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1. OBJETIVO
Definir um procedimento para preparação dos meios de cultura pelo Controle Microbiológico.
2. ALCANCE
Este procedimento se aplica a todos os lotes de meios de cultura preparados pelo Controle
Microbiológico, empregados na contagem de heterotróficas, no monitoramento dos microrganismos
heterotróficos do laboratório microbiológico e demais rotinas.
3. POLÍTICA
4. RESPONSABILIDADES
5. DEFINIÇÕES
6. MATERIAL E EQUIPAMENTO
Antonio C. A. Canabarro
Stelamaris B. Ribeiro Patricia C. Beneli NOVO
Controle Microbiológico Controle Microbiológico Reginaldo Schiavi
PROCEDIMENTO DE OPERAÇÃO PADRÃO - POP
CONTROLE DATA: 08/03/10
TÍTULO: PREPARAÇÃO DE MEIOS DE CULTURA MICROBIOLÓGICO /////////
7. DIAGRAMA DE FLUXO
Antonio C. A. Canabarro
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PROCEDIMENTO DE OPERAÇÃO PADRÃO - POP
CONTROLE DATA: 08/03/10
TÍTULO: PREPARAÇÃO DE MEIOS DE CULTURA MICROBIOLÓGICO /////////
8. PROCEDIMENTO
Atenção:
Antonio C. A. Canabarro
Stelamaris B. Ribeiro Patricia C. Beneli NOVO
Controle Microbiológico Controle Microbiológico Reginaldo Schiavi
PROCEDIMENTO DE OPERAÇÃO PADRÃO - POP
CONTROLE DATA: 08/03/10
TÍTULO: PREPARAÇÃO DE MEIOS DE CULTURA MICROBIOLÓGICO /////////
3) O meio Standard Methods Agar ou Plate Count Agar será armazenado em tubos com tampa
de rosca contendo 10 a 12 mL à temperatura ambiente, com prazo de validade de 15 dias.
4) Os meios EC, lactose broth dupla concentração, lauryl sulfate broth dupla concentração,
lauryl sulfate broth, lactose broth e brilliant green bile broth 2% distribuídos em tubos de ensaio
com tampa de rosca terão validade de 3 meses. Quando distribuídos em tubos com tampa de
inox a validade será de 15 dias.
5) O meio A1 distribuído em tubos com tampa de rosca terá validade de 7 dias.
8.1. Preparação:
8.1.1. Em uma balança calibrada, pese com precisão as quantidades dos meios desidratados.
8.1.2. Para saber qual a quantidade de meio a ser pesada, utilize a seguinte fórmula:
Quant. do meio a ser pesada = Quant. do meio contida no rótulo (g) x Vol. do meio a ser preparado(mL)
1000 mL
8.1.3. Coloque os meios em um recipiente limpo, o qual deve ter sido previamente lavado de
acordo com POP nº. CMI – 004.
8.1.4. Acrescente aos meios (caldos) pesados água destilada ou purificada. Mexa com a
baqueta e aguarde até completa dissolução. Realize a medida de pH e ajuste, se necessário.
Reserve uma alíquota para medida de pH após a autoclavação. Aguarde, no mínimo, 15 minutos
para a hidratação do meio contendo Agar, aqueça-o em microondas ou em outra fonte de calor
(bico de Bunsen com placa cerâmica). Retire, mexa a cada 5 ou 10 minutos ou até abrir fervura.
8.1.5. Distribua os meios de cultura em recipiente adequado, não excedendo ¾ da sua
capacidade, no caso de meios com Agar autoclavados em frasco para posterior plaqueamento.
Distribua os meios líquidos em tubos com os tubos de Durham, sempre que necessário.
Distribua 12 mL do meio para contagem de heterotróficas (Standard ou PCA) em tubos com
tampa de rosca. Utilize os repipetadores identificados para cada meio.
8.1.6. Submeta os meios ao processo de esterilização a vapor de acordo com o POP nº. CMI –
006, por um tempo que será determinado no relatório vigente de verificação da autoclave ou no
rótulo do fabricante.
8.1.7. Guarde os tubos do meio PCA em estantes sob temperatura ambiente por 15 dias a partir
da data de preparação.
8.1.8. Armazene os tubos com tampa de rosca dos meios EC, Lactose ou Lauril e Verde por 3
meses a partir da data de preparação. Quando em tubos com tampa inox a validade destes
meios será de 15 dias.
8.1.9. No caso dos meios ágar, após o ciclo de esterilização, deixe repousar em banho-maria ou
estufa à temperatura de ± 50°C, aguardando plaqueamento, se necessário.
Antonio C. A. Canabarro
Stelamaris B. Ribeiro Patricia C. Beneli NOVO
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PROCEDIMENTO DE OPERAÇÃO PADRÃO - POP
CONTROLE DATA: 08/03/10
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8.1.10. Coloque de 20 a 25 mL dos meios em cada placa estéril, sob o fluxo laminar, na zona
bacteriológica, para preparação de placas de monitoramento.
8.1.11. Inverta as placas contendo os meios de cultura e embrulhe-as com plástico ou papel
alumínio.
8.1.13. Coloque uma etiqueta de identificação contendo: o nome do meio, lote do meio, a data
de preparação,a data de validade e o responsável.
8.1.14. Conserve as placas/tubos em temperatura ambiente (PCA) ou em geladeira em uma
temperatura de 2 a 10°C.
8.1.15. No caso dos meios líquidos distribua-os em tubos e guarde-os em estante para tubos e
siga os itens 8.1.13.
8.1.16. Registre no livro de registro de meios de cultura, os seguintes dados:
- Nome do meio de cultura
- Número do lote do fornecedor
- Número do lote preparado
- Data de preparação
- Quantidade utilizada
- Volume de água
- Tempo, temperatura e pressão de esterilização
- pH antes do ajuste, pH após ajuste, pH após a autoclavação
- Quantidade de outros aditivos
- Quantidade de água para concentração simples
- Responsável
8.2.3. Meios de cultura seletivos podem ser utilizados em atividades específicas, tais como
detecção da presença de uma espécie de microrganismo em particular.
9. ANEXOS
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10. BIBLIOGRAFIA
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Stelamaris B. Ribeiro Patricia C. Beneli NOVO
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PROCEDIMENTO DE OPERAÇÃO PADRÃO - POP
CONTROLE DATA: 08/03/10
TÍTULO: PREPARAÇÃO DE MEIOS DE CULTURA MICROBIOLÓGICO /////////
REGISTRO DE INCUBAÇÃO
Material _____________________________________________
Método ______________________________________________
Nome
IDENTIFICAÇÃO GERAL
Material/Equipamento: _________________________________
_______ ______________________________________________
____________________________________________________
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CONTROLE DATA: 08/03/10
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NOTA: Meios alternativos a esta lista podem ser usados desde que validados.
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Stelamaris B. Ribeiro Patricia C. Beneli NOVO
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