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[S]
Fatores que influenciam a atividade
enzimática
• Concentração de substrato
▫ Desvios da linearidade ocorrem:
Presença de inibidores na solução de enzima;
Presença de substâncias tóxicas;
Presença de um ativador que dissocia a enzima;
Limitações impostas pelo método de análise.
Determinação da velocidade de reação
• Complicador - a concentração do substrato
varia ao longo da reação à medida que este vai se
transformando em produto.
Velocidade de reação
[P] é baixa
Cinética de Michaelis e Menten
• Modelo cinético que melhor explica a influência
das concentrações iniciais de enzima e substrato
na velocidade inicial da reação enzimática
(1913)
Leonor Michaelis -Enzimologista
Maud Menten - Pediatra
Cinética de Michaelis e Menten
• Hipóteses:
▫ O substrato e a enzima reagem reversivelmente
entre si formando um composto intermediário
denominado complexo enzima-substrato.
▫ O complexo formado ou se decompõe,
regenerando a enzima e formando os produtos da
reação.
Cinética de Michaelis e Menten
A constante de Michaelis
Reescrevendo...
(KM) é definida como:
Cinética de Michaelis e Menten
• Considerando que a concentração da enzima livre [E] corresponde à
concentração da enzima total [ET], menos a concentração da enzima ligada [ES]
Como: v0 = K3 [ES]
Então Equação de
Michalis-Menten
Cinética de Michaelis e Menten
Vo = V [S] Essa equação explica o comportamento
max
da cinética de reações catalisadas por
Km + [S]
enzimas:
3) Se [S] é igual a KM
v = Vmax [S]
v 2
Km
v = Vmax
1
Vmax 3
2
Km [S]
Determinação de Km e Vmáx
• Método gráfico de Lineweaver-Burk
1 Km 1 1
= + v
v Vmax [S] Vmax
Inclinação =
Km
Vmax
1
Vmax
-1 1
Km [S]
Determinação de Km e Vmáx
• Método gráfico de Eadie-Hofstee
v
v=V −K
max m [S]
Vmax -Km
Inclinação =
v
Vmax
Km
v
[S]
Determinação de Km e Vmáx
• Método gráfico de Hanes-Woolf
[S] K 1
[S]
m
= + [S] v
v V V
max max
Inclinação =
1
Km Vmax
Vmax
-Km [S]
Constante de afinidade
KM = K2 + K3
K1
Imaginando um caso limitante, em que k2 seja muito maior
do que k3; isto significa que a dissociação do complexo ES
em E mais S é mais rápida do que a formação de E mais
produto (P). Portanto, quando k3 é muito menor do que k2,
KM é igual à constante de dissociação de ES. Em outras
•Km alto – baixa afinidade
•Km baixo – alta afinidade
•Km depende:
o aspectos específicos do mecanismo de reação;
o n° de passos da reação;
o velocidades relativas dos passos individuais