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BIOCHIMICA APPLICATA AA 2020-2021 3° LAB CTF --REPORT

A) SDS-PAGE 1. Schematizza una camera elettroforetica verticale e tutti i suoi componenti. Specifica la
disposizione degli elettrodi

2a. Come devono essere preparati i campioni proteici per l’SDS-PAGE prima di essere caricati sul gel?
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2b. Come si procede per essere sicuri che il campione sia denaturato?
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3. Quando si deve interrompere la corsa elettroforetica? …………………………………………………………………………..………

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Motiva la tua risposta……………………………………………………………………………………………………………………………………………….

4. Schematizza il risultato di una SDS-PAGE (segnando anche la disposizione degli elettrodi) in cui sono state caricate
nei pozzetti 1-4 le seguenti proteine di cui conosciamo il PM. 1) Emoglobina umana A: 66.000 Da (ATTENZIONE
proteina con struttura IV vedi es 9) 2) Mioglobina: 18.000 Da; 3) Lisozima: 14.000 Da; 4) Albumina bovina; 66.000 Da

B) IEF 5. Nel retro di questo foglio schematizza i componenti del sistema IEF, mostra come sono collegati e spiega il
ruolo di ciascuno di essi.
6. Schematizza il risultato di una IEF monodimensionale condotta in condizioni native su un gel di poliacrilamide a
partire dalla stessa miscela di proteine effettuata al punto 4, i cui pI sono riportati nell’esercizio 9 .

7. Spiega perché il risultato della IEF è indipendente dalla posizione in cui sono caricati i campioni nel gel.

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C) 2-DE 8. Spiega e schematizza come si può procedere per effettuare una elettroforesi bidimensionale, e come si
deve combinare la prima e la seconda dimensione

9. Schematizza il risultato di una elettroforesi bidimensionale in cui è stata caricata una miscela contenente le
seguenti proteine di cui conosciamo sia il pI che il PM:

1) HbA 66.000 Da, pI 6.9 (attenzione proteina con struttura IV subunità alpha: PM 15700 Da, pI 7.8, subunità beta:
PM 16200, pI 6.4); 2) Mb 17.600 Da, pI 7.3; 3) Lisozima 14.000 Da, pI 11.35; 4) Albumina bovina 66.000 Da, pI 4.7.