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HUAMANGA
ESPECIALIDAD DE MICROBIOLOGIA
TRABAJO SEMESTRAL
AYACUCHO-PERÚ
2009
DEDICATORIA
en sus aulas y poder continuar con esta etapa de formación profesional, a la Escuela
docentes Biólogos que nos inculcan y van con nosotros en la preparación y formación
Polivalente anti Vibrio cholerae; serotipo Inaba (cepa que fue adquirida del laboratorio
La via de inoculación optima fue, fue por vía intravenosa para la cual se utilizó la vena
Farland (técnica para la producción del suero polivalente anti Vibrio cholerae.
Se pudo lograr un suero polivalente específico anti Vibrio cholerae, biotipo el Tor:
bacteria. Finalmente se logró obtener suero polivalente anti Vibrio cholerae, con una
Las bacterias ejercen un enorme impacto sobre el bienestar humano. Así pues, se les
La clasificación de las bacterias está bien establecida y emplea datos tanto fenotípico
como genotípico. Para los fines de la microbiología clínica, los primeros tienen más
bacterias
El cólera es una infección intestinal aguda causada por el Vibrio cholerae, el que
posee un entero toxina termolábil que produce diarreas acuosas profundas(como agua
fatal
La evolución de la sensibilidad y especificidad del suero polivalente anti Vibrio
los conejos
negativo.
CAPITULO I
1. EL CÓLERA
El Cólera es una enfermedad originaria del Asia, se considera su cuna la región del
Delta del Ganges; desde esta zona se difundía por toda el Asia, África, atravesando
toda Europa y hasta América Durante el Siglo XIX terribles pandemias azotaron todas
hasta Pekín y Japón, y por el occidente hasta Astrakán y Costa Africana, epidemia que
persistió durante seis años, produciendo grandes estragos sobre todo en la India. En
departamentos del Perú. Las hipótesis de la aparición del Cólera en el Perú, son las
Existen dos variedades de V. cholerae que son potencialmente patógenas para los
humanos. El principal tipo que causa el cólera es V. cholerae O1, y los otros tipos son
(sub) tropicales. El cólera siempre es asociado con el agua contaminada o con los
Por otro lado, el V. cholerae no O1 está relacionado a la variedad anterior, pero sólo
infecta a los humanos y a otros primates, causando una enfermedad menos severa
que el cólera. Tanto las cepas patogénicas como las no patogénicas del organismo
este organismo ha sido referido como vibrio no cólera (VNC) y como vibrio no
aglutinable (VNA).
Los síntomas del cólera asiático pueden variar desde una diarrea leve y acuosa hasta
períodos de incubación que varían desde las 6 horas hasta los 5 días. Entre los
diarrea, los calambres abdominales y los síntomas de fiebre asociados con el vómito y
Así mismo, un porcentaje similar presentan sangre y moco en las heces fecales. La
diarrea puede ser severa en algunos casos, durando de 6-7 días y presentándose
después lo invada.
2. Vibrio Cholerae
2.1. CARACTERISTICAS:
pueden fermentar, entre otros sustratos, la glucosa. Poseen flagelación polar, que les
Pese a que nutricionalmente son poco exigentes, se emplean medios específicos para
coma. El Vibrio cholerae es muy móvil, por un flagelo polar, y es considerado como el
más móvil de todas las especies patógenas. Son aerobios o anaerobios facultativos,
Vibrio cholerae es una bacteria Gram negativa con forma de bastón (un bacilo) curvo
que provoca el cólera en humanos. Junto con otra especie de género Vibrio pertenece
a la subdivisión gamma de las Proteo bacterias. Hay dos cepas principales de V.
Neuraminidasa.
polivalente de Vibrio cholerae son identificadas como Vibrio cholerae 01, cepa
Es del tipo AB. Sus genes están agrupados en el operón Ctx AB, corregulado con los
epiteliales.
enterocito. Este hecho permite la activación de la adenilato ciclasa celular por ADP-
secreción a la luz intestinal de agua y electrolitos, lo que redunda en una diarrea por
vida de los factores físicos y químicos que influyen sobre él y de los factores biológicos
En las heces con vibriones, después de 24 horas el número disminuye, sin embargo
oscuridad.
Pueden permanecer vivos en la tierra dependiendo del grado de humedad y del
asilamiento directo que reciba del terreno. En el agua vive largo tiempo, y sólo la
El bacteriófago CTX(j) codifica los genes para las dos subunidades de la toxina del
cólera (cíxA y ctxB). Este bacteriófago se une al pilus corregulado por la toxina (tcp) y
factores de virulencia: el gen ace para la enterotoxina accesoria del cólera, el gen zot
para la toxina de la zónula occludens y el gen cep para un factor de colonización (tabla
32-2). V. cholerae 01 y 0139 poseen un gran número de copias de estos genes, cuya
La toxina del cólera es una compleja toxina A-B semejante desde el punto de vista
compuesto por cinco subunidades B idénticas de la toxina del cólera se une a los
aquejados de una infección grave llegan a perder hasta 1 litro de líquido por hora
las proteínas quimiotácticas codificadas por los genes cep. En consecuencia, el pilus
corregulado por la toxina es un elemento destacado tanto como receptor del fago
portador del gen de la toxina del cólera como de la adhesión a la mucosa que tapiza el
infección.
nombre indica, la toxina de la zónula occludens relaja las uniones estrechas (zónula
complejo de virulencia que las cepas 01. Por consiguiente, la capacidad de las cepas
Se conocen con menor detalle los mecanismos por medio de los cuales otras especies
Kanagawa). TDH es una enterotoxina que induce la secreción de ion cloruro en las
colonias (3-hemolíticas en los medios de agar que contienen sangre humana, pero no
además como receptor para el fago ctxφ, que contiene los genes para la síntesis de
tcpA, que presenta alta variabilidad según lo descripto recientemente (Nandi et al,
bacteria le permite escapar del reconocimiento por el sistema inmune del huésped.
termoestable (ST) entre otros. Por lo tanto el estudio de la distribución de los distintos
2.7. AISLAMIENTO:
enriquecimiento que sea selectivo, como el TCBS (que contiene tiosulfato, citrato,
Una vez obtenido en cultivo puro, se procesa la muestra mediante diversos tests
Crecen con rapidez en agar peptona, agar sangre con pH cercano a 9,0; o sobre agar
3. DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO:
3.1. Microscopía
Las especies de Vibrio son bacilos gramnegativos curvados de pequeño tamaño (0,5 x
1,5 a 3 um). Estos microorganismos nose suelen observar en las muestras de heces ni
de heridas teñidas con Gram; no obstante, un observador con experiencia puede ser
3.2. Cultivo
Las muestras se deben obtener en la fase inicial del proceso e inocularse rápidamente
Los vibrios sobreviven mal en el tampón de glicerol salino, el medio de transporte que
se usa para la mayoría de los patógenos entéricos. Los vibrios crecen en la mayor
parte de los medios que se usan en los laboratorios clínicos para los coprocultivos,
agar selectivos especiales para vibrios (p. ej., agar de tiosulfato-citrato-sales biliares-
sacarosa [TCBS]), así como caldos enriquecidos (p. ej., medio alcalino enriquecido
con agua de peptona; pH 8,6). Las cepas se pueden identificar por medio de pruebas
América Latina en enero de 1991 (Levine, 1991), luego de 100 años, en forma de una
explosiva epidemia que comenzó en Perú. Esta epidemia fue causada por V. cholerae
O1 biotipo El Tor. En Argentina, entre 1992 y 1998 ocurrieron siete brotes de cólera,
En los últimos años, se registró una disminución en el número de casos, como también
sostener una continua vigilancia para prevenir futuros brotes, especialmente ante la
(Binsztein 2004).
5. INMUNOSUERO
Sistema inmunitario:
a este fenómeno los microorganismos y las células malignas son reconocidos como
Las células del sistema inmune y las moléculas producidas por ellas, mantienen una
memoria de este encuentro, para iniciar una defensa más activa y completa si el
defensa. Varios de ellos actúan desde el primer contacto con un agente patógeno
productos.
TIPOS DE INMUNIDAD
Inmunidad Natural
microorganismos patógenos.
El conjunto de procesos que protegen a cada individuo del primer ataque por los
Inmunidad Adquirida
a un proceso de aprendizaje que tiene lugar durante el primer contacto al huésped con
el agente patógeno. Mediante este contacto se programan grupos de linfocitos para
iniciar una respuesta inmune, rápida y eficaz en caso de que el mismo agente
Inmunidad Activa
por el mismo germen, evitar que se presente la enfermedad bien sea por producción
agresor. Este tipo de inmunidad explica la resistencia que se adquiere contra algunas
Inmunidad Pasiva
infección sin que el sistema inmune del individuo haya tenido contacto con el agente
patógeno. Este mecanismo explica también que contra las infecciones que tiene el
recién nacido, gracias a los anticuerpos que recibe de la madre al placenta y que le
Inmunoglobulina
Los anticuerpos son inmunoglobulinas. Esta seroglobulinas son de movilidad
antígeno.
Se encuentran en el suero y otros humores y tejidos del cuerpo. Existen 5 tipos: IgA,
← IgM: Está formada por cinco unidades básicas de inmunoglobulina unidas entre
si por una pieza J y se encuentra presente en el plasma. Tiene diez sitios de unión
una potente fijadora del complemento, al presentar cinco fragmentos Fc que unen
estas células.
y digestivo. Está formada por dos unidades básicas unidas por una pieza secretora
sintetizada por las células epiteliales de las mucosas. Esta pieza secretora es un
poli péptido responsable del trasporte de la IgA a través del epitelio. Además la
especialmente helmintos.
SISTEMA INMUNE.
El sistema inmune de los vertebrados superiores está compuesto por una variedad de
por contacto físico o a través de factores solubles que ejercen su función en células
con receptores específicos. Las células que forman el sistema inmune se organizan a
su vez en tejidos y órganos, estructuras que reciben el nombre genérico de sistema
mientras que los periféricos son los lugares de interacción entre las distintas células y
tienen como misión proveer un ambiente favorable para que se desencadenen las
respuestas inmunológicas.
Ya vimos en el capítulo anterior cuáles eran los tipos celulares fundamentales tanto de
la inmunidad innata como de la adquirida. Todas las células del s. inmune provienen
médula ósea, allí existen stem cells que dan lugar a todas las células. Las células stem
Del progenitor mieloide o promielocito derivan los eritrocitos e inflamocitos, este último
· Mastocitos,
Existen múltiples células dendríticas con distintos precursores (tanto mieloides como
· Linfocitos B,
· Linfocitos NK
Anticuerpo
cadenas pesadas con cuatro dominios Ig, mientras que en verde se muestran las
cadenas ligeras. Entre el tallo (Fracción constante, Fc) y las ramas (Fab) existe una
fluidos corporales de los vertebrados, disponiendo de una forma idéntica que actúa
como receptor de los linfocitos B y son empleados por el sistema inmunitario para
El anticuerpo típico está constituido por unidades estructurales básicas, cada una de
ellas con dos grandes cadenas pesadas y dos cadenas ligeras de menor tamaño, que
forman, por ejemplo, monómeros con una unidad, dímeros con dos unidades o
pentámeros con cinco unidades. Los anticuerpos son sintetizados por un tipo de
contribuyendo a dirigir la respuesta inmune adecuada para cada distinto tipo de cuerpo
esta parte de la proteína se la conoce como región hipervariable. Cada una de estas
variantes se puede unir a una "diana" distinta, que es lo que se conoce como antígeno.
otras partes del sistema inmunitario. Los anticuerpos también pueden neutralizar sus
del gen del anticuerpo, lo cual origina una diversidad aún mayor. Los genes de los
clase de inmunoglobulina que cambia la base de la cadena pesada por otra, creando
antígeno diana. Esto posibilita que un solo anticuerpo pueda ser usado por las
Antígeno
La definición moderna abarca todas las sustancias que pueden ser reconocidas por el
Cada antígeno está definido por su anticuerpo, los cuales interactúan por
convertirse en inmunógeno.
Las células presentan los antígenos al sistema inmune mediante una molécula de
Inmunosueros:
sanguíneos.
Monoclonal
Son anticuerpos que se forman de una sola clona de células y que por lo tanto esta
formada por una sola inmunoglobulina. Puede preparase por fusión de una célula de
Policlonal
naturaleza precisa de sus regiones variables pero todas reaccionan solo con el
antígeno no pertinente.
6. PRUEBAS INMUNOLOGICAS
masas y existen factores externos que pueden modificar dicha unión, como son: el pH,
6.2. AGLUTINACIÓN
superficie de una partícula o de una célula. Estas reacciones son más sensibles que
esferas de látex o arcilla coloidal y de esta manera pueden ser detectados los
de aglutinación pasiva.
alícuotas de esta, AcA, AcB, AcRH un control positivo y uno negativo. Según la
AGLUTINACION INDIRECTA:
utilizan hematíes y partículas de látex. Puede usarse el tamino como pegamento, entre
ser una técnica diseñada para su uso cualitativo, puede hacerse semicuantitativa
denomina título a aquella dilución del suero que todavía no ha perdido su acción.
La mejor Ig para realizar este tipo de técnicas es la Ig M, puesto que es la que mayor
tienen mucha carga negativa, y se repelen si están muy cerca, haciendo imposible que
MATERIALES Y METODOS:
MATERIALES:
BIOLOGICOS:
Alfalfa
INSTRUMENTOS:
6 viales
Asa de kolle
Mechero
Papel filtro
Varilla de vidrio
4 placas de petri
Espátula de drigaski
10 tubos de ensayo
Vaso precipitado
Papel aluminio
10 tuberculinas
2 agujas de 10 ml
Pipeta de Pasteur
Frascos de vidrio
Latas
Algodón
REACTIVOS:
Acetona
Metanol98%
SSF 0.98%
Alcohol
Xilol
APARATOS:
Microscopio
centrifuga
METODOS REALIZADOS:
determinar su pureza.
elimina el sobrenadante
microbiana con una serie de tubos que contiene diferentes concentraciones de los
reactivos de preparación:
Nº de 0.5 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
t tubos
solución:
Cl2Ba 1%ml 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0
H2SO41%ml 9.95 9.9 9.8 9.7 9.6 9.5 9.4 9.3 9.2 9.1 9.0
[ ] de m.o mil/ml
150 300 600 900 1200 1500 1800 2100 2400 2700 3000
4. INOCULACON DEL ANTIGENO EN EL CONEJO
hasta la sexta inoculación del cual según las técnicas se volverá a inocular la
Luego se le deja reposar por una semana para que su organismo asimile el
antígeno.
reacción frente al antígeno. en el que se toma una gota del suero y una gota
Fechas de inoculación
05 06 07 08 09 10 11
12 13 14 15 16 17 18
19 20 21 22 23 24 25
INOCULACIÓN:
AGLUTINACIÓN: Reacción suero+ dilución del pellet
DISCUSIÓN:
guardar memoria de este encuentro, para iniciar una defensa más activa y
Las inoculaciones destinadas son 6, pero según el autor agrega una última con
anticuerpos, luego de ello se deja reposar al conejo por una semana tiempo en
la cual el inoculo desparece por completo del fluido sanguíneo del conejo.
antígenos.
CONCLUSIÓN:
La vía de inoculación fue por vía intravenosa para lo cual se utilizó la vena
escala de Mac Farland, las dosis que se utilizaron fueron incrementado para
RECOMENDACIONES:
los materiales.
Los laboratorios deben de estar disponibles para todo aquel alumno que realiza
Tener siempre presente las técnicas a realizar, seguir paso a paso el protocolo,
ejecución del trabajo de investigación ya que esto representa alto riesgo para la
REFERENCIA BIBLIOGRAFICA:
Patríck R. Murray, Ken S. Rosenthal, Michael A. Pfaüer ,” MICROBIOLOGÍA
Kelly MT, Hickman-Brenner FW. Vibrio. En: Balows WJ, et al. Manual of clinical
1991;384-95.
http://www.britanialab.com/espanol/k06_03.html
http://www.cepis.ops-oms.org/eswww/fulltext/repind41/Aisla/Aisla.html
anticuerpos. El término se aplica a los glóbulos rojos, las acterias o partículas inertes
recubiertas de antígeno.
Centrífuga: Máquina que separa los distintos componentes de una mezcla por la
acción de la fuerza centrífuga. Ésta es una fuerza de inercia que se manifiesta en todo
cuerpo hacia fuera cuando se le obliga a describir una trayectoria curva. Es igual y
contraria a la centrípeta.
actuará una enzima: Por ejemplo: las enzimas que cortan las cadenas de proteínas
Polivalente. Cuando son efectivos contra una amplia gama de especies, o varias