Cap5.pdf Analise de ADITIVOS

CAPÍTULO
A D IT IV O S
IAL - 161
Mé to do sFísic oQuím
- icosp a raA ná lised e Alim entos- 4 ª Edição
1 ª EdiçãoDigital
162 - IAL
V
Capítulo V - Aditivos
A D IT IV O S
C
om o d e se vnolvim ent o te cnológ ico, é g ra n de e varia do o núm ero de
su b s tâ n c iaquímicas
s empregadas no decorrer de todo o proces so de
produção de alimentos. Dentre estas substâncias, destacam-se os
aditivos, que podem apresentar grandes va n ta g esn p a ra m e lhora r os
alim ento s do ponto de v is at te cnológ ico
, d e s de q ue
seu uso seja seguro. Para isto, é neces sário verificar se obedecem às normas de
identidade e pureza e s ta b e le cid
s pa e al FAO/OMS ou p elo Fo od C h e m icsa lC o d e,x
exigidos pela legislação b ra sile ira
, sen do portanto e s et contro le fe ito a n tes da
adição ao alim ent o.
Toda a legislação a respeito de aditivos é positiva e dinâmica, isto é, são

agrupadas em lis tas as su b s tâ n csiacujo u so é perm itido
, os alim ento
s em que
podem s er u s a dsa e os lim itesmáximos no produto final, sendo estas listas
revisadas e acrescidas com novas substâncias sempre que neces sário.
A partir de 1997, houve muitas alterações na legislação de aditivos

alimentares, a fim
de compatibilizar a legislação nacional com o estabelecido nas resoluções
harmonizadas no Merco su,l a c o m eça r com a Porta ria no 540 da SVS/MS de
27/10/1997 , q ue aprova o re g u- lamento té cnico de aditivos alimentares e os
define como “qualquer ingrediente adicionado intencionalm ent e a os alim e ntos ,
sem propósito de nutrir, com o objetivo de m odifica r a s c a ra c te rístic
s fís
a ic a,s
quím icas , b iológ ica
s ou se n so ria
s durant
i e a fa b rica ç ão
, pro c e ss a m -e n
to, pre p a ra çã, o tratam ento , em balage,m acondicionam ento , a rm azen ag em ,
tra n sprteo ou manipulação de um alimento. Ao agregar-se, poderá resultar que
o próprio aditivo ou seus derivados se convertam em um componente de tal
alimento. Esta definição não inclui os contam inante s ou s u b stâ n csianutritivas
q ue se jam in corp o ra ds aao alim ent o p a ra m anter
ou melhorar suas propriedades nutricionais.” Esta Portaria também altera a
clas sificação dos aditivos alimentares, aumentando de 11 para 23 clas ses
funcionais.
IAL - 163
A se g ur,i s ão com en ta da
s alg u m sa c la s ssede aditivo s, c u jas d efin içõseforam
e x tra íd a s
da Porta ria n° 540/97.
Acidulantes/
Reguladores de acidez
Substâncias que aumentam a acidez ou conferem um sabor ácido aos

alimentos, dentre e s tas são de m aior em pre go os á cid os o rg â n ico, sta si com o: o
ácido cítrico, tartárico, láctico
, fum árico e m álico; além do ácido fo sfó rico , que é
inorgânico. E s tes á cid os tam bém podem ser utilizados como reguladores de
acidez, substâncias que alteram ou controlam a a c idez ou a alcalinid ad e d os
alim entos.
Antioxidantes
Su b stâ n csia q ue re tardam o a p are cim ent

o de a lte ra ç õs eoxid ativas n os
alim entos.Geralmente são utilizados os galatos (propila, octila ou duodecila),
ácido ascórbico e seus isômeros, butil-hidroxianisol (BHA) e butil-hidroxitolueno
(BHT), isoladamente ou em mistura, pois apresentam melhores resultados
quando juntos (efeito sinérgico).
Arom atizantes
Su b stâ n csiao u m istura de s u b stâ n cia s com pro p rie d a ds earom ática s e/ou
sá p id a s,capazes de conferir ou reforçar o aroma e/ou sabor dos alimentos.
Segundo a Resolução RDC n° 2 da ANVISA, de 15 de ja neiro de 2007, os
arom a tizante s a pre se n ta
m d u as c la -s sificações: aromas naturais e sintéticos. As
misturas de aromas, os aromas de reação ou de transformação e os de fumaça
poderão ser considerados naturais ou sintéticos, de acordo com a natureza de
s u as m a té ria s -p rim
s ou
a pro c e s ssode e la b o ra çã
o. Eles podem s er com er - cializados
na forma sólida (pós, granulados ou tabletes), líquida (soluções ou emulsões)
ou p a sto sa . No c a so d os arom as em pó, além d os e n s a io s d e s crito
s n e ste capítulo ,
d ete rm inam -
se os re síd uso m ineral fixo e o insolúvel em HCl (1 + 9,)p a ra se ve rifica r a pre se naç
do dió- xido de silício (anti-umectante).
Conservadore s
Antigamente, os alimentos eram conservados com ácidos, sal, açúcar e

fumaça de madeira. Nos dias de hoje, é grande o número de conservadores
químicos empregados em alimentos. Tais aditivos impedem ou retardam as
alterações dos alimentos provocadas por m icroo rg an isms oou en zim as
. Entre os
de m aior em pre go e s tã :o dióxido de e nxo fre, ácido benzóico, ácido sórbico,
ácido propiônico, na forma livre, ou de sais de sódio ou potás sio e nitritos e
nitra to
s de sódio e de p o tá ssi
o.
164 - IAL
Corantes
Su b stâ n csia que co n ferem, inte nsifica m ou resta u ra m a c or de um

alim ent o. Os corantes artificiais são substâncias orgânicas de síntese cuja
estrutura molecular difere dos c o ra n te s encon tra dos na natureza. São produtos
cu aj ca p a cid aedde co n fe rrig ra n de intensi - dade de cor e estabilidade supera a dos
corantes naturais. Em 1999, foram introduzidos na le g isla çoã b ra sileair os
se g u in stec o ra n te
s artific ia is
: azul paten te, verde sólido e azo rrubina, que pas sam a
fazer parte deste capítulo. Apesar das dificuldades encontradas na aplicação d os
c o ra n te
s na tu rai s n os alim e ntos , devido ao seu b a xi o p oder tintorial
, alto cu sto e
instabi - lidade, atualmente seu emprego vem crescendo de forma significativa no
ramo alimentício, p e al preocu pa çã o d os consum ido res com o u so de s u b stâ n csia
artific iasi em alim entos.
Edulcorantes
Substâncias diferentes dos açúcares que conferem sabor doce aos

alimentos. Seu em pre go ju s tific ae-sn os produtos d estin a dsoa consum ido res q ue
n e c e s sita
m de re striç ã ca
o ló ric
a em s u as d ie ta,sbem como p a ra a q u e le s portad ores
de d ia b e te. sAtualm ente , a técni-
ca m ais utilizad a p a ra se p a ra ç ã, identificaçã
o o e quantificaçã o d os e d u lco ra nsteé a
crom ato-grafia líquida de alta eficiência. Os edulcorantes mais empregados hoje
em dia são: sacarina, ciclam ato , a s p artam e, a c e s u lfa mKee- e ste v io s o.
íd i
Gom as: s ão p o lissa c a ríd s iode alto p e so m ole cula r e, d e s de que atendam
a os pa- drões de identidade e pureza exigidos para uso em alimentos, são
consideradas GRAS pelo FDA. Devido à sua afinidade pela água,
desempenham papel importante na maioria dos alim entos , se n do de am plo u so
na indústria , como e s p e s s a n,teg es le ific a n te
, ess ta b iliza n te s
e em u lsifica n tes.
E sp essa n tes
Su b stâ n csiaq ue aum enta m a v isc o sid ae dd os alim entos

. Eles s ão u s a d so p a ra
contro- lar a co n sistê nacide alim ento
s líquidos e sem ilíquidos.
Geleificantes
Su b stâ n csiaque con ferem te x tuar p e al form açã

o de um g e l.
IAL - 165
Estabilizantes
Substâncias que tornam pos sível a manutenção de uma dispersão uniforme

de duas ou m ais su b s tâ n csiaim iscíve is em um alim ent
o.
Em ulsificantes
Su b stâ n csiaque propiciam a form açã

o ou m anutenção de uma m istura
uniforme d e duas ou mais fases imiscíveis no alimento. Estes podem ser naturais
ou sintéticos.
Ne s et capítulo , s ão d e sta ca ds oalg u ns acid ulantes , regu ladres

o de a c idez,
antioxidante s, arom atiza ntes , c o n se
rva dore s, c o ra n te
s n atu rasi e artificia is
,
e d u lco ra n tes
, e s p e s s a n tegeleificantes,
s, estabilizantes, emulsionantes; além dos
bromatos, cujo uso não é permitido
na legislação brasileira, da determinação de teobromina e cafeína em produtos
a base de c a cau e d os contam inante s a rsê n io
, fluore to e b enzo(a)pireno, um
hidrocarb o net o policí- clico aromático (HPA), formado principalmente em
proces sos de combustão incompleta
de matérias orgânicas, que se encontra na natureza como contaminante de solo,
ar, água e alimentos.
Como atualm ent e s ão perm itidos , no Bra s il, m ais de 300 aditivo s, é
d e s c rita
, a s e- guir, a a n á lis
e a p e n sa d os aditivo s, puros ou pre s e n te
s em uma
form ulação , m ais utilizadosnos alimentos. Os métodos podem sofrer algumas
alterações em função da formulação do produto.
A determinação dos aditivos nos alimentos é tratada nos respectivos

livro. capítulos deste
058/IV Acidulantes – Identificaçã

o de ácido cítrico, láctico e tartárico por
cromato-
grafia em papel.
Os ácidos orgânicos podem ser identificados por cromatografia em papel.

Na análise dos ácidos orgânicos, este método permite identificar,
simultaneamente, a presença dos ác id os cítrico, tartárico e lá ctico em a m o s tra
s de
aditivos alim enta
re s .
Material
Ba la n ça analítica
, p ap el Whatman nº 1 (20 x 20) cm, balão volum étric
o de 100
mL, bé- qu er de 100 mL, cuba crom a tog rá aficcom tam pa, fra sco Erlenm yeer de
300 mL, prove ta s
de 50 e 100 mL e s e rin gsade 5 μL.
166 - IAL
Rea g e n tes
Hidróxido de amônio
Á lcool
Azul de timol
Ácido cloríd rico
Soluções-padrão – Pese 1 g de ácido cítrico, transfira para um balão volumétrico

de 100
mL e complete o volume com água. Repita o mesmo procedimento para os
ácidos tartárico
e lá ctico.
Solve n te p a ra a fa se móvel com reve la d or – Misture 35 mL de álco ol, 13 mL de

água e
2 mL de hidróxido de amônio e adicione 50 mg de azul de timol. Se neces sário,
prepare um volume m aior m antend o as m e smsa proporçõ e .s Guarde em fra sco de
vidro com tam pa.
Procedim ent o – Em um bé qu er de 100 mL, d issova l a a m ostr

a com pouca
água. Aplique,em pontos eqüidistantes e a 2 cm da borda inferior no papel de
cromatografia, 5 μL da s o lu ç ã o -tee set 5 μL de ca da uma d as so lu ç õ e s-p ao. d rã
De s e nvolva o crom atogram, aem cuba saturada com a fase móvel contendo
revelador, até a frente do solvente atingir dois centímetros antes da borda
superior do papel. As manchas amarelas sob o fundo azul do papel indicam a
presença dos ácidos. Colocando o papel em atmosfera de vapores de ácido
clorídrico, o fundo azul do p apel to rn a e-s verm elh o. Marque, im ediatam ente , o
contorno
d as m ancha s com lá p is. A identificaçã
o d eve s er fe ita por com paraçã
o d os Rf das
manchas ob tid as com os d as s o lu çõ e s -p a o.
d rã
Re ferê n cai b ib lio rgá fic a
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Norm as Analítica s do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:

Mé to d oqsu ím ico
s e fís icsop ara a n á lis
e de a lim e n to
, 3.
s e d. São Pau lo: IMESP, 1985. p.
7 8 -7 9 .
059/IV Acidulante
s – Identificaçã
o de ácido cítrico
E s te e n s aoi perm it
e a identificaçã
o do ácido cítrico puro e b a s e iae-snuma
re a ç ã ocolorida com piridina e anidrido a cé tic
o.
Material
Bé q u eres de 5 e 25 mL, p ip e ta
s g ra d u a dsade 1, 5 e 20 mL e b a stão de vidro.
IAL - 167
Rea g e n tes
Piridina
Anidrido ac ético
Procedim ent o – Dis solva alguns mg de ácido cítrico em 1 mL de água,

transfira para um b éq u er contend o 15 mL de piridina e a g ite. Acre s c e net 5 mL
de anidrido a cé tic
o e a g itenovam ente
. A solu ção d eve fic ar averm elh ad a.
COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX.Food Chem ical s Codex. 4. ed .

Washingto
n D. C.: National Acad emci Pre s ,s 1996. p. 753.
060/IV Acidulante
s – Quantificaçã
o de ácido cítrico
Material
Balança analítica, frascos Erlenmeyer de 125 mL, proveta graduada de 50 mL e

bureta de
50 mL.
Rea g e n tes
Solução a q u oas de hidróxido de sódio 1 M
Solução de fenolftaleín
a 1% m /v – Pe se 1 g de fen olftaleína
, tra n s fir
a p a ra um
b alãovolum étric
o de 100 mL e com plet e o volume com álcool.
Procedim ento – Pese, com precisão, cerca de 3 g da amostra e dis solva em 40 mL

de água. Adicione alg um sa g o tas de solução de fenolftaleín
a e titule com NaOH 1
M.
Cálculo
Cada mL de NaOH 1M é equiva le net a 64,04 mg de C6H8O7.
COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX. Food Chem ical s Codex. 4.

ed. Washingto
n D. C.: National Acad emci Pre s ,s 1996. p. 102 e 753.
168 - IAL
061/IV Antioxidante
s – Titulação de ácido ascórbic
o e isôm eros com solução de
iodo
O ácido ascórbico pode ser adicionado aos alimentos com a função de

antioxidante
ou m elho rado r de farinha . Tam bém é em pre g a do n os s asi de cu ra p a ra red u zir a
p o ssib- ilid ade de form açã o de N -nitro sam in as , p e al a ção bloq uead aorna re a ç ão
de nitro sa ç oã d e nitrito. E s te m étodo é aplicad o p a ra m istu ra
s de aditivo s, d e s de
q ue não contenha m nitrito
ou o u tras su b s tâ n csiare d u to ras
, p ois re a g em com o iodo.
Ácido a scó rb oic Ácido dehidro a scó rb ico
Material
, b éq uer de 100 mL, balão volum étric
o de 100 mL, prove ta de 25
mL, bure ta de 25 mL e fra sco Erlenm yeer de 250 mL.
Rea g e n tes
Solução de ácido sulfúric

o
M Solução de iodo 0,05 M
Solução de amido a 1%
m/v
Procedim ent o – Pese uma quantidade de amostra que contenha

aproximadamente 0,2 g
de ácido a scó rb oic e d iss ova
l em uma solução de 100 mL de água, re ce n te m een t
fervida e resfriada, e adicione 25 mL de ácido sulfúrico M. Titule a solução
imediatamente com iodo
0,05 M, adicionando amido a 1% próximo ao ponto final da titulação.
IAL - 169
Cálculo
V = volume de I2 0,1 M g a sto na titulação

f = fa tor da solução de I2 0,1 M
P = m a ssa da a m o str
a em g
Nota: cada mL de iodo 0,1 M é equivalente a 8,806 mg de ácido ascórbico ou
ácido eritórbico
(C6H8O6), 9,905 mg de a sc o rb ao tde sódio (C6H7NaO6) e 10,81 mg de eritorbato
de sódio m onohidratad
o (C6H7NaO6.H2O).
COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX. Food Chem ical s Codex. 4. ed.

Washington
, D.C.: National Aca demy Pre s ,s 1996. p. 33,34,134,35
4 e 362.
062/IV Antioxidante
s – De terminação de ácido ascórbic
o e isôm eros pelo
método de
Tillman’s
Este método, aplicado para misturas de aditivos que apresentem baixa
concentração
de ácido a scó rb oic e não contenham nitrito em sua form ulação , fu n d a m e n ta
e -s
na
red ução
de 2 ,6 -d iclo
rofe nol indofeno
l por uma solução de ácido a scó rb o.
ic
170 - IAL
Procedim ent
o – Siga a dete rm inaçã
o conform
e m étodo 365/IV.
063/IV Antioxidantes – Titulação de ácido ascórbico e isômeros com solução

de iodo na pre se n aç de polisorbat
o 80
O polisorbato 80, componente comum nos produtos para panificação,

interfere na dete rm inaçã o do te or de ácido a scó rb oic p elo m étodo de iodim etria .
A ssim, quando am b os e s tiverem pre s e n te, sé n e ce ss áori fazer a e x tra çoã do
p olisorbat
o a n tes da determ inaçã o do ácido a scó rb o. ic Po d e -s
e tam bém d o s áo-l
dire ta m enetpor téc n ica p olaro g rá fica
, sem n e c e- ssid a de de e x tra ço.ã
Material
Balança analítica, balança semi-analítica, béquer de 100 mL, provetas de 25 e

50 mL, funil de separação tipo pêra de 250 mL, funil e papel de filtro, bureta
de 10 mL e frasco Erle nm yeer de 250 mL.
Rea g e n tes
Solução a q u oas de iodo 0,05

M Cloreto de sódio
Butanol
Solução a q u oas de HCl 3 M sa tu raad com NaCl – Adicione NaCl sólido à solução
HCl 3 M
a té h aver pre cip itaçã, oou, a ltern avam
ti ente
, dilua 1:1 uma solu ção de HCl 6 M
com solu- ção a q u oas sa tu raad de NaCl.
Procedim ent o – Pe s e, com pre c is ã,o uma quantidad e de a m o str a q ue contenh a

a proxim a- damente 50 mg de ácido ascórbico. Adicione 2 g de cloreto de sódio
e dis solva a mistura em 50 mL de água com agitação. Filtre, se neces sário.
Transfira o filtrado para um funil de separação. Adicione ao funil 25 mL de HCl
3 M, saturado com NaCl, e 25 mL de butanol. A g ite a m istura por 2 m inutos,
d e xi e s e p a ra
r as fa s e,se re co lha a cam ada aq u oas inferior, filtra n d ao -p a ra o fra s oc
Erle nm yeer. Titule com iodo usando am ido a 1% como indicado r. Cada mL de
iodo 0,05 M equivale a 8,806 mg de ácido ascórbico ou de ácido eritórbico,
9,905 mg de a sc o rb ao tde sódio e 10,81 mg de eritorb aot de sódio
m onohidratad o.
IAL - 171
Cálculos
V = mL de iodo 0,2 M g a sot na titulação

f = fa tor da solução de iodo
0,2 M P = m a ssa da a m o str
a
em g
DES SOUKY, Y. M.; HUS SEIN, F. T.; ISMAEL S. A. Determination of ascorbic

acid in the pre s e nec of p o ly so rbea t80 Pharm azie, v.28 (1 1-12, )p. 7 91 -7 9.21973.
064/IV Antioxidante
o de ácido ascórbic
o por redução da solução de
Fehling
Este método é aplicado para a identificação de ácido ascórbico, ácido

eritórbico, ascorbato de sódio e eritorbato de sódio em amostras puras ou em
misturas de aditivos que não a pre se n te
m o u tras su b s tâ n csiare d u to ra s.
Material
Balança analítica, banho-maria, tubo de ensaio, béquer de 10 mL e balão volumétrico

de
50 mL.
Rea ge n te
So lu çõ se tituladsa A e B de Fehling (Apêndice I)
Procedim ent o – Pese uma quantidade de amostra de maneira que a concentração final
de ácido a scó rb oic e s teaj em torno de 2%. Tra n sfir
a p a ra um b alão volum étric
o de 100
mL e complete o volume com água. Filtre se neces sário. Adicione a solução de Fehling.
172 - IAL
Na pre s e naç de ácido a scó rb ico

, o tarta raot cúprico alcalino é reduzido lentam e nt
ea
25°C,
porém m ais rap idam e entsob aquecim ent o.
Re ferê n c ia
s b ib lio rgá fic a s
COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX Food Chem ical s Codex. 4. ed.

Washingto
n D. C.: National Acad emci Pre s .s 1996. p. 34.
FARMACOPÉIA BRASILEIRA
, 3. ed. São Paulo: Organização Andrei Editora S.A.,
1977.
p. 83.
065/IV Antioxidante
o de ácido ascórbic
o por redução da solução
de
Tillmans
Material
, b alão volum étric
o de 100 mL, tubo de e n sa io
, bé qu er de 10 mL
e p ip e ta s
de 1 e 2 mL.
Rea ge n te
Solução de Tillm ans d e s c rit

a no m étodo 365/IV.
Procedim ent o – Pese uma quantidade de amostra de maneira que a

concentração final de ácido ascórbico esteja em torno de 1%. Transfira para um
balão volumétrico de 100 mL e com p leet o volume com água. Filtre se
n e c e s s áo.ri Pip e et 2 mL d e sat solução no tubo d e e n saoi e adicion
e 1 mL da
solução de Tillm ans, que d eve rá d e s c o r aer-s
im ediatam ente.
Re ferê n c ia

Mé to dsoQu ím icso e Fís ic so p ara An á lisse de Alim e n to. s3. ed. São Paulo: IMESP,
1985. p.
39 4-3 95 .
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of

Analysi
s of the Associatio
n of Official Analytica . 15th, Arlington:
l Chem ists
A.O.A.C.,
1990, c h a p te
r 45, p. 10 58 -1 05 9.
IAL - 173
066/IV Antioxidantes – Identificação de ácido ascórbico pela reação com

bicarbonato
de sódio e sulfato fe rroso
Material
Ba la n ça analítica , b a lõ es volum é trico

s de 100 e 1000 mL, prove ta de 100 mL, tubo
d e e n sa,iobé q u eres de 10 mL e p ip e ta s g ra d u a dsade 5 mL.
Rea g e n tes
Ácido sulfúrico
Bicarb onat
o de
sódioSulfato fe r o so
Solução a q u oas de ácido sulfúric
o a 10% v /v
Procedim ent o – Pese uma quantidade de amostra de maneira que a

concentração final de ácido ascórbico esteja em torno de 1%. Transfira para um
balão volumétrico de 100 mL e com p leet o volume com água. Filtre se
n e c e s s áo.riPip e et 4 mL d e sat solu ção em um tubo
de e n s ao.i Adicione 0,1 g de bicarbonat o de sódio e c erca de 0,02 g de su lfaot
fe r o so. A g ite
e d e xi e re p o u sr.a A solução d eve rá produzir c o lo ra çã
o v io le ta -e s ac uqrue d e sa pre
a ce
a p ós a ad ição de 5 mL de ácido sulfúric o a 10%.
Re ferê n c ia
FARMACOPÉIA DOS ESTADOS UNIDOS DO BRASIL. 2. ed. São Paulo:

Indústria
Grá fica Siq ue ira S.A., 1959. p. 4 5 -4 6 .
FARMACOPÉIA BRASILEIRA
. 3. ed. São Paulo: Org an iza çoãAndrei Editora S.A.,
1977.
p. 8 2 -8 3 .
067/IV Antioxidante
s – De terminação de butil-hidroxianisol (BHA)
A s o lu b ilid aedem á lc o ol a 72% de q u a es to d os os a n tiox id a n te s m a si

co m u- m e n et u tiliz a d o, sfavore ce a a n á lis
e d os m e s m o. sAp ós a e x t r a çoã d os
a n tiox id a n- tes, podem ser feitas provas qualitativas envolvendo reações para a
identificação ou cromatografia em camada delgada. O butil-hidroxianisol pode
ser identificado em a m o s trsade g ord u ras ou a d itivos fo rm u la dsoc o n te n od e s et
a n tiox id a net a p ós a e x- tr a ç ão com á lc o ol a 72% e p o s te rio
r c o n firm a çoãp or
m e oi de re a ç ão c o lo rim é triccom a 2 ,6 -d ic rolo quinona c loroim ida (re a g e net de
Gib b s) e b ó ra x. A re a ç ão do BHA,
174 - IAL
a p ós e x t r a çoãcom á lc o ol a 72%, c om 2 ,6 -d ic ro lo q u in o n a clo

roim ida em pre s e naç
de
b ó ra x, fo rma um c o m p o sot a z ul c u aj c o n c e n tra oç ãé m e d ida
porespectrofotometria
620 nm, usando curva -p a d rã o.
Material
Balança analítica, balança semi-analítica, espectrofotômetro UV/VIS, béqueres de

(25 e
100) mL, bastão de vidro, funil de separação tipo pêra de 250 mL, provetas
graduadas de
25, 50, 100 e 500 mL, balões volumétricos de 100, 200 e 500 mL, pipeta
graduada de 2
mL e p ip e ta
s volu m étrica
s de (1 a 12) mL.
Rea g e n tes
Éter de p etróleo (6 0-
10 0)°C Álcoo l absoluto
B ó ra x
2,6-Dicloroquinonacloroimida
Pa d rão an alític
o de 3-B HA ou uma m istur
a co n h e cid
a d os d o si isô m reos 3-B HA e 2-
BHA
Solução de álcool a 72% v/v – Adicione 360 mL de álcool em um balão

volumétrico de
500 mL e co m p leet o volume com á g u a .
Solução de b ó rax a 2% m /v – Pe se 2 g de b órax – Na2B4O7.10H2O, transfira para

um balão volum étric o de 100 mL e com p let e o volume com água.
Solução de 2 ,6 -d ic roquinonaclo
lo roim ida (re a g e net de Gibbs) – Pe se 0,01 g de 2 ,6 -
dicloro-quinonaclo
roim ida (C6H2ONCl3), transfira para um balão volumétrico de
100 mL
e com plet
e o volume com álcool absolut
o. Pre p are a solução no dia do u so.
Procedim ent o – Dis solva 10 g da amostra em 50 mL de éter de petróleo e
transfira quantitativamente para um funil de separação. Adicione 25 mL de
álcool a 72% e agite. Separe a camada alcoólica e extraia mais duas vezes com
60 mL de álcool. Reúna os e x tra to
s a lc o ó lico
s e com p leet o volume a té 200 mL
com álcool a 72%. Adicione a uma
IAL - 175
alíquota de 12 mL desta solução, 2 mL de uma solução de 2,6-

dicloroquinonacloroimida
a 0,01% e 2 mL de uma solução de bórax a 2% e agite. Meça a coloração
desenvolvida em espectrofotômetro a 620 nm e determine a quantidade de
BHA correspondente usando a curva -p a d rã
o prev ia m ene te sta b e le c id a .
Curva-padrão – Pese, com precisão, 0,1 g de BHA e dis solva em álcool a 72%.
Transfira quantitativamente para um balão volumétrico de 100 mL,
completando o volume. Retire 1 mL desta solução, transfira para outro balão
volumétrico de 100 mL e complete o volume com o m esmo s o vl en te. Tome
alíq uo tas de 1, 2, 3, 4, 5, 6 e 7 mL d e sat última solu ção em b équ ere s
de 25 mL e adicione, respectivamente, 11, 10, 9, 8, 7, 6 e 5 mL de álcool a 72%,
totalizando
12 mL em todos eles. Adicione 2 mL de solução de 2,6-
dicloroquinonacloroimida a 0,01% em álcool absoluto e 2 mL de solução de
bórax a 2%. Homogeneíze. Meça a coloração
desenvolvidaemespectrofotômetroa620nmusandocomobrancoumamisturacons
tituídade
12 mL de álcool a 72% e os dois re a g e n steacima m encionados . Construa a curva -
p a d rã
o.
Re ferê n c ia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Norm as Analítica s do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:

Mé t o dso Qu ím icso e Fís ic so p ara An á lisse de Alim e n to. s3. e d. São Paulo: IMESP, 1985.
p. 85.
JOSEPHY, P.D.; VAN DAMME, A. Reaction of Gibbs reagent with para-

substituted phenols
. Anal. Chem. v. 56, p. 81 3-814.,1984 .
MAHON, J.H.; CHAPMAN, R.Q. Butylated Hydroxianisole in lard and

shortening.
Anal. Chem. v. 23, n.8, p. 11 20 -1 12, 31951.
068/IV Antioxidante
o de butil-hidroxianisol (BHA)
Ba s e ae-sna re a ç ão do BHA com 2 ,6 -d ic roquinonaclo

lo roim ida em pre se naç de
bó- ra x, a p ós e x tra çoã com álcool a 72%, p a ra form ar um com post o azul.
Material
Balança semi-analítica, béqueres de 25 e 100 mL, balão volumétrico de 100 mL,

provetas graduadas de 50 e 100 mL, funil de separação tipo pêra de 250 mL e
pipetas graduadas de
1 e 5 mL.
Rea g e n tes
Éter de p etróleo (6 0-
10 0)°CÁlcool
B ó ra x
176 - IAL
2,6-Dicloroquinonaclo
roim ida
Á lcool a 72% v /v
Solução de bórax a 2% m/v
Procedim ent o – Dis solva 20 g da amostra em 50 mL de éter de petróleo. Extraia

em funil
de separação com três porções de 30 mL de álcool a 72%. Reúna os extratos
alcoólicos em balão volumétrico de 100 mL e complete com álcool a 72%.
Adicione 1 mL de solução de
b ó rax a 2% e algu ns c ristas ide 2 ,6 -d ic roquinonaclo
lo roimida a 5 mL de extrato
alcoólico obtido no item an terio r. Uma co lora çoã azul indicar
á a pre se naç de BHA.
JOSEPHY, P.D.; VAN DAMME, A. Reaction of Gibbs reagent with para-

substituted phenols
. Anal. Chem. v. 56, p. 8 13 -8 1,41984.
069/IV Antioxidante
s – De terminação de butil hidroxitolueno (BHT)
O princípio deste método baseia-se na reação do BHT, após extração da

amostra, com o-d ian isidina e nitrito de sódio e na m edida e sp e crofotom
t étric
a do
com post o ve rm e- lho-alaranjado formado. O BHT é melhor extraído por
destilação com arraste de vapor e o d estilaod é utilizado na re a ç ão colorim étrica.
Material
Ba la n aç a n a lític, a b a la naç se m i-a n a lític , ae s p e crofotôm

t et
ro UV/VIS, m anta
a q u e c e dao re lé tric are, g u la drode te m p e ra tu, ra
su p orte, g a rra
, m ufa, tubo de lá tex
p a ra co n d e n sar,d ob a s tã o de v idro, funil de separação tipo pêra de 250 mL,
provetas graduadas de 50 e 1 00 mL, condensador tipo re to, com junta e sm e rilh a d
24/40, b a lõ se vo lu m é trico s de 100 e 250 m L, b é q u rees de 50, 10 0
e 250 m L, p ip e ta s g ra d u a ds ade 2 e 5 mL e p ip eat vo lu m é tric a de 25 m L.
Rea g e n tes
Clorofórm io
Nitrito de sódio
o-Dianisidina
(C14H16N2O2) Meta n ol
Carvão
Ácido cloríd ric
o1M
Clore to de m agnési
o
(MgCl2.6H2O) Pad rão analític
o de
BHT
IAL - 177
Solução-padrão de BHT a 0,05% m/v – Pese 0,05 g de BHT, transfira para um

balão
volum étric
o de 100 mL e com plet
e o volume com m etanol.
Solução de nitrito de sódio a 0,3% m /v – Pe se 0,3 g de nitrito de sódio, tra n s fir

a
p a ra um balão volum étric o de 100 mL e com plet e o volume com ág ua. E s ta
solução é e s táve l, pelom e nos
, por d u as se m a nsaa 4ºC
Solução de o-dianisidain– Pe se 250 mg de o -d ianisidina (C1 4H1 6N2O2) e d is s oval

com
50 mL de m e ta n o. lAd ic io ne 1 00 mg de c arvão. A g ite p or c in co minutos e
filtre.
Adicione a 40 mL do filtrado, 60 mL de ácido clorídrico 1 M. Prepare
diariamente, e g u arde ao ab rigo da luz.
Solução de cloreto de magnésio – Pese 100 g de cloreto de magnésio e dis solva

em 50 mL
de água.
Procedim ent o – Monte o aparelho para destilação por arraste de vapor. Pese
exatamente
5 g da am ostr a e tran sfir
a p ara o fra sco Erlenm yeer junto com 15 mL da solução de
cloreto
de magnésio. Adapte as juntas conectoras e destile com arraste de vapor à razão
de 4 mL por minuto. Re co lha de 100 a 125 mL do d estilaod em um balão
volum étric o de 250 mL, completando o volume com metanol. A uma alíquota
de 25 mL, adicione 2 mL da solução
de nitrito de sódio e 5 mL da solução de o-dianisidina Após 10 minutos, extraia a
fração colorida com 10 mL de clorofórmio. Meça espectrofotometricamente a 520
nm e determine
a con cen tra oçãde BHT, utilizand o uma curva de ca lib ra çoãpre v ia m e ne t
co n struída.

Mé t o d o s
Qu ím icsoe Fís icso p ara An á lissede Alim e n to. 3.
s e d. São Pau lo: IMESP 19 85. p. 8 5 -8 6 .
070/IV Antioxidante
o de butil hidroxitolueno
(BHT) Material
Balança semi-analítica, manta aquecedora, regulador de temperatura, suporte,
garra e mufa, tubo de látex para condensador, balão de fundo redondo com
junta esmerilhada 45/50 e capacidade para 5 L, tubo de vidro de 1,4 m de
comprimento e 1,2 cm de diâmetro, juntas conectoras para frasco Erlenmeyer
com presilha, frasco Erlenmeyer com junta esmerilhada
29/32 e capacidade 500 mL, condensador tipo reto, com junta esmerilhada 24/40,
balão volum étric o de 100 mL, prove tas g ra d u a ds ade (50 e 100) m L, b éq u rees de
(50, 100 e 250) mL
e p ip e ta
s g ra d u a ds ade (2 e 5) mL.
178 - IAL
Rea g e n tes
Clorofórm io
Nitrito de sódio
o-Dianisidina
(C14H16N2O2) Meta n ol
Carvão
Ácido cloríd rico
Clore to de m agnési o
(MgCl2.6H2O) Padrão analítico
de BHT
Solução de nitrito de sódio a 0,3% m /v, conforme
069/IVSolução de o-dian isidina, conforme 069/IV
Solução de c lore to de m agnésio
, conforme 069/IV
Procedim ent o – Monte o a p arelho para destilação por arraste de vapor. Pese 5 g
da amostra, transfira para o frasco Erlenmeyer junto com 15 mL da solução de
cloreto de magnésio. Adapte as juntas conectoras e destile com arraste de vapor
à razão de 4 mL por minuto. Re co lha de 100 a 125 mL do d estilaod em um
b éq u er de 250 mL. Concent re, em b a n h omaria,
- o destilado até 50 mL. A uma
alíquota de 25 mL, adicione 5 mL de solução de
o-d ian isidaine 2 mL de solu ção de nitrito de sódio. Na pre se naç de BHT, d eve rá
form aruma co lo ra çã
o ve rm e lh o -a la ra najaem
d a té 10 m inutos.

e de a lim e n to
, 3.
s e d. São Pau lo: IMESP, 1985. p.
8 5 -8 6 .
071/IV Antioxidante
o de galatos
E s te e n s aoi perm it
e a identificaçã
o d os g a la to
s em m istu ra
s de aditivos e b a s e ia -
se na extração dos galatos (propila, octila ou duodecila) com álcool a 72% e
reação com hidróxido
de amônio .
Material
Balança semi-analítica, béqueres de 10 e 1 00 mL, proveta graduada de 50 mL,

funil
de s e p a r a ço ãde 1 25 m L, b a lõ se vo lu m é tricsode 1 00 e 5 00 mL e p ip e ta
s
g ra d u a d a se d1 e 5 m L.
Rea g e n tes
Éter de petróleo
IAL - 179
Álcool
Solução de álcool a 72% v /v – Misture 360 mL de álcool e 140 mL de ág ua.
Procedim ent o – Dis solva 20 g de amostra em 50 mL de éter de petróleo.

Extraia em funil de s e p a ra çoãcom álcool a 72% (30 mL por três veze s .) Reúna
os e x tra to
s em balãovolumétrico de 100 mL e complete o volume com álcool a
72%. Adicione 0,5 mL de hidróxido de am ônio a 5 mL do extrato alcoólico.
Uma coloração rósea indicará a presença
de g a la to s .

Mé to dsoq u ím ico
s e fís icso p ara a n á lis
e de a lim e n to, 3.
s e d. São Paulo: IMESP, 1985.
p. 82.
072/IV Arom atizante

o e quantificação
A identificaçã o e a quantificaçã o d os com p one nte

s do aroma (a ld eíd os
,
é s tere s, ce to- nas, etc.) são efetuadas por cromatografia em fase gasosa, usando
detector de ionização de chama (FID).
Material
Balança analítica, cromatógrafo a gás, coluna Carbowax 20 M ou equivalente,

detector de ionização de chama (FID), balões volumétricos de 10 mL, pipetas
graduadas de 2 mL e m icro s s e rinagde 10 μL.
Rea g e n tes
Álcool
Pa drõ es a n a líticsode a ld e íd o, sé s tere s, ce to n a, se tc .
Solução-padrão – Com auxílio de uma pipeta, pese cerca de 100 mg dos padrões
diretamente em b a lõ se volum étrico
s de 10 mL e com plet
e o volume com álcool.
Condições cromatográficas – Temperatura do injetor: 230°C, temperatura do

detector:
250°C, prog ra m açã
o de aquecim ent
o da coluna: de (70 - 210)°C, 8°C/min, ra zão
de s p litte r
1:100.
Procedim ent
o – Para aromas líquidos, pese diretamente em balão volumétrico de
10 mL, com auxílio de uma pipeta, uma quantidade da amostra de modo que a
concentração do
180 - IAL
analito estudado seja próxima a do padrão e em torno de 1%. Complete o

volume com
álcool. Pa ra arom as em pó, p e se uma quantidad e da a m o str
a cuja co ncen traçã o do
analitoestudado seja próxima a do padrão. Transfira, com álcool, para um balão
volumétrico de
10 mL e complete o volume. Filtre, se neces sário. Injete 1 μL da amostra e dos
padrões no crom atógraf o e ca lc uel a porce n tagme d os a n a lito
s e stu d a dso por
m eio d as áre as ob tid as n o scrom atogram as.
Cálculo
Cp = concentra oçã do
padrãoCa = con cen tra oçã
da a m o straAp = área do
padrão
Aa = área da a m o stra
Re ferê n c ia
ARCTANDER, S. Perfum and flavor chem ical s (aroma chem icals

) v. 1-2. New
Jersey, U.S.A.: publicad
o p elo autor, 1969.
Flavor and Fra g ra necMa te ria .lsW heaton

, USA: Allured Publishing Corporation
,
1993.

s – Teor alcoólico a 20°C
A quantificaçã
o do te or alcoólico
, quando pre se n te
, em arom as líquidos é
de term- nado
i conforme o m étodo 0217/IV.

o de óleos e sse n cia is
Os ó le os e s s e n c ia, is
quando pre s e n te
s n os arom as, podem s er id entificado
s
por cro- m atografi a em cam ada d elg a ad ou quantificads ocom o u so do balão
volum étrico tipo C ás- sia. Quando puros, devem ser feitas as seguintes
determinações físico-químicas: índice de refração a 20°C, densidade relativa a
(20/20)°C e rotação óptica a 20°C. Os valores obtidos são comparados com os
da literatura. Os aromas líquidos podem ser analisados diretamente
ou após a separação dos óleos es senciais com solução saturada de cloreto de
sódio, enquanto q ue os em pó d evem s er prev ia m ene te x tra íd o. sPa ra a m o stra s
em pó, e x traai com uma p e- quena quantidad e de álcool ou é ter.
IAL - 181
Material
Placas de sílica gel 60 G (20 x 20)cm, estufa, câmara ultravioleta, cuba

cromatográfica com tam pa, fra sco Erlen m yeer de 250 mL e prove tas de 10 e 100
mL.
Rea g e n tes
C iclohexano
Acetato de
etila Ácido
a cé ticoÁcido
sulfúrico
Pa drõ es a n a líticsode ó le os e s s e n c ia is
Fa se móvel – C iclo h e x a n o -a ce
o ta
det e tila -á cid
o a cé tic
o
(90:10:1).
Reve la d or – Solução aq u oas de ácido sulfúric
oa
10% (v/v).
Procedim ento – Sa ture a c u ba de v idro com a m istu ar de s o vl e n t es da

fa s e
móve l. C oloque, com a u x ílio de um c a p ilar, a a m o s tr a e os p a drõ es em
p o n to s
d ifere n t es da p la ca de s ílica g e ,l pre p a r a ad p a ra cro m a to g raafi a s c e n d e n .t e
De ixe
s e c ar. C oloque na c u ba cro m a to g rá fic a com o s o vl e n te e d e xi e c o rrer a té
uns
2 cm da e x tre m id a de s u p e rio r da p la c a. Re t ire e d e xi e s e c ar ao ar. Va p o rize
com o revelador. Seque em estufa a 105°C por alguns minutos tomando
o
cu id a do de não d e ix ar c a rb o n izraa p la c a. Com pare o cro m a to g ra m a da
a m o s tr a
com o d os p a drõ e s. A n tes de reve lar a p la c a, o b s erve o cro m a to g ra m a s ob
lu z
u ltra v io le ta .

s – Quantificaçã
o dos óleos e sse n cia is
Material
Pipeta volumétrica de 10 mLe balão volumétrico tipo Cás sia (110 mL de

capacidade e g a rg aol graduad
o de 10 mL, subdividid
o em 0,1 mL).
Rea g e n tes
Clore to de sódio
Solução saturada de cloreto de sódio – Adicione cloreto de sódio em 1000 mL de

água até sa tu ra
r a solu ção.
Procedim ent o – Pip e te 10 mL da a m o s tra

, tr a n s fir
a p a ra um b a lão
vo lum étricotipo C á s sai e co m p leet o volume com s o lu ç ão s a tu raad de
c lore to de só d oi .
182 - IAL
O volume do óleo es sencial separado (obtido na esc ala graduada do gargalo

do
b a lã o) c o r e s p o n ed ao te or em p orc e n ta gm
e do ó leo na a m o stra.

s – Rotação óptica a
20°C Material
Polarím et
ro
Procedim ent o – Tra n sfir a a a m ostr a p a ra um tubo de 1 dm de um

polarím et ro. Ajuste a temperatura da amostra a 20°C. Faça a determinação da
rotação óptica com luz m onocrom ática (lâm pad a de sódio). Efe tue no mínimo
5 le itu ra
s e c a lc uel a m édiaaritm é tica.
Cálculo
L = leituar no polarím etro

C = com prim ent o do tubo em dm
D = d e n sid aedda a m o stra
Re ferê n c ia

Mé t o dsoq u ím icsoe fís icso p ara a n á lis
s ed. São Paulo: IMESP. 1985.
p. 419.
FENAROLI, G. Sostanze Aromatiche Naturali. Milano, Italy: Editore Ulrico

Hopepli, v.
1:, 1963. 1004 p.

s – Índice de refração a
20°C Material
Refra tôm erot
Procedimento – Faça circular uma corrente de água através do refratômetro de

modo a m anter a tem pera tu
a rco n sta n .teE sta tem p eratur
a não d eve rá d ife rir da
re ferê n cia de + 2°C.
IAL - 183
A n tes de co lo ca
r o óleo e s s e n cl iano in strum ento, o m esmo d eve e s tar à tem pera tuar
na qual
a m edida s e ár e fe tu a d. aColoque 2 g o tas da a m o str a entre os p rism a. sFe c he os
p rism a s,ocalize
f e corrija o índice de refração obtido pela leitura da escala,
conforme o cálculo a se g ur.i
Cálculo
= índice de re fra çoã à tem p era tu

a rde trabalho
t’ = tem pe ra tu
a rde
trabalhot = 20°C
Re ferê n c ia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Norm as Analítica s do Instituto Adolfo Lutz. v.1:

e de a lim e n to. São
s Paulo: IMESP. 3. ed., 1985.
p. 420.
FENAROLI, G. Sostanze Arom atiche Naturali. Milano, Italy: Editore Ulrico

Hopepli,
v. 1, 1963. 1004 p.

s – Densidad
e relativa a
(20/20)°CMaterial
Term ôm et
ro, picnôm et
ro (ou d ensím et
ro digital) e d e s se c ar.d o
Procedim ento – Tare um picnômetro, previamente seco em estufa a 100°C.

Encha-o com água, a 20°C e pese. Seque o picnômetro em estufa e coloque
nele a amostra, a 20°C e p e s e .
Cálculo
A = m a ssa do conjunto picnôm et

ro e a m o str
a m e nos a ta ra do picnôm et
ro
B = m a ssa do conjunto picnôm et
ro e á g ua m e nos a ta ra do picnôm et
ro
184 - IAL
Re ferê n c ia

p. 421.
FENAROLI, G. Sostanze Arom atiche Naturali. Milano, Italy: Editore Ulrico

Hopepli,
v. 1, 1963. 1004 p.

s – Vanilina e correlatos
Pe s q u is
a em arom as contendo: vanilina, etil vanilina, m altol, etil m altol,
heliotropina, cum arina, dihidrocum arina
, e tc .
Material
Pa p el Whatman nº 1, (20x20) cm, câm aar ultrav ioleta , cuba crom ato g ráfic
a com
tam pa,funil de se p a ra çoãde 250 mL, b éq u eres de 50 mL, b a lõ se volum étrico
s
de 100 mL e m icro s se rin g a .
Rea g e n tes
Isobutanol
Pa drõ es a n a líticsode vanilina, etil vanilina, m altol, etil m altol, heliotropina,
cum arina , dihi-
drocum arina
So lu çã o -p a dorã– Pre p are so lu ç õsea 1% de vanilina, e til vanilina, m altol, e til m altol,
heliotropina, cum arina , dihidrocum arina , em álcool.
Fa se móvel – Isobutano l (100 mL) e hidróxido de am ônio a 2% (60 mL). A g ite em

funil d e separação. Decante. A camada alcoólica (superior) é utilizada para correr o
cromatograma.
A cam ada a q u oas (infe rior
) é utilizad
a p a ra s a tu ra
r a câm ara.
Procedim ent o – Coloque a cam ada alcoólic a da fa se móvel na cuba

crom atog ráfica . Distri- bua a camada aquosa da fase móvel em dois béqueres
pequenos e coloque-os dentro da cuba, um em cada extremidade. Para
amostras em pó, extraia com uma pequena quantidade de álcool ou é ter e filtre.
As am ostra s líquidas não ne ce ssita
m de pre pa raçã
o. Aplique, com auxílio
de um cap ilar, a am ostr a e os padrõ es em pontos d ifere n tes do papel Whatman nº
1, pre p a ra
-
do para cromatografia ascendente. Deixe secar. Coloque-o na cuba
cromatográfica contendo a fase móvel e deixe correr até 2 cm da extremidade
superior do papel. Retire e deixe secar ao ar. Ob serve sob luz ultraviolet
a e
m arque as m ancha
s obtidas. Compare com as dos padrões.
IAL - 185

e de a lim e n to
. São
s Pau lo: IMESP. 3. e d ,. 1985. p.
4 2 7 -4 2 8 .
080/IV Conservadores – Determinação espectrofotométrica simultânea de

nitrito e nitrato
E s se m étodo a p lic ae-sàs fo rm ulaçõe

s sim p le
s de aditivos contend o nitritos,
nitratos
e cloreto de sódio. A razão das abs o r b â n c iadse um a s o lu ç ã oa q u o s ad e nitritoa
3 5 5 nm
e a 3 0 2 nm é 2 ,5. O n itra tonão a b s orve a 3 5 5 nm m a ste m um a b a n d a
c a ra c t e r ís tic a
a 3 0 2 nm. A a b s o rb â n c iado n itra to p o d e s e r c a lc u la d ad iv id in d o -s ea
a b s o rb â n c iad o nitritoa 3 5 5 nm p o r 2 ,5 e s u b tra in d o -so eq u o c ie n tedo to ta l
d a a b s o rb â n c ia a 3 0 2 nm. Em cubeta de 1 cm, o limite de detecção para
nitrito é 0,02 mg/mL e 0,09 mg/mL para nitrato. O pH da solução não deve
estar abaixo de 5 (o nitrito forma ácido nitroso, com uma a b so rb â nacim áxima
a 357 nm).
Material
Balança analítica, espectrofotômetro UV/VIS, béqueres de 25 mL e balões

volumétricos de
100 mL.
Rea ge n te
Pa drõ es a n a líticsode nitrato de sódio e nitrito de sódio
Procedim ent o – Pe se 20 g da a m o stra

, com pre cis oã a té m g. Tra n sfir
a p a ra um
b alãovolumétrico de 100 mL e complete o volume com água. Ajuste o zero do
espectrofotômetro, em unidades de absorbância a 302 ou 355 nm, utilizando
água como branco e cubetas de
1 cm. Meça a absorbância da amostra a 302 e 355 nm e calcule como descrito
a seguir. Determine o teor de nitrito na amostra utilizando o valor da
absorbância a 355 nm e a curva-padrão do nitrito. Para o nitrato, divida o valor
desta absorbância por 2,5 e subtraia
do valor da absorbância a 302 nm. Calcule a concentração de nitrato na amostra
utilizando
o va lor de a b so rb â nac re
i su lta netd e sat su b tra çã
o e a curva -p a d rã
o do nitrato.
Curva-padrão do nitrito – Prepare, em uma série de balões volumétricos de

100 mL, diferentes concentrações de nitrito (0,025 - 0,2)g/100 mL e meça a
absorbância destas so lu ç õsea 355 nm.
186 - IAL
Curva -p a d rã o do nitrato – Pre p are, em uma s é rie de b a lõ es volum é trico

s de 100
mL,
d ifere n tes co n ce n tra çõ
s de
e nitrato (0,1 - 1)g/100 mL e m eça a a b so rb â nac di e s ta
s
s o lu ç õ e s
a 302 nm.
Cálculos
1. Em nitrito:
C = concentra oçãde nitrito de sódio encon traadna curva -p a d rã

o a 355 nm
P = m a ssa da a m o stra
2. Em nitrato:
C = concentra oçãde nitrato de sódio obtido na leituar de Ac na curva -p a d rã o

P = m a ssa da a m o stra
Ac = a b so rb â nacico rrig id a
Re ferê n c ia
LARA, W.H.; TAKAHASHI, M. Determ ina çã o esp e cto fo to m étric

a de nitritos e
nitra to sem s asi de cu ra. Rev. Inst. Adolfo Lutz, São Paulo, v. 52, p. 3 5 -3 ,9 1974.
WETTERS, J.M.; UGLUM, K.L. Dire ct s p e crophotom

t etri
c sim ultane ous
determ ination
of nitritre and nitrate in the ultrav iolet
. Anal. Chem., v. 42. p. 3 5 5 -3 40
, 1970.
081/IV Conservadores – Determinação de nitrato após redução em coluna de

cádmio
e de nitrito
E s te m étodo a p lic ae-s à a m o stra

s de aditivos que p o ssume na sua
form ulaçã o compostos que interferem na análise direta dos nitritos e nitratos
por espectrofotometria no u ltrav ioleta conforme 080/IV. A análise dos nitritos e
nitratos é feita por espectrofotometria
no v isve
í l, a p ós red ução d os n itra to
s em coluna de cádm io, conform
e os m éto do
s
283/IV
e 284/IV.
IAL - 187
082/IV Conservadores – De terminação de propionatos
Os s asi de cá lcio e sódio do ácido propiônico têm a ção antim icrobiana,

se n do e fe tivos no contro le de bolores em fa rin hsa e c ertos produtos de
co nfe ita ria. Os m étodo s p a ra a sua determinação envolvem primeiro a extração,
que geralmente é feita por destilação por arraste a vapor, seguida da separação e
identificação do ácido propiônico junto aos demais á cid os q ue podem s er co -
e x tra íd o. Ne
s s at e ta p a, p o d e e-sutilizar as té cn icsa de crom atogra
-
fia em fa se g a s o s, aem cam ada d e lg a ad ou em pap el.
Material
Banho-maria, aparelho completo para destilação por arraste a vapor, pipetas de

1, 2 e 5 mL, fra s oc Erle nm yeer de 200 mL, pap el Whatman nº 1 (20 x 20) cm,
m icro sse rin g, ava p o riza
- dor, pHmetro, béqueres de 100, 200, 400 e 600 mL,
provetas de 10, 50, 100 e 500 mL e cuba crom ato gráfic a com tam pa.
Rea g e n tes
Ácido sulfúrico
Ácido
fo sfo tú n gstico
Sulfato de
magnésio
Hidróxido de
sódio
Pa p el indicador verm elho cong o
Hidróxido de
amônio terc-
Butanol
n-Butanol
Indicado res verm e lh
o de m etila e azul de bromotimol
Form ol
Álcool
Ácido propiônico
Solução aquosa de ácido fosfotúngstico a 20% – Em um frasco

Erlenmeyer de
200 mL, p e se 20 g de ácido fosfotú
n g stico e dilua com 80 mL de água. Misture
bem. Gu ar-
de em fra sco de vidro com tam pa.
So lu çã o -p a dorã– Ne u traze,
li com hidróxido de sódio 1 M, 1 mL de ácido
propiônico e dilua até 100 mL. Use 4 mL desta solução para uma destilação igual
à da amostra, recolhendo
200 mL do d estila do
, neutralizand
o e se c a nod n as m e smsa co n diçõe
s
d e s critaFa
s . se móvel – terc-b u ta n o l-n -b u ta n oróxido
l-h id de am ônio (1:1:1).
Reve la d ro – Mis t ure 2 00 mg de ve r m e lh

o de m e tila, 2 00 mg de a z ul de
bro m o ti-
188 - IAL
mol, 1 00 mL de formol e 4 00 mL de álco ol e ajuste o pH a 5,2 com hidróxido

de
sódio 0,1 M.
Procedim ent o – Tra n s fir a 20 g da a m o str a p a ra um fra sco de d e stila çã, ocom
au- xílio de 50 mL de água. Adicione 10 mL de ácido sulfúrico 0,5 M, agite e
adicione
10 mL de ácido fo sfo tú n g stic o a 20% e a g ite nova m e n te , p or ro ta ção , o fra soc e
a d icio n e
40 g de su lfaot de m a g n ési o. A g ite. A m istuar d eve s er á cida quando se
u sa p a- p el ve rm e lh o -co n; gcoa so não s e ja, a d icioen ácido su lfú ric o (1 + 1. )
Aq u e ça o fr a -s
co contend o a a m o s atr a n tes de c o n e c ta r no a p are lho de d e stila çoã por
a rra- s
te a vap or. De s tile 200 mL em 3 5 -40 m inutos , re co lha o d e stilaod em
b é q u re d e
400 m L, contend o 2 mL de so lu çã o de hidróxido de sódoi 1 M. Eva p ore em
b a n h o -m a ria té s e c a g e.mDis s oval o re s íd uo em 2 mL de á g u a. De ixe sa tu ra nod
na cu ba de v idro o s o vl e n te : terc -b u ta n o l-n -b u ta n róxido o l-h id de am ônio na
prop orção (1:1:1) . Coloque 2 μL da so lu çã o
da a m o s atr e do p ad rão em po ntos d ifere n tes do p a p el W hatm an nº 1, pre p a raod
p a ra cro- m a to g raafi a sc e n d e n. teDe ixe s e c ra. C o lo q u eo - na cuba crom a to g ráafic
conte nd o o s o vl e n te e d e xi e c o r er a té a proxim adam en e t2 cm da e x rtem idaed
s u p e rio
r do p a p el (5 h o ra s) . Re tire e d e xi e s e c ra ao ar. Va p o rize com o reve la d or.
Coloque o p a p el em a tm o s fe a r de am oníac o p or a lg u ns in s ta n te. sAs m an chsa
ve rm e lhsac o r esp o n dm e a os á cid os vo lá te is
. Como não são e s- táve is, m arq ue lo go
q ue a p are çam com lá p is. Com pare as m a n chsac o r e s p o n d e nste à a m o stra
e ao p ad rão. O m esmo Rf m o straár a pre s e naç do propionat o na a m o stra e, se a
in ten sid ad e
da m ancha for m asi fra ca q ue a do p ad rã ,oe s taár a b axo
i de 0,2% m/m.
Referência bibliográfica
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of

Analysis of the Associatio n of Official Analytica s 16th, Arlington:
l Chem ist
A.O.A.C.,
1996. c h a p te
r 47, p. 19 (m ethod 970.36).
083/IV Conservadores – Identificaçã

o de ácido sórbico e sorbatos
O ácido sórbico e seus sais de sódio, potás sio e cálcio têm ação mais
efetiva sobre ferm en to
s e fung os do que em b a c té ria
s e a g em m elhor em m eio
ácido. Podem s er identificados em formulações de aditivos ou em alimentos
após adequada extração. Eles são convertidos em ácido sórbico após acidulação
e são extraídos das amostras por destilação com a rra set de vap or d’água e
po sterio rm ent
e ide ntifica dos por crom a tog raafi em p ap el ou com ácido
tiobarbitúric
o.
IAL - 189
Material
Balança analítica, balança semi-analítica, banho-maria, espectrofotômetro

UV/VIS, estufa, manta aquecedora, regulador de temperatura, suporte, garra,
mufa, tubo de látex para
condensador,béqueresde100e400mL,balãodefundoredondocomjuntaesmerilha
da45/50
ecomcapacidadepara5L,tubodevidrode1,40mdecomprimentoe1,2cmdediâmet
ro,juntas conectoras para frasco Erlenmeyer com presilha, frasco Erlenmeyer com
junta esmerilhada
29/32 com capacidade para 500 mL, condensador tipo reto com junta
esmerilhada 24/40, funil de separação tipo pêra de 250 mL, pipeta graduada de 2
mL, provetas graduadas de 25 e
200 mL, b a lõ es volum étrico
s de 1000, 500 e 100 mL e tubo ca p ilar de vidro.
Rea g e n tes
Cloreto de sódio
Ácido fosfórico
Sulfato de
m agnésio
Hidróxido de
sódio Éte r
Ácido
sulfúrico
Ácido só rb ic o
Propanol
Acetato de
etila
Solução de ácido sórb ico 0,001% m /v – Pe se 0,001 g de ácido sórb ico (C6H8O2) e
dis solva em á gua su fic ie netp a ra 100 mL em balão volum étric
o.
So lu ção de hidróxido de só doi 1 M – Dis s ova l 4 g de hidróx ido de só doi com á g ua em
um b é q u e r
de 100 m L, e s frie
, tra n s fir
a p a ar um b a lão vo lu m étric
o de 1 00 mL e c o m p lee to
volu m e.
Solução de ácido sulfúrico 0,005 M – Dis solva 0,3 mL de ácido sulfúrico em

água, esfrie, tra n s fir
e o volum e.
Solução saturada de cloreto de sódio – Adicione cloreto de sódio em 1000 mL de
água até sa tu ra
r a solu ção.
Procedim ent
o – Monte o aparelho para destilação por arraste de vapor. Pese 5 g
da amostra
ou meça 5 mL, se a amostra for líquida. Transfira para o frasco Erlenmeyer de 500
mL com
200 mL de solução saturada de cloreto de sódio. Acidule com 2 mL de ácido
fosfórico. Adicione 7,5 g de sulfato de magnésio. Destile cerca de 350 mL, com
arraste de vapor d’água para um béquer de 400 mL contendo 10 mL de
hidróxido de sódio 1 M, inclinando
o béquer de modo a manter a extremidade do condensador imersa na solução
alcalina. Evapore o destilado em banho-maria até reduzir o volume a 100 mL.
Esfrie. Transfira para um funil de separação, acidule e extraia com 4 porções de
éter. Reúna os extratos e evapore
190 - IAL
o éter sem levar à secura. Dis solva o resíduo em 0,5 mL de água. Acidule a
solução aquosa
com ácido sulfúric o 0,005 M e aplique com ca p ilar em p apel crom atográfic o
Whatman
nº 4 ou equivalente, paralelamente com o padrão de ácido sórbico a 0,001%.
Coloque em cuba crom ato g ráfic a pre v ia m e ne tsa tu raad com o s o vl e n te pro p a n o l-
a ce taot de e tila hidróxido
- de amônio-água (3:1:1:1) e deixe correr até ± 2 cm da
extremidade superior do p apel. Re tire e s e q ue a 60°C. Ob s erve o crom atogram a
em câm aar com luz ultrav iolet a (±
255 nm). Compare as m ancha s da a m o stra e do padrão.
A identificação do ácido sórbico, após a extração por arraste de vapor, também

pode
s er rea liza da como d e sc rit
o no m étodo colorim étric
o 085/IV, utilizando o
ácido tiobarbitúric o.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Norm as Analítica s do Instituto Adolfo Lutz. v.1:

p. 103.
084/IV Conservadores – De terminação de ácido sórbico e sorbato

s por
esp e ct
rofoto- m etria no UV
O ácido sórbico e seus sais podem ser quantificados em alimentos ou

formulações
de aditivos após sua extração. Este método baseia-se na extração do ácido
sórbico ou de seus s a is, convertidos em ácido só rb ico a p ós acid ificaçã, opor
d e stila çã
o com a rra set de va por e p o ste rio
r leituar e s p e crofotom
t é tric
a a 254 nm.
Material
, balanç a se m i-a n a lític
, baanh o -m a ria, e sp e crofotôm
t et
ro UV/VIS,
e s tu fa ,manta aquecedora, regulador de temperatura, suporte, garra, mufa,
tubo de látex para con den sa do r, pHmetro, pipetado r autom átic o de 100 a 1000
μL e de 1 a 5 mL com a s respectivas ponteiras, papel de filtro qualitativo,
béqueres de 25, 100 e 400 mL, balão de fundo redondo com junta esmerilhada
45/50 e co m c a p a c id a dpea ra5 L, tubo d e v idro d e
1 ,4 m d e co m p rim e nto e 1 ,2 cm d e d iâ m ero t , ju n ta sc o n e c to r apsa rafr a s c o
Erle n m yee r com pre s ilh afr
, a s c oErle n m yee r co m ju nta e s m e rilh a d2a9 /3 2e com
capacidade para
500 mL, condensador tipo reto com junta esmerilhada 24/40, pipeta graduada de
2 mL e b a lõ es volum é trico
s de 500 e 1000 mL.
Rea g e n tes
Cloreto de
sódio
Ácido fosfórico
IAL - 191
Sulfato de m agnési o (MgSO4.7H2O)

Hidróxido de sódio
Ácido sulfúrico
Ácido só rb ico (C6H8O2)
Solução de ácido sulfúrico 0,005 M – Dis solva 0,3 mL de ácido sulfúrico em

água, esfrie, tra n s fir
e o volum e.
Procedim ent o – Pro ce da como no m étodo 083/IV, a té: “inclinand o o b é q ure de

m odo
a m a n ter a e x rte m id aed do c o n d e n s ar dim
o e rs
a na s o lu çoã alcalina
”. Diss oval o
resíd uo da destilação, obtido no item anterior, com água até 500 mL, acidulando
com ácido sulfúrico
0,005 M, a fim de o b ter pH 5,9. A ju ste o zero do e s p e crofotôm t et
ro a 254 nm,
utilizandocomo branco água acidulada com ácido sulfúrico 0,005 M até pH igual
a 5,9, em cubeta de
1 cm de cam inho óptico. Me ça a a b so rb â nacida am ostra a 254 nm.
Cálculo
C alcule a co nce ntraçã

o usando o va lor = 2200, ou uma curva-padrão
construída com so lu ç õ e s-p a od rã
de ácido só rb ico (ou so rb aot de p o tá ssio ).

Mé to dso q u ím ico
s Paulo: IMESP, 3. ed., 1985.
p.
103.
085/IV Conservadores – Determinação de ácido sórbico por

espectrofotometria no visível
E s te m étodo b a s e iae-sna e x tra çoã do ácido só rb ico ou de s e us s a is,

convertid os em ácido sórbico , com clorofórmoi na re a ç ão colorim étric
a com ácido
tiobarbitúrico e p o s te-rior leituar e sp e crofotom
t é tric
a a 530 nm.
Material
Ba la n ç a a n a lític ab, a n h o -m a ria

e s, p e crot fo tô m erot UV/VIS,s u p orte , g a rr a m
, u fa ,
p a- ra film ep, a p e ld e filtro q u a litavoti , funil d e s e p a ra ç ã tipo
o , p ê ra ,d e 2 5 0 m L,
b a lõ e svolu- m é tric o sd e 2 5 , 5 0 , 1 0 0 , 2 0 0 , 2 5 0 , 5 0 0 e 1 0 0 0 m L, p ip e ta s
vo lu m é tric adse 1 , 2 , 5 , 1 0 ,
2 5 m L, funil p a r afiltra ç ã otub , o d e e n s a iop, ip e ta d oar u to m á ticdo e 1 0 0 a 2 0 0 μL
e de1
a 5 m L co m a s re s p e cva
t i s p o n te ira sb,é q u ree s d e 2 5 , 1 0 0 e 4 0 0 m L e prove t a s
g ra d u a d a s
d e 2 5 , 5 0 e 2 0 0 m L.
192 - IAL
Rea g e n tes
Clorofórm io
Sulfato de sódio anidro
Ácido sórb ic o
Ácido cloríd rico
Dicrom ato de
p o tá ssio
Bicarb onat
o
de sódioÁcido
sulfúrico
Solução-padrão – Pese, com precisão, cerca de 100 mg de ácido sórbico,

transfira para um balão volum étric o de 1000 mL com pletand o o volume com
água . Esta solução tem concentra ção de 100 μg/mL. Re tire 1 mL d e sta solução
e leve p a ra um balão volum étric
o de 50 mL, com pletando o volum e. E sta solução
tem concentraçã o de 2 μg/mL. Retire 5 mL da solução
a 100 μg/mL e leve p a ra um b alão volum étric
o de 100 mL, com pletando o
volume. Esta solução tem concen tra oçãde 5 μg/m L.
Solução de ácido clorídric

o (1:1) – Dis s ova
l 25 mL de ácido cloríd ric
o em 25 mL
d e ág ua.
Solução de bicarbonato de sódio 0,5 M – Dis solva 4,2 g de bicarbonato de sódio

em água, tra n sfir
a p a ra um balão volum étric
o de 100 mL e com plete o volume
com ág ua.
Solução de dicrom ato de p o tá ssi

o – Pe se 0,49 g de dicrom ato de p o tá ssi
o e d issova
l
em balão volumétrico de 1000 mL, com aproximadamente 500 mL de água.
Adicione 8 mL
de ácido sulfúric
o e com plet
e o volume com ág ua.
Solução de ácido tiobarbitúrico a 0,5% m/v – Dis solva 0,5 g de ácido

tiobarbitúrico em água, aquecendo em banho-maria para dis solver, esfrie, transfira
para um balão volumétrico
de 100 mL e com p lete o volum e. Pre p are na hora de u sar.
Procedim ent o – Pese , com precisão, 5 g da amostra (triture no liqüidificador,

se neces sário), transfira para um balão volumétrico de 250 mL e complete o
volume com água. Filtre se neces sário, e pipete 10 mL do filtrado para um funil
de separação de 250 mL e extraia, por agitação durante 1 minuto, com duas
porções de 40 mL de clorofórmio (pode-se aumentar para 4 extrações de 25
mL, se neces sário). Recolha a fase clorofórmica em balão volumétrico
de 100 mL ou outro de volume adequado, pas sando por um funil com sulfato de
sódio anidro.
Completeovolumecomclorofórmio.Pipete25mLdestasoluçãoparaumfunildesepara
çãode
250 mL e e x traai com 15 mL de solução de bicarbonat o de sódio 0,5 M, agitand o
durante
1 minuto, despreze a fase clorofórmica e transfira quantitativamente a fase aquosa
para um balão volum étric o de 25 mL (p o d ee-saum enta
r p a ra 4 e x tra ç õs ede 20
mL, se n e c e s s á rio ;
IAL - 193
nes se caso, receba o extratos em um balão volumétrico de 100 mL). Adicione

ácido clorídrico
1:1 cuidadosam eenta té q ue a solução fiq ue ácida e com p leet o volume com
água. Pip e et 2 mL p a ra um tubo de e n s aoi contend o 2 mL de solu ção su lfú ric
a
de dicrom ato de p o tá ssio. Cubra os tubos com parafilme e coloque-os em um
banho de água fervente, por 5 minutos. Retire-os e, imediatamente, adicione 2
mL de solução de ácido tiobarbitúrico, cobrindo-os novam ent e com pa ra film. e
Coloque os tubos de e n s aoi novam ent e em um banho de á g uafervente, durante
10 minutos. Retire os tubos e deixe esfriar. Faça um branco usando 2 mL
de á g ua em lu gar da a m o stra
. Le ai a a b sorb â nacia 530 nm e com pare com uma
curva -padrão obtida n as m e smsa co n diçõe s da a n á lise .
Curva -p a d rã
o – Re tire com pipetado r autom ático, porç õ es de 0,5; 1; 1,5 e 2 mL
da s o lu çã opadrã
- o a 2 μg/mL p a ra 4 tubos de e n s aoi e ad icion
e 1,5; 1; 0,5 e 0
mL de água, re s p e cti- vamente. Estas soluções contêm 1, 2, 3 e 4 μg de ácido
sórbico, pela ordem. Retire, com pipetador automático, porções de 1; 1,2; 1,4;
1,6; 1,8 e 2 mL da solução a 5 μg/mL para
6 tubos de ensaio e adicione 1; 0,8; 0,6; 0,4; 0,2 e 0 mL de água
respectivamente. Estas s o lu ç õse contêm 5, 6, 7, 8, 9 e 10 μg de ácido só rb ico ,
p e al ordem. Pro ce da a de term inação como d e sc rit
o acim a. Construa o g rá fico
a b so rb ânacix μg ácido sórbico/6 mL solução.
No ta: a p ós a e x tra çoã do analito, p o d e e-s tam bém fazer a quantificaçã o por
m eio d e leitura dire ta a 254 nm da solução a q u oas final, utilizand o como
branco uma solução d e bicarbonato de sódio. Outro modo de determinar o
ácido sórbico seria a extração deste por a rra set de va por (como d e sc rit o no
m étodo 083/IV), recolhe nd o o d estilaod e levando e s te
a um volume definido , se n e c e s s áorie pro ce da a determ inaçã
o como d e sc rit
o
acim a.

p. 103.
086/IV Corantes artificiais – Identificaçã

o por crom atografi
a em papel
Material
Balança analítica, papel Whatman nº 1, cuba cromatográfica, balão volumétrico

de 100
mL e ca p ilares de vidro.
Rea g e n tes
Citrato de sódio
Hidróxido de am ônio
194 - IAL
n -Butanol
Á lcool
So lu çõ e s-p a dorã
– Pre p are as s o lu ç õsea q u o sa
s de padrõ es d os c o ra n te
s a 1% m /v.
Fase móvel (Solvente A) – Pese 2 g de citrato de sódio, transfira para um balão

volumétrico
de 100 mL, adicione 20 mL de hidróxido de amônio e complete o volume
com água. Fa se móvel (Solve n te B) – n -b u ta n o l-á lc o o l-á g uróxido

a -h id de amônio
(50:25:25:10).
Procedim ent o – Prepare soluções aquosas das amostras a 1%. Sobre uma folha
de papel Whatman nº 1, a 2 cm da extremidade, em pontos distantes 2 cm
uns dos outros, aplique com um tubo capilar as soluções das amostras e dos
respectivos padrões dos corantes.
De s e nvolva o crom atogram a com o s o vl e n te A ou B. O va lor de Rf e a co lo ra çã
o da
m anchad evem s er idê ntico s a os do padrão. A v isu a liza oçãda m ancha tam bém
pode s er fe ita à luz ultravioleta, onde tem-se melhor nitidez dos contornos e, em
certos casos, de algumas
m ancha s que não foram v is tas no e x a me dire to.
No ta: os cromatogramas feitos com os solventes A e B não levam sempre ao

mesmo resultado. A lg uns c o ra n te s mudam inteiram ent e os va lores de Rf de um p a ra
outro solvente e outros
se mostram mais puros em solvente A que em solvente B. O cromatograma com
solvente
A é o m ais u sado por s er m ais rápido, a p e sar d os contorno s d as m ancha s não s erem
muito
pre c is o. sOutros s o vl e n tes tam bém podem s er u sa d so como m ostra a Tabela 1.
Tabela 1 – Rf e absorbância máxima de alguns corantes artificiais

permitidos em alimentos
Rf no so lve n te
Corante C la s s e Ab s. Máx.(nm)
A B C D E F
B ord e a u xS ou Az o 520
A m a ra n to 0,62 0,27 0,29 0,14 0,19 0,11 (em m e ioác id o )
Eritro s in a X anten o 525

0,21 0,52 0,61 1,00 0,58 0,47
(em m e ioác id o )
A m are lo 480
Az o 0,73 0,72 0,46 0,28 0,45 0,40
cre p ú s c u lo (e m m eioá c id o )
430
Tartra z in a Pir azo lon a 0,91 0,41 0,28 0,12 0,17 0,09
(e m m eioá c id o )
285 e 615
Indigotin a Indigóid e 0,52 0,27 0,25 0,14 0,20 0,30
(em m e ioác id o )
A = Hidróxido de amôn io -á gau (1: 99)

B = Clore to de sódio a 2% em álcool a
IAL - 195
50%
C = Iso b u ta n o l-á lco o l-á

a (1:2:1)
gu
D = n -Bu ta n o l-á g u a -áocid
a cé tic
o g la cial (20:12:5)
E = Iso b u ta n o l-á lco o l-á
a (3:2:2
g u ) e 1 mL de hidróxido de am ônio p a ra 99 mL da
m isturaanterio r
F = Solução de 80 g de fenol em 20 mL de água
Re ferê n cai bibliográ fic a
GAUTIER, J.A .; MALANGEAU, P. Mis es au Point de Chimie Analytiqu e Organique

– Pharm aceutiqu e et Brom atologique
. 13. ed ,. Pa ris: Ma s s on & Cie., 1964. p. 70,
71, 91.
087/IV Corantes artificiais – Identificaçã

o por esp ecrofotometria
t
Material
, pHmetro, espectrofotômetro UV/VIS, balão volumétrico de 100
mL , pip eta de 1 mL e balão de 2 L.
Rea g e n tes
Ácido a cé tico
Acetato de amônio 0,02 M (pH 5,6) – Pese 3,08 g de acetato de amônio e

transfira para balão volum étrico de 2 L, dilua com ág ua, a c erte o pH da solu ção
p a ra 5,6 com ácidoa cé tic
o e com p leet o volume com água.
Procedim ent o – Pe se 0,1 g da amostra e dilua a 100 mL com uma solução de

acetato de amônio 0,02 M (pH 5,6). Pip e et 1 mL d e sat solução e dilua a 100
mL com a solução d e acetato de amônio 0,02 M. Controle o pH da solução
para 5,6. Trace o espectro do corante
no intervalo de 200 a 600 nm. Os m áxim so e m ínim os de a b sorção s ão bem
de finidos , po- dendo variar de 2 a 3 nm. Compare com os espectros obtidos nas
mesmas condições para
os c o ra n te s -p ao.
d rã
JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES. Guide to

specification s for general notices, general analytical techniques
, identificatio
n
te sts,te st solutions and other re fere n ce m aterials
. Rom e, 1991. p. 114 (
FNP5/rev.2).
088/IV Corantes artificiais – Quantificaçã

o por esp e ct
rofotom etria
Material
Balança analítica, pHmetro, espectrofotômetro UV/VIS, balões volumétricos de
100, 200
196 - IAL
e 1000 mL, p ip e ta
s volu m étrica
s de 1 e 10 mL e fra s oc Erlen m yeer de 250 mL.
Rea g e n tes
Ácido a cé tico
Acetato de amônio 0,02 M
Acetato de amônio 0,02M (pH 5,6) – Pese 3,08 g de acetato de amônio e

transfira para balão volum étrico de 2 L, dilua com ág ua, a c erte o pH da solu ção
p a ra 5,6 com ácidoa cé tic
Procedim ent o – Para os corantes amarelo-crepúsculo, tartrazina, indigotina,

bordeaux S, e ritro sin a, poncea u 4R, verm elh
o 40 e azo rrubina, pre p are so lu ç õsea
0,001% em a ce ta to
de am ônio 0,02 M (pH 5,6). Pa ra os c o ra n te s a zu l-b rilh an
e te a zu l-p a te n, te
pre p are um a solu ção a 0,0005% em a c e taot de amônio 0,02 M (pH 5,6). Pa ra o
co ra net verd e -s ó lidFCF,
o pese com precisão, de 50 a 75 mg do corante, transfira
para um balão volumétrico de 1
L, dis solva e complete o volume com água. Ajuste o zero do espectrofotômetro,
em unidades
de absorbância no comprimento de máxima absorção do corante a ser medido,
utilizando a solução de acetato de amônio como branco e cubetas de 1 cm.
Meça no comprimento de onda de a b s orção m áxima no v isve í l, indicado na
Tabela 2, a absorbância das soluções de corantes. Para o corante verde sólido
FCF, pipete 10 mL da solução anterior para um frasco Erlen m yeer de 250 mL,
contend o 90 mL de a c e taot de amônio 0,04 M, m isture bem e fa ça a
leituar a 625 nm. Calcule a co n cen traçã o de ca da co ra net utilizand o o va lor da
a b sortividade
( ).
Cálculos
A = a b so rb â nacida solu ção da a m ostra

C = concentra oçãda solu ção da a m o str a (g/100
mL) Pa ra o verd e -s ó lid

o FCF:
A = absorbância da solução da amostra

a = a b sortividade
P = p e so da am o str
a em g
IAL - 197
Tabela 2 - C a ra c te rís tic

s eas p e crofotom
t étrica
s de alg u ns c o ra n te s
no Ab so rção
Colour
C orantes INS * máximo m áxim a
Ind e x
do v isíve l no v isíve l
A m are lo -c
re p ú s c u lo 11 0 15 98 5 5 64 ,1 (nm)48 1
Tartra zin a 10 2 19 14 0 5 36 ,6 42 6
Az u l-b rilh a n te 13 3 42 90 0 1 6 4 0 ,0 63 0
Ind ig otin a 13 2 73 01 5 4 49 ,3 61 0
Az u l-p a te n V
te 13 1 42 05 1 2089 64 0
Verd e -s ó lidFCF
o 14 3 42 05 3 ** 62 5
B ord e a u xS ou a m a ra n to 12 3 16 18 5 4 36 ,0 51 9
Eritro s in a 12 7 45 43 0 1 1 3 0 ,0 52 4
Po n c e a u4R ou N c o c in a 12 4 16 25 5 4 42 ,5 50 7
Ve rm e lh o40 12 9 16 03 5 5 36 ,0 50 5
Azo rrubinaou c a rm o is in a 12 2 14 72 0 5 18 ,6 51 5
*Sistema Inte rnaciona l de Num e ração

**Pa ra o verd e -só lid
o FCF, a a b sortividade é de 0,156 m g/L/cm .
Re ferê n c ia
COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX Food Chem ical s Codex. 4. ed.,

Washingto
n D. C.: National Acad emci Pre s ,s 1996. p. 142, 773.
GAUTIER, J.A .; MALANGEAU, P. Mises au Point de Chimie Analytique

Organique – Pharm aceutiqu
e et Bromatologique . 13. ed., Paris: Mas son & Cie.,
1964. p. 70, 71, 91.
089/IV Corantes artificiais – Quantificaçã

o por titulação com cloreto de titânio
A porcentagem de corante puro pode muitas vezes ser determinada pela

titulação com clore to de titânio, u s a n d oe-suma solu ção -tamop ãadeq uada . Na
m aiori a d os c a s o,s a própria a m ostr a s erve como indicado r, v is ot q ue no ponto
final o co re a d e sc o lo raoçãd a solu ção. Se a a m o str
a co ntiver uma m istura de dois
ou três co ra n te, sé n e c e s sáa riuma s e p -a ra ção por crom ato g rafi a a n tes de se
e fe tura a titulação.
Material
, a p arelho de Kipp p a ra g e rar de CO2 e H2 , agitador, balão de
2000 mL, fra sco Erlenm yeer de 500 mL, prove tas de 25 e 50 mL e bure ta de 50
mL.
198 - IAL
Reagentes
Solução de tricloreto de titânio 0,1 M – Misture 200 mL de solução de

tricloreto de titânio com ercial a 15% com 150 mL de ácido cloríd ric o. Ferva a
m istura durant e 2 m inutos e re s frie em á g ua fria. Adicione ág ua a té com pletar
2000 mL. Misture bem e borbulh e CO2
ou N2 na solução por uma hora. Antes de padronizar, mantenha a solução sob
atmosfera de
hidrogênio por pelo m enos 16 h o ras usando um a p arelho g e ra droKipp.
Padronização da solução de tricloreto de titânio – Transfira 3 g de sulfato duplo

de ferro e amônio para um frasco Erlenmeyer de 500 mL. Introduza uma
corrente de gás carbônico. Adicione 50 mL de água recentemente fervida e 25
mL de ácido sulfúrico 5 M. Adicione, rapidamente, com auxílio de uma bureta,
30 mL de solução de dicromato de potás sio 0,0167
M (não interrom pa a c o r e n te de CO2). Tra n sfir a a solu ção de triclore to de
titânio p a ra um a bure ta e coloque rap idam ente no fra s oc Erlenm yeer a té pouco
acima do ponto de v ira g em Adicion
. e rapid am ente 5 mL de tiocianat o de
amônio a 20% e com plet e a titulaçã
o a té que
desapareça a coloração vermelha e a solução permaneça verde. Efetue uma
determinação em branco com 3 g de su lfaot duplo de fe r o e am ônio, utilizand o as
m e smsa q uantid ad es
de água, ácido e solução de tiocianato de amônio e pas se uma corrente contínua
de gás carbônic o na solução.
Cálculo
A = mL da solução de dicrom ato de p o tá ssi o 0,0167 M adicionado

f = fa tor da solução de dicrom ato de p o tá ssi
o 0,0167 M adicionado
V = mL (corrigid)oda solução de triclore to de titânio g a sot na titulação
Procedim ent o – O a p are lh o p a ra d e te rm in a çã do o te o r d e c o ra n tep o r

titu la ç ã oco m TiCl3 (Figura 1) c o n s is t ed e um fr a s c od e e s to c a g e m(A ) d o
titu la n teTiCl3 m antido s o b a tm o s fe rad e hidro g ê n io ,prod uzid o p o r um a
a p are lh o g e r a d odr e Kipp, um fr a s c oErle n m yee r (B ), e q uip a d oco m um a fo n te
d e CO2 ou N2 , p a ram a n te ra a tm o s fe ra in erte , o n de a re a ç ã os e re a liz a ráum
;
a g ita d o re um a bure ta (C). Pe s e a q u a n tid a d ed a a m o s trad e a c ordo co m a
Ta b e la3. Tr a n s ra fi para um frasco Erlenmeyer de 500 mL, com auxílio de 150
mL de água. Adicione 1 0 g d e c itra tod e s ó d ioou 1 5 g d e b itarta ra to
d e só d io(Ta be la3). Titu lecom a solução-padrão de cloreto de titânio sem
interromper a co r e n te de CO2 e o aquecim ent
o.
IAL - 199
Figura 1 – Ap arelho p a ra de term inaçã

o do te or de co ra net por titulaçã
o com
TiCl3
Cálculo
A = mL (corrigid)ode so lu çã o -p a do rã de c lore to de titânio g a sto na titulação

D = peso (em g) do corante equivalente a 1 mL da solução-padrão de cloreto
de titânio
0,1 M ( Tabela 3)
f = fa tor da so lu çã o -p a do rã
de c lore to de titânio 0,1 M
P = peso da amostra
200 - IAL
Tabela 3 - Titulação com clore to de titânio

nº de g do
Ma s s aem g da
Adicionar co ra nte
Corante am ostra a s e r
15 - 10 g * equiva le n te a 1
u sa d a na
mL da so lu çã o -
titulação
A m are lo -c
re p ú s c u lo 0 ,5 – 0 ,6 C itrato pa d rã0o,01d 13
e 1TiCl3
Tartra zin a 0 ,6 – 0 ,7 Bitarta ra to 0 ,01 35 6
B ord e a u xS ou a m a ra n to 0 ,7 – 0 ,8 C itrato 0 ,01 51 1
Po n c e a u4R 0 ,7 – 0 ,8 C itrato 0 ,01 57 8
Ve rm e lh o 0 ,5 – 0 ,6 Bitarta ra to 0 ,01 24 1
40 0 ,5 – 0 ,6 Bitarta ra to 0 ,01 25 6
Azo rrubina 1 ,8 – 1 ,9 Bitarta ra to 0 ,03 96 5
Az u l-b rilh a n te 1 ,0 – 1 ,1 Bitarta ra to 0 ,02 33 2
Ind ig otin a 1 ,3 – 1 ,4 Bitarta ra to 0 ,02 89 8
Az u l-p a te n V
te 1 ,9 – 2 ,0 Bitarta ra to 0 ,04 04 5
*15 g, se for bitarta raot ou 10 g, se for citrato.
Re ferê n c ia
COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX Food Chem ical s Codex. 4th ed.,
Washingto
n D. C.: National Acad emci Pre s ,s 1996. p. 142, 77 3-7 74 .

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, identificatio
n
te sts,te st solutions and other re feren ce m aterials
. Rome, 1991. p. 116-118.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official m ethods of

analysi
s of the Associati o of Official Analytica
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. 16th, Arlington:
A.O.A.C.,
1996, c h a p te
r 46. p. 10, 11 (m ethod 950.61).
JOINTFAO/WHOEXPERTCOMMITTEEONFOODADDITTIVES.Compendium
of food addittive sp e cifica tio. nRom
s e, 1992, p. 37, 71, 176, 219, 639, 783, 1051,
1141,
1463, 1483.
090/IV Corantes artificiais – De terminação de eritrosina por gravim etria
O procedimento gravimétrico simples permite somente a determinação da

eritrosina na m a téria -p rim
a do co ra net puro.
IAL - 201
Material
Balança analítica, estufa, béquer de 400 mL, pipeta de 5 mL, placa filtrante.
provetas de 10
e 50 mL, d e ss e c ard com
o sílica g el ou clore to de cá lcio anidro e b a stão de vidro.
Rea g e n tes
Ácido nítrico (1 + 1 9 )
Ácido nítrico
(1+ 17 9)
Procedim ent o – Estabilize a temperatura da estufa para 135°C. Pese 0,25 g da

amostra e transfira com auxílio de 100 mL de água para um béquer de 400
mL. Adicione 5 mL de ácido nítrico (1 + 19), agite com um bastão de vidro,
filtre em placa filtrante previamente aquecida em estufa a 135°C, resfriada em
des secador e pesada. Lave o béquer e a placa com
50 mL de ácido nítrico (1 + 179) e depois com 10 mL de água, evitando que o
precipitado seque. Seque, aqueça em estufa a 135°C, resfrie em des secador e pese.
Repita as operações
de aquecim ent o e resfria m eon ta té p e so co n sta n te.
Cálculo
N = g da su b stâ naciprecipitad a
P = g da a m o stra
Re ferê n cai Bib lio grá fic a
JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES.

Compendium of Food Additive Specifications
. Rome , 1992. p. 573.
091/IV Corantes artificiais – De terminação de substância

s insolúve is em água
Material
Estufa, balança analítica, béquer de 250 mL, proveta de 200 mL, placa filtrante e
des secador com sílica g el ou clore to de cá lcio anidro.
Procedim ent
o – E sta b ili
ze a tem p eratu
a rda e s tuaf p a ra 135°C. Pe se 5 g da a m o stra
,
tra n s-fi
ra p a ra um b éq u re de 250 mL, com auxílio de 200 mL de á g ua q u enet (8 0-9 0)°C .
A g ite p a rad iss over
l o co ra net e d e xi e e s fria
r a so lu çã
o à tem p era tu
a ram biente
. Filtre a
so lu ção a travé s
202 - IAL
de uma p la ca filtra net (poro sid a ed 4), pre v ia m e ne ta q u ecid

a a 135°C, por 1 hora,
re s fria d a
em d e s se c ard eo p e s a d.aLave com á g ua fria a té as á g u as de lava g em se to rn arem
incolore s .Se q ue o filtro com o resíd u ,oa q u eaç em e s tuaf a 135°C, re s frei em
d e s se c ard eo p e s e .
Cálculo
N = nº de g de s u b stâ n cia
s insolúve is em á g ua
P = nº de g da a m o stra

specifications for general notices, general analytical techniques,
identifications tests, te st solutions and other re fere n ce m aterials
. Rom e, 1991.
p. 132.
092/IV Corantes artificiais – De terminação de substância

s voláteis a
135°CMaterial
Estu fa, b alanaç analítica , p e s a -filt

ro com tam pa e d e s se c ard com
o sílica g el ou
c lore to d e cá lcio anidro
Procedim ent o – Estabilize a temperatura da estufa para 135°C. Pese 5 g da
amostra em um pesa-filtro com tampa esmerilhada, previamente aquecido em
estufa a 135°C, por 1 hora, re s friaod em d e s se c ard aoté a tem p eratu a ram bientee
p e s a od. Aq u e ça a 135°C, por
12 horas. Resfrie em des secador até à temperatura ambiente e pese. Repita as
operações de aquecim ent o e resfriam en o ta té p e so c on sta n te .
Cálculo
N = p erda de p e so em g
P = nº g da am o stra

specifications for general notices, general analytical techniques, identifications
tests,
IAL - 203
te st solutions and other re feren ce m aterials

. Rom e, 1991. p. 1 31 -13 2.
093/IV Corantes artificiais – De terminação de sulfatos
Material
Mufla ,b a la n ç aa n a lític ap, a p e ld e filtro, fr asco Erlenmeyer de 2 50 mL, proveta

de
1 00 m L, b a lão vo lu m é tric o de 2 00 m L, p ip eat de 1 00 m L, b é q u re de 6 00
m L, proveta de 3 00 mL, pipeta graduada de 20 mL, pipeta graduada de 2 mL e
cadinho
d e p orc e lana.
Rea g e n tes
Clore to de sódio ise not de s u lfa to s

Solução sa tu raad de clore to de
sódioÁcido cloríd rico
Solução de c lore to de bário 0,125 M
Procedim ent o – E s ta b ilize a te m p e ra tu ra d a m uflap a ra50 0°C .Pe s e5 g d a

a m o s tra
e tr a n s fira
p a raum fr a s c oErle n m yee r d e 2 5 0 m L, co m a u x íliod e 1 0 0 mL d e
á g u a .Aq u e ç ae m b a n h o -m a ria a d, ic io n e3 5 g d e c lore to d e sódio, isento de
sulfatos, tampe
o frasco Erlenmeyer e agite em intervalos freqüentes, durante 1 hora. Esfrie,
transfira com auxílio de solução saturada de cloreto de sódio para um balão
volumétrico de
2 00 mL e c o m p leet o vo lu m e. A g ite, d e xi e em re p o u os p or a lg u m sa h o r a .s
Filtre a solução a travé s d e p a p e ld e filtro s e c oe tra n s fira1 00 mL do filtra d o ,
com a u xíliod e um a p ip e ta ,p a ra um b é q u e rd e 6 00 mL, dilua a té 3 00 mL
com á g u a e a c id u lecom ácid o c lo ríd ric o ad , icion and o1 mL e m exc e s o. s
Aq u e ç aa s o lu çã oa té e b u liç ã oe a d i- c io n eum exc e s s od e s o lu çã od e c lore to d e
b ário 0 ,12 5 M, g o ta a g o ta , com a g ita çã o. De ixe re p o u s a ra m istu ras o bre
um a p la c a q u e n ted u ra n te4 h o ra sou d e xi e po r um a n oite à te m p e ra tu ra
a m b ie n te .Se p are p or filtra ç ã oo s u lfa tod e bá rio , lave com á g u a q u e n tee
c a lc in eo p a p e ld e filtro com o re síd u oe m um cadinh opre v ia m e n te a q u e-cid o
e m m ufla a 500°C,re s fr ia d oe m um d e s s e c a d ao té r a te m p e ra tu raa m b ie n tee
p e s a od. L eve o cad inhocom a s u b s tâ n ciaà m ufla a 500°C, po r um a h o ra.
Re s fr iee m d e s s e c a d eo rp e s e .
Cálculo
204 - IAL
N = nº de g de su lfaot de bário
S = nº de g da a m o str
a usa do na precipitaçã o

Mé to dso q u ím ico
p.
410.
094/IV Corantes artificiais – De terminação de cloreto s
Material
Potenciôm ro,et e le rtodo A g+/AgCl, balança analítica, béquer de 4 00 mL, proveta

de
2 00 m L, p ip e at g ra d u aad de 1 mL e b ure ta de 25 m L.
Rea g e n tes
Nitrato de prata 0,1

M Ácido nítrico
Proce dim e nto – Pese 0,5 g da amostra. Transfira p a ar um b é q urede 4 00 m L, c om

a u x íli
o de
2 00 mL de água. Adicione 1 mL de ácido nítrico. Titu el com so lu çã o de n itrato de
p raat 0,1 M.
Cálculo
V = nº de mL de solução de nitrato de p ra at 0,1 M g a sto na titulação

f = fa tor da solução de nitrato de p ra at
0,1 M P = nº de g da a m o stra

specifications for general notices, general analytical techniques,
identifications tests, te st solutions and other re fere n ce m aterials
. Rom e, 1991.
p. 129.
IAL - 205
095/IV Corantes artificiais – De terminação de corante

s subsidiários
C o ra n te
s su b sid iá rio
s são de finido s como a q u e le s c o ra n te
s que s ão os
subprodutos
do proces so de fabricação do corante principal. Qualquer outro corante, que não
o principal
e s e us su b sid iá rio
, ss ão co n sid e ra sd oa d u lte ra nstecu ja pre s e naç é usualm ent
e
d e te ctaad em cromatogramas usados para determinar corantes subsidiários. Os
corantes subsidiários são se p a ra ds o do co ra net principa l por crom a tog raafi
a sc e n d een tem pap el.
Material
Balança analítica, papel Whatman nº 1, sílica gel, balão volumétrico de 100 mL,
cuba crom ato g ráfic
a e m icro ss e rin gs ade 5 ou 10 μL.
Rea g e n tes
Citrato
trissó d ico
n-
Butanol
Álcool
2 -Butanona
Aceto n a
Ácido ac ético glacial
Acetonitrila
Á lcool isoam ílico
Metil etil ce to n a
Fa s es móve is :
1. á g u a -a m ô n ia -citra
o trissó
t d oic (95:5:2)
2. n -b u ta n o l-á g u a -á lc oróxido
o l-h id de am ônio (600:264:135:6)
3. 2 -b u ta n o n a -a ce to n a -á(7:3:3)
gu
4. 2 -b u ta n o n a -a ce to n a -á gróxido
u a -h idde amônio (700:300:300:2)
5. 2 -b u ta n o n a -a ce to n a -á gróxido
u a -h idde amônio (700:160:300:2)
6. n -b u ta n o l-á ocida cé tic
o g la c ia l-á ag u(4:1:5) . A g ite por 2 m inutos, d e xi e s e p a ra
r
a scamadas e use a camada superior como fase móvel
7. a c e to n itrila -á lc
l iso
o o a m ílico -ml eetitil c e to n a -á g u aróxido
-h id de am ônio
(50 :5 0:15 :10 :5 )
Procedim ent
o – Prepare soluções aquosas das amostras a 1% m/v. Dilua em
água de acordo com o limite legal permitido para cada corante. Sobre uma
folha de papel Whatman nº 1 ou sobre a placa de sílica gel no caso do corante
verde sólido, aplique, com uma micros seringa,
2 μL das soluções de corantes a 1% e as respectivas soluções diluídas, conforme o
limite
206 - IAL
legal estabelecido para corantes subsidiários. Desenvolva o cromatograma com o

solvente
a propriado p a ra ca da co ra n te
, conform
e Tabela 4.
Tabela 4 – Altura ou tempo neces sário para o desenvolvimento de corantes em

respectivas fa s se móve is
Fa s e
Corante Altura ou tem po
móve l
Ve rm e lh o40 4 17
B ord e a u xS (Am aranto) 3 cm
17
Az u l-b rilh a n te 4 cm
20 h
Eritro s in a 5 17
Verd e -s ó lid o 7 cm
CCD - s ílic ag e la té o to po d a p la c a
Az u l-in d ig o tin a 3 17
A m are lo - trtra
a z in a 4 cm
12
A m are lo -re
c p ú s c u lo 4 cm
17
Azo rrubina(c a rm o isin a ) 4 cm
17
Az u l- p a te n te 2 cm
17
Po n c e a u4R 3 cm
17
cm
A m ancha do co ra net su b sidiáorida solu ção a 1% d eve s er m enor do q ue a
m ancha prin-
cip al da solu ção diluída.
Re ferê n c ia

, identificatio
n
te sts,te st solutions and other re feren ce m aterials
. Rome, 1991. p.122.

, identificatio
n
te sts,te st solutions and other re fere n ce m aterial
s . Rome , 1992. p. 37, 71,
176, 219, 641,
785, 1051, 1141, 1463, 1482.
096/IV Corantes artificiais – De terminação quantitativa de m isturas de am are lo -

cre- púsculo e bordeaux S
Este método espectrofotométrico é aplicado para determinação das

misturas dos c o ra n te
s artificia is
: am are lo -c
repú scuol e bord e a ux S e b a s e iae-sna
aditividad
e d as a b sorb â n cia
s d os c o ra n te s.
IAL - 207
Material
, pHm etro, e s p e crofotôm
t et
ro UV/VIS, balão volum étric
o de 100
mL, balão volum étric o de 2000 mL e p ip e ta s volum étricas.
Rea g e n tes
Ácido a cé tico
Acetato de amônio 0,02 M – Pese 3,08 g de acetato de amônio e transfira para

balão volumétrico de 2000 mL, dilua com água, acerte o pH da solução para
5,6 com ácido a cé tic
Procedim ent o – Pese uma quantidade adequada da amostra e faça as diluições

neces sárias em a ce taot de amônio 0,02 M, de forma a ob ter leituar n os
com prim ento s de onda d e se ja
- dos. A solução final deverá estar em balão
volumétrico de 100 mL. Para amostras contendo am are lo crep úscul o e bord e a ux
S, fa ça a leituar em 481 nm e 519 nm (As le itu ra
s n e s tecomprimentos
s de onda
correspondem à absorção do amarelo crepúsculo mais a absorção
do bord e a ux S).
Tabela 5 – Va lores de dos corantes amarelo-crepúsculo e bordeaux S, nos comprimentos

de onda 481 e 519 nm
Corante λ (nm)
A m are lo -re
c p ú s c u lo 481 5 33,3
A m are lo -re
c p ú s c u lo 519 3 25,0
B ord e a u xS 481 2 91,3
B ord e a u xS 519 4 38,2
Cálculo
Utilize o va lor de obtidos para estes corantes nos comprimentos de onda de 481 nm
e 519 nm na eq u ação de Lam bert-Be er (Tabela 5).
208 - IAL
Re ferê n cai
b ib lio rgá fic a
YABIKU, H. Y.; MARTINS, M. S .; BRUM, A. M. S. Determ in açã o quantitati

va
de m istu ra s de co ra n te
s artificia is
. Boletim do Instituto Adolfo Lutz, ano 6, n. 1,
p. 1 4 -1 ,9 1996.
097/IV Corantes artificiais – Determinação quantitativa de misturas de

indigotina e bordeaux S
Procedim ent o – Pa ra a m o stra

s contend o indigotin a e bord e a ux S, fa ça as le itu ra
s
d as ab- sorbâncias em 519 nm e 610 nm. (A leitura a 519 nm, corresponderá à
absorção do corante indigotin a m ais a do bord e a ux S e a 610 nm so m e net a do
co ra net indigotina).
Tabela 6 – Va lores de d os c o ra n te
s bord e a ux S e indigotina
, n os com prim ento
s
d e onda 519 e 610 nm
Corante λ (nm)
B ord e a u x 519 438,2
S 610 ------
B ord e a u x 519 060,0
S 610 447,4
Indigotin a
Cálculo
Utilize os va lores de obtidos p a ra e s tes c o ra n te

s n os com prim ento
s de onda de 519 nm
e 610 nm na eq u açã o de Lam bert Be er.
IAL - 209
YABIKU, H. Y.; MARTINS, M. S .; BRUM, A .M. S. Determ in açã o quantitativa

d e m istu ras de c o ra n te
s artific ia is
. Boletim do Instituto Adolfo Lutz, ano 6, n.
1,
p. 1 4 -1 ,9 1996.

tartrazina, bordeaux S e indigotina
Procedim ent o – Pa ra a m o s tras co ntenod tartra zin,ab ord e a ux S e indigotina

, fa ça a
le ituar em
42 6, 519 e 610 nm. Em 426 nm, o c ore a a b sorção da tartra zina m asi bord e a ux S,
em 519 nm
a a b sorção do b ord e a ux m asi indigotin
a e em 610 nm s o m e net a a b s orção da
indigotina.
Tabela 7 – Va lores de dos corantes tartrazina, bordeaux S e indigotina,

nos com prim ento
s de onda 426, 510 e 519 nm
Corante λ (nm)
Tartra z in a 4 26 5 3 4 ,1
Tartra z in a 5 19 ----
Tartra zin a 6 10 ----
B ord e a u x 4 26 1 0 0 ,0
S 5 19 4 3 8 ,2
B ord e a u x 6 10 ----
S 4 26 ----
B ord e a u x 5 19 0 6 0 ,0
S 6 10 4 4 7 ,4
In digotina
In digotina
In digotina
Cálculo
Utilize os va lores de obtidos p a ra e s tes c o ra n te

s n os com prim ento
s de onda de
426,
519 e 610 nm na eq ua ção de Lam bert Be er (Tabela 7).
210 - IAL
YABIKU, H. Y.; MARTINS, M. S .; BRUM, A. M. S. Determ in açã o quantitati

va
de m istu ra s de co ra n te
s artificia is
1,
p. 1 4 -1 ,9 1996.

tartrazina, indigotina e azul brilhante
Procedim ent o – Pa ra m istu ra s contend o tartra zin ,a indigotin a e a zu l-b rilh a n, te

fa ça
a sle itu ra
s da a b so rb â naciem 426, 610 e 630 nm. No com prim ent o de onda 426
nm, o co re
a a b sorção d os c o ra n tes tartra zina e a zu l-b rilh a n, te
em 610 nm a a b s orção da
indigotin a e a zu l-b rilh aen et em 630, a da indigotin a e do azu l-b rilh a n te .
Tabela 8 – Va lores de d os c o ra n te
s tartrazin ,a indigotin
a e azul brilhante
, nos
com prim ento
s de onda 426, 610 e 630 nm.
C orante λ (nm)
Tartra zin a 4 26 5 34 ,1
Ind ig otina 4 26 ------
Ind ig otina 6 10 4 47 ,4
Ind ig otina 6 30 3 57 ,3
Az u l-b rilh a n te 4 26 0 62 ,9
Az u l-b rilh a n te 6 10 10 1 6 ,8
Az u l-b rilh a n te 6 30 16 5 2 ,0
Cálculo
Utilize o va lor de obtido para estes corantes nos comprimentos de onda de

426, 610
e 630 nm na eq u ação de Lam bert-Be er.
IAL - 211
YABIKU, H. Y.; MARTINS, M. S .; BRUM, A .M. S. Determ in açã o quantitativa

d e m istu ras de c o ra n te
s artific ia is
1,
p. 1 4 -1 ,9 1996.

tartrazina e amarelo crepúsculo
Procedim ent o – Para amostras contendo tatrazina e amarelo-crepúsculo, faça a

leitura em
426 e 481 nm, pois n e s tes com prim ento
s de onda o co re a a b s orção d os do si
c o ra n te s .
Tabela 9 – Va lores de dos corantes tartrazina e amarelo-crepúsculo, nos

comprimentos
de onda 426 e 481 nm.
Corante λ (nm)
Tartra z in a 426 53 5
Tartra z in a 481 17 0
A m are lo -re
c p ú s c u lo 426 22 1
A m are lo -re
c p ú s c u lo 481 59 2
Cálculo
Utilize os va lores de obtidos para estes corantes nos comprimentos de onda de

426 e
481 nm na eq u açã o de Lam bert-Be er.
TAKAHASHI, M. Y.; YABIKU, H.Y.; MARSIGLIA, D.A.P. Determinação

quantitativa
de c o ra n te
s artificiasi em alim entos
. São Paulo, Rev. Inst. Adolfo Lutz, v.
48,
p. 7-15, 1988.
212 - IAL
101/IV Teobromina e cafeína – De terminação por crom atografi

a líquida de alta
eficiência
Este método é aplicado para a determinação de teobromina e cafeína em

cacau, produtos de chocolate e aromas à base de cacau. A té cnica utilizada é a
cromatografia líquida de alta eficiência, que separa e quantifica a teobromina e
a cafeína. Estes dois a lc a ló idse s ão s e p a ra ds oem uma colu na de fa se reve r sa
(C18), eluídos com a fase móvel metanol-ácido ac ético-água e detectados por
absorção na região do ultravioleta a 280 nm.
Material
Balança analítica, centrífuga, tubos de c entrífuga de 50 mL, banho-maria,
cromatógrafo líquido de alta eficiência com detector DAD ou ultravioleta,
coluna analítica de o cta d ecilsila,n8o mm x 10 cm, 5 μm (Lichro sp h re 100 R P -
18 ou equiva le n te) , in te gradr,o papel de filtro, nitrogênio para evaporação do
solvente, balões volumétricos de 100, 200 e
1000 mL, funil de vidro, prove tas de 50 mL, b éq u eres de 50 e 250 mL, b a s tõse de
vidro, frascos Erlenmeyer de 250 mL, pipetas volumétricas de 5 mL, pedras de
ebulição e sistema
de filtraçoã de fa se móvel (Millipore ou equiva le n te).
Rea g e n tes
Ácido a cé tico g rau
CLAE Meta n ol g rau
CLAE
Á gua u ltra -p u ra
Pa drõ es a n a líticsode te obrom ina e ca fe ín a
Éter de p etróleo (40 -
6 0)°CAce taot de zinco
Ácido a cé tico 0,1 M
Fe rrocian eto de
p o tá ssio
Solução de C arrez I – Diss ova

l 219 g de a ce taot de zinco em a proxim adam ent
e
500 mL
de água ultra-pura e 30 mL de ácido ac ético 0,1 M. Transfira para um balão
volumétrico de
1000 mL e com plet e o volume com ág ua.
Solução de Carrez II – Dis solva 106 g de ferrocianeto de potás sio em

aproximadamente
500 mL de água ultra-pura, transfira quantitativamente para um balão
volumétrico de
1000 mL e com plet
Fa se móvel – Misture 200 mL de m etanol , 790 mL de ág ua e 10 mL de ácido

a cé tic
o. Ho- m og eneí
ze, filtre a través de m e m b rana
s de 0,45 μm e d e g a se ifiq u e .
IAL - 213
Solução-padrão de teobromina (250 μg/mL) – Pese, com precisão, 50 mg de

teobromina,
dis solva em água e aqueça, se neces sário. Transfira a solução para um balão
volumétrico de
200 mL e complete o volume com água.
So lu çã o -p a dorãde trab alh

o de teo brom ina – Tra n sfir
a 5 mL da so lu çã o -p a do rã
de
teo bro- mina em um balão volumétrico de 100 mL e complete o volume com
água. Filtre com filtros de 0,45 μm.
Solução-padrão de cafeína (500 μg/mL) – Pese com precisão, aproximadamente

100 mg de cafe ín,ad issova
l em água. Tra n sfir
a quantitati
vam ent
e p ara um balão
volum étric
o de 200 mL
e complete o volume com água.
So lu ç ã o -p a dorã
de tra b a lh
o de c a fe ín
a – Tra n s fir
a 5 mL da so lu ç ã o -p a od rã
de ca fe ín
a
p a ra um b a lão volum étric o de 100 mL e co m p leeto volume com á g u a. Filtre com
filtros de 0,45 μm.
Procedim ent o – Pese, com precisão, em um tubo de centrífu g ad e 5 0 m L, c erc a

d e 0 ,5 g
d e a m o s trad e c a c a uou 1 g , s e fo r arom a à b a s ed e c a c a u ou
, 3 g , s e forem
produtos de chocolate (biscoitos, bolos, sorvetes, bebidas lácteas, alimentos
achocolatados, etc). Extraia
a g ordura adicionand o 30 mL de é ter de p e tróleo. A g ite por 2 m inutos.
Centrifugu ea
2000 rpm por 10 minutos e decante o solvente. Repita esta extração com mais
30 mL de éter de petróleo. Evapore o solvente residual (pode-se usar uma
corrente de nitrogênio ou um banho de á gua q ue nte dentro de uma
ca p e laTra
). n sfira quantitati vam ente , o resíd u ocom auxílio de água quente para
um frasco Erlenmeyer de 250 mL contendo várias pedras
de ebulição. Adicione água até um volume aproximado de 50 mL. Aqueça 20
minutos
a 100°C. Transfira quantitativamente para um balão volumétrico de 100 mL.
Esfrie e adicione 5 mL de cada uma das soluções de Carrez I e Carrez II,
complete o volume com água e homogeneíze. Filtre descartando os primeiros
20 mL. Use o filtrado para a análise cromatográfica, filtrando-o previamente
com filtros de 0,45 μm. Ajuste o comprimento
de onda do detector para 280 nm , o fluxo da fase móvel para 1 mL/min e a
temperatura
do forno a 35°C. Injete 20 μL das soluções-padrão de trabalho de teobromina e
cafeína
no cromatógrafo ajustado às condições experimentais estabelecidas. Efetue a
operação em triplicada de cada padrão para verificar a repetitividade. A diferença
não deve ser maior que
2%. In jete 20 μL da a m o str
a em triplicata.
Cálculo
Calcule o teor de teobromina e cafeína na amostra analisada por meio das áreas
dos picos obtidos n os crom atogram as.
214 - IAL
Cp = concen tra oçãdo padrão de te obrom ina

Ca = concentra oçã da
a m o straAa = área do pico
pico do padrã o
Cp = concen tra oçãdo padrão de ca fe ín a

Ca = concentra oçã da
a m o straAa = área do pico
pico do padrã o
YABIKU, H. Y.; KIMURA, I. A. Determinação de teobromina e cafeína em cacau

e produtos de ch oc o laetpor crom ato grafi
a líquida de a lta e ficiê n cia
. Rev. Inst.
Adolfo Lutz,
56(1), p. 5 9 -6 ,4 1996.
102/IV Corantes naturais – Identificação de antocianinas de cascas de uva
Dentre os corantes naturais, as antocianinas (ou enocianinas) são obtidas

a partir dos e x tra to
s de c a s csa de uva. São so lúve is em água e p ertencem à c la ses
de com posto s contendouma e s rtutura b á s ica de 15 átom os de carbono ,
co nh e cidsoco le ti
vam ent e como flavonói- des. Apresentam-se na forma de líquido,
pó ou pasta de cor vermelho-púrpura com odor c a ra c te rístic o.
Material
, b éq u eres de 25 mL, prove ta g rad uaad de 50 mL, b alão
volum étric o de
100 mL.
Rea g e n tes
Solução de hidróxido de sódio – Pese 4,3 g de NaOH, transfira para um balão
volumétrico
de 100 mL e com p leet o volume com água.
IAL - 215
Procedim ent o – Pe se 0,1 g de a m o s tra

, a d ic ioen 50 mL de á g ua e a g ite. Filtre, se
n e c e s s oá rie
a d ic ioen so lu çoã de hidróxido de só do. i A c or ve rm e lh a -p ú rp
a to
u rrn ae-sa zul ou verd e -
e s c u ra .
No ta: outra maneira para identificar antocianinas em cascas de uva é o

aparecimento de um máximo de absorção a 525 nm, na varredura
espectrofotométrica na região do visível de uma solução pre p a raad de a c ordo
com o procedim ent o 0103/IV.
Re ferê n c ia
TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins

alimentícios:
padrõ es de identidad
e e qualidade
, 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.
ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DE NORMAS TÉCNICAS. NBR 13.612: Coletânea de

norm as de c o ra n te
s n atu rasi p a ra fins alim e ntícios
. São Paulo, 1996.
103/IV Corantes naturais – De terminação da intensidad

e de cor em
enocianina
s por esp e ct
rofotom etria
Material
Balança analítica, pHmetro, espectrofotômetro UV/VIS, béqueres de 100 mL,

provetas g ra d u a dsade 50 e 100 mL, b a lõ es volum é trico
s de 100 e 1000 mL.
Rea g e n tes
Ácido cítrico
Fosfato de sódio dibásico
Solução-tampão de ácido cítrico/fosfato de sódio dibásico, pH 3 – Misture

79,45 mL de ácido cítrico 0,1 M e 20,55 mL de fosfato de sódio dibásico 0,2 M
e ajuste o pH a 3 com uma ou outra solu ção. A solu ção 0,1 M de ácido cítrico
dihidratado contém 21,01 g/L d e C6H8O7.2H2O. A solu ção 0,2 M de fo s faot de
sódio d ibá sic
o contém 28,40 g/L de Na2H- PO4 ou 35,6 g/L de Na2HPO4.2H2O.
Procedim ento – Pe s e, com pre c isã,o c erca de 0,1 g de a m o str

a e ad icione a
solução-tam pãpHo 3 a té com p le ta
r 100 mL. A ju ste o zero do e sp e crofotôm
t et
ro,
em unid adse de a b so- rbância a 525 nm, utilizando a solução-tampão como
branco e cubetas de 1 cm. Meça a absorbância (A) da amostra a 525 nm. Caso
a absorbância não esteja entre 0,2 e 0,7, reajuste
a m a sas inicial.
216 - IAL
Cálculo
A = a b so rb â nacia 525 nm
P= m a ssa da a m o stra em g
Re ferê n c ia

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.

. São Paulo, 1996.
104/IV Corantes naturais – Identificaçã

o de carmim de cochonilha
O co ra net carmm i de cochonilh a é a la ca de alumínio ou cálcio-alum oíni

obtido
a p artir do e x traot a q uo os d os co rp so d e s s e c asd od as fê m esa de in s e to s
Da c ty lo psiuc o c c u cs o sat (C o c csu c a cit L). Seu principal constituinte é o ácido
carmínico (ácido 7-beta-d-gluco piranosil-3,5,6,8-tetra-hidroxi-1-metil-9,10-dioxo-
antraceno-2-carboxílico), o qual pode
ser comercializado na forma de solução (corante natural ácido carmínico) ou na
forma de la ca de alumínio ou cálcio-alum oíni(co ranet natural carmm i de
cochonilha) . O co ra n-
te carmim de cochonilha apresenta-se na forma de pó friável, de coloração
vermelha ou ve rm e lh a -e sacuou r solução de co lora çoã ve rm e lh a -v io lá.c eO a
carmm i d eve a pre se n ta r no mínimo 42% de ácido carm ínico , calcu laod em b a se
seca.
Material
Chapa e lé tric,abé qu eres de 25 mL, b a lõ es volum é trico

s de 100 e 1000 mL, pipeat
g ra du -a
da de 1 mL, funil de se p a ra ç ã, pip
o eta g rad uaad de 5 mL e prove ta grad u aad de
500 mL.
Rea g e n tes
Hidróxido de sódio ou hidróxido de p o tá ssio

Cris tasi de ditionito de sódio - Na2S2O4
Ácido sulfúrico
Ácido
clorídrico
Álcool amílico
Éter de
petróleo
IAL - 217
Acetato de uranila
Solução a q u oas de hidróxido de sódio ou hidróxido de p o tá ssi
o a 10%
Solução aquosa de ácido clorídrico a 10% v/v – Dilua 266 mL de HCl com água
em um b alão volum étric o de 1000 mL e com plet e o volum e.
Solução aquosa de acetato de uranila a 5% m/v – Pese 5 g de acetato de uranila,

transfira p a ra um b alão volum étric
o de 100 mL e com p leet o volume com água.
Procedim entos
1 . A lc a linzei leve m e n teum a d is p e rs ãaoq u o s ad a a m o s trap e la a d iç ã od e um a

g o ta
d e s o lu ç ã od e hidróx id o d e só d ioou h idróx id o d e p o tá s s ioa 10% . Fo r m a - s e
um a c o lo ra ç ãvoio le ta .
2. A adição de pequena quantidade de cristais de ditionito de sódio às soluções

da amostra, em m eio ácido, neutro ou alcalino
, não d e s c oar a solução.
3. Leve à secura, em banho-maria, uma pequena quantidade da amostra em

cápsula de porcelana. Esfrie totalmente e trate o resíduo seco com uma ou duas
gotas de ácido sulfúrico concentrado. Não se observa alteração da cor.
4.Transfira uma dispersão aquosa da amostra para um funil de separação, cuja

capacidade s e aj três vezes o volume da d isp e rso.ã Adicione 1/3 do volume
(co resp o n d ene tao da d isp e- rsão) de solução de ácido clorídrico a 10% v/v e
agite. Adicione álcool amílico de maneira a d obrar o volume do conteúd o do
funil de se p a ra çoãe a g ite. De ixe se p a ra r e d e s preze a fa s eaquosa (inferior). Lave a
fase amílica 2 a 4 vezes com água para eliminar resíduos de ácido clorídrico.
Dilua a fase amílica com igual volume de éter de petróleo e agite. Adicione
uma pequena quantidade de água (cerca de 1/6 do volume total). Adicione
gota a gota solução
de a c e taot de uranila a 5%, agitand o a p ós ca da ad ição. Fo rm a e-suma co lo ra çoã
verd e -e sm e raaldc a ra c te rís tic
, naa fa se in ferior.
Re ferê n c ia

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.

. São Paulo, 1996.
218 - IAL
105/IV Corantes naturais – De terminação de ácido carmínico em carmim de

cocho-
nilha
Material
Balança analítica, espectrofotômetro UV/VIS, béqueres de 100 mL, proveta

graduada de
100 mL, b a lõ es volum étrico
s de 200 e 500 mL e pipeat volum étric
a de 10 mL.
Rea g e n tes
Ácido cloríd ric

o2M
Procedim ent o – Dis soval 100 mg do co ra net carmm

i em 30 mL de ácido
clorídrico 2
M em ebulição. Resfrie e transfira quantitativamente para um balão
volumétrico de 1000 mL, complete o volume com água e homogeneíze. Ajuste
o zero do espectrofotômetro, em unidades de absorbância a 494 nm, utilizando
uma solução de ácido clorídrico 2 M como branco e cu b e ta s de 1 cm. Me ça a
a b so rb ânacida a m o str
a a 494 nm.
Cálculo
A = a b so rb â nacida a m o str
a a 494 nm
0,139 = a b so rb â nacido ác. carm ínic
o numa solu ção contend
o 100 m g/1000 mL.
Re ferê n c ia
SUBCOMMITTEE ON CODEX SPECIFICATIONS ET AL. Second Supplement to

the Food Chem ical s Codex, 2nd ed., Washington D. C.: National Academy of
Sciences,
1975. p.1 8 -2 0 .

. São Paulo, 1996.

o de cúrcuma
A cúrcuma ou a ça frão d as Índ ias, é o rizoma da Cúrcuma lo n ga L. d e s s e c ao d
e pulverizado. Apresenta coloração amarelo-castanho ou amarelo-castanho-escura e
tem como
IAL - 219
princípio a tivo principa

l a curcum ina (um co ra net am are lo -a la ra n ja) dcuj
o o te or
g era lm en-
te va ria de 1 a 5% n os produtos vendid so com ercialm ente .
Material
Placa de toque, pipeta graduada de 5 mL, béquer de 25 mL., banho-maria,

papel de filtro, funil de vidro, tubo de ensaio, béquer de 125 mL, proveta
graduada de 50 mL e bastão de vidro.
Rea g e n tes
Ácido sulfúrico
Á lcool
Ácido bórico
Ácid os
ox á licoÁcido
a cé tico
Procedim entos
1. Acidifiqu e levem ent e a a m o stra em pó, com ácido sulfú rico : a p are ce uma
c o lo ra çãve
o rm e lh a -in te n sa .
2. A adição de álcool na a m o str a em pó, e x trai o co ra net am are lo.
3. Ex traai alg um sa g ra m sa da a m o str a com 20 mL de ácido a cé tic o em um
b éq u er de 125 mL. Agite com um bastão de vidro. Filtre para um tubo de
ensaio e coloque em banho ferve n te, por alg uns m inutos. Uma c o lo ra çã o
verm e lh a indica a pre s e naç de cúrcum a.
Re ferê n c ia

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.
TAKAHASHI, M. Y.; INOMATA, E.I.; YABIKU, H. Y.; GIANNATTASIO, C.M.P.

Be t a -croteno
a , urucum e cúrcuma em m a s ssa alim en tícia
s vitam inada
s com ovo s.
Rev. do Inst. Adolfo Lutz, 50(1/2)
, p. 2 5 7 -2 60
, 1990.
107/IV Corantes naturais – De terminação do teor de curcumina na cúrcuma
Material
Balança analítica, chapa elétrica, espectrofotômetro UV/VIS, balão de extração

com fundo chato de 100 mL e junta esm erilh a ,d coa n d ensadr ode b o las de 30 a
40 cm com junta e s- m erilhada
, b éq u er de 25 mL, b a lõ es volum é trico
s de 100 e
250 mL, pip eta volum étric
a de
220 - IAL
20 mL e prove ta g ra d u ad
a de 50 mL.
Rea ge n te
Á lcool
Procedim ento s – Pese, com precisão, cerca de 0,1 g de cúrcuma em pó e pas se

com auxílio
de álcool p ara um fra sco de e x tra çã o. Adicione c erca de 30 mL de álcool e re fluxe
por du as ho-
ras e m eia. E sfrie o fra sco e filtre quantitati
vam ent e p ara um balão volum étrico de
100 mL. Com plet e o volume com álcool. Pip e et 20 mL d e set e x traot p a ra um
b alão volum étric o de
250 mL e com p let e o volume com álcool. A ju ste o zero do e s p e crofotôm
t et
ro, em
unidades
de a b sorb â nacia 425 nm, utilizand o álcool como branco e c u b e ta
s de 1 cm. Me ça
a a b so- rbância da a m o str a a 425 nm.
Cálculo
C alcule o te or de curcum ina usando o va lor de a b sortivid ad

e = 1607.
Re ferê n c ia

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.

. São Paulo, 1996.

o de curcumina
A curcum ina em pó é obtida por e x tra çoã d os rizom as da Cúrcu ma lo n ga L.

com solventes e posterior purificação do extrato por cristalização. Pos sui coloração
de alaranjada
à amarela e deve conter no mínimo 90% de pureza. É insolúvel em água e em
éter e solúvel em álcool e ácido a cé tic
o g la cia l.
Material
Pip e tas g ra d u a dsade 10 mL, béq u er de 25 mL e b a stão de vidro.

Rea g e n tes
Á lcool
IAL - 221
Ácido sulfúrico
Procedim ento
Dis solva a amostra em álcool e observe a cor amarela e a fluoresc ência esverdeada.
Adicione ácido sulfúric
o e ve rifiq ue a form açã
o de in te nas co lo ra çã
o carm esim .

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.
109/IV Corantes naturais – Identificação de curcumina por cromatografia em

camada delgada
Material
Ba la naç a n a lític, ap la csa de c e lu loesm icro c rista lin

a de 0 ,1 m m, câ m aar u ltra v io le, ta
c u ba
d e v idro p a ar cro m a to g ra,fia
prove tas g ra d u a sd ade 1 00 m L, p ip eat g ra d u aadde 1 mL e
b é q ure d e
5 m L.
Rea g e n tes
Álcool a 95%
3 -Me til-1 -b u ta n o l
Fa se móve l: 3 -m e til-1 -b u ta n ol:á lc oo l:á gróxido

u a :h idde amônio (4:4:2:1).
Procedim ent o – Sature a cuba de vidro com a fa se móve l. Pe se 0,01 g da

a m o stra e adicio ne 1 mL de álcool a 95%. Aplique 5 μL da solução da am o str a
na p la ca de c e lu lo sem icro crista lina de 0,1 mm. Coloque a p la ca na cuba de
vidro e d e xi e c o r er c erca de 15 cm . Exam ine à luz do dia e sob luz u ltra v io le:ta
três m ancha s am are las a p are cem entre Rf 0,2 e
0,4, à luz do dia e m ancha s com Rf c erca de 0,6 e 0,8 a p are c em sob luz u ltra v io leta
;
to d as a s
m ancha s apre se n ta m d istin ta
s fluore s c ê n csiaam are las sob luz u ltrav ioleta.
222 - IAL

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.
110/IV Corantes naturais – De terminação do teor de curcumina
Material
, e sp e crofotôm
t et
ro UV/VIS, b a lõ se volum étrico
s de 100 e 200 mL,
pipe-
ta volum étrica de 1 mL, b éq uer de 10 mL.
Rea ge n te
Á lcool
Procedim ent o – Pe s e, com pre c isã,oc erca de 0,08 g da a m o stra

, tra n sfir
a p a ra um
b a- lão volum étric
o de 200 mL, com auxílio de álcool, a g ite p a ra d is sover l e
com ple -
te o volume com o m esmo s o vl e n te. Pip e et 1 mL p a ra um b alão volum étric o
de
100 mL e com p let e o volume com álcool. A ju ste o zero do e s p e crofotôm
t et
ro,
em unidades de absorbância a 425 nm, utilizando álcool como branco e
cubetas de
1 cm. Me ça a a b so rb â nacida a m ostra a 425 nm.
Cálculo
C a lc uel o te or de m a téaric o ra ne tto tal na a m o s tra

, u s a n od o va lor de a b s rotiv id aed =
1607.
Re ferê n c ia

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.

. São Paulo, 1996.
o de urucum lipossolúvel
Ex tra to
s de urucum s ão os produtos o le o sso (urucum lip ossolú
ve l) ou
a lca linso (urucum hidros solúvel) obtidos por remoção da camada externa das
sementes da árvore de urucum (Bixa ore lla na L). Também pode-se encontrar o
pigmento bruto na forma de pó, de
IAL - 223
c o lo ra çã
o ve rm e lh a -e s c,uobtid
ra o p e al e x tra çoã m ecânic
a d as se m e n te. O
s e x traot de
uru-
cum lipos solúvel, de cor vermelha a castanho-avermelhada, contém diversos
componentes colo rido, sse n do o principa l a bixina.
Material
Coluna de vidro de 1 cm de diâmetro e 8 a 10 cm de altura, béqueres de 150

mL, provetas
de 10 mL, p ip e ta
s de 5 m Le e sp e crofotôm
t et
ro UV/VIS.
Rea g e n tes
Ácido sulfúrico
C iclohexano
Clorofórm io, d esid ra taodcom carbonat o de p o tá ssi
o anidro
Alumina p a ra coluna crom ato g ráfica
Tricloreto de
antimônio Sulfato de
sódio anidro Lã de
vidro
Re a tivo de C a rr-Price – Pe se 25 g de triclore to de antim ônio , tra n s fir
a p a ra um
b alão volum étric o de 100 mL e com p let e o volume com c lorofórmo. i De ixe em
re p o uos por um dia, em fra sco bem fech a od e em g e la d e ira. O fra sco não d eve
s er a b erto enquant o a soluçãoe stiver g e la d a .
Procedim ent o – Dis solva uma quantidade da amostra em ciclohexano de

modo a se obter uma co lo ra çã o sem elh a en tà de uma solução de dicrom ato de
p o tá ssi
o a 0,1%. Pre p are um a coluna de 1 cm de diâm et ro e 8 a 10 cm de
altura com e m ulsã o de alum ina em c iclo h e x- a
no e tampão de lã de vidro na extremidade afilada da coluna de vidro. Escoe
lentamente o so vl e n te. Pa s es p e al coluna a solução da a m o str a obtida
anteriorm ente . Lave 3 vezes com 10 mL de ciclohexano sem deixar secar a
coluna. A bixina é fortemente adsorvida pela alumina
na p arte su p e rior da coluna e forma uma zona ve rm e lh o -a la ra najabrilhant
d e (o que
a difere n cia da croce tina)
. Uma zona de cor am are la -p á lid
a m igra a través da coluna
e é elim inada
na lavagem com ciclohexano. Elua a coluna três vezes com 5 mL de clorofórmio.
A zona da bixina adsorvida não é eluída em ciclohexano, éter de petróleo,
clorofórmio, acetona, álcool
e metanol (com os dois últimos solventes, a cor pas sa à laranja). Quando a
última porção for eluída, adicione 1 mL do reativo de Carr-Price. A bixina
adsorvida torna-se imediatamente a z u l-everd
s ea d ,a d ifere n te da crocetina que
fic a ria ve rm elh a.
No ta s
O e x traot de urucum lipossolú vel é insolúvel em água e pouco so lúvel em álcool.
Os e x tra to
s de urucum re a g em em ácido sulfúrico dando co loraçã
o azulada devida
à bixina.
224 - IAL
O e x traot de urucum lipossolú

vel diluido com clorofórmoi a pre se nat a b so rb ânaci
m áxim a
a 439, 470 e 501 nm.
Re ferê n c ia

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.

. São Paulo, 1996.
112/IV Corantes naturais – De terminação do teor de bixina
Material
Balança analítica, espectrofotômetro UV/VIS, béquer de 25 mL, balões

volumétricos de
100 mL, pip eta volum étric
a de 10 mL.
Rea ge n te
Clorofórm io
Procedim ent o – Pe s e, com pre c isã,o a quantidad

e de mg da a m o str a que pode
s er encon- trada p e al fórm ula: m = 0,153, dividida p e al porcen ta gm e de bixina
e s p e ra d, atra n sfir
a p a ra um balão volumétrico de 100 mL com clorofórmio e
complete o volume. Transfira 10 mL d e sat solução p a ra outro b alão volum étric o
de 100 mL e com p leet o volume com c lorofór- mio. Ajuste o zero do
espectrofotômetro, em unidades de absorbância, a 470 nm, utilizando
c lorofórmoi como branco e c u b e ta s de 1 cm. Me ça a ab so rb â nac ida a m o str
a a
470 nm.
Cálculo
Calcule o teor de carotenóides totais expres so em bixina usando o valor de

absortividade
= 2826.
Re ferê n c ia
alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.
IAL - 225

. São Paulo, 1996.

o do urucum hidrossolúvel
O extrato de urucum hidros solúvel, de coloração castanho-avermelhada a

castanho, contém como com ponent e colorido principa
l a norbixina
, produto de
hidró lise da bixina,
na forma de s al de sódio ou p o tá ssi
o.
Material
Coluna de vidro de 1 cm de diâmetro e 8 a 10 cm de altura, béqueres de 150

mL, provetas
de 10 e 100 mL, pipetas de 5 mL, funil de separação de 250 mL, balão
volumétrico de
1000 mL e e s p e crot fotôm et
ro UV/VIS.
Rea g e n tes
Ácido sulfúrico
C iclohexano
Clorofórm io, d esid ra taodcom carbonato de p o tá ssi
o anidro
Alumina p a ra coluna crom ato g ráfica
Triclore to de
antimônioSulfato de
sódio anidro Lã de
vidro
Ácido sulfúric o1M
Re a tivo de C a rr-
Pric e
Procedim ent o – Tra n s fira2 mL ou 2 g d a a m o s trap a raum funil d e s e p a ra ç ãdoe

250
m L. Ad ic io n eá c id os u lfú rico1 M s u fic ie n te p a ras e o b te rum a re a ç ã oforte m e n te
á c id a
(a n o rbix in aé s e p a ra dcom
a opre c ip ita d ove rm e lh o ). Ad ic io n e5 0 mL d e
c ic lo h e x a n o
e a g iteforte m e n teAp. ó s a s e p a ra ç ãdoa sf a s e sd, e s crte
a a a q u o s ae lave a f a s e
c ic lo h-ex â n ic acom á g u aa té elim in a çã od o á c ido. C e n trifu g u ae e m u ls ã oq u e s e
fo rm a ,p o r
1 0 min, a 2 5 00rpm . De c a n tea s o lu ç ã olím pidad e n o rb ix in ae s e q u es o bre
s u lfa to
d e só d ioa n idro. Pre p are um a c o lu n ad e 1 cm d e d iâ m et ro e 8 a 1 0 cm d e a ltu ra
com e m u ls ã od e alum inae m c ic lo h e x a neota m p ãod e lã d e v idro n a e x rte m id a d e
a fila d a
d a co lu n ad e v idro. E s c o ele n ta m e n te
o s o vl e n te .Ad ic io n e3 a 5 mL d a s o lu ç ã o
o btidaa n te rio rm e n te no top o d a c o lu n ad e alum inae pro c e d aco m o d e s c r ito
e m 0111/IV. A n o rb ix in afo rm aum a zo n a ve rm e lh o -a la ra n jan da as u p erfíc ied a
co lu n ae dá a m e s m are a ç ã ocom re a tivo d e C a rrPric - ed a b ix in a .
226 - IAL
No ta s
O e x traot de urucum hidro ss o lú
vel é pouco so lúvel em álcool.
Os extratos de urucum reagem com ácido sulfúrico dando coloração azul-
esverdeada devido
à norbixina.
O e x traot de urucum hidro ss o lú
vel diluído com água a pre s e nat ab so rb â nac i
m áxima a 453
e 483 nm.
Re ferê n c ia

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.

. São Paulo, 1996.
114/IV Corantes naturais – De terminação do teor de norbixina
Material
, e s p e crofotôm
t et
ro UV/VIS, b éq u eres de 25 mL, b a lõ es
volum étrico s de
100, 500 e 1000 mL e pipeat volum étric a de 1 mL.
Rea g e n tes
Hidróxido de potás sio
Solução aquosa de hidróxido de potás sio a 0,5% – Pese 5 g de hidróxido de

potás sio e tra n s fir
o de 1000 mL.
Procedim ent o – Pe s e, com pre c isã,oc erca de 0,1 g do co ra net em pó, tra n sfir
a p a ra
um b a- lão volumétrico de 500 mL com Hidróxido de potás sio 0,5% e complete
o volume. Pipete
1 mL d e sat solução p a ra um b alão volum étric o de 100 mL e com p leet o volume
comHidró- xido de potás sio 0,5%. Ajuste o zero do espectrofotômetro, em
unidades de absorbância a
453 nm, utilizando a solução de Hidróxido de potás sio 0,5% como branco e
cubetas de
1 cm. L e ai em e s p e crot fotôm et
ro a 453 nm.
Cálculo
Calcule o teor de carotenóides totais expres so em norbixina usando o valor de

absortividade
= 3473.
IAL - 227
No ta: p a ra e x pre s s ra o resu ltad

o em bixina, d eve -se m ultiplica
r o te or de norbixin
a
e ncontrad o
p elo fa tor 1,037.
Re ferê n c ia

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.
YABIKU, H. Y.; TAKAHASHI, M. Y. Determ ina çã o de bixina em se m e n stede

urucum :
estu do cola borati
vo. Rev. do Inst. Adolfo Lutz, 52(1/2), p. 3 1 -3 ,6 1992.
115/IV Corantes naturais – Identificação de corante caramelo
E ste m étodo se a p lica à m istu ra

s de aditivos e à b e b id a s.
Material
Ba la n ça analítica , b éq uer de 100 mL, funil, p ap el de filtro, prove ta grad u aad de

10 mL, prove ta g rad uaad de 50 mL com tam pa de vidro esm e rilh ad , atubo de
e n s aoi e p ip e ta s g ra d u sa ddea 2 e 5 mL.
Rea g e n tes
Óxido de m agnésio
Ac e taot neutro de chum bo
Mistu ar de álcool b u tílico -értede p etróleo (1:5)
Re s orcina a 5% em ácido clorídrico , pre p a raad no dia do u so
Procedim ent o – Ad ic io n e1 g d e a c e ta ton e u rto d e chum boe 0 ,5 g d e óx id o

d e m a g- n é s ioa 5 0 mL d a a m o s traeva , p o ra n d oa n te so á lc o o lquandofo r o
c a so. A g itebe m .Filtre , re c o lh ad e 3 0 a 3 5 mL do filtra d oe m um a prove ta com
tam p ad e v idro e s m -erilh a d a Ad . ic io n e1 0 mL d a m is tu raá lc o o l-ér.teA g iteco m
cu id a d o(a brin d ovez p o r o u trao fra s c od) u ra n te5 m inu tos.De ixe e m re p o uo. s
Re tire , com um a p ip e ta ,5 mL
d a c a m a d ae t ére a p a raum tubo d e e n s ao.i Ad ic io n e2 mL d e s o lu ç ã od e
re s orc in a ,d e
ta l m odoq u e e s c o r rpa e la sp are d e sdo tubo a t é o fundo. Na pre s e n ç ad e
c a ra m e lon,a zo n a d e c o n ta tod a sd u a sc a m a d afo
s r m a -sum
e a n e lve rm e lh o.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Norm a s Analíticasdo InstitutoAdolfo Lutz. v.1 :

228 - IAL
Mé t o dsoq u ím icsoe f í s i csop ara a n á lis

e de a lim e n t .o São
s Paulo: IMESP, 3. ed.,
1 9 8 5.
p. 1 1 4 .
116/IV Corante caram el

o pro c e ss
o amônio – De terminação da intensidad
e de
cor
O co ra net c a ram el o obtido p elo pro c e sos amônio é com post o por
s u b stâ n csiare- sultantes do tratamento térmico de carboidratos, em presença de
hidróxido de amônio, por tecn o loga iadeq uada . Apre s e n tae-sna forma de líquido
d en so de c or m arro m -e s cu a r a preta, tendo odor característico de açúcar
queimado e sabor amargo. São solúveis em água, soluções diluídas de álcool,
ácidos minerais, soluções de hidróxido de sódio e insolúveis em álcool absoluto,
acetona, éter de petróleo e clorofórmio. A intensidade de cor é definida como a
a b so rb ânacide uma solu ção a 0,1% m /v, a 610 nm em c u b et a de 1 cm,
c a lcu la d asobre o conteúdo de sólidos. Para o corante caramelo proces so
amônio, esta intensidade de c or d eve e s tar e ntre 0,08 e 0,36.
Material
, e s p e crofotôm
t et
ro UV/VIS, centrífu g, ab éq u er de 50 mL e b a lõ se
volu- m é trico
s de 100 mL.
Procedim ent o – Pese 100 mg a amostra em béquer de 50 mL, dis solva em

água e transfira para um balão volumétrico de 100 mL. Complete o volume e
homogeneíze. Se a solução ficar turva, centrifugue. A solução não pode ser
filtrada. Ajuste o zero do espectrofotômetro, em unidades de absorbância, a 610
nm, utilizando água como branco e cubetas de 1 cm. Me ça a a b so rb ânacida
solução a 610 nm.
Cálculo
A610 = a b so rb â nac de
i solução da a m o str
a a 610 nm.
Re ferê n c ia

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.
ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DE NORMAS TÉCNICAS. NBR 13.660-13.661 : Cole-
tâ n ea de norm as de c o ra n te
s n a turai
s p a ra fins alim entícios
. São Paulo, 1996.
IAL - 229

o pro c e ss
o amônio – De terminação de sólidos
Material
Estuaf a vácuo, m ufla, p e n e ira

s de m alha n° 40 e 60 m e s,hbé qu er de 250 mL,
c á p sual d e porce la n a .
Rea g e n tes
Ácido clorídrico
Are ia pura de quartzo – Utilize are ia pura de quartzo q ue p a ses a través de uma
p en eir
a d e m alha nº 40 m e hs e fique retida na peneira de nº 60. Esta areia é
preparada pela digestão com ácido clorídrico (por exemplo, a 10%) e em
seguida lavada até ficar livre de ácido, seca
e ca lcin ad
a em m ufla a 600°C por 4 h o ra s.
Procedim ent o – Misture 30 g de areia preparada com (1,5 - 2,0)g do corante

caramelo e seque até peso constante a 60°C sob 50 mm/Hg de pres são. Registre
a mas sa final da areia m ais co ra net ca ra m eo.l
Cálculo
Pf = m a ssa final da are ia + c ara m elo

Pa = m a ssa da are ia
Pc = m a ssa do ca ra m e lo
Re ferê n c ia

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.

. São Paulo, 1996.
230 - IAL

o proce sso amônio – De terminação do 4-m etilim ida
zol
(MEI)
Material
Estu fa, cuba crom a tog rá afic com tam pa, p la cas de vidro p a ra
crom a tog ra fia
(20 x 20)cm, balões volumétricos de 10, 100 e 1000 mL, provetas graduadas de
100 mL, nebulizado r, funil de se p a ra çoãde 125 mL, p ip e ta
s volum étrica
s de 5, 25
e 50 mL, b é qu ere s
de 10 e 25 mL, lã de vidro e ro tava por.
Rea g e n tes
Sílica g el GF 254
C elite 545
Clorofórm io
Á lcool
Meta n ol
Ácido sulfúrico
Bicarb onat o de
sódioÉte r
Nitrito de sódio
Ácido sulfanílico
Ácido clorídrico
Carbonato de
sódio
Pa d rão analític o de 4-m etilim idzol a
Ácido sulfúric o 0,025 M
So lu çõ e s-p a dorã
– Pre p are so lu ç õsea q u o ssade 4 -m etilim ida
zol contend
o 100, 200,
300,
400, 500, 600, 700 e 800 m g/Kg.
Hidróxido de sódio 2 M – Pese 90 g de hidróxido de sódio e transfira para um

frasco com rolha de borracha com auxílio de 1000 mL de água isenta de gás
carbônico. Adicione, gota
a gota, solu ção sa tu raad de hidróxido de bário a té não se form ar m ais pre cip itad
o
e a g ite .Conserve o frasco fechado em repouso durante 12 horas. Decante e
transfira o líquido claro p a ra o fra sco de polietilen
o. C onserve protegido contra o
g ás carbônic o do ar.
Solução de bicarbonat o de sódio a 8% m /v – Pe se 8 g de bicarbonat
o de sódio,
tra n s fira
p a ra um b alão volum étric
o de 100 mL e com p leet o volume com água.
Solução de nitrito de sódio a 0,5% m/v – Pese 0,5 g de nitrito de sódio, transfira
para um balão volum étrico de 100 mL e com plete o volume com ág ua.
IAL - 231
Ácido sulfanílico a 0,5% em ácido clorídrico a 2% m/v – Pese 0,5 g de ácido

sulfanílico, tra n s fir
o de 100 mL e com p leet o volume
com solu ção a q u osa
de ácido clorídric o a 2% v /v.
Solução de carbonato de sódio a 20% m/v – Pese 20 g de carbonato de sódio,

transfira para um balão volum étric
Pre p a ra çã
o d as p la c sa – Pre p are p la cas de vidro com uma m istura de sílica g el GF
254 e duas partes de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 8%. Seque as
placas ao ar livre e coloque-as em estufa a 120°C, durante 2 horas. Deixe
saturando na cuba de vidro com o so vl e n te: é te r-crofórm lo io-m etano
l (80:20:20).
Reve la d or – Misture, im ediatam ent

e a n tes de u sar, uma p arte da solu ção de nitrito
de sódio
a 0,5% e uma p arte de solu ção de ácido sulfanílic o a 0,5% em ácido cloríd ricoa
2%.
Ex tra çã
o em coluna de C elite 545 – Coloque um tampão de lã de vidro no
fundo de uma coluna crom a tog rá aficde (25 x 250)m m, com to rn eir a de te flo .n
Sobre a m esm ,a coloqueuma m istura de 3 g de Celite e 2 mL de hidróxido de
sódio 2 M. A coluna d eve fic ar firm e
e uniformemente compactada. Pese 10 g de corante caramelo num béquer e
adicione 6 mL
de solução aquosa de carbonato de sódio a 20%, misturando bem. Adicione 10 g
de Celite, hom ogeneizand o bem. Coloque todo o conteúd o so bre o em pacotam ent o
da coluna. Lim-
pe o béquer com um grama de Celite e transfira para a coluna. Coloque um
tampão de lã
de vidro no topo da mesma. A coluna deve estar firmemente compactada, sem
rachaduras. Elua a coluna com uma m istura de c lorofórm io-álcoo l (80:20) v /v,
com uma va zão de a proxim a dam ent e 5 mL/min a té o b ter 125 mL do eluído.
Se n e ce ss á ,riou se vácuo n e sat o p e ra-ção. Transfira o eluído para um funil de
separação de 125 mL e extraia com 25 mL de ácido sulfurico 0,025 M e depois
com mais 5 mL. Transfira os extratos obtidos para o frasco de um rotavapor e
concentre até 5 mL aproximadamente. Controle a temperatura do banho p a ra
q ue não exc e da 55°C. A p arte final da co ncentraçã o d eve s er cuid ad osam ent e
controla-
da a fim de q ue não ha aj carbo niza o. çã Tra n sfir
a o concentrado p a ra um balão
volum étrico
de 10 mL, lavando o frasco com várias porções de 1 mL de água e complete o
volume. Na hora de ap licar so bre a p la ca, tra et a solução obtida com p eq u e nsa
porç õ es de carbonat o d e sódio sólido a té q ue não dê m ais e ferve s c ê n ac i e a
solução e s teaj alca lina (pH 9).
Procedim en to – Aplique, so bre a placa, 2 μL d as so lu çõe s-p a odrã

de 4-m etilim ida
zol
contendo 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700 e 800 mg/kg. Desenvolva o
cromatograma com
a m istura é te r-clorofórm io-m etanol (80:20:20) a té que o s o vl e n te tenha atingido
a proxim a- damente 15 cm. Retire a placa, seque à temperatura ambiente e
borrife com o revelador. Compare a intensidad e da c or da m ancha am are la -
a la ra n jaad obtida com as m ancha s d os padrões de concentração conhecida. As
manchas permanecem estáveis por 30 min, clareando em se g u id a .
232 - IAL
Cálculo
Quando o limite de 4-metilimidazol é expres so baseando-se na equivalência de

cor,
a concentra oçãé prim eiram ent
e ca lcu laad s o bre o conteúd
o de só lid os Cs, usando-se
a fórm ula:
C1 = quantidad
e de im pureza (MEI) enco n trad
a no produto
Cs = conteúd
o de só lid o s
A se g ur,i c a lc uel o te or de 4 -m etilim ida

zol b a s e aod na eq uiva lên ci
a de c o r:
IC = intensid ad
e de c o r
Cs = conteúd
o de só lid o s
O teor de 4-metilimidazol é expres so em termos de um corante caramelo

(proces sos à base
de amônio) cu ja a b sorb â nacié igual a 0,1.
Re ferê n c ia
s s b ib liorág fic a s

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.
JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES Compen-

dium of Food Additive Specifications
. Rom e, 1992. p. 346, 349.
119/IV Corantecaram e lopro c e s s osulfito/am ônio– De term inaçãoda

intensidaded e co r
O corante caramelo proces so sulfito/amônio é composto de substâncias

obtidas a p artir do tratam ent o térm ico de c a rb o id ra to , sem pre s e naç de
ca ta lisa dr oquím ico co nsti - tuído da m istura de hidróxido de am ônio e dióxido de
e nxo fre, por tecnolo ga iadeq uada. Apresenta-se na forma de pó ou líquido denso
de cor marrom-escura a preta, tendo odor c a ra c te rístic o de a çú car queim ad o e
sa b or am argo.Pa ra o co ra net ca ra m eo l pro c e sos s u lfitoamônio
- , e s at intensid ad
e de
c or d eve e s tar en tre 0,1 e 0,6.
Procedim ent
o – Siga o m esmo procedim ent
o d e sc rit
o em 116/IV.
IAL - 233
Re ferê n c ia

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.
ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DE NORMAS TÉCNICAS. NBR 1 3 .6 6 0 -

13.661: C o le tâ nae de n o rm as de c o r a n te
s n a tu rasi p a ra fins a lim e n tíc io. sSão
Pa u- lo, 19 96 .

o pro c e ss
o sulfito/amôni
o – De terminação de sólidos
Procedim ent
o d e sc rit
o em 117/IV.
Re ferê n c ia

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.

. São Paulo, 1996.
121/IV Corante caram elo pro c e ss

o sulfito/amôni
o – De terminação do 4-
m etilim ida
- zol (MEI)
Procedim ent
o d e sc rit
o em 0118/IV.
Re ferê n c ia

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.
JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITIVES. Compen-

dium of Food Additive Specifications
. Rom e, 1992. p. 346, 349.
122/IV Corantes naturais – Identificação de beta-caroteno
Be ta -croten
a o idêntico ao natural é um c arotenóid
e obtido por sín tees
quím ica. 0,6
μg de b e ta -croten
a o c o r espondm
e a uma unidade internaciona l de vitam ina A.
Apre s e n ta -
se na forma de pós (c ris tas iverm elhsoou pó cristalin)oou su sp e n sã o. Pode s er
adicionado
de antioxidantes permitidos. Os cristais são insolúveis em água, praticamente
insolúveis em álcool e m etanol , m as pouco so lúve is em óleo ve g e ta l.
234 - IAL
Material
Es p e crofotôm
t et
ro UV/VIS, a p arelho m edidor de ponto de fu sã o, b éq ueres de 25
mL
Rea g e n tes
Éter de petróleo
Á lcool
Procedim entos
1. O espectro de absorção da solução da amostra, em éter de petróleo, apresenta

picos de absorção máximo em 475, 448 e 450 nm. Em álcool, apresenta
absorções em 475, 449 e
427 nm.
2. O intervalo de fu são da am o str oC, com decom posiçã

a va ria entre (1 78 -18 4) o.
Re ferê n c ia

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.
ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DE NORMAS TÉCNICAS. NBR 13.669: Coletânea

de norm as de co ra n te
. São Paulo, 1996.
123/IV Carotenóides lipos solúveis (preparações a 30%) – Determinação do
teor de b e ta -ca
roteno
Material
Balança analítica, espectrofotômetro UV/VIS, béquer de 25 mL, balões

volumétricos de
100 mL e pipeat volum étric a de 20 mL.
Rea ge n te
Éter de petróleo
Procedim ent o – Pe s e, com pre c isã,o c erca de 50 mg da a m o stra

, d issova
l em
é ter d e p e tróle o, tra n s fir
o de 100 mL e com p lete o
volume com o mesmo solvente. Transfira uma alíquota de 20 mL para outro
balão volumétrico de 100 mL
e com plet e o volum e. A ju ste o zero do e sp e crofotôm
t et
ro, em unidade
s de
a b so rb ân cia
,a
IAL - 235
448 nm, utilizand o é ter de p etróleo como branco e c u b e ta

s de 1 cm. Me ça a
a b so rb ân cia
da a m o str
a a 448 nm.
No ta: Os e n s a io
s d evem s er fe itos com a m aior ra p idez p o ssí
ve l, evitand o e x p o siçã
o
dem a-s ia da ao ar e à luz. Utilize v id ra ri
a de b a ixa perm e ab ilidade a os ra ios a ctín ic o s.
Cálculo
C alcule a porcen ta gm
e de b e ta -croten
a o usando = 2592.
Re ferê n c ia

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.

. São Paulo, 1996.
124/IV Carotenóides hidromiscíveis (preparações com 10%) – Determinação

do teor de b e ta -ca
roteno
Material
Balança analítica, espectrofotômetro UV/VIS, béquer de 50 mL, funil de separação

de
250 mL, pipeta volumétrica de 20 mL, balões volumétricos de 100 e 5 00 mL,
provetas
de 100 e 200 mL e fra s oc Erle n m yeer de 250 mL.
Rea g e n tes
Éter de p etróleo
Aceto n a
Sulfato de sódio anidro
Procedim ent o – Pese, com precisão, cerca de 70 mg de amostra, transfira para

um balão volum étric o de 500 mL com auxílio de água, d isp e rs e totalm ent
e e
com plet e o volum e. Tra n sfira uma alíquot a de 20 mL p a ra um funil de
se p a ra ç ã, adicion
o e 80 mL de a ce toan e a g ite por 5 min. Adicione 60 mL de é ter
de p etróleo, seg u id o de água p a ra a u x ilia
r a tra n -sferência do pigmento para a
fase de éter. Após a separação das fases, descarte a fase inferior. Lave 3 vezes com
a proxim adam ente 150 mL de ág ua. Re co lha em fra sco Erlenm yeer contendo
sulfato de sódio anidro para retirar gotas de água. Transfira para um balão
volumétrico
236 - IAL
de 100 mL e com p leet o volume com é ter de p etróleo. A ju ste o zero do

e s p e crofotôm
t et
ro
em unidades de absorbância a 448 nm, utilizando éter de petróleo como branco.
Meça a absorbância da amostra em cubeta de 1 cm, a 448 nm.
No ta: os ensaios devem ser realizados com a maior rapidez pos sível, evitando
exposição d em a siaadao ar e à luz. Utilize v id ra ri
a de b a ixa perm eab ilidad
e a os ra ios
a ctin ic os.
Cálculo
C alcule a porcen ta gm
e de b e ta -croten
a o usando = 2592.
Re ferê n c ia

alimentícios:
e e qualidade
. 2. ed., São Paulo, 1987. 114 p.

. São Paulo, 1996.
125/IV Edulcorantes – Determinação de acesulfame-K por cromatografia

líquida de alta eficiência
E s te m étodo é aplicad
o p a ra a dete rm inaçã
o de a c e su lfa mKeem
- a d o ça n te s.
Material
Ba la n ça analítica, crom atógraf

o líquido de a lta e ficiê n acicom d e te ctor de
ultra violeta, colu-
na analítica Lichrospher 100 RP-18 (5μm) ou equivalente, integrador, balões
volumétricos
de 100, 200 e 1000 mL, pip eta de 5 mL, m em brana s filtra n te
s d e scrtáve
a is de 0,45
μm, bom ba de vácuo, siste m a de filtra çã
o da fa se móvel e se rin ag de vidro de 5
mL.
Rea g e n tes
Meta n ol g rau CLAE

Hidrog en osu lfat
o de te trab uti
l amônio -
C16H37NO4S Á gua u ltra -p u ra
Solução–padrã
o e s to qeu de a c e s u lfa mKe–- Pe s e, com pre c isã,o100 mg de
a c e su lfa mKee- transfira para balão volumétrico de 200 mL. Dis solva o acesulfame-K
em água e complete
o volum e.
Solução-padrão de trabalho do acesulfame-K – Pipete 5 mL da solução-estoque
para balão
IAL - 237
volum étric o de 100 mL e com plet e o volume com ág ua. Filtre a través de
m em brana s fil-
trantes de 0,45 μm, antes de injetar no cromatógrafo.
Fa se móve l: m eta n o l-so luoçã
a q u oas de hidrogênio su lfaot de tetrabutilam ôni
o
0,01M
(35:65) – Pese 3,3954 g de hidrogênio sulfato de tetrabutil amônio e transfira
para um balão volumétrico de 1000 mL. Misture 650 mL da solução com 350
mL de metanol, hom ogeneí ze, filtre a través de m e m b rana s de 0,45 μm e
d e g a s e ifiq u e .
Procedim ent o – Pese uma q u a n t id aed de a m o s tar q ue c o n te nah

a prox im a d a m e n te
2,5 mg de acesulfame-K. Dis solva em água e transfira para b a lã ovo lu m é trico
de
1 0 0 m L, co m p le ta n doo volu m eco m á g u a .Filtre a travé s d e m e m b ra n afiltras n te s
de
0 ,4 5 μm, a n te sd e in je ta rno cro m a tó g rao.f A ju s teo com prim en to d e o n d ad o
d e te c to r p a2ra2 7 nm e o fluxo d a f a s emóve l p a ra0 ,6 mL/min.In je te5 μL d a
s o lu ç ã oadrão
-p
de trabalho no cromatógrafo, ajustado às condições experimentais estabelecidas.
Efetue a op era çã o em triplicata p a ra ve rificra a rep etitiv id a .de
A d ifere n ça não d eve
s er su p e rio
ra
2%. In jete 5 μL da a m o str a em triplicata.
Cálculo
Calcule o teor de acesulfame-K na amostra analisada por meio das áreas dos picos
obtidos n os crom atog ram as.
Cp = concen tra oçã do padrão em

m g/mL C a = concen tra oçã da
a m o str
a em m g/mLA a= área do pico
da a m o stra
Ap = área do pico do padrão
H.GROPIETSCH and H.HACHENBERG, Z. Lebensm. Unters. Forsch. 171:41-

43,
1980.
126/IV Edulcorante s – De terminação de aspartame por crom atografi

a líquida
de alta eficiência
Este método é aplicado para a determinação de aspartame, em adoçantes e

refrigerantes.
238 - IAL
Material
, crom atógraf o líquido de a lta e ficiê n acicom d e te cto
r ultra violeta ,
colunaan alític a Lichro sp h re 100 R P-18 (5 μm) ou eq uiva le n te , in tegradr,o b a lõ es
volum étricos
de 100 e 200 mL, pipeta volum étric a de 10 mL, b éq u er de 10 mL, prove tas de
50 e 100 mL, membranas filtrantes descartáveis de 0,45 μm, bomba de vácuo,
pHmetro, sistema de filtra çã o da fa se movel e se rin ag de vidro de 5 mL.
Rea g e n tes
Acetonitril a g rau
CLAE Á gua u ltra -p u ra
Fo s faot de p o tá ssi
o m onobásico
Ácido fo sfó rico
Meta n ol
So lu ç ã o -e stoeq ude a s p artame – Pe s e, com pre c isã,o a proxim adam ent

e 140 mg
de a s p a- rtame, transfira para um balão volumétrico de 100 mL e dis solva em
metanol ou água com auxílio do u ltra -so ,me com p leet o volume com m etano l
ou ág ua. O padrão d eve s er pre- parado m ensalm ente .
So lu çã o -p a dorãde trabalh o de a s p artame – Pip e et 10 mL da so lu ç ã o -e stoe qeu
dilua com á gua p a ra um b alão volum étric o de 100 mL. Pre p are no dia de u so.
Filtre a través de m em- b ra n sa filtra n te s de 0,45 μm, a n tes injetar no
crom atógraf o.
Fase móvel: tampão fosfato pH 3,5-acetonitrila (9:1) – Pese 3,3913 g de fosfato

de potás sio monobásico e transfira para balão volumétrico de 2000 mL, dilua
em água e acerte o pH para 3,5 com ácido fosfórico, homogeneíze e complete
o volume. Misture 1800 mL desta solução-tampão com 200 mL de acetonitrila.
Homogeneíze, filtre através de membranas de
0,45 μm e d e g a se ifiq u e .
Procedim ent o – Ajuste o comprimento de onda do detector para 214 nm e o

fluxo da fase móvel para 1,5 mL/min.
Re fr igra
e n tes – De g a se ifiqe u em u ltra -sm
o e p a ses em m em brana
s filtra n te
s de 0,45
μm. Dilua, em ág ua se n e c e s s áo.ri
Ad o ça net líquido e em pó – Pe se uma quantidad e de am ostr

a q ue contenh
a
a proxim adam en -
te 14 mg de a sp artam e, tra n s fir
o de 100 mL e com p leet
o volume com água. Filtre em membranas filtrantes de 0,45 μm. Injete 5 μL da
solução–padrão
de trabalho no cromatógrafo ajustado às condições experimentais estabelecidas.
Efetue a
IAL - 239
operação em triplicata para verificar a repetitividade. A diferença não deve ser

maior que
2%. In jete 5 μL da a m o str
a em triplicata.
Cálculo
Calcule o teor de edulcorante na amostra analisada por meio das áreas dos picos
obtidas nos crom atog ram as.
Cp = co nce n traçã
o do padrão em
m g/mL Ca = con cen tra oçã da
a m o str
a em m g/mL Aa = área do
pico da am o stra
No ta: este método também pode ser aplicado p a raa d e te rm in a ç ãdoe á c id o s

b e nzóico
e s ó rb ic oe m b e b id a sa, lte ra n d o co m p rim e nto
d e on dap a ra2 3 4 nm e o fluxo
p a ra
2 ,0 mL/minNe s t ec a s o p, e s e1 0 0 m g d o s á c id o sb e nzó ico e sórbico para o
preparo da so lu çã o -p a dorã e sto qeu e pipete 5 mL d e sat solu ção p a ra um balão
volum étric o de 100 mL
e dilua a té o volume com água (so lu çã o -p a do rã de trabalho).
Re ferê n c ia
ABREU, R.W.,; OLIVEIRA, I.R.; ZENEBON, O. Quantificaçã o de a s p artame por

cro- m atog raafi líquida de a lta re so lu çã
o (CLAR) em p ós p a ra o pre p aro de
s o bre m e sa. sRev. Inst. Adolfo Lutz, 53(1/2)
, p. 7 7 -8 ,0 1993.
TYLER, T. A. Liquid Chromatographic Determination of Sodium Sac charin,

Caffeine, A sp artame and Sodium Be nzo a te in Cola Beve ra g e. sJ. As so c. Off. Anal.
Chem. 67(4), p.
7 4 5 -4,71984.
127/IV Edulcorante
s – De terminação de ciclam atos
Fa ça a dete rm inaçã
o conform
e o m étodo 258/IV.
128/IV Edulcorantes – Determinação de esteviosídeo por cromatografia

líquida de alta eficiência
o de e ste v io síd
o eem a d o ça n te s.
240 - IAL
Material
Ba la n ça analítica , crom atógraf o líquido de a lta e ficiê n acicom d e te cto

r de
ultra violeta , colu-
na analítica Lichrospher 100 RP – 18 (5 μm) ou equivalente, integrador, ultra-
som, balões volum é trico s de 100 e 1000 mL, pipeta de 10 mL, m em b rana s
filtra n te
s d e scrtáve
a is d e
0,45 μm, bom ba de vácuo, s e rin ag de vidro de 5 mL e s iste m a de filtra çã
o de fa se
móve l.
Rea g e n tes
Meta n ol g rau
CLAE Hidróxido
de sódio Á gua
u ltra -p u ra
So lu çã o -p a dorã e sto qeu de e s te v io síd

o i – Pe s e, com pre c isã,o 200 mg de
e s te v io s íd
o e transfira para balão volumétrico de 100 mL. Dis solva em água no
ultra-som e complete o volum e. Pre p are o padrão todo m ês.
Solução-padrão de trabalho de esteviosídeo – Pipete 10 mL da solução-estoque

para balão volum étric
o de 100 mL e com p leet o volume com água. Pre p are no dia
do u so.
Fa se móve l: m e tan o l-so luoçã

a q u oas de hidróxido de sódio 5 mM (65:35) – Pe se
0,1125 g
de hidróxido de sódio e transfira para balão volumétrico de 500 mL e complete
o volume com ág ua. Misture 350 mL d e sat solução com 650 mL de m etanol ,
hom ogeneíze, filtre a través de m e m b rana s de 0,45 μm e d e g a se ifiq u e .
Procedim ent o – Pe se uma quantidad e de a m o stra que contenha ,

a proxim adam ente , 20
mg de esteviosídeo. Dis solva em água, tra n sfir a pa ra balão volum étric o de 100 mL
e com ple -
te o volume. Ajuste o comprimento de onda do detector para 2 10 nm e o fluxo
para
1,0 mL/min.Filtre em m em brana s filtra n te
s d e s crtáve
a is de 0,45 μm. Injete 10
μL da solução-padrão de trabalho no crom atógraf o ajustad o às con d içõse
e x p e rim e nstaei s ta b- ele c id a. s Efe tue a o p e ra çoã em trip licat a p a ra ve rificra a
re pe titiv ida .de
A d ifere n ça não d eve
s er m aior que 2%. In je te 10 μL da a m o str a em trip licata.
Cálculo
Calcule o teor de esteviosídeo na amostra analisada por intermédio das áreas dos
picos obtidos n os crom atog ram as.
IAL - 241
Cp = co n ce n traçã
o do padrão em mg/mL
Ca = concentra oçãda a m ostra em m g/mL
Aa = área do pico da am o stra
ALVAREZ, M.; KUSUMOTO, I.T. A n á lise quantitati va d os g lic o síd es o

e d u lco ra nsted a Ste vai reb audian
a e dos seus produtos de hidrólise através da
cromatografia líquida de alta p erform anc e (HPLC). Arq. Biol. Tecnol. 30 (2), p.
337-348, 1987.
129/IV Edulcorante s – De terminação de polióis (manitol e sorbitol) por

crom atogra
- fia líquida de alta eficiência
E s te m étodo é ap licad o p a ra a de term inaçã o de m anitol e sorbito

l em
a d o ça n te. Es s-
tes edulcorantes são separados em uma coluna de divinil estireno amina, eluídos
com água
e d e te c ta ds opor d ifere n ça d os ín d ices de re fra çoã.
Material
Ba la n ça analítica , crom atógraf

o líquido de a lta e ficiê n aci com d e te cto
r de índice
de refra çã ,o coluna an alítica Bio -R ad Am inex HPX-87C – 4,0 x 250 mm ou
eq uiva le n te
, integrador, béquer de 10 mL, balão volumétrico de 50 mL, bastão
de vidro, funil de vidro, membranas filtrantes descartáveis de 0,45 μm, bomba
de vácuo, sistema de filtração da fase móvel e s e rin ag de vidro de 5 mL.
Rea g e n tes
á g ua u ltra -p u ra
So lu çã o -p a dorã de trabalh o de m anitol ou so rb ito l – Inicialm ente, coloq ue

a proxim ada - mente 300 mg de sorbitol em des secador com sílica por 24 horas.
Utilize um pesa-filtro contend o c lore to de cá lcoi anidro no interior da balança
analític a p o r 1 5 m inutosa n te sd e p e s a ro s o rb ito l.Pa r a o m anitol,s e q u e - ao
1 05°C p o r 4 h o ra s .Pe s e ,co m pre c is ã o e, m um b é q u e rd e 1 0 m L, 0 ,2 4 g d e
s o rb itooul m anitol.Tra n s firap a rab a lã ovo lu m é tric o
d e 5 0 m L, d is s oval em á g u ae co m p le teo volu m e .Filtre a travé s d e m e m b ra n a s
filtra n-t e sd e 0 ,4 5 μm, a n t e sd e in je ta rno cro m a tó g rao.f
Fa se móvel – Ág ua u ltra -p u ra
Procedim ento – Ajuste a temperatura da coluna para 65°C e o fluxo da fase
móvel para 0,4
242 - IAL
mL/min, estabilize o detector de índice de refração. Pese uma quantidade de

amostra que
contenh a a proxim adam ent e 0,24 g de so rb ito
l ou de m anitol. Diss ova
l em ág ua
e tra n sfirapara balão volumétrico de 50 mL, completando o volume. Filtre
através de membranas filtrantes de 0,45 μm, antes de injetar no cromatógrafo.
Injete 5 μL da solução-padrão de trab alh o no crom atógraf o ajustad o às con d içõse
e x p e rim e nstaei s ta b e le c id. aEfe
s tue a op e- ra ção em triplicata p a ra ve rifica
r a
re pe titiv ida .deA d ifere n ça não d eve s er m aior que 2%. In je te 5 μL da a m o str a
em triplicata.
Cálculo
C alcule o te or de poliol na a m o str

a a n a lisaad por m eio d as áre as d os p icos obtidos
n o scrom atog ram as.
o do padrão em
a m o str
pico da am o stra
COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX. Food Chem ical s Codex. 4. ed.,

Washingto
n D.C.: National Aca demci Pre s ,s 1996. p. 7 73 -7 7 4 .
130/IV Edulcorantes – Determinação de sacarina por cromatografia líquida

de alta eficiência
o de s a c a rin
a em a d o ça n te s.
Material
Balança analítica, cromatógrafo líquido de alta eficiência com detector

ultravioleta, coluna analítica Lichrospher 100 RP-18 (5 μm) ou equivalente,
integrador, pipeta volumétrica
de 10 mL, béquer de 10 mL, balões volumétricos de 200, 250 e 2000mL ,
provetas de
50 e 100 mL, membranas filtrantes descartáveis de 0,45 μm, bomba de vácuo,
sistema de filtra çã
o da fa se móvel e se rin ag de vidro de 5 mL.
IAL - 243
Reagentes
Acetonitril a g rau
CLAE Á gua u ltra -p u ra
Fo s faot de p o tá ssi
o m onobásico
Ácido fosfórico
So lu çã o -p a dorãe sto qeu de sa c a rin

a – Pe s e, com pre c isã,o100 mg de sa c a rin
a
tra n s fir
a p a rabalão volum étric o de 250 mL e com plet e o volume com ág ua.
Solução-padrão de trabalho de sacarina – Pipete 4 mL da solução-estoque e dilua

com água para balão volumétrico de 200 mL. Filtre através de membranas
filtrantes de 0,45 μm, antes
de in jetar no crom atógraf
o.
Fase móvel: tampão fosfato pH 3,5-acetonitrila (9:1) – Pese 3,3913 g de fosfato

de potás sio monobásico e transfira para balão volumétrico de 2000 mL, dilua
em água e acerte o pH para 3,5 com ácido fosfórico, homogeneíze e complete
o volume. Misture 1800 mL da solução-tampão com 200 mL de acetonitrila,
homogeneíze, filtre através de membranas de
0,45 μm e d e g a se ifiq u e .
Procedim ent o – Ajuste o comprimento de onda do detector para 214 nm e o

fluxo da fase móvel p a ra 0,4 mL/min. Pe se uma quantidad e de amostra que
contenha aproximadamen-
te 1,6 mg de sacarina. Dis solva em água e transfira para balão volumétrico de 2 00
mL. Filtre em membranas filtrantes de 0,45 μm. Injete 5 μL da solução-padrão de
trabalho
no cromatógrafo ajustado às condições experimentais estabelecidas. Efetue a
operação em trip licata p a ra ve rificra a rep etitivid ad
.Ae d ifere n ça não d eve s er m aior
q ue 2%. In jete 5 μL
da a m o str
a em trip licata.
Cálculo
o do padrão em
a m o str
pico da am o stra
244 - IAL
ABREU, R.W., OLIVEIRA, I.R.; ZENEBON, O. Quantificaçã o de a s p artame por

crom a- to g raafi líquida de a lta re so lu çã
o (CLAR) em p ós p a ra o pre p aro de
s o bre m e sa. sRev. Inst. Adolfo Lutz, 53 (1/2), p. 7 7 -8 ,0 1993.
131/IV Edulcorante
s – De terminação de su cra loes por crom atografi
a líquida de
alta eficiência
o da s u c ra loe spura e em
a d o ça n te s.
Material
Ba la n ça analítica, crom atógrafo líquido de a lta e ficiê n aci com d e te cto

r de índice
de refra çã ,o coluna an alític
a (Lichro sp h re 100 R P -18 ou equiva le n te)
, in tegradr,o
m em branasfiltrantes descartáveis de 0,45 μm de diâmetro de poro ou
equivalente, filtros descartáveis
de 0,45 μm de diâm et ro de poro ou eq uiva le n te, bom ba de vácuo p a ra filtra çã o
da fa se mó- vel, balões volumétricos de 25 e 1000 mL, proveta de 200 mL,
seringas de vidro de 5 mL, siste m a de filtra ção de fa se móvel (Millipore ou
eq uiva len te ).
Rea g e n tes
Acetonitrila g rau
CLAE Á gua ultra pura
Pa d rão analític
o de su c ra lo se
Fase móvel – Adicione 150 mL de acetonitrila a 850 mL de água. Homogeneíze,

filtre a través de m em brana
s de 0,45 μm e d e g a s e ifiq u e .
Solução-padrão – Pese, com precisão, 100 mg de sucralose em um balão

volumétrico de
100 mL. Dis sova
l e com p leet o volume com a fa se móve l. Filtre com filtros de
0,45 μm.
Procedim ento – Pese uma quantidade da amostra que contenha

aproximadamente
1 00 mg de sucralose. Transfira para balão volumétrico de 1 00 mL, dis solva e
complete
o volume com a fase móvel. Filtr e com filtros de 0,45 μm. Ajuste o fluxo da
fase móvel p a ra q ue o tem po de re te n çoã da su c ra loe s e s teaj em torno de 9
m inutos (g era lm en
e t1,5 mL/min). Trabalhe em temperatura ambiente. Injete
20 μL do padrão no cromatógrafo ajustado às condições experimentais
estabelecidas. Efetue a operação em triplicada para verificar a repetitividade. A
diferença não deve ser maior que 2%. Injete 20 μL da amostra em trip licata.
IAL - 245
Cálculo
Calcule o teor de edulcorante na amostra analisada por meio das áreas dos picos
obtidos n os crom atog ram as.
o do padrão em
a m o str
pico da am o stra
COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX Food Chem ical s Codex. 4. e d ;

Washingto
n D. C.: National Acad emci Pre s ,s 1996. p. 3 9 8 -3 99 .
132/IV E sp essa nste– Extração de gom as em alimentos
As gomas podem ser identificadas em formulações de aditivos ou em

alimentos nos q uais é perm itid
o s eu u so, com re a ç õse c a ra c te rístic
s ead ifere n tes
re a g e n te s .
Material
Balança semi-analítica, centrífuga, banho-maria, provetas graduadas de 50, 100

e 200 mL, pipeta graduada de 1 mL, béqueres de 100, 250 e 500 mL, balão
volumétrico de 100 mL, tubo de cen trífuag e vidro de reló go.
i
Rea g e n tes
Dioxan
o Álcool
Éte r
Ácido tricloro a cé tico
Clore to de sódio
Solução de ácido tricloro a cé tic

o a 50% m /v – Dis sova
l 50 g de ácido tricloro a cé tic
o
em á gua su fic ie netp a ra 100 mL.
Solução a q u oas sa tu raad de clore to de sódio – Utilize o s o bren ad a nte.

246 - IAL
Procedim ent o – Pe se 50 g da a m o s tr. Ad a ic ioen 1 50 mL de d iox a n ,o c o lo qeu em tu bo

de c e n tri -
fuga e extraia usando centrifugação a 1 8 00 rpm para separar o solvente. Extraia
novamente o resíduo c om 30 mL de é t er, a g ita nod v ig oro s a m e n. teDe c a net o é ter.
Se q ue o re s íd ou em b a n h o -m a. ria Ad i- c io ne 50 mL de á g ua a 8 0 °C. A g ite v ig oro s a m een t
a fim de d is p e rrs ao re s íd o. u Ad ic ioen 20 mL d e ácido tricloroacético a 5 0%. Agite.
Centrifugue a 1 2 00 rpm, durante 10 minutos. Decante a solução a tr vaés de p a p le de
filtro p a ar o u rto tu bo de c e n trifu g ao.ç ãAd ic ioen 1 00 mL de á lc o lo e 1 mL d a s o lu çoã
s a t u r aa dde c lore to de s ó do.i De xi e em re p o uos d u ra net a n o ite. Have n do fo rm a çoãde
pre c-i p ita d,o há pre s e naç de g o m .a De c a n .t e Pu rifiqeu o pre c ip itaod d is s ovel n do
nova m e net em 30 mL d e á g ua a 8 0 °C e re pre c ipeit c om á lc o lo e s o lu çoã s a tu r aadde
c lore to de s ó do.i De c a n ,ted e s rpeze o á lc o o l
e re d is sva o l o pre c ip itaodem á g ua a 8 0 °C, re s f r ,iee u se e sat s o lu çoã p a ar as re a ç õsede
id e n tific ao.ç ã

s e d. São Paulo: IMESP, 1985.
p. 121.
133/IV E sp essa nste– Extração de gom as em form ulaçõe

s de aditivo s
Material
Ba la n ça se m i-a n a lític
, baan ho -m a ria
, prove tas g ra d u a dsade 50, 100 e 200 mL,
pip etag ra d u ada de 1 mL, bé qu er de 500 mL e vidro de reló gio.
Rea g e n tes
Álcool
Clore to de sódio
Solução a q u oas sa tu raad de clore to de sódio – Utilize o s o bren ad a nte.
Procedim ento– Pese 10 g da amostra, aumentando ou diminuindo es sa

quantidade se
o teor de goma for menor ou maior que 1% e dis solva em 100 mL de água a
80°C em um b éq u er de 500 mL. Adicione , com a g ita çã,o1 mL de solução
sa tu raad de clore to de sódio
e 300 mL de álcool. Se houver precipitação, indica a presença de gomas. Deixe
em repouso durante a noite, cobrindo o béquer com vidro de relógio. Decante.
Purifique o precipitado re d iss ovend
l o em 100 mL de á g ua a 80°C, e
re precipitand o com álcool e solu ção sa tu ra d a
de cloreto de sódio como anteriormente. Decante, despreze a fase alcoólica,
redis solva o precipitad
o em ág ua a 80°C, re s frie , e u se e s at solução p a ra as re a ç õse
de identificaçã o.
IAL - 247
134/IV E sp essa nste– Identificaçã

o de goma guar
Material
E sta net p a ra tub os de e n sa io

, tub os de e n sa io
, p ip e ta
s g ra d u a dsade 1 e 5 mL.
Rea g e n tes
Solução de b ó rax a 4% m /v
Solução de ácido tânico a 10% m/m
Procedim entos
1. Em tubos de e n s aoi contend

o a proxim adam ent
e 10 mL do e x traot obtido em
0132/IV
ou 0133/IV ou a 5 mL de uma solu ção a 0,5 % m /v da gom a, adicion e 2 mL de
solução d e bórax. A formação de um gel confirma a presença de goma guar.
2. Adicione 2 mL de solução de ácido tânico a 10% m/v e visualize a formação
de um precipitado.
Re ferê n c ia
GLICKSMAN, M. Gum Technolog

y in the Food Industry. New York: Aca demci
Pre s s ,
1969. 590 p.
KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R.
A n álise de g o m as em aditivos alim enta
re s. Bol. Inst. Adolfo Lutz, São Paulo, ano
13, n. 1,
p. 2 1 -2 ,4 2003.

o de goma carragen
a (m usgo
irlandês)Material
Balança semi-analítica, estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio, pipetas

graduadas de
1 e 5 mL, balão volum étric o de 100 mL e prove ta de 100 mL.
Rea g e n tes
Clore to de bário
Azul de m etileno
Solução a q u oas sa tu raad de clore to de bário – Utilize o
s o bren ada n te.
Solução a q u oas de azul de m etilen o a 0,5% m /v.
248 - IAL
Procedim entos
1. Em tubos de e n s aoi contend o a proxim adam ent

0132/IV
ou 0133/IV ou a 5 mL de uma solução a 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de
solução sa tu raad de clore to de bário. Há a form açã
o de um precipitad o branco
g ela tin oo.s
2. Adicione algumas gotas de azul de metileno a 0,5%.m/v. A precipitação de

fibras coloridas
de púrpura indica a pre se naç de goma c a rra g e n a .
Re ferê n c ia
COMMITEE ON CODEX SPECIFICATIONS. Food Chem ical s Codex. 3. ed;

Washingto n D.C.: National Aca demci Pre s ,s 1981. p. 74.
GLICKSMAN, M. Gum Technolog y in the Food Industry. New York: Aca demci
Pre s s .
1969. 590 p.
re s. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13, n. 1, p.
21-24,
2003.

o de goma arábica
(acácia)Material

, tub os de e n saoi e p ip e ta
Rea g e n tes
Su b -a c e ta
o tde chum bo
Indicado r verm elho cong o
Solução aquosa de sub-acetato de chumbo – Triture 14 g de monóx id o d e

chum bocom
1 0 mL d e á g u a ,tra n s fir pa a raum fr a s c olavan docom m a is1 0 mL d e á g u a .
Dis s ova
l
2 2 g d e a c e ta tod e chum boe m 7 0 mL d e á g u ae a d icio n ee s t as o lu ç ã on a
m istu ra
d e monóxido de chumbo. Agite vigorosamente por cinco minutos. Guarde esta
mistura durante sete dias, agitando freqüentemente. Filtre para um balão
volumétrico de 100 mL, lave o filtrado com água, esfrie e complete o volume
com água recentemente fervida. Dilua
3,25 mL d e sat solução em 100 mL de ág ua re ce n te m eenfervida.
t
Solução a q u oas de indicado

r verm elh
o congo a 0,5% m /v.
IAL - 249
Procedim entos
1. Em tubos de e n s aoi contendo aproxim adam ent e 10 mL do e x traot obtido em

132/IV
ou 133/IV ou a 5 mL de uma solução a 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de
solução de su b -a c e ta
o de
t chum bo. Fo rm a e-sum precip itad
o branco floculento.
2. Adicione alg u m sa g o tas de solu ção de verm elh

o congo. Fo rm a e-sum pre cip itad
o
fino a z u l-e scro.
u
Re ferê n c ia
COMMITEE ON CODEX SPECIFICATIONS Food Chem ical s Codex. 3. ed.,

Washingto
n D.C.: National Aca demci Pre s ,s 1981. p. 7, 561.

Pre s s ,
1969. 590 p.
KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M .S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R. Análi-
se de g o m sa em a d itivos a lim e n ta
re s. Bol. Inst. Adolfo Lutz, a no 13, n. 1, p. 2 1 -2 ,4
2 00 3.

o de alginato de sódio
Material

Rea g e n tes
Ácido sulfúrico
Clore to de cá lcio
Solução de acido sulfúric o4M
Solução de c lore to de cá lcio (CaCl2.2H2O) a 7,5% m /v
Procedim entos
1. Em tubos de e n s aoi contend o a proxim adam ent e 10 mL do e x traot obtido em

132/IV
ou 133/IV ou a 5 mL de uma solução 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL da
solução de c lore to de cá lcio. Fo rm a e-sum g el levem ent
e branco.
2. Adicione 2 mL de solu ção de ácido sulfúric
o. Fo rm a e-sum g e l.
250 - IAL
Re ferê n c ia

Washingto
n D.C.: National Aca demci Pre s ,s 1981. p. 274.

Pre s s ,
1969. 590 p.
KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R. Aná-
lise de g o m sa em aditivos alim enta
re s. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13 ,n. 1, p. 2 1 -
24,
2003.

o de goma Konjak
Material

Rea g e n tes
Solução de hidróxido de p o tá ssi
o a 10% m /v
Procedim entos
1. Em um tubo de e n s aoi contend

o a proxim adam ent
e 10 mL do e x traot obtido
em 132/
IV ou 133/IV ou a 5 mL de uma solução 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de
solução de bórax a 4% m/v. Forma-se um precipitado.
2. Adicione 2 mL de solu ção de hidróxido de p o tá ssi

o. Fo rm a e-sum g el rígido.
Re ferê n c ia

Pre s s ,
1969. 590 p.
21-24,
2003.
IAL - 251

o de a g a r-a g a r
Material

, p ip e ta
Rea g e n tes
Solução de sub-acetato de chumbo, triture 14 g de monóxido de chumbo com

10 mL de água, transfira para um frasco, lavando com mais 10 mL de água.
Dis solva 22 g de acetato
de chum bo em 70 mL de água e adicion e e s at solu ção na m istura de óxido de
chum bo. Agi-
te vigorosamente por 5 minutos. Guarde esta m istu rad u ra n te7 d ia s ,a g ita n d o
fre q ü e n-te m e n teFiltre
. , p a raum b a lã ovo lu m é tric od e 1 0 0 m L, lave o filtra d o
com á g u a ,e s fr ie
e c o m p le teo volu m eco m á g u are c e n te m e nferv te id a .Dilu a 3 ,2 5 mL d e s ta
s o lu ç ã oe m
1 0 0 mL d e á g u are c e n te m e nferv
te id a .
Solução de indicador verm elho congo a 0,5%

m /v. Solução de azul de m etilen
o a 1 % m /v
Procedim entos
1. Em tubos de e n s aoi contend

o a proxim adam ent
132/IV
ou 133/IV ou a 5 mL de uma solução 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de
solução de solução de sub-acetato de chumbo. Forma-se um precipitado floculento
com gel.
2. Adicione alg u m sa g o tas de solução de indicado

r verm elh o -coo.
n g Fo rm a e-s
um precipitad
o fino a z u l-e scro.
u
3. Adicione alg u m sa g o tas de solu ção de azul de m etilen

o a 1% m /v. Fo rm a e-sum
precipitado
de c or púrpura.
Re ferê n c ia

Washingto
Pre s s ,
1969. 590 p.
252 - IAL

21-24,
2003.

o de goma jataí
Material

, p ip e ta
Rea g e n tes
Solução de acetato de chumbo a 20% m/v – Dis solva o sal em água, aqueça até
a ebulição, e s fri
e e utilize a solução s o bren ada n te.
Procedim entos
1. Em tubos de e n s aoi contend o aproxim adam ent e 10 mL do e x traot obtido em

0132/IV
solução de solução de b ó ra x. Fo rm a e-sum g e l.
2. Adicione 2 mL de solu ção de a ce taot de chum bo. Fo rm a e-sum precipitad

o
floculentobranco.
Re ferê n c ia

Pre s s ,
1969. 590 p.
21-24,
2003.

o de carboxim etilcelulose
Material

IAL - 253
Rea g e n tes
Solução a q u oas de su lfaot cúprico a 12,5% m /v
Solução aquosa de acetato de chumbo a 20% m/v – Dis solva o sal em água,
aqueça até a ebulição
, e s frie e utilize a solução so brenad an te.
Procedim entos
1. Em tubos de e n s aoi contendo a proxim adam ent

132/IV
solução de sulfato cúprico. Forma-se um precipitado branco-azulado.
2. Adicione 2 mL de solu ção de a ce taot de chum bo. Fo rm a e-sum g el floculent

o.
Re ferê n c ia

Washingto

Pre s s ,
1969. 590 p.
21-24,
2003.

o de pectina
Material

Rea g e n tes
Solução de c lore to de cá lcio a 7,5% m /v
Solução de acetato de chumbo a 20% m/v – Dis solva o sal em água, aqueça até
a ebulição, e s fri
e e utilize a solução s o bren ada n te.
254 - IAL
Solução sa tu raad de clore to de bário – Utilize o so bren ad an te.
Solução de su lfaot cúprico a 12,5% m /v
Procedim entos
1. Em um tubo de e n s aoi contend o a proxim adam ent

e 10 mL do e x traot obtido
em 132/
IV ou 133/IV ou a 5 mL de uma solução 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de
solução de a c e taot de chum bo. Fo rm a e-sum g e l.
2. Adicione 2 mL de solu ção de c lore to de cá lcio. Fo rm a e-sum g e l.
3. Adicione 2 mL de solu ção sa tu raad de clore to de bário. Fo rm a m e-sp artícu las

flo cu le n taem
s s u s p e n so.ã
4. Adicione 2 mL de solução de sulfato cúprico a 12,5% m/v. Formam-se

partículas brancas em su sp e n sã
o.
Re ferê n c ia

Washingto

Pre s s ,
1969. 590 p.
KIMURA, A. I.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A; MICHELATO, S.R.
21-24,
2003.

o de goma xantana
Material

Rea g e n tes
Solução de sub-acetato de chumbo – Triture 14 g de monóxido de chumbo com

10 mL
de água, transfira para um frasco, lavando com mais 10 mL de água. Dis solva 22
g de
IAL - 255
acetato de chumbo em 70 mL de água e adicione esta solução na mistura de

óxido de
chumbo. Agite vigorosamente por 5 minutos. Guarde esta mistura durante 7
dias, agitando freqüentemente. Filtre, para um balão volumétrico de 100 mL,
lave o filtrado com água, esfrie e complete o volume com água recentemente
fervida. Dilua 3,25 mL desta solução em 100 mL de á g ua re ce n te m eenfervid
t a.
Solução aquosa de acetato de chumbo a 20% m/v – Dis solva o sal em água,
aqueça até a ebulição
, e s frie e utilize a solução so brenad an te.
Procedim entos
1. Em tubos de e n s aoi contend o aproxim adam ent e 10 mL do e x traot obtido em

0132/IV
solução de a c e taot de chum bo. Fo rm a e-sum g el floculent
o.
2. Adicione 2 mL de solu ção de s u b -a c e ta

o de
t chum bo. Fo rm a e-sum g e l.
Re ferê n c ia

Washingto

Pre s s ,
1969. 590 p.
KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M .S.; DIAS, N.A; MICHELATO, S.R. A n á lise
de g o m sa em a d itivos a lim e n re
ta s. Bol. In st. Adolfo Lutz, a no 1 3, n. 1, p. 2 1 -2,4
2 00 3.
144/IV Estabilizante
s – De terminação de fosfatos
, em P2O5, por gravim etria
Em amostras de aditivos contendo tripolifosfatos, hexametafosfatos,

pirofosfatos, e tc,. p o d e e-s fazer a de term inação do te or de fó sforo (em P2O5) por
m eio de técn ica g ra v- im étrica ou colorim étric a (e s p e crofotom
t etri
a na re g ião do
v isve
í l). Quando o te or de P2O5
for su p e rio
r a 50%, re c o m e n d ea -sutilizar o m étodo g ra vim étric
o.
Material
Ba la naç an alítica
, b alanaç se m i-a n a lítica
, ch a pa e lé tric, abom ba p a ar filtra çã
o a vácu o,
e stu fa
, b éq ure es
de 250, 400 e 600 m L, funil de v idro, prove tas g ra d u a sd ade 50, 100 e 250 m L, vidro de
re lóg io
, b a lõ evo
s lu m é t r ic
s ode 5 00 e 1 0 00 m L, f r a soc Er le n myer
e de 5 00 m L, p ip e tsa
vo lu m é t r ic
s de
a 5,
256 - IAL
20 e 25 m L, c a d in oh f ilt r a net de v idro c om c a p a c id ea dde 30 mL e p oro s id aed fina

(n °4 )
e k it a s s oa tde 5 00 m L .
Rea g e n tes
Ácido nítrico
Molibdato de
sódio Ácido cítrico
Quinolina
sin téticaAce to n a
Solução de Quim ocia c – Dis s ova

l 70 g de m olibdat
o de sódio (Na2MoO4.2H2O)
em 150 mL de água (solução A). Dis solva 60 g de ácido cítrico numa mistura
de 85 mL de ácido nítrico e 150 mL de água e deixe esfriar (solução B).
Gradualmente, adicione a solução A na solução B, com agitação, para produzir
a solução C. Dis solva 5 mL de quinolina sintética numa mistura de 35 mL de
ácido nítrico e 100 mL de água (solução D). Gradualmente, adicione a solução
D na solução C, misture bem e deixe em repouso uma noite. Filtre a mistura
recolhendo em um balão volumétrico de 1000 mL, adicione 280 mL de
acetona no filtrado , com plet
e o volume e hom ogeneí ze. Guarde em fra sco de
polietilen
o.
Procedim ent o – Pese, com precisão, 800 mg da amostra num béquer

de 4 00 mL. Adicione 100 mL de água e 25 mL de ácido nítrico e tampe com
um vidro de re ló go. i Ferva por 10 m inutos numa c h a pa e lé tric.a L ave o
vidro de re ló goi reco lh en od a á g ua de lava g em no b é q u er e e s fri
e a so lu ç oã
a té a te m p e ra tu
a ram bien-
te. Tra n s fir
a qu an titavati m e net p a ra um b a lão volu m é trico de 500 mL,
co m ple-
te o volume com água e homogeneíze. Transfira uma alíquota de 20 mL num
frasco Erlenmeyer de 500 mL, adicione 1 00 mL de água e aqueça até a
ebulição. Adicione, com agitação, 50 mL de solução de Quimociac, cubra com
vidro de relógio e ferva por
1 minuto dentro de uma capela. Esfrie até a temperatura ambiente, agitando
de vez em quando, durante o resfriamento. Filtre em um cadinho de vidro de
placa porosa nº 4, previamente tarado a 225°C, e lave o precipitado com 5
porções de 25 mL de água. Seque
na e s tuaf a 225°C por 30 m inutos , e s fri
e e pese.
Cálculo
Cada mg de precipitad
o obtido é eq uiva le net a 32,074 μg de P2O5.
COMMITEE ON CODEX SPECIFICATIONS. Food Chem ical

s Codex. 3. ed.,
IAL - 257
Washingto
s – De terminação de fosfatos
, em P2O5, por
esp e ct
rofotom etria
Material
Espectrofotômetro UV/VIS, balança analítica, banho de areia, béqueres de 50 e

400 mL, tubos de ensaio, balões volumétricos de 10, 100, 250, 500 e 1000 mL,
pipeta graduada de
5 mL e p ip e ta
s volu m étrica
s de 5 e 50 mL.
Re a g en tes
Fo sfaot ácido de
p o tá ssio
Molibdato de
amônio Vanadato de
amônio Ácido nítrico
Ácido sulfúrico
So lu çã o -p a dorãde fo sfaot – Diss ova

l 0,9587 g de fo sfaot ácido de p o tá ssio
(KH2PO4), previamente seco em estufa a 105°C por 1 hora, em água e
transfira para um balão volum étric o de 500 mL e com p leet o volum e. Tra n sfir
a
50 mL p a ra um balão volum étrico
de 250 mL e com p leet o volume com á g ua (1 mL d e sat solução contém 0,2 mg
de P2O5).
Re a g e net e vanado-m olibdat o de am ônio – Diss ova,

l se p a ra d a m en , te20 g de
m olibdat o d e am ônio, (NH4)6Mo7O24.4H2O, em á g ua q ue nte e 1 g de vanadat o
de amônio (NH4VO3) também em á g u aq u e n te filtra , n d os e n e c e s s áo.r iMis ture
a s s o lu ç õ e sa,c id ifiq u com
e
1 4 0 mL d e ácido nítrico e dilua para 1 litro.
Procedim ent o – Em um tubo de e n sa io , p e se uma quantidad e de a m o str

a cu ja
co nce -ntra ção final de P2O5 esteja dentro dos valores da curva-padrão. Adicione 4
gotas de ácido sulfúric o e 2 mL de ácido nítrico. Fa ça um branco d os re a g e n te . s
Aq u e ça em banho de are ia
até completa carbonização da amostra. Faça as diluições neces sárias e transfira
uma alíquota para um balão volumétrico de 10 mL. Adicione 2,5 mL de
vanado-molibdado de amônio em cada balão, complete o volume com água e
espere 10 minuto s . A ju s te o zero do e s p e- ctro fo tôm ero, t e m u n id a d e sd e
a b s o rb â n caia4 2 0 nm, utilizan doum b ra n c oco n te n d o
2 ,5 mL d e va n a d o -m o lib d adtoe am ônioe m 1 0 mL d e á g u a e c u b e ta sd e 1
cm . Deter- mine a absorbância a 420 nm usando o branco dos reagentes e
determine a quantidade de P2O5 c o r espon de nte , utilizando a curva -p a d rã o
prev ia m ene te sta b e le c id a .
258 - IAL
Preparação da curva-padrão – Coloque em uma série de balões volumétricos de

10 mL,
volum es da so lu çã o -p a dorã
eq uiva le net a os va lores entre 0,02 e 0,4 mg de P2O5
em 10 mL. Adicione 2,5 mL de vanado-m olibdat o de amônio em ca da balão,
com plete o volum ecom água e espere 10 minutos. Determine a absorbância a
420 nm usando o branco dos reagentes à temperatura ambiente. Construa o
gráfico concentração de fosfato em mg/10 mL x ab sorb â n cia.

p 33.
s – De terminação de fluoretos em fosfato
s por
potenciom etria
O m étodo d e s t in ae-sà d e te rm in a oçãde flu ore t os em fo s fa to s u tiliza dso

como aditivos p a ra alim e n to, spor p o tencio m eatridire ta, utilizand o e le rodo
t
s e le vo
ti de íon fluoreto. O método baseia-se na destilação prévia do íon
fluoreto na amostra, para eliminar
a matriz interferente, e posterior determinação deste íon por potenciometria
direta, com e le rtodo s e le vo ti de flu ore to. A lg u ns cá tio ns como A l3 +, Fe3 +, Si4+ e
outros poliva le n te sin terferem na d e te rm in a oç ã de flu ore to s, uma vez q ue
form am co m p le xo s. O g rau d e co m p le x a oç ãd e p e ned da c o n s ta ne tde fo rm a ção
do co m p le xo, da c o n c e n tra oç ãdo a g e n-
te complexante, da concentração total do íon fluoreto, do pH e da força iônica
total da solução. Os ânions, de maneira geral, não interferem na resposta do
eletrodo seletivo
de flu ore to, com exc e ç ão do íon hidrox ila. A lg u ns ân ion ,s como 2- ou PO43 -, não
CO3
in terferem
-
dire ta m e netna le ituar do e le rtodo, porém aum enta m a co n c e n tra oç ã
de OH
do meio, tornando as sim neces sária a destilação da amostra. O pH da solução de
leitura também é um parâmetro importante e deve estar entre 5,0 e 5,5, pois
abaixo des se valor
o c o re a fo rm a çã o de HF não d is so c iaode do íon - e, a cima d e ses pH, o c o re a
HF2 in-
-
terferê n cai d e vido ao íon OH . Por es se motivo, é neces sário adicionar tanto aos
padrões
quanto às a m o s tra, s no m om ent o da d e te rm in açã o p o te n cio m é tric a de
flu ore to s, um a alíquota adequada de uma solução de TISAB, a fim de manter a
força iônica elevada, o íon fluoreto livre em solução e o pH da solu ção ajustad o.
Material
Analisador de íons (potenciômetro para uso com eletrodo seletivo), eletrodo

seletivo de fluore to com binado , a gita dro m agnético , b alanaç analítica , m anta
e lé tric
a a q u eced o,rate r- mômetro, suportes, garras, condensador de Liebig, balão
de fundo redondo de 125 mL com sa ída la te ra l (p a ar d estila çã,o along
) a p a ra
d e stila çã, ofunil de se p a ra çoãtipo p ê ra d e
125 mL com h a set alongada , b a lõ es volum é trico
s de 1000, 200, 100 e 50 mL,
p ip e ta
s vo-
IAL - 259
lum étricas
, bé qu eres de polietilen
o.
Lim peza da v id ra ri
a – Pa ra e v itar contam inaçã o da a m o str a e dim inuir o va lor do
branco , o balão de d e stila çã
o d eve p a s sra p elo se g u inet procedim ento de lim pez a:
lave com solução d e hidróxido de sódio a 10%, a quente e enxágüe com água
destilada e deionizada. Coloque no balão 15 a 20 mL de ácido sulfúrico (1:2) e
aqueça até o desprendimento de fumaça (usar a capela). Esfrie, descarte o
ácido, trate o balão novamente com solução de hidróxido de sódio
a 10% e e n x á geü bem com ág ua.
Rea g e n tes
Ácido sulfúrico
Solução de hidróxido de sódio a 10% m /v
Ácido 1,2 -diam inociclohexano-N ,N ,N ’N ’-tetracétic
o - C14H22N2O8.H2O (Titriplex IV)
Solução-padrão estoque de fluoreto 100 mg/L – Pese 221 mg de fluoreto de

sódio anidro, tra n sfir
a p a ra um b alão volum étrico de 1000 mL e com plet
e o
volume com água. Esto q u e s at solução em fra sco de polietilen
o.
So lu çã o -p a dorãe s to qeu interm ediáaride fluore to 10 m g/L – Pre p are, a p artir da

so lu çã opadrã
- o e sto q u,ediluindo com á g ua d e stilaad e d esm in eralizad. Estoq
a eu
em fra sco de po- lie tileno.
Solução de TISAB – Pese 58 g de cloreto de sódio, transfira para um balão

volumétrico de
1000 mL, adicione 57 mL de ácido ac ético glacial, 4 g de titriplex IV, ajuste o pH
desta solu ção a 5 ,0 -55, com solu ção de hidróxido de sódio 5 M e com p leet o
volume com água.
No ta: a á gua utilizad

a p a ra o pre p aro de to d as as so lu ç õsed eve s er d e stilaad e
deionizada.
Procedim ent o – Tr a n s fir 8a g d a a m o s trapre v ia m e n te h o m o g e n e iz a d1a0,m L d e

á c id os u lfú ric oc o n c e n tra d3o0, m L d e á g u ae a lg u m a ps éro la sd e v idro p a raum
b a lã od e d e s- tila ç ã oc o n e c ta dao um c o n d e n s a d od re L ie b ig .Na b o c ad o b a lã o
a d a p teu m a ro lh a p e la q u a l s e in tro d u z um fun il d e s e p a r a ç ã(c o om h a ste
a lo n g a d ap a ra q u e o g o te ja m e n to s e ja le n to e próx im o à s o lu ç ã o )e um
te rm ô m erot, o q u a l d eve e s t a rm e rg u lh a d no a s o lu ço. ã C o lo q u eo b a lã o n a
m a n tad e a q u e c im e n to p a ra faze r a d e s t ila ç ãeo re c o lh ao d e s tila d eo m fr a s c o
p lá s tic
o. Du ra n tea d e s tila ç ã oq,u a n d oa te m p e ra tu ra a tin g ir1 4 0 °C ,a d ic io n e
á g u ale n ta m e n te a t r avé s d o fu nil d e s e p a r a ç ãpoa ram a n te ra te m p e ra tu ra e n tre
1 30e
1 4 0 °C . De s t ile d u ra n te3 h o ra s c o n ta d a sa p artir d o m o m e n toe m q u e a
te m p e ra tu aratin g iu1 4 0 °C ,ou a t é q u e o vo lu m ed o d e s tila d eo s t e japróx im o d e
2 0 0 m L. Tr a n s fir ao d e s tila d qo u a n titava
ti m e n tep a rab a lã ovo lu m é tric od e 2 0 0
m L, c o m p le teo vo lu m ec o m
260 - IAL
á g u ae e m s e g u id traa n s firpa a raum fr a s c od e p o lie tileo.n A ju s t eo a p are lh o

a n a lis a d odre
ío n se , c a lc u leo s lo p d
e o e lero t d o ,c o n fo rm oe re c o m e n d a dnoo m a n u a dl o
fa b r ic a n teEm
. b a lã ovo lu m é trico d e 5 0 m L, p ip e teu m a a líq u o taa d e q u a ddaa
a m o s tr (d
a e ta l fo rm aq u e
a le itu rae s t e jaco m pre e n d id an a c urva -p a d rã oe) 1 5 m L d e TIS A B .C o m p le teo
vo lu m e c o má g u ad e s m in e r a liz a Tr d aa.n s fir pa a rab é q u ree s d e p o lie tileo.n Fa ç a a
le itu r ad a c o n- c e n tr a ç ã om, a n te n d oa s m e s m acso n d iç õ eesx p e rim e n t ad is a c urva -
p a d rão.
Te s t edo e le rod
t o (c á lcu lod o s lo p e–) C a lc u leo s lo p ed a m a n e irare c o m e n d a d a
-
no m anuald o e le rodo. t O s lo p e(ta n g e n ted e c urva lo g [ F ] x E), c o r e s p o n d eà
va ria ç ã o
d o p o te n c ia(E)
l quandoa c o n c e n tra ç ãdo o flu ore to va r ia1 0 veze s .
Curva -p a d rã –o Pip e te ,em b a lõ e svo lu m é tricodse 5 0 m L, a líq u o ta as d e q u a d a s
d a s o lu ç ã o -p a d rã
e soto q u ed e flu ore to. A s c o n c e n tra ç õpod
e s emva ria rd e a c ord o
com
a sensibilidade e a faixa linear de trabalho do equipamento. A cada balão
adicione
15 mL de T ISAB e c o m p leet o vo lu me c om á g ua d e io n iz a d. aTr a n s fair as
s o lu ç õ e padrão
s- para béqueres de polietileno e faça a leitura da concentração,
sob agitação não tu rb u le n ta .
No ta s
As so lu ç õ e s-p aod rã
d evem s er pre p a ra dsano m om ent
o da leitu ra .
Lave o e le rtodo com água entre ca da leitura e e n x á g üoe -com a próxima solu ção a
s er lida.
Cálculo
c = con cen tra oçãde fluore tos na solu ção de leitu ra, em
m g/LV = volume do d estilado , em mL
V1 = volume do b alão de leitu ra, em mL
V2 = alíquota da a m o str
a utilizad a p a ra leitura, em mL
m = m a ssa da a m o stra
, em g
Lim ite de quantificação do equipam ent

o = 0,1 m g/L
Limite de quantificação do método = 5 mg/kg (levando em consideração a
diluição da am o stra )
Re ferê n c ia
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS Official Methods of

Analysi
s of the Associatio n of Official Analytica . 16th, Arlington:
l Chem ists
A.O.A.C.,
1996, ch a p te
r 9. p. 1 1 -1 5 .
IAL - 261

Washingto
n D.C.: National Aca demci Pre s ,s 1996. p. 7 58 -7 6 0 .
s – De terminação de mono e diglicerídio
s e glicerol livre
Os m ono e d ig lic e ríd iossã o fo rm a d o ps o r um a m is tu rad e m ono,di e

tr ié s te
re s
d e g lic ero l co m á c id o sg r axo s c o m e sve tí is . E s te m étodod e te rm in as o m e n teo
te o r d e m o n o é ste r, po d en d o s e r utiliza d o em pro d u to s p uro s ou e m
fo rm u la ç õ e Qu s. and oe s tve i r e m m istu raco m g o m a se s t a sd eve m s e rs e p a r a d a s
p o r filtra ç ã oa n t e sd a e ta p ad a e x tra ço.ã
O princípio do m étodo analític o p a ra determ inaçã o de mono e dig lice rídio

se
g lic e-rol livre e s tá b a se aod n as s e g u in stere a ç õse q uím icas:
O O
\\ \\
H2C -O -C -C H
17 35
H2C -O -C -C H
17 35
H
| | \
H-C-OH + H5IO6 → H-C=O + C=O + HIO 3 + 3H2O
| /
H2C-OH H
monoestearato de glicerila
(e xtraot org ânico)
H2 C-OH H H
| / \
H-C-OH + 2 H5IO6 → C=O + C=O + 2 HIO 3 + 6 H2O
| \ |
H2C-OH H C=O
H
g lic erol (e x traot aq u oso )
Na titulaçã o a co n te ce
m as s e g u in stere a ç õ e s :
H5IO6 + HIO 3 + 12KI + 12CH3COOH → 7I2 + 9H2O + 12CH3COOK
(am o stra)
H5IO6 + 7KI + 7 CH3COOH → 4I2 + 6 H2O + 7 CH3COOK (branco)
2Na2S2O3 + I2 → Na2S4O6 + 2NaI (titulação)

262 - IAL
Material
, b alanaç se m i-a n a lític
, ban
a h o-m aria
, p apel de filtro (se n e c e ssá rio
, )
b éq u e r
de 50 mL, bastão de vidro, proveta de 50 mL, funil de separação tipo pêra de 250
mL, pipetas graduadas de 5, 10 e 20 mL, pipetas volumétricas de 25 ou 50 mL,
frasco Erlenmeyer de
250 mL com tam pa, bure ta de 25 ou 50 mL e funil de vidro, se n e c e s s áo.ri
Reagentes
Tio ssu lfaotde

sódioAcetato de
etila Sulfato de
sódio Ácido
ac ético glacial
Ácido periódic o H5IO6
Iodeto de potás sio
Amido
Solução de Na2S2O3 0,4
M Solução de amido
0,5% m/v
Solução de su lfaot de sódio a 10% m /v – Diss ova

l 100 g de Na2SO4 em á gua
su ficie n te paa1000
r mL.
Solução de ácido a cé tic

o e periódic
o – Dis s ova
l 11 g de ácido periódic
o em 200
mL de á gu a
e com plet
e o volume p a ra 1000 mL com ácido a cé tico.
Solução de iodeto de potás sio a 25% m/v – Dis solva 25 g de KI em água

suficiente para
100 mL.
Procedim ent o -- Pe s e, com pre c isã,oem um b éq u er de 50 mL, c erta quantidad

e de
am o -s
tra calculada de acordo com a seguinte fórmula: mas sa de amostra = 30/% de
monoéster e sp e raodna a m o stra .
Dis s oval a a m o s tracom p e q u e n o svo lu m e sd e a c e ta tod e e tila , tritu ra n d o -a

a p ó s c a d a a d içã oco m b a s tã od e v idro. Tra n s firac a d a um d o s vo lu m e sd o
s o bre n a d a n tep a ra um funil d e s e p a ra ç ã ofiltra
, n d o s e n e c e s s á rioa,té a
d is s o lu ç ãto
o ta ld o s m o n o g lic e ríd io s
e m 5 0 mL d o s o vl e n te .Ex tr a iaco m trê s p orç õ e sd e 1 5 mL d e Na2SO4 a 10%
a g ita n d ov ig oro s a m e n te
a p ó sc a d aa d içã oe c o le teo e x tra toa q u o sod, a ca m a d a
in fe rio rd o funil
d e s e p a ra ç ã em
o , um fr a s c oErle n m yee r d e 2 5 0 mL com ta m pa .Re c e b ao e x tra to
e m a c e ta tod e e tilad a c a m a d as u p e rior, e m o utro fr a s c oErle n m yeer. L ave o funil
d e s e p a ra ç ã o
IAL - 263
com d u a sp orç õ e sd e 5 mL d e á c id oa c é tic ore , c e b e n d o -no

a s fr a s c oErle n m yee r
com
o e x tra toe m a c e ta tod e e tila .Pre p are um a prova em branco com 50 mL de
acetato de etila e 10 mL de ácido ac ético em um terceiro frasco Erle n m yeer.
Ad ic io n e 5 0 mL d e s o lu ç ã o d e á c id o a c é tic o -p e rió d icnoo s trê s fr a s c o s
Erle n m yeer, ta m p e -o as ,g it e - obse m
e c o lo q u e -oesm b a n h o -m a ria p o r 4 5 m inu tosno e s c uro , e m te m p e ra tu ra n ão
s u p e rio r
a 50 °C.Ap ó s e s t ete m po ,re tire o s re s p e cvoti s fr a s c odo
s b a n h o -m a ria a d, ic io n e1 0
mL
d e s o lu ç ã od e KI a 25% e m c a d aum e titu le -ocom s s o lu ç ã od e Na2S2O3 0 ,4 M,
u s a n d oam idocom oin d ica do r.
No ta: no caso de se usar 25 mL de solução de ácido ac ético-periódico e titular

com bureta
de 25 mL, utilize m eta de da m a sas ca lcu laad acim a.
Cálculo
No ta: utilize os fatores 2,68 e 2,99, para expres sar o resultado, respectivamente,
em
α-m onoacetat o de g lic e ril
a e α-m o n o este a orade
t sorb itana
No ta: utilize os fatores 1,52 e 1,21, para expres sar o resultado, respectivamente,
em propilenoglico l livre e so rb ito
l livre
B= mL de Na2S2O3 0,4 M, g a s to s na prova em branco.

A= mL de Na2S2O3 0,4 M, g a s to s na titulaçã
o da a m o stra
f = fa tor da solução de Na2S2O3 0,4 M
P= mas sa da amostra

CRAM, D.J.; HAMMOND, G.S. Organic Chemistry, Mc Gra w H- ill Book
Company
Inc. 1964. p. 5 4 6 -54 7.
148/IV Realçador de sabor – Identificação de glutamato de sódio

Material
Pipeta de 1 mL, proveta de 50 mL, béquer de 100 mL, banho-maria, balança

analítica e balão volum étric
o de 100 mL.
264 - IAL
Rea g e n tes
Ninidrina (tricetohidrindeno hidratado) – Dis solva 200 mg de tricetohidrindeno

hidratado
(C9H4O3 H2O) em á g ua a té 100 mL. Pre p are a solu ção no dia
do u so. Ac e taot de sódio
Procedim ento – A 1 mL da solu ção aq u oas da a m ostr

a diluída em 1:30 (em
glutam at
o d e sódio), adicione 1 mL de ninidrina e 100 mg de acetato de sódio
e aqueça em banho-maria por 10 min. Uma in tenas c or v io leat a zu lad a é
form ada.
COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX. Food Chem ical s Codex. 4.

ed., Washingto
n D.C.: National Acad emci Pre s ,s 1996. p. 260.
149/IV Identificaçã
o de brom atos pelo método direto
O bromato é identificado direta ou indiretamente em preparados para

produtos de p anificação
, m elhorado res de farinha ou o u tras fo rm u laçõe
s de aditivos
p a ra panificaçã
o.
Material
Ba la n ça se m i-a n a lític
, agitad
a ro m agnético
, b a rra m ag né tica
, ro tavapor, p la c sa p a ra
crom a- tografia em camada delgada de sílica gel 60G, papel de filtro qualitativo,
béqueres de 100,
250 e 1000 mL, bastão de vidro, funil de vidro, provetas de 25, 50 e 200 mL,
tubo capilar
de vidro p a ra crom atog rafia , cuba de vidro p a ra crom a tog raafie pulve riza dr.o
Rea g e n tes
Butanol
Propano
l Álcool
Orto-tolidina
Sulfato de zinco
Ácido cloríd rico
Hidróxido de
sódio
Brom ato de p o tá ssio
Solução de brom ato de p o tá ssi
o a 1% m /v.
IAL - 265
Solução de orto-tolid in
a a 0,02% em álcool
Solução de ácido clorídrico em álcool na proporção 25:65
Solução de su lfaot de zinco 20
g/L.Solução de hidróxido de sódio
0,4 M
A ntiespum ante
: por exem plo, dim etil silic on e
Procedim ent o - Para amostras sólidas ou em pastas, siga o procedimento: transfira

200 mL
da solução de su lfaot de zinco 20 g/L p a ra um béq u er de 1000 mL. A g ite em
a g ita dor m a g- n é tico c om ve lo c id ae dc o n s ta n. teAd ic ioen a prox im a d a m e n50 t g da
a m o s tra
, m a n te noda a g ita ço.ã Ad ic ioen 50 mL da s o lu çoã de h idróx ido de s ó doi 0 ,4 M.
C o n tineu a g ita nodp or m asi 15 m in u to sFiltre . em p a p le de filtro q u a litavo. ti C o n c e nret
o filtraod em ro tava p or c om te m p e raatunrão s u p e r io r
a 7 0 °C. Ad ic io n, ese n e c e s s á, ruioma g o at de a n tie s p u m ea ao n t filtrao.
d Re d uaz a té um
vo lu me in fe-rior a 50 m L. Ap liq ue o c o n c e n tra, dpoa ra le la mee ao n t p a d rã, oem p la ac de
c a m aad d e lg aadde s ílic a
gel 60 G, numa cuba previamente saturada com a fase móvel butanol-propanol-água na
proporção
de 1 :3 :1. Reve el o cro m a to g raa ms e q ü e n c ia lme ecnom t a s o lu çoã de o -to lidaina 0 ,0 2% e
á c ido c lo rí-d rico em á lc o lona pro p orç ão de 2 5 :6 .5Na pre s e naçde bro m aot a p are c eár u ma
m a n cah a m are al e m
Rf 0 ,6 4, a prox im a d a m e.nPa tera a m o s tr
s alíq u id a, sa p liqeu d ire ta m een na
t p la ac de c a m aad
d e lg a d a
e pro c e ad c o mo d e s c roita c im a .
YABIKU, H.Y.; KIMURA, I.A.; DIAS, N. A.; MARSIGLIA, D.A.P.; ZENEBON,

O. Brom ato de p o tá ssi
o em farinha de trigo e m elhorado res de panificaçã
o.
Bol. Inst.Adolfo Lutz, São Paulo, ano 6, n. 1, p. 4-6, 1996.
1 5 0 /IV Id e n tific a oç ãde bro m a to

s p e ol m é to d
o indire to c om o re a tvo
i fu c s in a -
b is s u lfito
Após a incineração da amostra, é realizada a identificação do brometo

formado pela decom p osiçã
o té rm ica do brom ato.
Material
Balança semi-analítica, mufla, cápsula de porcelana, béquer de 50 mL, bastão de

vidro, p ip e ta
s g ra d u a dsade 1 e 5 mL e a g ita do
r m agnétic
o com b a rra m agnética
Rea g e n tes
Á gua
ox ig e n a d a
Ácido sulfúrico
Fu csin a
266 - IAL
Ácido sulfúric o 10% m /v

Á gua ox ig e n aad 30% m /v
Solução de brom eto de p o tá ssi
o a 1% m /v
Solução descorada de fucsina a 0,1% m/v – Dis solva 0,1 g de fucsina em

pequenas porções
de ág ua, tritu ra n dao-com b a stão de vidro, a té atingir 100 mL. Adicione , com
a g ita çã o , b issuo lfit
de sódio em pó a té d e s c o ra
r totalm ent
e a solu ção. C aso a
solução não d e sc roe totalmente, filtre em papel de filtro contendo carvão
ativado.
Procedim ent o – Incinere, a proxim adam ente , 50 g de a m ostr a em uma cá p sual

de porc e- lana em m ufla a 550°C. Diss ova l as c in zas obtid as em volume de ácido
sulfúric o a 10% m /v su ficie netp a ra sua dissolu ção , agitando com b a stão de vidro.
Filtre, se n e c e s s áo.ri Em seguida, adicione 2 mL de água oxigenada a 30% e 3
mL do reativo fucsina-bis sulfito. Agite
e aguarde aproximadamente 5 minutos. O aparecimento de coloração lilás
persistente, que pode aparecer em até 24 horas, indica a presença de brometos
formados pela decomposição té rm ica do brom ato. Fa ça p a ra le la m een tuma
prova em branco com á g ua e uma prova com
o padrão de brom eto de p o tá ssi o a 1%.
YABIKU, H.Y.; KIMURA, I.A.; DIAS, N. A.; MARSIGLIA, D.A.P.; ZENEBON, O.

Brom ato de p o tá ssi
o. Bol.
Inst. Adolfo Lutz, São Paulo, ano 6, n. 1, p. 4 -6, 1996.
151/IV Identificação de bromatos por método indireto com fluoresceína
Material
Balança semi-analítica, mufla, estufa, cápsula de porcelana, placas para

cromatografia em camada delgada de sílica gel 60 G, papel de filtro qualitativo,
béqueres de 100 e 250 mL, bastão de vidro, funil de vidro, provetas de 25, 50 e
200 mL, tubo capilar de vidro para crom atografia , cuba de vidro p a ra
crom a tog raafie pulve riza dr.o
Rea g e n tes
Fa se móve l: b u ta n o l-a ce to n aróxido
-h id de amônio (1:3:1)
Solução de ácido a cé tic o g la c ia- lág ua ox ig e n aad a 30% (10:1), recém pre p a ra d a
So lu çã o -p a dorãde brom eto de p o tá ssi
o a 1% m /v
Solução alcoólic a de fluore s c e ín
a a 0,01% m /v – Dis s ova
l 0,01g de fluore sc e ín
a em
álcool
a 50% a té com pleta r 100 mL.
IAL - 267
Procedim enot – Incinere, aproximadamente, 50 g da amostra em uma cápsula

de
porcelana. Dis solva as cinzas em 10 mL de água. Filtr e ou transfira o
sobrenadante para outra cápsula de porcelana, reservando alguns mL para a
cromatografia em camada delgada. Adicione uma gota de solução de
fluoresceína a 0,0 1%, seguida
de u ma g o ta da m is tuar de á c ido a c é tic o g la c ia
l em á g ua ox ig e n aad e
eva p ore e m banho-maria até à secura. Faça, paralelamente, uma prova em
branco utilizando á g u a. O a p are c im e not de uma c o lo r a çoã ró s ea p e r s is t een t
p o de in d ic ar a pre s e n ç a
de brometos. Para confirmação, aplique a porção restante do sobrenadante em
placa
de c a m a da d e lg a ad de s ílica g el 60 G c om a f a se móvel b u ta n o l-a c e to n a -
h idróx id o
de am ônio (1 :3 :1,) c o r e n do p a ra le la m eenot p a d rão de bro m e ot de p o t á s so i a
1% . Revele com a mistura de partes iguais das soluções de fluoresceína a
0,0 1% e ácido ac ético em água oxigenada. Coloque em estufa a 1 0 5°C, até
o aparecimento de m a n c h a. sNa pre s e naç de bro m e ot a p are c eár u ma m a n c ha
ró s ea em Rf aproximado
de 0 ,6 5, a q u al p o de a p are c er em a té 24 h o r a s .
YABIKU, H.Y.; KIMURA, I.A.; DIAS, N. A.; MARSIGLIA, D.A.P.; ZENEBON, O.

Brom ato de p o tá ssi
o. Bol.
Inst. Adolfo Lutz, São Paulo, ano 6, n. 1, p. 4 -6, 1996.
152/IV Determinação de arsênio em aditivos
O método baseia-se, fundamentalmente, na liberação de arsina (um gás

de odor d e sa g ra vel
d á e x rtem am ent e ven en o so ) a qual é a b sorvida em uma
solução de dietilditio - carb am at o de p ra ta, form and o um com p le xo de c or
verm e lha , cuja intensid ad e pode s e r estim aad a olho nu ou
e s p e crofotom
t etricam e.nte
As re a ç õse e nvo lv id sa sã o :
A s+5 + Sn+2 → A s+3 + Sn+4 (redução do A s+5 → A s+ 3)

Zn0 + 2H+ → Zn+2 + H → (produção de com ad ição de zinco m etálico)
H 2 2
2 A s+3 + 3 2 →2 AsH3 (form açã o de a rsin a )
H
AsH3 + 6 (C2H5)2NCSSAg → 6 Ag + 3 (C2H5)2NCSSH + [(C2H5)2NCSS]3As
(com p lexo verm e lho)
Os metais ou sais de m e ta is ,a s e g u ir m e n c io n a d o s, in terfere m n a
lib e ra ç ã od a a r s in a :crom o, c o b a lto ,c o bre , m erc ú rio , m olibdênio,n íqu e l,
p a lá d ioe p ra ta .O a n- tim ônio,q u e fo rm aa e s tib in a(SbH , 3
) é o e le m e n toq u e
p o d e pro d u zirin terferê n c iap o s itiva , p orq u e dá c o r co m o d ie tild itio c a rb a m a to
d e p ra ta .A e s tib in afo rm aum com- p lexo q u e te m m áxim od e a b s orç ã o a 5 1 0
nm ; e n tre 5 3 5 e 5 4 0 nm, a a b s o rb â n c diae s t e
268 - IAL
co m p le xo é dim inuídad e ta l m a n e iraq u e o s re s u lta d odse d o s a g e mdo a rs ê n io

n ão
s ã o a lte ra d odse um a m a n e iras ig n ific ava
ti . Po r o utro la d o ,o antim ônioé
ig u a lm e n tetóx ic oe in d e s e ve
já l.
Material
Algodão hidrófilo, balança semi-analítica, aparelho para determinação de

arsênio, frasco Erle nm yeer de 500 mL com junta esm e rilh a d24/40, b éq u eres de
10, 50, 150 e 600 mL, prove tas g ra d u a dsade 100 mL, prove tas g ra d u a dsade
100 mL com tam pa, p ip e ta s grad u- adas de 1, 2, 5 e 10 mL, pipetas
volumétricas de 3, 5 e 10 mL, balões volumétricos de 100
e 1000 mL e fra sco Kjeldah l de 800 mL.
Rea g e n tes
Ácido sulfúrico
Á gua ox ig e n aad a
30% Ácido cloríd rico
Cloreto estanoso
Iodeto de
potás sio Ac e taot
de chum bo
Piridina
Dietilditiocarbamato de prata
Trióxido de arsênio
Zinco granulado isento de arsênio
IAL - 269
Figura 2 - Ap arelho p a ra de term inaçã

o de a rsê n io
So lu çã o -p a dorãe sto qeu de a rsê noi – Pe s e, com pre c isã,o0,132 g de trióxido de

a rsê n iofinamente pulverizado e seco. Dis solva em 5 mL de solução (1:5) de
NaOH. Neutralize
a solução com ácido sulfúrico a 10% e adicione um exces so de 10 mL. Transfira
para um balão volum étric o de 1 L e com plet e o volume com água re ce n te m een t
fervid a.
So lu çã o -p a dorãde trab alh o de a rsê noi – No dia do u so, pip ete 10 mL da

so lu çã o -p a d rãe osto qeu de a rsê noi p a ra um balão volum étric
o de 1000 mL,
adicione 10 mL de ácido sulfú- rico a 10% e com plet e o volume com água
re ce ntem en e tfervida. Esta solução contém 1 μg d e arsênio por mL. Conserve-a
por até três dias.
Solução de dietilditiocarbam
o at
de p ra at 0,5% em piridina – Pe se 0,5 g de
AgSCSN(CH)
2 5 2
270 - IAL
em um balão âmbar de 100 mL. Adicione piridina para dis solver e complete o
volume.
C onserve e s at solu ção a té um m ês, em fra sco âm bar.
Solução de ácido sulfúrico a 10% m /v – Dilua, com as pre c a u çõsehabituais

, 57
mL d e ácido sulfúric
o a 1000 mL com ág ua.
Solução de clore to e sta n oos em ácido cloríd ric

o - Dis s ova
l 40 g de SnCl2.2H2O
em 100 mL de ácido clorídric o conce ntrad
o. C onserve e s at solução a té três m e se, s
em fra sco d e vidro.
Solução de iodeto de potássi

o a 15% m /v - Dissova
l 15 g de iodeto de potássi
o em
100 mL de água.
Algodão contend o a ce taot de chum bo – Em beba o algodão hidrófilo em uma

solução sa tu- rada de acetato de chumbo. Extraia o exces so de solução e seque
sobre vidro à temperatura am biente.
Procedim ent o – In s tael o a p arelho conform e a Figura 2. Introduza no tubo de

absorção, com auxílio de pinça, três tampões de algodão nesta ordem: um
hidrófilo, um embebido em solução saturada de acetato de chumbo e outro
hidrófilo. Dependendo da natureza
da a m ostra , siga um d os se g u in ste proced im e nto : sno c a so de su b s tâ n csia
o rg â n ica
s que,em meio clorídrico turvam, existe a neces sidade da mineralização
por via úmida; em caso contrári o (por e x. ácido cítrico, ácido láctico, ácido
a cé tico
, citrato de cá lcio, e tc), a m ine- ralização não é neces sária. Em presença de
sais de ferro (por ex. pirofosfato de ferro, citrato fé rrico am oniacal , s a c a raot de
fe r o, e tc) adicion e 1 g de ácido a scó rb oic à solução de d o sa- gem. O ácido
a scó rb oic re d uz e com plex a o fe r o q ue interfere na lib eraçoã da a rsin .a Pa ra
matérias-primas solúveis em meio clorídrico, calcule a mas sa neces sária para
comparação com um padrão conhecido de arsênio e dis solva de maneira a se
obter sempre um volume final de (35 + 2) mL.
Min era liza çã o por v ia úm ida – Numa prove ta com tam pa, ad icion e 30 mL de
á g ua ox ig e-nada e 7 mL de ácido sulfúric o. Hom oge ne zeí e d e xi e em rep o uos uma
noite. Pe se a m a ss a
de a m o stra n e c e s sáa ri(No ta 3) e transfira para o frasco Kjeldahl com auxílio da
mistura: água oxigenada/ácido sulfúrico. Aqueça até que toda a água oxigenada
seja consumida (agite, de vez em quando). Esfrie. Caso a solução ainda esteja
escura, adicione mais água oxigenada
e a q u eaç novam ente . Quando houver forte d e s prendim ent o de fum aça s b ra n csa
(SO3) e a solu ção não m ais e sc ure c er, a m ine ralizaçã o e s tá term inada . Lave 3 vezes o
fra sco Kjeldahl
com ág ua, a qu ece ndo a té red u zir o volume a m ais ou m e nos 5 mL a p ós ca da
adição (c a so a solução escureça novamente, adicione mais água oxigenada,
aqueça e lave novamente com água (três vezes). Esfrie o frasco e transfira a
solução para um frasco Erlenmeyer de 500 mL
IAL - 271
de b o ca esm e rilh a .d Lave

a as p are d es do fra sco Kjedahl e tra n s fir
a p a ra o fra sco
Erle nm yee r
com auxílio de ág ua su ficie netp a ra com pleta r o volume p a ra 35 mL. Adicione ,
n e sta ordem, n os fra s cso Erlen m yee r: 10 mL de ácido clorídrico , 2 mL da solução
de KI e 0,5 mL
da solução de cloreto estanoso. Conecte os tubos de absorção, agite e deixe
repousar por 30 minutos à temperatura ambiente. Pipete 3 mL da solução de
dietilditiocarbamato de prata em piridina nos tubos de absorção (parte
superior). Após os 30 minutos, introduza 4 g de zinco granulado nos frascos
Erlenmeyer, conecte rapidamente os tubos de absorção nestes fra s c o, sa g ite e
d e xi e a re a ç ão o co rer dura nt e 45 m inutos à tem p eratu a r am biente , com pre-
endida entre 25°C e 35°C, com agitações casuais de 10 minutos. A liberação de
hidrogênio deve ser regular e suficiente sem ser exces siva (a adição de uma
pequena quantidade de isopropanol no frasco Enlermeyer pode melhorar e
uniformizar a liberação do gás). Após os
45 minutos, compare a intensidade de coloração nos tubos de absorção da
amostra, branco
e padrão. A re a ç ão s e g ue a Lei de Be er de 0 a 10 μg de a rsê no.i É p o ssí vel
e s ta b e lerc eum a curva-padrão para um comprimento de onda máximo
determinado entre 535 e 540 nm, com um espectrofotômetro ou colorímetro,
usando a solução de dietiliditiocarbamato de p ra at em piridina como branco.
Como a intensid ad e de co lo raçoã é muito in stáve l, é importante q ue se fa ça a
m edida em tem p eratu a rco n stan ,tenão in fe rior a (25 + 2)°C e logo a p ós os 45
m inutos, tanto p a ra as a m o stra s como p a ra os padrõ e s .
Re p e titiv id a: dpara
e comparação visual com os padrões desenvolvidos
conjuntamente com
os te s te, so lim ite v isu al de d e te c çã
o é de 0,2 m g/kg. Em tra b a lhsocom
e s p e crofotôm
t et
ro,
a d ifere n ça e n tre os re s u lta dsode d u as d e te rm in a çõ
s exe
e c u ta dsasim ultaneam ente
,
p elom esmo a n a lista , não d eve s er m aior que 0,2 μg .
No ta 1 : é neces sário fazer, conjuntamente com as determinações, uma prova em

branco
(com os re a g e n te) se um padrão de co n ce ntraçã
o conh ecida
: pre p are,
sim ultaneam ente, padrões de 1, 2, 3, etc, μg de arsênio por pipetagem de 1, 2, 3,
etc., mL da solução padrão
de 1 μg/mL e dilua a a proxim adam ent e 35 mL de água.
No ta 2: em pre s e naç de íon fé rric o, so KI é oxid ado com lib era çã

o de iodo. Adicione
um exc e sos de c lore to e sta n oosp a ra uma red ução com pleta. A lib era çã
o de
hidrogênio da re a ç ã o
é n e ste c a so c a ta lis aade a c e le ra d a .
No ta 3: exem plo de cálculo da m a sas de a m o str a a s er p e sa d:as a b ee- spor norma
q ue o co ra net artificial pode co n ter no m áximo 1 μg de As por g de co ra n te . Na
d o sa gm
e com pa-rativa usa-se um padrão de 3 μg de Arsênio. Desta maneira, a
fórmula que fornece a mas sa
de a m ostra a s er p e sa ad s e rá :
272 - IAL
ma = m a ssa da a m o stra a s er p e sa d a
pa = padrão p a ra com paração
n = lim ite de a rsê noi e sta b e le coidna e sp e c ific aoç de
ã ca da m até ria -p rim a
Re ferê n c ia
YABIKU, H. Y.; DIAS, N. A.; MARTINS, M.S. Estudo comparativo de métodos

u su asi p a ra de term inaçã
o de a rsê no.i São Paulo, Rev. Inst. Adolfo Lutz, 49(1), p.
51-55,
1989.
BABKO, A. K.; PILIPENKO, A. T. Photometric analysis. Methods of

determining non-m etals
. Mo scow: Mir Pu b lish e .rs1976. 374 p.
COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX Food Chem ical s Codex. 4.

ed., Washingto
n D. C.: National Aca demci Pre s ,s 1996. p. 7 5 5 -75 7.
153/IV De terminação de benzo(a)pireno em arom as de fumaça e alim entos

defumados
Os hidro ca rb o n estopolicíclico s arom ático s (HPA s) re pre se n ta m um

im porta nte gru-
po de compostos químicos, muitos dos quais têm elevado potencial
carcinógenico, dentre e s tas su b stâ n cia , ds e s ta c ae -so b enzo(a )pire no , por ter sido o
prim eiro hidrocarb o n et o a s e ridentificad o e reco nh ecid o como c arcinógeno , e s er
c o n sid e raodum indicado r da pre s e n ç a
de outros do grupo. São form adso principalm ent e devido à com bustã o
incom pleta , à a lta stem p era tu ra , de
s m a té ria s o rg â n ica s e e s tão distrib uído s no
m eio am bient e em b a ix sa con- c e n tra ç õ;e spodem s er encon tra do s em pla ntas
te r e s rtes e a q u á tica, ss o lo ,s sed im e n to, ás g u a s
e na atmosfera. A contaminação nos alimentos é normalmente resultado da
defumação, contam inaçã o d os s o lo ,s poluição do ar e da ág ua, pro c e s ssode
cozim ent o ou pre p a ra çã o
de alim ento s e d os aditivos alim enta re s. E s te m étodo se a p lica à dete rm inaçã o de
b enzo(a) pireno em aromas de fumaça e alguns alimentos defumados, tais
como: bacon, presunto, lingüiça , lom bo, p eru, c h e s te r, c o s teal de boi, e tc. Ba s e ia -
se na e x tra çoã do be nzo(a)pireno,posterior separação e quantificação por CLAE
em fase reversa, usando uma coluna analítica
de o cta d ecilsila o n(C18) e detector de fluoresc ência.
Material
Crom atógraf o líquido de a lta e ficiê n cia
, coluna analític
a de 4,0 mm x 12,5 cm,
Lichro sp h ree
100 R P-18 (5 μm) ou eq uiva le n te , d e te cto
r de fluore sc ê n c,iapro c e s s a dr oe
re g istra d o r/
in te gradro de d ad o ,s balanaç analítica , pro c e s s a dr ode c a rn se ou
eq uiva le n te, m anta d e aquecim ent o de 500 mL, ro tavapor, m e m b rana s filtra n te
s
d e s crtáve
a is de 0,45 μm d e diâmetro de poro, filtros descartáveis de 0,45 μm
de diâmetro de poro, torpedo de nitrogênio,
IAL - 273
pipetado r autom átic

o de 100 a 1000 μL com re s p e cva ti ponteira
, pipetado
r
autom átic o de
1000 e 5000 μL com respectiva ponteira, condensador de bola com junta
esmerilhada
24/40, com prim ent o de 400 mm, funis de se p a ra çoãde 125, 250 e 500 mL com
to rn e ira s
de te flo ,nbalão de fundo chato de 250 mL com junta esmerilhada 24/40, coluna
de vidro
de 22 cm de com prim ento , com re s ervatório p a ra 60 mL e torneir a de te flo ,n
funil de vidro, fra s cso de vidro tipo p ê ra de 400 mL com junta esm e rilh a d
24/40, funil de Büchner, fra s c ocon centra dr ograduad o de 10 mL com tam pa,
s e rin gsade 5 mL, b a lõ es volum é trico
s de 10,
50 e 100 mL e p ip e ta s volum étrica s.
Re a g en tes
Ág ua u ltra -p u ra
Álcool
Me tan ol g rau CLAE
Ace tonitrila g rau
CLAE
1 ,1 ,2 -triclo
ro -1 ,2 ,2 -triflu
reta
o no (TCTFE) g rau CLAE
Dim etilsulf óxido (DMSO) g rau e sp e crofotom
t étrico
Ciclohexan o g rau CLAE
Óxido de alum ínio 90, tam anho de p artícula 7 0 -2 30 m e s h
Sílica g el 60 , tam anho de p artícula 7 0 -2 30 m e s h
Hidróxido de p o tá ssio
So lu ç ã o -e s toeq–u Diss ova

l 1 mg de b enzo(a)pireno (BaP) em 10 mL de
ciclohexano e d e xi e em u ltra -som por 15 m inutos.
Solução-intermediária – Pipete 0,5 mL da solução-estoque, leve para um balão de

50 mL e com p let e o volume com a ce to n itrila -m e ta l (1:1).
no
Solução de trab alh o – Pip e et 4 mL da solu ção interm ediári a e leve p a ra um balão
de 100 mL, com pletand o o volume com a c eto n itrila -m eta l (1:1)
n o . C oncentraçã
o
final de b e nzo(a) pire no: 0,04 μg/mL.
Alumina desativada – Determine a perda aparente de peso da alumina, por
aquecimento ao rubro com bico de Bünsen de 10 g de alum ina em c áp sual de
porc e la na ou platina ta ra d a .Cubra a cá p sual im ediatam ent e e coloque em
d e ss e c ard op a ra e s fria
r, d ep oi
s p e se (as p e s -a g e ns d evem s er fe itas rapidam ente ,
pois a alum ina a d s orve im ediatam ent e a á g ua a tm osfé - rica). Calcule o conteúdo
de água. Descarte a alumina que tenha sido aquecida. Adicione su fic ie net
quantidad e de água p a ra m olhar a alum ina, d e s de que p a ra o total de água
adicionado, se considere 10% do peso final da alumina desativada. Agite
vigorosamente a alumina por 15 m inutos e g u arde em vidro âm bar por no
mínimo 4 h o ras a n tes do u so.
274 - IAL
Cálculo
Y = quantidade de água presente na alumina

X = quantidad e de á g ua a s er adicionad
a na alum ina
M = m a ssa de alum ina inicial
Sílica g el d e sa va
ti da – Aq u e ça porç õ es de sílica g el em fra s oc Erlenm yeer ta ra do a
160°C por
16 h o ras e a q u eaç tam bém a tam pa já ta ra da em um b éq u er. Remova o fra sco
Erle nm yee r
da estufa, tampe imediatamente e esfrie em des secador. Pese o frasco para
determinar o peso
da sílica gel seca. Adicione quantidade suficiente de água à sílica gel, desde que
a soma das adições não ultrapas se 15% do peso final da sílica gel desativada.
Imediatamente tampe o fra s oc e a g ite v ig oro sa m enetpor 15 m inutos. A gu arde 4
h o ras ou m ais a n tes do u so.
Cálculo
X = quantidad e de á g ua a s er adicionad
a na
sílic a M
; = m a ssa de sílica inicial.
Preparação da coluna cromatográfica – Adicione na coluna de vidro, contendo lã

de vidro na extremidade inferior, 5 g de sílica gel desativada (contendo 1 5% de
água),
5 g de alumina desativada (contendo 1 0% de água) e 10 g de sulfato de
sódio, nesta ord e m, b a te n od leve m e net d u ra net c a da a d iç ão. L ave a c o lu na
c om 50 mL de TC- TFE. Par e o fluxo quando o nível do líquido alcançar o
topo da camada de sulfato
de s ó d io
Recuperação da coluna cromatográfica – Teste antes do uso. Prepar e 2 colunas

como d e s c roit a c ima (uma c o lu na p a ra o b ra n co e u ma p a ra a re c u p e r a ç ã. o )
Ad ic io ne 4 0 mL de TCTFE à uma coluna e à outra adicione 40 mL de TCTFE
contaminado c om 2 mL de uma s o lu ç oã de b e nzo (a)pireno (BaP) 0,25
μg/mL. Deixe o solvente percolar as colunas e colete separadamente os eluatos
em frascos tipo pêra de 4 00 mL. Repita a eluição da coluna com duas porções
de 25 mL de TCTFE. Deixe cada eluente escoar até o topo da camada de
sulfato de sódio antes das próximas adições. Concentr e as soluções eluídas de
TCTFE a 5 mL em um rotavapor com banho-maria
a 3 0 °C. Tr a n s fir
a os c o n c e n tr a sd op a ra um fr a s oc c o n c e n tra d
r og ra d u aod de 10
m L, com pipetador automático ou pipeta tipo Pasteur. Lave cada frasco tipo
pêra com 3 p orç õ es de 1 mL de TCTFE e tr a n s fir a p a ra o fr a s oc c o n c e n tra rd o
re s p e cvo.
t i Colo-
IAL - 275
que os frascos em um banho-maria a 3 0°C e concentr e as soluções à secura sob

leve
fluxo de nitrogênio. Adicione 2 mL de acetonitrila-metanol (1:1) e leve ao
ultra-som p or 3 m in u tos . Filtre a s o lu ç oã em m e m b ra nsa de 0 ,45 μm.
Su b m eat à cromatografia líquida de alta e ficiê ncia . Os crom atog rams ad os
s o vl e n tes d evem e s tar livres de p icos interfere n tes e a recu p eraçã
o p ara o
benzo(a)pireno (BaP) deve ser maior que 90%.
Fa se móve l
Solve n te A: a ceton itrila -m eta l no
(1:1)Solve n te B: á g ua
Filtre os s o vl e n tes A e B a través de m e m b rana
s de 0,45 μm e d e g a se ifiq u e .
Solve n te s
para extração – Água saturada com TCTFE e água saturada com ciclohexano.
Em um funil de separação, sature a água com o solvente específico em exces so,
agite e descarte a fase orgânica.
Procedim ent o – Ajuste o detector de fluoresc ência para os seguintes

comprimentos de
onda: λe x= 295 nm eem = 405 nm. Ajuste a proporção da fase móvel para 80% do
λ solvente
A e 20% do solvente B, o fluxo para 1 mL/min e a temperatura para 35°C.
Programe o g rad ie netda fa se móvel como d e scrit
o a b axo
i :
Tabela 10 – Program açã

o do g ra d ie netda fa se móve l
Tem po % Solve n teA % Solve n teB

(min) (aceton itrila-m etan1:1)
ol (água
0 80 )
20
20 100 0
40 100 0
45 80 20
65 80 20
Triture a am ostr a e d issova

l 25 g em 500 mL e m um balão de fundo redondo p a ra
ebulição,
com a lg um sa péro las de vidro. Adicione 100 mL de álcool e 4 g de hidróxido de
p otássio. Coloque o fra sco na m anta de aquecim ento , a d apet o con densad r ode
b olas e d e xi e digerindo po r 2 h o ra.s De ixe e s fria
r à tem peratur
a am biente . Coloque
lã de vidro em um funil e um e- d e ça com álcool, p a ses a soluçã o fria a través da lã
de vidro e recolha o filtrado em um funil d e s e p a ra çoãde 500 mL. Fa ça lava g e sn
se q ü e n cia
s com
i 90 mL de á gua saturad
a com TCTFE,
40 mL de TCTFE e 50 mL de álcool, re co lha as so lu çõseno funil de se p a ra çã
o de
500 mL. Fe c he o funil e então inverta e a bra a to rneir
a enquant
o a gita su avem enet o
conteúd o por a l-
276 - IAL
g uns se g un dsop ara e s c a p. eFe c he a to rn eira e e x traai agitand o o funil por 2 m inutos .
De ixe a s
c amadas separarem e então escoe a c amada de TCTFE através da coluna
cromatográfica (como pre p arad a anteriorm ente) . Rep ita as e x tra çõs ecom 2 porçõ es
de 40 mL de TCTFE. De ixe cad a e x traot p ercolar a coluna e co leet
a proxim adam ent e 300 mL em um fra sco tipo p êra. Quando
o terc e rio e x traot atingir o topo da cam ad a de sulfato de sódio, adicion e 50 mL de
TCTFE para lavagem da coluna e colete este eluído no frasco. Adicione 10 mL de
DMSO à solução no fra sco e evapore o TCTFE em um rotavapor com banho a
30°C, deixand o o DMSO. Tra n s- fira quantitati vam ente o concentraod de
DMSO p a ra um funil de se p a ra çã o de 125 mL, usando 5 mL de DMSO em
p eq u ensaporç õ e .s Lave o fra sco com 50 mL e adicione a slava g e ns ao funil. A g ite
o funil p ara e xtra çã o por 2 m inutos . De p osi que as fa s se se se p a ra rem , d e s carte a
cam ad a in ferior p ara um funil de se p a ra çã o de 250 mL contend o 25 mL de ciclo-
h ex ano e 90 mL de á gua sa tu raad com ciclo hexao.n Repita a e x tra çã o de
cicloh exaonno funil
de 125 mL com d u as alíq uo ta s de 15 mL de DMSO. Adicione os e x tra to s de DMSO
ao funil
de 250 mL, a g ite vig orosam ene tpor 2 m inutos pa ra e xtra çã o. De p osi da se p a ra çã o
d as fa s e stra
, n sfir
a a cam ad a in ferior p a ra outro funil de 250 mL contend o 25 mL
de cicloh exan o e a g itepor 2 m inutos pa ra e xtra çã o. De p osi da s e p a ra çã o d as fa s e, s
d e s ca
rte a cam ad a in ferior, aq u osa.Com bine os d ois e x tra to s de cicloh exan o no
prim eiro funil de 250 mL. Lave o seg unod funil
de 250 mL com d u as alíq uo ta s de 10 mL de ciclo hexaone adicion e as lava g e ns ao
prim eiro funil de 250 mL. Lave a soluçã,od u as veze s, com su ave ag ita çã o por 15
se gu ndsocom 100 mL
de á gua saturad a com cicloh exan o. De s c rate a cam ad a aq u osa d ep ois de cada
lavag em. Colo- que 10 g de alum ina d e sa vada ti (10% de água) se g u id a por 50 g de
Na2SO4 em um funil d e
Büchner de 60 mL. Lave com 50 mL de cicloh ex an o e d e s ca
rte. Pa s es os e x tra to
s
com binados
de ciclo hexaondo funil de se p a ra ç ã, ao través do funil de Büchner p ara um fra sco
tipo pê ra d e
400 mL. Lave o funil de se p a ra çã o com du as a líqu ota s de 25 mL de cicloh exan, eo
p a ses ca dauma a través do funil de Büchner p ara o fra sco. Use um rotavapor com
b an ho-m ari a a 40°C,
a té reduzir o volume p ara c erca de (2 -5) mL. Tra n s fir a o conteúd o quantitati vam ent e
p ara o fra sco concen trad r usand
o o um pipetado r autom átic o ou pipeta tipo Pa ste ru,
utilizand o 5 mL
ou m enos de cicloh exan o p ara lavag em. Leve o conteúd o do tubo à s e c uar em
b an ho-m ari aa
30°C sob uma su ave co r e n te de nitrogênio. Leve p ara 2 mL com aceto n itrila-m eta l no
(1:1) e de xi e no u ltra -som por 3 m inutos . Filtre o e x traot p ara um fla co neetde 2 mL.
Injete 20 μL
do e x traot de a m o s tr
a ou da s o lu ç ã o -p a do rã
na co luna Lichro s p h ree 100 R P -18 (5
μm) ou equiva le net e inicie a program açã o de g rad ienet de fa se móve l. Entre as
inje çõ e, s lave o lo op d e am ostra . Compare os tem pos de reten çã o do pico
o b servado com o padrão de benzo(a)pireno crom atografad o sob as m e smsa
cond ições . In je et o padrão a ca da 3 a m o stra. s C alcule a quanti- da de de
benzo(a)pireno no e x traot de am o str a p elo procedim ent o de padrão e x te rn o.
Cálculo
IAL - 277
Aa = área do pico da a m o str

a de b enzo(a)pireno no e x traot da a m o stra
Ap = área do pico de padrão e xte rn o de b enzo(a)pireno
Mp = m a ssa de padrão e x te rn
o de b enzo(a)pireno na inje ção
Finalize o cálculo
, levando em co n sid e raoçãas diluiçõe
s e fe tu a dsae o p e so inicial
d e a m o stra .
Re ferê n c ia
YABIKU, H.Y.; MARTINS, M.S.; TAKAHASHI, M.Y. Leve ls of be nzo (a )p rye ne and
oth er polycyclic arom atic hydro ca rb osnin liquid sm o ke flavour and so me sm oked
fo od .s Food Addit. and Contam., v. 10(4), p. 39 9-4 05 , 1984.
JOE Jr, F.L.; SALEMME, J.; FAZIO, T. Liquid chrom atographi c of tra ce re s id use
of p o lyn u clea
r arom atic hydro ca rb osn in sm oked fo ods J. As so c. Off. Anal.
Chem., v.
67(6), p. 10 76 -1 08, 21982.
Colaboradore s :
Irace ma de A. Tam ura; Ma risteal Satou Martins e Ne lson Aranha Dia s.
278 - IAL

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CAPÍTULO

Toda a legislação a respeito de aditivos é positiva e dinâmica, isto é, são

A partir de 1997, houve muitas alterações na legislação de aditivos

Substâncias que aumentam a acidez ou conferem um sabor ácido aos

Su b stâ n csia q ue re tardam o a p are cim ent

Antigamente, os alimentos eram conservados com ácidos, sal, açúcar e

Su b stâ n csia que co n ferem, inte nsifica m ou resta u ra m a c or de um

Substâncias diferentes dos açúcares que conferem sabor doce aos

Su b stâ n csiaq ue aum enta m a v isc o sid ae dd os alim entos

Su b stâ n csiaque con ferem te x tuar p e al form açã

Substâncias que tornam pos sível a manutenção de uma dispersão uniforme

Su b stâ n csiaque propiciam a form açã

Ne s et capítulo , s ão d e sta ca ds oalg u ns acid ulantes , regu ladres

A determinação dos aditivos nos alimentos é tratada nos respectivos

058/IV Acidulantes – Identificaçã

Os ácidos orgânicos podem ser identificados por cromatografia em papel.

Soluções-padrão – Pese 1 g de ácido cítrico, transfira para um balão volumétrico

Solve n te p a ra a fa se móvel com reve la d or – Misture 35 mL de álco ol, 13 mL de

Procedim ent o – Em um bé qu er de 100 mL, d issova l a a m ostr

Re ferê n cai b ib lio rgá fic a

INSTITUTO ADOLFO LUTZ Norm as Analítica s do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:

Procedim ent o – Dis solva alguns mg de ácido cítrico em 1 mL de água,

Re ferê n cai b ib lio rgá fic a

COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX.Food Chem ical s Codex. 4. ed .

Balança analítica, frascos Erlenmeyer de 125 mL, proveta graduada de 50 mL e

Solução a q u oas de hidróxido de sódio 1 M

Procedim ento – Pese, com precisão, cerca de 3 g da amostra e dis solva em 40 mL

Cada mL de NaOH 1M é equiva le net a 64,04 mg de C6H8O7.

Re ferê n cai b ib lio rgá fic a

COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX. Food Chem ical s Codex. 4.

O ácido ascórbico pode ser adicionado aos alimentos com a função de

Ácido a scó rb oic Ácido dehidro a scó rb ico

Solução de ácido sulfúric

Procedim ent o – Pese uma quantidade de amostra que contenha

V = volume de I2 0,1 M g a sto na titulação

COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX. Food Chem ical s Codex. 4. ed.

063/IV Antioxidantes – Titulação de ácido ascórbico e isômeros com solução

O polisorbato 80, componente comum nos produtos para panificação,

Balança analítica, balança semi-analítica, béquer de 100 mL, provetas de 25 e

Solução a q u oas de iodo 0,05

Procedim ent o – Pe s e, com pre c is ã,o uma quantidad e de a m o str a q ue contenh a

V = mL de iodo 0,2 M g a sot na titulação

Re ferê n cai b ib lio rgá fic a

DES SOUKY, Y. M.; HUS SEIN, F. T.; ISMAEL S. A. Determination of ascorbic

Este método é aplicado para a identificação de ácido ascórbico, ácido

Balança analítica, banho-maria, tubo de ensaio, béquer de 10 mL e balão volumétrico

So lu çõ se tituladsa A e B de Fehling (Apêndice I)

Na pre s e naç de ácido a scó rb ico

COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX Food Chem ical s Codex. 4. ed.

Solução de Tillm ans d e s c rit

Procedim ent o – Pese uma quantidade de amostra de maneira que a

INSTITUTO ADOLFO LUTZ Norm as Analítica s do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:

ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of

066/IV Antioxidantes – Identificação de ácido ascórbico pela reação com

Ba la n ça analítica , b a lõ es volum é trico

Procedim ent o – Pese uma quantidade de amostra de maneira que a

FARMACOPÉIA DOS ESTADOS UNIDOS DO BRASIL. 2. ed. São Paulo:

A s o lu b ilid aedem á lc o ol a 72% de q u a es to d os os a n tiox id a n te s m a si

a p ós e x t r a çoãcom á lc o ol a 72%, c om 2 ,6 -d ic ro lo q u in o n a clo

Balança analítica, balança semi-analítica, espectrofotômetro UV/VIS, béqueres de

Solução de álcool a 72% v/v – Adicione 360 mL de álcool em um balão

Solução de b ó rax a 2% m /v – Pe se 2 g de b órax – Na2B4O7.10H2O, transfira para

alíquota de 12 mL desta solução, 2 mL de uma solução de 2,6-