DETERMINACION DE separación y cuantificación de
ALCOHOLES POR sustancias químicas.
CROMATOGRAFIA DE
GASES
Presentado a:
FERNANDO LARMAT
Jhoser Marín Cod 0329128,
José Luís Luna Cod 0330609
Viviana Domínguez Cod 0328312
RESUMEN
Se determino el contenido de etanol
en una muestra de cerveza por
cromatografía de gases utilizando
patrón interno (n-butanol), y liquido y la fase móvil un gas en
teniendo como método de medición
una curva normal de calibración
realizada a partir de soluciones
estándar de etanol de 0.4, 0.8, 1.2,
1.6 y 2.0% v/v, el cromatógrafo
mide y reporta el tiempo de
retención y el área de los picos del
etanol y del patrón interno a partir
de los cuales logramos identificar y
cuantificar el analito de interés
(Etanol). Se obtuvo como resultado
experimental una concentración de
etanol del 4.35%, y un porcentaje de
error del 8.87% con respecto a la
concentración real (4.0%).
INTRODUCCION
La cromatografía de gases es una
técnica de alta sensibilidad,
exactitud y precisión utilizada en la
En cromatografía de gases la
muestra se volatiliza y se inyecta en
la cabeza de una columna
cromatografica. La elusión se
produce por el flujo de una fase
móvil de un gas inerte, y a
diferencia de la mayoría de los tipos
de cromatografía, la fase móvil no
interacciona con las moléculas del
analito; su única función es la de
trasportar el analito a través de la
columna.
Existen dos tipos de cromatografía:
la cromatografía gas-solidó (GSC) y
la cromatografía gas-liquido (GLC).
En la cromatografía gas-solidó
(GSC) la fase estacionario es un
solidó de gran área superficial y la
fase móvil un gas y la separación
depende de la capacidad de
absorción en la fase estacionaria y
en la cromatografía gas-liquido
(GLC) la fase estacionaria es un
cual el liquido esta depositado en
forma de película delgado sobre un
solidó inerte (soporte) y la
separación se basa en la
separación del soluto entre la
película liquida (Fase estacionaria) y
la fase móvil (gaseosa).
La respuesta registrada del detector
con respecto al tiempo se llama
cromatograma.
A partir del cromatograma se hacen
determinaciones cuantitativas
basadas en la relación del área (o
altura) del pico y la concentración (o
cantidad) del soluto en la muestra
problema.
PARTE EXPERIMENTAL
Se prepararon soluciones de 0.4,
0.8, 1.2, 1.6 y 2.0 % v/v a partir de
etanol al 96% para realizar la curva
de calibración, a cada una de estas
soluciones se le adicionó 1 mL de 1-
Butanol (patrón interno); Se tomaron
30 mL de muestra problema, se
adicionó 1 mL del patrón interno y
se aforo en 100 mL.
Se inyectan 2 µL de cada solución
estándar y de la solución de la
muestra problema por triplicado en
el cromatógrafo de gases con las
siguientes condiciones
operacionales:
Columna:(5%fenil)-
metilpolisiloxano, 0.25µm espesor,
HP-5® 30m longitud × 0.25 mm
diámetro interno Temperatura 80°C,
velocidad 48 cm/s, flujo de Helio
2.4mL/min, presión 25.4 PSI.
Inyector: Temperatura 200 °C,
presión 25.4 PSI, flujo 124 mL/min,
Gas de arrastre Helio.
Detector FID: Temperatura 280°C,
flujo de H 35 mL/min, flujo de aire
300 mL/min, flujo auxiliar de helio 45
mL/min.
Tabla de datos No 1. Tiempos de retención y áreas
obtenidas para los estándares y la muestra.

ESTANDARES ETANOL 1-BUTANOL

DE %ETANOL TIEMPO AREA TIEMPO AREA
0,4 0.632 206.7 0.72 815.4
0,4 0.613 246.3 0.71 1031
0,4 0.621 225.7 0.709 951.6
0,8 0.625 565.8 0.713 1172.6
0,8 0.633 483.9 0.721 944.9
0,8 0.632 491.2 0.721 968.2
1,2 0.628 622.8 0.716 797
1,2 0.629 750.6 0.718 923.2
1,2 0.632 715.7 0.721 970.4
1,6 0.63 1222.3 0.719 1171
1,6 0.622 999.3 0.71 890.9
1,6 0.632 912.9 0.721 858.4
2,0 0.632 1194.7 0.72 932.4
2,0 0.626 1304.3 0.714 989.2
2,0 0.635 1086.1 0.723 848

MUESTRA 0.629 755.7 0.718 903.7

MUESTRA 0.635 611.1 0.723 741.4
MUESTRA 0.629 1036 0.719 1255.9

CALCULOS Y RESULTADOS:

Tabla 2.Relación de concentraciones y áreas para la curva de calibración.

COCIENTE COCIENTE PROMEDIO PROMEDIO
CE/CB AE/AB CE/CB AE/AB
0,4 0,2534952
0,4 0,2388943 0,4 226,233333
0,4 0,2371795
0,8 0,4825175
0,8 0,5121177 0,8 513,633333
0,8 0,5073332
1,2 0,7814304
1,2 0,8130416 1,2 696,366667
1,2 0,7375309
 1,6 1,0438087
1,6 1,1216747 1,6 1044,83333
1,6 1,0634902
2,0 1,281317
2,0 1195,03333
2,0 1,3185402
2,0 1,2807783

Grafico 1.Curva de calibración. Relación de concentración de Etanol /Butanol VS relación

de áreas Etanol /Butanol.

Curva de calibracion CE/CB Vs

AE/AB

1400
1200
1000
AE/AB

800
600
400
200
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5
CE/CB
Tabla de datos No 3.Variables estadísticas de la línea de regresión obtenida para la
curva de calibración.
REGRESION LINEAL POR MINIMOS CUADRADOS
Estándar Xi Yi Xi-X* (Xi-X*)2 Yi-Y* (Yi-Y*)2 (Xi-X*)(Yi-Y*)
1 0,40 226,23 -0,80 0,64 -508,99 259067,43 407,19
2 0,80 513,63 -0,40 0,16 -221,59 49100,65 88,63
3 1,20 696,37 0,00 0,00 -38,85 1509,58 0,00
4 1,60 1044,83 0,40 0,16 309,61 95860,41 123,85
5 2,00 1195,03 0,80 0,64 459,81 211428,30 367,85
Sxx Syy Sxy
S 6,00 3676,10 0,00 1,60 -7E-06 616966,37 987,52
Promedio 1,20 735,22

-La pendiente de la recta viene dada

por:
b  Sxy Sxx
De la tabla nº 2:
Sxx =1.60; Sxy= 987.52
Entonces: b
987.52
 617.2 Sb 
Sr 2

 49.8966 2  39.447
1.60 Sxx 1.60
-El intercepto de la recta de regresión
es: -La desviación del intercepto es:
a  Y  bX
y  735.22 ; x  1.20
 1 (X )2   1 (1.20) 2 
a  735.22  (617.2  1.2) S S    49.8966   
a R n S  5 1.60 
a = -5.42  xx   
S  52.332
a
La ecuación de la recta es: - La desviación estándar en la medida:
y = 617.2x – 5.42  1 1  Yc  Y  2 
Sr    
Sc  
b m n b 2
S 
Para saber la desviación de la pendiente y  xx

el intercepto, se calculó la desviación de la S c  0.0594
regresión realizada por medio de:
Entonces, la ecuación de la recta de
Syy  b Sxx
2 regresión es:
Sr  Syy= 616966,37
n 2
b = 617.2 y = 617.2x +52.332
Sxx=1.60
SR = 49.8966 -Coeficiente de correlación y su
cuadrado:
-La desviación de la pendiente es:
 S xy 987.52
r    0.9939
S S 1.60  616966.37
xx yy
2
r  0.9879
Los limites de confianza al 95%, se Valor Exp. - Valor Real
% ERROR 
calculan con la ecuación utilizando Valor real
t=3.18 para n-2 grados de libertad. 4.355%l - 4.0%.
% ERROR  x100
LC= tSx 4.0%
N % ERROR  8.87%
Para la pendiente:
LC= 3.18 X 39.447 DISCUCION DE RESULTADOS
5
En este laboratorio se realizo la
LC=56.099 determinación de etanol en una muestra
de cerveza. Se prepararon cinco
Para el intercepto: estándares para la elaboración de la
LC= 3.18 X 52.332 curva de calibración, con
concentraciones de etanol de 0.4, 0.8,
5
1.2, 1.6 y 2.0 por ciento, antes de
empezar el análisis debíamos
LC=74.423 comprobar que la concentración de la
solución que contenía al analito estaba
Para la medida: dentro de los parámetros de la curva de
LC= 3.18 X 0.0594 calibración. Como el contenido de
5 alcohol registrado en la lata es de 4%:

LC=0.0845 30
C e tan ol
 4% 
100
 1.2%
Tabla de datos No 4. Relación de las
áreas obtenidas para la muestra.
Efectivamente la concentración de
INYECCION AREA
etanol en la solución problema esta
1 755.7
dentro de los limites de la curva de
2 611.1
calibración. Se uso como estándar
3 1036 interno el 1-butanol el cual nos va a
PROMEDIO 800.93 disminuir las interferencias causadas
por efectos de matriz, y obtener así una
La concentración en porcentaje v/v de mayor precisión en la cuantificación
etanol en la muestra de cerveza es: porque se minimizan las incertidumbres
relacionadas con la preparación de la
800.93  5.42
CE / CB   1.3065 muestra así como su inyección en el
617.2
instrumento.
Se procedió a la inyección de los
CB  1.0%
estándares en el cromatógrafo y se
obtuvieron datos de tiempo y área, con
CE  1.3065(1.0%)  1.3065% los cuales se realizo la curva de
calibración, y después de la regresión
1.3065%  100 mL por el método de mínimos cuadrados y
 4.355%
30mL el tratamiento estadístico se obtuvieron
PORCENTAJE DE ERROR los valores de la pendiente, el
intercepto, el coeficiente de correlación,
las desviaciones respectivas y los
limites de confianza.
Con el promedio de las áreas obtenidas
en la inyección de la muestra se pudo
calcular la concentración de etanol en la
muestra la cual dio 4.355% y se obtuvo
un % de error del 8.87% el cual es un
porcentaje relativamente pequeño esto
se pudo haber producido ya que al
realizar los cálculos no se utilizaron
todas las cifras significativas y se
produjo así una propagación del error en
el reporte de los datos; también puede
que no haya funcionado como se
esperada el patrón interno, otro factor
que afecta es la preparación de las
soluciones ya que el material de vidrio
usado en el laboratorio no es de optima
calibración lo que hace que las
soluciones preparadas no estén en la
concentración que uno esperaría,
produciendo así un error experimental.
Se observo que el detector FID del
cromatógrafo es muy sensible puesto
que solo se inyectaban 2µL de solución
y se obtenían unos picos bien definidos
con los cuales se halló la eficiencia de la
columna en términos, de (N) numero
total de platos teóricos, de (N/L)
numero de platos por metro y la altura
equivalente a un plato teórico (H=L/N)
en donde:
N=7574.32 platos
N/L=252.48 platos/metro
H=3.96mm
De donde se infiere que como la
cantidad de platos teóricos es
directamente proporcional a la
eficiencia de la columna; nuestra
columna capilar presenta un poder de
separación muy bueno, ya que presenta
una gran cantidad de platos teóricos.
Esta técnica además de ser muy sensible
y dar resultados muy precisos es un
método de separación y purificación
excelente.
PREGUNTAS
1. La primera pregunta que es la de
resolver las incógnitas por el método de
mínimos cuadrados se encuentra en la
parte de los cálculos.
2. La estructura general de las fases
estacionarias del tipo metilpolisiloxano
es:
En donde el significado de 5% fenil es
la fracción de grupos –R sustituidos por
el grupo fenilo –C6H5. Al usarse la fase
estacionaria (5% fenil)metilpolisiloxano
que es esencialmente no polar y que por
lo tanto exhibe predominantemente
fuerzas de london; al usarse en nuestro
caso para la separación de etanol y 1-
butanol pueden aparecer interacciones
adicionales de puente de hidrogeno, lo
que explica porque el primer alcohol en
eluir es el etanol ya que es un alcohol
mas sencillo que el butanol y por lo
tanto las fuerzas de retención generadas
van a ser menores, que las que se van a
generar en la retención del butanol.
3. Número de platos teóricos (N).
Cada plato teórico representa un
equilibrio teórico de distribución
del soluto entre las fases. El número
total de platos teóricos de una columna
representa el poder de separación de la
columna. Una buena columna tiene un
número alto de platos teóricos. Se
calcula con cualquiera de las
ecuaciones:
2
 tr 
N  5.545 
 
 w1 / 2 
 - Se pudo observar que cromatografía es
Donde tr es el tiempo de retención, w1/2 una técnica muy sensible, ya que la
es el ancho del pico a la mitad de la cantidad de analito que se inyecta es
altura. muy pequeña, y a pesar de esto los
picos obtenidos en el cromatograma son
Según el cromatograma obtenido muy bien definidos.
tr=0.632 min; w1/2=0.0171;
BIBLIOGRAFIA
2
 tr   0.632 
2

N  5.545    5.545  1. SKOOG, D.A, Análisis Instrumental,

 
 w1 / 2   0.0171  cuarta edición, Editorial McGraw-Hill,
2001, Mexico.pag.682-688,714-720
N  7574.32 platos
N 7574.32 2. WILLARD, H Métodos
  252.48 platos  metro
L 30m instrumentales de analisis.Septima
edicion.Grupo editorial
L 3.0  104 mm
H    3.96mm Iberoamericana; México 1991.Pág.
N 7574.32 33, 34,511-520

H=Altura equivalente a un plato teórico

4. Las características que deben tener

los estándar internos son:

- tiene que ser una especie

estructuralmente relacionada con el
analito.

- Durante el análisis las moléculas del

estándar interno se comporten de
manera similar a las del analito.

- Cualquier factor operacional que

afecte al analito afectara al estándar
interno en igual proporción.

CONCLUSIONES

- Se pudo observar que el resultado

obtenido mediante la técnica de
cromatografía de gases, es muy preciso
según los datos calculados.

- Se observo que entre más platos

teóricos tenga una columna mas poder
de separación tiene y por lo tanto es más
eficiente.