ESTUDIO DE LA EFICACIA PROTEOLÍTICA DE DETERGENTES ENZIMATICOS A

TEMPERATURA AMBIENTE Y 37° C

Rodríguez, Milagros1; Temer, Ricardo2 ; Guerra, Silvia3

1) Hospital de Salto. Integrante de Comisión directiva de Asociación de Esterilización del Uruguay

(AESTU)
2) Medica Uruguaya Corporación de Asistencia Médica. Tesorero de AESTU
3) Servicio Médico Integral. Presidente de AESTU

Introducción

El reprocesamiento de artículos de uso médico, requiere del cumplimiento meticuloso de

varios pasos, imprescindibles para el mejor resultado. Independientemente del método final
(desinfección o esterilización), la limpieza es determinante para su eficacia. Ningún agente
esterilizante o desinfectante, es capaz de penetrar proteínas o biofilms, en condiciones normales. Y
la detección de suciedad remanente en materiales una vez lavados, es dificultosa, por lo que asegurar
un proceso adecuado todas las veces es fundamental, máxime en instrumentos huecos o de diseño
complejo.
La limpieza es el proceso mediante el cual se elimina con agua y detergente la suciedad y
todos los componentes que no forman parte de un determinado objeto. Mediante la limpieza no sólo
se elimina la materia orgánica y otra suciedad, sino que también se logra la reducción de un número
importante de microorganismos, lo que facilita su manipulación posterior así como los procesos
siguientes.

El agua por sí sola no es capaz de eliminar la suciedad, debido a su alta tensión superficial y
necesita del detergente. La tensión superficial es la responsable de que una gota de un líquido asuma
forma esférica, ofreciendo un área mínima de contacto con una superficie sólida. Lograr que el área
de contacto entre la gota y la superficie aumente, es decir, que la gota se aplaste y moje dicha
superficie, es la propiedad característica de las sustancias tensioactivas; éstas disminuyen la tensión
superficial y aumentan el contacto con la superficie a limpiar. El detergente es un producto químico
que disuelto o disperso en el agua o en otros disolventes, tiene la propiedad de modificar
profundamente la tensión superficial, con lo que la solución o la dispersión, adquieren la capacidad
humectante y emulsionante necesaria para producir el efecto limpiador que confiere a estos
productos su aplicación práctica. Los detergentes actúan básicamente sobre las grasas, pero actúan
poco sobre proteínas y polisacáridos, que son abundantes en la materia orgánica.

Para lograr la eficacia necesaria para material de uso médico, se crearon los detergentes con
enzimas (conocidos como detergentes enzimáticos) que combinan enzimas y detergentes. Las
enzimas hidrolizan sustancias orgánicas específicas, fragmentándolas y facilitando su remoción.

Los detergentes enzimáticos pueden contener proteasa o agregar otras enzimas como lipasas
y amilasas, entre otras; siendo la más importante la proteasa, debido a que las proteínas están
presentes en un 55% en la sangre y son la suciedad más común en instrumentos médicos.

Los detergentes enzimáticos se recomiendan fuertemente para instrumentos difíciles de

limpiar, huecos o de diseño complejo, como los endoscopios con canales largos y/o estrechos. La
acción de la proteasa se evidencia pues hidroliza los enlaces de la molécula proteica, facilitando la
eliminación de contaminantes de base proteica como sangre y secreciones. Las enzimas no son
compatibles con pH muy ácidos o muy alcalinos, ni con temperaturas elevadas (>60C).
 Existe en el mercado uruguayo, una gran diversidad de detergentes enzimáticos, desde mono-
enzimático hasta hexa-enzimáticos. La pregunta que nos hacemos a diario, es si la eficacia es
dependiente del número de enzimas, del tipo de éstas o de la cantidad (%) que poseen los productos.
También es deseable disponer de un método objetivo de medición de la eficacia de los productos y
demostrar que la limpieza es provocada por las enzimas y no solamente por la acción del detergente,
su pH o la acción mecánica que le imponen las lavadoras o el personal de limpieza de instrumentos.

Este ensayo tiene el objetivo de determinar la eficacia proteolítica de 5 detergentes

enzimáticos disponibles en Montevideo, a temperatura ambiente y a 37°C.

Materiales.

Utilizamos 10 trozos de una película radiográfica sin uso, en trozos de 15 cm largo x 1 cm ancho.
El motivo de esta selección fue la composición de las películas radiográficas (placa)

La composición de las película radiográfica (ver figura

N° 1) es un soporte o lámina de plástico de 0,18 Figura 1. Placa radiográfica.
micrómetro sobre la que está depositada una
emulsión. La adherencia entre las capas de
emulsión y el soporte se logra mediante un
tratamiento químico de este último, llamado
sustrato. Un delgado recubrimiento de gelatina
endurecida, que actúa a modo de barniz protector
protege la delicada superficie de las emulsiones. La
emulsión está hecha de innumerables microcristales (cloruro, bromuro y ioduro) granos de haluros
de plata suspendido en una gelatina. La mezcla va extendida en finas capas sobre el soporte
(espesor: 4 micras).

La gelatina, es una proteína extraída de las pieles y huesos de animales de matadero. Por ello,
representa un desafío perfecto para los detergentes enzimáticos de instrumentos médicos.

También se dispuso de los siguientes materiales:

5 muestras de detergente enzimático de diferentes fabricantes, orígenes y cantidad de enzimas (ver

cuadro n° 1)

Cuadro 1. Muestras utilizadas en el ensayo.

Muestra Marca o tipo Fabricado Enzimas que contiene

en
N° 1 Plurazyme® Alemania Proteasa | Lipasa | Amilasa
N° 2 Multienzimatico Brasil Amilasa | Lipasa | Carbohidrasa
Proteasa | Peptidasa
N° 3 Cidezyme® USA. Proteasa
N° 4 Multienzimatico Francia. Amilasa | Celulasa | Lipasa | Mananasa |
Proteasa.
N° 5 Multienzimático. USA. Proteasa | Amilasa | Lipasa |
Carbohidrasa

Otros materiales incluyeron:

10 tubos de ensayo | 1 Soporte de tubos | 1 calentador a gas | 5 Pipetas graduadas | 5 Frascos vidrio
pirex® de 500 ml | Jeringas | Guantes | 1 frasco vidrio pirex® 1 litro | 2 cronómetros | Termómetro |

Método

A) Ensayo a temperatura ambiente (16°C)

1) Se agrego 500 cc de agua de grifo a los frascos de vidrio graduados,

2) Se agregó 1cc de detergente enzimático. Una muestra distinta en cada frasco.

Nota: A los efectos de poder comparar la potencia de los distintos productos, se optó por una
dosis única e igual para todos.

3) Se revolvió la dilución con pipeta de vidrio.

4) Se tomó de cada frasco una muestra de 10cc de la dilución, y se colocaron en tubos de ensayo
rotulados con el número de muestra (coincidente con tabla 1)

5) Se colocaron los tubos con la dilución en un soporte, para poder visualizar en conjunto la
acción del producto sobre la capa de gelatina de la placa radiográfica.

6) Se introdujeron las placas radiográficas en los 5 tubos.

7) Se inició el cronómetro.

8) Se observaron y fotografiaron las reacciones en los tubos hasta los 60 minutos post-
inmersión.

B) Ensayo N°2. A 37°C

Para la prueba a 37°C, se procedió igual hasta el paso 5.

6. Luego se colocaron estos nuevos tubos en matraz con agua, así como un tubo marcado como
“Prueba”, éste último solo con agua a los efectos de medir la temperatura dentro del mismo.

7. Se calentaron todos los tubos a la vez, bajo llama de gas, hasta lograr una temperatura de
40°C.

8. Una vez alcanzada la temperatura, se colocaron los tubos de ensayo con las diluciones de
detergentes en un soporte y se introdujeron en cada uno, una placa radiográfica, iniciando la
medición del tiempo y temperatura. La temperatura se midió solo en el tubo “Prueba”. Al
momento de iniciar la prueba, las diluciones de detergente enzimático estaban a 37°C y al
finalizar a 21°C.

Nota: Decidimos dejar decaer la temperatura por efecto del ambiente, pues esa es la situación
real en hospitales, donde se prepara la dilución con agua tibia y luego se va enfriando por su
uso.
Resultados

Cuadro n° 2. Resultados de Ensayo 1. Remoción de suciedad a temperatura ambiente.

Imagen Tiempo en minutos. Cambios visualizados.

Inicio de la prueba La diluciones de detergentes enzimáticos lucían limpias al

inicio de la prueba.

40 minutos de A los 40 minutos de iniciada la prueba se comenzó a

Inmersión. observar turbidez en las muestras 1 y 3, que comenzaron a
despegar la gelatina de la placa.

Las demás diluciones no habían alterado la placa.

55 minutos Muestra 3 limpió totalmente la placa, desprendiendo de ella

toda la gelatina.

Minutos más tarde (minuto 60) la muestra 1 también logró

dejar totalmente limpia la placa.

60 minutos
Finalizó la prueba.
En las muestras 1 y 3 la placa estaba limpia (color celeste),
demostrando actividad proteolítica. La dilución lucía turbia
por la suciedad extraída de la placa.
Muestras 2-4-5 no se observó actividad enzimática luego de
60 minutos de inmersión (la dilución continuaba limpia y la
placa continuaba sucia)

El cuadro N° 2 muestra los resultados observados en el ensayo 1, de limpieza por inmersión

con los detergentes enzimáticos a temperatura ambiente.

A temperatura ambiente, la capacidad enzimática fue lenta y requirió (en los únicos dos
productos que demostraron eficacia) casi una hora de inmersión de las placas radiográficas, para
que estos detergentes desprendieran totalmente la suciedad.

Los resultados del Ensayo N°2 que utilizó diluciones con agua tibia, fueron más rápidos e
incluyeron a una tercera muestra como eficaz, la que no había demostrado eficacia a temperatura
ambiente. (Ver cuadro n°3)
Cuadro N° 3. Resultados de la actividad proteolítica de detergentes enzimáticos a 37°C.
Numero de foto. Tiempo Cambios visualizados en el proceso.
(minutos)

Inicio de Diluciones se veían limpias, placa sucia (gris).

la
prueba.

8 minutos
Comenzó a opacarse la dilución de detergente, en muestras 1 y
3.

Se observó turbidez en el fondo del tubo de muestras 1 y 3.

9 minutos 15 La placa quedó limpia (color celeste) en la muestra 3. Estaba casi

segundos. limpia en muestra 1.

Las muestras 2-4-5 no presentaron cambios.

10 minutos Muestras 1 y 3 placa lucía completamente limpia (celeste). La

dilución enzimática estaba turbia por la suciedad retirada de las
placas, por las enzimas.

Muestras 2, 4 y 5 sin actividad proteolítica.

17 minutos Muestra N° 2 comienzó a mostrar turbidez en la dilución.

20 minutos A los 20 minutos, se dió por finalizada la prueba. Las diluciones

estaban a 21°C.

La imagen muestra la suciedad que retiraron de las placas

radiográficas los detergentes 3, 1 y 2 (en orden de eficacia).
Mientras que las muestras 4 y 5 no limpiaron en lo más mínimo
las placas.

Muestras 3,2 y 1 limpiaron la placa. Aunque el detergente 2 a los

20 minutos, no logró dejarla totalmente limpia (ver foto)

Muestras 4 y 5 no mostraron acción proteolítica sobre la placa.

Ensayo 1.
En los procesos de lavado realizados a temperatura ambiente 16º C ninguno de los productos
demostró eficacia en tiempos de inmersión recomendados por los fabricantes. Aunque debemos
considerar que estamos frente a un desafío mucho mayor al habitual (suciedad seca).
Luego de una hora de inmersión solo dos de las cinco muestras mostraron actividad proteolítica.
Ensayo 2.
A 37º C la acción de los productos se evidenció en forma más rápida que a temperatura ambiente.
Comenzando a 37ºC y habiendo llegado a 21ºC la temperatura de inmersión a los 20 minutos, de las
cinco muestras solo dos limpiaron totalmente las placas y otra muestra lo hizo parcialmente.

A pesar de haber utilizado la temperatura como posible acelerador, dos detergentes enzimáticos,
luego de los 20 minutos no demostraron acción proteolítica, a pesar de estampar en sus etiquetas la
presencia de proteasa.

Análisis y conclusiones.

Este estudio pretende ayudar a discriminar de un modo objetivo, que detergentes enzimáticos
tienen capacidad proteolítica y cuáles no, y de hecho descubrimos que este contenido no siempre
está relacionado a lo que indica la etiqueta del fabricante. Una posible explicación puede ser que a
pesar de que se indique proteasa como contenido del detergente enzimático en la etiqueta, la
cantidad de esta enzima en el detergente puede ser tan baja, que no posea efecto enzimático en
situaciones clínicas.

Otra conclusión importante es la comprobación del efecto de la temperatura sobre la acción

enzimática. A temperatura ambiente, el detergente enzimático actúa más lentamente, e incluso en
uno de los testeados, la temperatura fría es determinante para que no actúe, aunque cuando es
utilizado con agua tibia si tiene acción proteolítica.

Estas observaciones nos permiten recomendar utilizar siempre agua tibia en la dilución de los
detergentes enzimáticos y su uso inmediato, así como prohibir la reutilización de las diluciones que
ya fueron utilizadas. También parece lógico exigir por escrito al fabricante la información del
porcentaje de enzimas (de cada una) contenidas por litro de detergente enzimático

Queda claro que no es más efectivo para retirar sangre o fluidos corporales un detergente
multi-enzimático frente a uno mono-enzimático que tenga una mayor cantidad de proteasa.

Bibliografía
1) Acosta-Gnass, S & Stempliuk, V. Manual de Esterilización para Centros de Salud. Washington,D.C OPS. 2008.
2) AORN. Recommended Practices for Cleaning and Caring for Surgical Instruments and Powered Equipment. EN Conner R, editor. Standards,
Recommended Practices, and Guidelines. 2006 ed. Denver: Association of periOperative Registered Nurses; 2006.
3) Balderas M.L. Administración de los Servicios de Enfermería. México: Ed Mc Graw Hill 5º edición, 2009.
4) Bernadet V.H, Guerra, S et al. Recomendaciones de Esterilización en Hospitales. Montevideo. Publicación Técnica Nº11 FNR. Recomendación Técnica
Nº5 MSP 2009
5) Riveros, S. Limpieza de materiales de uso médico. Accedido en http://www.enfermeraspabellonyesterilizacion.cl/trabajos/material.pdf
6) Senlle A. Evaluar la gestión y la calidad. Herramientas para la gestión de la calidad y los recursos humanos. Barcelona: Ed. Gestión 2000, 2003.
7) La película radiográfica. Accedido en http://radiologiarte.tripod.com/pelicularx.htm

E-mail: aestu@aestu.org.uy