Tema 6. Enzimología. Principios de la catálisis enzimática.

Cinética
enzimática: ecuación de Michaelis-Menten. Inhibición enzimática:
irreversible y reversible. Tipos de inhibición reversible. Mecanismos de
regulación de la actividad enzimática. Isoenzimas

José C. Rodríguez Rey

Departamento de Biología Molecular

Algunos enzimas utilizados en pruebas diagnósticas

LA ASPIRINA ES UN INHIBIDOR IRREVERSIBLE DE LAS CICLOOXIGENASAS

COX Aspirina COX acetilada Salicilato

Acetil-salicílico (inactiva)

De Nelson et al. Principles of

Biochemistry. 4th Ed. Freeman

LOS ENZIMAS
 DEFINICIONES DE ENZIMAS

COFACTORES Y COENZIMAS

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 CLASES DE ENZIMAS Y NOMENCLATURA

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LAS ENZIMAS AUMENTAN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES

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 LA CATALISIS DISMINUYE LA ENERGIA DE ACTIVACION

∆G‡S›P Energía de activación

∆GB Energía de fijación

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El centro activo del enzima crea un entorno específico para el sustrato en el

que la reacción es más favorable

Quimotripsina

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EFECTO DE LA DISMINUCION DE LA ENTROPIA EN EL AUMENTO DE LA
VELOCIDAD DE REACCION

Reacción Incremento de velocidad

105

108

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El sustrato interacciona con los aminoácidos del centro activo y con los
cofactores

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 Encaje inducido de la hexoquinasa

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Las enzimas utilizan la energía de fijación para disminuir la energía

necesaria para la catálisis

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 CONSTANTES Y UNIDADES CINETICAS DE LOS ENZIMAS

Número de recambio (Kcat) es el número de moléculas de sustrato convertidas en

producto por unidad de tiempo (en condiciones de saturación de sustrato)
 La ecuación de Michaelis- Menten

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Representación de dobles recíprocos (Lineweaver- Burke)

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 De Nelson et al. Principles of
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Dependencia del pH de los enzimas

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 Principales tipos de inhibición

• Irreversible.
• Reversible.
– Competitiva
– Acompetitiva (solamente en enzimas con dos sustratos)
– Mixta (solamente en enzimas con dos sustratos)
– No competitiva (solamente teórica)

LA ASPIRINA ES UN INHIBIDOR IRREVERSIBLE DE LAS CICLOOXIGENASAS

COX Aspirina COX acetilada Salicilato

Acetil-salicílico (inactiva)

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 Inhibición competitiva
• El inhibidor tiene una estructura
similar al sustrato y compite con él
por el centro activo del enzima.
• Cuando ocupa el centro activo impide
la fijación del sustrato.
• La inhibición puede revertirse
simplemente por la adición de más
sustrato.

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La inhibición competitiva modifica la KM, pero no la velocidad máxima

αKM= KM aparente

α depende de la
concentración del
inhibidor y de la
afinidad del inhibidor
por el enzima.

[I]
α=1+
KI
 Inhibición acompetitiva

• El inhibidor se une a un sitio

diferente al centro activo
• El inhibidor solamente se une
cuando el centro activo está
ocupado por el sustrato.
• La unión afecta a la velocidad
máxima.
• Aunque la unión del inhibidor
no afecta a la afinidad del E
por el sustrato, la
concentración de sustrato
necesaria para alcanzar la
vmax aumenta y por lo tanto la
Km también resulta
modificada.

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La inhibición acompetitiva modifica tanto la KM como la

velocidad máxima

[I]
α’ = 1 +
KI’
 Inhibición mixta

• El inhibidor se fija tanto al

enzima como al complejo ES.
Está afectado por las dos
constantes: KI y KI’

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Cinética de una inhibición mixta

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 Regulación de las rutas metabólicas

-
A B C D E F

Principales estrategias de regulación

enzimática*

• Enzimas alostéricos (Los moduladores se unen a “otros sitios” de

regulación diferentes del centro activo y cambian la actividad del
enzima)
• Modificación covalente que cambia la estructura y la actividad del
enzima
• Isoenzimas (diferentes tejidos poseen diferentes formas del enzima y
así se regulan de forma diferente)
• Rotura proteolítica de precursores inactivos

* Idealmente la regulación tiene lugar en las primeras reacciones de la ruta. En

ocasiones el propio producto final de la ruta (o algún intermedio importante) actúa como
regulador.
 Enzimas alostéricos
• Los moduladores se unen a sitios diferentes del centro activo y cambian
la estructura del enzima (a diferencia de los inhibidores acompetitivos).
• Cuando el modulador es el propio sustrato se denominan enzimas
HOMOTROPICOS. Si es diferente se denominan HETEROTROPICOS.
• Son mayores y más complejos (más subunidades que los otros enzimas).
Suelen poseer varias subunidades.
• Poseen una cinética que no responde al modelo de Michaelis- Menten.

Aspartato transcarbamilasa (12 subunidades. En azules y púrpura las tres

subunidades catalíticas. De Nelson et al. Principles of Biochemistry. 4th Ed.
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Cinética de un enzima alostérico

homotrópico

La cinética sigmoidea
sugiere un efecto
cooperativo

El equivalente de la
Km se denomina K0,5 De Nelson et al. Principles of
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 Cinética de un enzima alostérico
heterotrópico

Los activadores
hacen que la cinética
se aproxime más a la
de M-M.

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Principales estrategias de regulación

enzimática*

• Enzimas alostéricos (Los moduladores se unen a “otros sitios” de

regulación diferentes del centro activo y cambian la actividad del
enzima)
• Modificación covalente que cambia la estructura y la actividad del
enzima
• Isoenzimas (diferentes tejidos poseen diferentes formas del enzima y
así se regulan de forma diferente)
• Rotura proteolítica de precursores inactivos

* Idealmente la regulación tiene lugar en las primeras reacciones de la ruta. En

ocasiones el propio producto final de la ruta (o algún intermedio importante) actúa como
regulador.
 Los enzimas pueden sufrir modificaciones covalentes que afectan a su actividad

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La fosforilación es el método de regulación utilizado por las principales

hormonas que controlan el metabolismo energético (Ej: Regulación de la
Glucógeno fosforilasa hepática*)

Insulina +
Glucagón, Adrenalina
(receptor β adrenérgico)

Glucagón, Adrenalina
(receptor β adrenérgico) -

* La glucógeno fosforilasa se activa por fosforilación, pero otros enzimas se inactivan

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Los enzimas poseen normalmente más de un sitio de fosforilación

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La actividad del enzima sufre cambios discretos en su actividad

dependiendo del número de residuos fosforilados.

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 Principales estrategias de regulación
enzimática*

• Enzimas alostéricos (Los moduladores se unen a “otros sitios” de

regulación diferentes del centro activo y cambian la actividad del
enzima)
• Modificación covalente que cambia la estructura y la actividad del
enzima
• Isoenzimas (diferentes tejidos poseen diferentes formas del enzima y
así se regulan de forma diferente)
• Rotura proteolítica de precursores inactivos

* Idealmente la regulación tiene lugar en las primeras reacciones de la ruta. En

ocasiones el propio producto final de la ruta (o algún intermedio importante) actúa como
regulador.

Principales estrategias de regulación

enzimática*

• Enzimas alostéricos (Los moduladores se unen a “otros sitios” de

regulación diferentes del centro activo y cambian la actividad del
enzima)
• Modificación covalente que cambia la estructura y la actividad del
enzima
• Isoenzimas (diferentes tejidos poseen diferentes formas del enzima y
así se regulan de forma diferente)
• Rotura proteolítica de precursores inactivos

* Idealmente la regulación tiene lugar en las primeras reacciones de la ruta. En

ocasiones el propio producto final de la ruta (o algún intermedio importante) actúa como
regulador.
Muchas proteasas se activan por proteolisis

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