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Subturma: T3
Professora: Fernanda Badotti
O grupo de microrganismos caracteriza-se por ser completamente heterogêneo tendo como única
característica comum o pequeno tamanho. Além disso, interagem com outros seres vivos, quer
como organismos comensais não induzindo qualquer dano, quer como organismos simbiônticos
que ambos se beneficiam da relação ou como organismos patogênicos que causam
enfermidades. Acredita-se que metade da biomassa do planeta seja constituída por
microrganismos e os outros 50% são distribuídos entre 35% de plantas e 15% de animais.
Em 1997, foram publicados relatos das expedições da NASA a Marte, sugerindo a presença de
microrganismos em minerais lá encontrados, sendo que partículas semelhantes foram também
detectadas em meteoritos que atingiram a Terra.
Os microrganismos formam uma comunidade viva e vibrante no solo. Um solo típico tem milhões
de bactérias em cada grama. Essa população microbiana é maior nos poucos centímetros do topo
do solo e declina rapidamente com a profundidade. Nenhum único meio nutriente ou condição de
crescimento pode encontrar todos os nutrientes e outras exigências necessárias para todos os
microrganismos do solo. Nos ciclos biogeoquímicos, os elementos são oxidados e reduzidos por
microrganismos para fornecer suas necessidades metabólicas. Sem os ciclos biogeoquímicos, a
vida na Terra não existiria.
Os microrganismos do ar podem ter origem do solo que são passados para o ar com o auxílio dos
ventos, através de gotas de água que se desprendem da superfície, através de depósitos de
resíduos, através da respiração e expelição de seres vivos. Os fatores que afetam a microbiota do
ar são: a umidade, a temperatura, a radiação e a densidade populacional. Os principais tipos de
microrganismos encontrados no ar são os esporos de fungos e bactérias esporulantes.
Meios com caldo de cana são ricos em sacarose, o que favorece o crescimento de leveduras, já
que elas utilizam o açúcar para obter energia (ATP). Meios a base de batata são ricos em
carboidratos complexos que os fungos são capazes de matabolizar e que bactérias normalmente
não conseguem utilizar como nutrientes. Meios a base de caldo de carne e frango são utilizados
para o crescimento de bactérias, pois são ricos em proteínas, lipídios e vitaminas que são
indispensáveis para o crescimento bacteriano.
2. Objetivos
Produzir meios alternativos de cultura de menor custo; verificar a existência de diferentes tipos de
microrganismos em diversos ambientes e superfícies; reconhecer e compreender a relação meio
de cultura e tipos de microrganismos e reconhecer a ubiqüidade de microrganismos e a
interferência do tempo de exposição no crescimento microbiano.
3. Materiais necessários
3.1 Reagentes:
• Açúcar (glicose)
• Ágar Nutriente
• Ágar Sabouraud
• Água destilada
• Caldo de frango ou carne
• Extrato de levedura
• Extrato de solo
• Garapa
• Infuso de batata
• K2HPO4
• Solução de HCl
• Solução de NaOH
3.2 Materiais
• Alça de Drigalski
• Barbante
• Bastão de vidro
• Béqueres
• Caneta permanente de ponta fina
• Erlenmeyer
• Espátula
• Estante para tubos de ensaio
• Fita de autoclave
• Fósforos
• Micropipeta automática
• Papel Kraft
• Placas de Petri
• Ponteiras para pipetas
• Proveta
• Recipiente de plástico
• Saco plástico
• Swabs
• Tubos de ensaio
3.3 Equipamentos
• Autoclave
• Balança semi-analítica
• Bico de Bunsen
• Capela de fluxo laminar
• Estufa incubadora
• Geladeira
• Panela de pressão
- Água - cálcio - pH 6 Se -
- - fósforo descarta Balança Manter Ver
- meio do no refrigerad referência
carboidratos - ferro -
homogêne esgoto o s
Meio Autoclav bibliográ-
- Vitamina - potássio o. comum,
com e ficas
B6 - glicose faz com
caldo (Item
que os - Bico de
de cana - Vitamina C. - polissacarí- 5.1.4)
microor- Bunsen
- Ágar deos ganismo
-
- Extrato de (agarose e s se
micropi-
levedura multipli-
agaropectina petador.
quem de
) forma -
- excessiv espátula
maltodextrin a.
- uso de
a
jaleco
- Vitaminas - Ferro - pH 7 Se -
Meio B1, B2, B6, - magnésio descarta Balança Manter Ver
B12 - meio do no refrigerad referência
com - fósforo -
- Niacina homogêne esgoto o s
caldo Autoclav bibliográ-
- potássio o. comum,
de - Ácido e ficas
pantotênico - zinco faz com
carne/ (Item
que os - Bico de
frango - Folacina - selênio 5.1.4)
microor- Bunsen
- Ácidos - glicose ganismo
Graxos -
- polissacarí- s se
micropi-
- Ágar multipli-
deos petador.
quem de
- Mel
(agarose e forma -
- Água excessiv espátula
agaropectina
a.
) - uso de
jaleco
- Ágar - proteínas - pH 5 Se -
Meio à - Água - descarta Balança Manter Ver
base de destilada - meio do no refrigerad referência
carboidratos -
homogêne esgoto o s
batata Autoclav bibliográ-
- Infuso de (amido) o comum,
batata e ficas
- fibras faz com
(Item
alimentares que os - Bico de
- glicose 5.1.4)
microor- Bunsen
- glicose ganismo
-
- polissacarí- s se
micropi-
multipli-
deos petador.
quem de
(agarose e forma -
agaropectina excessiv espátula
a.
) - uso de
jaleco
- Solo neutro - Micro e - pH entre Se -
Extrato macro 5e7 descarta Balança Manter Ver
- Água
nutrientes do no refrigerad referência
de solo destilada vari-ados -
- meio esgoto o s
Autoclav bibliográ-
- Ágar - K2HPO4 homogêne comum,
e ficas
- glicose - fibras o. faz com
(Item
que os - Bico de
- celulose 5.1.4)
microor- Bunsen
- polissacarí- ganismo
deos -
s
(agarose e micropi-
cresçam
agaropectina petador.
) de forma
excessiv -
a. espátula
- jaleco
- Peptona - glicose - Pó fino e O - Deve ser http://w
higroscópi descarte Balança armazenad ww.hexa
- dextrose - polissacarí-
co do ágar o no frasco systens.
Ágar - Ágar deos - com tampa
Sabour propicia com.br/v
Autoclav rosqueável,
- Extrato de (agarose e - meio o er.asp?
aud e a
levedura agaropectina homogêne crescime temperatur Dep=47
o n-to de - Bico de a ambiente 97&Seca
)
microrga Bunsen (abaixo de o=79584
- - pH baixo -nismos 30 ºC) e &Cat=60
maltodextrin - após a
(5,6) em 68&Prod
a micropi- preparação
meios uto=100
petador. do meio, de
aquático 2-8 ºC. 378
s ou em -
esgoto espátula
comum
- uso de
jaleco
4.2 Planejamento de gastos de soluções/meios de cultura e cálculos para o planejamento
do(a)s mesmo(a)s (Tabela 02)
5.1 Procedimentos/metodologia
Técnicas assépticas:
Antes do início da aula, realizar a lavagem de mãos e passar álcool em todas as bancadas. Para
realizar inoculações, utilizar a área em volta de um bico de Bunsen ligado ou a capela de fluxo
laminar.
• Ajustar o pH para 5.
• Autoclavar.
• Para cada 5mL de caldo de cana, adicionar 0,5g de levedo de cerveja e 2g de ágar.
• Verter o meio esterilizado em placas de Petri junto à chama do bico de Bunsen e deixar
solidificar.
• Ajustar o pH para 5.
• Autoclavar.
• De forma asséptica, adicionar o meio na placa Petri e esperar até que solidifique.
• Incubar à temperatura de
• Com duas placas de ágar sabouraud e duas de ágar nutriente em mãos, ir ao local desejado.
• Abrir as placas ao ar livre. Ao final de 5 minutos, fechar uma de cada. Ao final de 15 minutos,
fechar as restantes
Como é possível observar na Tabela 03, o meio à base de batata favorece o crescimento de
fungos filamentosos, pelo fato de possuir amido em sua constituição e seu pH estar em torno de
5. No vestiário masculino, no entanto, observou-se um crescimento de incontáveis colônias de
aspecto mucoso, isso pode ser devido ao grande número de bactérias presentes neste local.
Os meios com caldo de carne e frango favorecem o crescimento de bactérias, pois seu pH está
em torno de 7 e esses contêm proteínas, carboidratos e vitaminas, principalmente. Portanto,
observa-se na Tabela 03, que não houve (se sim, foi pequeno) crescimento de colônias com
aspecto filamentoso, enquanto, em sua maioria, o número de colônias com aspecto mucoso foi
incontável, apresentando diversas morfologias.
O meio com caldo de cana favorece o crescimento de leveduras, principalmente, pois seu pH está
em torno de 6 e esse possui em sua composição glicose em grande quantidade. Logo, é possível
concluir, a partir de observações da Tabela 03, que o vestiário masculino e o bebedouro possuem
micro-organismos dessa classe
No extrato de solo, analisado na Tabela 04, apesar de na maioria das placas não haver
crescimento, na placa com amostra de terra do vaso de planta do corredor do 4º andar é possível
observar o crescimento de colônias com aspecto mucoso, típico de bactérias; portanto, pode-se
concluir que esse meio de cultura alternativo favorece o crescimento dessas, isso pode ser devido
à sua constituição e seu pH.
• 2 colônias • Incontável
Uma de coloração 5 morfologias diferentes:
Vestiário masculino Meio à base de marrom e outra Colônias de tamanhos e cores
batata esbranquiçada. Ambas variados: róseas, alaranjadas,
opacas, com centro negro esbranquiçadas, centro negro
e bordas claras. e bordas claras.
• Incontável
- 9 morfologias diferentes:
Meio com caldo de Nenhuma colônia Uma colônia grande, com
carne centro claro e bordas mais
escuras, sobre outras
colônias; uma grande,
enrugada, com aspecto de
cérebro; diversas colônias
translúcidas, esbranquiçadas,
disformes, com borda
irregular; duas colônias
róseas, com borda irregular,
sobre outras colônias,
apresentando falhas; um tipo
branco, pequeno; outro
alaranjado, pequeno, com
colônias espalhadas por toda
a placa; três colônias
brancas, irregulares e
côncavas; um tipo rosa claro,
pequeno; outro grande,
branco e translúcido.
• Incontável
- 4 morfologias diferentes:
Meio com caldo de Não houve crescimento Colônias rosa claro,
cana pequenas; colônias
esbranquiçadas, pequenas,
sobre toda a placa; três
colônias de tamanho médio,
esbranquiçadas; duas
colônias pequenas e
amareladas.
Tabela 04. Isolamento de bactérias do solo – meio de cultura alternativo: Extrato de solo
• 67 colônias
15
Não houve crescimento - 7 morfologias diferentes
• 15 colônias
5
Ágar nutriente Não houve crescimento - arredondadas, transparen-
Hall tes em seu centro e brancas
nas bordas.
• 24 colônias
15
Não houve crescimento - arredondadas, com bordas
mais escuras que o centro
Ágar • 24 colônias • 1 colônia
5
sabouraud - colônias arredondadas, - pequena e arredondada
transparentes em seu
centro e brancas nas
bordas
• 29 colônias
15 Não houve crescimento
- Diferentes formas e cores,
colônias sobrepostas.
• 3 colônias
5 Colônias brancas, leitosas e
Cantina Ágar nutriente Não houve crescimento
brilhantes.
• 15 colônias
15 Duas morfologias: uma com o
Não houve crescimento mesmo aspecto das
apresentadas na placa
exposta por cinco minutos e a
outra amarela e brilhante.
• 4 colônias • 4 colônias
Ágar 5 Três morfologias: uma é Duas morfologias: uma é
Sabouraud rosa, com bordas brancas; branca e brilhante e a outra é
outra é cinza com a borda bege claro e brilhante.
cinza claro; a outra é
laranja.
• 6 colônias • 6 colônias
15 Cinco morfologias: uma é Três morfologias: uma
rosa, com bordas brancas; bege claro e brilhante;
outra cinza e leitosa; e a
outra é cinza com a borda
última branca e brilhante
cinza claro; outra é cinza
com a borda bege; outra é
laranja claro com a borda
laranja mais claro; e a
última é toda branca.
Os meios utilizados podem ser reaproveitados transformando estes em alimentos para animais e
adubos. Para a produção dos alimentos e adubos seria necessário o tratamento dos produtos
gerados pela degradação do meio e pelo metabolismo das bactérias. Porém, não foram
encontradas pesquisas nessa área. O tratamento existente consiste na combustão dos meios, o
que gera muita poluição por gás carbônico e resíduos sólidos não identificados.
5.1.3 Conclusão
Foi possível concluir que, mesmo em situações de pouco recurso, é possível a cultura de
microrganismos através de meios alternativos, feitos com substâncias comuns do nosso dia a dia;
que microrganismos estão em todos os lugares e é notória a diferença de tempo de exposição
para o crescimento dos mesmos; e que é de extrema importância conhecer os meios de cultura
para o crescimento de cada tipo de microrganismo para conseguirmos um bom resultado. Foram
utilizadas técnicas já aprendidas antes e foi possível o reconhecimento da importância das
técnicas apresentadas.
5.1.4 Bibliografia
- MICHAEL J. PELCZAR JR. & E.C.S. CHAN & NOEL R. KRIEG. Microbiologia: Conceitos e
Aplicações - vol. 1. 2ª Ed.
- TORTORA, Gerard J., FUNKE, Berdell R. e CASE, Christine L. Roberta Marchiori Martins.
Microbiologia. Porto Alegre: Artmed, 2005.
- http://www.hexasystens.com.br/ver.asp?Dep=4797&Secao=79584&Cat=6068&Produto=100378.
Acessado em: 10 de maio de 2010.