“AÑO DE LA PROMOCIÓN DE LA INDUSTRIA RESPONSABLE Y DEL COMPROMISO CLIMÁTICO ”

UNIVERSIDAD NACIONAL

“SANTIAGO ANTUNEZ DE MAYOLO”

“CIENCIAS DEL AMBIENTE”

“ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL DE INGENIERIA

AMBIENTAL”

TEMA

Informe de Laboratorio N° 01

“Aislamiento y selección de hongos Filamentosos””

ASIGNATURA

BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL

DOCENTE

Tamariz Ángel Carmen

ESTUDIANTES

 Duran Prudencio Luis

 Villanueva Rosas Diego
 Villavicencio Guillen Eduardo
 Tarazona Mendoza Jhonior

INTRODUCCIÓN

HUARAZ - DICIEMBRE – 2014

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El estudio y la dedicación abocada al aprovechamiento de organismos

modificando su material genético, aislándolos, otorgan al hombre una gran

herramienta para combatir las necesidades de las sociedades modernas.

Ejemplos claros de ello son los antibióticos, las enzimas, los cultivos mejorados,

entre otros. El aspecto económico es una característica muy importante de la

biotecnología, ya que se obtiene de la naturaleza y a través de tecnologías

innovadoras se consigue óptimos resultados. Algunas baterías aportan al medio

sustancias residuales que son aprovechables para el hombre y en medios

controlados en los laboratorios se consigue aislarlos para que su uso se masifique.

En el presente informe detallaremos las cualidades de los organismos en este

caso hongos para sintetizar enzimas de beneficio para el hombre, a través de

técnicas de aislamiento y actividad enzimática se logra obtener un producto puro

con capacidad de producir beneficio económico entre otros.

Objetivos:

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 Aislar las especies de hongos filamentosos de muestras de compost para su uso y

aprovechamiento.
 Sinterizar enzimas producidas por los hongos aislados para su uso y optimización.
 Verificar la actividad enzimática de las especies aisladas.
 Adiestrar a los alumnos en técnicas de aprovechamiento de biorremediación

Metodología (Procedimiento)

Laboratorio n°01 “preparación de materiales” (medio de cultivo)

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Se realizó un aislamiento y selección de hongos celuloliticos provenientes del compost aplicando la

siguiente metodología.

medio selectivo: carboximelo celulosa

medios consales + estreptomicina + Agar
sustrato carbonado Agar (1.5) + tripton x 100
selectivo (0.1%)

Esterelizar pipeta 1ml

1 fasco 90ml de H2O

siembra por diluciones
disolucion

aislar y seleccionar en 5 tubos con 9ml de H2O

tubos de TSA (banco) deisolucion

produccion enzimatica 3 placas petri

actividad enzimatica

seleccion final

Para una buena nutrición en el medio tiene que haber una fuente nitrogenada y fuente
carbonada. La estreptomicina es un antibiótico que se usa para eliminar las bacterias,
triton x100 (0.1%) impedirá el crecimiento de las colonias, para tenerlas aisladas.

Laboratorio N°02 Siembra por diluciones sucesivas de suelo

Materiales:

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 Botella con muestra de suelo

 Pipetas graduadas (5 ml)
 Tubos de ensayo (5 unidades)
 Gradilla porta tubos de ensayo
 Placas Petri de vidrio (3)
 Papel Graf
 Mechero bunsen
 Asa bacteriológica

Procedimiento:

1. Se procede a diluir 10gr de muestra de suelo en 90 ml de agua destilada.

90
ml
H2O

2. con la muestra preparada en el recipiente se procede a realizar las diluciones sucesivas en

el siguiente orden. (0.1 ml – 1 ml – 1 ml – 1 ml – 1 ml).

0.1 ml

1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml

10-1 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7

3. luego se procede a sacar de las diluciones (10 -5 / 10-6 / 10-7) 0.1 ml de solución y se siembra
en las placas Petri por separado.

10-5
Medio de cultivo

Medio de cultivo
4. 10-6 Cada medio de cultivo tiene los siguientes componentes.
 10-7 Agar Bushnell Hoas
 Sulfato de magnesio 0.2 g/l
Medio de cultivo

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 Cloruro de calcio 0.02 g/l

 Mono fosfato de potasio 1.00 g/l
 Difosfato de potasio 1.00 g/l
 Nitrato de amonio 1.00 g/l
 Cloruro de hierro 0.05 g/l
 Carbohidrato (Cel. /Xil. / Alm. ) 10.00 g/l

Se encuentra a un pH de 7.00

Laboratorio N°03 “SEPARACION DEL HONGO DE LA ENZIMA“

MATERIALES:

1. Tubos centrifuga o tubos falcón 14ml

2. Microtubos 2ml

EQUIPOS

1. Mechero
2. Centrifugadora
3.

PROCEDIMIENTO:

1. Tomamos los tubos de las siembras de 10−5 ,10−6 , 10−7 ; separamos 10ml para colocarlos
a los tubos falcón para luego llevarlos a la centrifugadora durante una hora.
La separación se hiso de acuerdo a las diluciones.

2. Luego de retirar los tubos falcón procedemos con cuidado (sin agitar) a retirar la en zima
colocándolos a los microtubos de 2ml.

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3. Y guardamos la enzima en la refrigeradora.

Laboratorio N° 04 “Actividad Enzimática”

Celulasa ………………celulosa

Enzimas del Xilanasa ………………xilano Sustrat

extracto o
Amilasa ………………..almidón

Azucares reductores

(1,2,3,….monómeros

0.25ml extracto + 0.5ml sustrato

Incubar a 36 °C
por una hora

Nuestras muestras por un

inconveniente no se incubaron A
lo que supone alteración de gr
resultados e
g
a
m

0.5ml de DNS (reactivo de ácido denitro

Hervir 7 min en agua a
Luego salicílico) que cuantifica azucares reductores
92°C

Enfriamos en agua
corriente
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0.5 de sustrato
H. SUSTRATO 0.25 de buffer
B1 B2 B3
H. MUESTRA 0.5 de sustrato 0.5 de sustrato 0.5 de sustrato
0.25 de buffer 0.25 de buffer 0.25 de buffer
1 2 3
MUESTRA 0.25 de muestra 0.25 de muestra 0.25 de muestra
0.5 de sustrato 0.5 de sustrato 0.5 de sustrato

RESULTADOS:

 Dilución 105
 168ufcBC/suelo
 Circulares, de color blanco y anaranjado
 Tamaño: mediano
 Colonias con puntos negros al centro
 El crecimiento del hongo es similar al algodón

 Dilución 106
 49ufcBC/suelo
 Circular
 Umbonada
 El crecimiento del hongo es similar al algodón

 Dilución 107
 5ufcBC/suelo
 Circular
 Planos
 El crecimiento del hongo es similar al algodón

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CONCLUSIONES:

 Durante el proceso de incubación no se puedo obtener resultados, concluyentes pues la

temperatura no fue la óptima para el desarrollo de las muestras.
 La carencia de color en los tubos de ensayo evidencia la poca actividad enzimática en las
muestras.
 La falta de coloración en las muestras dificulto los cálculos por medios físico químicos en el
espectrofotómetro.

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