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HEMATOLOGIA
Para la coloración, una vez seco el extendido no se deja pasar más de una
hora:
♦ Se aplica 1 cm colorante de Wright por 1 minuto.
♦ Se aplica buffer Giordano (que debe mantenerse en la nevera, pero a
temperatura ambiente en el momento de emplearlo) por 6 minutos.
♦ Se lava la lámina con agua de chorro, se seca por la parte posterior y
se deja secar a temperatura ambiente en posición vertical.
HEMOGLOBINA
FUNDAMENTO
El ión ferroso de la HB se oxida a ión férrico por acción del ferricianuro
potásico formándose hemiglobina (metahemoglobina). La hemiglobina
reacciona con el cianuro para formar cianhemiglobina
(cianmetahemoglobina) que se puede medir por espectrofotometría.
REACTIVOS
Reactivo concentrado y patrón de Hb, deben guardarse en refrigeración,
bien cerrados, protegidos de la luz y evitar su contaminación durante su
uso para que se conserve hasta la fecha indicada en la etiqueta.
Presencia de turbidez, partículas en el reactivo y el blanco son
indicaciones de deterioro, además de lecturas superiores de 0,010 a 540
nm del blanco.
Reactivo de trabajo: Diluir el contenido del frasco de reactivo
concentrado hasta 1000 ml con agua destilada, agitar. Para preparar otros
volúmenes mezclar en proporción 1 ml de reactivo concentrado + 49 ml
de agua destilada. Conservar en frasco oscuro siendo estable 6 meses a
15-30°C: No congelar.
MUESTRAS
Sangre capilar o venosa recogida con EDTA o heparina.
La Hb en sangre es estable 6 días de 2-8°C.
PROCEDIMIENTO
BLANCO PATRON MUESTRA
PATRON -- 10 ul --
MUESTRA -- -- 10 ul
REACTIVO 2.5 ml 2.5 ml 2.5 ml
TRABAJO
Agitar y dejar por 3 minutos a temperatura ambiente.
Leer las absorbancias a 540 nm frente al blanco. El color es estable por
varias horas.
Cálculos:
Con patrón:
A muestra
------------ X C patrón = C muestra
A patrón
Sin patrón:
A muestra X 37,5 = C muestra
VALORES NORMALES:
HOMBRES MUJERES
12-14 años 12,0-16,0 g/dl 11,5-15,0 g/dl
15-17 años 11,7-16,6 g/dl 11,7/15,3 g/dl
18-74 años 13,5-17,5 g/dl 12,0-16,0 g/dl
CARACETERISTICAS METROLOGICAS
Límite de detección: 0,2 g/dl de Hb.
Límite de linealidad: 20 g/dl. Para valores superiores diluir la muestra
½ con agua destilada y repetir.
Interferencias: La bilirrubina no interfiere. La lipemia puede elevar
falsamente los resultados debido a la turbidez. Otros medicamentos y
sustancias pueden interferir.
HEMATOCRITO
En la lámina una vez coloreada se lee con objetivo de 100X las células
vistas hasta llegar a 100 células contadas. La lectura se realiza en sentido
vertical y de derecha a izquierda buscándose con anterioridad en 10X la
zona ideal, en la parte media del frotis. Cada valor se dará en porcentaje
de células vistas.
Es importante diferenciar los tres tipos de células que podemos observar:
♦ Células nucleadas (leucocitos) con función defensiva.
♦ Células anucleadas (hematíes) con función respiratoria.
♦ Seudofragmentos citoplasmáticos (plaquetas) con función
hemostática.
Para linfocitos atípicos se debe informar: si son mas del 10% (es decir,
sumándolos al total de los linfocitos) se deben informar en el diferencial
de los 100 leucocitos. Si es menor del 10% del total de linfocitos solo se
anotan como: se observan linfocitos atípicos escasos.
En caso de reacción leucoeritoblástica se incluyen por aparte dentro del
recuento diferencial. Además la presencia de normoblastos deberán
incluirse como se menciono.
FORMA DE CORRECCION:
1. Hacer el recuento diferencial.
2. Saber cuántos normoblastos o cuantos restos nucleares se obtuvieron
en este recuento.
3. Conocer el recuento total de blancos.
Son los monocitos que de sangre periférica pasan a los diferentes tejidos,
con actividad macrofágica. Sus características dependen del tejido al cual
ha migrado:
NOMBRE TEJIDO
Histiocitos Conjuntivo
Células de Kupfer Hígado
Macrófagos alveolares Pulmón
Macr. de cordones y senos esplénicos Bazo
Células sinusoidales Ganglio linfático
Macrófagos medulares Médula ósea
Macrófagos de las serosas Pleura y peritoneo
Osteoclastos Hueso
Células de la microglia Sistema nervioso
LINEA PLASMOCITICA
Si la orden además indica otro examen que implique la toma de tubo con
EDTA, la muestra será tomada del mismo tubo y no se puncionara al
paciente en su dedo índice.
MUESTRA
No se requiere preparación especial del paciente para obtener la muestra.
Se puede tomar muestra venosa (usando anticoagulante) o por punción
capilar en este caso si la prueba se realiza de una vez sin retrasos para
evitar que la muestra se seque. Lavado de glóbulos rojos de pueden
almacenar en solución preservante de 2-8°c por no más de 35 días.
GOTA GRUESA
Se coloca dos gotas en una lámina portaobjetos sin tocar la piel, la cual se
ha divido imaginariamente en 3 partes, una para marcarla en el extremo
derecho y los otros dos espacios para colocar cada gota. Se extiende la
sangre de cada gota utilizando el ángulo y los primeros 5 mm del borde
longitudinal de otro portaobjetos se extiende la gota amanera de “N” para
formar un rectángulo de 1,5 a 0.5 cm; se hacen 2 laminas que se dejan
secar a temperatura ambiente en posición horizontal, se deben colorear
antes de 2 horas de tomadas empleando la coloración de Field.
Limpiar con alcohol la lámina que se utilizó para las gotas gruesas con el
fin de evitar la contaminación de las siguientes muestras. Es importante
tener en cuenta que el exceso en el tiempo de secado, el alcohol o el calor
pueden fijar la hemoglobina, haciendo inadecuada la muestra para el
diagnóstico de malaria.
LECTURA:
Con base en el número de leucocitos. En gota gruesa se cuentan los
trofozoitos, esquizontes y gametocitos para P. vivax; y/o trofozoitos
y/o gametocitos, aunque ocasionalmente esquizontes para P.
falciparum, presentes en los campos microscópicos determinados con
10X y 40X donde se encuentre mayor número de leucocitos. Un buen
campo microscópico es aquel en donde se encuentran de 10 a 20
leucocitos, mirando los campos hasta que estos sumen 100 leucocitos.
Conociendo el número de leucocitos por mm3 se puede calcular la
cantidad de parásitos en este volumen de sangre.
De no visualizar el parásito, se deben observar 200 campos para
calificar la muestra como negativa.
Ejemplo: paciente con malaria con un recuento de 8.000 leuc/ul de
sangre. Se establece la proporción de parásitos en 100 leucocitos
encontrados:
# de parásitos X 8.000 luec/ul de sangre / 100 leucocitos = # de
parásitos/ul de sangre.
INFORME DE RESULTADOS:
Con base en el número de leucocitos: Para los casos de P. vivax no se
debe hacer recuento ni diferenciación entre las formas sexuadas y
asexuadas. En los casos de P. falciparum se debe informar por
separado las formas sexuadas y asexuadas. En las infecciones mixtas
se debe registrar primero el parásito prevalente y luego la especie
subordinada.
Ejemplos:
• Hemoparásitos: Negativo.
• Hemoparásitos: Positivo para P. vivax.
• Hemoparásitos: Positivo para P. falciparum (50.000 trofozoitos/ul).
• Hemoparásitos: Positivo para P. falciparum (100 trofozoitos/ul y 5
gametocitos/ul).
• Hemoparásitos: Positivo para P. falciparum (200 gametocitos/ul).
• Hemoparásitos: Positivo para infección mixta: P. vivax (5.000
parásitos/ul) y P. falciparum ( 2.000 trofozoitos/ul).
• Hemoparásitos: Positivo aunque no se puede precisar la especie. Se
sugiere nuevo examen.
reemplazando y simplificando: