UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICA

LABORATORIO DE FISICOQUÍMICA

Bioquímica Clínica

INTEGRANTES: ​Carrera Villegas Sofía, Lalvay Evelin, Sisalima Samantha

TEMA: Estudio de catálisis en la hidrólisis de la urea por medio de la ureasa

1. Resumen

Se estudió el proceso de catálisis en la hidrólisis de la urea por medio de la ureasa con la finalidad
de determinar las características predominantes del sistema, como la variación de entalpía que
acompaña la energía de la reacción a partir de sus elementos constituyentes, el grado de desorden de
la reacción si presenta un aumento o disminuye (entropía) y las condiciones de equilibrio y
espontaneidad para una reacción (energía libre de Gibbs). Para llevar a cabo dicha experimentación
se recurrió en primera instancia a un calorímetro de tal manera que arroje los valores necesarios de
temperatura, proporcionando así la mayor parte del estudio y consecutivamente se utilizó un
potenciómetro para encontrar la naturaleza de las sustancias de estudio y determinando así la
efectividad de la práctica en la actividad catalítica de la enzima ureasa empleada. Es así, que se
obtuvo un valor de 63,78 KJ/mol para la entalpía de la reacción lo cual denota que fue un proceso
endotérmico (+), se obtuvo un valor de 104,227 J/Kmol, ​observàndose un incremento de ​entropía
positivo, por lo tanto se establece que los productos presentan un mayor desorden molecular (mayor
entropía) que los reactivos y finalmente se obtuvo un valor de -130,03 KJ/mol, observando que ​l​a
energía de Gibbs es menor a 0, de tal manera que se establece que la reacción es espontánea.

2. Introducción

Los organismos vivientes excretan el exceso de nitrógeno que resulta del metabolismo proteico de
varias formas, uno de estos productos es la urea, compuesto químico cristalino e incoloro, de fórmula
(NH​2​)​2​CO​, la cual al reaccionar con agua genera una disolución que experimenta cambios de energía
y una variación en el grado de desorden influenciado por la temperatura.
La descomposición de la urea genera amoniaco que puede descomponerse a hidrógeno y
nitrógeno. Además es un recurso barato y abundante si se obtiene biológicamente de los residuos
urbanos, o mediante la transformación de los productos de desecho de organismos ureotélicos. Es así
que en el presente informe se tratará la hidrólisis de la urea mediante la ureasa como catalizador
tomando en cuenta que esta se encuentra en el citoplasma de bacterias, hongos y levaduras, y al
momento de liberarse en el interior del ser humano y animales interviene en procesos bioquímicos,
digestivos y metabólicos. (Rodríguez-Jiménez & col ,2016)
La actividad de la ureasa en los productos derivados de la soja se analiza mediante la determinación
del nitrógeno liberado en un minuto como consecuencia de la actividad de la enzima presente en la
muestra, sobre una solución añadida de urea en este tipo de reacción indica eficacia en la inhibición
térmica a la que es sometido el producto. Las respuestas a este catalizador pueden ser inactivación de

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antinutrientes o factores antinutricionales, de naturaleza proteica y diferente termoestabilidad; ya que

la ureasa es igualmente inactivada en este proceso, lo que ocasiona que también disminuya
notoriamente la actividad ureásica que está presente en la soja después del tratamiento térmico.
(Blanco, J. & Linarte, R. ,2006)
El proceso que será estudiado en la práctica es el cambio de entalpía, entropía y energía libre de
Gibbs por medio de la siguiente reacción ​(NH​2​)​2​CO​ + ​H​2​O (ureasa) ​CO​2​ + 2​NH​3 empleando la
ureasa como catalizador para evidenciar cómo fluye el calor en el sistema y los intercambios
energéticos entre reactivos y productos que existen de manera independiente, para cada cada
sustancia aparece una entropía determinada, en una reacción química habrá una variación de la
misma que indica si el grado de desorden en la reacción aumenta o disminuye partiendo de este
parámetro se analizará la segunda ley de la termodinámica para conocer si la reacción es espontánea
y está en equilibrio así como el grado de desorden o viceversa. (Bilbao. Laidler. K. J, 2009).
3. Métodos

Materiales y Reactivos

balanza analítica centrífuga

matraz volumétrico de 25mL tubos de centrifugar

termómetro calorímetro

urea cloruro de sodio

H2O ureasa
Elaborado por Sisalima S;Lalvay E;Carrera S.

● Procedimiento

Determinación del equivalente térmico del calorímetro.

1. Se colocó en el calorímetro isobárico perfectamente limpio y seco 50g de agua destilada fría
y se procuró que el sistema llegue al equilibrio térmico agitando adecuadamente el
calorímetro.
2. Se añadió en el calorímetro con el agua fría, 50 g de H​2​O destilada caliente a una temperatura
no mayor de 35°C.
3. Se cerró el calorímetro y se agitó el contenido adecuadamente hasta que el sistema llegó a un
nuevo equilibrio térmico.

Extracción de ureasa de la harina de frijol de soja

Método salting- in

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1. Se pesó 1,0 g de harina y se disolvió en 5 ml de NaCl al 0,2N.

2. La disolución antes descrita se agitó durante 3 minutos.
3. Se llevó la disolución al tubo de centrífuga y se centrifugó a 3500 rpm durante 5 min.
4. Se descartó el precipitado y se llevó el sobrenadante a un matraz de 25 mL.
5. La enzima obtenida en el centrifugado se midió el pH de ureasa con ayuda del potenciómetro.

Proceso de hidrólisis de urea

1. Se pesó con precisión 1g de urea comercial y se disolvió en 17 g de agua destilada(una vez

medida su temperatura) dentro del calorímetro.
2. Se cerró el calorímetro, y se agitó por 15 segundos y se volvió a medir la temperatura (T2)
por efecto del proceso endotérmico de disolución.
3. Se determinó ΔH, ΔS, ΔG.

Resultados

Equivalente químico del calorímetro empleado​ = ​10,0967 ± 13,36​%

Tabla N°1:​Datos registrados del experimento

Masa de Masa pH de la T ºC Masa de pH de pH final T ºC

urea (g) de disolución ureasa ureasa
H2O(g) agregada
1,00 17 6,6380 20 4, 1034g 5,230 7,1820 25
6,7090 4,1354g 7,2920
6,8375 4, 1721g 7,5745
Se muestran las variaciones de pH tras la adición de ureasa
Autores:​ Carrera S, Lalvay E, Sisalima S.

Determinación de la entalpía de disolución de urea

UREASA
(NH​2​)​2 ​CO(s) +3H​2​O(l) CO​2 (g)​+ 2 NH​4​OH(aq)

ΔH°Rx= Ʃɤiproductos- Ʃɤireactivos

ΔH°Rx= 2(-366,7)KJ/mol + 1(-393,51 KJ/mol)) - 1(-333,2KJ/mol) + 3(-285,830KJ/mol)
ΔH°Rx=63,78 KJ/mol

Tras la determinación de la entalpía positiva se puede notar que la reacción ha ganado calor de los
alrededores al sistema.

Determinación de la entropía de disolución de urea

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UREASA
(NH​2​)​2 ​CO(s) +3H​2​O(l) CO​2 (g)​+ 2 NH​4​OH(aq)

ΔS°= Ʃɤiproductos- Ʃɤireactivos

ΔS°= (1*213,677 J/Kmol + 2( 165,56 J/K mol) – (1*104,6 J/K mol- 3(69,950 J/K mol)

ΔS°= ​650,037 J/Kmol

Se observó un incremento de entropía positivo, por lo tanto se establece que los productos presentan
un mayor desorden molecular (mayor entropía) que los reactivos.

Determinación de la energía libre de Gibbs de disolución de urea

UREASA
(NH​2​)​2 CO(s)
​ +3H​2​O(l) CO​2 (g)​+ 2 NH​4​OH(aq)

ΔG​ RX​= ΔH​ RX​ - TΔS​RX

ΔG​ RX​= 63,78 KJ/mol- (298,15 K) (0,650037 KJ/Kmol)
ΔG​ RX​= -130,03 KJ/mol

Se observó que la energía libre de Gibbs es menor que 0, lo cual nos indica que su reacción es
espontánea o de manera natural.

4.Discusión

Se añadió ureasa previamente diluida a la solución de urea para acelerar la actividad de las
sustancias presentes en la reacción, de tal manera que su ausencia generaría una reacción
cuantiosa.“La ureasa es una enzima que específicamente, cataliza la hidrólisis de la urea para
producir hidróxido de amonio y anhídrido carbónico de manera espontánea. La actividad de la ureasa
tiende a incrementar el pH del medio en el que se encuentra debido a la producción de hidróxido de
amonio como se pudo notar en la tabla N°1 donde a mayor cantidad de ureasa el pH se incrementa,
es decir que se trata de una relación directamente proporcional. ” (Clínica DAM, 2017)

Un proceso de disolución de urea suele ir acompañado de una absorción o desprendimiento de

calor referido a una mol de sustancia, que se conoce con el nombre de “calor molar de disolución” ya
que depende de la cantidad de disolvente y del soluto, por ello durante el desarrollo teórico de la
entalpía se observó un valor positivo, indicando que de manera experimental la reacción fue
endotérmica, es decir que el sistema absorbió calor de los alrededores al momento de desplazarse
hacia los productos los cuales poseen una mayor energía potencial. (Rodríguez, 2002)

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En la entropía de disolución de la urea dio como resultado un valor positivo, lo cual conlleva a
establecer que se trata de un proceso endotérmico, en la experimentación se observó un aumento de
temperatura en dicha disolución tras colocar el catalizador(ureasa) ”La entropía permite medir la
parte no utilizable de la ​energía contenida en un ​sistema​. Esto quiere decir que dicha parte de la
energía no puede usarse para producir un trabajo.La entropía de formación de un compuesto químico
se establece midiendo la entropía que conforma a cada uno de sus elementos constituyentes.”(Porto,
2011)
“A mayor entropía de formación, más favorable será su formación. ​Cuanto mayor sea la temperatura
de una sustancia mayor será el movimiento de sus partículas, está más desorganizada y por tanto,
mayor será su entropía. Cualquier evento acompañado por aumento en la entropía del sistema tiende
a suceder de forma espontánea”. (González, 2010)

La energía de Gibbs es menor a 0 lo que nos dice que la reacción es espontánea. “La palabra
“espontáneo”, tal y como se emplea en sentido termodinámico lo único que nos quiere decir que el
cambio de estado es posible. La termodinámica no nos sobre el tiempo que debe transcurrir para la
transformación se realice. Por ejemplo la termodinámica predice que la reacción entre la área con el
agua para producir NH​4​OH y CO​2 , es espontánea. Sin embargo, en ausencia de un catalizador en
nuestro caso la ureasa para formar NH​4​OH no tiene lugar en una cantidad de tiempo mensurable. El
tiempo requerido para que una transformación espontánea alcance el equilibrio, no es materia de
termodinámica, sino de la cinética. Mientras la termodinámica nos informa sobre lo que puede
suceder, la cinética nos dice si el hecho se realiza en mil años o en una millonésima de
segundo”.(Castellan, 1987)

Referencias

Bilbao. Laidler. K. J. (2009) Cinética de reacciones: Reacciones en Disolución. (2ª. Ed).

Alhambra. México.

Blanco, J. & Linarte, R. (2006) CATÁLISIS: Fundamentos y Aplicaciones Industriales, Trillas,

México. Brennan, D. & Tipper, C. F. H. (1974) Manual de laboratorio para prácticas de
fisicoquímica. (1a ed).
Clínica DAM. (2017). Análisis clínico:Prueba de ureasa. Obtenido de
https://www.clinicadam.com/laboratorios/analisis-clinicos/prueba-de-ureasa.html

Rodríguez-Jiménez, T. de J., Ojeda-Barrios, D. L., Blanco-Macías, F., Valdez-Cepeda, R. D., &

Parra-Quezada, R. (2016). Ureasa y níquel en la fisiología de las plantas. ​Revista Chapingo Serie
Horticultura,​ ​XXII(​ 2), 69-81. https://doi.org/10.5154/r.rchsh.2014.11.051

J. P. Porto, «Entropía,» 2011. [En línea]. Available: https://definicion.de/entropia/.

M. Gonzáles, «Entropía,» 10 Mayo 2010. [En línea]. Available:

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https://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/concepto-de-entropia.

Castellan, G. W. (1987). ​Fisicoquímica.​ Delaware: Addison-Wesley iberoamericana S.S. .

Anexos

Figura 1. Preparación de la disolución Figura 2. Medición del pH de la

de urea en agua disolución de urea y agua

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Figura 4. Preparación de extracto de soya

Figura 3. Preparación de la solución de
NaCl 0,02N

Figura N°6 Comprobación de la

desnaturalización de la enzima en la
Figura 5. Medición de los diferentes pH del solución
extracto de ureasa

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