Exercícios de revisão – Tecnologia do DNA

recombinante
1-Descreva as definições de:
a) DNA recombinante: DNA Recombinante são moléculas de DNA que
possuem fragmentos de DNA derivados de duas ou mais fontes,
geralmente de espécies diferentes

b) Enzimas de restrição: Uma enzima de restrição ou endonuclease de

restrição é um tipo de nuclease que cliva a dupla fita de DNA sempre que
identificar uma seqüência particular de nucleotídeos que seja o sítio de
reconhecimento da enzima.

c) Clonagem molecular: É o isolamento e a propagação em um organismo

de moléculas idênticas de DNA.

2-Com relação a molécula de DNA recombinante, marque a alternativa

correta:

I. São moléculas de DNA que possuem fragmentos de DNA derivados de

duas ou mais fontes;
II. Os materiais genéticos utilizados sempre são oriundos de espécies
diferentes para que ocorra a formação da molécula recombinante;
III. Possui como aplicações a produção de substâncias úteis como
insulina humana, hormônio de crescimento, vacinas, enzimas
industriais;
IV. A clonagem molecular é a técnica central da metodologia do DNA
recombinante e consiste na transferência de um gene de um
organismo para outro, ou seja, a recombinação de DNA proveniente de
diferentes fontes;
V. A técnica de DNA recombinante não pode ser aplicada no processo de
investigação de paternidade.
a) São corretas apenas as afirmações I, II e IV
b) São corretas as afirmações I, II, III e IV
c) São corretas apenas as afirmações I e III
d) São incorretas as afirmações II e V
e) São incorretas as afirmações II, IV e V

3 - Indique as nomenclaturas das seguintes enzimas:

a) Enzima de restrição obtida da bactéria Bacillus amyloliquefaciens, da cepa
H, sendo esta a 1ª enzima descrita: BamHI
b) Enzima de restrição obtida da bactéria Escherichia coli, da cepa R, sendo
esta a 1ª enzima descrita: EcoRI

4 – Quais são os tipos de cortes das enzimas de restrição? Diferencie-os.

As enzimas de restrição são capazes de cortar o material genético
através de um corte assimétrico ou um corte simétrico. Os mesmos
diferenciam-se com relação aos tipos de fragmentos gerados, sendo o
corte assimétrico responsável por formar fragmentos coesivos e o corte
simétrico gerando fragmentos abruptos.
5- O que são vetores? Quais são as características essenciais de um
vetor de clonagem e de expressão?
Em Biologia Molecular, um vetor significa uma molécula de DNA com
replicação autônoma, na qual um fragmento de DNA estranho pode ser
inserido para a sua multiplicação em uma célula hospedeira ou para a
integração em uma célula hospedeira ou para a integração no genoma.
Alguns vetores são construídos especificamente para promover a
expressão do gene inserido. Dentre os vetores de DNA mais comuns
estão os plasmídeos.As principais características de um vetor de
clonagem são: replicação autônoma, marcador de seleção(antibiótico),
sítio único de clonagem. Já as características de um vetor de expressão
são: promotores induzíveis, sinais de secreção, fusão com proteínas
carreadoras e necessidade de um promotor forte(de um RBS e um ATG).

6 - Relacione os tipos de vetores com as afirmações abaixo.

a) Vetor plasmidiais; b) Bacteriofogos; c) Cosmídeos;
(B ) Vírus que infectam bactérias.
(A ) Utilizados para clonar fragmentos de até 9 kb.
(C ) São moléculas de DNA circulares extracromossomais que combinam as
vantagens de um plasmídeo com a de um bacteriófago.
(C ) Utilizados para clonar fragmentos de 25 a 35 kb.
( A) São moléculas de DNA circulares extracromossomais que se replicam
autonomamente em células bacterianas hospedeiras.
(B ) Utilizados para clonar fragmentos de 9 kb a 25 kb

7- Cite e explique as etapas da construção de um micro-organismo

recombinante.
1. Obtenção do DNA a ser clonado (Extração de DNA; - PCR -
Digestão - Purificação)
2. Preparação do vetor
3. Ligação do vetor com o “inserto”
 4. Transformação da bactéria (choque térmico, eletroporação)
5. Seleção dos clones recombinantes
8- Com relação aos vetores, marque a alternativa correta.
I. A replicação autônoma e sítio único de clonagem são características
essenciais para um vetor de clonagem;

II. Vetores de expressão necessitam de um promotor forte, de um RBS e

de ATG;

III. Promotores induzíveis, sinais de secreção e fusão com proteínas

carreadoras também são características vetor de clonagem;

IV. A utilização de marcador de seleção, como antibióticos, é essencial

em um vetor de clonagem.

a) Todas as alternativas estão corretas

b) Apenas as alternativas I e IV estão corretas
c) As alternativas II e III estão incorretas
d) As alternativas I, II e IV estão corretas
e) Todas as alternativas estão incorretas

9) A preparação de células competentes é um procedimento importante na

construção de um micro - organismo recombinante e visa estimular as células
bacterianas a captarem DNA solúvel no meio. Explique dois métodos de
preparação de células.
A eletroporação que é uma técnica em que um campo eléctrico é aplicado nas
células de modo a aumentar a permeabilidade da membrana celular, permitindo
que produtos químicos, medicamentos ou DNA possam ser introduzidos na
célula. O choque térmico é o processo onde é criando uma diferença de
temperatura entre o interior e o exterior da célula bacteriana, o que promove a
abertura dos poros na membrana bacteriana, auxiliando na entrada do DNA
através desses canais.