BIOMED Guía No. 4. Actividad Enzimática de Catalasa

UNIVERSIDAD MILITAR NUEVA GRANADA
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE CATALASA
Identificación:
GL-AA-F-1
Guías de Prácticas de Número de
Revisión No.:
Páginas:
Laboratorio 2
22
Fecha Emisión:
2018/01/31
Laboratorio de:
BIOQUÍMICA
Título de la Práctica de Laboratorio:

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:
María Claudia Sandoval, Dr. Martha Catalina Rozo, M.Sc. Comité Asesor de
Sc Departamento de Química
Docente Departamento de Docente Departamento de

Química Química
Pagina 1 de 22
El uso no autorizado de su contenido así como reproducción total o parcial por cualquier persona o entidad, estará en
contra de los derechos de autor
Control de Cambios
Fecha de
Descripción del Cambio Justificación del Cambio Elaboración /
Actualización
El procedimiento anterior
era muy extenso para el
Modificación del procedimiento Julio 2019
tiempo de realización de la
práctica
Pagina 2 de 22
1. FACULTAD O UNIDAD ACADÉMICA: Facultad de Ciencias Básicas y

Aplicadas
2. PROGRAMA: Ingeniería Biomédica
3. ASIGNATURA: Bioquímica
4. SEMESTRE: Segundo
5. OBJETIVOS:
• Evaluar la actividad de la catalasa en presencia de reguladores no

específicos.
• Determinar el efecto del pH sobre la velocidad de reacción.
• Identificar el efecto de la temperatura sobre la velocidad de la reacción.
• Establecer algunas diferencias entre extractos enzimáticos de varias
fuentes
MARCO TEÓRICO
ENZIMAS
Las enzimas son proteínas que tienen la función de catalizar reacciones químicas. Su
naturaleza proteica las hace susceptibles de cambios en su estructura en diferentes
condiciones lo cuales generan cambios en su actividad.
La actividad enzimática está sujeta a diversas variables entre las que se encuentran
temperatura, pH, concentración del sustrato, concentración de enzima y la presencia de
inhibidores. Como cada enzima tiene unas condiciones óptimas diferentes, es necesario
estudiar las condiciones en las que la enzima tiene la actividad más alta, especialmente de
temperatura y pH, por medio del empleo de buffers y termostato.
El curso de una reacción enzimática puede medirse de dos formas:
a) Medición del sustrato que se transforma

b) Medición del producto formado
El método escogido va a depender de la enzima particular, encontrando un método

cuantitativo apropiado.
El mecanismo que permite que las enzimas incrementen la velocidad de la reacción es la

reducción de la energía libre de activación requerida para transformar un sustrato al
producto correspondiente, sin afectar la constante de equilibrio.
V1
V2 Pagina 3 de 22
A+B ⇌ C + D
[C][D]
Keq =
[A][B]
v1 = Velocidad de la reacción para formar los productos

v2 = Velocidad de la reacción para formar los reactivos
Keq = Constante de equilibrio
[ ] = Concentración molar.
A continuación, se presenta un resumen de las características que distinguen a una enzima:
1. Es una proteína.
2. Resulta muy específica para el sustrato.
3. Incrementa la velocidad de la reacción.
4. No modifica la constante de equilibrio (Keq).
5. Se modifica de manera temporal, pero esta modificación no persiste al final de la
reacción, ni forma parte de los productos.
6. Requiere condiciones óptimas para la catálisis.
La actividad de una enzima se evalúa de acuerdo con la velocidad de la reacción. La

cinética enzimática estudia la velocidad de la reacción enzimática, los factores que la
modifican y el mecanismo de la reacción. Los factores fisicoquímicos que modifican la
actividad de la enzima son los siguientes:
1. Concentración del sustrato.

2. pH.
3. Temperatura.
4. Tiempo de reacción.
5. Cantidad de enzima
6. Adición de un inhibidor
Catalasa
En esta práctica se utilizará la enzima catalasa como modelo para analizar algunos
aspectos de la regulación no específica de la enzima (pH, temperatura, tiempo de reacción,
concentración del sustrato, concentración de enzima y presencia de un inhibidor).
La catalasa es una hemoproteína que contiene cuatro grupos hemo. Además, posee
actividad de peroxidasa, utiliza una molécula de peróxido de hidrógeno (H2O2) como
sustrato donador de electrones y otra molécula de H2O2 como oxidante o aceptor de
electrones.
2H2 O2 ⇌ 2H2 O + O2
Pagina 4 de 22
La catalasa se encuentra en todas las células vegetales y animales, incluyendo la sangre,

la médula ósea, las mucosas, el riñón y el hígado. Su función es la destrucción del H2O2
formado por la acción de las oxidasas. Los microcuerpos, o peroxisomas, se encuentran en
cuantiosos tejidos, incluido el hígado. En ellos abundan las oxidasas y la catalasa, lo que
sugiere que tal vez haya una ventaja biológica en el agrupamiento de las enzimas que
producen H2O2 con la enzima que lo destruye. Además de las enzimas peroxisómicas, se
debe considerar que los sistemas mitocondriales y microsómicos de transporte de
electrones, además de la xantina oxidasa, son fuentes de H2O2.
VELOCIDAD DE REACCIÓN
El uso de una enzima cataliza la reacción, es decir que el catalizador, en este caso la
enzima, disminuye la energía de activación de la reacción, resultando en una mayor
velocidad de reacción. Esto se debe a que se genera una nueva ruta de reacción dando
lugar a un estado de transición más favorable energéticamente,
Para la reacción:
S⟶P
Tenemos que la velocidad será:
V=k[S]
En donde k es la constante de velocidad de la reacción y [S] es la concentración del

sustrato. Esta ecuación indica que la velocidad de reacción es proporcional a la
concentración del sustrato y al valor de la constante. Cuando la reacción es catalizada por
una enzima, la reacción sería:
k1 k2
E+S ⇌ES⇌E+P
k-1
Para esta reacción, la velocidad será:
V0 =k2 [ES]
En donde V0 es la velocidad inicial y se determina midiendo la cantidad de producto formado

en la fase inicial, antes de llegar a la zona plateau. k2 es la constante de velocidad de
reacción, [ES] es la concentración del complejo enzima-sustrato.
A partir de esta ecuación, y después de un tratamiento matemático, obtenemos que:
[S]
V0 =Vmax
[S]+Km
En donde Vmax es la velocidad máxima y Km es la constante de Michaelis Menten. Esta

constante equivale a la concentración de sustrato a la cual la velocidad de reacción es la
mitad de la velocidad máxima.
Pagina 5 de 22
Al graficar la V0 vs. [S] se obtiene una curva en donde se observa que a medida que
aumenta la [S] llega un punto de saturación en donde la velocidad de reacción tiende a ser
constante.
Vmax
V0
Vmax/2
Km
[S]
Para linealizar los resultados obtenidos, se realiza una gráfica de los inversos, por medio
de la linealización de Lineweaver-Burk
1 Km 1 1
= × +
V0 Vmax [S] Vmax
FUNDAMENTO DE LA MEDICIÓN DE LA ACTIVIDAD CATALASA
En cada experimento, la concentración de H2O2 se determina mediante titulación con

estándar de KMnO4. La titulación de una muestra control por cada experimento sirve como
medida de la concentración de peróxido al comienzo del experimento. La titulación de la
muestra es una medida del peróxido remanente al final del experimento. La diferencia entre
las dos titulaciones representa la cantidad de peróxido descompuesto. En este experimento,
se considera que las moles de peróxido descompuesto por unidad de tiempo son la medida
de la actividad de la catalasa y de la velocidad de reacción.
Reacciones:
2H2O2 ⇌ 2H2O+O2
5H2 O2 + 2KMnO4 + 3H2 SO4 ⟹ 8H2 O + 5O2 + 2MnSO4 +K2 SO4
Calcule las moles de KMnO4 gastadas, a partir del volumen de titulación y la concentración.
moles de KMnO4
Molaridad=
L de solución
Moles de KMnO4 =Molaridad * L de solución
Teniendo en cuenta la siguiente reacción, calcule el número de moles de H2O2 gastadas en

la titulación. Estas moles debe escribirlas en la columna de moles sin reaccionar.
Pagina 6 de 22
5H2 O2 + 2KMnO4 + 3H2 SO4 ⟹ 8H2 O + 5O2 + 2MnSO4 +K2 SO4
Para calcular las moles de H2O2 que reaccionaron, se deben restar las moles de la muestra
que no tiene extracto de papa, y las moles de las muestras que sí tienen extracto de papa.
Finalmente, la velocidad se halla dividiendo las moles por el tiempo de reacción en minutos.
Ejemplo:
Suponga que los volúmenes de titulación que usted obtuvo son los que se muestran en la
tabla, en la columna de Vol KMnO4:
Velocidad
Vol KMnO4 Moles de Moles de Moles de (moles de
pH Extracto 0,01M KMnO4 H2O2 sin H2O2 que H2O2
gastado gastadas reaccionar reaccionaron /minutos de
reacción)
4,0 0,5 mL 12,6 1,26,E-04 3,15,E-04
2,00,E-05 1,00,E-05
4,0 - 13,4 1,34,E-04 3,35,E-04
Cálculo [S]:
Cuando hay cambios en la concentración de sustrato, el cálculo de su concentración, [S],

debe hacerse por medio de la titulación de la muestra que no contiene extracto de papa de
cada punto.
Por ejemplo:
Vol KMnO4
Sustrato H2O2 Extracto de
Matraz Agua (mL) 0,01M
(pH 7,0) catalasa
gastado
3 1,25 8,75 0,5 mL 7,43
4 1,25 8,75 - 10,65
Para hallar la concentración del sustrato, debe usar el volumen del matraz 4.
0,01 moles KMnO4 5 moles H2 O2

0,01065 L× × =2,7x10-4 moles H2 O2
1L 2 moles KMnO4
Teniendo las moles, se dividen por el volumen de la mezcla de reacción, que es de 10 mLi,
y al convertir a litros:
Pagina 7 de 22
2,7x10-4 moles H2 O2
M= =0,027 M
0,010 L
6. MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS, SOFTWARE, HARDWARE O

EQUIPOS DEL LABORATORIO:
DESCRIPCIÓN (Material, reactivo,

UNIDAD DE
instrumento, software, hardware, CANTIDAD
MEDIDA
equipo)
Ácido sulfúrico (H2SO4) a 1 M, que
contiene 1 mg/mL de sulfato de 125 mL
manganeso (MnSO4)
Permanganato de potasio (KMnO4) a
0,01 M
250 mL
Soluciones de sustrato: H2O2 a 0.24 %
preparada con buffer citrato 50 mM a 10 mL
pH 4
pH 6
pH 7
pH 8
Buretas 3 unidades
Pipetas graduadas de 5,00 mL 3 unidades
Pipeteador 1 unidad
Vaso de precipitados (100, 250 mL) 4 unidades
Erlermeyer 8 unidades
7. MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS, SOFTWARE, HARDWARE O

EQUIPOS DEL ESTUDIANTE:
DESCRIPCIÓN (Material,
UNIDAD DE
reactivo, instrumento, software, CANTIDAD
MEDIDA
hardware, equipo)
Bata de poliéster blanca. 1 unidad
Gafas de seguridad. 1 par
Guantes de nitrilo 2 pares
Pagina 8 de 22
Bayetilla 1 unidad
Toallas de papel Scott 10 unidades
Marcador tipo Sharpie 1 unidad
Cinta de enmascarar 1 rollo
Cuaderno de laboratorio 1 Unidad
Vegetal para extracto enzimático
Unidad grande o
(papa, yuca, champiñones, 1
bananos, kiwi, piñas, etc) mediana
8. PRECAUCIONES CON LOS MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS

Y EQUIPOS A UTILIZAR:
• Antes de entrar al laboratorio lea la guía del trabajo en el laboratorio y elabore el
respectivo preinforme, tenga en cuenta todas las indicaciones
• Deben seguirse las instrucciones para cada una de las reacciones, teniendo en cuenta
las condiciones que se mencionan en el procedimiento.
• Al momento de realizar la titulación asegúrese que la bureta este correctamente llena y
que el nivel de enrase se encuentre en 0,0 mL, de no ser así enrace a un volumen
conocido y regístrelo en su cuaderno de laboratorio para así poder precisar el volumen
de agente titulante usado. No olvide registrar la concentración del titulante.
• Recuerde revisar todas las precauciones de los reactivos empleados en la práctica
• Al realizar las medidas con micropipeta tenga en cuenta que el líquido no debe ascender
hasta el vástago de la misma y de ser así, debe hacérselo saber a la laboratorista.
• Cuando realice medidas con las pipetas, el líquido no debe ascender hasta el pipeteador
9. PROCEDIMIENTO, MÉTODO O ACTIVIDADES:
9.1. Preparación de la solución de catalasa
La catalasa se extrae a partir de algún material vegetal. Para ello, debe pesar
aproximadamente 100 g de material vegetal. Córtelo en pedazos y mézclela en la licuadora
con una pequeña porción de agua destilada, sin superar el volumen del matraz aforado que
se empleará (250,0 mL). Tenga un baño de hielo preparado, y apenas se licúe hasta obtener
una mezcla homogénea, filtre con tela de cortina y transfiera el filtrado al matraz aforado,
que debe mantenerse en hielo. Cada grupo de laboratorio preparará su extracto que debe
ser de diferentes fuentes, de tal manera que pueda comparar los datos obtenidos con dos
extractos enzimáticos diferentes.
9.2. Efecto del pH sobre la velocidad de reacción
Teniendo su extracto de catalasa en hielo, debe alistar los matraces como se muestra en
la tabla No. 1 para realizar la reacción enzimática y posteriormente la titulación. Si no tiene
suficientes matraces, debe irlos lavando a medida que los usa, DESPUÉS DE LA
TITULACIÓN.
Pagina 9 de 22
Matraz Sustrato H2O2 (5,0 mL) Extracto de catalasa

1 pH 4,0 0,5 mL
2 pH 4,0 -
3 pH 6,0 0,5 mL
4 pH 6,0 -
5 pH 7,0 0,5 mL
6 pH 7,0 -
7 pH 8,0 0,5 mL
8 pH 8,0 -
Tabla 1 Efecto del pH en la velocidad de reacción de la enzima catalasa, extraída de papa.
Debe incubar la reacción enzimática a temperatura ambiente durante exactamente 2

minutos. Pasados los 2 minutos, añadir 5,0 mL de H2SO4 1M para detener la reacción.
Cuando tenga listo el primer matraz puede empezar con la titulación. Debe obtener 8
valores de titulación, es decir 8 valores de volumen de KMnO4 gastado para cada uno de
los matraces.
9.3. Efecto del tiempo sobre la velocidad de reacción

Teniendo su extracto de catalasa en hielo, debe alistar los matraces como se muestra en
la tabla No. 2 para realizar la reacción enzimática y posteriormente la titulación. Si no tiene
suficientes matraces, debe irlos lavando a medida que los usa, DESPUÉS DE LA
TITULACIÓN.
Extracto de
Matraz Sustrato H2O2 (pH 7,0) Tiempo
catalasa
1 5,0 mL 0 -
2 5,0 mL 1 min 0,5 mL
3 5,0 mL 2 min 0,5 mL
4 5,0 mL 3 min 0,5 mL
5 5,0 mL 5 min 0,5 mL
6 5,0 mL 7 min 0,5 mL
7 5,0 mL 10 min 0,5 mL
8 5,0 mL 15 min 0,5 mL
Tabla 2 Efecto del tiempo en la velocidad de reacción de la enzima catalasa, extraída de papa.
Debe incubar la reacción enzimática a temperatura ambiente durante exactamente el

tiempo indicado. Pasado este tiempo, añadir 5,0 mL de H2SO4 1M para detener la reacción.
Cuando tenga listo el primer matraz puede empezar con la titulación. Debe obtener 8
valores de titulación, es decir 8 valores de volumen de KMnO4 gastado para cada uno de
los matraces.
Pagina 10 de 22
10. RESULTADOS ESPERADOS:
En esta práctica, se titula el exceso de H2O2 remanente después de la reacción

enzimática. Para poder realizar los cálculos, debe completar tablas como la que se
muestra a continuación, teniendo en cuenta cuáles son las variables y deberá
incluirlas en su informe de laboratorio, en la parte de “Resultados”.
Después de medir el volumen de KMnO4 0,01M gastado en la titulación, debe

calcular el número de moles gastadas y con estas moles calcular el número de
moles de H2O2 tituladas (moles de H2O2 que no reaccionaron con la catalasa). Para
hallar el número de moles que sí reaccionaron, debe restar el valor correspondiente
a la muestra que no tiene catalasa en cada caso. Revise el ejemplo que se da a
continuación:
Velocidad
Extracto de
pH 0,01M KMnO4 H2O2 sin H2O2 que H2O2
catalasa
reacción)
4,0 0,5 mL 12,6 1,26,E-04 3,15,E-04
2,00,E-05 1,00,E-05
4,0 - 13,4 1,34,E-04 3,35,E-04
6,0 0,5 mL
6,0 -
7,0 0,5 mL
7,0 -
8,0 0,5 mL
8,0 -
Tabla 3 Resultados obtenidos del efecto del pH en la velocidad de reacción de la enzima catalasa,
extraída de papa.
Esta tabla debe realizarse para cada uno de los 2 experimentos (pH óptimo y tiempo
óptimo) indicando siempre las diferencias entre una muestra y otra, no simplemente
enumerándolos (1, 2, 3…). Adicionalmente, debe escoger otra de las muestras y
hacer lo mismo con los datos obtenidos por otro grupo de sus compañeros.
Luego de realizar estas tablas, debe realizar las siguientes gráficas:
1. Velocidad vs. pH
2. Velocidad vs. Tiempo
Pagina 11 de 22
Tenga en cuenta que debe incluir las dos series de datos de cada una de las
muestras en la misma gráfica.
11. CRITERIO DE EVALUACIÓN A LA PRESENTE PRÁCTICA:

Presentación del informe grupal, el cual debe entregarse en el formato que se encuentra en
el aula virtual, con las características allí mencionadas.
En el cuaderno individual deben registrarse todos los resultados obtenidos, y podrán ser
revisados en la siguiente práctica.
NIVELES
Excelente Bueno Aceptable Deficiente No Presentó
4,0 a 5,0 3,0 a 4,0 2,0 a 3,0 1,0 a 2,0 0,0
Asiste Asiste Asiste Asiste
No asiste a la
puntualmente a la puntualmente a la puntualmente a la puntualmente a la
práctica
práctica práctica práctica práctica.
Presenta el informe No presenta el No presenta el No presenta el
No presenta el
en la fecha informe en la fecha informe en la fecha informe en la fecha
informe
indicada indicada indicada indicada
Presenta el informe Presenta el informe Presenta el informe No presenta el
en el formato en el formato en el formato informe en el
indicado indicado indicado formato indicado
Los resultados
Los resultados
mostrados están
Los resultados Los resultados mostrados están
incompletos, y los
mostrados están mostrados están completos, pero los
cálculos y las
completos, así completos, así cálculos y gráficas
gráficas no
como los cálculos y como los cálculos y no son correctos,
corresponden con
las gráficas. las gráficas no están bien
los datos o están
realizados
mal ejecutados
Es capaz de Es capaz de No Es capaz de
No explica todos
explicar todos los explicar todos los explicar todos los
los fenómenos
fenómenos fenómenos fenómenos
moleculares
moleculares moleculares moleculares
ocurridos durante
ocurridos durante ocurridos durante ocurridos durante
la práctica ni
la práctica, la práctica, pero no la práctica ni
evidencia todas las
evidenciando todas evidencia todas las evidencia todas las
reacciones
las reacciones reacciones reacciones
químicas llevadas
químicas llevadas químicas llevadas químicas llevadas
a cabo en el
a cabo en el a cabo en el a cabo en el
laboratorio.
laboratorio laboratorio. laboratorio.
El estudiante El estudiante no El estudiante no
El estudiante no
analiza sus analiza sus analiza sus
incluye análisis de
resultados resultados resultados
resultados en su
basándose en lo basándose en lo basándose en lo
informe
aprendido en aprendido en aprendido en
Pagina 12 de 22
clase, explicando clase, ni explica los clase, ni explica los

los resultados resultados dentro resultados dentro
dentro de un de un contexto de un contexto
contexto pertinente, se limita pertinente.
pertinente. a describir lo
ocurrido en el
laboratorio.
Está capacidad de Está capacidad de No está capacidad
resumir en las resumir en las de resumir en las
No escribe ninguna
conclusiones los conclusiones los conclusiones los
conclusión acerca
resultados resultados resultados
de la práctica o de
obtenidos y su obtenidos y su obtenidos y su
los resultados
interpretación de interpretación de interpretación, se
obtenidos en ella
forma clara y forma clara y limita a mencionar
concisa. concisa. resultados.
Pagina 13 de 22
INFORME DE LABORATORIO
1. TÍTULO DE LA PRÁCTICA: ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA CATALASA
Nombres y (Códigos) ______________________________________________________________
______________________________________________________________
______________________________________________________________
2. OBJETIVOS
2.1. Objetivo General
________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
2.2. Objetivos Específicos
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________
Pagina 14 de 22
El uso no autorizado de su contenido así como reproducción total o parcial por cualquier persona o entidad, estará en contra de los
derechos de autor
3. OBSERVACIONES (0,5 puntos)
Efecto del pH sobre la velocidad de reacción
Vol KMnO4 0,01M gastado

Extracto de: Extracto de:
Matraz pH Extracto enzimático
1 4,0 0,5 mL
2 4,0 -
3 6,0 0,5 mL
4 6,0 -
5 7,0 0,5 mL
6 7,0 -
7 8,0 0,5 mL
8 8,0 -
Efecto del tiempo sobre la velocidad de reacción
Vol KMnO4 0,01M gastado

Tiempo Extracto de: Extracto de:
Matraz de
reacción
1 0
2 1 min
3 2 min
4 3 min
5 5 min
6 7 min
7 10 min
8 15 min
Pagina 15 de 22
derechos de autor
4. CÁLCULOS Y RESULTADOS (1,5 puntos)
4.1. Efecto del pH sobre la velocidad de reacción con el primer extracto: ________________
Velocidad
Extracto de
catalasa
reacción)
4,0 0,5 mL
4,0 -
6,0 0,5 mL
6,0 -
7,0 0,5 mL
7,0 -
8,0 0,5 mL
8,0 -
Cálculo de la velocidad de reacción del efecto del pH sobre la velocidad de reacción
Pagina 16 de 22
derechos de autor
4.2. Efecto del pH sobre la velocidad de reacción con el segundo extracto: ________________
Velocidad
Extracto de
catalasa
reacción)
4,0 0,5 mL
4,0 -
6,0 0,5 mL
6,0 -
7,0 0,5 mL
7,0 -
8,0 0,5 mL
8,0 -
Cálculo de la velocidad de reacción del efecto del pH sobre la velocidad de reacción
Pagina 17 de 22
derechos de autor
4.3. Efecto del tiempo sobre la velocidad de reacción del primer extracto: ________________
Velocidad
Tiempo 0,01M KMnO4 H2O2 sin H2O2 que H2O2
reacción)
0
1 min
2 min
3 min
5 min
7 min
10 min
15 min
Cálculo de la velocidad de reacción del efecto del tiempo sobre la velocidad de reacción
Pagina 18 de 22
derechos de autor
4.4. Efecto del tiempo sobre la velocidad de reacción del segundo extracto: ________________
Velocidad
Tiempo 0,01M KMnO4 H2O2 sin H2O2 que H2O2
reacción)
0
1 min
2 min
3 min
5 min
7 min
10 min
15 min
Cálculo de la velocidad de reacción del efecto del tiempo sobre la velocidad de reacción
Pagina 19 de 22
derechos de autor
5. DISCUSIÓN DE RESULTADOS (2 puntos). Discuta los siguientes aspectos:

• Discuta sobre el efecto de cada uno de los parámetros sobre la velocidad de reacción de la
catalasa.
• ¿Por qué la velocidad de reacción cambia cuando cambian los parámetros?
• ¿Qué hace que velocidad varíe con respecto al pH? ¿Al tiempo?
• ¿Qué tipo de enzima es la catalasa?
• ¿Por qué hay dos reacciones que se llevan a cabo?
• ¿Qué efecto tiene cambiar la fuente de la que proviene la enzima?
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
Pagina 20 de 22
derechos de autor
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
Pagina 21 de 22
derechos de autor
6. CONCLUSIONES (1,0 punto)

___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
7. BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA (Obligatoria)

___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
Pagina 22 de 22
derechos de autor

BIOMED Guía No. 4. Actividad Enzimática de Catalasa

Caricato da

Informazioni sul documento

Titolo originale

Copyright

Formati disponibili

Condividi questo documento

Condividi o incorpora il documento

Opzioni di condivisione

Hai trovato utile questo documento?

Questo contenuto è inappropriato?

Copyright:

Formati disponibili

BIOMED Guía No. 4. Actividad Enzimática de Catalasa

Caricato da

Copyright:

Formati disponibili

UNIVERSIDAD MILITAR NUEVA GRANADA

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE CATALASA

Título de la Práctica de Laboratorio:

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

Docente Departamento de Docente Departamento de

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE CATALASA

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE CATALASA

1. FACULTAD O UNIDAD ACADÉMICA: Facultad de Ciencias Básicas y

2. PROGRAMA: Ingeniería Biomédica

• Evaluar la actividad de la catalasa en presencia de reguladores no

a) Medición del sustrato que se transforma

El método escogido va a depender de la enzima particular, encontrando un método

El mecanismo que permite que las enzimas incrementen la velocidad de la reacción es la

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE CATALASA

v1 = Velocidad de la reacción para formar los productos

A continuación, se presenta un resumen de las características que distinguen a una enzima:

La actividad de una enzima se evalúa de acuerdo con la velocidad de la reacción. La

1. Concentración del sustrato.

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE CATALASA

La catalasa se encuentra en todas las células vegetales y animales, incluyendo la sangre,

En donde k es la constante de velocidad de la reacción y [S] es la concentración del

En donde V0 es la velocidad inicial y se determina midiendo la cantidad de producto formado

En donde Vmax es la velocidad máxima y Km es la constante de Michaelis Menten. Esta

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE CATALASA

FUNDAMENTO DE LA MEDICIÓN DE LA ACTIVIDAD CATALASA

En cada experimento, la concentración de H2O2 se determina mediante titulación con

Teniendo en cuenta la siguiente reacción, calcule el número de moles de H2O2 gastadas en

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE CATALASA

5H2 O2 + 2KMnO4 + 3H2 SO4 ⟹ 8H2 O + 5O2 + 2MnSO4 +K2 SO4

Cuando hay cambios en la concentración de sustrato, el cálculo de su concentración, [S],

0,01 moles KMnO4 5 moles H2 O2

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE CATALASA

6. MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS, SOFTWARE, HARDWARE O

DESCRIPCIÓN (Material, reactivo,

7. MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS, SOFTWARE, HARDWARE O

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE CATALASA

8. PRECAUCIONES CON LOS MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS

9. PROCEDIMIENTO, MÉTODO O ACTIVIDADES:

9.1. Preparación de la solución de catalasa

9.2. Efecto del pH sobre la velocidad de reacción

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE CATALASA

Matraz Sustrato H2O2 (5,0 mL) Extracto de catalasa

Debe incubar la reacción enzimática a temperatura ambiente durante exactamente 2

9.3. Efecto del tiempo sobre la velocidad de reacción

Debe incubar la reacción enzimática a temperatura ambiente durante exactamente el

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE CATALASA

10. RESULTADOS ESPERADOS:

En esta práctica, se titula el exceso de H2O2 remanente después de la reacción

Después de medir el volumen de KMnO4 0,01M gastado en la titulación, debe

Luego de realizar estas tablas, debe realizar las siguientes gráficas:

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE CATALASA

11. CRITERIO DE EVALUACIÓN A LA PRESENTE PRÁCTICA:

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE CATALASA

clase, explicando clase, ni explica los clase, ni explica los

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE CATALASA

1. TÍTULO DE LA PRÁCTICA: ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA CATALASA

Nombres y (Códigos) ______________________________________________________________

2.1. Objetivo General

2.2. Objetivos Específicos

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE CATALASA

3. OBSERVACIONES (0,5 puntos)

Efecto del pH sobre la velocidad de reacción

Vol KMnO4 0,01M gastado