina.
Se desarrolla en la mayor parte de pacientes con SIDA dando
candidiasis orofaringea y un alto porcentaje de los mismo s puede dar
esofagitis candidiasica.
La erradicación de Candida albicans de la mucosa oral es difícil y las
reinfecciones son frecuentes, especialmente en pacientes leucémicos
y transplantados pudiendo producir una infección diseminada de
desenlace fatal. Los órganos implicados pueden ser hígado, riñón y
pulmón.
En pacientes con catéteres venosos y urinarios Candida
albicans puede producir endocarditis (se asocia a drogadictos),
infecciones urinarias, tromboflebitis y osteomelitis.
También se puede producir candidiasis broncopulmonar como
complicación de un proceso broncopulmonar.
Si Candida albicans pasa sangre puede dar candidiasis sistémica.
Candida albicans se diferencia bien de otras especies de
Candidas porque en suero produce túbulos germinales (hifas) cuando
se incuba a 37ºC (dimorfismo), esto se conoce como la prueba o test
de la filamentación.

1.2.- CRYTOCOCCUS NEOFORMANS

Es un hongo levaduriforme característico por presentar una

gran cápsula, la presencia de ésta permite el diagnóstico directo a
través de muestras clínicas (suero y LCR) con tinta china y
aglutinación en látex.
Cryptococcus neoformans es un hongo ampliamente distribuido
por la naturaleza, puede producir neumonías, en pacientes con SIDA,
da meningitis e infecciones diseminadas.
Una vez que pasa al sistema sanguíneo puede afectar a distintas
vísceras y SNC.

1.3.- ASPERGILLUS

Aspergillus= a cepillo. Destaca Aspergillus níger que es el

agente etiológico de otomicosis. También destaca Aspergillus
fumigatus y Aspergillus flavus que causan infecciones pulmonares.

207
 Microbiología

El aire contiene conidias de Aspergillus por lo que la vía normal

de entrada al organismo es a través del tracto respiratorio pudiendo
provocar fiebre, disnea, dolor pleural, tos seca, etc.
Puede haber complicaciones a nivel de las paredes de los vasos
sanguíneos produciendo trombosis o incluso originar graves
hemorragias.
Se encuentra en el suelo y materia orgánica en descomposición.

1.4.- ZIGOMICETOS

Los géneros de mayor interés son Rhizopus, Absidia y Mucor.

Son hongos filamentosos que se caracterizan por poseer
grandes hifas no tabicadas que se reproducen de forma asexual por
esporangioesporas contenidas en vesículas especiales denominadas
esporangios.
Los Zigomicetos son agentes etiológicos de zigomicosis o
mucomicosis, infecciones graves en las que el hongo invade paredes
arteriales y avanza produciendo embolias y necrosis.

2.- MICOSIS SISTÉMICAS (hongos patógenos verdaderos).

Se caracterizan por su dimorfismo (fase miceliar a 25ºC y

levaduriforme a 37ºC) y presentan una distribución geográfica
restringida.

2.1.- HISTOPLASMA CAPSULATUM

Es el agente etiológico de la histoplasmosis americana. Se trata

de una infección del sistema retículo endotelial que se adquiere por
vía respiratoria, el principal órgano afectado es el pulmón desde
donde se puede diseminar a órganos más profundos.
La variedad africana es Histoplasma capsulatum var. duboisii
que difiere de la americana en producir menor implicación pulmonar,
siendo frecuente las lesiones cutáneas, subcutáneas y óseas.

2.2.- BLASTOMYCES TIPIDIS

Causa la blastomicosis, que es una infección granulomatosa

crónica principalmente en Estados Unidos y África.
La infección primero afecta al pulmón y se disemina a otros
órganos principalmente la piel. Es semejante a Blastomyces
dermatiditis. Es dimórfico.
2.3.- COCCIDIOIDES IMMITIS

Se da en Estados Unidos y América latina, dando infecciones

respiratorias a nivel pulmonar que pueden extenderse a piel,
estructura ósea y SNC.

208
 Microbiología

2.4.- PARÁCOCCIDIOIDES

Afecta al pulmón. La principal variedad es la braliensis.

3.- MICOSIS SUBCUTÁNEA

3.1.- SPOROTHRIX SCHENKII

Produce la esporotricosis, es una infección granulomatosa crónica del

tejido subcutáneo.

3.2.- MICETOMA

Son lesiones crónicas localizadas en la piel, tejido subcutáneo y

el hueso. Pueden estar causadas por bacterias y hongos. Un gran
número de especies pueden dar micetomas.

3.3.- CROMOMICOSIS

Es una infección progresiva granulomatosa producida por hongos

negros.

3.4.- LOBOMICOSIS

Enfermedad producida por Loboa loboi.

4.- MICOSIS CUTÁNEAS Y SUPERFICIALES (TIÑAS)

Son dermatofitos. Son hongos causantes de infecciones en las

porciones queratinizadas de la piel (pelos, uñas…) y que pertenecen a
los géneros Epidermophyton, Microsporum y Trichophyton.
Cuando se observa con KOH los pelos, uñas o escamas de la
piel aparecen como filamentos tabicados ramificados.
La prevalencia de la dermatofitosis en los distintos países varía
no solo con la distribución geográfica sino también con el clima,
estado inmunológico, nutrición y condiciones higiénicas de la
población.
En muchas ocasiones las especies están adaptadas al hombre y
no son capaces de infectar a animales. La infección humana se
transmite por contacto directo o indirecto (piscinas, cuarto de
baño…), estas especies se denominan antropofilicas. Otros
dermatofitos tienen como huésped animales y de ellos pueden
transmitirse al hombre, son especies zoofilicas. Y otras menos
frecuentes se contagian del suelo y reciben el nombre de geofilicas.
A los dermatofitos se le asocian unos cuadros clínicos
denominados dermatofitosis o tiñas que se describen
tradicionalmente con una base anatómica regional mas que una base
etiológica causal; ej.:

209
 Microbiología

- tiña corcoris: infección de la piel en todo el cuerpo

- tiña barbare: infección de la barba
- tiña capitis: infección del cuero cabezudo, cejas y pestañas
- tiña pedis: infección de los pies

Otros hongos superficiales son:

• Trichosporum cuya especie principal es Trichosporum
beigelii, que produce la enfermedad llamada “piedra blanca”
que afecta principalmente al tallo del pelo dando lugar a la
formación de nódulos blandos.
• Malassezia furfur es una levadura que causa pitiriasis
versicolor caracterizada por manchas claras y/o oscuras de la
piel principalmente en el tronco.
• Piedraza hortae causa la piedra negra, es una infección del
tallo del pelo típico de tierras húmedas y tropicales.

210
 Microbiología

TEMA 30.- PARASITOS I. GENERALIDADES

1.- DEFINICIONES

 Comensalismo
 Mutualismo
 Parasitismo

2.- PROPIEDADES QUE CARACTERIZAN LA RELACIÓN HUESPED

– PARASITO

3.- CLASIFICACION

4.- EPIDEMIOLOGIA

5.- VIA DE ENTRADA

6.- ACCION PATOGENA

7.- CLINICA

8.- PROFILAXIS

9.- DIAGNOSTICO PARASITOLOGICO

9.1.- Tracto intestinal

 Cualitativa
a) Fresco:
o Frotis
o Técnica de concentración: métodos físicos y métodos
bifásicos
b) Tinciones

 Cuantitativas (recuento de huevos)

9.2.- Tracto genitourinarios (Trichomonas vaginalis, orina, exudados

vaginales)

9.3.- Tracto hematico

 Protozoos
o Leishmania
o Tripanosoma
o Toxoplasma
o Plasmodium

211
 Microbiología

 Helmintos
o Equistosoma/ Echistosoma
o Microfilarias

1.- DEFINICIONES

 Comensalismo: asociaron útil para uno de ellos (asociación de

dos seres en los que uno se beneficia y el otro ni se beneficia ni
se perjudica)
 Mutualismo: asociación que proporciona ventaja a ambos.
También se denomina simbiosis.
 Parasitismo: el parásito se nutre a costa de otro (huésped) el
cual carga con la desventaja. Cuando el parásito se sitúa en el
interior del huésped se habla de endoparasitismo y si lo hace en
la piel o anejos se denomina ectoparasitismo. En ocasiones se
habla de infección cuando se refiere al endoparasitismo, que es
lo más frecuente, y hablamos de infestación cuando se refiere
al ectoparasitismo.

2.- PROPIEDADES QUE CARACTERIZAN LA RELACIÓN HUESPED

– PARASITO

 Escaso valor de las vacunas

 Frecuente resistencia a la infección
 Variación antigénica como mecanismo de acción para la
defensa del huésped.
 Es frecuente la parasitacion múltiple sobre todo en zonas
endémicas.
 Existen pruebas serológicas y cutáneas para la detención de
muchos parásitos pero con frecuencia dan reacciones cruzadas.

3.- CLASFICACIÓN

(Ver esquema 21.1)

4.- EPIDEMIOLOGÍA

Las principales vías de transmisión son:

- Directa, por contacto persona a persona, principalmente vía
sexual o trasplacentaria
- Fecal-Oral, mediante alimentos, es la vía más común.
- Telúrica, a partir de suelos contaminados.
- Antropozoonosis, el hombre se infecta a través de animales.
- Artrópodos, actúan como vectores.

212
 Microbiología

En la prevalencia de estas enfermedades tiene gran importancia

los factores ecológicos (clima, lluvia, etc) y los socioeconómicos y
culturales (higiene, alcantarillado) lo que hacen que en muchas
ocasiones sean enfermedades exclusivamente tropicales.

5.- VÍA DE ENTRADA

 Digestiva, por ingestión de quistes o huevos.

 Cutánea
 Respiratoria
 Transfusional
 Mucosas, etc

6.- ACCIÓN PATÓGENA

Se basa en los siguientes mecanismos:

 Mecánico: Causan obstrucción. Ej: hidatidosis, fialrias,
quistecercosis.
 Traumática: Por migración a través de tejidos (sarna).
 Exfoliadora
 Tóxica: Mediante sustancia químicas que secretan o vehiculizan
como enzimas proteolíticas necrotizantes o venenos (ej: arañas,
escorpión).
 Citopatógenas: Parásitos que producen destrucción celular (ej:
Plasmodium y Leishmania).
 Metaplásica o neoplásica: Como por ejemplo:
- Esquistosoma que produce carcinoma de colon, hñigado,
recto o vejiga.
- Fasciola hepática que produce tumores en vías biliares.
- Paragonimus westermani que puede producir tumores
pulmonares.

7.- CLÍNICA

Es muy variable y oscila desde el estado de portador

asintomático o síntomas leves a manifestaciones graves que pueden
provocar la muerte.
Depende del número de parásitos, tamaño, toxicidad y respuesta
inmunitaria del huésped.
Suelen presentar enfermedades generales como anorexia, perdida de
peso, cefaleas, etc, que pueden cursar de forma aguda, subaguda o
crónica.

8.- PROFILAXIS

213
 Microbiología

Se basa en:
• Control de reservorios y fuente de infección, por lo que es
necesario conocer su ciclo biológico.
• Saneamiento del medio ambiente.
• Higiene individual y de las viviendas.
• Control higiénico sanitario.
• Control de vectores.
• Quimioprofilaxis
• Programas destinado a aumentar el nivel sociocultural y
educación sanitaria.

9.- DIAGNÓSTICO PARASITÓLOGICO

En gran parte se basa en la detección de huevos, larvas o

adultos de helmintos y trofozoitos (forma vegetativa) o quistes (forma
de resistencia) de protozoos.
La identificación se basa en la morfología a diferencia de las técnicas
bacteriológicas en las que las que la pruebas bioquímicas tienen gran
importancia.
Además de las técnicas que se vana describir existen pruebas
complementarias que pueden ayudar al diagnostico como
hemogramas, radiografías, TAC, etc.
(Ver esquema 21.2)
Para el estudio del diagnóstico parasitológico existen pruebas
analíticas que se pueden clasificar en:
- Pruebas intestinales
- Pruebas genitourinarias
- Pruebas hemáticas

1.- TRACTO INTESTINAL

a. Análisis cualitativo
 Examen en fresco
- Frotis
- Técnicas de concentración
• Métodos físicos
• Métodos bifásicos
 Tinciones
b. Análisis cuantitativo (recuento de huevos)

El análisis parasitológico de heces, también llamado

coproparasitológico es el que más se utiliza en el laboratorio.
Las técnicas empleadas están orientadas a la búsqueda de formas
vegetativas de protozoos así como de huevos, elementos maduros y
fragmentos de helmintos.

a.- Análisis cualitativo

214
 Microbiología

FROTIS

 Material: Portas, cubres, pipeta Pasteur y microscopio óptico.

 Reactivos: Solución salina, lugol y MIF.
 Técnica:
Examen de heces no diluidas(heces líquidas, semilíquidas o
mucosanguinolentas)
1.- Se toma un fragmento de muestra, el más representativo,
con un asa y se coloca sobre el porta.
2.- Se pone un cubre y se observa al microscopio.
Examen de heces consistentes
1.- Se coloca en un porta una gota de solución salina a 37ºC.
2.- Se toma con un asa desde distintos puntos de la muestra
pequeñas porciones de la misma y se mezcla y homogeniza con
la solución salina.
3.- Se pone un cubre y se observa al microscopio.
 Resultados: Se observa la morfología y la posible movilidad del
parásito.
 Observaciones al método: Se puede facilitar la observación en
fresco con:
- Lugol: se añade una gota antes de poner el cubre
mejorándose la observación de protozoos y huevos.
(color amarillento)
- MIF: es un conservador, fijador y colorante. Da buenos
resultados en protozoos y huevos de helmintos. Se coloca
sobre el porta una gota de solución salina más una gota
de MIF. Se pone la muestra, se homogeniza y se coloca el
cubre para su observación.
Para extensiones de heces diluidas no poner demasiada
muestra pues dificultarái su l ectura ya que el cubre flotaría.
No utilizar objetivo de inmersión de frotis fecales sin cubre.
En determinadas extensiones no utilizar agua destilada pues el
parasito es sensible a la presión osmótica.
El procesamiento de muestras debe ser rápido, menor de 30
minutos desde la recogida, si se buscan trofozoitos pues
mueren muy pronto. En caso contrario deben utilizarse
conservantes añadiendo 3 volúmenes de conservante por 1
volumen de muestra (si tengo 20 gr de muestra añadir 60ml de
conservante). Los más utilizados son la Formalina (formol al 5-
10%), PVA (alcohol polivinilo) y PAF (fenol-alcohol-formol).
Como la expulsión de parásitos es intermitente se recomienda
enviar tres muestras de 2-3 días.
El primer examen que debe realizarse es el macroscópico en
busca de parásitos enteros o anotando la consistencia y color
de la muestra.
En el examen microscópico la observación comienza con
objetivos de menor aumento y hay que ver la preparación
completa. Se recomienda utilizar al menos una técnica de

215
 Microbiología

concentración, ya que los parásitos pueden estar en un número

muy pequeño. También se deberá hacer tinciones permanentes
que presenten la ventaja adicional de poder consultarse en
cualquier momento y servir de colección.

TÉCNICAS DE CONCENTRACIÓN

(Ver fotocopias 3 y 4)

TINCIONES

Generalmente se utiliza la técnica tricromica (Ver fotocopia 5)

b.- Análisis cuantitativo

Si pesamos una cantidad de heces, la diluimos y contamos el

número de huevos en un volumen determinado de suspensión
podemos conocer la concentración de huevos en heces.
Una técnica especial es la Técnica de Graham (Ver fotocopia 6). Es un
método de diagnostico de los oxiuros (lombrices) que consiste en
pasar una cinta de celofán por la región perianal a primera hora de la
mañana sin haberse lavado. Esta cinta se pega en el porta y se
examina al microscopio.
También se pueden observar otras muestra clínicas para la
detección de parásitos como esputos, biopsias, LCR, etc.
Existe una serie de técnicas para la determinación de parásitos
aunque estas suelen realizarse en laboratorios especializados, ej.
cultivos, inoculación en animales, etc.
Las técnicas serológicas están poco desarrolladas, no estando los Ag
bien definidos siendo frecuente las reacciones cruzadas y careciendo
de sensibilidad muchas veces.
La PCR se basa en la detección del genoma por su gran sensibilidad.

TEMA 31.- PARÁSITOS II

216
 Microbiología

1.- PROTOZOOS.

Clasificación

Se pueden clasificar entre otras cosas en función de su mecanismo de

desplazamiento en:

1.- Sarcodinas: Son las amebas, utilizan pseudopodos para el

movimiento. Los hay de vida libre o parasitaria.

2.- Ciliofora: Los órganos de locomoción son los cilios, son cortos y
numerosos. Son de vida libre y parasitaria. El más representativo en
Balantidium coli.

3.- Mastigophora: Son los flagelados. Es una especie de vida libre y

parasitaria.

4.- Esporozoos: No presentan órganos de locomoción y alternan

fases de reproducción sexual y asexual. Destacan los parásitos del
paludismo.

1.- SARCODINAS

Son las amebas

ENTAMOEBA HISTOLITICA

El representante más importante de las amebas. Es una ameba

intestinal que presenta un tamaño de 10-12 micras y quistes con 4
núcleos, también presenta una vacuola de glucógeno y una o dos
varillas que es lo que se denomina cuerpos cromatiodes.
La transmisión de la enfermedad es vía fecal-oral por la
ingestión de quistes ya que los trofozoitos son muy sensibles a la
desecación.

MANIFESTACIONES CLÍNICAS Y DIAGNÓSTICO

La Entamoeba histolitica produce la disentería amebiana que se

caracteriza por la aparición de lesiones en el colón (lesiones
sanguinolentas). El cuadro clínico se caracteriza por el número y la
gravedad de las ulceras que pueden causar abscesos hepáticos.

El tratamiento es a nivel intestinal Diyodohidroxiquim y a nivel de

tejidos Metronidazol.
El diagnóstico se basa en la observación de los trofozoitos
generalmente quistes que aparecen en heces.

OTRAS SARCODINAS

217
 Microbiología

La mayor parte son comensales, siendo las principales

Entamoeba coli, Endolimax nana, Dientamoeba fragilis.
Es importante diferenciar entre Entamoeba histolitica y
Entamoeba coli, para ello nos tenemos que fijar en el núcleo de los
quistes Entamoeba coli tiene 8 núcleos y Entamoeba histolitica tiene
4, siendo muy importante ver el tamaño y forma de los núcleos y
quistes.
2.- CILIOFORA

Son los ciliados

BALANTIDIUM COLI

Es el protozoo de mayor tamaño, es de forma oval y mide 150

micras. Su forma quistita mide 50-70 micras y produce una disentería
sanguinolenta similar a la amebiana, pudiendo existir portador
asintomático.
Es capaz de atravesar la mucosa intestinal produciendo
perforación intestinal. El principal reservorio es el cerdo.
El diagnostico se basa en la aparición de parásitos en heces.
El tratamiento son tetraciclinas.

3.- MASTIGOPHORA

Son los flagelados. Se dividen en: Intestinales, urogenitales y

hemoflagelados.

3.1.- INTESTINALES

El principal parásito flagelado intestinal es la Giardia lamblia.

El trofozoito presenta una morfología perecida a una lagrima de
frente y de lado se parece a la porción curva de una cuchara
(fotocopia). Tiene cuatro pares de flagelos, dos núcleos, dos
axonemas y dos cuerpos medianos. Los quistes son redondeados u
ovalados y presentan cuatro núcleos, cuerpos medianos y axonemas.
Los quistes son las formas que habitualmente se transmiten por
vía fecal-oral, es mas frecuente encontrarlas en niños y zonas
tropicales, pudiendo producir desde cuadros diarreicos intermitentes,
irritación de las mucosas y mala absorción hasta diarreas
asintomáticas.
El diagnostico se basa en la observación de los quistes en las heces.
Para visualizar el trofozoito se requieren secreciones duodenales,
recientemente se usan métodos de ELISA o inmunofluorescencia.
El tratamiento son tetracilinas y metomidazol
Existen otros flagelados en el tracto gastrointestinal Ej.: Tricomonas
hominis, Retrortamonas intestinales etc.…

3.2.- UROGENITALES

218
 Microbiología

El más importante es Tricomonas vaginalis. Es un flagelado

cuyo hábitat es la vagina en mujeres y uretra en hombres.
Es una ETS. No produce quistes y el trofozoito tiene de 3 a 5 núcleos,
axostilo y membrana ondulante, presentan varios flagelos.
La sintomatología se produce tras incubar 4-28 días y consiste
principalmente en picor vulvar y secreciones purulentas. En el
hombre generalmente la infección suele ser asintomática.
El tratamiento es con metromidazol o timidazol.
El diagnostico suele realizarse por frotis de flujo vaginal o sedimento
urinario.
Es importante que no haya contaminación fecal (fotocopia).

3.3.- HEMOFLAGELADOS

Este grupo comprende una serie de diversos parásitos incluidos en

la familia Tripanosomidae, que son los Tripanosomas y Leishmania.
Se transmite por vectores invertebrados y presentan variación de tipo
morfológico. En función de la localización del flagelo tenemos:
• Tripomastigote: en el extremo posterior y discurre en sentido
longitudinal quedando en el extremo libre
• Epimastigote: cercano al núcleo.
• Promastigote: cercano al extremo anterior.
• Amastigote: flagelo muy cortado.

A.- TRIPANOSOMA

TRIPANOSOMA BUCEI

Son los agentes causantes de la Enfermedad del sueño o

Tripanosomiasis africana que se transmite por la mosca Tsé – Tsé. En
el vector están como epimastigote y tripomastigote siendo esta
última la forma que infecta al hombre al ser picado, produciéndose un
chancro en el lugar de la inoculación.
La enfermedad se manifiesta tras un periodo de incubación que
puede durar semanas o meses con fiebre irregular, linfoadenopatías
en la parte posterior del cuello (cervicales), anemias y
esplenomegalia. También exantemas eritomatosos y al avanzar la
enfermedad se produce letargia, sueño, apatía, coma y muerte.
Existen 2 subespecies, la Gambiensis en África Occidental cuyo
reservorio son los animales domésticos y la enfermedad que produce
es de curso lento. La otra es Phodensis de África Oriental cuyo
reservorio son animales salvajes y de evolución rápida.
El tratamiento es sudamina y pentamicina en las primeras etapas.
Metarsoploh cuando hay afectación del SNC.
El diagnostico se basa en la observación del parásito por tinción de
Giemsa en sangre, nódulos linfáticos y LCR y métodos serológicos.

219
 Microbiología

TRIPANOSOMA CRUZI

Produce la Enfermedad de Chagas, se da en América

principalmente. Es una zoonosis que se transmite por los chinches
besucones. En el animal vertebrado se presentan los 4 tipos
morfológicos mientras que en el invertebrado esta como epimastigote
y tripomastigote. Esta ultima es la forma infectante que se transmite
a través de las mucosas o por las heridas de la picadura.
La incubación dura entre 1-2 semanas produciéndose
posteriormente fiebre irregular, hepatomegalia, adenopatías, edemas
etc., después sigue una fase de latencia tras la cual se pueden
producir unas manifestaciones de infección crónica siendo la más
característica miocarditis.
El tratamiento son nifurtimos y benzomidazol.
El diagnostico comprende observación en sangre, hemocultivo y
xenodiagnóstico (realización del diagnostico a partir del huésped).
Este diagnóstico consiste en permitir que chinches no infectados se
alimenten de la piel del enfermo que se supone que padece la
enfermedad de chagas, posteriormente se estudia el contenido
intestinal o las heces de los chinches para identificar la presencia del
parásito en sus diferentes etapas del desarrollo.

B.- LEISHMANIA

Es un parásito intracelular obligado, que se transmite por

mosquitos en los que están el tripomastigote; en el vertebrado son
amastigote.
Se localiza en las células del retículo endotelial de la piel,
mucosa, bazo, hígado y medula ósea. En función de su localización se
producen distintas manifestaciones clínicas: Leishmaniosis cutáneas,
mucocutáneas o visceral.
Diagnóstico general: se basa en el diagnóstico del protozoo mediante
tinción de giemsa o siembras. Para formas cutáneas se realiza una
biopsia de la piel. En las leishmaniosis viscerales el mejor rendimiento
se obtiene por aspirado de médula ósea. Los métodos serológicos
principalmente son inmunofluorescencia indirecta.

Los principales grupos de Leishmania son:

LEISHMANIA DONOVANI

Produce la Enfermedad de Kala-azar. Es una enfermedad

visceral distribuida en Asia, África y Estados Unidos. Dentro de la
Leishmania donovani existe una variedad denominada Leishmania
infantum que es endémica en países mediterráneos. Su principal
reservorio son los perros y se transmite por el mosquito del género
Phlebotomus, afectando a niños.
El periodo de incubación es de 4 meses y los síntomas son:
fiebre, hepatomegalia, anemia, leucopenia e

220
 Microbiología

hipergammaglobulinemia. Se puede producir un oscurecimiento de la

piel que es lo que le da el nombre al Kala-azar (fiebre negra). Tras la
enfermedad se produce una inmunidad verdadera.
El tratamiento: derivados pentavalentes de antimonio, como
glucantine. Otros fármacos activos son pentamicina, anfotericina
B y alocurinol.

LEISHMANIA TROPICAL

Produce Leishmaniosis cutánea del viejo mundo. En el lugar de

la inoculación produce una pápula que se ulcera durante semanas o
meses. La enfermedad se denomina Botón del oriente.

LEISHMANIA MEXICANA

Produce Leishmaniosis cutánea del nuevo mundo. Recibe el

nombre de UTA o Ulcera de los chicleros.
En el 60% de los casos la afectación se sitúa en la oreja.

LEISHMANIA BRASILENSIS

Se da en America del sur, produce Leishmaniosis mucocutánea.

Se conoce como espundia o pianboys.

4.- ESPOROZOOS

PLASMODIUM

Se distinguen 4 especies:
- Plasmodium falciparum
- Plasmodium ovale
- Plasmodium malariae
- Plasmodium vivax

Son parásitos que producen la malaria o paludismo. Es una de las

enfermedades que mayor número de muertes produce en el mundo
sobretodo en países subdesarrollados.

CICLO BIOLÓGICO

Comienza con la inoculación de esporozoitos por las hembras

del mosquito del género Anopheles. Por el torrente circulatorio se va
la hígado donde comienzan las fases exoeritrocitarias primarias. Es un
proceso de esquizogonia donde se producen sucesivas generaciones
de merozoitos que posteriormente se liberan y se dirigen a los
eritrocitos, donde tienen lugar los ciclos eritrocitarios.
El Plasmodium vivax y Plasmodium ovale pueden permanecer en el
hígado en fase de latencia como hynozoitos que podrán dar lugar a
recaídas.

221
 Microbiología

En los glóbulos rojos van a ir madurando los merozoitos dando

lugar a equizontes que por equizogonia dan lugar a nuevos
merozoitos que infectan nuevas células. Después de sucesivas
generaciones algunos merozoitos se transforman en gametocitos,
éstos pueden ser masculinos o femeninos que son ingeridos por el
mosquito, en el que tendrá lugar la reproducción sexual por la unión
de los gametocitos que dará lugar al zigoto que al crecer forma un
ooquiste y al romperse libera cientos de esporozoitos, con lo que se
inicia de nuevo el ciclo. (ver fotocopia 9)

MANIFESTACIONES CLÍNICAS

Las fases exoeritrocitarias suelen durar una semana, se liberan

los merozooitos a la sangre produciéndose los síntomas típicos del
paludismo, que comienza con una fase fría de escalofríos, fiebre alta,
anemias, sudoración y esplenomegalia.
La liberación de sucesivas generaciones dará lugar a nuevas
fases sintomáticas dependiendo de la duración del ciclo de vida del
parásito, aunque esto no siempre es así.
En Plasmodium vivax y ovale los ciclos son de 48 horas, en
Plasmodium malariae es de 72 horas y en Plasmodium falaparum es
de 36-48 hora, siendo esta ultima la que con mayor frecuencia
presenta complicaciones dando lugar a coagulación intravascular
diseminada y paludismo celular.

TRATAMIENTO

Cloroquina, siendo también muy útil la profilaxis al viajar a

estas zonas. Fármacos alternativos son la quinina, tetraciclinas y
falsidal.

EPIDEMIOLOGÍA

Las especies más importantes son Plasmodium vivax y

Plasmodium falciparum que son responsables del 95% de la
enfermedad. La prevención se realiza por la lucha de contra vectores
(mosquito). Hoy en día se están estudiando vacunas frente al
parásito.

TINCIÓN

De Giemsa, siendo muy importante la observación de las

distintas formas morfológicas.

BABESIA

Es un parásito de sangre transmitido por garrapatas. En el

hombre afecta a los eritrocitos dando lugar a la cruz de malta.
Los síntomas son: fiebre, mialgias, hepatoesplenomegalia y anemia
hemolítica.

222
 Microbiología

Tratamiento: Cloroquina

TOXOPLASMA FONDII

Es un parásito de distribución mundial cuya infección es

frecuente aunque rara vez produce manifestaciones clínicas.

CICLO BIOLÓGICO

El huésped definitivo es el gato donde tiene lugar la

reproducción sexual (gametogonia) y asexual (esquizogonia).
Los ooquistes que se encuentran en heces pueden infectar a otros
gatos, mamíferos y aves en los que se produce únicamente
reproducción sexual formando quistes en el tejido muscular.
El hombre adquiere la infección a través de los alimentos por
ooquistes o por carne poco cocinada que da lugar a taquizoitos.

MANIFESTACIONES CLINICAS

La mayor parte de las infecciones son asintomáticas aunque

pueden cursar con un cuadro con linfoadenopatías.
Hay que tener en cuenta dos situaciones que cobran gran
importancia:
- Infección durante el embarazo, que puede dar lugar a abortos o
malformaciones.
- Inmunodeficiencia, frecuente en enfermos con SIDA donde dan
cuadros graves que afectan al SNC.

TRATAMIENTO

Sulfamidas, lindamicina, espiramicina, etc

DIAGNOSTICO

En primer lugar métodos histológicos para detectar parásitos en

los tejidos y en segundo lugar serología principalmente mediante
ELISA e inmunofluorescencia indirecta detectándose Ig G e Ig M
específicos frente a Toxoplasma gondii. El parásito también se puede
recuperar mediante inoculación en animales principalmente ratones.

CRIPTOSPORIUM

Es una infección importante en pacientes con SIDA que suele

cursar con diarreas crónicas de difícil tratamiento.
Su detección se realiza a través de los quistes con tinción de Kinyoun.

NEUMOCISTIS CARINII

Se pueden presentar de forma quistita o extraquística.

223
 Microbiología

La fase quistica presenta en su interior de 2-8 células denominándose

esporozoito. Las paredes del quiste se tiñen con colorantes como
azul de toluidina.
La fase extraquística se denomina trofozoito. Aparece en personas
con SIDA, mal nutridas, neoplásicas, etc. Da manifestaciones
pulmonares.

OTROS (Son esporozoos)

- Isospora belli
- Sarcocistis
- Blastocistis hominis
- Microsporium

224
 Microbiología

TEMA 32: HELMINTOS O METAZOOS

1.- INTRODUCCION

Los metazoos o helmintos son gusanos o vermes. Su tamaño

puede oscilar entre 1 mm a varios metros. Se dividen en:

1.- Platelmintos o gusanos planos

o Cestodos: segmentados y con varios órganos de fijación, suelen

ser hermafroditas.
o Trematodos: no segmentados con forma de hoja, hermafroditas
o con sexos separados.
Los platelmintos presentan simetría bilateral y 3 capas:
ectodermo, mesodermo y endodermo.
El tubo digestivo carece de ano y suele acabar en intestinos
ciegos, excretándose en los residuos por regurgitación por la boca.

2.- Nematelmintos o gusanos cilíndricos

No segmentados y con sexos separados.

2.- PLATELMINTOS

2.1.- TREMÁTODOS

Se conocen como duelas y se clasifican en función de su localización

en el hombre en:
 intestinales
 pulmonares
 hepáticos
 sanguíneos.

MORFOLOGÍA

Los tremátodos tienen forma de hoja en general, aunque

pueden variar de una especie a otra al igual que su tamaño.
Presentan 2 ventosas, una oral que se continúa con la boca, faringe e
intestinos ciegos y otra ventral.
Los adultos son hermafroditas.
(Ver fotocopia 10)

DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO

Se basa en la detección y diferenciación de huevos en heces. El

fármaco de elección es el Praziquantel.
Debemos diferenciar distintos tipos de huevos:

225
 Microbiología

a) Cilíndricos u ovalados
b) Ausencia o presencia de casquete u opérculo
c) Presencia o ausencia de espolón y si el espolón se encuentra
en posición central o lateral. El espolón en ocasiones se
utiliza como mecanismo de defensa.

CLASIFICACIÓN

Los tremátodos los podemos dividir en:

A.- INTESTINALES

FACIALEPSIS BUSKI

Se da en las regiones asiáticas afectando al hombre y al cerdo,

principalmente a través de las plantas acuáticas donde se enquistan
las metacercarias, produce trastornos intestinales con hemorragias,
ulceras y edemas.
El adulto puede medir hasta 7 cm.

SCHISMOSTOMA ILOCANUM

Se adquiere por ingestión de moluscos dando cuadros leves.

HETEROPHYES HETEROPHYES

Se adquiere por ingestión de pescado poco cocinado.

METAGONIMUN YOKOGAWAI

Se adquiere por ingestión de pescado poco cocinado.

B.- HEPÁTICOS

Parasitan los conductos biliares del hombre

FASCIOLA HEPÁTICA

Es un trematodo de 2 – 3 cm. de longitud y huevos grandes

operculados y sin espolón. El parásito adulto se localiza en el hígado y
vías biliares en el ganado ovino, bovino y en el hombre.

CICLO BIOLÓGICO

Igual que el general, el segundo hospedador son plantas

(berros)ingeridas por el huésped herbívoro (ovejas, vacas, etc.)
llegando a las vías biliares donde se desarrolla el gusano adulto.

226
 Microbiología

La sintomatología esta asociada a obstrucción biliar y lesiones

hepáticas, produce fiebre y eosinofilia.
El diagnóstico se realiza por detección de huevos en heces y
métodos serológicos.

CLONORCHIS SINENSIS

Se le denomina duela hepática. Las metacercarias se

encuentran en peces, adquiriéndose la infección al consumir pescado
poco cocinado. La patología depende de la intensidad y duración de la
infección y puede acabar en cirrosis.

C.- PULMONARES

PARAGONIMUS WESTERMANI

El ciclo biológico es igual que el general pero el segundo

hospedador es el cangrejo. La infección se produce al consumir éste.
Las larvas migran al pulmón aunque pueden encontrarse en otro
lugares.
La sintomatología suele ser pulmonar, produciendo destrucción
tisular, inflamación y hemorragia.
La detección se realiza por detección de huevos en heces o
esputo, siendo huevos operculados. También se realizan pruebas
serológicas.
Se da principalmente en Asia y África.

D.- SANGUÍNEOS

SCHISTOSOMA

Son agentes infecciosos de gran importancia a nivel mundial

por su gran prevalencia y producir una enfermedad debilitante
crónica.
Los Schistosomas no son hermafroditas y se van a situar en parejas
en el sistema venoso (Schistosoma janicum y Schistosoma mansoni) o
en el plexo vesical (Schistosoma haematobium).
Los huevos se depositan en pequeñas venas del recto, intestino
y vejiga y salen la exterior por las heces u orina, eliminando el
miracidio.
Al entrar en contacto con el agua migran a los caracoles que dan
lugar a las cercarias llegando al hospedador definitivo. A continuación
migran al sistema venoso correspondiente dando lugar a formas
adultas iniciando de nuevo el ciclo.

MANIFESTACIONES CLÍNICAS Y DIAGNÓSTICO

227
 Microbiología

Este parásito (larvas) puede atravesar la piel humana dando

lugar a dermatitis transitoria benigna. Después se produce un cuadro
agudo con fiebre, hepatitis, urticaria, hemorragia intestinal, etc.
Una vez puestos los huevos se pueden diseminar a distintos órganos
como hígado, pulmones, etc. y en la fase crónica se produce la
respuesta inmunitaria a la lesión tisular. Se puede producir cirrosis
hepática, glomerulonefritis y existe una elevada relación con
carcinoma de recto, hígado y vejiga.
El diagnóstico se realiza por detección de huevos con espolón en
orina y heces. Cuando los huevos tienen un espolón en posición
central es típico de Schistosoma haematobium , si lo tienen en
posición central Schistosoma mansoni y si es pequeño y lateral
Schistosoma japonicum. También se hacen pruebas serológicas.
Estos parásitos se dan en África, Asia y América del sur.

2.2.- CESTODOS

MORFOLOGÍA

Están compuestos por:

 Escólex, son órganos de fijación y pueden tener ventosas. Se

dice que esta armado cuando presenta una prominencia
denominada rostellum o rostelo provista de ganchos.
 Cuello y estrobilo, formado por segmentos denominados
proglótides que según van madurando sexualmente se alejan
del cuello, así los más cercanos son inmaduros a continuación
vienen los maduros y los grávidos cargados de huevos.

Todo el organismo comparte un sistema excretor y nervioso,

mientras que no existe un tracto alimentario al estar sujetos a
superficies, siendo especialistas en absorción de nutrientes.
Son hermafroditas, sirviendo la estructura uterina de las proglótides
para diferenciar algunas especies.
(Ver fotocopia 12)

TENIA SOLIUM

MORFOLOGÍA

Es la tenia del cerdo que puede llegar a medir hasta 2-3 metros
en el intestino humano. Presenta un escólex con 4 ventosas y un
rostelo con 20-35 ganchos. Las proglótides son más anchas que
largas cuando son inmaduras, invirtiéndose las proporciones en los
grávidos. Puede haber hasta 100 proglótides. Normalmente existen
hasta 10 ramificaciones a cada lado en los segmentos grávidos

228
 Microbiología

diferenciándose de la Tenia saginata con más de 15, ya que los

huevos son indistinguibles.
Los huevos son de cubierta gruesa y son excretados en heces,
pudiendo permanecer viables durante semanas y al ser ingeridos por
el cerdo (u hombre)se desarrollan oncosferas que por la sangre se
diseminan a distintos órganos o músculos formando cisticercos
(enfermedad denominada cisticercosis).

MANIFESTACIONES CLÍNICAS Y DIAGNÓSTICO

Los síntomas más frecuentes son malestar general,

principalmente en niños en los que produce trastornos nerviosos.
El tratamiento es con niclosamida y praziquantel.
El diagnóstico se hace mediante la detección de los huevos o
proglótides en las heces.

Más grave es la Cisticercosis por la ingestión accidental de

huevos que pueden estar en el agua o alimentos. Los huevos no dan
lugar a adultos sino que liberan oncosferas uqe daran lugar a
cisticercos en tejidos. En las formas más graves afecta al ojo y al
cerebro y requiere además de fármacos tratamiento quirúrgico.
El diagnóstico se basa en técnicas radiológicas, histológicas y
serológicas.

TENIA SAGINATA

Se diferencia de la anterior en que el escólex se encuentra

desarmado. Alcanza hasta 5 metros y el útero presenta más
ramificaciones. Además la cisticercosis no aparece en el hombre sino
en el ganado vacuno.

ECHINOCOCCUS GRANULOSUS

Es la tenia del perro. Tiene un escólex armado y tres proglótides

(inmaduro, maduro y grávido). La longitud es de 0.5-0.25 cm y el
hombre y ganado son los huéspedes intermediarios donde se dan las
formas larvarias hasta ingerir los huevos formándose los quistes que
aumentan de tamaño progresivamente pudiendo alcanzar hasta 20
cm.
El quiste hidatídico presenta una pared cuticular gruesa que da lugar
a una formación de tipo vesicular.
La Hidratosis humana puede afectar a múltiples órganos y la
gravedad va a depender de su localización. La rotura de un quiste
puede tener consecuencias graves con diseminación de nuevos
quistes.
Para prevenir la hidratosis se debe desparasitar a los perros.

229
 Microbiología

El diagnóstico se basa en detectar el parásito con fluorescencia,

electroforesis y hemoaglutinación.
El tratamiento es quirúrgico.

ECHINOCOCCUS NANA

Es una tenia enana de 1-4 cm con proglótides 4 veces más

anchas que largas. Afecta principalmente a niños. Es cosmopolita
(distribución mundial) y presenta manifestaciones clínicas leves.
El tratamiento es con praziquantel niclosamida.

HYMENOLEPSIS DIMINUTA

Es muy raro en el hombre y el diagnostico se basa en detectar

huevos en heces.

DIPHYLOBOTRIUM LATUM

Tiene un escólex con dos ventosas alargadas y las proglótides

son más anchas que largas. Presentan huevos con casquete que
secretan con heces dando lugar a unas oncosferas en las que se
encuentran los coracidios que presentan cilios, que penetran en
crustáceos donde desarrollan el procercoide (pierde los cilios) que
migran a los peces donde se forma la fase adulta.
La infección en el hombre viene por consumo de peces
insuficientemente cocinados, sobre todo en países asiáticos y Japón.
La enfermedad depende del grado de parasitación, pudiendo cursar
con múltiples lesiones en el intestino y anemia debido a que el
parásito concentra la vitamina B12.
El tratamiento es con praziquantel y niclosamida.

DIPYLIDIUM CANINO

Afecta a perros y gatos. El diagnóstico se basa en detectar los

huevos en forma de paquetes. Ocasionalmente puede afectar al
hombre.

3.- NEMATELMINTOS

Son unos gusanos redondos, no segmentados y con simetría

bilateral. Pueden ser vertebrados o invertebrados con sexos
separados siendo el macho el más pequeño. Se dividen en:
intestinales, tisulares y filarias.

3.1.- NEMATELMINTOS INTESTINALES

230
 Microbiología

Las formas adultas tienen su habitat final en el intestino,

aunque muchos de ellos presentan una migración por tejidos en fase
larvaria.

ENTEROBIUS VERMICULARIS

Son los oxiuros, habituales del intestino delgado y

ocasionalmente del tracto genitourinario. Son los helmintos que se
diagnostican con mayor frecuencia en nuestro medio y tiene
distribución cosmopolita.
Las hembras tienen una longitud de 1 cm y los machos de 2-5
cm con el extremo posterior en espiral. Los huevos son resistentes a
la desecación y rara vez se ven en heces, ya que la puesta de huevos
se hace en la región perianal.
.
La sintomatología es leve y consiste en picor anal, insomnio e
irritabilidad. En ocasiones produce irritación en genitales de niños.
El diagnóstico se hace con la técnica de Graham
El tratamiento es con mebendazol, que se recomienda para toda la
unidad familiar o contactos cercanos.

TRICHURIS TRICHURA

Helminto común en climas húmedos y cálidos va asociado a

Ascaris (gusano). Es habitante del ciego y del colon ascendente.
También se conoce como tricocéfalo por presentar un extremo
anterior muy fino introducido en la mucosa intestinal y un extremo
posterior más grueso en la luz intestinal.
El cuadro clínico es leve pero si la parasitación es extensa se
producen lesiones en la mucosa, anemias, diarrea crónica, etc.
El diagnóstico se basa en la detección de huevos caracterizado por
presentar dos tapones en los dos extremos. Son muy resistentes a la
desecación y necesitan un proceso de maduración en el suelo.
Posteriormente infectan al hombre por agua y alimentos.

CAPILLARIA PHYLIPPINENSIS

Se sitúa en el intestino delgado a partir de la ingestión de

pescado poco cocinado siendo los huevos parecidos a los de Trichura
pero con pared estriada.
Puede producir deshidratación (que si no se trata puede ser mortal) y
mala absorción.

ASCARIS LUMBRICOIDES

Es el segundo helminto intestinal en prevalencia a nivel mundial

después de los oxiuros. Predominan en niños en regiones tropicales y
subtropicales.

231
 Microbiología

La infección humana es por ingestión de huevos liberándose las

larvas en intestino que sufren migración al pulmón. A los 10 días
ascienden a la faringe y son deglutidos desarrollándose la forma
adulta en el intestino.
La hembra mide 20 cm y pone 27 millones de huevos que pueden ser
fértiles y no fértiles. El hombre mide 16 cm.
El cuadro clínico se presenta si la parasitación es intensa dando
lugar a bronconeumonía en fase pulmonar y trastornos intestinales.
El diagnóstico es por detección de huevos en heces.
No es frecuente pero se pueden observar larvas en esputo.

ANCYLOSTOMA

Las especies más importantes son Ancylostoma duodenale,

necator y americans.
Las formas adultas se diferencian por la disposición de piezas
dentales y estructura de la bolsa copuladora. Son la primera causa de
infección en el viejo mundo y la segunda en el nuevo mundo.
Los machos miden 1 cm y las hembras 1-1.5 cm. Los huevos salen
por heces y la maduración se realiza en el suelo dando lugar primero
a una forma larvaria, posteriormente a otra forma larvaria y la tercera
fase que será infecciosa es la que penetra en la piel y migrará al
pulmón, de aquí a la faringe donde son deglutidos y pasan al intestino
donde anidan las formas adultas.

La transmisión de las larvas se ve favorecida por el hecho de no

llevar calzado. La sintomatología que produce es dermatitis que se
denomina sarna de la tierra o de la mina. En el pulmón e intestino
pueden producir neumonitis o irritación con diarrea y dolor
abdominal.
La infección crónica conduce a anemia microcítica o hipocrómica que
se ve favorecida por el hecho de que la población donde produce la
infección tiene dieta pobre en Fe.
El diagnóstico se basa en la detección de huevos en heces.
El tratamiento es con mebendazol.

STRONGELOIDES STERCOLARIS

Son parásitos con un ciclo muy complejo. Presentan unas larvas

filiformes que atraviesan la piel y pasan a sangre, pulmón, faringe
donde son deglutidos y pasan al intestino. Pueden producir
dermatitis, bronconeumonía y trastornos intestinales que pueden
dañar la mucosa causando septicemias mortales.
El diagnóstico es por detección de huevos en heces o esputo aunque
es mas probable la detección de larvas.
El tratamiento es con tiabendazol.

3.2.- NEMATELMINTOS TISULARES

232
 Microbiología

TRICHINELLA ESPIRALES

Las hembras pueden llegar a depositar 500 huevos. Las larvas

son de 1 mm de longitud dando lugar a quistes en el músculo
esquelético, miocardio y SNC. Los sitios más frecuentes de
localización en los músculos son los intercostales, lengua, laringe,
bíceps y músculos oculares.
El hombre suele adquirir la triquinosis por ingestión de carne de
cerdo (jabalí, carne de caza, monte) insuficientemente cocinada.
La sintomatología es intestinal con diarrea, dolor abdominal y
muscular y lo más grave es la miocarditis y encefalitis aunque esta
última es rara.
El diagnóstico es serológico o histológico con detección de
larvas en los tejidos.

LARVA MIGRATORIA VISCERAL

Causada por larvas de Toxocara canis (perro) y Toxocara cati

(gato) siendo frecuente en perros y gatos.
El hombre adquiere la infección a través de los huevos del
parásito. Las larvas que se liberan sufren migración a distintos
órganos, pulmón, ojo, hígado, cerebro, etc.
El diagnóstico es serológico aunque también se pueden observar las
larvas por biopsias.
Es muy importante la desparasitación de perros y gatos.

LARVA MIGRATORIA CUTÁNEA

Síndrome causado por las larvas a través de la piel de distintas

especies (generalmente Ancylostomas). Como consecuencia se
forman túneles en la piel para el desplazamiento de las larvas.

ANISAKIASIS

Enfermedad causada por la ingestión de larvas por comer

pescado poco cocinado.

DRACUNCULOS MEDINENSIS

Se da principalmente en África. Los machos miden 2 cm y las

hembras 1 cm. Migran a nivel subcutáneo y se ulcera la piel por la
liberación de las larvas, cosa que puede ocurrir cuando hay contacto
con el agua. Las larvas infectan pequeños animales marinos que son
los que transmiten la infección al ser ingeridos por el consumo de
agua.
El diagnóstico por lesiones cutáneas en las que se pueden llegar a ver
el gusano.

3.3.- FILIARIAS

233
 Microbiología

Aunque se conocen más de 200 especies sólo 7 tienen

importancia en el hombre. La característica más importante es que
las hembras producen embriones móviles denominados microfiliarias.
Los adultos presentan distintas localizaciones, tejido linfático, cavidad
pleural, nódulos subcutáneos, etc. a partir de los cuales secretan las
microfilarias a la piel o torrente sanguíneo. A partir de la sangre son
ingeridos por artrópodos (mosquito) en los que se transforma en
larvas infecciones que son inoculadas a huevos huéspedes.
El ciclo se completa en un año.
El diagnostico se basa en la detección de microfiliarias en sangre, piel
y otros líquidos
corporales.
El tratamiento: dietilcarbamazina.

TEMA 33.- ARTRÓPODOS

Pueden actuar como parásitos, generalmente ectoparásitos,

pero su importancia en parasitología es debido a su acción como
vectores.
Presentan un cuerpo dividido en cabeza, tórax y abdomen. Además
de parásitos también pueden ser patógenos por su acción mecánica
(mordedura).

1.- CLASIFICACION

1.1. INSECTOS

a. Dípteros (moscas y mosquitos): Trasmiten bacterias, virus y

parásitos. Destacando principalmente los que producen
leyhsmaniosis, paludismo, filarias y tripanosomiasis.
b. Hemípteros (chinches): Su mordedura puede producir reacción
cutánea. Destaca como vector en la enfermedad de Chagas.
c. Anoplura (piojos).
d. Siphanaptera (pulgas).
e. Otros órdenes.

1.2. ARÁCNIDOS

Presentan importancia médica sobre todo por las picaduras de

arañas y escorpiones pero el orden que más nos interesa es el de los
ácaros, siendo el más importante Sarcoptes scabiei.
También son importantes las garrapatas que son transmisoras de
virus, bacterias (Rickettsias) y protozoos (Babesia).

234
 Microbiología

2.- PRINCIPALES ACCIONES COMO PARÁSITOS DE LOS

ORTROPODOS

2.1. PIOJOS

Son ectoparásitos que se encuentran muy frecuentemente.

Además el piojo humano es el vector de las fiebres recurrentes y del
tifus exantemático.
Las principales especies son:
 Pediculus humanos.- Es el piojo humano del cuerpo y cabeza.
 Phthirus pubis.- Es el piojo del pubis. Producen irritaciones
cutáneas y picores.
Tratamiento.- Lociones o champús con pernetrina al 1% (lindane).
Se aconseja tratar a los contactos cercanos y repetir el tratamiento a
los 10 días.

2.2. MIASIS

Infecciones del hombre y animales por larvas de dípteros que

se alimentan de tejidos vivos o muertos. Se produce cuando la
hembra deposita los huevos en piel, heridas y mucosas.
Según la localización se distinguen formas cutáneas y mucocutáneas.
Afecta principalmente a ojos, nariz y oídos. Formas menos frecuentes
son las intestinales, pulmón, vagina y uretra.
Tratamiento.- Quirúrgico y paliativo.

2.3. SARNA

Producida por Sarcoptes scabiei. El macho mide 200 µ m y la

hembra 400. Ésta al ser fecundada escarba túneles en la epidermis
donde deposita los huevos, de 3-5 huevos diarios, continuando su
camino durante 30 días aproximadamente y posteriormente muere.
Produce túneles en espacios interdigitales, antebrazos, codos,
axilas, ingles, surcos submamarios, cintura, pliegues del glúteo,
genitales, etc. El poder infectante es bajo y requiere un contacto
estrecho como familiares y contactos sexuales.
Periodo de incubación: 5-15 dias.
Tratamiento: Lindane.

2.4. DEMOCIDOSIS

Es producida por algunas especies de ácaros del género

Demodex (Demodex Follicubrun y brevis) que suelen ser comensales

235
 Microbiología

de folículos pilosos y glándulas sebáceas que pueden producir

Pitiriasis, acné, queratosis y epiteliomas.

TEMA 34: VIRUS

1.- INTRODUCCION

Desde antes del descubrimiento de los microorganismos se

utilizaban virus para cualquier agente productor de enfermedad ya
que etimológicamente virus significa veneno.
A finales del s. XIX Ivanosky demostró que una enfermedad el
“mosaico del tabaco” se podía transmitir de una planta enferma a
otra sana por medio de unos extraños organismos que se
machacaban y posteriormente se filtraban. Este agente era capaz de
atravesar los filtros que retenían las bacterias, así fueron
denominados virus filtrables.
Los virus mejor conocidos son los que afectan a las bacterias siendo
denominados por D´Merelle como bacteriófagos o fagos.

236
 Microbiología

Los virus constituyen una clase de agente infeccioso único. Son

parásitos intracelulares obligados y tienen unos rasgos
verdaderamente distinguidos debidos a su simple organización y su
mecanismo de replicación.
Una particicula vírica puede considerarse como un bloque de material
genético rodeado por una capa proteica, y a veces de una cubierta
membranosa adicional que le protege del medio ambiente, y le sirve
de vehículo para la transmisión de una célula huésped a otra.
Los virus se multiplican solo en determinadas células huésped, de
acuerdo con ello se subdivide en:
a) Virus animales
b) Virus vegetales
c) Bacteriófagos (virus que afectan a bacterias)

La especificidad de unión depende tanto de las propiedades de la

cubierta del virion (unidad formada por el ac. nucleico y la envoltura
proteica) como de la presencia de receptores especiales en la
superficie celular. Esta limitación desaparece cuando se produce la
transferencia es decir, cuando la infección es llevada a cabo por ácido
nucleico vírico desnudo.

2.- COMPOSICION QUIMICA DE LOS VIRUS

Básicamente están compuestos por proteínas, ac. nucleico y

también pueden contener lípidos e hidratos de carbono.
La proporción relativa de dichos constituyentes es muy variable en los
virus.

2.1.- PROTEINAS

Hay que diferenciar:

a) Proteínas estructurales: son las que dan forma al virus tienen
carácter antigénico lo cual permite identificar a los virus
mediante utilización de Acs específicos.
b) Proteínas con actividad enzimática: Ej.; enzimas necesarias
para la replicación del virus, absorción, penetración…

2.2.- ACIDOS NUCLEICOS

Los virus tienen un solo tipo de ácido nucleico bien ADN o ARN.
Este puede estar constituido por una sola cadena monocatenaria o
doble cadena bicatenaria. La información genética se halla situada
entre 1000 codones (conjunto de 3 bases nitrogenadas que codifican
a distintos aa) en virus de menor tamaño y 100.000 los de mayor
tamaño. Según el ac. Vírico tenemos:

 ADN monocatenario
 ADN bicatenario

237
 Microbiología

 ARN monocatenario
 ARN bicatenario

2.3.- LIPIDOS

Muchos virus contienen lípidos en su envoltura, la característica

fundamental es que son sensibles a disolventes orgánicos perdiendo
la infectividad. Por el contrario los virus que carecen de envoltura
lipidica en general son resistentes a tratamientos con disolventes
orgánicos.

2.4.- HIDRATOS DE CARBONO

Principalmente están formando parte de glicoproteinas las cuales

suelen localizarse en la membrana que rodea el virus.

3.- ESTRUCTURA DEL VIRUS

3.1.- ACIDO NUCLEICO

ADN y ARN: monocatenario y bicatenario.

3.2.- ENVOLTURA PROTEICA

Recibe el nombre de capsida (CAP) esta formada por unas

subunidades idénticas denominadas capsomeros.
Los capsomeros son proteínas globulares que en ocasiones tienen
una parte glucidica que se ensambla entre si dando a la cubierta una
forma geométrica.
A su vez los capsomeros están formados por un pequeño número de
monómeros. Se suelen presentar 2 tipos de capsomeros:
- Pentagonales (5 monómeros)
- Hexagonales (6 monómeros)
Dejando un espacio de 40 Amstrom.
Atendiendo a la forma de la cápsula se pueden distinguir los
siguientes tipos de virus:
• Cilíndricos o helicoidales: los capsomeros que son de un solo
tipo se ajustan en torno a una hélice simple del ac. nucleico, Ej.:
virus del mosaico del tabaco.
• Icosaedricos: los capsomeros que suelen ser de varios tipos se
ajustan formando un icosaedro regular y dejando un hueco
central donde se sitúan el ac. nucleico fuertemente
apelotonado, algunos presentan fibras proteicas que sobresalen
de la capsida, Ej.: Adenovirus en los que se encuentra los del
resfriado y faringitis.
• Pleomorficos: presenta una envoltura exterior además de la
nucleocapsida (capsida o cubierta que tiene como misión

238
 Microbiología

proteger el ac. nucleico) la cual puede ser icosaedrica o

cilíndrica, Ej.: virus de la gripe.

• Complejos: poseen además de nucleocapsida prolongaciones y

apéndices para facilitar la infección, ej: fagos de la serie T. por
lo general responden a la siguiente estructura:
- Una cabeza de estructura icosaedrica que alberga el ac
nucleico.
- Una cola de estructura helicoidal que sustituye un cilindro
hueco.
- Un collar de capsomeros entre la cabeza y la cola.
- Una placa basal al final de la cola con unos puntos de anclaje
que sirven para fijar el virus a la membrana celular. De la
placa salen también unas fibras proteicas que ayudan a la
fijación del virus sobre la célula hospedadora, Ej.: virus
bacteriófagos.

3.3.- ENVOLTURA LIPOPROTEICA

Muchos virus exteriormente a la capsida presentan una

envoltura de características similares a la membrana plasmática,
doble capa fosfolipidica y proteínas. Muchas de ellas son
glicoproteinas que proyectan salientes hacia el exterior llamados
especulas.
Se interpreta que la envoltura lipoproteica es un resto de la
membrana plasmática de la célula infectada donde se ha formado el
virus, (virus de la gripe).

3.4.- REPRODUCCIÓN DE LOS VIRUS

a. Fase de penetración en la célula

b. Fase de eclipse
c. Fase de multiplicación
d. Fase de liberación del virus

a.- Fase de penetración en la célula

Consta a su vez de 2 etapas: la adsorción o fijación del virus en

la superficie celular y la penetración a través de la membrana.
Hay una especificidad en la fijación de un virus en la membrana
de célula hospedadora, porque se ha de producir la unión entre
determinadas proteínas de la cápsida vírica y determinadas
glicoproteínas de la membrana plasmática. A lo largo de un proceso
evolutivo cada virus ha ido adquiriendo los sitios de unión específicos
para adherirse en la membrana de un determinado tipo celular.

239
 Microbiología

b.- Fase de eclipse

Corresponde a un tiempo después de la penetración en que el

virus parece desaparecer pues no se advierte ningún indicio ni de su
presencia ni de su actividad.
Lo que ocurre es que se produce un desensamblaje de piezas del
virus y su ácido nucleico en las estructuras celulares aptas para los
procesos de replicación y trascripción. Esta fase es variable para unos
virus y otros y termina con la síntesis de ARNm necesario para la
síntesis de las proteínas que actuarán en la multiplicación del virus.

c.- Fase de multiplicación del virus

Consiste tanto en la replicación del ácido nucleico como en la

síntesis de proteínas de la cápsida. Los ácidos nucleicos y proteínas
recién sintetizadas se ensamblan rápidamente produciéndose nuevas
partículas víricas.
d.- Fase de liberación del virus

Consiste en la salida de nuevas partículas del virus que podrán

infectar nuevas células iniciando de nuevo el ciclo.

4.1.- MODALIDADES DE PENETRACIÓN EN LA CÉLULA

a.- VIRUS COMPLEJOS

Producen una rotura en la membrana bacteriana en uno de los

puntos de anclaje gracias a la presencia de algunas moléculas de
enzimas hidrolíticas. A través de la rotura, el tubo central inyecta el
ácido nucleico vírico quedando la cápsula vacía en el exterior de la
bacteria. La presencia de la cápsida en la superficie bacteriana es un
buen indicio de que la bacteria ha sufrido infección vírica.

b.- VIRUS SIN ENVOLTURA LÍPIDICA

Se introducen en células con cápsida, lo cual puede realizarse de 2

maneras:
 Penetración directa: después de la fijación el virus abre una
brecha en la membrana y se introduce en el citoplasma.
 Por endocitosis: la membrana forma un invaginación en torno al
virus, llegando a formar una vesícula que penetra en la célula.
Formada la vesícula el virus abre una brecha en la membrana
de la misma con ayuda de algunas enzimas hidrolíticas que él
mismo transporta penetrando así en el citoplasma.

c.- VIRUS CON ENVOLTURA LIPÍDICA

240
 Microbiología

Burlan la barrera de la membrana celular porque su envoltura

lípidica se funde con la membrana ya que tiene la misma naturaleza.
Esta fusión de la membrana puede realizarse en 2 lugares:
 Fusión en la superficie de manera que el virión penetra en el
citoplasma.
 Fusión con un lisosoma, se forma una vesícula por endocitosis a
la que se une un lisosoma para dirigirle la partícula introducida,
entonces la cubierta lípidica del virus se funde con la
membrana del lisosoma y el virión escapa hacia el citoplasma.

4.2.- MODALIDADES DE FASE DE ECLIPSE

a.- CICLO ORDINARIO

El ácido nucleico vírico procede inmediatamente a la

transcripción de su mensaje genético en los ARNm necesarios para su
multiplicación y prosigue rápidamente el ciclo vital. Este tipo de ciclo
es el más extendido en la naturaleza.

b.- CICLO LISOGÉNICO

el ADN vírico se cierra en los extremos dando lugar a un ADN

circular que se inserta en el ADN bacteriano en un lugar específico en
el la secuencia de nucleótidos bacterianos es semejante a alguna
región del ADN vírico. La bacteria prosigue sus funciones vitales sin
que el virus realice ninguna acción y cuando el ADN bacteriano se
duplica también lo hace el vírico, de manera que el genoma del virus
pasa a las dos bacterias hijas. La multiplicación bacteriana puede
seguir durante generaciones sin que el virus se manifieste, pero ante
una alteración de las condiciones ambientales el ADN vírico se separa
del bacteriano y prosigue las restantes fases del ciclo infeccioso
produciendo la muerte de la bacteria y nuevos ejemplares del virus.
Un ejemplo de este ciclo son los virus de las verrugas y algunos
retrovirus que producen algún tipo de cáncer.

4.3.- MULTIPLICACIÓN DE LOS VIRUS

Consta de la replicación de su material genético, de la

transcripción de su mensaje en moléculas de ARNm y de la traducción
del mensaje para producir proteínas víricas, tanto las que se forman
para la cápsida como las proteínas enzimáticas necesarias para el
ensamblaje de las piezas del virión y algunas funciones necesarias
para el virus.
Los ribosomas y la mayor parte de los enzimas que los ácidos
nucleicos víricos utilizan en estos procesos son los de la célula
infectada.

4.4.- MODALIDADES DE LIBERACIÓN DEL VIRUS

241
 Microbiología

Tras su multiplicación los nuevos virus saldrán con capacidad de

infectar nuevas celulas. Así tendremos:

a.- CICLO LÍTICO

Se da en la mayor parte de los bacteriófagos y muchos otros

que no tienen cubierta lipoproiteica. Los virus no abandonan la célula
hospedadora hasta que se ha producido su muerte por agotamiento
de los recursos necesarios para sus funciones vitales, en ese
momento se produce la lisis de la célula y los viriones escapan libres
al medio.

b.- INFECCIÓN PERSISTENTE

Los nuevos virus no esperan a la muerte de la célula

hospedadora para abandonarla sino que van saliendo de la célula al
mismo tiempo que se van produciendo, de manera que la célula
puede seguir viva y produciendo nuevas partículas vivas. La
liberación puede hacerse:
♣ Directamente: en aquellos virus sin envoltura lipoproteica por
medio de una brecha en la membrana o por exocitosis (salida
de sustancias al exterior celular)
♣ Gemación: en virus con envoltura lipoproteica se rodean de
porciones de membrana plasmática que acaba separándose de
la célula y constituye la cubierta lipoproteica del virus.

5.- LISOQUIA

Hasta ahora todos los bacteriófagos descritos provocan lisis

celular, por lo que son considerados virulentos, pero puede
presentarse otra relación en que el virus se adapte una vez haya
infectado al huésped y no provoque su muerte. Este fenómeno de
denomina lisoliquia.
A la célula bacteriana que contiene el material genético del
virus pero que no se reproduce sin producir fagos se conoce como
cepa lisoliquia.
El material genético del virus que está en el interior de la
bacteria se denomina profago y al virus capaz de inducir lisoliquia,
virus atenuado.

6.- PATOGENÉSIS

La infección vírica puede tener muchos efectos sobre el

organismo, los cuales pueden oscilar desde una infección
asintomática hasta una infección aguda o la inducción a un cáncer.
Las consecuencias de la infección dependen de ciertos factores:
- Vías de transmisión.

242
 Microbiología

- Efectos sobre la función celular.

- Vía de multiplicación.
- Respuesta del huésped, etc.

6.1.- ALTERACIONES CELULARES PRODUCIDAS POR INFECCIÓN

VÍRICA

a.- EFECTO CITOPÁTICO

Consiste en alteraciones morfológicas de la célula que en

general causan su muerte. Los factores que contribuyen al desarrollo
son:
• Efecto sobre la síntesis de macromoléculas celulares: Los virus
que contienen ADN inhiben la síntesis de ADN de la célula del
huésped pero no del ARN de la bacteria ni de las proteínas
hasta periodos posteriores en el ciclo de multiplicación. Por lo
contrario muchos virus con ARN inhiben la síntesis de proteínas
y de ARN en las células huésped en los primeros periodos del
ciclo de multiplicación.
• Alteración en los lisosomas: Que pueden causar destrucción
celular.
• Alteración de la membrana celular: Las células infectadas por
virus pueden incorporar proteínas víricas en el interior de la
membrana celular adquiriendo antígenos delos viriones y
reacciona con anticuerpos o con linfocitos inmunes
convirtiéndose en blanco de la destrucción inmunológica. En
ocasiones la célula alterada adquiere la capacidad de adsorber
glóbulos rojos, es lo que se denomina hemoadsorción. En
otras ocasiones células infectadas se fusionan con las no
infectadas y después dela disolución de las membranas forman
células gigantes denominadas policariocitos.
• Un aumento de la concentración de viriones o de proteínas de
la cubierta vírica puede iniciar la formación de alteraciones
citopáticas sin replicación del virus infeccioso.

b.- DESARROLLO DE CUERPOS DE INCLUSIÓN

Los cuerpos de inclusión son masas intracelulares de nuevo

material, pueden formarse por:
• grandes acumulaciones de material vírico obstruyen la
estructura y función de la célula y causan la muerte.
• en ocasiones son cicatrices dejadas por una anterior
multiplicación vírica.

c.- INDUCCIÓN A ALTERACIONES CROMOSOMICAS.

d.- TRANSFORMACIÓN CELULAR

243
 Microbiología

Una consecuencia sorprendente de la infección por ciertos virus

moderados con la producción de tumores y leucemias.

7.- FACTORES INMUNOLÓGICOS

7.1.- ANTICUERPOS

Los anticuerpos presentes en el suero y en los líquidos

extracelulares proporcionan la protección principal contra la infección
vírica. El grado de protección se relaciona directamente con el nivel
de anticuerpos neutralizantes.
La inmunidad de larga duración con persistencia de Acs. circulantes
es el resultado de una infección con cierto número de virus,
especialmente los que producen viremia (diseminación del virus por
vasos sanguíneos y linfáticos), es extremadamente raro que la
persona sufra un segundo ataque, por el contrario las infecciones
localizadas agudas sin viremia especialmente enfermedades
respiratorias (gripe) no dejan inmunidad persistente y son frecuentes
nuevas infecciones.

7.2.- INMUNIDAD CELULAR

Es importante por intervenir en la recuperación vírica, mantiene el

estado de superación de las infecciones víricas latentes, por ejemplo
herpesvirus.

7.3.- FACTORES INESPECÍFICOS

Son factores que actúan más bien de forma indiscriminada sobre

todos los virus.

8.- CUADROS DE ENFERMEDAD

Los virus causan 3 cuadros básicos de infección:

8.1.- LOCALIZADA

La multiplicación vírica y lesión celular permanece localizada

cerca de la zona de entrada (piel en verrugas, aparato respiratorio en
gripe, etc.).

8.2.- DISEMINADA

Se desarrolla a través de unos pasos secuenciales:

1- El virus sufre multiplicación en la zona de entrada y en ganglios
linfáticos regionales.

244
 Microbiología

2- El virus se esparce por circulación sanguínea y vasos linfáticos

(viremia primaria).
3- Llega a órganos adicionales donde se multiplica.
4- El virus se disemina en los órganos afectados (viremia
secundaria).
5- Se multiplica en los órganos afectados donde causa una lesión
celular y patológica.

8.3.- INAPARENTE

Pueden desarrollarse infecciones víricas transitorias sin causar

enfermedad abierta (son aquellas en que el virus ha diseminado
ampliamente en el organismo y se alcanza un máximo en sangre y
bazo).
En la producción de infecciones inaparentes se hallan implicados
ciertos factores:
- Naturaleza del virus, los virus atenuados ocasionan infección
inaparente.
- Grado de inmunidad.
- Fracaso del virus en alcanzar el órgano diana.

9.- MÉTODOS DE VIROLOGÍA CLÍNICA

El diagnóstico de laboratorio de las infecciones virales se basa en 3

métodos:

9.1.- MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA

Como el cultivo de virus esta reservado para laboratorios

especializados.

9.2.- MÉTODOS SEROLÓGICOS

Con ellos se intenta detectar un aumento significativo del

titulo de anticuerpos para un determinado virus en el curso
de una enfermedad.

9.3.- CULTIVOS CELULARES

Donde distinguimos:
• Cultivos celulares primarios: proceden directamente de tejidos y
suelen tener una morfología epitelioide o fibroblástica.
• Cultivos celulares secundarios: proceden de repetidos pases de
los anteriores. Estos cultivos tienen una vida limitada pero en
ocasiones se consiguen células alteradas que van a ser capaces
de crecer indefinidamente dando lugar a una línea celular, que
es el método más utilizado en la actualidad.
Las más conocidas son: Hela, Hep-2 y KB, derivadas de
carcinomas humanos.

245
 Microbiología

10.- MEDIOS DE CULTIVO

Para mantener las mismas condiciones fisiológicas de presión

osmótica, pH, así como las concentraciones adecuadas de iones
orgánicos esenciales in vitro como in vivo se precisa una solución de
sales equilibradas (BSS) que es la base de todos los medios de cultivo
químicamente definidos.
Algunos medios contienen glucosa que proporciona los hidratos de
carbono necesarios.
Los medios que se emplean en cultivo celular son los siguientes:
- BSS de Hanks.
- BSS de Earle, con mayor capacidad del tampón que el anterior.
- BSS suplementado con vitaminas, aminoácidos y otros
nutrientes para formar medios sintéticos.
Los medios disponibles en el mercado más utilizados son:
- Nº 199.
- BME (Medio Basal de Earle).
- MEM ( Minimum Esential Médium).

11.- CLASIFICACIÓN (Ver fotocopia)

Las clasificaciones de los virus son complicadas y generalmente se

basa en 3 puntos:
 Naturaleza del ácido nucleico, si es ADN o ARN y si este ácido
nucleico es monocatenario o bicatenario.
 Simetría, si es helicoidal, icosaedrica, compleja, pleomorfica,
etc.
 Si presenta o no envoltura.
TEMA 35: VACUNAS

1.- INTRODUCCION

Las vacunas son preparados obtenidos a partir de

microorganismos que han perdido su eficacia para desencadenar la
enfermedad y que una vez se administrados producen en la persona
una inmunidad frente a la enfermedad de que se trate previniendo de
este modo la transmisión de la infección.
Las vacunas son preparados inocuos y que no causan por regla
general efectos secundarios de importancia, por ello es importante
que exista una amplia cobertura de vacunación en toda la población
para que la inmunidad colectiva haga que disminuya el número de
personas que padecen determinadas enfermedades infecciosas.

2.- CARACTERISTICAS GENERALES DE LAS VACUNAS

246
 Microbiología

Las dos propiedades principales que deben reunir una vacuna

son la seguridad y la eficacia protectora. Esta última a su vez esta
íntimamente relacionada con la inmunogenicidad. Otras cualidades
importantes son la estabilidad frente a los factores ambientales en
especial la Tª y la luz y un coste de producción bajo.
Las cinco propiedades fundamentales que debe reunir una
vacuna son:
 Seguridad: es una propiedad fundamental en cualquier vacuna
ya que estas deben de ser seguras incluso en individuos
inmunodeprimidos lo cual no quiere decir que no puedan tener
efectos secundarios.
 Inmunogenicidad: es la capacidad de un agente infeccioso de
inducir inmunidad específica.
 Eficacia protectora: hace referencia a los resultados o
beneficios de salud proporcionados por una vacuna o individuos
vacunado cuando ésta es aplicada en condiciones ideales.
 Eficiencia: consiste en relacionar los resultados de salud de un
programa de vacunación con los recursos movilizados para el
desarrollo del programa, es decir, la efectividad vacunal.
 Estabilidad: es la resistencia a la degradación física de las
vacunas que hace que mantenga sus propios inmunógenos.

3.- BASES INMUNOLOGICAS DE LAS VACUNAS

La inmunidad se desarrolla en el ser vivo cuando penetra en él

una sustancia antigénica y esta provoca la producción de Acs
por parte de los LB (inmunidad humoral) y la sensibilización de
los LT que actúa a través de macrófagos y factores citotóxicos
(inmunidad celular).
La inmunidad se puede adquirir natural o artificialmente.
 Inmunidad natural: puede ser activa y pasiva;
 Activa: se adquiere a través de una infección o
enfermedad.
 Pasiva: se adquiere a través de los Acs de la madre que
pasan al hijo por medio de la placenta o la leche.

 Inmunidad artificial: puede ser activa y pasiva;

 Activa: se consigue por medio de las vacunas estimulando
la activación de Acs. El grado de inmunidad producido por
una vacuna depende de la eficacia del Ag, de la
naturaleza del Ag, dosis aplicada, vía de administración,
reacciones individual.
 Pasiva: se administra directamente Acs (Ig y sueros) que
permiten una respuesta inmediata frente a la infección al
evitar el tiempo de latencia entre la inoculación del Ag y
la presencia de los Acs correspondientes. Hay que tener

247
 Microbiología

en cuenta que tras unas semanas se pierde la protección

porque los A son metabolizados por el receptor. Algunas
Ig de probada eficacia son antitetánica, antihepatitis A,
antihepatitis B, antirubéola (en embarazadas),
antisarampiosa (indicada especialmente en embarazadas,
niños y adultos debilitados), etc.

4.- RESPUESTA PRIMARIA Y SECUNDARIA

La primera exposición de un huésped a un Ag inmunógeno se

denomina inmunización primaria. La respuesta inmunitaria que le
sigue (débil y de corta duración) es la respuesta primaria.
La segunda exposición al mismo Ag inmunógeno se conoce como
inmunización secundaria y la respuesta generada más lenta y
duradera que la 1ª es la respuesta secundaria anamnesica o
booster.
La medición de la respuesta humoral (Ac séricos) es mas fácil
que la respuesta celular (LTh y LTc) de ahí que la mayoría de los
estudios sobre la cinética inmunitaria se hallan relacionado con la
inmunidad humoral. Los resultados son extrapolables a la inmunidad
celular ya que ambas son paralelas.

4.1.- RESPUESTA PRIMARIA

Se puede dividir en 4 fases:

• 1ª fase: periodo de latencia: es el tiempo que transcurre entre
la exposición al Ag y la detección de Ac en el suero. Los
humanos dura de 5 a 10 días este es el tiempo que los LTh y LB
tardan en ser activados es decir, en tomar contacto con el Ag
proliferador y diferenciarse.
• 2ª fase: exponencial: es esta fase se produce un incremento
exponencial en la concentración de Ac en el suero reflejando un
importante incremento en el nº de células plasmáticas
secretoras.
• 3º fase: fase de estabilidad: durante esta etapa el titulo de Ac
permanece estacionado reflejando un equilibrio entre la
producción y la degradación de Ac.
• 4º fase: fase de declinación: en esta ultima fase la
concentración de Ac decrece progresivamente como reflejo del
declive de la respuesta inmunitaria, no se produce nuevas
células plasmáticas y las existentes mueren o dejan de producir
Ac reflejando la progresiva eliminación del Ac.

En la respuesta primaria la 1ª clase de Ac detectados es por lo

general Ig M, la cual en algunos casos es la única Ig producida. Si se
secreta Ig G su aparición se acompaña de una rápida detección en la
producción de Ig M.

248
 Microbiología

4.2.- RESPUESTA SECUNDARIA

La reexposición al mismo Ag al cabo de un tiempo induce una

respuesta inmune secundaria mucho más intensa y duradera que la
primaria. El periodo de latencia es más corto (1-3 días). El incremento
del título de Ac es más rápido y los niveles alcanzados son más
elevados continuando la producción durante un largo periodo de
tiempo. Además las dosis requeridas de Ag es menor y los Ac
producidos son mayoritariamente de clase IgG .
Esta cinética más rápida, intensa y duradera de la respuesta
secundaria se debe a que en ella intervienen las células Th2 y los LB
de memoria producidas en grandes cantidades durante la respuesta
inmune primaria. Precisamente lo que distingue a la respuesta
primaria de la secundaria es la memoria inmunológica generada
durante la respuesta primaria, la cual es específica y de larga
duración. (ver tabla 4.2 y 4.3).

5.- CLASIFICACIÓN DE LAS VACUNAS

5.1.- CLASIFICACIÓN MICROBIOLÓGICA

Según su composición y forma de obtención podemos distinguir:

♣ Vacunas con microorganismos vivos: Se denominan también
vacunas atenuadas. Contienen microorganismos que han
perdido su virulencia, bien mediante inoculaciones sucesivas en
animales, por cultivo en líneas celulares o por medio de
manipulación genética. Estas vacunas producen respuesta
inmune (humoral y celular) de intensidad y duración mayor que
las logradas con microorganismos muertos. En general es
suficiente con una dosis y la inmunidad dura de por vida.
Ejemplo: polio oral, rubéola, sarampión, BCG (tuberculosis),
parotiditis y fiebre amarilla.
♣ Vacunas con microorganismos muertos: Se denominan vacunas
inactivadas. Estas vacunas pueden ser de 3 tipos:
- Con virus y bacterias completas: que han sido inactivados
por medios físicos (calor) o químicos (formol). Se recurre
a este método cuando no se conoce exactamente la
fracción inmunizante. Ejemplos: tos ferina, gripe, polio
parenteral, fiebre tifoidea, cólera y rabia.
- Con Ag purificados: solo contienen una parte del germen,
los Ag inmunizantes. A este grupo pertenecen las vacunas
antimeningocócicas A y C, antihaemophylus influenzae B,
antineumocócica y antihepatitis A y B obtenida a partir de
polisacáridos de la cápsula bacteriana.
- Con toxoides y anatoxoides: las toxinas eliminadas por
algunas bacterias se inactivan previamente por medio de

249
 Microbiología

calor, radiaciones ionizantes, formol, etc, e inducen la

formación de Ac (antitixinas). Ejemplo: vacunas
antitetánica y antidiftérica. El poder estimulante de
vacunas antitóxicas se incrementa asociándolas a las
vacunas bacterianas correspondientes o a sustancias
coadyuvantes como hidróxido de aluminio, que enlentece
la absorción del Ag con lo que facilita la capacidad
inmunizante de éste. (ver cuadro 5.1.)

5.2.- CLASIFICACIÓN SANITARIA

♣ Vacunas sistémicas: Son aquellas incluidas en el calendario

vacunal de una comunidad. Son las siguientes:
 Vacuna contra la difteria: La eficacia de las medidas
preventivas ha conseguido la eliminación en los países
industrializados. La difteria se transmite por contacto
íntimos con enfermos o portadores a través de
secreciones. Un 90-95% de los vacunados con 4 dosis de
DTP adquieres niveles séricos de antitoxina diftérica que
persiste inalterada durante 5 años. Las dosis se
administran a los 2,4 y 6 meses de edad.
 Vacuna contra el tétanos: Las dosis se inyectan a los 2,4,6
y 18 meses y a los 6 y 14 años de edad.
 Vacuna contra la tos ferina: La tos ferina se contagia a
través de secreciones. La inmunogenicidad es superior al
85% con tres dosis. Administración puede ser
intravascular o subcutánea. Las dosis se inyectan a 2,4,6
y 18 meses y a los 6 años de edad.
 Vacuna contra la poliomielitis: La poliomielitis es una
enfermedad vírica que presenta un amplio abanico de
manifestaciones clínicas; puede ser asintomático o
producir enfermedad febril inespecífica, meningitis y
enfermedad paralítica pudiendo causar la muerte. La vía
principal de transmisión es fecal-oral aunque también es
posible por secreciones respiratorias y vía
transplacentaria. La enfermedad puede contraerse a
cualquier edad siendo los niños más susceptibles. En la
vacuna de la polio oral la serie completa es de tres dosis
que induce inmunidad prolongada frente a los 3 polio
virus en el 100% de los vacunados. Las dosis se inyectan
a los 2,4,6 y 18 meses de edad.
 Vacuna contra el sarampión: el sarampión es una
enfermedad vírica transmitida por secreciones
nasofaríngeas o gotículas y produce síntomas como
fiebre, tos, rinitis, conjuntivitis y exantema (granos por
todo el cuerpo). La inmunidad es del 95%.
 Vacuna contra la rubéola: La rubéola es una enfermedad
vírica que se caracteriza por exantema, adenopatías y

250
 Microbiología

febrícula. Un problema más grave es la rubéola congénita

(las anomalías en esta forma pueden ser oftálmicas,
cardiacas, auditivas y neurológicas). Inmunidad del 98%.
 Vacuna contra la parotiditis: La parotiditis es una
enfermedad vírica caracterizada por hinchazón de las
glándulas salivares. Se transmite por gotículas y por
contacto directo con la saliva de la persona infectada. La
inmunidad es del 97-98%.
 Triple vírica: Constan las vacunas del sarampión, rubéola
y parotiditis. La inmunidad es del 95%. Las dosis se
inyectan a los 15 meses y a los 6 años.
 Hepatitis B: Se caracteriza por anorexia, nauseas,
vómitos, astenia, astromialgias y cefaleas que pueden
preceder a la ictericia. El virus se presenta en sangre,
fluidos, líquidos orgánicos, lagrimas y saliva. La
inmunidad es del 95-98%.

♣ Vacunas no sistémicas: Se entiende por vacunas no

sistémicas aquellas que no están incluidas en el calendario
vacunas de una comunidad. Son las siguientes:
 Vacuna contra la tuberculosis (BCG): La tuberculosis se
transmite por vía respiratoria. Las personas vacunadas
desarrollan una respuesta inmune a las 8-14 semanas
tras la vacunación. El efecto protector dura
aproximadamente 10 años. Administración por vía
intradérmica.
 Vacuna contra el cólera: El cólera se transmite por agua y
alimentos contaminados insuficientemente cocinados. La
eficacia de la vacuna es de aproximadamente del 50% de
la población vacunada. Tiene pobre inmunogenicidad con
una corta duración de 6 meses.
 Fiebre amarilla: Producida por un virus. El vector es el
mosquito Aedes aegypti, principalmente se da en zonas
tropicales y subtropicales. La eficacia de la vacuna es del
100% y mantiene inmunidad durante 10 años.
 Fiebres tifoideas: Se transmite por el agua y alimentos
contaminados. La eficacia es del 95-100% y la duración
de la inmunidad es de 3-5 años.
 Gripe: Enfermedad viral de transmisión aérea. La eficacia
de la vacuna es del 70-80% y se ha observado que la
eficacia vacunal decae con la edad.
 Hepatitis A: Producida por el virus VHA que se replica en
el hígado y se elimina en grandes cantidades por las
heces, por lo que la principal vía de transmisión es la
fecal-oral. Se administran 3 dosis y la eficacia protectora
es del 95%. La protección se estima que perdura al
menos durante 10 años.
 Vacuna contra el meningococo: Causa entre 500 mil y 600
mil muertes al año y afecta principalmente a lactantes y

251
 Microbiología

niños pequeños. Se vacuna contra el meningococo A y C y

no es válida para el meningococo B. La protección contra
el polisacárido A se mantiene durante 4 años después de
la inmunización primaria y dosis de recuerdo. La vacuna
contra el meningococo C es válida para niños menores de
24 meses. La vacuna bivalente A+C es más efectiva.
 Vacunación contra el neumococo: El único reservorio del
microorganismo es el hombre. La diseminación se realiza
por vía aérea o de manera indirecta por objetos recién
contaminados con secreción de las vías respiratorias. La
transmisión interpersonal es común pero la enfermedad
entre los contactos causales es poco frecuente. Su
eficacia es moderada con resultados que oscilan entre 45-
70% manteniéndose niveles detectables de Ac durante 5
años.
 Rabia: Es una enfermedad viral que afecta al SNC y
generalmente se transmite por la saliva de mamíferos.
También se puede transmitir por aerosoles. Es una
zoonosis que actualmente está erradicada en nuestro
país.

6.- CONSERVACIÓN DE LAS VACUNAS

Generalmente refrigeradas entre 2-8ºC. Las vacunas atenuadas

en la parte menos fría de la nevera y las inactivadas en la parte más
fría de la nevera. Siempre es conveniente evitar estantes inferiores, la
puerta y zonas cercanas al congelador.

7.- TÉCNICA DE ADMINISTRACIÓN DE VACUNAS

La administración de las vacunas puede ser por vía:

- oral
- intramuscular
- subcutánea
- intradérmica

8.- INTERVALO ENTRE VACUNAS Y OTROS PRODUCTOS

INMUNOLÓGICOS

8.1.- INTERVALO ENTRE MÚLTIPLES DOSIS DEL Ag

Los intervalos de tiempo superiores alo establecido en el

calendario vacunal no supone que se necesite reiniciar la pauta
completa de la vacuna no que se deban administrar dosis adicionales,
simplemente se ha de completar la serie establecida.

252
 Microbiología

La administración de vacunas a intervalos de tiempo menores

del mínimo recomendado pueden disminuir la respuesta inmune. En
algunas circunstancias pueden dar lugar a elevadas reacciones
adversas locales o sistémicas, probablemente debido a la formación
de complejos Ag-Ac que se han de evitar.

8.2.- INTERVALOS ENTRE VACUNAS E Ig

a. Vacunas de microorganismos vivos: En general no se deben

administrar simultáneamente con Ig. Constituyen excepciones a
esta regla las vacunas de la polio oral, fiebre amarilla y fiebre
tifoidea que pueden darse en cualquier momento, antes,
después o coincidiendo con algún producto que contenga Ig sin
que disminuya de forma significativa la respuesta inmune. El
intervalo mínimo que ha de transcurrir entre la administración
no simultánea de una vacuna de Ag vivo y una posterior de Ig
es de 2 semanas. En el caso de administrar primero las Ig el
tiempo que ha de pasar hasta poder dar una vacuna de
microorganismos vivos conteniendo virus de sarampión
depende de la dosis.
b. Vacunas con microorganismos muertos o toxoides: No hay
inconveniente en administrar Ig antes, después o
simultáneamente. En este último caso se deben poner vacuna e
Ig en distintos lugares.

8.3.- INTERVALO ENTRE DIFERENTES VACUNAS

Las vacunas inactivadas no suelen interferir con la respuesta

inmune a otras vacunas inactivadas o a vacunas de microorganismos
vivos por lo que pueden administrarse en cualquier momento, antes,
después o simultáneamente unas de otras. La única excepción sería
la administración de vacunas frente a la fiebre amarilla o el cólera
que no debe de hacerse a la vez.
En teoría en caso de que no se administre de forma simultanea, la
respuesta inmune a una vacuna de Ag vivo podía verse disminuida
por la administración de otras vacunas de Ag vivo con un intervalo
menor de 30 días, aunque no hay datos que avalen este concepto, de
todas formas es preferible espaciar las administraciones al menos 4
semanas.
No hay inconveniente en administrar 2 vacunas de Ag vivos de
manera simultánea.

8.4.- INTERVALO DE LAS VACUNAS CON OTROS

MEDICAMENTOS O TRATAMIENTOS

Es posible que un paciente que acude a vacunarse este sometido a

--------------------------------
La combinación de vacunas con productos hematicos o plasma así
como el padecimiento de alguna inmunodeficiencia son aspectos muy

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 Microbiología

importantes a la hora de establecer intervalos entre unos y otros, ya

que pueden limitar la respuesta de la vacunación.

9.- CONSIDERACIONES GENERALES, SEGURIDAD,

PRECAUCIONES Y CONTRAINDICACIONES DE LAS VACUNAS

• No se debe inmunizar en zonas donde se observan signos

locales de inflamación.

• Las vacunas reconstituidas si no se utilizan deben desecharse

ya que su actividad una vez reconstituidas es de 1 hora.

• Debemos tener en cuenta los beneficios obtenidos tras la

inmunización y ver si superan los posibles efectos adversos de
la misma, si es así se procederá a la vacunación.
• Contraindicaciones absolutas de la vacunación general
- Si la fiebre es superior a 38 º C
- Enfermedades infecciosas agudas con fiebre superior a 38
º C o trastornos considerados importantes por el medico.
- Alteraciones inmunitarias.
- Niños afectados por trastornos neurológicos evolutivos.
- Hipersensibilidad a los componentes de las vacunas.
- Procesos malignos en fase evolutiva.
- Cardiopatías descompensadas.

Contraindicaciones en el embarazo: Lo ideal seria que las mujeres

estarían debidamente inmunizadas antes de quedarse
embarazada. La gestación supone una situación en la que los
riesgos de las vacunas aumentan por ello ha de tenerse en cuenta
lo siguiente:
- no administrar vacunas vivas
- en general ninguna vacuna en el primer trimestre
- esta indicada la antitetánica en el segundo trimestre

• Contraindicaciones en alergias: La anafilaxia se manifiesta

generalmente como consecuencia de una sensibilidad previa a
los componentes vacunales tales como: el Ag principal, los
componentes animales del medio de cultivo (nuevo), Ab,
conservantes, excipientes, estabilizantes,etc.

• Falsas contraindicaciones: Son más numerosas y frecuentes

que lasverdaderas. Se consideran falsas contraindicaciones:
- niños que están tomando Ab
- esteroides a baja dosis
- dermatosis, eccemas o infecciones cutáneas
localizadas
- prematuridad
- historia de alergias inespecíficas

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 Microbiología

- antecedentes familiares de convulsiones

- lactancia materna
- síndrome de Down
- malnutrición
- calor veraniego
- la madre del niño este embarazada
- historia familiar de muerte súbita infantil
- tratamientos de sensibilización
- diabetes

• Efectos secundarios de las vacunas: Las reacciones

vacunales son muy variadas y el pronóstico oscila entre ser una
simple molestia hasta graves secuelas o muerte. Las reacciones
más frecuentes son leves o moderadas y son muy raras las
secuelas permanentes. Se pueden clasificar de la siguiente
forma:
 Reacciones locales: Pueden aparecer tras la aplicación de
cualquier vacuna más frecuentemente relacionada con la
DTT y a la vacuna contra las fiebres tiroideas. Aparece
dolor, enrojecimiento, induración, edema, inflamación,
etc. en el lugar dela inyección que desaparece
espontáneamente, también pueden dar lugar a pápulas y
vesículas localizadas. En algunos casos se producen
abscesos estériles en el lugar de la inyección, sobretodo
tras vacunas de virus inactivados.
 Reacciones sistémicas: Si aplicamos vacunas
intramusculares puede aparecer un cuadro de mareo e
hipotensión secundaria que no debe interpretarse como
un efecto adverso de la vacuna. Tras la vacunación
inmediatamente o en un corto periodo de tiempo debe
vigilarse la aparición de cualquiera de las siguientes
alteraciones:
- Adenopatías.
- Reacción alérgica, considerada como la
presencia de urticaria, espasmo bronquial,
edema localizado o generalizado.
- Erupción cutánea.
- Anafilaxia, cuadro grave que produce edema de
glotis con diseña, estado de shock y colapso
cardiovascular o respiratorio.
- Reacción de hipotonía e hipoactividad, definido
como la disminución o perdida del tono
muscular, palidez, cianosis, disminución o
perdida de conciencia con o sin parada
cardiocirculatoria.
- Somnolencia.
- Artritis.
- Vómitos o diarreas.
- Trombocitopenia.

255
 Microbiología

- Fiebre.
 Reacciones neurológicas: Se han descrito diversos
cuadros neurológicos relacionados con las vacunas
aunque no en todos ellos se ha podido demostrar una
verdadera reacción causal. Se deben conocer, vigilar y
comunicar cualquiera de las siguientes alteraciones:
- Llanto persistente.
- Convulsión.
- Encefalopatías (requiere diagnóstico médico).
- Meningitis (requiere diagnóstico médico).
- Anestesia.
- Parálisis.
 Reacciones secundarias a la mala utilización de las
vacunas: Pueden ser debidas a :
- Haber utilizado material o un producto
inmunizante contaminado o en malas
condiciones de conservación.
- La administración de la vacuna a un grupo de
edad inapropiado.
- Administración de la vacuna sin tener en cuenta
sus precauciones, vías de administración,
posología y calendario vacunal.
 Reacciones de hipersensibilidd.
 Reacciones idiosincrásicas.

10.- CALENDARIO VACUNAL

(Fotocopia)

11.- VACUNAS Y VIAJES INTERNACIONALES

(Fotocopia)

12.- CONSIDERACIONES MÉDICAS DESPUÉS DEL VIAJE

Los síntomas a tener en cuenta para la consulta médica son:

• fiebre de cualquier tipo, especialmente intermitentes.
• Mal estar general con dispepsias y nauseas.
• Diarreas repetidas.
• Tos persistente, especialmente con expectoración.
• Hepatalgia (dolor de hígado), especialmente ictericia.
• Alteraciones urinarias.
• Manifestaciones cutáneas.
• Ulceras principalmente en las áreas genitales y perianales.

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 Microbiología

13.- CARACTERÍSTICAS DE LA VACUNA IDEAL

 Reproducir una respuesta inmunológica similar a la dela

infección natural.
 Efectividad superior al 90%.
 Mínimos efectos secundarios y completamente segura.
 Inmunidad persistente a largo plazo.
 Dosis única y compatible con otras vacunas.
 Administración no invasiva (vía oral preferentemente).
 Administración precoz en los primeros meses de vida.
 Estable a temperatura ambiente.
 Fácil producción y económicamente asequible.

14.- VOCABULARIO RELACIONADO CON VACUNAS

(Fotocopias)

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